CN114262508A - 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用 - Google Patents

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崔大祥
沈琦
梁辉
彭家伟
张文桦
高昂
周诚
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Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
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Abstract

本发明提供了一种用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用,这种微球的成分为聚乳酸‑羟基乙酸共聚物(PLGA),粒径分布为100‑300μm。PLGA分子量为20K。PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50比50至90比10。通过本方法制备出的微球可用于多种细胞的悬浮培养,细胞贴覆率远高于现在市面上的其余微球。

Description

一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于纳米材料领域,涉及一种复合纳米材料的制备。具体而言,是一种用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用。
背景技术
悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里,培养单细胞及小细胞团的组织培养系统,是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单,只要增加体积就可以了。深度超过5 mm,需要搅动培养基,超过10 cm,还需要深层通入二氧化碳和空气,以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。然而,并不是所有细胞都能经过驯化成为可以悬浮培养的细胞系。所以我们制备出一种微球,在细胞培养中起到三维生长支架的作用,使细胞贴附在微球表面生长。
发明内容
为了解决以上技术问题,本发明目的在于提供一种用于细胞悬浮培养的微球。
本发明的再一目的在于:提供一种上述方法制备的用于细胞悬浮培养的微球产品。
本发明的又一目的在于:提供一种上述产品的应用。
本发明目的通过下述方案实现:一种用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于这种微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。
粒径分布为100-300μm。
优选的:粒径分布为218±15.3 μm。
PLGA分子量为20K。
PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50比50至90比10。
优选的:PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为75比25。
本发明提供一种用于细胞悬浮培养的微球的制备方法,采用油水复乳法,包括以下步骤:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=50:50至90:10,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500 rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
本发明还提供了一种微球用于细胞悬浮培养的应用。
本发明所述的微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由两种单体:乳酸和羟基乙酸随机聚合而成,是一种可降解的功能高分子有机化合物,具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能,被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证,被正式作为药用辅料收录进美国药典。不同的单体比例可以制备出不同类型的PLGA,例如:PLGA 75:25表示该聚合物由75%乳酸和25%羟基乙酸组成。PLGA的降解产物是乳酸和羟基乙酸,同时也是人代谢途径的副产物,所以当它应用在医药和生物材料中时不会有毒副作用。当然,乳糖缺陷者除外。通过调整单体比,进而改变PLGA的降解时间,这种方法已广泛应用于生物医学领域中,如:皮肤移植,伤口缝合,体内植入,微纳米粒等。所以用PLGA制备微球对于各种细胞来说都是安全的。
本发明提供了一种可用于细胞悬浮培养的微球,这种微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能,被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。可以在细胞培养中作为细胞生长的支架,让细胞悬浮培养,增大细胞培养密度,提高细胞产量。
具体实施方式
为了更加清楚、详细地说明本发明的目的技术方案,下面通过相关实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为具体说明本发明的实施方法,并不限定本发明的保护范围。
实施例1
一种用于细胞悬浮培养的微球,采用油水复乳法,按以下步骤制备:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=75:25,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
该PLGA微球粒径分布为218±15.3 μm。
实施例2
一种用于细胞悬浮培养的微球,与实施例1步骤近似,按以下步骤制备:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=90:10,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
该PLGA微球的粒径分布为108±8.3 μm。
实施例3
一种用于细胞悬浮培养的微球,与实施例1步骤近似,按以下步骤制备:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=50:50,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
该PLGA微球的粒径分布为158±18.3 μm。
应用例
将实施例1中的PLGA微球在75%酒精浸泡后用超纯水洗净,与HeLa细胞共孵育3天,可以在显微镜下看出PLGA微球表面会附着HeLa细胞。
由此可见,本文提出的PLGA微球可以用于细胞的悬浮培养。
以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于,这种微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。
2.根据权利要求1所述的用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:微球的粒径分布为100-300μm。
3.根据权利要求2所述的用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:微球的粒径分布为218±15.3 μm。
4.根据权利要求1所述的用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:PLGA分子量为20K。
5.根据权利要求1所述用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50比50至90比10。
6.根据权利要求5所述用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为75比25。
7.一种根据权利要求1-6任一所述用于细胞悬浮培养的微球的制备方法,其特征在于,采用油水复乳法,包括以下步骤:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=50:50至90:10,加入到2.6mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500 rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
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8.一种根据权利要求1-6任一所述的微球用于细胞悬浮培养的应用。
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