CN114259465B - 一种加米霉素注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种加米霉素注射液及其制备方法，该加米霉素注射液包括加米霉素、牛磺酸、茶多酚和注射用水；所述加米霉素注射液的pH为4.2‑4.8。本发明提供的加米霉素注射液，通过在加米霉素注射液中添加牛磺酸和茶多酚，两者相互配合，能够极大提高加米霉素原料药的溶解度，结合4.2‑4.8的pH值，能够提高加米霉素注射液的稳定性，降低对注射部位的刺激性。

Description

一种加米霉素注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于兽药药物制剂领域，尤其涉及一种加米霉素注射液及其制备方法。

背景技术

加米霉素属于大环内酯类抗生素，具有抗菌谱广、抗菌药活性强，体内分布广泛、吸收快、低残留和安全性高等优点，主要用于治疗溶血性巴斯德菌、出血败血性巴斯德菌和嗜组织菌等细菌病原体导致的牛感染性疾病，在兽医临床领域具有广泛的应用前景。

目前，加米霉素的剂型主要是冻干粉剂和注射液剂，其中，注射液剂因工艺流程更为简单，价格更低，应用更为广泛。在制备注射液的过程中，由于加米霉素不溶于水，需要加入助溶剂才能溶解，而且其稳定性不佳，为了防止氧化一般需要加入抗氧化剂，如现有技术中公开的一种加米霉素注射液，具体是采用注射用水做溶剂、磷酸做助溶剂、亚硫酸氢钠做抗氧剂，但是该注射液存在pH值不稳定的问题，在长期放置过程中，抗氧剂亚硫酸氢钠易被氧化成硫酸氢钠，导致pH降低，进而影响产品稳定性、增加注射的刺激性。

针对上述问题，现有技术中公开了一种采用注射用水做溶剂、使用大量维生素C同时充当助溶剂和抗氧化剂的加米霉素注射液，该产品虽然解决上述的稳定性和注射刺激性问题，但是维生素C的大量使用会对牲畜造成一定的危害：短期内服用会产生多尿、腹泻等副作用；长期服用会导致草酸及尿酸结石，引起动物痛风。

因此，开发一种稳定性高，刺激性和副作用小的加米霉素注射液具有一定的临床需求和应用价值。

发明内容

鉴于此，本发明提供一种加米霉素注射液及其制备方法，该加米霉素注射液能够提高加米霉素注射液的稳定性，而且对注射部位的刺激性小。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种加米霉素注射液，包括加米霉素、牛磺酸、茶多酚和注射用水；所述加米霉素注射液的pH为4.2-4.8。

发明人通过大量实验意外发现通过在加米霉素注射液中添加牛磺酸和茶多酚，两者相互配合，能够极大提高加米霉素原料药的溶解度，结合4.2-4.8的pH值，能够提高加米霉素注射液的稳定性，降低对注射部位的刺激性。

可选地，每100mL所述加米霉素注射液中，含有加米霉素5-20g、牛磺酸1-3g、茶多酚0.1-0.3g。

通过对加米霉素注射液中加米霉素、牛磺酸及茶多酚的含量进行限定，使得加米霉素注射液的稳定性更强，有关物质水平更低，副作用更小。

可选地，每100mL所述加米霉素注射液中，含有加米霉素10-15g、牛磺酸2-3g、茶多酚0.2-0.3g。

可选地，每100mL所述加米霉素注射液中，含有加米霉素15g、牛磺酸3g、茶多酚0.2g。

本发明提供了上述的加米霉素注射液的制备方法，包括如下步骤：

将牛磺酸溶于配置量体积70％-90％的注射用水，然后加入加米霉素，搅拌溶解后，溶入茶多酚，调节pH为4.5-5.0，用注射用水定容，过滤，灌装，液面上充氮，封口，灭菌，即得所述加米霉素注射液。

本发明提供的加米霉素注射液的制备方法，通过控制混料顺序，将牛磺酸溶于部分注射用水中，加入加米霉素进行溶解，再溶入茶多酚，使得配料时间大大缩短，提高了生产效率，而且有效避免了配料过程中加米霉素的氧化，制得的加米霉素注射液的稳定性好，黏度低，对注射部位的刺激性小。如果更换加料顺序不仅会延长配料时间，增加制得加米霉素注射液中有关物质的含量，而且可能会导致加米霉素不能完全有效地溶解。

此外，发明人经研究还发现，本发明提供的灌装后的加米霉素注射液经灭菌后，体系pH都有所下降。

可选地，进行液面上充氮至顶空残氧量<5％。

可选地，用0.01mol/L盐酸和0.01mol/L氢氧化钠调节pH。

可选地，所述过滤包括：将定容后的药液经过两组规格相同的聚醚砜滤芯过滤，两组所述聚醚砜滤芯之间的压差≤0.2MPa。

可选地，所述聚醚砜滤芯的孔径为0.45μm，长度为10英寸。

可选地，所述灭菌的温度为121℃，灭菌时间为12-15min。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

加米霉素不溶于水、易氧化的特性增加了加米霉素注射液制备的困难程度，为提高加米霉素在水中的溶解度、防止制备及储存过程中加米霉素的氧化，需要在注射液中添加助溶剂和抗氧化剂。发明人在进行多种助溶剂和抗氧化剂的筛选过程中，意外发现同时添加牛磺酸和茶多酚，并将体系pH控制在4.2-4.8的条件下，能够提高加米霉素在注射用水中的溶解性及稳定性，但是只能提高短期内加米霉素注射液的稳定性，在长期的储存过程中有关物质含量会有一定的增加。

通过对不同用量的牛磺酸进行考察，发现如果单独添加牛磺酸，牛磺酸的用量较大(需要添加牛磺酸至约10g/100mL才会提高加米霉素的溶解性)，最重要的是副作用较大：由于牛黄酸是从肾脏排泄，临床发现动物摄入过多易造成肾脏和肝脏的损伤。如果单独添加茶多酚，茶多酚用量控制在约1g/100mL以上时能够提高加米霉素的溶解性，但是注射液的稳定性较差，分析原因有可能是因为在灭菌及储存过程中茶多酚中的儿茶素等氧化分解导致，而且，由于茶多酚是一种咖啡因食物，临床发现摄入过多会导致精神振奋，分泌失调。

在此基础上，发明人经进一步深入研究发现，通过限定每100mL所述加米霉素注射液中各物质的含量：加米霉素5-20g、牛磺酸1-3g、茶多酚0.1-0.3g，能够进一步极大提高加米霉素注射液的长期稳定性，显著降低有关物质水平，分析原因有可能是因为特定含量的牛黄酸和茶多酚之间能够发挥协同作用，在灭菌、储存过程中牛黄酸抑制了茶多酚中儿茶素的氧化分解。

实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

各实施例和对比例中在加入茶多酚调节体系pH值时，采用0.01mol/L盐酸或0.01mol/L氢氧化钠。

实施例1

本实施例提供一种加米霉素注射液，具体制备方法如下：

将30g牛磺酸溶于800mL的注射用水中，然后加入150g加米霉素，搅拌溶解后，溶入2g茶多酚，调节体系pH为4.5后，加注射用水定容至1000mL；

将定容后的药液经过两组规格相同聚醚砜滤芯过滤(聚醚砜滤芯的孔径为0.45μm，长度为10英寸)，两组聚醚砜滤芯之间的压差控制在≤0.2MPa，滤液灌装完成后、封口前在液面上方充入氮气(氮气流量5-8L/min至顶空残氧量<5％)，封口，121℃灭菌12min，即得所述加米霉素注射液。

实施例2

本实施例提供一种加米霉素注射液，具体制备方法如下：

将10g牛磺酸溶于700mL的注射用水中，然后加入50g加米霉素，搅拌溶解后，溶入1g茶多酚，调节体系pH为5.0后，加注射用水定容至1000mL；

将定容后的药液经过两组规格相同聚醚砜滤芯过滤(聚醚砜滤芯的孔径为0.45μm，长度为10英寸)，两组聚醚砜滤芯之间的压差控制在≤0.2MPa，滤液灌装完成后、封口前在液面上方充入氮气(氮气流量5-8L/min至顶空残氧量<5％)，封口，121℃灭菌15min，即得所述加米霉素注射液。

实施例3

本实施例提供一种加米霉素注射液，具体制备方法如下：

将20g牛磺酸溶于900mL的注射用水中，然后加入200g加米霉素，搅拌溶解后，溶入3g茶多酚，调节体系pH为4.7后，加注射用水定容至1000mL；

将定容后的药液经过两组规格相同聚醚砜滤芯过滤(聚醚砜滤芯的孔径为0.45μm，长度为10英寸)，两组聚醚砜滤芯之间的压差控制在≤0.2MPa，滤液灌装完成后、封口前在液面上方充入氮气(氮气流量5-8L/min至顶空残氧量<5％)，封口，121℃灭菌12min，即得所述加米霉素注射液。

实施例4

本实施例与实施例1相似，区别仅在于各组分的用量不同，本实施例中各组分的用量如下：

加米霉素100g、牛磺酸20g、茶多酚3g。

实施例5

本实施例与实施例1相似，区别仅在于各组分的用量不同，本实施例中各组分的用量如下：

加米霉素120g、牛磺酸25g、茶多酚2.5g。

对比例1

本对比例与实施例1相似，区别仅在于用维生素C代替茶多酚，本对比例中维生素C的用量为2g。

对比例2

本对比例与实施例1相似，区别仅在于调节体系的pH不同，本对比例中在溶入茶多酚后，调节体系pH为4.2。

实验例1稳定性考察

将各实施例和对比例制得的加米霉素注射液，按市售包装，在40℃土2℃、相对湿度75％±5％条件下放置6个月，并在第1个月、2个月、3个月、6个月末分别取样一次，对其外观性状、澄清度、含量与有关物质进行检测，具体结果如下表2所示。

其中，含量及有关物质均采用岛津LC-16、资生堂CAPCELL PAK C18MGⅡS5(250×4.6mm)色谱柱进行检测，含量的具体检测方法如下：

将各实施例和对比例制得的加米霉素注射液分别用去离子水稀释成每1mL约含0.3mg加米霉素，即得各实施例和对比例的待测溶液；

流动相：0.01M磷酸氢二钾(用20wt％磷酸溶液调节pH至8.0):乙腈＝20∶80(v/v)；流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；柱温为40℃；进样量为20μL。

有关物质的具体检测方法如下：

将各实施例和对比例制得的加米霉素注射液分别用去离子水稀释成每1mL约含8mg加米霉素，即得各实施例和对比例的待测溶液；

流速为1.0mL/min；检测波长为210nm；进样量为50μL；柱温为35℃；流动相A：0.02M磷酸氢二钾(用20wt％磷酸溶液调节pH至8.4)∶乙腈＝90∶10(v/v)，流动相B：0.02M磷酸氢二钾(用20wt％磷酸溶液调节pH至8.4)∶乙腈＝30∶70(v/v)，按下表1所示梯度程序进行洗脱：

表1洗脱梯度

时间min	流动相A％	流动相B％
			0	50	50
10	50	50
			25	0	100
50	0	100
			50.1	50	50
70	50	50

表2稳定性考察结果

注：稳定性考察中出现浑浊后，取续滤液测定含量

由上表中的加速稳定性试验结果表明，实施例1制得的加米霉素注射液的外观性状、pH值、含量与有关物质均无明显变化，稳定性最好；实施例4-5制得的加米霉素注射液在加速后的第6个月，其含量与有关物质没有明显变化，稳定性良好；实施例2-3制得的加米霉素注射液在加速后的第6个月，其含量与有关物质没有明显变化，稳定性较好；对比例1的加米霉素注射液于第1个月开始含量下降，有关物质显著增加，第2个月时出现浑浊，澄清度不合格，且随着放置时间的延长注射液颜色逐渐加深，pH值下降；对比例2的加米毒素注射液在第1个月其含量和pH明显下降、有关物质显著增加。

实验例2局部刺激性实验

选取健康新西兰家兔24只，雌雄各半，饲养三天后，随机分为2组，每组12只，分别剪去家兔两侧股四头肌处被毛，按无菌操作法，于右侧股四头肌注入各加米霉素注射液和葡萄糖注射液，注射量均为1mL，其中，第一组注射实施例1制得的加米霉素注射液，第二组注射等体积的葡萄糖注射液，每天一次，连续3天，每天给药前后对家兔和注射部位进行肉眼观察，观察注射部位有无红肿、出血等刺激反应，最后一次给药24h、一周后分别处死动物，每次每组处死6只，观察注射部位及周围组织有无水肿、充血、坏死等显著刺激性反应。组织水肿、充血、坏死程度分为0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度，0度为无变化，Ⅰ度为轻微变化，Ⅱ度为明显变化，Ⅲ度为严重变化。具体实验结果如下表所示。

表3局部刺激性试验结果

由上表中的数据可知，本发明制备得到的加米霉素注射液基本无刺激性，安全性高。

同理，为了验证其它实施例制得的加米霉素注射液的局部刺激性，采用上述同样的方法，分别对实施例2-5制得的加米霉素注射液进行上述测试；经测试，实施例2-5制得的加米霉素注射液的测试结果与实施例1的测试结果整体趋势一致，表明本发明提供的加米霉素注射液对注射部位没有刺激性，安全性高。

试验例3对巴氏杆菌引起的肉牛呼吸道疾病临床疗效试验

材料及方法

1、试验药物及用量：实施例1的加米霉素注射液，皮下注射，每日1次，连用3日，一次量每1kg体重牛6mg加米霉素(相当于每25kg体重注射1mL)。

对照药物：头孢噻呋注射液，皮下注射，每日1次，连用3日，一次量每1kg体重牛3mg头孢噻呋。

2、试验动物：内蒙古自治区赤峰市某牛场，30头已经确诊为巴氏杆菌感染的肉牛，发病日龄为8个月。

3、试验方法：将自然发病的30头肉牛，随机分成实施例组、对照组和空白组，每组10头。实验例组注射实施例1制得的加米霉素注射液，对照组注射对照药物头孢噻呋注射液，空白组不给药，实验组和对照组每次用药前观察并记录临床症状，观察期为20d。

疗效评价指标

1、死亡率

在试验期间，肉牛出现巴氏杆菌的典型症状，病牛干咳，流泡沫样或脓性鼻液，呼吸困难胸部听诊有支气管呼吸音和水疱音，严重的有胸膜摩擦音，叩诊有浊音区，病牛便秘或下痢，同时可从该处分离出大量溶血性较强的巴氏杆菌。根据每组动物中的死亡数计算死亡率。

死亡率(％)＝每组死亡数(头)/各组总数(头)×100％。

2、治愈率

在试验期间，用药的肉牛临床症状消失，呼吸、粪便及精神恢复正常，接种菌分离阴性，均属治愈。根据每组动物中的治愈数极少数治愈率。

治愈率(％)＝各组治愈数(头)/各组总数(头)×100％。

3、有效率

治愈的肉牛为给药后呼吸症状缓解，食欲增加，下痢减轻或消失等症状的猪，均判断为有效，据此计算有效率。

有效率(％)＝各组存活数(头)/各组总数(头)×100％。

实验结果

具体实验结果如下表所示。

表4对巴氏杆菌病的疗效试验结果

由上表中的数据可知，实验例组无动物死亡，其有效率及治愈率显著高于对照组(P<0.05)，说明本发明制备得到的加米霉素注射液对巴氏杆菌引起的肉牛呼吸道疾病治疗效果显著。

同理，为了验证其它实施例制得的加米霉素注射液的药效，采用上述同样的方法，分别对实施例2-5制得的加米霉素注射液进行上述测试；经测试，实施例2-5制得的加米霉素注射液的测试结果与实施例1的测试结果整体趋势一致，表明本发明提供的加米霉素注射液对巴氏杆菌引起的肉牛呼吸道疾病治疗效果显著。

而且，本发明提供的加米霉素注射液在进行上述实验的过程中均没有出现肾脏和肝脏的损伤以及失眠等副作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种加米霉素注射液，其特征在于，包括加米霉素、牛磺酸、茶多酚和注射用水；其中，每100mL所述加米霉素注射液中，含有加米霉素5-20g、牛磺酸1-3g和茶多酚0.1-0.3g，所述加米霉素注射液的pH为4.2-4.8；

配置加米霉素注射液时，将牛磺酸溶于配置量体积70％-90％的注射用水，然后加入加米霉素，搅拌溶解后，溶入茶多酚，调节pH为4.5-5.0，用注射用水定容。

2.如权利要求1所述的加米霉素注射液，其特征在于，每100mL所述加米霉素注射液中，含有加米霉素10-15g、牛磺酸2-3g和茶多酚0.2-0.3g。

3.如权利要求1或2任一项所述的加米霉素注射液，其特征在于，每100mL所述加米霉素注射液中，含有加米霉素15g、牛磺酸3g和茶多酚0.2g。

4.一种权利要求1-3中任一项所述的加米霉素注射液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

将牛磺酸溶于配置量体积70％-90％的注射用水，然后加入加米霉素，搅拌溶解后，溶入茶多酚，调节pH为4.5-5.0，用注射用水定容，过滤，灌装，液面上充氮，封口，灭菌，即得所述加米霉素注射液。

5.如权利要求4所述的加米霉素注射液的制备方法，其特征在于，进行液面上充氮至顶空残氧量<5％。

6.如权利要求4所述的加米霉素注射液的制备方法，其特征在于，用0.01mol/L盐酸或0.01mol/L氢氧化钠调节pH。

7.如权利要求4所述的加米霉素注射液的制备方法，其特征在于，所述过滤包括：将定容后的药液经过两组规格相同的聚醚砜滤芯过滤，两组所述聚醚砜滤芯之间的压差≤0.2MPa。

8.如权利要求7所述的加米霉素注射液的制备方法，其特征在于，所述聚醚砜滤芯的孔径为0.45μm，长度为10英寸。

9.如权利要求4-8任一项所述的加米霉素注射液的制备方法，其特征在于，所述灭菌的温度为121℃，灭菌时间为12-15min。