CN114181888B - 一种浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立方法及其在胶原蛋白合成中的应用，包括如下步骤：S1、通过原代和传代培养建立浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系，目前已传至50代；S2、用TGF‑β试剂孵育细胞，48小时后，收集细胞，探究其胶原蛋白相关基因表达量及胶原蛋白含量的变化。建立浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系作为研究胶原蛋白合成机制、鱼鳔营养调控的体外模型是非常有必要的，不仅填补相关领域的空白，也为开发提高鱼鳔品质的方法提供新思路。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立方法及应用。
背景技术
鱼胶(鱼鳔干制品)又称花胶，富含胶质，自古以来就是名贵补品，素有“海洋人参”之誉。浅色黄姑鱼是属于石首鱼科黄姑鱼属的一种肉食性鱼类。因其肉质鲜嫩，味道鲜美，尤其是其鱼胶(白花胶)具有有很高的营养及药用价值，属于四大名胶之一(优质鱼胶价格在10000-15000元/公斤)，具有极高经济价值和养殖前景。近年来随着国民生活水平不断提高，越来越多的人开始注重养生，鱼胶作为一种理想的高蛋白低脂肪食品受到消费者喜爱，需求量不断增加，市场规模也持续扩大。
胶原蛋白是鱼胶的主要组成成分和品质的评价指标，探索鱼鳔胶原蛋白合成机制，对于生产高质量鱼鳔产品具有重要意义。浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立不仅是研究胶原蛋白合成调控理想的体外模型，也可以应用到浅色黄姑鱼免疫学、毒理学、活性物质检测、细胞生物学及鱼类资源保护等方面的研究中。目前，仅有极少数鱼类(草鱼、金鱼和石斑鱼)有关于鱼鳔细胞系应用于病理研究的相关报道，还未有浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系以及利用鱼鳔细胞系进行胶原蛋白合成机制相关研究的成功报道。
发明内容
浅色黄姑鱼作为生产鱼胶的特种鱼类，其鱼鳔的经济价值要远高于已报道的有鱼鳔细胞系的少数鱼种。然而，目前尚未有浅色黄姑鱼细胞系的报道，也没有利用鱼鳔细胞系在进行胶原蛋白合成调控研究的应用报道。因此建立浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系作为研究胶原蛋白合成机制、鱼鳔营养调控的体外模型是非常有必要的，也是本发明的目的，可以填补相关领域的空白。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的应用，用于探究胶原蛋白合成机制、高品质鱼胶生产营养调控，包括如下步骤：
S1、将通过建立浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系得到的浅色黄姑鱼鱼鳔第25代细胞接种于12孔板，待细胞生长密度达45％～55％，进入S2；
S2、用TGF-β试剂孵育细胞，48小时后，收集细胞，对基因表达量及胶原含量进行检测。
浅色黄姑鱼是生产名贵鱼鳔的特色品种，本发明将鱼鳔细胞首次用于胶原蛋白合成相关研究。
一种上述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立方法，包括如下步骤：
A、制备完全培养基；
B、原代细胞培养：浅色黄姑鱼在消毒海水中暂养，之后麻醉、消毒并解剖，取出鱼鳔组织并洗涤，在含5％胎牛血清的DMEM/F12培养基中剪碎成碎片，一并转移离心，获得组织块，用DMEM/F12培养基清洗后进行接种于表面用 0.5ml所述完全培养基润湿且已包被0.1％明胶的培养瓶，正置培养6-8小时后加入所述完全培养基，注意不要将组织块吹起，24小时候增添所述完全培养基，置于恒温培养箱中培养，定期用所述完全培养基更换旧培养基，培养14天后得到原代细胞；
先加入少量培养基让组织块贴壁，再加入剩余培养基进行培养，可以减少组织块悬浮，提高细胞培养的成功率。观察组织块，看组织块是否贴壁已确定培养时间。
C、细胞传代培养：待细胞铺满单层后，吸去旧培养基，清洗后加入胰酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞变圆时，加入所述完全培养基终止消化，轻柔吹打细胞，使其脱落完全，将细胞悬液离心除去培养基后，加入所述完全培养基重悬细胞，1:2传代，增添所述完全培养基，置于恒温培养箱中培养，4-6天 (细胞在细胞瓶中基本长满就可进行传代)传一次；
D、第10代后的传代培养：从第10代开始，1:2传代，增添的培养基置于恒温培养箱中培养，4-6天传一次，形成所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系。
优选的，包括如下步骤：
A、制备所述完全培养基；
B、原代细胞培养：浅色黄姑鱼在青霉素浓度为1000IU/ml，链霉素浓度为 1000μg/ml的消毒海水中暂养20～30小时，之后丁香酚麻醉，至于70％的酒精中消毒2分钟，在超净台进行解剖，取出鱼鳔组织后，用含抗生素的磷酸盐缓冲液洗涤三次，在含5％胎牛血清的DMEM/F12培养基中剪碎成1mm3的碎片，一并转移至离心管，加入磷酸盐缓冲液，800rpm下离心，获得组织块，用 DMEM/F12培养基清洗2次后进行接种于表面用0.5ml所述完全培养基润湿且已包被0.1％明胶的T25培养瓶，正置培养6小时后加入所述完全培养基1ml，注意不要将组织块吹起，24小时候增添所述完全培养基3ml，置于27℃恒温培养箱中培养，每3天更换旧培养基，培养14天后得到生长至90％左右原代细胞；
C、细胞传代培养：待细胞铺满单层后，用吸管吸去旧培养基，加入2ml PBS 轻轻晃动清洗一遍，之后加入1ml溶解在EDTA中的0.25％的胰酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞变圆时，加入4ml所述完全培养基终止消化，轻柔吹打细胞，使其脱落完全，将细胞悬液转移至离心管，500rpm下离心5分钟，除去培养基后，加入2ml所述完全培养基重悬细胞，1:2传代，增添4ml所述完全培养基，置于27℃恒温培养箱中培养，5天传一次；
D、第10代后的传代培养：从第10代开始，1:2传代，增添的培养基为含 15％胎牛血清的DMEM/F12培养基，同时不含生长因子(碱性成纤维生长因子、胰岛素样生长因子及表皮生长因子)，pH为7.0～7.4，置于恒温培养箱中培养， 5天传一次，形成所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系。
细胞系的建立难点在于，细胞系的建立与鱼的品种和组织有关，不同鱼、甚至同一种鱼不同组织的细胞具备不同的性质，需要特定的条件下才能保持其活性并成功完成传代。适用于一种鱼的细胞系建立方法，并不一定适用另外一种，同时有些组织甚至完全无法传代、无法建立细胞系。
因为在培养至10代后，细胞生长趋于稳定，发现15％血清浓度对细胞生长没有影响，可以降低血清浓度从而降低细胞培养的成本。
优选的，步骤B中，麻醉所用丁香酚与浅色黄姑鱼的比重为1:10000。
优选的，制备所述完全培养基包括如下步骤：取DMEM/F12培养基，加入占培养基总体积20％的胎牛血清，20ng/ml的碱性成纤维生长因子，40ng/ml 的胰岛素样生长因子，20ng/ml的表皮生长因子，100IU/ml青霉素，100μg/ml 链霉素，制成所述完全培养基。
优选的，所述DMEM/F12培养基中，DMEM：F12＝1:1。
优选的，还包括如下步骤：
E、细胞冻存及复苏：收集胰酶消化后的细胞悬液，离心除去培养基后，加入预冷的冻存液重悬细胞，在冰箱中冷冻过夜，再移入液氮中长期保存，完成细胞冻存；从液氮中取出后，立即恒温震荡至融化，加入所述完全培养基，离心除去培养基和所述冻存液，加入所述完全培养基重悬细胞，均匀铺于培养瓶中培养，完成细胞复苏；所述冻存液包括10％DMSO，20％胎牛血清，70％所述完全培养基。
优选的，还包括如下步骤：
E、细胞冻存及复苏：收集胰酶消化后的细胞悬液，500rpm离心5分钟，除去培养基后，加入1ml预冷的所述冻存液重悬细胞，放入冻存管中，在-80℃的冰箱中冷冻过夜，再移入液氮中长期保存，完成细胞冻存；从液氮中取出后，立即在恒温振荡孵育器中30℃震荡至融化，加入2ml所述完全培养基，离心除去培养基和所述冻存液，加入所述2ml所述完全培养基重悬细胞，均匀铺于培养瓶中培养，完成细胞复苏；所述冻存液包括10％DMSO，20％胎牛血清，70％所述完全培养基加培养基重悬细胞后，将细胞均匀铺于培养瓶中培养。
与现有技术相比较，实施本发明，具有如下有益效果：
1.本技术填补了浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系这一方面的空白，为提高浅色黄姑鱼鱼鳔品质的相关研究提供了体外模型。
2.浅色黄姑鱼作为生产名贵鱼鳔的特色品种，通过研究首次发现了TGF-β能提高鱼鳔细胞的胶原蛋白。利用浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系研究胶原蛋白的合成机制，不仅能丰富鱼类胶原蛋白合成理论知识，还为提高鱼胶产量和品质的研究提供新的思路。
3.培养原代细胞时完全培养基含20ng/ml的碱性成纤维生长因子(bFGF)，40 ng/ml的胰岛素样生长因子(IGF-I)，20ng/ml的表皮生长因子(EGF)有助于原代细胞的生长。
4.原代培养至10代后，培养基可调整为仅含100IU/ml青霉素，100μg/ml 链霉素及15％胎牛血清的DMEM/F12完全培养基(pH：7.0-7.4)，该培养基能够保证细胞稳定生长，同时降低细胞培养成本。
5.组织块接种前，预先用0.1％明胶包被培养瓶，并用0.5ml完全培养基提前润湿培养瓶表面。组织块接种后，先正置培养6-8h后，先加入1ml培养基培养24h，待组织块基本贴壁后，再小心加入3ml培养基的培养方式。这一方法降低了组织块在培养液中脱离底壁浮起的概率，提高了原代细胞培养的成功率。
附图说明
图1为传代培养的浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系，标尺示100μm，其中：A)浅色黄姑鱼鱼鳔细胞3代；B)浅色黄姑鱼鱼鳔细胞10代；C)浅色黄姑鱼鱼鳔细胞40代。
图2为冷冻后复苏的20代浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系，标尺示100μm。
图3为绿色荧光蛋白基因在浅色黄姑鱼鱼鳔细胞中的表达，标尺示100μ m。
图4为TGF-β(10ng/ml)对浅色黄姑鱼鱼鳔细胞胶原蛋白含量的影响。
图5为TGF-β(10ng/ml)对浅色黄姑鱼鱼鳔细胞胶原蛋白含量的影响。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步地详细描述。
一、浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的构建
1.制备细胞培养基
取Gibco公司Dulbecco's Modified Eagle Medium:Nutrient Mixture F-12(DMEM/F12,1:1)培养基，加入占培养基总体积20％的胎牛血清，20ng/ml的碱性成纤维生长因子(bFGF)，40ng/ml的胰岛素样生长因子(IGF-I)，20ng/ml 的表皮生长因子(EGF)，100IU/ml青霉素，100μg/ml链霉素制成细胞完全培养基。
2.原代细胞培养
本发明所用的浅色黄姑鱼(50g)来自汕头大学南澳海洋生物实验站，原代细胞培养时间为2019年4月。将鱼在青霉素浓度为1000IU/ml，链霉素浓度为 1000μg/ml的消毒海水中暂养24小时。用丁香酚(1:10000)对鱼进行麻醉，后于70％的酒精中消毒2分钟，在超净台进行解剖。取出鱼鳔组织后，用含抗生素的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤三次，在含5％胎牛血清的的DMEM/F12培养基中剪碎成1mm3的碎片。将培养基与组织块转移至离心管，加入PBS，800 转离心收集组织块。用不含血清的DMEM/F12清洗组织块2次后，将组织块均匀接种于表面用0.5ml完全培养基润湿且已包被0.1％明胶的T25培养瓶中，正置培养6小时后加入配置好的完全培养基1ml，注意不要将组织块吹起。24小时后向培养瓶中加入3ml完全培养基，置于27℃恒温培养箱中培养，每3天更换2ml旧培养基。培养14天后得到生长至90％左右原代细胞。
3.细胞传代培养
待细胞铺满单层后，用吸管吸去旧培养基，加入2ml PBS轻轻晃动清洗一遍。加入1ml 0.25％的胰酶(含EDTA)消化细胞，在显微镜下观察到细胞变圆时，加入4ml完全培养基终止消化，轻柔吹打细胞，使其脱落完全。将细胞悬液转移至离心管，500rcf离心5分钟，弃培养基。加入2ml完全培养基重悬细胞，1:2传代，加入培养基至4ml，放入27℃培养箱培养，约4-6天传一次。传至第十代时，培养基为含青霉素和链霉素，15％胎牛血清的DMEM/F12培养基，同时不含生长因子(碱性成纤维生长因子、胰岛素样生长因子及表皮生长因子)，(pH：7.0-7.4)。
本发明构建的浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系生长状态良好，细胞增殖稳定，目前已传至50代以上，如图1所示。
4.细胞冻存及复苏
收集胰酶消化后的细胞悬液，500rcf离心5分钟，加入1ml预冷的冻存液 (冻存液含10％DMSO，20％胎牛血清，70％完全培养基)。将重悬的细胞液加入冻存管，-80℃冰箱过夜，置于液氮长期保存。
冻存管在液氮中取出后，立即在恒温振荡孵育器中30℃震荡至融化。将细胞加入含有2ml完全培养基的离心管中，500rcf离心5分钟，弃培养基，除去细胞冻存液。加1ml培养基重悬细胞后，将细胞均匀铺于培养瓶中培养，如图2 所示。
二、浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系外源基因的转染及表达
将第31代浅色黄姑鱼鱼鳔细胞接种于12孔板中，以27℃培养三天，细胞密度约为60％-70％时进行转染。将pEGFP-N1质粒用LTX&PLUSTM Reagent转染，并于48小时后在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白基因的表达，可以观察到明显的荧光信号，如图3所示，证明浅色黄姑鱼鱼鳔细胞可以用于外源基因在细胞内表达的研究。
三、浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的应用
在哺乳动物中已有研究表明，转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在胶原蛋白沉积、组织纤维化过程中发挥重要的作用。然而，目前关于水产动物胶原蛋白沉积机制的研究仍十分缺乏。将第25代细胞接种于12 孔板，待细胞生长密度达50％左右，用终浓度为10ng/ml的TGF-β孵育浅色黄姑鱼鱼鳔细胞，48小时后，胰酶消化收集细胞。一部分细胞用于RNA提取，用 qPCR检测Col1a1、Col1a2基因表达水平，如图4所示；另一部分胰酶消化下细胞后，用南京建成公司生产的羟脯氨酸(Hyp)测定试剂盒检测细胞内胶原蛋白含量变化，如图5所示。应用统计学分析软件SPSS对细胞中Col1a1、Col1a2 基因表达及胶原蛋白含量进行显著性分析。实验证明，用TGF-β孵育浅色黄姑鱼鱼鳔细胞后，与对照组细胞相比，Col1a1、Col1a2基因表达量显著上升，细胞内胶原蛋白含量也显著上调。
以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。
Claims (8)
1.一种浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的应用，其特征在于，做为用于探究胶原蛋白合成机制、高品质鱼胶生产及营养调控的体外模型，包括如下步骤：
S1、通过组织块法进行原代细胞培养，并进行传代培养，得到浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系，进入S2；
S2、用TGF-β试剂孵育细胞，48小时后，收集细胞，检测胶原蛋白相关基因表达量及胶原蛋白含量的变化；所述TGF-β试剂中，TGF-β的终浓度为10 ng/ml。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立包括如下步骤：
A、制备完全培养基；
B、原代细胞培养：浅色黄姑鱼在消毒海水中暂养，之后麻醉、消毒并解剖，取出鱼鳔组织并洗涤，在含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基中剪碎成碎片，一并转移离心，获得组织块，用DMEM/F12培养基清洗后进行接种于表面用0.5ml所述完全培养基润湿且已包被0.1%明胶的培养瓶，正置培养6-8小时后加入所述完全培养基，注意不要将组织块吹起，24小时后增添所述完全培养基，置于恒温培养箱中培养，定期用所述完全培养基更换旧培养基，培养14天后得到可传代的原代细胞；
C、细胞传代培养：待细胞铺满单层后，吸去旧培养基，清洗后加入胰酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞变圆时，加入所述完全培养基终止消化，轻柔吹打细胞，使其脱落完全，将细胞悬液离心除去培养基后，加入所述完全培养基重悬细胞，1:2传代，增添所述完全培养基，置于恒温培养箱中培养，4-6天传一次；
D、第10代后的传代培养：从第10代开始，1:2传代，增添培养基，置于恒温培养箱中培养，4-6天传一次，形成所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立包括如下步骤：
A、制备所述完全培养基；
B、原代细胞培养：浅色黄姑鱼在青霉素浓度为1000 IU/ml，链霉素浓度为1000 μg/ml的消毒海水中暂养20~30小时，之后丁香酚麻醉，至于70%的酒精中消毒2分钟，在超净台进行解剖，取出鱼鳔组织后，用含抗生素的磷酸盐缓冲液洗涤三次，在含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基中剪碎成1 mm3的碎片，一并转移至离心管，加入磷酸盐缓冲液，800 rpm下离心，获得组织块，用DMEM/F12培养基清洗2次后进行接种于表面用0.5ml所述完全培养基润湿且已包被0.1%明胶的T25培养瓶，正置培养6小时后加入所述完全培养基1ml，注意不要将组织块吹起，24小时后增添所述完全培养基3ml，置于27℃恒温培养箱中培养，每3天更换旧培养基，培养14天后得到可传代的原代细胞；
C、细胞传代培养：待细胞铺满单层后，用吸管吸去旧培养基，加入2ml PBS轻轻晃动清洗一遍，之后加入1ml溶解在EDTA中的 0.25%的胰酶消化细胞，在显微镜下观察到细胞变圆时，加入4ml所述完全培养基终止消化，轻柔吹打细胞，使其脱落完全，将细胞悬液转移至离心管，500 rpm下离心5分钟，除去培养基后，加入2ml所述完全培养基重悬细胞，1:2传代，增添4ml所述完全培养基，置于27℃恒温培养箱中培养，5天传一次；
D、第10代后的传代培养：从第10代开始，1:2传代，增添的培养基为含青霉素和链霉素，15%胎牛血清的DMEM/F12培养基，同时不含生长因子，pH为7.0~7.4，置于恒温培养箱中培养，5天传一次，形成所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，步骤B中，麻醉所用丁香酚与浅色黄姑鱼的比重为1:10000。
5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，制备所述完全培养基包括如下步骤：取DMEM/F12培养基，加入占培养基总体积20%的胎牛血清，20 ng/ml的碱性成纤维生长因子，40 ng/ml的胰岛素样生长因子，20 ng/ml的表皮生长因子，100 IU/ml青霉素，100 μg/ml 链霉素，制成所述完全培养基。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述DMEM/F12培养基中，DMEM：F12体积比为1:1。
7.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述浅色黄姑鱼鱼鳔细胞系的建立还包括如下步骤：
E、细胞冻存及复苏：收集胰酶消化后的细胞悬液，离心除去培养基后，加入预冷的冻存液重悬细胞，在冰箱中冷冻过夜，再移入液氮中长期保存，完成细胞冻存；从液氮中取出后，立即恒温震荡至融化，加入所述完全培养基，离心除去培养基和所述冻存液，加入所述完全培养基重悬细胞，均匀铺于培养瓶中培养，完成细胞复苏；所述冻存液包括10%DMSO，20%胎牛血清，70%所述完全培养基。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，步骤E的具体操作为：收集胰酶消化后的细胞悬液，500 rpm离心5分钟，除去培养基后，加入1ml预冷的所述冻存液重悬细胞，放入冻存管中，在-80℃的冰箱中冷冻过夜，再移入液氮中长期保存，完成细胞冻存；从液氮中取出后，立即在恒温振荡孵育器中30℃震荡至融化，加入2ml所述完全培养基，离心除去培养基和所述冻存液，加入所述2ml所述完全培养基重悬细胞，均匀铺于培养瓶中培养，完成细胞复苏；所述冻存液包括10%DMSO，20%胎牛血清，70%所述完全培养基加培养基重悬细胞后，将细胞均匀铺于培养瓶中培养。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101451122A (zh) * | 2008-12-26 | 2009-06-10 | 中国海洋大学 | 褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法 |
| CN101543507A (zh) * | 1999-09-25 | 2009-09-30 | 衣阿华大学研究基金会 | 免疫刺激性核酸 |
| CN103952369A (zh) * | 2014-04-03 | 2014-07-30 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 一株草鱼鱼鳔上皮样细胞系及其应用 |
| WO2021111263A1 (en) * | 2019-12-02 | 2021-06-10 | Avant Meats Company Limited | Methods for improving cell growth with species-specific or genus-specific proteins and the applications thereof |
-
2021
- 2021-11-24 CN CN202111406175.9A patent/CN114181888B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101543507A (zh) * | 1999-09-25 | 2009-09-30 | 衣阿华大学研究基金会 | 免疫刺激性核酸 |
| CN101451122A (zh) * | 2008-12-26 | 2009-06-10 | 中国海洋大学 | 褐点石斑鱼鳔细胞系的构建方法 |
| CN103952369A (zh) * | 2014-04-03 | 2014-07-30 | 中国水产科学研究院珠江水产研究所 | 一株草鱼鱼鳔上皮样细胞系及其应用 |
| WO2021111263A1 (en) * | 2019-12-02 | 2021-06-10 | Avant Meats Company Limited | Methods for improving cell growth with species-specific or genus-specific proteins and the applications thereof |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| Lakra WS 等."Development of cell culture from liver and kidney of Indian major carp, Labeo rohita (Hamilton)".《INDIAN JOURNAL OF FISHERIES》.2005,第52卷(第3期),373-376. * |
| Rong H 等."Effects of dietary proline on swim bladder collagen synthesis and its possible regulation by the TGF-beta/Smad pathway in spotted drum, Nibea diacanthus".《AQUACULTURE NUTRITION》.2020,第26卷(第5期),1792-1805. * |
| 张好放."草鱼TGF-β1、Smad4基因真核过表达和RNA干扰表达载体的构建及其活性验证".《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》.2018,(第2期),第2页第2段，第6页第3段，第27页图3-7B，第35页图4-1. * |
| 翟中和等.《细胞生物学》.高等教育出版社,2011,(第4版),第180页. * |
| 荣华 等."抑制TGF-β/Smads通路对Hyp促进浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白沉积的影响".《西北农林科技大学学报(自然科学版)》.2022,第50卷(第9期),1-10. * |
| 袁钰莹."结缔组织生长因子（CTGF）在浅色黄姑鱼鱼鳔胶原蛋白合成中的作用研究".《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》.2023,(第2期),D052-345. * |
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| CN114181888A (zh) | 2022-03-15 |
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