CN114196749B - 核酸产品和用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种核酸产品和用于α‑地中海贫血单体型分析的试剂盒。该核酸产品包括十组引物对，对应地扩增以下十个STR位点：D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423。利用上述核酸产品对α‑地中海贫血单体型分析的成功率和准确率高、能对目标突变位点进行分析且能发现新发突变。

Description

核酸产品和用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种核酸产品和用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒。
背景技术
α-地中海贫血(简称α-地贫)是一种常见的单基因遗传病，主要是由于α-珠蛋白基因上的改变引发血红蛋白合成障碍从而引起的慢性进行性加重溶血性贫血。α地贫是地中海贫血的一种常见类型，属于常染色体不完全显性遗传疾病。
目前预防和控制地中海贫血的诊断方法包括产前诊断和胚胎植入前遗传学诊断(PGD)。前者是在不同孕周进行绒毛膜取绒毛或羊膜腔穿刺抽取羊水或脐带血等方法对已孕胚胎进行基因诊断，而PGD是将常规产前诊断提早到胚胎于子宫着床之前进行活检和遗传学分析，选择无遗传性疾病的胚胎植入子宫腔内，从而获得正常胎儿的诊断方法。
临床上在进行α-地贫PGD时会容易导致误诊，故在进行α-地贫PGD时常加入上下游的单核苷酸多态性(SNP)或者短串联重复序列(STR)位点作为遗传标记，进行连锁分析从而降低等位基因脱扣(ADO)和污染引起的误诊率。
目前应用于α-地贫PGD单体型分析的方法主要是基于二代测序(NGS)的SNP单体型分析技术。SNP单体型分析技术是对发育至第5天或者第6天的囊胚行活检，对活检细胞进行全基因组扩增，将致病基因突变作为目标区域，在该基因突变上下游选择数十至上百个单核苷酸多态性位点作为连锁遗传标记，通过二代测序技术进行胚胎植入前单体型分析和染色体非整倍体筛查。
基于二代测序的SNP单体型分析技术虽然能用于连锁分析的位点通常为数十至上百个，可提供更准确、更全面的信息，但对于α-地中海贫血单体型分析而言，其可用于分型的SNP位点数目少，杂合度低，且容易发生等位基因脱扣现象，对于分型的成功率及准确性无法保障，且其操作需要经文库构建和高通量测序，步骤繁琐、成本高、数据分析时间长，不易临床推广。
发明内容
基于此，有必要提供一种核酸产品及用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒，利用该核酸产品对α-地中海贫血单体型分析，成功率和准确率高。
一种核酸产品，包括十组引物对，所述十组引物对用于对应地扩增以下十个STR位点：D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423。
经本申请研究发现，D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423这十个STR位点具有高度多态性，用于α-地中海贫血的单体型分析(例如胚胎植入前的α-地中海贫血的单体型分析)时，每个家系至少有四个有效STR位点，并且分析的准确率高，成本低。此外，通过上述STR位点进行单体型分析结合家系基因型信息，还可以对胚胎样本进行植入前遗传学诊断。。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S521的引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.1～2所示；和/或，用于扩增STR位点D16S3399的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4所示；和/或，用于扩增STR位点HBA220831的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6所示；和/或，用于扩增STR位点HBA572的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7～8所示；和/或，用于扩增STR位点HBA1654275的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10所示；和/或，用于扩增STR位点HBA2001727的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11～12所示；和/或，用于扩增STR位点D16S291的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14所示；和/或，用于扩增STR位点D16S475的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.15～16所示；和/或，用于扩增STR位点D16S3065的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18所示；和/或，用于扩增STR位点D16S423的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.19～20所示。
在其中一个实施例中，各所述引物对上标记有荧光染料。
在其中一个实施例中，所述荧光染料选自FAM、TET、VIC、JOE、HEX、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、TAMRA、ROX和Texas Red中的一种。
在其中一个实施例中，各所述引物对的正向引物的5’端标记有荧光染料。
一种用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒，包括上述的核酸产品。
在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括单细胞全基因组扩增试剂、基因组DNA提取试剂、PCR反应试剂和毛细管电泳测序试剂中的至少一种。
在其中一个实施例中，所述试剂盒包括单细胞全基因组扩增试剂，所述单细胞全基因组扩增试剂为MDA单细胞全基因组扩增试剂。
在其中一个实施例中，所述试剂盒包括基因组DNA提取试剂，所述基因组DNA提取试剂包括细胞裂解剂、蛋白去除剂及DNA纯化剂。
在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括dNTP、DNA聚合酶和PCR反应缓冲剂。
附图说明
图1为一实施例的α-地中海贫血单体型分析流程图；
图2为实施例1的STR位点D16S521的毛细管电泳检测峰图；
图3为实施例1的STR位点D16S3399的毛细管电泳检测峰图；
图4为实施例1的STR位点HBA220831的毛细管电泳检测峰图；
图5为实施例1的STR位点HBA572的毛细管电泳检测峰图；
图6为实施例1的STR位点HBA1654275的毛细管电泳检测峰图；
图7为实施例1的STR位点HBA2001727的毛细管电泳检测峰图；
图8为实施例1的STR位点D16S291的毛细管电泳检测峰图；
图9为实施例1的STR位点D16S475的毛细管电泳检测峰图；
图10为实施例1的STR位点D16S3065的毛细管电泳检测峰图；
图11为实施例1的STR位点D16S423的毛细管电泳检测峰图；
图12为实施例1HBA1基因上下游10个STR位点的杂合度统计结果。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本发明公开内容更加透彻全面。术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
本申请一实施方式提供了一种核酸产品，该核酸产品包括十组引物对，该十组引物对用于对应地扩增以下十个STR位点：D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423。
具体地，D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423为HBA1基因上下游的STR位点。D16S521距离HBA1基因)上游0.13M，位于chr16:94000+94375；D16S3399距离HBA1基因上游81K，位于chr16:145268-145453；HBA220831距离HBA1基因上游5.0K，位于chr16:220813+220911；HBA572距离HBA1基因下游0.34M，位于chr16:572113+572370；HBA1654275距离HBA1基因下游1.4M，位于chr16:1654194+1654345；HBA2001727距离HBA1基因下游1.8M chr16:2001686+2001878；D16S291距离HBA1基因下游2.1M，位于chr16:2339917+2340050；D16S475距离HBA1基因下游3.2M，位于chr16:3470337+3470686；D16S3065距离HBA1基因下游3.6M位于chr16:3822269+3822426；D16S423距离HBA1基因下游5.8M，位于chr16:6043155-6043458。需要说明的是，本文中的HBA1基因的位置为chr16：226679-227521(参考版本为(GRch37)。
经本申请研究发现，D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423这十个STR位点具有高度多态性，用于α-地中海贫血的单体型分析(例如胚胎植入前的α-地中海贫血的单体型分析)时，每个家系至少有五个有效STR位点，并且分型的准确率高，成本低。此外，通过上述STR位点进行单体型分析结合家系基因型信息，还可以对胚胎样本进行植入前遗传学诊断。。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S521的引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.1～2所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S3399的引物对的核苷酸序列如SEQID NO.3～4所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点HBA220831的引物对的核苷酸序列如SEQID NO.5～6所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点HBA572的引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.7～8所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点HBA1654275的引物对的核苷酸序列如SEQID NO.9～10所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点HBA2001727的引物对的核苷酸序列如SEQID NO.11～12所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S291的引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.13～14所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S475的引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.15～16所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S3065的引物对的核苷酸序列如SEQID NO.17～18所示。
在其中一个实施例中，用于扩增STR位点D16S423的引物对的核苷酸序列如SEQ IDNO.19～20所示。
可以理解的，用于扩增D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423的引物对不限于上述，还可以根据上述STR位点设计对应的其他引物对。
在其中一个实施例中，用于扩增D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423的引物对均是独立包装，使用时按需取。需要说明的是，此处的独立包装是指扩增不同STR位点的引物对包装在不同的包装容器中。
在一些实施例中，各引物对上标记有荧光染料。荧光染料作为信号物质，便于后续检测。在其中一个实施例中，荧光染料选自FAM、TET、VIC、JOE、HEX、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、TAMRA、ROX和Texas Red中的一种。可以理解的是，荧光染料不限于上述，还可以根据实际情况选择其他的荧光染料。当然，引物对上标记的作为信号物质的材料也不限于荧光染料，还可以根据后续检测进行调整。
在其中一个实施例中，各引物对的正向引物的5’端标记有荧光染料。在另一个实施例中，各引物对的反向引物的5’端标记有荧光染料。
此外，基于上述核酸产品对α-地中海贫血单体型分析具有良好的准确性、成本低且可以对目标突变位点进行分析，本申请一实施方式还提供了一种上述核酸产品在α-地中海贫血单体型分析中的应用。在其中一个实施例中，上述核酸产品在α-地中海贫血基因分型中的应用。
另外，基于上述，本申请一实施方式还提供了一种用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒，该试剂盒包括上述核酸产品。
在其中一个实施例中，上述试剂盒是用于胚胎植入前α-地中海贫血单体型分析的试剂盒。可以理解的是，在其他实施例中，上述试剂盒还可以用于非胚胎植入前的α-地中海贫血单体型分析。
在其中一个实施例中，上述试剂盒还包括单细胞全基因组扩增试剂、基因组DNA提取试剂、PCR反应试剂和毛细管电泳测序试剂中的至少一种。
单细胞全基因组扩增试剂用于扩增单细胞的全基因组，以获得足够的模板来满足后续PCR反应的量。在单细胞为胚胎细胞时，上述试剂盒为胚胎植入前α-地中海贫血单体型分析的试剂盒。在一个可选地具体示例中，单细胞全基因组扩增试剂为MDA单细胞全基因组扩增试剂，也即是，该扩增试剂是通过多重置换扩增(MDA)进行单细胞基因组扩增的。可以理解的是，在其他实施例中，单细胞全基因组扩增试剂不限于MDA单细胞全基因组扩增试剂，还可以是通过其他方式(例如，简并寡核苷酸引物PCR扩增(DOP-PCR)、置换预扩增和PCR扩增的组合(MALBAC))进行单细胞全基因组扩增的试剂。
基因组DNA提取试剂用于提取人体基因组DNA。进一步地，基因组DNA提取试剂包括细胞裂解剂、蛋白去除剂及DNA纯化剂。
PCR反应试剂用于PCR扩增反应。进一步地，PCR反应试剂包括dNTP、DNA聚合酶和PCR反应缓冲剂。
毛细管电泳测序试剂用于将PCR扩增产物进行毛细管电泳，以获得各STR位点的等位基因信息。
在其中一个实施例中，上述试剂盒包括基因组DNA提取试剂。
在其中一个实施例中，上述试剂盒还包括PCR反应试剂。
基于上述，本申请一实施方式还提了一种α-地中海贫血单体型分析的方法，该方法包括以下步骤：采用上述α-地中海贫血单体型分析的试剂盒和毛细管电泳获得待检者、待检者的父方和母方及先证者在以下十个STR位点处STR信息：D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423，其中，先证者为父方与母方所育的子代1(成熟个体)，STR信息包括所在STR位点的等位基因数目和等位基因频率；及根据获得的STR信息进行连锁反应分析确定待测者的单体型。
在其中一个实施例中，根据获得的STR信息进行连锁反应分析确定待测者的单体型的步骤包括：根据先证者的STR信息来反推是遗传了父方、母方的哪一条链，然后对比先证者和胚胎的等位基因来判断其是否携带了带有突变位点的那一条链，以确定待测者的单体型。
上述α-地中海贫血基因分型的方法采用上述α-地中海贫血单体型分析的试剂盒，技术流程简单易操作，成本低，能快速在12小时内完成对家系单体型分析，分型准确性及成功率高，胚胎水平10个STR检测成功率100％。
基于上述，本申请一实施方式还提供了一种α-地中海贫血基因分型的方法，该方法与上述α-地中海贫血单体型分析的方法的区别在于，该方法在根据获得的STR信息进行连锁反应分析确定待测者的单体型的步骤之后，还包括根据父方和母方及先证者的基因型确定的步骤。
上述α-地中海贫血基因分型的方法采用上述α-地中海贫血单体型分析的试剂盒，具有相应的优点。
具体实施例
以下结合具体实施例进行详细说明。以下实施例如未特殊说明，则不包括除不可避免的杂质外的其他组分。实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者生产厂家推荐的方法实现。下文中，“企参家系”是指父母双方及子代1基因组DNA、子代2胚胎细胞扩增产物这四个样本构成的一个家系，并且已有这个家系的芯片基因型结果。
实施例1
本实施例的α-地中海贫血单体型分析流程如图1所示，具体步骤包括：
1、父母双方基因组DNA、先证者基因组DNA及待检胚胎的MDA单细胞扩增产物：
募集了1个α-地贫企参家系(已有芯片检测结果)，家系信息见表1。抽取父方、母方以及先证者的外周血样本(共三份血样)各5ml于EDTA抗凝采血管中保存以及父方与母方的1枚胚胎活检样本。
表1
编号 家系成员 基因型(芯片结果)
1 父方 --SEA/αα
2 母方 αQSα/αα
3 先证者 --SEA/ααQS
4 胚胎1 αα/ααQS
家系基因组DNA采用天根血液提取试剂盒进行抽提，父母及先证者基因组DNA、待检胚胎的MDA单细胞扩增产物经质检后均稀释成5ng/uL待用。胚胎活检样本采用凯杰QIAGEN REPLI-g Single Cell Kit试剂盒扩增获得全基因组扩增产物。
2、父母双方基因组DNA、先证者基因组DNA及待检胚胎的MDA单细胞扩增产物分别与表2中的针对十个STR位点的引物分别进行PCR反应：
表2
(1)从-20℃冰箱中取出稀释好的各STR位点正反向10μM引物工作液、诺唯赞PhantaMax Super-Fidelity DNAPolymerase组分试剂、基因组DNA及胚胎MDA单细胞扩增产物，冰盒上溶解完全，充分振荡混匀5s，微量离心机离心5s，放置于冰盒上。
(2)按照表3配制单个样本单个引物对的PCR反应体系：
表3
(3)PCR扩增反应
完成体系配制后，将所配制的PCR反应体系充分涡旋震荡10s，微量离心机离心5s后，放置于PCR仪上，按照表4的程序进行PCR。
表4
PCR完成后，产物短时间保存用锡箔纸避光放置于4℃，过夜需放置于-20℃。
(4)将步骤(3)获得的PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳质检：2.0％琼脂糖凝胶电泳质检扩增结果：扩增产物5μL+10×Loading buffer，DNAMarker：2000bp点3μL。电压120V，电泳时间40min。对电泳质检通过的样本进行下一步的毛细管电泳上机测序。
3、将质检合格的PCR扩增产物进行毛细管电泳测序
(1)将步骤2的PCR扩增产物稀释至产物浓度在1ng/μL-10ng/μL。
(2)按照表5制备测序上机体系：
表5
(3)上机产物变性：将(2)中制备好的上机体系置于金属浴中95℃变性4min，然后迅速置于冰盒中冷却4min，后短暂离心，取10μL样品利用美国ABI 3730XL遗传分析仪进行毛细管电泳上机测序，结果如图2～图11所示。在图2～图11中，除图2外，其他图都是按照第一排的从左至右依次为父方的检测峰图、母方的检测峰图，第二排从左到右依次是先证者基的检测峰图和胚胎检测峰图；图2中，从上到下，依次是父方的检测峰图、母方的检测峰图，第二排从左到右依次是先证者基的检测峰图和胚胎检测峰图。
4、数据分析
将毛细管电泳上机测序获得的STR图谱进行数据分析，统计父母双方、先证者及胚胎的等位基因数，通过构建家系单体型得到有效STR位点，从而鉴定胚胎的单体型是否存在异常。
对本实施例的毛细管电泳上机测序获得的STR图谱进行数据分析，结果如表6所示和图12所示。
表6
由图12可知，D16S291、D16S475、D16S423杂合度最高，为0.85；最低为D16S521、HBA220831，为0.45。
先根据先证者的单体型来确定父方、母方的单体型链，再根据单体型结果来判断胚胎是否遗传了变异链。由表6可知，单体型分型结果显示，检测成功的10个STR中，有效位点为D16S3399、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065、D16S423。该企参家系单体型分析说明，对于父方来源的染色体，先证者与胚胎1分别遗传了父方的单体型F2与F1，对于母方来源的染色体，先证者与胚胎1均遗传了母方的单体型M2。单体型分型准确，且胚胎水平10个STR检测成功率100％。并且由表1中的已知的父方、母方及先证者的基因型，可以确定胚胎1的基因型为αα/ααQS
实施例2
本实施例的α-地中海贫血基因分型步骤大致与实施例1相同，其不同在于，本实施例的所采用的家系不同，本实施例的家系信息如表7所示，本实施例的毛细管电泳上机测序获得的STR图谱的汇总结果如表8所示，
表7
编号 家系成员 基因型(芯片结果)
1 父方 --SEA/αα
2 母方 αwsα/αα
3 先证者 --SEA/ααws
4 胚胎1 --SEA/ααws
表8
由表8可知，单体型分型结果显示，检测成功的10个STR中，有效位点为D16S3399、HBA2001727、D16S291、D16S475和D16S3065。该企参家系单体型分析说明，对于父方来源的染色体，先证者与胚胎1均遗传了父方的单体型F1；对于母方来源的染色体，先证者与胚胎1均遗传了母方的单体型M1。单体型分型准确，且胚胎水平10个STR检测成功率100％。并且由表7中的已知的父方、母方及先证者的基因型，可以确定胚胎1的基因型为--SEA/ααws。
实施例3
本实施例的α-地中海贫血基因分型步骤大致与实施例1相同，其不同在于，本实施例的所采用的家系不同，本实施例的家系信息如表9所示，本实施例的毛细管电泳上机测序获得的STR图谱的汇总结果如表10所示。
表9
编号 家系成员 基因型(芯片结果)
1 父方 αwsα/αα
2 母方 αα/αα
3 先证者 αwsα/αα
4 胚胎1 αwsα/αα
表10
由表10可知，单体型分型结果显示，检测成功的10个STR中，有效位点为D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA1654275、HBA2001727、D16S291和D16S423。该企参家系单体型分析说明，对于父方来源的染色体，先证者与胚胎1均遗传了父方的单体型F1；对于母方来源的染色体，先证者遗传了母方的单体型M1，胚胎1遗传了母方的单体型M2。单体型分型准确，且胚胎水平10个STR检测成功率100％。并且由表9中的已知的父方、母方及先证者的基因型，可以确定胚胎1的基因型为αwsα/αα。
实施例4
本实施例的α-地中海贫血基因分型步骤大致与实施例1相同，其不同在于，本实施例的所采用的家系不同，本实施例的家系信息如表11所示，本实施例的毛细管电泳上机测序获得的STR图谱的汇总结果如表12所示。
表11
编号 家系成员 基因型(芯片结果)
1 父方 -α3.7/αα
2 母方 αα/αα
3 先证者 -α3.7/αα
4 胚胎1 αα/αα
表12
由表12可知，单体型分型结果显示，检测成功的10个STR中，有效位点为D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA2001727、D16S475和D16S423。该企参家系单体型分析说明，对于父方来源的染色体，先证者遗传了父方的单体型F1，胚胎1遗传了父方的单体型F2；对于母方来源的染色体，先证者遗传了母方的单体型M2，胚胎1遗传了母方的单体型M1。单体型分型准确，且胚胎水平10个STR检测成功率100％。并且由表11中的已知的父方、母方及先证者的基因型，可以确定胚胎1的基因型为αα/αα。
实施例5
本实施例的α-地中海贫血基因分型步骤大致与实施例1相同，其不同在于，本实施例的所采用的家系不同，本实施例的家系信息如表13所示，本实施例的毛细管电泳上机测序获得的STR图谱的汇总结果如表14所示。
表13
编号 家系成员 基因型(芯片结果)
1 父方 --SEA/αα
2 母方 αα/αα
3 先证者 αα/αα
4 胚胎1 αα/αα
表14
由表12可知，单体型分型结果显示，检测成功的10个STR中，有效位点为D16S521、HBA1654275、D16S291和D16S3065。该企参家系单体型分析说明，对于父方来源的染色体，先证者和胚胎1均遗传了父方的单体型F1；对于母方来源的染色体，先证者和胚胎1均遗传了母方的单体型M2。单体型分型准确，且胚胎水平10个STR检测成功率100％。并且由表9中的已知的父方、母方及先证者的基因型，可以确定胚胎1的基因型为αα/αα。
综上，由上述实施例1～5可知，对5个α-地贫家系参考品进行的单体型分型检测，结果显示5个家系单体型分型成功率100％，每个家系参考品的有效STR位点分别为8个、5个、7个、6个、4个，平均每个家系有6个有效STR位点可用于单体型分析。且技术流程简单易操作，成本低，能快速在12小时内完成对家系单体型分析，分型准确性及成功率高。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解的是，在本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。
序列表
<110> 苏州贝康医疗器械有限公司
<120> 核酸产品和用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒
<160> 20
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
caaccaatat aaaaaatctc agaggac 27
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cttttatttg caccctggag aac 23
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tcccacagtc ccatatccca 20
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
acgaatatac agcacgatcc taa 23
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
aaaatctatc catgctttca caca 24
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
aggagacagg aaagagagac 20
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ggaaagcctt gggtgtaaat cag 23
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gtccatgctt acagtgacag c 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ccttcgcaaa gctgccagta 20
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
tggcccctta ggaactgct 19
<210> 11
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
agccatagtt tctaaccctc agcag 25
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
tagccagctg agaagctctt ac 22
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
caaggctggc agaggaggtg 20
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tgcagcctca gttgtgtttc c 21
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
agcctggaca atatgacaaa ac 22
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
ggaacagaaa atactgcacg 20
<210> 17
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
tacatccata agtaccctta acaat 25
<210> 18
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
tgaagtgtat ccccagtata ga 22
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
aaacaggctt gaaagtctct g 21
<210> 20
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ttgtcttctg tccacttaca ca 22

Claims (9)

1.一种核酸产品，其特征在于，由十组引物对组成，所述十组引物对用于对应地扩增以下十个STR位点：D16S521、D16S3399、HBA220831、HBA572、HBA1654275、HBA2001727、D16S291、D16S475、D16S3065和D16S423；用于扩增STR位点D16S521的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1~2所示；用于扩增STR位点D16S3399的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3~4所示；用于扩增STR位点HBA220831的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5~6所示；用于扩增STR位点HBA572的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.7~8所示；用于扩增STR位点HBA1654275的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.9~10所示；用于扩增STR位点HBA2001727的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.11~12所示；用于扩增STR位点D16S291的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.13~14所示；用于扩增STR位点D16S475的引物对的核苷酸序列如SEQID NO.15~16所示；用于扩增STR位点D16S3065的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.17~18所示；用于扩增STR位点D16S423的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.19~20所示。
2.根据权利要求1所述的核酸产品，其特征在于，各所述引物对上标记有荧光染料。
3.根据权利要求2所述的核酸产品，其特征在于，所述荧光染料选自FAM、TET、VIC、JOE、HEX、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、TAMRA、ROX和Texas Red中的一种。
4.根据权利要求2所述的核酸产品，其特征在于，各所述引物对的正向引物的5’端标记有荧光染料。
5.一种用于α-地中海贫血单体型分析的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1~4任一项所述的核酸产品。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括单细胞全基因组扩增试剂、基因组DNA提取试剂、PCR反应试剂和毛细管电泳测序试剂中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括单细胞全基因组扩增试剂，所述单细胞全基因组扩增试剂为MDA单细胞全基因组扩增试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括基因组DNA提取试剂，所述基因组DNA提取试剂包括细胞裂解剂、蛋白去除剂及DNA纯化剂。
9.根据权利要求7~8任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应试剂，所述PCR反应试剂包括dNTP、DNA聚合酶和PCR反应缓冲剂。
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