CN114271262B - 一种多器官保存液及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种多器官保存液及其用途，属于器官保存液领域。所述保存液包括如下浓度的组分：聚乙二醇1％～3％、乳糖酸50～100mM、组氨酸120～180mM、组氨酸盐酸盐一水12～18mM、腺苷5～15mM、谷胱甘肽2～4mM、Na+10～20mM、K+6～10mM、Mg2+4～6mM、Cl‑24～42mM、曲美他嗪0.1～1mM、硫辛酸0.1～1mM，其余为水。该器官保存液对多种组织、器官具有良好的保存效果，其中对于肝脏和肾脏保存效果优异，在0‑4℃条件下可保存肝脏达12小时，保存肾脏达24小时，其保存过程中对器官损伤小，优于现有器官保存液。本发明多器官保存液有望打破国外技术垄断，造福于我国器官移植患者，具有优良的应用前景。

Description

一种多器官保存液及其用途
技术领域
本发明属于器官保存液领域，具体涉及一种多器官保存液及其用途。
背景技术
器官移植技术目前已广泛应用于心脏、肺、胰腺、肠、肾、肝等器官。随着器官移植需求的增加和捐献者的紧缺，器官移植往往不能直接从捐献者转移到需求者，需要对离体器官进行较长时间保存和较远距离运输。器官保存液对离体器官的保存和运输极其重要。器官保存液主要功能是减少缺血和缺氧对器官造成的各种损伤，使离体器官保持活力。
由美国Wisconsin大学发明的University Wisconsin液(UW液)，是一种多器官保存液，其特点是以乳糖盐和棉子糖作为非渗透因子，阻断细胞外液内流，从而抑制低温引起的水肿；以谷胱甘肽、别嘌呤醇对抗氧自由基；羟乙基淀粉作为胶体防止细胞间隙扩大；缓冲液采用磷酸盐，防止细胞酸中毒。但UW液黏度高，因此使得灌洗时间延长，从而损伤微循环；并且其高钾水平可能会引起血管收缩，并导致羟乙基淀粉积聚引起冠状动脉内膜损害。寻找一种更加安全的多器官保存液十分重要。
HTK(Histidine Tryptophan Ketoglutarate)液是一种低钠低钾型多器官保存液，最初应用于心脏移植，能有效延长心脏缺血时间。与UW液相比，HTK液黏性低，容易扩散至细胞间隙，利于器官短时间内降温。但是，HTK对于肾脏等器官的保存效果较差，实际应用有限。
如何提供一种既安全，又有效的器官保存液，可以对多种器官进行良好保存对于器官移植等行业具有重要意义。此外，目前我国器官移植手术使用的保存液绝大部分依赖于国外进口，关键技术受制于人，且价格昂贵，加重了病人负担。现迫切需要研发出一款具有我国自主知识产权的替代产品，打破国外的技术垄断，造福于我国器官移植患者。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种多器官保存液及其用途。
本发明提供了一种多器官保存液，所述保存液包括如下浓度的组分：聚乙二醇1％～3％、乳糖酸50～100mM、组氨酸120～180mM、组氨酸盐酸盐一水12～18mM、腺苷5～15mM、谷胱甘肽2～4mM、Na+ 10～20mM、K+ 6～10mM、Mg2+ 4～6mM、Cl- 24～42mM、曲美他嗪0.1～1mM、硫辛酸0.1～1mM，其余为水。
进一步地，所述保存液包括如下浓度的组分：聚乙二醇2％、乳糖酸50mM、组氨酸180mM、组氨酸盐酸盐一水18mM、腺苷10mM、谷胱甘肽3mM、Na+ 15mM、K+ 8mM、Mg2+ 5mM、Cl-33mM、曲美他嗪1mM、硫辛酸1mM，其余为水。
进一步地，所述聚乙二醇为聚乙二醇35kD。
进一步地，所述多器官保存液的渗透压为300-310mosmol/kg。
进一步地，所述多器官保存液的pH为7.1-7.2。
进一步地，所述器官为肝脏和/或肾脏。
本发明还提供了前述的多器官保存液的制备方法，它包括如下步骤：
将各组分混合配制成溶液，即可。
本发明还提供了前述的多器官保存液在保存组织或器官中的用途。
进一步地，所述器官为肝脏和/或肾脏。
本发明还提供了一种器官保存方法，它是采用前述的多器官保存液保存；
优选地，所述保存温度为0～8℃。
本发明提供了一种器官保存液，该器官保存液对多种组织、器官具有良好的保存效果，其中对于肝脏和肾脏保存效果优异，在0-4℃条件下可保存肝脏达12小时，保存肾脏达24小时，其保存过程中对器官损伤小，优于现有器官保存液。本发明多器官保存液有望打破国外技术垄断，造福于我国器官移植患者，具有优良的应用前景。
将本发明的新型器官保存液的各种成分浓度进行等比例提高或降低，在使用时通过稀释、减压浓缩等手段将工作浓度调回至本发明的比例，其实质上属于本发明在本领域的常规可替代形式，仍属于本发明的范围。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为肝脏在各组器官保存液中保存不同时间后的H&E染色图(200×)。
图2为肝脏在各组器官保存液中保存不同时间后TUNEL染色图(400×)以及凋亡小体数量统计图。
图3为肝脏在各组器官保存液中保存不同时间后AST、ALT、LDH的变化结果。
图4为肾脏在各组器官保存液中保存不同时间后的H&E染色图(200×)。
图5为肾脏在各组器官保存液中保存不同时间后TUNEL染色图(400×)以及凋亡小体数量统计图。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1、本发明器官保存液
本发明器官保存液以水为溶剂，水中各种成分及其浓度如表1所示。
表1.器官保存液中的成分
成分 浓度
聚乙二醇35kD 2％(质量体积比)
乳糖酸 50mM
组氨酸 180mM
组氨酸盐酸盐一水(CAS号：5934-29-2) 18mM
腺苷 10mM
谷胱甘肽 3mM
<![CDATA[Na<sup>+</sup>]]> 15mM
<![CDATA[K<sup>+</sup>]]> 8mM
<![CDATA[Mg<sup>2+</sup>]]> 5mM
<![CDATA[Cl<sup>-</sup>]]> 33mM
曲美他嗪 1mM
硫辛酸 1mM
该器官保存液的渗透压为300-310mosmol/kg。pH 7.1～7.2。
以下通过具体试验例证明本发明的有益效果。
试验例1、本发明器官保存液的器官保存效果测试
1、器官保存方法
采用本发明实施例1配制的器官保存液(简称HX1组)进行器官保存效果测试。同时以浓度为0.9％的NaCl水溶液(NaCl组)和市售HTK液(HTK组)作为对照组。具体器官保存方法如下：
取昆明小鼠健康、新鲜的肝脏和肾脏，将健康、新鲜的肝脏或肾脏分别浸没于各组器官保存液中，于4℃条件下保存。
2、器官保存效果
各组器官保存液保存肝脏和肾脏的效果如图1～5所示。
NaCl组、HTK组及HX1组对肝脏组织保存6h、12h和24h后的H&E染色如图1所示。NaCl组多见肝细胞水肿，胞质疏松淡染；肝细胞空泡变性，胞质中可见较小的圆形空泡；肝窦可见扩张和挤压。与NaCl组相比(保存相同时间)，HTK组和HX1组肝小叶结构清晰，肝索排列整齐，肝窦未见明显扩张或挤压，未见明显炎症。
NaCl组、HTK组及HX1组肝脏组织保存6h、12h和24h后的TUNEL染色如图2所示。相同保存时间，HTK组和HX1组肝细胞凋亡数量均明显少于NaCl组，HTK组和HX1组之间无明显差异。
如图3为NaCl组、HTK组及HX1组肝脏组织保存6h、12h和24h后取保存液检测酶学水平：AST、ALT、LDH的变化情况。在保存时间相同的情况下，HTK组和HX1组AST、ALT、LDH含量显著少于NaCl组，HTK组和HX1组之间差异不明显。
上述结果说明：本发明制备的器官保存液对于肝脏组织具有良好的保存效果，0～4℃条件下保存时间可达12小时，保存效果与HTK液相近。
NaCl组、HTK组及HX1组肾脏组织保存6h、12h和24h后的H&E染色如图4所示。在保存时间相同的情况下，NaCl组和HTK组均有中度以上肾小球扩张、肾小管上皮细胞肿胀及肾小管扩张；其中以NaCl组更为严重，可见肾小球部分坏死，肾小管上皮细胞高度肿胀、变形，肾小管明显扩张；而HX1组肾小管排列整齐，肾小管扩张程度和肾小管上皮细胞肿胀程度不明显。
NaCl组、HTK组及HX1组肾脏组织保存6h、12h和24h后的TUNEL染色如图5所示。相同保存时间，HX1组肾脏细胞凋亡数量均明显少于NaCl组和HTK组。
上述结果说明：本发明制备的器官保存液对于肾脏组织具有良好的保存效果，0～4℃条件下保存时间可达24小时，保存效果优于HTK液。
综上所述：本发明实施例中的器官保存液在对肝脏和肾脏保存后的测试指标显示，在静态冷保存6h、12h和24h内，HX1保存液对肝脏的保存效果与HTK液相当，而其对肾脏供肝的静态冷保存中则明显优于HTK液。本发明器官保存液可于0-4℃条件下保存肝脏12小时，同等条件下可保存肾脏24小时。
综上，本发明提供了一种器官保存液，该器官保存液对多种组织、器官具有良好的保存效果，其中对于肝脏和肾脏保存效果优异，在0-4℃条件下可保存肝脏达12小时，保存肾脏达24小时，其保存过程中对器官损伤小，优于现有器官保存液。本发明多器官保存液有望打破国外技术垄断，造福于我国器官移植患者，具有优良的应用前景。

Claims (9)

1.一种多器官保存液，其特征在于：所述保存液由如下浓度的组分组成：
聚乙二醇2％、乳糖酸50mM、组氨酸180mM、组氨酸盐酸盐一水18mM、腺苷10mM、谷胱甘肽3mM、Na+15mM、K+8mM、Mg2+5mM、Cl-33mM、曲美他嗪1mM、硫辛酸1mM，其余为水；
所述聚乙二醇为聚乙二醇35kD。
2.根据权利要求1所述的多器官保存液，其特征在于：所述多器官保存液的渗透压为300-310mosmol/kg。
3.根据权利要求1所述的多器官保存液，其特征在于：所述多器官保存液的pH为7.1-7.2。
4.根据权利要求1所述的多器官保存液，其特征在于：所述器官为肝脏和/或肾脏。
5.权利要求1～4任一项所述的多器官保存液的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
将各组分混合配制成溶液，即可。
6.权利要求1～4任一项所述的多器官保存液在保存组织或器官中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述器官为肝脏和/或肾脏。
8.一种器官保存方法，其特征在于：它是采用权利要求1～4任一项所述的多器官保存液保存。
9.根据权利要求8所述的器官保存方法，其特征在于：所述保存温度为0～8℃。
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