CN114262508A - 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用 - Google Patents

一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114262508A
CN114262508A CN202111492278.1A CN202111492278A CN114262508A CN 114262508 A CN114262508 A CN 114262508A CN 202111492278 A CN202111492278 A CN 202111492278A CN 114262508 A CN114262508 A CN 114262508A
Authority
CN
China
Prior art keywords
suspension culture
plga
cell suspension
microspheres
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111492278.1A
Other languages
English (en)
Inventor
崔大祥
沈琦
梁辉
彭家伟
张文桦
高昂
周诚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd filed Critical Shanghai National Engineering Research Center for Nanotechnology Co Ltd
Priority to CN202111492278.1A priority Critical patent/CN114262508A/zh
Publication of CN114262508A publication Critical patent/CN114262508A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)

Abstract

本发明提供了一种用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用,这种微球的成分为聚乳酸‑羟基乙酸共聚物(PLGA),粒径分布为100‑300μm。PLGA分子量为20K。PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50比50至90比10。通过本方法制备出的微球可用于多种细胞的悬浮培养,细胞贴覆率远高于现在市面上的其余微球。

Description

一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于纳米材料领域,涉及一种复合纳米材料的制备。具体而言,是一种用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用。
背景技术
悬浮培养指的是一种在受到不断搅动或摇动的液体培养基里,培养单细胞及小细胞团的组织培养系统,是非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单,只要增加体积就可以了。深度超过5 mm,需要搅动培养基,超过10 cm,还需要深层通入二氧化碳和空气,以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。然而,并不是所有细胞都能经过驯化成为可以悬浮培养的细胞系。所以我们制备出一种微球,在细胞培养中起到三维生长支架的作用,使细胞贴附在微球表面生长。
发明内容
为了解决以上技术问题,本发明目的在于提供一种用于细胞悬浮培养的微球。
本发明的再一目的在于:提供一种上述方法制备的用于细胞悬浮培养的微球产品。
本发明的又一目的在于:提供一种上述产品的应用。
本发明目的通过下述方案实现:一种用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于这种微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。
粒径分布为100-300μm。
优选的:粒径分布为218±15.3 μm。
PLGA分子量为20K。
PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50比50至90比10。
优选的:PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为75比25。
本发明提供一种用于细胞悬浮培养的微球的制备方法,采用油水复乳法,包括以下步骤:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=50:50至90:10,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500 rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
本发明还提供了一种微球用于细胞悬浮培养的应用。
本发明所述的微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。聚乳酸-羟基乙酸共聚物由两种单体:乳酸和羟基乙酸随机聚合而成,是一种可降解的功能高分子有机化合物,具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能,被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证,被正式作为药用辅料收录进美国药典。不同的单体比例可以制备出不同类型的PLGA,例如:PLGA 75:25表示该聚合物由75%乳酸和25%羟基乙酸组成。PLGA的降解产物是乳酸和羟基乙酸,同时也是人代谢途径的副产物,所以当它应用在医药和生物材料中时不会有毒副作用。当然,乳糖缺陷者除外。通过调整单体比,进而改变PLGA的降解时间,这种方法已广泛应用于生物医学领域中,如:皮肤移植,伤口缝合,体内植入,微纳米粒等。所以用PLGA制备微球对于各种细胞来说都是安全的。
本发明提供了一种可用于细胞悬浮培养的微球,这种微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能,被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。可以在细胞培养中作为细胞生长的支架,让细胞悬浮培养,增大细胞培养密度,提高细胞产量。
具体实施方式
为了更加清楚、详细地说明本发明的目的技术方案,下面通过相关实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为具体说明本发明的实施方法,并不限定本发明的保护范围。
实施例1
一种用于细胞悬浮培养的微球,采用油水复乳法,按以下步骤制备:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=75:25,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
该PLGA微球粒径分布为218±15.3 μm。
实施例2
一种用于细胞悬浮培养的微球,与实施例1步骤近似,按以下步骤制备:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=90:10,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
该PLGA微球的粒径分布为108±8.3 μm。
实施例3
一种用于细胞悬浮培养的微球,与实施例1步骤近似,按以下步骤制备:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=50:50,加入到2.6 mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
该PLGA微球的粒径分布为158±18.3 μm。
应用例
将实施例1中的PLGA微球在75%酒精浸泡后用超纯水洗净,与HeLa细胞共孵育3天,可以在显微镜下看出PLGA微球表面会附着HeLa细胞。
由此可见,本文提出的PLGA微球可以用于细胞的悬浮培养。
以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于,这种微球的成分为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。
2.根据权利要求1所述的用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:微球的粒径分布为100-300μm。
3.根据权利要求2所述的用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:微球的粒径分布为218±15.3 μm。
4.根据权利要求1所述的用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:PLGA分子量为20K。
5.根据权利要求1所述用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为50比50至90比10。
6.根据权利要求5所述用于细胞悬浮培养的微球,其特征在于:PLGA中聚乳酸和羟基乙酸的比例为75比25。
7.一种根据权利要求1-6任一所述用于细胞悬浮培养的微球的制备方法,其特征在于,采用油水复乳法,包括以下步骤:
(1)将二氯甲烷用氢化钙加热回流干燥3小时,除去其中的水分,得干燥的二氯甲烷;
(2)将0.29 g 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA),其中LA:GA=50:50至90:10,加入到2.6mL上述干燥的二氯甲烷中,不断搅拌,使其完全溶解得溶液;用一次性滴管吸取司班80向上述溶液中滴加1滴,混匀;再向溶液中滴加0.1 mL的2-甲基戊烷,并不断搅拌,搅拌速率为500 rpm,得油相溶液;
(3)配制1wt%的聚乙烯醇(PVA,Mw=31000)水溶液28.5 mL,用一次性滴管吸取吐温80向PVA水溶液中滴加5滴,混匀;
(4)用注射器取步骤(2)中的油相溶液逐滴滴加入步骤(3)的PVA水溶液中,并不断搅拌过夜,直至其中的二氯甲烷挥发完全,搅拌速率为500 rpm,得混合溶液;
(5)将步骤(4)中的混合溶液3500 rpm离心5 min,然后同样转速和时间用去离子水清洗3次,除去上层液体,将产物置于真空干燥箱室温干燥24h,经上述处理程序后,就获得了表面多孔的PLGA微球。
8.一种根据权利要求1-6任一所述的微球用于细胞悬浮培养的应用。
CN202111492278.1A 2021-12-08 2021-12-08 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用 Pending CN114262508A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111492278.1A CN114262508A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111492278.1A CN114262508A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114262508A true CN114262508A (zh) 2022-04-01

Family

ID=80826585

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111492278.1A Pending CN114262508A (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114262508A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102728287A (zh) * 2012-06-07 2012-10-17 东南大学 一种表面多孔的plga微球的制备方法
CN104448356A (zh) * 2014-12-13 2015-03-25 浙江大学 一种空白plga微球及制备方法
CN108434520A (zh) * 2018-06-08 2018-08-24 黑龙江鑫达企业集团有限公司 一种引导骨组织再生的支架的制备方法
CN111925556A (zh) * 2020-03-20 2020-11-13 江苏普瑞康生物医药科技有限公司 一种复合微球的制备方法及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102728287A (zh) * 2012-06-07 2012-10-17 东南大学 一种表面多孔的plga微球的制备方法
CN104448356A (zh) * 2014-12-13 2015-03-25 浙江大学 一种空白plga微球及制备方法
CN108434520A (zh) * 2018-06-08 2018-08-24 黑龙江鑫达企业集团有限公司 一种引导骨组织再生的支架的制备方法
CN111925556A (zh) * 2020-03-20 2020-11-13 江苏普瑞康生物医药科技有限公司 一种复合微球的制备方法及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4376455B2 (ja) 制御された分解速度を有するポリヒドロキシアルカノエート組成物
US6586246B1 (en) Preparing porous biodegradable polymeric scaffolds for tissue engineering using effervescent salts
KR100355563B1 (ko) 비등성 혼합물을 이용한 조직공학용 생분해성의 다공성고분자 지지체 및 그의 제조방법
Hu et al. Modified composite microspheres of hydroxyapatite and poly (lactide-co-glycolide) as an injectable scaffold
US10046088B2 (en) Nanoscale collagen particles and membranes
TWI285100B (en) Surface modification of polysaccharide, the modified polysaccharide, and method of culturing and recovery cells using the same
CA2675181A1 (en) Silica sol material for producing biologically degradable and/or resorbable silica gel materials, the production and use thereof
CN102319449A (zh) 一种基于聚乳酸-羟基乙酸共聚物的生长因子梯度释放微球支架及其制备方法和应用
NZ508148A (en) Method for preparing a porous foam material by dissolving the polymer and mixing in a carbonate compound
CN107670113A (zh) 一种细胞三维扩增培养用微载体的制备方法
JP2014024818A (ja) ゲル体の製造方法
JP2014187901A (ja) バクテリアセルロースを含有する温度感受性複合体及びその製造方法
AU762250B2 (en) Macroporous chitosan beads and preparation method thereof
JP5718815B2 (ja) 重合可能なアルキレングリコール(メタ)アクリレートモノマーから調製されるポリマー粒子
CN109749119A (zh) 聚乳酸-羟基磷灰石微米纳米多级结构复合微球材料及应用
Sun et al. Preparation and characterization of poly (3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate)/pullulan-gelatin electrospun nanofibers with shell-core structure
Li et al. A review on thermoresponsive cell culture systems based on poly (N-isopropylacrylamide) and derivatives
Kulikouskaya et al. Fabrication and characterization of ultrathin spin-coated poly (L-lactic acid) films suitable for cell attachment and curcumin loading
US20040209361A1 (en) UV-cross-linked PVA-based polymer particles for cell culture
CN114262508A (zh) 一种可用于细胞悬浮培养的微球及其制备方法和应用
KR102005579B1 (ko) 세포배양용 다공성 지지체 및 이의 제조방법
CN113368304B (zh) 一种利用基于原位乳化的3d打印技术制备包埋载药微球的多功能海藻酸钠支架的方法
CN110448724B (zh) 一种具有表面凹坑的可降解高分子微球及其制备方法与应用
Zhao et al. Preparation and HL-7702 cell functionality of titania/chitosan composite scaffolds
Mucha et al. Novel technique of polymer composite preparation for bone implants

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220401

RJ01 Rejection of invention patent application after publication