CN114259514A - 五指毛桃提取物的制备方法及其在制备防治肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用,涉及中药提取物的应用技术领域,所述应用中的五指毛桃提取物的制备方法,包括以下步骤:五指毛桃粉碎、回流提取、减压浓缩、冷冻干燥得到五指毛桃提取物。五指毛桃提取物能够降低高脂饮食小鼠的肝脏脂滴积累和肝脏总胆固醇、甘油三酯及血脂含量,降低肝脏损伤指标谷草转氨酶、谷丙转氨酶,降低小鼠体重、肝重/体重,改善肝脏脂质合成和脂质氧化水平,能够预防、治疗肥胖、高血脂症、非酒精性脂肪肝肝炎。用于制备预防、治疗肥胖、高脂血症和非酒精性脂肪肝肝炎相关代谢性疾病的五指毛桃提取物产品。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取物的应用技术领域,尤其涉及五指毛桃提取物的制备方法及其在制备预防治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎产品中的应用。
背景技术
近十年来肥胖的发病率显著提高,随之而来的是肥胖及其相关疾病成为目前和未来公共健康的一个严重威胁。肥胖伴随着一系列的健康问题,包括发生高血脂症、胰岛素抵抗、2型糖尿病、动脉粥样硬化、退行性疾病,甚至增加与一些癌症的相关发生率。肥胖可以导致的肝病包括:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝纤维化、肝硬化、肝癌,甚至肝衰竭。NAFLD的发生与内脏脂肪组织(VAT)过量分泌的游离脂肪酸(FreeFatty Acids,FFAs)密切相关,长期的脂质供给超过肝脏代谢需要可以导致肝细胞损伤,包括促炎细胞因子和信号通路的多种机制可以解释NASH的发病机制。肥胖相关肝病治疗的主要目标是在阻止肝硬化发生的同时,不加重心血管疾病或促进癌症发生。对NASH发病机制认识的不断提高提示多种治疗措施具有潜在价值。
高血脂症是目前临床上一种常见病,简称高血脂。系人体脂代谢失常所致,主要指血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平过高或高密度脂蛋白水平过低。其危害主要表现在因它而继发的多种疾病,如肥胖症、高血压病、冠心病、脂肪肝、糖尿病和低密度脂蛋白血症。其病因复杂,主要包括饮食习惯、生活习惯、生活环境、长期吸烟饮酒、药物的刺激、自身的新陈代谢变化因素等。
五指毛桃(Radix Fici Simplicissimae)为岭南特色中药,以桑科植物粗叶榕的根入药,又名牛奶木、土黄芪、南芪、五爪龙、五爪毛桃等,为药食同源的植物,在广东民间又被称为“广东人参”。味甘、性平,入脾、肺、肝经,具有益气健脾、祛痰化湿、舒筋活络之功效。主治脾虚浮肿、肝硬化腹水、肝炎、跌打扭伤等。以五指毛桃为主要成分研制的中药复方乙肝袋泡茶,具有补益肝肾、健脾祛湿、解毒退黄的功效;加味五指毛桃煎剂能够改善乙肝肝硬化患者的临床体征和肝功能、肝纤维化等,提示五指毛桃在肝脏疾病方面具有一定优势。
发明内容
本发明的目的在于提供五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用,降低肝脏脂滴积累和肝脏总胆固醇、甘油三酯及血脂含量,降低肝脏损伤指标谷草转氨酶、谷丙转氨酶,降低小鼠体重、肝重/体重,改善肝脏脂质合成和脂质氧化水平。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用。
优选的,所述产品为药物、食品、保健品或营养补充剂。
优选的,所述的产品的剂型包含颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、口服液、泡腾片、浸膏剂、糖浆剂、注射剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。
本发明还提供了所述应用中的五指毛桃提取物的制备方法,包括以下步骤:
五指毛桃粉碎、回流提取、减压浓缩、冷冻干燥得到五指毛桃提取物。
优选的,所述五指毛桃粉碎后过筛,所述过筛的筛网目数为60~100目。
优选的,所述回流提取的溶剂为水或者体积浓度60~80%的乙醇溶液,所述溶剂与五指毛桃的质量比为10:0.5~1.5。
优选的,当所述回流提取溶剂为水时,所述回流提取的温度为90~110℃,所述回流提取次数为1~3次,每一次回流提取的时间为0.5~1.5h。
优选的,所述回流提取溶剂为体积浓度60~80%的乙醇溶液时,所述回流提取的温度为60~80℃,所述回流提取的次数为1~3次,每一次回流提取的时间为0.5~1.5h。
优选的,减压浓缩的压力为0.2~0.8Pa,时间为2.5~4h,浓缩比例为14~18:1。
优选的,冷冻干燥的时间为12~20h,冷冻干燥的温度为梯度温度,具体为:
0℃~2℃,2~4h;
-20℃~-60℃,6~10h;
-10℃~10℃,4~6h。
本发明提供了五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用,对已知中药五指毛桃发掘了新的药用价值,动物实验表明,五指毛桃提取物能够降低高脂饮食小鼠的肝脏脂滴积累和肝脏总胆固醇、甘油三酯及血脂含量,降低肝脏损伤指标谷草转氨酶、谷丙转氨酶,降低小鼠体重、肝重/体重,改善肝脏脂质合成和脂质氧化水平,能够预防、治疗肥胖、高血脂症、非酒精性脂肪肝肝炎。制备预防、治疗肥胖、高脂血症和非酒精性脂肪肝肝炎相关代谢性疾病的五指毛桃提取物产品,开拓了五指毛桃的医药用途,为有效地改善肥胖、高脂血症和非酒精性脂肪肝病提供一种新的候选药物。另外,本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全,制备工艺简单,可制成各种剂型,且服量小,使用方便,因此易于推广。
附图说明
图1-A为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠外形的影响;
图1-B为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠皮下腹股沟脂肪的影响;
图2-A为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠1-19周体重变化影响;
图2-B为实施例1不同处理组小鼠的摄食量;
图2-C为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏外形影响;
图2-D为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝指数影响;
图2-E为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏HE染色以及油红O染色图影响;
图2-F为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠血清中TC含量的影响;
图2-G为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠血清中TG含量的影响;
图2-H为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠血清中LDL-C含量的影响;
图2-I为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠血清中HDL-C含量的影响;
图2-J为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中TC含量的影响;
图2-K为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中TG含量的影响;
图2-L为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中ALT含量的影响;
图2-M为实施例1不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中AST含量的影响;
图3-A为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠外形的影响;
图3-B为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠皮下腹股沟脂肪的影响;
图4-A为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠1-19周体重变化影响;
图4-B为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏外形影响;
图4-C为实施例2不同处理组小鼠的摄食量;
图4-D为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝指数影响;
图4-E为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏HE染色以及油红O染色图影响;
图4-F为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠血清中TC含量的影响;
图4-G为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中TC含量的影响;
图4-H为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中TG含量的影响;
图4-I为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中AST含量的影响;
图4-J为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝脏中ALT含量的影响;
图4-K为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠血清中LDL-C含量的影响;
图5-A~I为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝组织中脂质代谢指标的影响;
图5-J~L为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠血清中炎症指标的影响;
图5-M~P为实施例2不同处理组对高脂饮食小鼠肝组织中炎症指标的影响;
图中正常组(NFD)、模型组(HFD)、五指毛桃低剂量组(FV-E(L),2g/kg),五指毛桃高剂量组(FV-E(H),4g/kg)。
具体实施方式
本发明提供了五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用。
本发明中,所述产品优选为药物、食品、保健品或营养补充剂。
本发明中,所述的产品的剂型优选为颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、口服液、泡腾片、浸膏剂、糖浆剂、注射剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。
本发明中,所述五指毛桃提取物制备的产品中,优选的可采用常规的赋形剂、润滑剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂和甜味剂中的一种或几种;赋形剂优选为乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、结晶纤维素;润滑剂优选为硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉;抗氧化剂优选为亚硫酸盐、抗坏血酸;防腐剂优选为二羟基乙酸、氯丁醇;辅料均采用食品级标准用量。
本发明还提供了所述应用中的五指毛桃提取物的制备方法,包括以下步骤:
五指毛桃粉碎、回流提取、减压浓缩、冷冻干燥得到五指毛桃提取物。
本发明中,五指毛桃粉碎后过筛,所述过筛的筛网目数优选为60~100目,进一步优选为70~90目,再进一步优选为75~85目。
本发明中,过筛后进行回流提取,所述回流提取的溶剂优选为水或者体积浓度60~80%的乙醇溶液,所述溶剂与五指毛桃的质量比优选为10:0.5~1.5,进一步优选为10:0.8~1.2,再进一步优选为10:1。
本发明中,当回流提取溶剂为水时,所述回流提取的温度为优选90~110℃,进一步优选为95~105℃,再进一步优选为100℃;所述回流提取次数优选为1~3次,进一步优选为2次;每一次回流提取的时间优选为0.5~1.5h,进一步优选为0.8~1.2h,再进一步优选为1h。
本发明中,所述回流提取的溶剂还优选为65~75%乙醇溶液,进一步优选为70%的乙醇溶液;当回流提取溶剂为体积浓度60~80%的乙醇溶液时,所述回流提取的温度优选为60~80℃,进一步优选为65~75℃,再进一步优选为70℃;所述回流提取的次数优选为1~3次,进一步优选为2次;每一次回流提取的时间优选为0.5~1.5h,进一步优选为0.8~1.2h,再进一步优选为1h。
本发明中,进行回流提取后减压浓缩,所述减压浓缩的压力优选为0.2~0.8Pa,进一步优选为0.3~0.7Pa,再进一步优选为0.4~0.6Pa;所述减压浓缩的时间优选为2.5~4h,进一步优选为2.5~3.5h,再进一步优选为2.5~3h;所述减压浓缩的浓缩比例优选为14~18:1,进一步优选为15~17:1,再进一步优选为16:1。
本发明中,减压浓缩后进行冷冻干燥,冷冻干燥的时间优选为10~20h,进一步优选为12~18h,再进一步优选为14~16h;所述冷冻干燥的温度优选为梯度温度,具体为:
0℃~2℃,2~4h;
-20℃~-60℃,6~10h;
-10℃~10℃,4~6h。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
五指毛桃醇提物的制备方法及药效研究如下:
(1)五指毛桃醇提物的制备方法
五指毛桃粗粉碎为80目后,用10倍质量的70%乙醇加热回流提取2次,每次1h,回流提取的温度为70℃,第二次提取时,乙醇质量仍为五指毛桃质量的10倍;提取液减压浓缩,压力为0.6Pa,时间为3h,冷冻干燥16h后,得五指毛桃醇提取物,所述冷冻干燥的过程为:
0℃~2℃,4h;
-20℃~-60℃,6h;
-10℃~10℃,6h。
(2)动物实验分组方法及给药方法
将28只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(NFD)、模型组(HFD)、五指毛桃低剂量组(FV-E(L),2g/kg),五指毛桃高剂量组(FV-E(H),4g/kg),四组,每组分别为7、7、7、7只。高脂饮食建立肥胖模型,具体建模方法:适应性喂养2周后,将小鼠随机分为四组:NFD组(n=7)喂以正常饲料饮食,HFD组(n=7)和FV剂量组(FV-E(L)和FV-E(H)组,每组n=7)喂以高脂饲料饮食和葡萄糖果糖水溶液喂养17周,建立非酒精性脂肪肝模型;建模成功的标志:模型组的肝指数显著性高于正常组。造模的同时灌胃给予生理盐水与药物,所有组动物正常饮食饲养、体重记录每周一次。第19周后戊巴比妥钠麻醉、眼球取血、处死。
(3)小鼠各样本的收集与处理
①小鼠体表外型和肝脏指数的测定
给小鼠腹腔注射水合氯醛,取全部肝脏,称重,生理盐水漂洗肝组织残留的血液,将肝脏置于EP管内,标记,放在装有干冰的泡沫盒内,然后转移到-80℃冰箱保存,待用。记录小鼠开始体重、体重变化、最终体重、肝脏、腹股沟重量,计算肝指数。
②肝脏病理切片
各组取新鲜肝脏组织,放入配制好的10%中性甲醛固定液中固定24h,然后经过脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤制作石蜡切片,切片厚度为4μm,进行HE染色,观察肝脏纤维化、坏死评分,以及脂细胞观察。
③血清和肝脏组织生化指标的测定
血清:摘眼球取血,取血后静置1h,4℃,3500rpm,离心10min,血清在-80℃下留存,采用试剂盒检测血样本中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、ALT和AST。
肝组织:用蒸馏水清洗肝组织,在冰上有Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,5mmol/L含有2mmoml/L EDTA,pH值为7.4)进行组织匀浆,组织匀浆液在4℃用8000rpm离心10min,收集上清液,采用试剂盒检测TC、TG、水平。
(4)实验结果
五指毛桃对非酒精性脂肪肝小鼠的药效学研究
小鼠外形图(图1-A):NFD组的小鼠外形正常;HFD组腹部皮下脂肪堆积;五指毛桃干预后小鼠形态改变明显变瘦,向正常组靠近,说明五指毛桃具有减少肥胖的效果。
腹股沟脂肪图(图1-B):NFD组腹股沟脂肪大小正常,而HFD组腹股沟脂肪体积明显增加;与HFD组相比,五指毛桃干预后腹股沟脂肪体积明显减少,说明五指毛桃能够减轻肥胖小鼠皮下脂肪堆积。
小鼠体重变化图(图2-A)显示,与NFD组相比,HFD组体重明显增加;与HFD组相比,FV组体重明显降低;尽管模型组和给药组小鼠的摄食量没有明显区别(图2-B),说明五指毛桃可以减轻小鼠体重增加。
小鼠肝脏外形图以及肝指数图(图2-C、图2-D)显示,NFD组肝脏颜色正常,结构完整;HFD组颜色明显变浅;FV干预后肝脏颜色和形态得到明显改善,同时肝指数在FV干预后有显著的下降,说明五指毛桃对肝脏有保护作用。
小鼠肝脏HE染色以及油红O染色(图2-E),HE染色结果显示,NFD组肝脏组织微观结构形态正常,细胞排列整齐,间隙致密,染色均匀,细胞结构完整;模型组小鼠的肝细胞变化比较明显,细胞排列没有规律,肿胀较为明显,有分布较广泛且大的脂肪滴,肝细胞坏死情况也比较明显;经药物治疗后小鼠情况有所改善五指毛桃给药组小鼠的肝细胞有轻微脂肪变性,细胞核的结构较模型组清晰,且按一定的顺序进行排列,但仍可观察到少数的脂滴空泡,说明五指毛桃起到了一定的肝脏保护作用;与HFD组相比,FV(2g/kg、4g/kg)干预后脂质沉积明显减少,并且其改善程度具有统计学意义,说明五指毛桃能够减轻高脂饮食肥胖小鼠肝脏脂质沉积。
血清TC含量(图2-F):血清中TC含量结果显示在HFD组中血清TC含量明显增高,而在五指毛桃干预后血清TC明显降低,说明五指毛桃能够显著改善高脂饮食肥胖小鼠血清中TC蓄积。血清TG含量(图2-G),与模型组相比,在五指毛桃高低剂量给药组中呈现下降趋势,尽管三组没有显著性。
血清LDL-C含量(图2-H):与HFD组比较,五指毛桃干预后可以减少肥胖小鼠中血清中LDL-C含量,改善LDL-C在肝脏中的蓄积。注:与HFD组比较,*P<0.05;与NFD比较,#p<0.05。
五指毛桃对高脂饮食小鼠非酒精性脂肪肝炎的影响
肝脏TC、TG含量(图2-J、图2-K):HFD组中肝脏TC和TG都比NFD组显著增高,在FV干预后肝脏TC、TG蓄积情况有明显的改善,说明FV可显著降低高脂饮食导致的肥胖小鼠肝脏中TC、TG含量。
肝脏ALT、AST含量(图2-L、图2-M):与NFD组相比,HFD组ALT和AST水平明显增加;与HFD组相比,FV组ALT和AST水平明显降低,且呈剂量依赖性,说明五指毛桃能够抑制高脂饮食导致的肥胖小鼠的肝脏损伤,具有肝保护作用。
实施例2
五指毛桃水提物的制备方法如下:
(1)五指毛桃水提物的制备方法
五指毛桃粗粉碎后,过80目筛,用10倍质量的纯水回流提取2次,每次1h,回流提取的温度为100℃,第二次提取时,纯水质量仍为五指毛桃质量的10倍,提取液减压浓缩,压力为0.2Pa,时间为3h,冷冻干燥20h,得五指毛桃水提物,冷冻干燥的具体过程为:
0℃~2℃,4h;
-20℃~-60℃,10h;
-10℃~10℃,6h。
高脂饮食小鼠模型的建立
(2)动物实验分组方法及给药方法
将38只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组(NFD)、模型组(HFD)、五指毛桃低剂量组(FV-L,2g/kg),五指毛桃高剂量组(FV-H,4g/kg),四组,每组分别为8、10、10、10只。高脂饮食建立肥胖模型,具体建模方法:适应性喂养2周后,将小鼠随机分为四组:NFD组(n=7)喂以正常饲料饮食,HFD组(n=7)和FV剂量组(FV-E(L)和FV-E(H)组,每组n=7)喂以高脂饲料饮食和葡萄糖果糖水溶液喂养17周,建立非酒精性脂肪肝模型;建模成功的标志:模型组的肝指数显著性高于正常组。造模的同时灌胃给予生理盐水与药物,所有组动物正常饮食饲养、体重记录每周一次。第19周后戊巴比妥钠麻醉、眼球取血、处死。
(3)小鼠各样本的收集与处理
①小鼠体表外型和腹股沟重量的测定
给小鼠腹腔注射水合氯醛,取全部肝脏,称重,生理盐水漂洗肝组织残留的血液,将肝脏置于EP管内,标记,放在装有干冰的泡沫盒内,然后转移到-80℃冰箱保存,待用。记录小鼠开始体重、体重变化、最终体重、肝脏、腹股沟重量,计算肝指数。
②肝脏病理切片
各组取新鲜肝脏组织,放入配制好的10%中性甲醛固定液中固定24h,然后经过脱水、透明、浸蜡、包埋等步骤制作石蜡切片,切片厚度为4um,进行HE染色,观察肝脏纤维化、坏死评分,以及脂细胞观察。
③血清和肝脏组织生化指标的测定
血清:摘眼球取血,取血后静置1h,4℃,3500rpm,离心10min,血清在-80℃下留存,采用试剂盒检测血样本中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、ALT和AST。
肝组织:用蒸馏水清洗肝组织,在冰上有Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,5mmol/L含有2mmoml/L EDTA,pH值为7.4)进行组织匀浆,组织匀浆液在4℃用8000rpm离心10min,收集上清液,采用试剂盒检测TC、TG、水平。
(4)实验结果
五指毛桃对非酒精性脂肪肝小鼠的药效学研究
小鼠外形图(图3-A):NFD组的小鼠外形正常;HFD组腹部皮下脂肪堆积;五指毛桃干预后小鼠形态改变明显变瘦,向正常组靠近,说明五指毛桃具有减少肥胖的效果。
腹股沟脂肪图(图3-B):NFD组腹股沟脂肪大小正常,而HFD组腹股沟脂肪体积明显增加;与HFD组相比,五指毛桃干预后腹股沟脂肪体积明显减少,说明五指毛桃能够减轻肥胖小鼠皮下脂肪堆积。
小鼠体重变化图(图4-A)显示,与NFD组相比,HFD组体重明显增加;与HFD组相比,FV组体重明显降低;尽管模型组和给药组小鼠的摄食量没有明显区别(图4-C),说明五指毛桃可以减轻小鼠体重增加。
小鼠肝脏外形图以及肝指数图(图4-B、图4-D)显示,NFD组肝脏颜色正常,结构完整;HFD组颜色明显变浅;FV干预后肝脏颜色和形态得到明显改善,同时肝指数在FV干预后有显著的下降,说明五指毛桃对肝脏有保护作用。
小鼠肝脏HE染色以及油红O染色(图4-E),HE染色结果显示,NFD组肝脏组织微观结构形态正常,细胞排列整齐,间隙致密,染色均匀,细胞结构完整;模型组小鼠的肝细胞变化比较明显,细胞排列没有规律,肿胀较为明显,有分布较广泛且大的脂肪滴,肝细胞坏死情况也比较明显;经药物治疗后小鼠情况有所改善五指毛桃给药组小鼠的肝细胞有轻微脂肪变性,细胞核结构的较模型组清晰,且按一定的顺序进行排列,但仍可观察到少数的脂滴空泡,说明五指毛桃起到了一定的肝脏保护作用;与HFD组相比,FV(2g/kg、4g/kg)干预后脂质沉积明显减少,并且其改善程度具有统计学意义,说明五指毛桃能够减轻高脂饮食肥胖小鼠肝脏脂质沉积。
血清TC含量(图4-F):血清中TC含量结果显示在HFD组中血清TC含量明显增高,而在五指毛桃干预后血清TC明显降低,说明五指毛桃能够显著改善高脂饮食肥胖小鼠血清中TC蓄积。
血清LDL-C含量(图4-K):与HFD组比较,五指毛桃干预后可以减少肥胖小鼠中血清中LDL-C含量,改善LDL-C在肝脏中的蓄积。注:与HFD组比较,*P<0.05;与NFD组比较,#p<0.05。
五指毛桃对高脂饮食小鼠非酒精性脂肪肝炎的影响
肝脏TC、TG含量(图4-G、图4-H):HFD组中肝脏TC和TG都比NFD组显著增高,在FV干预后肝脏TC、TG蓄积情况有明显的改善,说明FV可显著降低高脂饮食导致的肥胖小鼠肝脏中TC、TG含量。
肝脏AST、ALT含量(图4-I、图4-J):与NFD组相比,HFD组ALT和AST水平明显增加;与HFD组相比,FV组ALT和AST水平明显降低,且呈剂量依赖性,说明五指毛桃能够抑制高脂饮食导致的肥胖小鼠的肝脏损伤,具有肝保护作用。
小鼠肝组织中脂质代谢指标(图5-A~I):与NFD组相比,HFD组中与脂质合成相关的基因SREBP-1、SCD1、ACACA,与胆固醇合成相关的基因HMGCR,脂质摄取相关的基因CD36表达明显增高,与脂肪酸氧化相关的基因CPT1α表达明显下降,而五指毛桃干预后,均改善了高脂饮食诱导小鼠的脂质代谢相关的基因表达,说明五指毛桃显著改善NAFLD小鼠肝脏中肝脏脂质代谢相关指标的表达。
小鼠血清中炎症指标图(图5J~L)和小鼠肝组织中炎症指标(图5M~P):与NFD组相比,HFD组血清中炎症相关指标IL-6、IL-1β、TNF-α表达明显增加,肝组织中IL-1β、TNF-α和CCL5表达明显升高,而五指毛桃干预后,相关炎症指标的mRNA和蛋白水平明显下降,表明,五指毛桃通过减少血清和肝细胞中的炎症来部分减轻肝细胞损伤。注:与HFD组比较,*P<0.05;与对照组比较,#p<0.05。
由以上实施例可知,本发明提供了五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用以及其制备方法,本发明所述的五指毛桃提取物通过降低肥胖小鼠体重、血清中总胆固醇和肝组织中总胆固醇、甘油三酯,减少脂肪堆积,同时增加肝组织中脂肪酸氧化指标的表达,减少血清和肝组织中炎症指标的表达,促进肥胖小鼠脂肪酸代谢,增加能量消耗,改善肥胖、非酒精性脂肪肝炎和高脂血症。所述的五指毛桃提取物能够开发成一种具有同时改善肥胖和高血脂的药物,且具有良好的应用前景、重要的临床意义和商业价值。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.五指毛桃提取物在制备预防和/或治疗肥胖、高血脂和非酒精性脂肪肝炎的产品中的应用。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述产品为药物、食品、保健品或营养补充剂。
3.如权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述产品的剂型包含颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、口服液、泡腾片、浸膏剂、糖浆剂、注射剂。
4.权利要求1所述应用中的五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
五指毛桃粉碎、回流提取、减压浓缩、冷冻干燥得到五指毛桃提取物。
5.如权利要求4所述五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,所述五指毛桃粉碎后过筛,所述过筛的筛网目数为60~100目。
6.如权利要求4所述五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,所述回流提取的溶剂为水或者体积浓度60~80%的乙醇溶液,所述溶剂与五指毛桃的质量比为10:0.5~1.5。
7.如权利要求6所述五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,当所述回流提取溶剂为水时,所述回流提取的温度为90~110℃,所述回流提取次数为1~3次,每一次回流提取的时间为0.5~1.5h。
8.如权利要求6所述五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,当所述回流提取溶剂为体积浓度60~80%的乙醇溶液时,所述回流提取的温度为60~80℃,所述回流提取的次数为1~3次,每一次回流提取的时间为0.5~1.5h。
9.如权利要求4~8任一项所述五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,减压浓缩的压力为0.2~0.8Pa,时间为2.5~4h,浓缩比例为14~18:1。
10.如权利要求4~8任一项所述五指毛桃提取物的制备方法,其特征在于,冷冻干燥的时间为12~20h,冷冻干燥的温度为梯度温度,具体为:
0℃~2℃,2~4h;
-20℃~-60℃,6~10h;
-10℃~10℃,4~6h。
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