CN114224946A - 一种抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用 - Google Patents

一种抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用，属于生物发酵技术领域。第一方面，本发明提供一种抗炎症发酵产品，该抗炎症发酵产品原料包括猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子，还包括黑芝麻；第二方面，本发明提供该抗炎症发酵产品的制备方法；第三方面，本发明提供该抗炎症发酵产品的一种制品；第四方面，本发明还提供一种该抗炎症发酵产品及其制品抗真菌性阴道炎的应用。

Description

一种抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用
技术领域
本发明涉及生物发酵技术领域。具体而言，涉及一种抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用。
背景技术
过去认为白色念珠菌为真菌性阴道炎主要病原体，但现如 今其他感染菌种感染率明显上升，这种变化与抗真菌药物滥用 有较大的关联。此外近年来白色念珠菌及其他念珠菌对抗真菌 药物的耐药性也明显增加。
因此为确保治疗可靠性，需加强对真菌性阴道炎病原菌鉴定，并进行药敏分析，确保针对性用药，提高疗效。
随着社会的发展，人们对药品安全性的要求越来越高，绿色、安全、对皮肤无伤害且抗真菌性阴道炎效果好的产品是本领域的研发热点。
鉴于此，本发明提供一种猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子、黑芝麻抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗炎症发酵产品及其制备方法、制品与应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种抗炎症发酵产品，抗炎症发酵产品原料包括猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子。
进一步地，该抗炎症发酵产品原料还包括黑芝麻。
进一步地，该抗炎症发酵产品原料按重量份数计，猴头菇为4-12份，牡丹皮为2-10份，丁香为2-10份，芡实为2-10份，桃仁为2-10份，莲子为4-12份，以及黑芝麻为2-10份。
更进一步地，该抗炎症发酵产品原料按重量份数计，猴头菇为8份，牡丹皮为6份，丁香为6份，芡实为6份，桃仁为6份，莲子为8份，以及黑芝麻为6份。
第二方面，本发明提供一种抗炎症发酵产品的制备方法，其包括：
包括以下步骤：第一步制备超微粉；第二步制备发酵菌株种子液；第三步制备发酵基质；第四步发酵方法；第五步制得发酵产品。
进一步地，第一步制备超微粉具体工艺为取干燥的猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子、黑芝麻等原料，破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
进一步地，第二步制备发酵菌株种子液具体工艺为枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌混合培养制成发酵菌株种子液，备用。
进一步地，第三步制备发酵基质具体工艺为按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入适量的水，煮沸后保持一段时间，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
进一步地，第四步发酵方法具体工艺为按重量0.02～0.06倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵。
进一步地，第五步制得发酵产品具体工艺为终止发酵后，控制适宜的酵母自溶条件，将发酵液中酵母进行自溶并采用超声波破壁萃取工艺，获得丰富的酵母小分子肽和氨基酸。
更进一步地，第二步中，将枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种于温度在30～42℃的培养基中，培养5～20小时制成发酵菌株种子液。
更进一步地，第三步中，以第一步中得到的超微粉重量为基准，在超微粉中加入2～5倍的水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
更进一步地，第四步中，发酵温度30～36℃，发酵时间为1～2天。
更进一步地，第二步中，所述培养基含有牛肉膏0.2～0.4%，胰蛋白胨0.8～1.2%,NaCL0.4～0.6%。
第三方面，本发明提供该抗炎症发酵产品的制品，该制品可以为粉剂或栓剂。
第四方面，本发明还提供一种该抗炎症发酵产品及其制品在抗真菌性阴道炎的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
本发明提供的抗炎症发酵产品与现有技术相比，组方更加科学合理，制备方法高效，制品生物利用度高，抗炎症效果显著，诸多方面均有显著提高。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：
实施例1
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为8kg，牡丹皮为6kg，丁香为6kg，芡实为6kg，桃仁为6kg，莲子为8kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.3%，胰蛋白胨1.0%,NaCL0.5%。将经活化的枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种比例1:1:1、接种量分别为2%，36℃混合培养12h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入5倍水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.04倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为33℃，时间36h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4500rpm离心25min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
实施例2
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为2kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.2%，胰蛋白胨1.2%,NaCL0.4%。将经活化的枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种比例1:1:1、接种量分别为1%，42℃混合培养5h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入7倍水，煮沸后保持7分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.03倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为36℃，时间24h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液5000rpm离心20min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
实施例3
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为12kg，牡丹皮为2kg，丁香为10kg，芡实为2kg，桃仁为10kg，莲子为4kg，黑芝麻为10kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.4%，胰蛋白胨0.8%,NaCL0.6%。将经活化的枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种比例1:1:1、接种量分别为3%，30℃混合培养20h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入3倍水，煮沸后保持3分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.05倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为30℃，时间48h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4000rpm离心30min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
实施例4
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.3%，胰蛋白胨1.0%,NaCL0.5%。将经活化的枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种比例1:1:1、接种量分别为2%，36℃混合培养12h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入5倍水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.04倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为33℃，时间36h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4500rpm离心25min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
对比例1
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步水提取法:加10倍蒸馏水，浸泡4h后加热沸腾煎煮2h过滤，药渣再加5倍量蒸馏水，加热沸腾煎煮1h过滤;将2次滤液混合。
第三步制得产品：滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得产品。
对比例2
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步乙醇提取法:加入10倍量95%乙醇，浸泡4h后加热回流提取2h过滤，药渣再加5倍量95%乙醇，加热回流提取2h过滤;将2次滤过液混合。
第三步制得产品：滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得产品。
对比例3
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步先乙醇提取再水提取:加入10倍量95%乙醇，浸泡4h后加热回流提取2h过滤，药渣再加5倍量95%乙醇，加热回流提取2h过滤;将2次滤过液混合。药渣加10倍蒸馏水，浸泡4h后加热沸腾煎煮2h过滤，药渣再加5倍量蒸馏水，加热沸腾煎煮1h过滤;将2次滤液与醇提滤过液混合。
第三步制得产品：滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得产品。
对比例4
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.3%，胰蛋白胨1.0%,NaCL0.5%。经活化的枯草芽孢杆菌接种量为6%，36℃混合培养12h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入5倍水、0.15倍葡萄糖，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.04倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为33℃，时间36h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4500rpm离心25min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
对比例5
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.3%，胰蛋白胨1.0%,NaCL0.5%。经活化的乳双歧杆菌接种量为6%，36℃混合培养12h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入5倍水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.04倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为33℃，时间36h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4500rpm离心25min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
对比例6
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.3%，胰蛋白胨1.0%,NaCL0.5%。经活化的瑞士乳杆菌接种量为6%，36℃混合培养12h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入5倍水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.04倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为33℃，时间36h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4500rpm离心25min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
对比例7
第一步制备超微粉：取干燥的猴头菇为4kg，牡丹皮为10kg，丁香为2kg，芡实为10kg，桃仁为2kg，莲子为12kg，黑芝麻为6kg。破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用。
第二步制备发酵菌株种子液：培养基含有牛肉膏0.3%，胰蛋白胨1.0%,NaCL0.5%。将经活化的凝结芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种比例1:1:1、接种量分别为2%，36℃混合培养12h，制成发酵菌株种子液，备用。
第三步制备发酵基质：按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入5倍水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用。
第四步发酵方法：分别按重量0.04倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵，发酵温度为33℃，时间36h。
第五步制得发酵产品：终止发酵后，取发酵液4500rpm离心25min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
实验例1
发酵产品采用分子量500道尔顿纳滤管去除小分子后，测定终产品多肽产量结果见表1。
表1
终产品多肽产量（g/kg原料）
实施例1 51.6
实施例2 63.7
实施例3 66.5
实施例4 70.2
对比例1 4.9
对比例2 0.6
对比例3 5.2
对比例4 28.4
对比例5 31.5
对比例6 35.2
对比例7 26.9
从表1可以看出，本发明实施例1～4中利用本发明猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子、黑芝麻抗炎症发酵产品进行液体发酵得到的多肽含量与对比例1～7相比，均有显著提高。
实验例2
实施例1～4组与对比例1～7组每组样品稀释为10个浓度，相邻浓度2倍关系，共计110个样品，每个样品分别与灭菌后的沙氏培养基混合后各分为3等份，用点种法将限制性马拉色菌、红色毛癣菌、白色假丝酵母菌3种真菌分别接种于上述3份培养基上。接种物于28℃培养2周，观察真菌生长情况。以真菌不生长的最大样品稀释度作为该组样品的最低抑菌浓度（单位原料重量所对应的冷冻干燥制得的发酵产品稀释后的体积即mg/ml）。结果见表2。
表2
组别 白色假丝酵母菌（mg/ml） 红色毛癣菌（mg/ml） 限制性马拉色菌（mg/ml）
实施例1 65.8 163.7 219.6
实施例2 41.9 160.8 198.0
实施例3 43.1 156.8 182.8
实施例4 39.6 159.1 190.2
对比例1 669.3 991.2 1077.8
对比例2 751.8 875.6 1215.9
对比例3 517.9 680.7 836.9
对比例4 186.5 223.5 392.8
对比例5 178.0 205.8 261.4
对比例6 252.8 271.0 356.7
对比例7 362.1 402.3 481.6
本发明中未详细说明的环节均为本领域普通技术人员可自行选择的公知常识。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域普通技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种抗炎症发酵产品，其特征在于，所述抗炎症发酵产品包括以下原料：猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子。
2.根据权利要求1所述的抗炎症发酵产品，其特征在于，所述抗炎症发酵产品原料还包括黑芝麻。
3.根据权利要求2所述的抗炎症发酵产品，其特征在于，按重量份数计，所述猴头菇为4-12份，所述牡丹皮为2-10份，所述丁香为2-10份，所述芡实为2-10份，所述桃仁为2-10份，所述莲子为4-12份，以及所述黑芝麻为2-10份。
4.根据权利要求2所述的抗炎症发酵产品，其特征在于，按重量份数计，所述猴头菇为8份，所述牡丹皮为6份，所述丁香为6份，所述芡实为6份，所述桃仁为6份，所述莲子为8份，以及所述黑芝麻为6份。
5.根据权利要求1-4任一所述的抗炎症发酵产品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步制备超微粉；第二步制备发酵菌株种子液；第三步制备发酵基质；第四步发酵方法；第五步制得发酵产品。
6.根据权利要求5所述的抗炎症发酵产品的制备方法，其特征在于：
所述第一步制备超微粉具体工艺为取干燥的猴头菇、牡丹皮、丁香、芡实、桃仁、莲子、黑芝麻等原料，破碎成粒径在10μm以下超微粉，备用；
所述第二步制备发酵菌株种子液具体工艺为枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌混合培养制成发酵菌株种子液，备用；
所述第三步制备发酵基质具体工艺为按照所述第一步中得到的超微粉重量为基准，在发酵罐中加入适量的水，煮沸后保持一段时间，停止加热，降温，得发酵基质，备用；
所述第四步发酵方法具体工艺为按重量0.02～0.06倍的比例，将所述第二步中的发酵菌株种子液接种在第三步中得到的发酵基质中进行发酵；
所述第五步制得发酵产品具体工艺为终止发酵后，取发酵液4000～5000rpm离心20～30min，取上清液使用截留分子量为10000道尔顿的超滤膜进行膜分离，滤过液适当浓缩后，冷冻干燥制得发酵产品。
7.根据权利要求6所述的抗炎症发酵产品的制备方法，其特征在于，所述第二步中，将枯草芽孢杆菌、乳双歧杆菌、瑞士乳杆菌三种菌接种于温度在30～42℃的种子液培养基中，培养5～20小时制成发酵菌株种子液;所述第三步中，以第一步中得到的超微粉重量为基准，在超微粉中加入2～5倍的水，煮沸后保持5分钟，停止加热，降温，得发酵基质，备用;所述第四步中，发酵温度30～36℃，发酵时间为1～2天。
8.根据权利要求7所述的抗炎症发酵产品的制备方法，其特征在于，所述第二步中的种子液培养基含有牛肉膏0.2～0.4%，胰蛋白胨0.8～1.2%,NaCL0.4～0.6%。
9.一种抗炎症发酵产品的制品，其特征在于，所述制品为粉剂或栓剂。
10.一种根据权利要求1-4所述的抗炎症发酵产品及根据权利要求9所述的制品的应用，其特征在于，所述应用是指在抗真菌性阴道炎的应用。
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