CN114246988A - 一种胶原纳米簇复合材料及其制备方法 - Google Patents

一种胶原纳米簇复合材料及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种胶原纳米簇复合材料及其制备方法，该方法包括将胶原凝胶浸泡于磷酸钙纳米簇中37℃恒温矿化形成该胶原纳米簇复合材料。本发明制备得到的胶原纳米簇复合材料，具有良好的生物相容性等，将其用于肌腱干细胞培养中的应用，具有很大的市场前景。

Description

一种胶原纳米簇复合材料及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种胶原纳米簇复合材料及其制备方法，属于生物材料领域。具体地，本发明提供了良好生物相容性的力学增强的胶原纳米簇复合材料及其制备方法，并明确了其在肌腱干细胞培养中的应用。
背景技术
腱骨连接处是运动系统中的一类复杂连接处，而其特殊的生物学功能导致其极易损伤或断裂。传统的肌腱/韧带重建手术后正常的腱骨连接处仅为纤维化组织，无法实现完全的再生修复，致使其生物力学功能下降，易造成二次损伤或断裂。因此，腱骨连接处的再生修复是肌腱组织工程的难点。
腱骨连接处是从肌腱组织到骨组织的过渡，胶原是肌腱细胞外基质的天然成分，用于肌腱组织工程修复具有良好的特点。骨组织中主要的无机成分是羟基磷灰石。因此，若能实现胶原到羟基磷灰石的逐渐变化，可较好的仿生天然组织结构，有助于腱骨连接处的再生。
目前，以磷酸钙为基础的骨移植替代物因具有良好的生物相容性和诱导修复功能，被认为在骨组织工程领域具有广泛的应用前景。本发明创造性地利用纳米磷酸钙材料(纳米簇)具有尺寸小、易于胶原组装等特点，制备了一种新的胶原纳米簇复合材料，在具有可塑性的胶原凝胶上以磷酸钙纳米簇为基础直接进行矿化，节省了大量时间，并能于肌腱干细胞的培养中显示出良好的生物相容性，可以预见在未来的修复腱骨连接处的应用过程中能尽可能适配不同类型的损伤类型并提供干细胞良好的存活环境。
发明内容
本发明的目的在于提供一种良好生物相容性的力学增强的胶原纳米簇复合材料及其制备方法。
本发明采用的技术方案如下：
一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，该方法包括将胶原凝胶浸泡于磷酸钙纳米簇中37℃恒温矿化形成该胶原纳米簇复合材料。
优选地，上述方法中，所述的胶原凝胶与磷酸钙纳米簇的体积比为1:20～1:200。更优选地，体积比为1:20～1:60。
优选地，上述方法中，所述的磷酸钙纳米簇为原液或者1:1、1:10、1:100、1:200的稀释液，稀释溶液为磷酸盐缓冲液PBS；原液浓度为0.172mg/ml～0.193mg/ml。
优选地，上述方法中，所述的磷酸钙纳米簇为原液用磷酸盐缓冲液PBS按照1:10进行稀释的稀释液。
优选地，上述方法中，胶原凝胶在磷酸钙纳米簇的浸泡时间为48h。
上述方法中，所述的胶原凝胶由包括如下步骤的方法制备得到：步骤S1：用猪跟腱提取I型胶原，制成I型胶原溶液；步骤S2：利用氨气扩散和戊二醛交联的方法制备胶原凝胶。
优选地，步骤S1中制备的I型胶原溶液的浓度为5mg/ml。
本发明还提供了上述方法制备得到的胶原纳米簇复合材料。
本发明还提供了该胶原纳米簇复合材料在肌腱干细胞培养中的应用。
本发明所具有的有益效果：
本发明制备得到的胶原纳米簇复合材料，是在具有可塑性的胶原凝胶上以磷酸钙纳米簇为基础直接进行矿化，节省了大量时间，并能于肌腱干细胞的培养中显示出良好的生物相容性(人来源的，具有向骨、软骨、脂肪分化的能力的肌腱干细胞)，可以预见在未来的修复腱骨连接处的应用过程中能尽可能适配不同类型的损伤类型并提供干细胞良好的存活环境。
附图说明
图1胶原纳米簇复合材料的大体图和纳米簇稀释倍数；
图2胶原纳米簇复合材料种植材料1天、3天和5天后的CCK8细胞活性检测结果；
图3矿化两天后的胶原纳米簇复合材料表面的扫描电镜图；图中标尺：2um；
图4矿化两天后的胶原纳米簇复合材料的能谱分析图；
图5矿化两天后的胶原纳米簇复合材料的XRD分析结果显示出现了羟基磷灰石的特征峰；
图6胶原纳米簇复合材料力学性能明显增强；
图7胶原纳米簇复合材料的应力应变曲线图；
图8矿化两天后的胶原纳米簇复合材料的钙黄绿素染色图；
图9为胶原纳米簇复合材料的细胞AM/PI染色图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。
实施例1
胶原纳米簇复合材料的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1：I型胶原的提取：(1)将50g新鲜猪跟腱浸泡于双抗水(青霉素和链霉素)中10分钟，取出沥干水分，用绞肉机打碎，溶于0.05mol/L的Tris溶液中，4℃过夜；(2)将(1)中所得溶液用纱布过滤，过滤所得固体物质用蒸馏水清洗5遍，溶于胃蛋白酶醋酸溶液中(0.5mol/L醋酸，3.3g/L胃蛋白酶)，并于4℃搅拌3天；(3)将消化后的溶液4℃4000rpm离心25分钟，回收中间的胶原层，弃去上层脂肪层和下层残渣层；(4)在回收的胶原溶液中加入300ml的0.9mol/L氯化钠溶液，4℃搅拌过夜，可见絮状物析出；(5)将(4)中溶液于4℃4000rpm离心25分钟，回收沉淀物(胶原)，加入0.5mol/L的醋酸溶液，4℃过夜溶解胶原；(6)将(5)中所得的胶原溶液放入透析袋中，加入适量蒸馏水，4℃搅拌3天，每天换水4-6次；(7)3天后将透析袋中胶原溶液转移至50ml离心管中，进行冷冻干燥处理；(8)称量并计算冻干所得胶原重量，加入0.5mol/L的醋酸溶液，制成5mg/ml的I型胶原溶液。
步骤S2：胶原凝胶的制备：(1)在模具内滴入步骤S1所得的5mg/ml的I型胶原溶液，将模具置于充满1:1氨水:去离子水的密闭环境中，于37℃恒温中静置4h形成凝胶，取出后用去离子水洗3次，每次5min，然后于4℃浸泡过夜，使pH为中性；(2)将(1)中所得凝胶浸泡于0.25％的戊二醛溶液中，于37℃恒温放置4h，取出后用去离子水洗3次，每次5min。
步骤S3：磷酸钙纳米簇的制备：(1)分别配制0.1mol/L的氯化钙溶液、0.3g/mL的聚天冬氨酸，3M的氢氧化钠；(2)取4.3g聚丙烯酸、2.15g聚天冬氨酸、0.724g磷酸氢二钠，加入50ml去离子水中，常温搅拌过夜，称为溶液A；(3)将0.15mL聚天冬氨酸加入烧杯中，再加入2mL氯化钙，持续搅拌；(4)在搅拌过程中缓慢加入2mL溶液A，持续搅拌至液体澄清；(5)在搅拌过程中缓慢加入氢氧化钠，调节pH，得到磷酸钙纳米簇。
步骤S4：胶原纳米簇复合材料的制备：(1)用磷酸盐缓冲液将磷酸钙纳米簇按原液、1:1、1:10、1:100、1:200的比例用磷酸盐缓冲液PBS稀释制成不同浓度的磷酸钙纳米簇溶液，备用；(3)胶原凝胶分别浸泡于不同浓度的磷酸钙纳米簇溶液中，37℃恒温放置2天，每12h换一次新配制的磷酸钙纳米簇溶液，制成具有不同性能的胶原纳米簇复合材料。
图1为胶原纳米簇复合材料的大体图和纳米簇溶液的稀释倍数，浸泡于梯度浓度的纳米簇溶液后，胶原凝胶呈现出梯度的颜色变化；
图3为矿化两天后的胶原纳米簇复合材料表面的扫描电镜图；图中标尺：2um；复合材料表面出现颗粒状物质，证明纳米簇成功与胶原纤维结合；
图4为矿化两天后的胶原纳米簇复合材料的能谱分析图，浸泡于梯度浓度的纳米簇溶液后，复合材料中出现了梯度改变的钙和磷元素，证明纳米簇与胶原凝胶装配成功，且具有梯度改变的矿化程度；
图5为矿化两天后的胶原纳米簇复合材料的XRD分析结果，显示出现了羟基磷灰石的特征峰(002，211和222)，证明纳米簇使胶原纤维矿化；
图6为胶原纳米簇复合材料的杨氏模量图，显示纳米簇使胶原凝胶的力学性能明显增强，且随着所浸泡的纳米簇溶液浓度的上升，复合材料力学性能也随之上升；
图7为胶原纳米簇复合材料的应力应变曲线图及曲线代表点，显示随纳米簇浓度的升高，应力应变曲线的斜率也逐渐升高，表明复合材料的力学性能也随之升高，证明了纳米簇使胶原凝胶的力学性能明显增强，且纳米簇浓度越高，所制成的胶原纳米簇复合材料的力学性能越强；
实施例2
胶原纳米簇复合材料钙黄绿素染色实验：
(1)将胶原纳米簇复合材料(制备方法同实施例1)铺到96孔板底部作为实验组，胶原凝胶(即实施例1中的步骤S1制备的胶原凝胶)铺到96孔板底部作为对照组。流水冲洗过夜以去除毒性。加入DMEM低糖培养基，每2h换一次液，直至培养基颜色均一，pH值保持一致。
(2)孔板放于37℃包含5％二氧化碳的加湿空气中培养，培养基每三天换一次。
(3)培养三天后，在96μl的DMEM低糖培养基中加入2μl的钙黄绿素染料，置于37℃孵育30min，在PBS中充分漂洗，在共聚焦显微镜下观察。
图8为矿化两天后的胶原纳米簇复合材料的钙黄绿素染色图，表明复合材料中含有一定量的钙离子，证明了纳米簇与胶原凝胶装配成功；
实施例3
胶原纳米簇复合材料生物相容性实验：
(1)将胶原纳米簇复合材料(制备方法同实施例1)铺到96孔板底部作为实验组，胶原凝胶(即实施例1中的步骤S2制备的胶原凝胶)铺到96孔板底部作为对照组。流水冲洗过夜以去除毒性。将实验组和对照组的孔中加入75％的无水乙醇，于4℃过夜，再置于超净台内风干和紫外灯照射杀菌后，加入DMEM低糖培养基，每2h换一次液，直至培养基颜色均一，pH值保持一致。
(2)以105个细胞/孔的密度将人肌腱干细胞种于材料上，加入含10％胎牛血清的DMEM低糖培养基，孔板放于37℃包含5％二氧化碳的加湿空气中培养，培养基每三天换一次。
(3)培养三天后，在96μl的DMEM低糖培养基中加入2μl的Calcein-AM染料和2μl的PI染料，置于37℃孵育30min，在共聚焦显微镜下观察。
图9为实验组和对照组培养3天后的细胞活死染色情况(细胞AM/PI染色图)。绿色为活细胞，红色为死细胞。可以看出，存活细胞较多，表明实施例1中胶原纳米簇复合材料具有良好的生物相容性。
实施例4
CCK8检测胶原纳米簇复合材料上的细胞活性实验：
(1)将胶原纳米簇复合材料(制备方法同实施例1)铺到96孔板底部作为实验组，胶原凝胶(即实施例1中的步骤S2制备的胶原凝胶)铺到96孔板底部作为对照组。流水冲洗过夜以去除毒性。将实验组和对照组的孔中加入75％的无水乙醇，于4℃过夜，再置于超净台内风干和紫外灯照射杀菌后，加入DMEM低糖培养基，每2h换一次液，直至培养基颜色均一，pH值保持一致。
(2)以105个细胞/孔的密度将人肌腱干细胞种于材料上，加入含10％胎牛血清的DMEM低糖培养基，孔板放于37℃包含5％二氧化碳的加湿空气中培养。
(3)在种植细胞的一天、三天和五天后，在90μl培养基中加入10μl的CCK8溶液，于培养箱中孵育2小时，用酶标仪在450nm波长处检测吸光度OD。
图2为胶原纳米簇复合材料种植材料1天、3天和5天后的CCK8细胞活性检测结果；结果显示与在普通孔板底部培养的肌腱干细胞相比，在低浓度的纳米簇溶液(1:10，1:100和1:200)中浸泡48小时后，胶原纳米簇复合材料能够明显增加肌腱干细胞的活性，而在高浓度的纳米簇溶液(未稀释Undiluted)中浸泡48小时后，胶原纳米簇复合材料使肌腱干细胞的活性明显下降；
由上述实施例所得的胶原纳米簇复合材料，综合考虑其力学性能和生物相容性，可见稀释倍数为1：10的磷酸钙纳米簇制备所得的胶原纳米簇复合材料具有显著增强的力学性能和较好的生物相容性，且能显著促进肌腱干细胞增殖。
本发明未尽事宜为公知技术。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：该方法包括将胶原凝胶浸泡于磷酸钙纳米簇中37℃恒温矿化形成该胶原纳米簇复合材料。
2.根据权利要求1所述的一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：所述的胶原凝胶与磷酸钙纳米簇的体积比为1:20～1:200；更优选地，体积比为1:20～1:60。
3.根据权利要求1所述的一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：所述的磷酸钙纳米簇为原液或者1:1、1:10、1:100、1:200的稀释液，稀释溶液为磷酸盐缓冲液PBS；原液浓度为0.172mg/ml～0.193mg/ml。
4.根据权利要求3所述的一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：所述的磷酸钙纳米簇为原液用磷酸盐缓冲液PBS按照1:10进行稀释的稀释液。
5.根据权利要求1所述的一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：胶原凝胶在磷酸钙纳米簇的浸泡时间为48h。
6.根据权利要求1所述的一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：所述的胶原凝胶由包括如下步骤的方法制备得到：步骤S1：用猪跟腱提取I型胶原，制成I型胶原溶液；步骤S2：利用氨气扩散和戊二醛交联的方法制备胶原凝胶。
7.根据权利要求5所述的一种胶原纳米簇复合材料的制备方法，其特征在于：步骤S1中制备的I型胶原溶液的浓度为5mg/ml。
8.权利要求1-7任一项所述方法制备得到的胶原纳米簇复合材料。
9.权利要求8所述胶原纳米簇复合材料在肌腱干细胞培养中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114832154A (zh) * 2022-04-12 2022-08-02 浙江大学 一种钛种植体及其表面原位胶原内矿化的方法
CN114870082A (zh) * 2022-05-25 2022-08-09 浙江大学 一种高强度复合胶原膜及其制备方法和应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014054326A (ja) * 2012-09-11 2014-03-27 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 遺伝子とリン酸カルシウムを含む複合粒子を備える遺伝子導入用基材
CN105561392A (zh) * 2016-01-19 2016-05-11 郭琛琨 生物衍生角胎骨质新材料及其应用
US20160375176A1 (en) * 2014-01-28 2016-12-29 Beijing Allgens Medical Science And Technology Co., Ltd. Mineralized collagen composite bone cementing and filling material
CN108025082A (zh) * 2015-07-28 2018-05-11 塔夫茨大学信托人 多肽整料
CN109718249A (zh) * 2019-01-24 2019-05-07 浙江大学 一种磷酸钙纳米簇及其制备方法和应用
CN110898253A (zh) * 2019-12-17 2020-03-24 浙江大学医学院附属第一医院 可促进细胞成骨分化的纤维内仿生矿化胶原膜制备方法
CN111449804A (zh) * 2020-03-18 2020-07-28 中南大学湘雅医院 一种组织工程支架矿化装置和方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014054326A (ja) * 2012-09-11 2014-03-27 National Institute Of Advanced Industrial & Technology 遺伝子とリン酸カルシウムを含む複合粒子を備える遺伝子導入用基材
US20160375176A1 (en) * 2014-01-28 2016-12-29 Beijing Allgens Medical Science And Technology Co., Ltd. Mineralized collagen composite bone cementing and filling material
CN108025082A (zh) * 2015-07-28 2018-05-11 塔夫茨大学信托人 多肽整料
CN105561392A (zh) * 2016-01-19 2016-05-11 郭琛琨 生物衍生角胎骨质新材料及其应用
CN109718249A (zh) * 2019-01-24 2019-05-07 浙江大学 一种磷酸钙纳米簇及其制备方法和应用
CN110898253A (zh) * 2019-12-17 2020-03-24 浙江大学医学院附属第一医院 可促进细胞成骨分化的纤维内仿生矿化胶原膜制备方法
CN111449804A (zh) * 2020-03-18 2020-07-28 中南大学湘雅医院 一种组织工程支架矿化装置和方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
姚沙沙: "磷酸钙纳米簇在硬组织修复方面的应用", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（博士） 工程科技Ⅰ辑》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114832154A (zh) * 2022-04-12 2022-08-02 浙江大学 一种钛种植体及其表面原位胶原内矿化的方法
CN114870082A (zh) * 2022-05-25 2022-08-09 浙江大学 一种高强度复合胶原膜及其制备方法和应用

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