CN114249809A - 一种glp-1类似物的冻干方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种GLP‑1类似物的冻干方法，包括以下步骤：1)预冻：直接在‑35～‑25℃下进行预冻；2)一次干燥：采取线性升温的方式进行一次干燥，一次干燥温度从‑20～‑15℃升至‑10～‑5℃，升温完毕后，继续冻干一段时间；3)二次干燥：在25℃～35℃下进行二次干燥。其中预冻过程采用的是快冻，冻干得到的原料药溶解性更好；一次干燥采用的是线性升温，所得原料药的有关物质合格的同时，可缩短一次干燥的时间；二次干燥的温度范围是25～35℃，所得原料药的有关物质合格的同时，水分含量较低。
Description
技术领域
本发明属于GLP-1类似物加工技术领域，涉及一种GLP-1类似物的冻干方法。
背景技术
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物，属于一种肠促胰素类药物，其可刺激胰岛β细胞以糖依赖的方式分泌胰岛素并抑制胰高血糖素的分泌，从而降低血糖水平。该类药物的优势在于，除了降血糖作用外，还可以延缓肠胃排空、提高饱腹感、抑制食欲，从而达到降低体重的效果。GLP-1类似物可通过化学合成或生物发酵所得，或再结合一定的化学修饰，以延长该类药物的半衰期，如利拉鲁肽、索玛鲁肽等。
对于GLP-1类似物，通常经过纯化和转盐后，可得到纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的精肽溶液。后续需要进一步进行冻干，最终得到GLP-1类似物的原料药。关于GLP-1类似物的冻干工艺研究很少，绝大多数仅提到了冻干，但未对冻干工艺进行研究和说明。由于冻干工艺参数会影响到GLP-1类似物原料药的溶解性、水分含量、有关物质等关键的质量指标，因此，有必要对冻干工艺参数进行研究，提供一种GLP-1类似物的冻干方法。
发明内容
为了解决上述背景技术中所提出的问题，本发明的目的在于提供一种GLP-1类似物的冻干方法。采用本申请的冻干方法最终得到溶解性良好、水分含量低、有关物质合格的GLP-1类似物原料药。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：一种GLP-1类似物的冻干方法，包括以下步骤：
1)预冻：直接在-35～-25℃下进行预冻；
2)一次干燥：采取线性升温的方式进行一次干燥，一次干燥温度从-20～-15℃升至-10～-5℃，升温完毕后，继续冻干一段时间；
3)二次干燥：在25℃～35℃下进行二次干燥。
进一步地，步骤1)前还包括样品的制备，即制备GLP-1类似物的精肽溶液。
进一步地，所述GLP-1类似物包括索玛鲁利肽、利拉鲁肽。
进一步地，样品厚度为0.8～1.2cm时，步骤1)中所述预冻的时间为2.0～4.0h。
进一步地，步骤1)和步骤2)之间还包括预冻至一次干燥的升温过程，即-35～-25℃升温至-20～-15℃，优选地，所述升温时间为1.0～2.0h。
进一步地，步骤2)中所述升温的速率为0.4～0.6℃/h。
进一步地，样品厚度为0.8～1.2cm时，步骤2)中所述升温完毕后，继续冻干的时间为4.0～8.0h。
进一步地，步骤2)和步骤3)之间还包括一次干燥至二次干燥的升温过程，即-10～-5℃升温至25～35℃，优选地，所述升温时间为2.0～3.0h。
进一步地，样品厚度为0.8～1.2cm时，步骤3)中所述二次干燥的时间为8.0～12.0h。
进一步地，包括以下步骤：
样品制备：制备GLP-1类似物的精肽溶液，样品厚度为0.8～1.2cm；
预冻：直接在-35～-25℃下进行预冻2.0～4.0h；
预冻至一次干燥的升温：从-35～-25℃升温至-20～-15℃，所述升温时间为1.0～2.0h；
一次干燥：采取线性升温的方式进行一次干燥，一次干燥温度从-20～-15℃升至-10～-5℃，升温速率为0.4～0.6℃/h；升温完毕后，继续冻干4.0～8.0h；
一次干燥至二次干燥的升温：-10～-5℃升温至25～35℃，所述升温时间为2.0～3.0h；
二次干燥：在25～35℃下进行二次干燥8.0～12.0h。
本发明的有益效果为：
1)预冻过程，采用的是快冻，冻干得到的原料药溶解性更好；
2)一次干燥采用的是线性升温，所得原料药的有关物质合格的同时，可缩短一次干燥的时间；
3)二次干燥的温度范围是25～35℃，所得原料药的有关物质合格的同时，水分含量较低。
具体实施方式
为了更好地理解本发明的内容，下面结合具体实施方法对本发明内容作进一步说明，但本发明的保护内容不局限以下实施例。
实施例1：索玛鲁肽冻干
1)样品制备：索玛鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为10mg/mL，体积为1.2L。
2)预冻：在-35℃下预冻2.0h，样品厚度为1.0cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.0h从-35℃升至-20℃。
4)一次干燥：从-20℃按0.5℃/h的升温速率升至-10℃，共20.0h；升温至-10℃后，继续冻干6.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在2.0h从-10℃升至25℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为25℃，冻干时间12.0h。完成二次干燥后，得索玛鲁肽精肽11.6g。
实施例2：索玛鲁肽冻干
1)样品制备：索玛鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为15mg/mL，体积为1.0L。
2)预冻：在-30℃下预冻3.0h，样品厚度为1.2cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.5h从-30℃升至-18℃。
4)一次干燥：从-18℃按0.4℃/h的升温速率升至-8℃，共25.0h；升温至-8℃后，继续冻干4.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在2.5h从-8℃升至32℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为32℃，冻干时间10.0h。完成二次干燥后，得索玛鲁肽精肽14.5g。
实施例3：索玛鲁肽冻干
1)样品制备：索玛鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为20mg/mL，体积为0.8L。
2)预冻：在-25℃下预冻4.0h，样品厚度为0.8cm。
3)预冻至一次干燥升温：在2.0h从-25℃升至-15℃。
4)一次干燥：从-15℃按0.6℃/h的升温速率升至-5℃，共16.7h；升温至-5℃后，继续冻干8.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在3.0h从-5℃升至35℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为35℃，冻干时间8.0h。完成二次干燥后，得索玛鲁肽精肽15.5g。
实施例4：利拉鲁肽冻干
1)样品制备：利拉鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的利拉鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为20mg/mL，体积为1.0L。
2)预冻：在-30℃下预冻2.0h，样品厚度为0.8cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.5h从-30℃升至-17℃。
4)一次干燥：从-17℃按0.4℃/h的升温速率升至-7℃，共25.0h；升温至-7℃后，继续冻干4.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在3.0h从-7℃升至35℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为35℃，冻干时间8.0h。完成二次干燥后，得利拉鲁肽精肽19.4g。
实施例5：利拉鲁肽冻干
1)样品制备：利拉鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的利拉鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为15mg/mL，体积为1.2L。
2)预冻：在-35℃下预冻3.0h，样品厚度为1.2cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.0h从-35℃升至-20℃。
4)一次干燥：从-20℃按0.5℃/h的升温速率升至-10℃，共20.0h；升温至-10℃后，继续冻干6.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在2.5h从-10℃升至33℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为33℃，冻干时间10.0h。完成二次干燥后，得利拉鲁肽精肽17.5g。
实施例6：利拉鲁肽冻干
1)样品制备：利拉鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的利拉鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为10mg/mL，体积为1.5L。
2)预冻：在-25℃下预冻4.0h，样品厚度为1.0cm。
3)预冻至一次干燥升温：在2.0h从-25℃升至-15℃。
4)一次干燥：从-15℃按0.6℃/h的升温速率升至-5℃，共16.7h；升温至-5℃后，继续冻干8.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在2.0h从-10℃升至25℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为25℃，冻干时间12.0h。完成二次干燥后，得利拉鲁肽精肽14.4g。
对比例1：索玛鲁肽冻干
1)样品制备：索玛鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为15mg/mL，体积为1.0L。
2)预冻：在2.0h从0℃降低至-30℃后，继续在-30℃下预冻1.0h，样品厚度为1.2cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.5h从-30℃升至-18℃。
4)一次干燥：从-18℃按0.4℃/h的升温速率升至-8℃，共25.0h；升温至-8℃后，继续冻干4.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在2.5h从-8℃升至32℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为32℃，冻干时间10.0h。完成二次干燥后，得索玛鲁肽精肽14.6g。
对比例2：索玛鲁肽冻干
1)样品制备：索玛鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的索玛鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为20mg/mL，体积为0.8L。
2)预冻：在-25℃下预冻4.0h，样品厚度为0.8cm。
3)预冻至一次干燥升温：在2.0h从-25℃升至-15℃。
4)一次干燥：一次干燥板温恒定为-15℃，冻干时间35.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在3.0h从-15℃升至35℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为35℃，冻干时间8.0h。完成二次干燥后，得索玛鲁肽精肽15.6g。
对比例3：利拉鲁肽冻干
1)样品制备：利拉鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的利拉鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为20mg/mL，体积为1.0L。
2)预冻：在-30℃下预冻2.0h，样品厚度为0.8cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.5h从-30℃升至-17℃。
4)一次干燥：从-17℃按0.4℃/h的升温速率升至-7℃，共25.0h；升温至-7℃后，继续冻干4.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在3.0h从-7℃升至38℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为38℃，冻干时间8.0h。完成二次干燥后，得利拉鲁肽精肽19.1g。
对比例4：利拉鲁肽冻干
1)样品制备：利拉鲁肽粗肽(公司自行合成)经离子交换纯化、反相纯化和超滤脱盐后，得到的纯度≥99.0％、单杂≤0.15％的利拉鲁肽精肽溶液(公司自行纯化和脱盐)。上述精肽溶液作为待冻干样品，其中：精肽溶液浓度为15mg/mL，体积为1.2L。
2)预冻：在-35℃下预冻3.0h，样品厚度为1.2cm。
3)预冻至一次干燥升温：在1.0h从-35℃升至-20℃。
4)一次干燥：从-20℃按0.5℃/h的升温速率升至-10℃，共20.0h；升温至-10℃后，继续冻干6.0h。
5)一次干燥至二次干燥升温：在2.5h从-10℃升至22℃。
6)二次干燥：二次干燥板温为22℃，冻干时间15.0h。完成二次干燥后，得利拉鲁肽精肽17.7g。
实施例1-3和对比例1-2中索玛鲁肽冻干结果如表1所示：
表1索玛鲁肽冻干结果对比
从表1可以得知，实施例2预冻时采用的是快冻的方式，最终冻干产品的水溶性良好；对比例1预冻时采用的是慢冻的方式，最终冻干产品的水溶性变差。实施例3在一次干燥过程中，采用了逐步升温的工艺，一次干燥时间较短，总时间为24.7h；对比例2在一次干燥过程中，保持温度恒定不变，一次干燥时间较长，总时间为35.0h。
实施例4-6和对比例3-4中利拉鲁肽冻干结果如表2所示：
表2利拉鲁肽冻干结果对比
从表2可以得知，实施例4二次干燥的板温为35℃，最终冻干产品的最大单杂≤0.15％；对比例3二次干燥的板温为38℃，最终冻干产品的最大单杂>0.15％。实施例5二次干燥的板温为33℃，最终冻干产品的水分为1.9％；对比例4二次干燥的板温为22℃，最终冻干产品的水分为3.3％。
以上所述仅为本发明的具体实施方式，不是全部的实施方式，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)预冻：直接在-35～-25℃下进行预冻；
2)一次干燥：采取线性升温的方式进行一次干燥，一次干燥温度从-20～-15℃升至-10～-5℃，升温完毕后，继续冻干一段时间；
3)二次干燥：在25℃～35℃下进行二次干燥。
2.根据权利要求1所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，步骤1)前还包括样品的制备，即制备GLP-1类似物的精肽溶液。
3.根据权利要求1所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，所述GLP-1类似物包括索玛鲁利肽、拉鲁肽。
4.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，样品厚度为0.8～1.2cm时，步骤1)中所述预冻的时间为2.0～4.0h。
5.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，步骤1)和步骤2)之间还包括预冻至一次干燥的升温过程，即-35～-25℃升温至-20～-15℃，优选地，所述升温时间为1.0～2.0h。
6.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，步骤2)中所述升温的速率为0.4～0.6℃/h。
7.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，样品厚度为0.8～1.2cm时，步骤2)中所述升温完毕后，继续冻干的时间为4.0～8.0h。
8.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，步骤2)和步骤3)之间还包括一次干燥至二次干燥的升温过程，即-10～-5℃升温至25～35℃，优选地，所述升温时间为2.0～3.0h。
9.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，样品厚度为0.8～1.2cm时，步骤3)中所述二次干燥的时间为8.0～12.0h。
10.根据权利要求1-3任一项所述的GLP-1类似物的冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：
样品制备：制备GLP-1类似物的精肽溶液，样品厚度为0.8～1.2cm；
预冻：直接在-35～-25℃下进行预冻2.0～4.0h；
预冻至一次干燥的升温：从-35～-25℃升温至-20～-15℃，所述升温时间为1.0～2.0h；
一次干燥：采取线性升温的方式进行一次干燥，一次干燥温度从-20～-15℃升至-10～-5℃，升温速率为0.4～0.6℃/h；升温完毕后，继续冻干4.0～8.0h；
一次干燥至二次干燥的升温：-10～-5℃升温至25～35℃，所述升温时间为2.0～3.0h；
二次干燥：在25℃～35℃下进行二次干燥8.0～12.0h。
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