CN114181872A - 一种屎肠球菌高密度发酵培养方法 - Google Patents
一种屎肠球菌高密度发酵培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114181872A CN114181872A CN202210015038.0A CN202210015038A CN114181872A CN 114181872 A CN114181872 A CN 114181872A CN 202210015038 A CN202210015038 A CN 202210015038A CN 114181872 A CN114181872 A CN 114181872A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- enterococcus faecium
- medium
- liquid
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 92
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 92
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 title claims abstract description 60
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title claims description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 45
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 50
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 22
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 21
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 14
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 11
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 11
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 9
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 7
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 7
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 7
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 claims description 6
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 claims description 6
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 6
- 239000000498 cooling water Substances 0.000 claims description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000012526 feed medium Substances 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 abstract description 3
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 abstract description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 5
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 5
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000006052 feed supplement Substances 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 description 2
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 2
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 2
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 2
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 2
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- HTKLCTLNLJFVLN-UHFFFAOYSA-L P(=O)([O-])([O-])O.[K+].[K+].O.O.O.O.O.O.O Chemical compound P(=O)([O-])([O-])O.[K+].[K+].O.O.O.O.O.O.O HTKLCTLNLJFVLN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N diammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000007413 intestinal health Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一株屎肠球菌的高密度发酵培养基及其发酵工艺，属于乳酸菌培养技术领域。其中，所述屎肠球菌的保藏编号为CGMCC NO.12851；利用本发明提供的高密度发酵培养基及分批补料发酵工艺，屎肠球菌在30L发酵罐规模条件下活菌数能达到4.0*1010CFU/mL，是相同发酵条件下传统MRS培养基发酵活菌数的40倍以上，优化培养基成本比MRS培养基成本也有所降低，实现了作为微生态制剂屎肠球菌的低成本、高效率的生产。
Description
技术领域
本发明属于微生物培养技术领域，具体而言，涉及一种屎肠球菌的高密度发酵培养方法。
背景技术
乳酸菌是一种应用已久的益生菌，有200多余种，其中一些也是肠道微生物的固有益生菌群。屎肠球菌属于链球菌科，肠球菌属乳酸菌，革兰氏阳性，兼性厌氧。其具有优良的生物学特性，是肠道共生菌，可在肠道中形成优势菌群，由于其生长速度快，具有较好粘附力，产生乳酸以及一些抗菌物质，抑制有害菌，促进肠道健康，调节肠道的微生态平衡，效果与抗生素相当。因此，屎肠球菌在畜禽养殖业中有着广泛的应用前景，其微生态制剂因具有环境友好，无残留等优点被越来越多地应用于畜牧业生产，对养殖生态环境的保护及养殖业的可持续发展具有重要的意义。
然而传统的乳酸菌发酵多选用MRS培养基，价格昂贵，发酵活菌数低于1×109cfu/mL，在益生菌有效使用剂量固定的情况下，低发酵水平等于变相的增加了成本。此外，抗生素的持续饲喂导致细菌的耐药性、畜产品中的药物残留等问题日益加重。益生菌作为一种无毒、无残留、无抗药性的饲料添加剂，已成为有效的抗生素替代产品之一。因此，寻求一种低成本的培养基，能够低成本高效优化发酵工艺、提高其发酵活菌数对于推进益生菌发酵的产业化有重大指导及实践意义。
发明内容
本发明提出一种屎肠球菌的高密度发酵培养基及其发酵工艺，该发酵培养基成本低，且能够高效优化发酵工艺、提高其发酵活菌数。
为达到此目的，本发明采用以下技术方案：
一种屎肠球菌高密度发酵培养方法，包括以下步骤：
(1)屎肠球菌一级种子液培养：取屎肠球菌平板单菌落，接种于一级种子培养基中，装液量50mL/150mL，37℃培养16小时，得到一级种子液；
(2)屎肠球菌二级种子液培养：将步骤1培养的屎肠球菌一级种子液接种于二级种子培养基中装液量540mL/1000mL，接种量3％，37℃培养4～8小时，得到二级种子液；
(3)屎肠球菌液体发酵：发酵培养基灭菌结束后通冷却水保温至37℃，接入二级种子液，接种量3％，搅拌速度150rpm，维持pH 6.0～7.5；发酵2h后开始流加补料培养基，补料培养基的补充体积为2L，发酵12h；
其中，步骤(3)发酵培养基组分及其用量为：糖蜜20g/L，胰蛋白胨10g/L，牛肉浸粉20g/L，乙酸钠6.42g/L，磷酸二氢钾2g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.04g/L。
进一步，所述屎肠球菌为屎肠球菌CGMCC NO.12851。
进一步，所述一级种子培养基组分及其用量为：牛肉浸粉5g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化钠5g/L，葡萄糖10g/L。
进一步，所述二级种子培养基组分及其用量为：牛肉浸粉12.5g/L，蛋白胨5g/L，酵母浸粉2.5g/L，氯化钠2.5g/L，葡萄糖5g/L，糖蜜10g/L，胰蛋白胨5g/L，乙酸钠3.21g/L，磷酸二氢钾1g/L，柠檬酸氢二铵1g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.02g/L。
进一步，所述步骤(2)二级种子培养时间为5-6h。
进一步，所述步骤(3)液体发酵过程中维持pH 6.0-6.5。
进一步，所述补料培养基由25％糖蜜、17.5％玉米浆制成。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：
本发明优化了屎肠球菌(Enterococcus faecium)的高密度发酵的种子培养基和发酵培养基，通过发酵过程中控制发酵液的pH、溶氧量以及通过控制糖和氮源的含量采用流加的方式进行分批补料的策略，实现了屎肠球菌的低成本、高效率的生产。本发明的发酵培养基组成相较于MRS肉汤培养基的组成，原料更为廉价，更适用于菌株的工业化生产，而本发明菌株可以更好地利用发酵培养基进行发酵增值。与现有技术相比，本发明通过优化培养基显著提高了屎肠球菌的高密度发酵水平。
附图说明
图1为屎肠球菌种龄变化曲线
图2不同发酵培养基对屎肠球菌液体发酵活菌数影响
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。
实施例1屎肠球菌发酵及培养基配制
1.培养基配制：
(1)一级种子培养基为BPY培养基，组成成分及含量为：牛肉浸粉5g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化钠5g/L，葡萄糖10g/L，pH7.0-7.2。
(2)上罐发酵培养基组成成分及含量为：糖蜜20g/L，胰蛋白胨10g/L，牛肉浸粉20g/L，乙酸钠6.42g/L，磷酸二氢钾2g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.04g/L。
(3)二级种子培养基(BPY培养基和发酵培养基按1:1比例混匀)组成成分及含量为：牛肉浸粉12.5g/L，蛋白胨5g/L，酵母浸粉2.5g/L，氯化钠2.5g/L，葡萄糖5g/L，糖蜜10g/L，胰蛋白胨5g/L，乙酸钠3.21g/L，磷酸二氢钾1g/L，柠檬酸氢二铵1g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.02g/L，pH 6.0。
2.屎肠球菌高密度发酵方法
(1)屎肠球菌一级种子液培养
取屎肠球菌CGMCC NO.12851平板单菌落，接种于一级种子培养基中，装液量50mL/150mL，37℃培养16小时，得到一级种子液。
(2)屎肠球菌二级种子液培养
将步骤1培养的屎肠球菌一级种子液接种于二级种子培养基中装液量540mL/1000mL，接种量3％，37℃培养5小时，得到二级种子液。
(3)屎肠球菌液体发酵
发酵培养基灭菌结束后通冷却水保温至37℃，接入二级种子液，接种量3％，调节pH至6.5，搅拌速度150rpm，发酵开始，设定自动补充氢氧化钠，维持pH6.5。发酵2h后开始流加补料培养基(糖蜜25％+17.5％酵母浸粉)，补料培养基的补充体积为2L，发酵12h。
实施例2不同二级种子液培养基对屎肠球菌液体发酵活菌数影响
屎肠球菌高密度发酵方法同实施例1，其中，二级种子培养基分别选择A：BPY培养基、B：发酵培养基、C：BPY培养基和发酵培养基按1:1比例混匀，分别进行发酵。
发酵完成后分别测定活菌数，结果见表1。结果显示，按1:1混匀的种子液发酵水平优于其它两种种子液发酵水平，故选择1:1比例混匀的培养基作为二级种子培养基。
表1不同种子液培养基对屎肠球菌液体发酵活菌数影响
| 种子液培养基 | 菌数(CFU/mL) |
| A(BPY培养基) | 2.4*10<sup>10</sup> |
| B(发酵培养基) | 2.5*10<sup>10</sup> |
| C(A和B按1:1比例混匀) | 2.85*10<sup>10</sup> |
实施例3不同发酵培养基对屎肠球菌液体发酵活菌数影响
屎肠球菌高密度发酵方法同实施例1，其中，液体发酵培养基分别选择实施例1的发酵培养基和传统MRS培养基，分别进行发酵。
传统MRS培养基的主要成分及含量为：蛋白胨10g/L，牛肉粉5g/L，酵母浸粉4g/L，葡萄糖20g/L，三水合乙酸钠5g/L，七水合磷酸氢二钾2g/L，柠檬酸铵2g/L，七水合硫酸镁0.2g/L，四水合硫酸锰0.05g/L，吐温80 1ml/L。
发酵结果如图2所示，与传统MRS培养基相比较，选择发酵培养基高密度发酵活菌数是传统MRS培养基发酵活菌数的40倍以上，完全满足屎肠球菌作为饲用乳酸菌的生产要求。
实施例4屎肠球菌的种龄生长曲线测定
取实验室保存的屎肠球菌CGMCC NO.12851平板单菌落，接种于一级种子培养基中，装液量50mL/150mL，37℃培养16小时，之后以3％的比例接种到二级种子培养基中，装液量540mL/1000mL，混匀，37℃培养8小时，从第2h开始，每隔1h进行活菌计数，以时间为横轴，活菌数为纵轴，绘制活菌数随时间变化曲线图，参照附图1。从图1中可以看出，该株屎肠球菌于5h菌数增长迅速，故选取5h为最佳接种龄。
实施例5流加不同补料发酵培养基对屎肠球菌液体发酵活菌数影响
屎肠球菌高密度发酵方法同实施例1，其中，液体发酵过程中分别流加不同补料培养基A、B，补料A：糖蜜25％+17.5％酵母浸粉、补料B：糖蜜25％+17.5％玉米浆，发酵完成后，分别测定活菌数，结果见表2。结果显示，用玉米浆替代酵母浸粉，对屎肠球菌的发酵水平没有显著影响，但大大降低了成本。
表2不同补料培养基对屎肠球菌液体发酵活菌数影响
| 补料培养基 | 菌数(CFU/mL) |
| 补料A(糖蜜25％+酵母浸粉17.5％) | 2.7*10<sup>10</sup> |
| 补料B(糖蜜25％+玉米浆17.5％) | 2.6*10<sup>10</sup> |
实施例6屎肠球菌液体发酵最佳发酵pH确定
屎肠球菌高密度发酵方法同实施例1，其中，液体发酵过程中分别调节pH至5.0、6.0、6.5、7.0、7.5，发酵开始，设定自动补充氢氧化钠维持相应pH。发酵完成后，分别测定活菌数，结果如表3所示，当发酵液pH为6时，发酵液活菌数最高，所述发酵液活菌数为4.0*1010CFU/ml。
表3不同发酵pH对屎肠球菌液体发酵活菌数影响(CFU/ml)
| pH | 菌数(CFU/mL) |
| 5.0 | 2.15*10<sup>9</sup> |
| 6.0 | 4.0*10<sup>10</sup> |
| 6.5 | 3.46*10<sup>10</sup> |
| 7.0 | 1.95*10<sup>10</sup> |
| 7.5 | 2.2*10<sup>10</sup> |
对比例1使用不同菌株发酵对比试验
所涉及菌种：植物乳杆菌Zhang-LL(CGMCC NO.6936)，罗伊氏乳杆菌RI021(CGMCCNO.4650)，副干酪乳杆菌KL1(CGMCC NO.11533)，约氏乳杆菌CGMCC NO.4926，酿酒酵母K1(CGMCC NO.6560)，屎肠球菌CGMCC NO.5092。
具体方法包括如下步骤：
1.一级种子液培养
分别取各菌种平板单菌落，接种于一级种子培养基中，装液量50mL/150mL，37℃培养16小时，得到一级种子液。
2.二级种子液培养
将步骤1培养的一级种子液分别接种于二级种子培养基中，装液量540mL/1000mL，接种量3％，37℃培养5小时，得到二级种子液。
3.液体发酵
发酵培养基灭菌结束后通冷却水保温至37℃，分别接入步骤2中的二级种子液，接种量3％，调节pH至6.0，搅拌速度150rpm，发酵开始，设定自动补充氢氧化钠维持pH。发酵2h后开始流加补料培养基(糖蜜25％+17.5％玉米浆)，补料培养基的补充体积为2L，发酵12h，分别测定活菌数，结果显示，此高密度发酵培养方法对屎肠球菌有显著效果。
表4不同菌属高密度发酵活菌数变化(CFU/ml)
| 菌种 | 菌数(CFU/mL) |
| 植物乳杆菌Zhang-LL(CGMCC NO.6936) | 5.5*10<sup>9</sup> |
| 罗伊氏乳杆菌RI021(CGMCC NO.4650) | 1.25*10<sup>9</sup> |
| 副干酪乳杆菌KL1(CGMCC NO.11533) | 3.75*10<sup>9</sup> |
| 约氏乳杆菌CGMCC NO.4926 | 8.5*10<sup>8</sup> |
| 酿酒酵母K1(CGMCC NO.6560) | 6.75*10<sup>9</sup> |
| 屎肠球菌CGMCC NO.5092 | 1.13*10<sup>10</sup> |
| 屎肠球菌CGMCC NO.12851 | 3.85*10<sup>10</sup> |
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (7)
1.一种屎肠球菌高密度发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)屎肠球菌一级种子液培养：取屎肠球菌平板单菌落，接种于一级种子培养基中，装液量50mL/150mL，37℃培养16小时，得到一级种子液；
(2)屎肠球菌二级种子液培养：将步骤1培养的屎肠球菌一级种子液接种于二级种子培养基中装液量540mL/1000mL，接种量3％，37℃培养4～8h，得到二级种子液；
(3)屎肠球菌液体发酵：发酵培养基灭菌结束后通冷却水保温至37℃，接入二级种子液，接种量3％，搅拌速度150rpm，维持pH6.0～7.5；发酵2h后开始流加补料培养基，补料培养基的补充体积为2L，发酵12h；
所述步骤(3)发酵培养基组分及其用量为：糖蜜20g/L，胰蛋白胨10g/L，牛肉浸粉20g/L，乙酸钠6.42g/L，磷酸二氢钾2g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸锰0.04g/L。
2.根据权利要求1所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，所述屎肠球菌为屎肠球菌CGMCC NO.12851。
3.根据权利要求1或2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，所述一级种子培养基组分及其用量为：牛肉浸粉5g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化钠5g/L，葡萄糖10g/L。
4.根据权利要求1或2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，所述二级种子培养基组分及其用量为：牛肉浸粉12.5g/L，蛋白胨5g/L，酵母浸粉2.5g/L，氯化钠2.5g/L，葡萄糖5g/L，糖蜜10g/L，胰蛋白胨5g/L，乙酸钠3.21g/L，磷酸二氢钾1g/L，柠檬酸氢二铵1g/L，硫酸镁0.1g/L，硫酸锰0.02g/L。
5.根据权利要求1或2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)二级种子培养时间为5-6h。
6.根据权利要求1或2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(3)液体发酵过程中维持pH 6.0-6.5。
7.根据权利要求1或2所述的高密度发酵培养方法，其特征在于，所述补料培养基由25％糖蜜、17.5％玉米浆制成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210015038.0A CN114181872B (zh) | 2022-01-07 | 2022-01-07 | 一种屎肠球菌高密度发酵培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210015038.0A CN114181872B (zh) | 2022-01-07 | 2022-01-07 | 一种屎肠球菌高密度发酵培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114181872A true CN114181872A (zh) | 2022-03-15 |
| CN114181872B CN114181872B (zh) | 2023-11-24 |
Family
ID=80545603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210015038.0A Active CN114181872B (zh) | 2022-01-07 | 2022-01-07 | 一种屎肠球菌高密度发酵培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114181872B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116200302A (zh) * | 2023-01-10 | 2023-06-02 | 太原市威尔潞威科技发展有限公司 | 屎肠球菌lv-434、微生物菌剂及其制备方法和应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102154439A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-08-17 | 宜春强微生物科技有限公司 | 粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的培养基及其检测方法 |
| CN103981117A (zh) * | 2013-12-24 | 2014-08-13 | 北京伟嘉人生物技术有限公司 | 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用 |
| CN105087420A (zh) * | 2015-03-30 | 2015-11-25 | 北京伟嘉人生物技术有限公司 | 一株饲用屎肠球菌的高密度发酵培养基及其发酵工艺 |
| CN107034165A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-08-11 | 江西省科学院微生物研究所 | 粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺 |
| CN108251334A (zh) * | 2018-01-15 | 2018-07-06 | 大连理工大学 | 一种发酵生产乳酸的微生物混合菌群及发酵方法 |
| US20190292513A1 (en) * | 2015-11-17 | 2019-09-26 | Pfizer Inc. | Media and fermentation methods for producing polysaccharides in bacterial cell culture |
-
2022
- 2022-01-07 CN CN202210015038.0A patent/CN114181872B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102154439A (zh) * | 2010-12-31 | 2011-08-17 | 宜春强微生物科技有限公司 | 粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的培养基及其检测方法 |
| CN103981117A (zh) * | 2013-12-24 | 2014-08-13 | 北京伟嘉人生物技术有限公司 | 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用 |
| CN105087420A (zh) * | 2015-03-30 | 2015-11-25 | 北京伟嘉人生物技术有限公司 | 一株饲用屎肠球菌的高密度发酵培养基及其发酵工艺 |
| US20190292513A1 (en) * | 2015-11-17 | 2019-09-26 | Pfizer Inc. | Media and fermentation methods for producing polysaccharides in bacterial cell culture |
| CN107034165A (zh) * | 2017-05-31 | 2017-08-11 | 江西省科学院微生物研究所 | 粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺 |
| CN108251334A (zh) * | 2018-01-15 | 2018-07-06 | 大连理工大学 | 一种发酵生产乳酸的微生物混合菌群及发酵方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| WEI ZHENG ET AL.: "Antimicrobial activity and safety evaluation of Enterococcus faecium KQ 2.6 isolated from peacock feces", 《BMC BIOTECHNOLOGY》, vol. 15, no. 30, pages 1 - 8 * |
| 景宇超等: "屎肠球菌CCTCCM2017191发酵培养基的优化", 《饲料工业》, vol. 39, no. 3, pages 42 - 49 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116200302A (zh) * | 2023-01-10 | 2023-06-02 | 太原市威尔潞威科技发展有限公司 | 屎肠球菌lv-434、微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN116200302B (zh) * | 2023-01-10 | 2023-10-27 | 太原市威尔潞威科技发展有限公司 | 屎肠球菌lv-434、微生物菌剂及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114181872B (zh) | 2023-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103205376B (zh) | 一株适用于发酵饲料的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN106754524B (zh) | 副干酪乳杆菌n1115培养基及其应用 | |
| CN107828698B (zh) | 一种复合菌制剂及其制备方法和应用 | |
| CN105385644B (zh) | 降解乳酸合成己酸的功能微生物菌剂及其在窖泥养护中的应用 | |
| CN107251989B (zh) | 一种包含桑黄菌的复合固态益生菌剂的制备方法 | |
| CN109666599B (zh) | 一种罗伊氏乳杆菌高密度发酵培养基及发酵方法、应用 | |
| US20240102058A1 (en) | Caproate-producing bacterium with multiple substrate utilization capabilities and its applications | |
| CN112608861B (zh) | 一种含有丁酸梭菌和乳酸片球菌的复合制剂及其制备方法和应用 | |
| CN105524866A (zh) | 提高凝结芽孢杆菌出芽率及l-乳酸产量的发酵方法 | |
| CN110923268A (zh) | 酿酒酵母y3401的培养方法及其在白酒酿造中的应用 | |
| CN114181872B (zh) | 一种屎肠球菌高密度发酵培养方法 | |
| CN107034165B (zh) | 粪肠球菌高密度发酵培养基及其发酵工艺 | |
| CN114107111B (zh) | 一种丁酸梭菌的发酵方法及其微生态制剂和应用 | |
| CN109234215B (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌低盐培养基及培养方法 | |
| CN117551592B (zh) | 乳酸菌发酵用碳源及采用该碳源的乳酸菌培养方法及应用 | |
| CN115074290A (zh) | 一种联产苯乳酸和γ-氨基丁酸的干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN109430559A (zh) | 一种用于仔猪的液体活性饲料的制备方法 | |
| CN112961797A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌高密度发酵培养基及其应用 | |
| CN116114791A (zh) | 一种含改性腐植酸钠微生态制剂及其制备方法 | |
| CN112725202A (zh) | 酿酒酵母菌与嗜酸乳杆菌共培养物、其制备方法、应用和发酵豆粕 | |
| CN116144519A (zh) | 一种丁酸梭菌的发酵方法 | |
| CN112175855B (zh) | 乳酸菌培养基及其应用与乳酸菌的培养方法 | |
| CN116286556B (zh) | 一种格氏乳球菌abml2022003、微生物发酵剂及其制备方法 | |
| CN117904009B (zh) | 适用非粮生物基碳源的枯草芽孢杆菌及其发酵生产方法 | |
| LU503658B1 (en) | High-density fermentation medium of enterococcus faecalis and fermentation process thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20230512 Address after: 100080 1901A, 19th floor, Zhongguancun building, 27 Zhongguancun Street, Haidian District, Beijing Applicant after: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd. Applicant after: HARBIN DABEI FARMING AND ANIMAL HUSBANDRY TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 100192 Room 301, 3 / F, building B-3, Zhongguancun Dongsheng Science Park, No. 66, xixiaokou Road, Haidian District, Beijing Applicant before: Beijing Qinglan Weiye Technology Co.,Ltd. Applicant before: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |