CN114191458A - 罗布麻花或/和罗布麻叶的新应用 - Google Patents

罗布麻花或/和罗布麻叶的新应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种罗布麻花或/和罗布麻叶的新应用，主要涉及罗布麻花或/和罗布麻叶在制备抗冠状病毒的药物中的应用。与传统技术方案相比，本发明具备如下优势效果：本发明的发明人经过大量的筛选，发现罗布麻叶和罗布麻花均具有较强的抑制冠状病毒感染和抗新冠病毒的功效，将其制备成抗冠状病毒的药物，能为预防或/治疗冠状病毒提供有效手段。

Description

罗布麻花或/和罗布麻叶的新应用
技术领域
本发明属于生物医学领域，涉及一种罗布麻叶或/和罗布麻花的新应用。
背景技术
冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒、中东呼吸综合征(MERS)和严重急性呼吸综合征(SARS)等较严重疾病。新型冠状病毒是以前从未在人体中发现的冠状病毒新毒株。国际病毒分类委员会将此种新病原体命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2号(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)。
人感染了新冠病毒(SARS-CoV-2)后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。因此，寻找有效抑制新冠病毒的候选药物是亟待解决的技术问题。
发明内容
基于以上技术问题，本发明的目的之一是提供罗布麻叶或/和罗布麻花的新应用，主要是用于制备抗冠状病毒的药物。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
罗布麻花或/和罗布麻叶在制备抗冠状病毒的药物中的应用。
在其中一些实施例中，所述的药物包含所述罗布麻花的提取物或/和罗布麻叶的提取物以及药学上可以接受的辅料。
在其中一些实施例中，所述罗布麻花的提取物为罗布麻花的水提物。
在其中一些实施例中，所述罗布麻叶的提取物包含罗布麻叶的水提物或/和罗布麻叶的醇提物。
在其中一些实施例中，所述罗布麻叶的醇提物为乙醇体积百分比为50％-90％的乙醇水溶液的提取物。
在其中一些实施例中，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂以及等渗或等张调节剂中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为冲剂。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为颗粒剂。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为胶囊剂。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为片剂。
在其中一些实施例中，所述药物的剂型为茶剂。
在其中一些实施例中，所述冠状病毒为严重急性呼吸综合征冠状病毒2号、严重急性呼吸综合征冠状病毒、中东呼吸综合征冠状病毒或者蝙蝠SARS样冠状病毒。
与传统技术方案相比，本发明具备如下优势效果：
本发明的发明人经过大量的筛选，发现罗布麻叶和罗布麻花均具有较强的抑制冠状病毒感染和抗新冠病毒的功效，将其制备成抗冠状病毒的药物，能为预防或/治疗冠状病毒提供一种有效手段。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为不同浓度罗布麻叶醇提物抑制假病毒作用的结果；
图2为不同浓度罗布麻叶水提物抑制假病毒作用的结果；
图3为不同浓度罗布麻花水提物抑制假病毒作用的结果；
图4为比较罗布麻叶醇提物、水提物和罗布麻花水提物抑制假病毒作用的结果；
图5为不同浓度罗布麻叶醇提物抑制刺突蛋白与ACE2结合作用的结果；
图6为不同浓度罗布麻叶水提物抑制刺突蛋白与ACE2结合作用的结果；
图7为不同浓度罗布麻花水提物抑制刺突蛋白与ACE2结合作用的结果；
图8为比较各提取物抑制刺突蛋白与ACE2结合作用的结果。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。
出于说明本发明各种实施方式的目的给出如下实施例，并非意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将理解，如权利要求的范围所限定的，其中的变化和其它用途包括在本发明精神范围内。下列实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明中，“第一方面”、“第二方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。
本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。
本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。
本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。
罗布麻(Apocynum venetum L.)属于夹竹桃科罗布麻属植物，又称小花罗布麻、罗布红麻，别名野麻、野茶、红麻、茶叶花、泽漆麻、牛茶、红柳子等。罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻Apocynum venetum L.的干燥叶。《中国药典》记载其功效：“平肝安神，清热利水。用于肝阳眩晕，心悸失眠，浮肿尿少；高血压，神经衰弱，肾炎浮肿。”现代研究表明，罗布麻叶含黄酮苷、酚性物质、有机酸、氨基酸、还原物质、多糖苷、糅质、甾醇、甾体皂苷等物质。罗布麻花小而多，芳香美丽，是一种良好的蜜源植物。罗布麻叶被广泛应用于茶饮、保健品等；但罗布麻花的研究应用和开发相对较少。
发明人在中药研究过程中，利用模拟新冠病毒SARS-CoV-2感染的假病毒为模型和对新冠病毒外壳(SARS-COV-2)的刺突蛋白(Spike protein)与血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合的抑制作用两个模型，筛选了200多种中药及其化学成分，发现罗布麻花的水提物，以及罗布麻叶的水提物、罗布麻叶的醇提物能够抑制新冠病毒假病毒的入侵，以及减少刺突蛋白与血管紧张素转化酶2的结合，从而可以起到抑制冠状病毒的作用。基于该发现，本发明将罗布麻提取物用于制备抗(也即预防或/和治疗)冠状病毒感染的药物，为冠状病毒感染的控制提供新的解决方案。
基于此，本发明提供一种罗布麻叶或/和罗布麻花的新应用，主要是罗布麻花或/和罗布麻叶在制备抗冠状病毒的药物中的应用。
在其中一个示例中，所述的药物包含所述罗布麻花的提取物或/和罗布麻叶的提取物以及药学上可以接受的辅料。
在其中一个示例中，所述罗布麻花的提取物为罗布麻花的水提物。
在其中一个示例中，所述罗布麻叶的提取物包含罗布麻叶的水提物或/和罗布麻叶的醇提物。
在其中一个示例中，所述罗布麻叶的醇提物为乙醇体积百分比为50％-90％的乙醇水溶液的提取物。
本发明所述的“水提物”，其制备方法包括如下步骤：
(1)取药材，称重，加入8倍-12倍(8倍、9倍、10倍、11倍、12倍)质量的水浸泡(浸泡时长例如为0.3小时、0.4小时、0.5小时、0.6小时)，加热煎煮0.8小时-1.2小时(0.8小时、0.9小时、1.0小时、1.1小时、1.2小时)，之后隔药渣，将药液滤出；
(2)药渣加8倍-12倍(8倍、9倍、10倍、11倍、12倍)质量水再加热煎煮0.8小时-1.2小时(0.8小时、0.9小时、1.0小时、1.1小时、1.2小时)，之后隔药渣，将药液滤出；
(3)合并步骤(1)和步骤(2)所得药液。
所得药液可以经冷冻(例如置-80℃冰箱24小时)、干燥等制备成干粉。
本发明所述的“醇提物”，其制备方法包括如下步骤：
取药材，加入8倍-12倍(8倍、9倍、10倍、11倍、12倍)质量的含醇提取溶剂浸泡(浸泡时长例如为0.3小时、0.4小时、0.5小时、0.6小时)，回流加热0.8小时-1.2小时(0.8小时、0.9小时、1.0小时、1.1小时、1.2小时)，之后隔药渣，将药液滤出。后续还可以对所得药液可以进行干燥处理(例如旋转蒸发)。
本发明的所述辅料可以选自，包括但不限于如下种类中的一种或者多种：稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂、等渗或等张调节剂。所述稀释剂可以选自，包括但不限于：淀粉类、糖类、纤维素类、无机盐类。所述润湿剂可以选自，包括但不限于：水、乙醇。所述黏合剂可以选自，包括但不限于：淀粉浆、糊精、糖、纤维素衍生物、明胶、聚维酮、聚乙二醇。所述崩解剂可以选自，包括但不限于：淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、表面活性剂、泡腾崩解剂。所述润滑剂可以选自，包括但不限于：滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、十二烷基硫酸镁、微粉硅胶、聚乙二醇。所述色香味调节剂可以选自，包括但不限于：色素、香料、甜味剂、胶浆剂、矫臭剂。所述溶剂可以选自，包括但不限于：水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、二甲基亚砜、液体石蜡、脂肪油、乙酸乙酯。所述增溶剂可以选自，包括但不限于：吐温类、卖泽类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、肥皂类、硫酸化物、磺酸化物。所述助溶剂可以选自，包括但不限于：有机酸及其盐类、酰胺及胺类化合物、无机盐、聚乙二醇、聚维酮、甘油。所述乳化剂可以选自，包括但不限于：司盘类、吐温类、卖泽类、苄泽类、甘油脂肪酸酯、高级脂肪酸盐、硫酸化物、磺酸化物、阿拉伯胶、西黄耆胶、明胶、果胶、磷脂、琼脂、海藻酸钠、氢氧化物、二氧化硅、皂土。所述助悬剂可以选自，包括但不限于：甘油、糖浆、阿拉伯胶、西黄耆胶、琼脂、海藻酸钠、纤维素衍生物、聚维酮、卡波普、聚乙烯醇、触变胶。所述抗氧剂可以选自，包括但不限于：亚硫酸盐、焦亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、抗坏血酸、没食子酸及其酯类。所述金属络合剂可以选自，包括但不限于：乙二胺四乙酸二钠、多羧酸化合物；所述惰性气体可以选自，包括但不限于：氮气、二氧化碳中。所述防腐剂可以选自，包括但不限于：尼泊金类、有机酸及其盐、季铵类化合物、醋酸氯己定、醇类、酚类、挥发油。所述局部止痛剂可以选自，包括但不限于：苯甲醇、三氯叔丁醇、利多卡因、普鲁卡因。所述pH调节剂可以选自，包括但不限于：盐酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、乙二胺、葡甲胺、磷酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐。所述等渗或等张调节剂可以选自，包括但不限于：葡萄糖、氯化钠、枸橼酸钠、山梨醇、木糖醇。
本发明对药物的具体剂型不做特别的限定，可以根据临床需求制备成相应的剂型，例如冲剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、茶剂。
本发明实施例所涉的冠状病毒，包括但不限于所述冠状病毒为严重急性呼吸综合征冠状病毒2号(SARS-CoV-2)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、或蝙蝠SARS样冠状病毒(bat-SL-CoVZC45)等。
实施例1、罗布麻花和罗布麻叶水提物的制备
罗布麻花/叶水提物的制备方法包括如下步骤：
(1)取药材，称重，加入10倍质量的水浸泡半小时，加热煲煮1小时，之后隔药渣，将药液滤出；
(2)药渣加同量(即加入10倍药材质量)水再加热煲煮1小时，之后隔药渣，将药液滤出。
(3)合并步骤(1)和步骤(2)所得药液。
(4)置-80℃冰箱24小时，再移至冷冻干燥机，冷冻干燥，直至所有药液干燥至粉状。
实施例2、罗布麻花和罗布麻叶的50-90％乙醇提物的制备
罗布麻花/叶50-90％乙醇提物的制备方法包括如下步骤：
(1)取药材，置250mL圆底烧瓶，加入10倍质量的90％乙醇浸泡半小时，回流加热1小时，之后隔药渣，将药液滤出；
(2)用旋转蒸发器蒸发至干。
实施例3、药效验证
罗布麻叶和罗布麻花的抗冠状病毒功效，利用模拟新冠病毒SARS-CoV-2感染的假病毒，以及对新冠病毒外壳(SARS-COV-2)的刺突蛋白(Spike protein)与血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合的抑制作用两个模型，用不同的浓度罗布麻叶和罗布麻花提取物进行测试。
显示罗布麻叶醇提物有很强的抗冠状病毒功效，罗布麻叶和罗布麻花水提物功效次之。
一、罗布麻花和罗布麻叶对SARS-CoV-2 Spike假型病毒的抑制作用
(1)实验原理
假病毒是一类嵌合型病毒颗粒，是在一种复制缺陷型病毒(病毒载体)的表面上表达另一种病毒的重组糖蛋白的嵌合病毒颗粒。用新冠病毒S蛋白替代病毒载体中的包膜糖蛋白，形成模拟新冠病毒SARS-CoV-2感染的假病毒。如果中药提取物能抑制假病毒的入侵和感染，这代表该提取物也能抑制新冠病毒入侵。
(2)实验材料
高糖Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)购自Gibco(UK)。胎牛血清(FBS)购自Gibco(巴西)。青霉素和链霉素(Pen/Strep)购自Gibco。胰蛋白酶-EDTA(1x)购自Gibco。萤光素酶检测系统购自Promega。Protein Assay Dye Reagent Concentration购自Bio-Rad。牛血清白蛋白(BSA)购自Sigma。酶标仪购自Thermo Scientific。MicroplateLuminometer购自GLOMAX。
(3)实验步骤
细胞培养：HEK293T细胞在含有10％(v/v)小牛血清(FBS)和1％(w/w)Pen/Strep的高葡萄糖Dullbecco改良Eagle培养基(DMEM)中培养。通过用pcDNA3.1-hACE2质粒转染进行ACE-2过表达的HEK293T细胞系。
SARS-CoV-2假病毒的产生与采集：HEK293T细胞与质粒NR-52514、NR-52516、NR-52517、NR-52518、NR-52519共转染，产生SARS-CoV-2 Spike假型病毒颗粒。转染后48小时收集上清液中的假病毒，用孔径为0.45μm的过滤器过滤并储存在-80℃。
表1、建立SARS-CoV-2 Spike假型病毒模型共转染的质粒类型和作用
质体类型 嵌入 BEI Resources产品编号
Viral Entry Protein Spike Glycoprotein NR-52514
Lentiviral Backbone Luc2；ZsGreen NR-52516
Helper Plasmid Gag；pol NR-52517
Helper Plasmid Tat1b NR-52518
Helper Plasmid Rev1b NR-52519
假病毒入侵试验：ACE-2过表达的HEK293T细胞已接种在48孔板中，每孔加入100μL假病毒(同时加入检测样品)和400μL培养基，孵育过夜。将培养基换成DMEM、FBS和Pen/Strep的混合物，培养48小时后，用1×PBS洗涤，然后进行荧光素酶活性测定。
以中和抗体(A19215)为阳性对照，溶剂空白和无假病毒组为阴性对照。检测样品为罗布麻花和罗布麻叶的水提取物和醇提物。检测样品最终浓度控制在1μg/mL至100μg/mL。用溶剂空白的荧光素酶活性检测数据标化荧光素酶活性，计算样品抑制病毒的百分比。每个样品加三个孔，取平均值，实验重复三次。
(4)实验结果
在实验中，以中和抗体A19215溶液为阳性对照。结果如图1、图2、图3和图4所示。
如图1和图2所示，罗布麻叶的醇提物(如图1)和罗布麻叶的水提物(如图2)对假病毒的抑制作用呈剂量依赖方式，当浓度为100μg/mL时，罗布麻叶的醇提物对假病毒抑制率高于90％。
如图3所示，罗布麻花的水提物(如图3)和罗布麻叶的水提物对假病毒抑制率都高于80％。
比较罗布麻叶和罗布麻花醇提物和水提物对假病毒的抑制作用(图4)，数据显示：罗布麻叶和罗布麻花均表现出显著的抗新冠病毒(SARS-CoV-2)作用。罗布麻花的醇提物对假病毒没有抑制效果，所以未列出数据。
表2
Figure BDA0003451262970000111
Figure BDA0003451262970000121
二、检测罗布麻花和罗布麻叶对新冠病毒外壳(SARS-COV-2)的刺突蛋白(Spikeprotein)与血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合的抑制作用
(1)实验原理
通过检测罗布麻样品对新冠病毒外壳(SARS-COV-2)的刺突蛋白(Spike protein)与血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合的抑制作用，来表示中药提取物的抗病毒功效。当刺突蛋白被中药提取物抑制时，其与人类受体——血管紧张素转化酶2(ACE2)的结合就会降低。刺突蛋白与ACE2的结合越少，则罗布麻提取物抑制冠状病毒的功效越强。该方法是目前测试药物抗新冠病毒(SARS-CoV-2)功效的一种有效的体外检测手段。
(2)实验材料
罗布麻花和罗布麻叶提取物稀释至4个不同浓度，利用SARS-CoV-2 Spike:ACE2Inhibitor Screening Assay Kit(购自BPS Bioscience公司)进行抗新冠病毒(SARS-CoV-2)测试。
(3)实验步骤
将浓度为1μg/mL的刺突蛋白溶液加入特制的96孔板中，每孔加50μL，4℃过夜孵育。孵育完成后，倒去上清液，用100μL封闭液A清洗3次。拍干液体，每孔加入100μL封闭液B，室温振荡1小时。拍干液体后，每孔加入20μL封闭液A，阳性对照孔和阴性对照孔中分别加入10μL 5％(v/v)的DMSO水溶液，样品孔加入10μL样品溶液(含有5％DMSO)，室温振荡1小时。
阳性对照以中和抗体A19215作为模拟实验最高抑制率的情况，阴性对照孔和样品孔中分别加入20μL浓度为2.5ng/μL的ACE2-His溶液，室温振荡反应1小时。反应完成后拍干液体，用100μL封闭液A清洗3次。拍干液体，每孔加入100μL封闭液B，室温培养10分钟。培养结束后拍干液体，每孔加入10μL Anti-His-HRP溶液，室温振摇培养1小时。先用100μL封闭液A清洗3次，紧接着每孔加入100μL封闭液B，室温培养10分钟。最后，拍干液体，每孔加入100μL ELISA ECL substrate A和B(1:1)的混合液，测定化学荧光强度。
(4)实验结果
在实验中，以中和抗体A19215溶液为阳性对照；以不加任何抑制剂的溶液为阴性对照。结果参见图5、图6、图7和图8。
不同浓度罗布麻叶醇提物结果如图5所示；不同浓度罗布麻叶水提物结果如图6所示；不同浓度罗布麻花水提物结果如图7所示。比较浓度为100mg/L的各提取物抑制新冠病毒作用(图8)，罗布麻叶醇提物和罗布麻叶水提物的功用好于和罗布麻花水提物，而10mg/L的提取物中，只有罗布麻叶醇提物有抑制新冠病毒的效果。罗布麻花的醇提物没有抑制效果，所以未列出数据。
表3
Figure BDA0003451262970000141
表4
Figure BDA0003451262970000142
综上所述，本发明利用模拟新冠病毒SARS-CoV-2感染的假病毒为模型和对新冠病毒外壳(SARS-COV-2)的刺突蛋白(Spike protein)与血管紧张素转化酶2(ACE2)受体结合的抑制作用两个模型，验证罗布麻花的水提物，以及罗布麻叶的水提物、罗布麻叶的醇提物能够抑制新冠病毒假病毒的入侵，以及减少刺突蛋白与血管紧张素转化酶2的结合，从而可以起到抑制冠状病毒的作用，为冠状病毒感染的控制提供新的解决方案。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所述附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.罗布麻花或/和罗布麻叶在制备抗冠状病毒的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物包含所述罗布麻花的提取物或/和罗布麻叶的提取物以及药学上可以接受的辅料。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述罗布麻花的提取物为罗布麻花的水提物。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述罗布麻叶的提取物包含罗布麻叶的水提物或/和罗布麻叶的醇提物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述罗布麻叶的醇提物为乙醇体积百分比为50％-90％的乙醇水溶液的提取物。
6.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述辅料包含稀释剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、色香味调节剂、溶剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、抗氧剂、金属络合剂、惰性气体、防腐剂、局部止痛剂、pH调节剂以及等渗或等张调节剂中的至少一种。
7.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为冲剂或者颗粒剂。
8.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为胶囊剂或者片剂。
9.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为茶剂。
10.根据权利要求1至5任一项所述的应用，其特征在于，所述冠状病毒为严重急性呼吸综合征冠状病毒2号、严重急性呼吸综合征冠状病毒、中东呼吸综合征冠状病毒或者蝙蝠SARS样冠状病毒。
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