CN114181834A - 聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法 - Google Patents
聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114181834A CN114181834A CN202111438750.3A CN202111438750A CN114181834A CN 114181834 A CN114181834 A CN 114181834A CN 202111438750 A CN202111438750 A CN 202111438750A CN 114181834 A CN114181834 A CN 114181834A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polyethyleneimine
- staphylococcus aureus
- magnetic nanoparticles
- magnetic
- separating
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 title claims abstract description 41
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 31
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 29
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 17
- 239000002131 composite material Substances 0.000 claims description 11
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 20
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 abstract description 8
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 abstract description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 abstract 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000078673 foodborn pathogen Species 0.000 description 1
- 235000013611 frozen food Nutrition 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 201000007119 infective endocarditis Diseases 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Magnetic Means (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开了一种聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，属于生物技术领域。本发明方法包括磁性纳米粒子与聚乙烯亚胺进行偶联、聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物捕获样品液中的目的菌，通过外加磁场的作用，将被捕获目标菌与样品液进行分离及重悬等步骤。本发明通过磁分离捕获到的目的菌可以直接进行后续分析；与传统的细菌磁分离方法相比，本发明方法可以对食品基质中的大部分细菌进行磁分离，不仅提高了样品中金黄色葡萄球菌分离效率，同时也降低了成本。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法。
背景技术
金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性病原体，可分泌肠毒素污染食物。由金黄色葡萄球菌引起的疾病主要有菌血症、感染性心内膜炎以及骨关节、皮肤和软组织胸膜相关感染。1998年至2008年间，美国报告的食源性疾病确诊原因中约有87％是由金黄色葡萄球菌引起的。许多研究已证明肉制品是受金黄色葡萄球菌食源性感染的主要基质。因此，开发一种用于检测牛肉产品中金黄色葡萄球菌的快速筛查方法是必要的。鉴于需要建立一种高效、快速的检测方法，基于功能化的磁性纳米粒子的分离技术在致病菌检测中得到了迅速发展。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，该方法可以在低梯度磁场下从复杂基质中快速、特异性分离目的菌金黄色葡萄球菌，捕获效率高、操作简便、分离时间短。
本发明具体是通过如下技术方案实现的：
聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，包括以下步骤：
1)将磁性纳米粒子洗涤后重悬于无菌PBS溶液中；
2)将EDC和NHSS分别溶解于无菌PBS溶液，然后加入至步骤1)所得溶液，室温条件下活化1h，将活化后的磁性纳米粒子再次洗涤重悬；
3)将聚乙烯亚胺溶于无菌PBS溶液，然后加入至步骤2)活化后再次洗涤的磁性纳米粒子溶液，反应4h，所得反应产物洗涤重悬后得到聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物；
4)将步骤3)制备得到的聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物加入至含金黄色葡萄球菌的溶液中，37℃条件下以180rpm混匀孵育2min，然后插入磁力架分离3min，分离产物洗涤后重悬即得金黄色葡萄球菌-聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物。
进一步地，步骤1)所述磁性纳米粒子表面修饰羧基，其粒径为180nm。
进一步地，所述洗涤、重悬均采用无菌PBS溶液。
进一步地，所述无菌PBS溶液的浓度为0.01M，pH为7.4。
进一步地，步骤3)所述聚乙烯亚胺为支链化，其分子量为5000Da。
本发明采用支链化的聚乙烯亚胺，其富含氨基，可通过氨基与磁性纳米粒子表面的羧基相连，然后聚乙烯亚胺通过静电吸附与金黄色葡萄球菌表面的磷酸基等负电荷基团相连，从而达到本发明富集分离的目的。具体原理见图1。
进一步地，步骤1)所述磁性纳米粒子与步骤3)所述聚乙烯亚胺的质量比为4:3。
进一步地，步骤2)所述EDC和NHSS的质量比为2.90:3.25。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本方法适用于从复杂样品基质中富集分离金黄色葡萄球菌，如食品样品等。食品样品包括各类新鲜或冷冻加工后的食品材质，如新鲜蔬菜、肉类、海鲜类等产品。样品处理按照常规处理方法即可，如将样品粉碎后制成待测溶液。
2.本发明采用粒径180nm的磁性纳米粒子，主要用于基质中目标菌的快速富集，而现有技术采用粒径30nm或者50nm磁珠结合树状分子的富集方法是用于磁信号的放大。
3.本发明采用的聚乙烯亚胺是带有强正电的阳离子聚合物，相比于抗体，具有稳定性好、成本低、质量可控等优点。基于上述优点，在单次分离过程中，本发明构建的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物在成本上较免疫磁分离成本大大降低；在材料保存方面较免疫磁珠保质期也更长。
4.食品基质是多种致病菌共存的环境。本发明采用的聚乙烯亚胺是广谱的识别细菌的分子识别剂，用于分离基质中的细菌是一种通用的分离策略，可以将基质中的大多数细菌都分离出来，然后通过聚合酶链式反应(PCR)或选择性培养进行鉴别。相比之下，抗体因其只能专一的识别，从而分离出对应的目标菌，其他存在于基质中的致病菌无法鉴别，不适用于快速筛查大量未知目标菌的样本。
5.本发明合成的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物是先通过EDC和NHSS将磁性纳米粒子表面的羧基活化，然后再利用活化后的羧基与聚乙烯亚胺上的氨基进行共价结合，将聚乙烯亚胺偶联到磁性纳米粒子表面。相比于牛血清蛋白或者聚乙二醇介导偶联的方法，本发明的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物合成方法更为简单，耗时更短且成本更低。
6.本发明将支链化的聚乙烯亚胺修饰于磁性纳米粒子表面，相比于多聚赖氨酸(PLL)修饰磁性纳米粒子的方法，本发明中使用的支链化的聚乙烯亚胺分子含有更多的氨基，带有更强的正电荷，聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物可以达到更好的分离效率，且分离时间更短。
7.本发明合成的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物是通过聚乙烯亚胺表面的氨基结构与金黄色葡萄球菌表面丰富的官能团相互作用，包括静电相互作用、疏水作用和氢键等，相比于抗体或抗生素等识别分子基于特定生物标志物受体的相互作用方法，本发明的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物与细菌相互作用力更强，分离金黄色葡萄球菌的能力更强，特别适用于复杂样品中金黄色葡萄球菌的富集分离。
附图说明
图1为本发明涉及的磁分离技术的操作流程图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明所选磁性纳米粒子(180nm)购买于上海奥润有限公司。
本发明所选支链化聚乙烯亚胺(分子量5000Da)购自上海源叶生物科技有限公司。
NHSS(N-羟基丁二酰亚胺)，EDC(乙基3-(3-二甲氨基)碳二亚胺盐酸盐)等均为常规试剂，不再赘述。
本发明所用0.01M PBS配制方法为：8.0g NaCl、0.2g KCl、0.24g KH2PO4、1.44gNa2HPO4溶解于800mL蒸馏水中，用5M NaOH调整pH至7.4，再定容至1000mL即得。
实施例1
1.聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物合成，按照如下步骤制备：
(1)吸取1mL磁性纳米粒子(10mg/mL)，加入到9mL pH 7.4的无菌的PBS溶液中，然后在外加磁场的作用下，对磁性纳米粒子进行洗涤，重复3次，将洗涤后的磁性纳米粒子重悬于9mL无菌的PBS溶液中；
(2)称取2.9mg EDC溶于290μL无菌的PBS中，称取3.25mg NHSS溶于325μL无菌的PBS中，然后将溶解后的EDC和NHSS加入到洗涤过的磁性纳米粒子溶液中，再加入9mL无菌PBS，室温活化1h；
(3)将活化后磁性纳米粒子用无菌的PBS洗涤3次，重悬于9mL无菌的PBS溶液中；
(4)称取聚乙烯亚胺7.5mg，溶解到750μL无菌的PBS溶液中，然后加入到活化后的磁性纳米粒子溶液中，反应4h，然后用无菌的PBS洗涤3次，重悬于10mL无菌的PBS溶液中，得到终浓度为1mg/mL的聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物，用于富集分离金黄色葡萄球菌。
2.富集捕获：取1mL待测样品溶液，加入60μg聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物，置于混匀仪上，以180rpm的转速37℃孵育2min，形成金黄色葡萄球菌-聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物；将离心管插入磁力架分离3min，磁力分离后，用无菌的PBS溶液清洗后重悬即得金黄色葡萄球菌-聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物。
实施例2
富集效果实验
(1)取1mL浓度为104CFU/mL的金黄色葡萄球菌1.5mL无菌离心管中，12000rpm离心5min，弃上清，用等体积无菌PBS溶液重悬。
(2)分别设置本发明技术方案组：磁性纳米粒子、聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子组富集目的菌。
(3)磁分离后，将上清液转入无菌离心管中，而分离得到的金黄色葡萄球菌的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子则用PBS清洗两次，混合均匀，并用1mL无菌PBS溶液重悬金黄色葡萄球菌-聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物。
(4)捕获率计算：将各组富集的目的菌重悬液进行梯度稀释后，用平板对每个梯度计数，通过捕获效率公式计算目标菌的捕获效率，每次实验重复三次。各组捕获效率的计算公式如下：[被富集吸附的菌落总数/(上清液中菌落总数+被富集吸附的菌落总数)]×100％。
所述各组富集捕获目的菌的方案如下：
a.本发明技术方案组(聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子)富集捕获目的菌方案如实施例1，具体如下：将60μg聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物加入到含有目标菌离心管中，置于混匀仪上，以180rpm的转速37℃孵育2min。将离心管置于常规磁力架分离3min。
b.磁性纳米粒子组富集捕获目的菌方案具体如下：
将60μg磁性纳米粒子加入到含有目标菌的离心管中，置于混匀仪上，以180rpm的转速37℃孵育2min。最后将离心管置于常规磁力架分离3min。
各组捕获效率如表1所示。
表1
| 磁性纳米粒子 | 聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子 | |
| 捕获效率/％ | 31.2 | 97.4 |
实验结果表明，聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子组的捕获效率明显高于磁性纳米粒子组捕获效率，这说明材料与金黄色葡萄球菌的相互作用主要是依靠聚乙烯亚胺的强正电特性，因此在短时间内就能分离富集较多的目标菌，说明聚乙烯亚胺分子用来捕获目标菌具有较好的效果。
实施例3
将无菌肉类粉碎，按常规方式制成待测样品溶液，加入金黄色葡萄球菌调节菌落浓度至104CFU/mL备用。
将制备好的聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子(60μg)分别加入到样品溶液中，置于混匀仪上，以180rpm的转速37℃孵育2min。置于常规磁力架上磁分离3min。将上清液倒入无菌离心管中，而分离出来捕获有金黄色葡萄球菌-聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物则用无菌PBS清洗两次，用1mL无菌PBS重悬并混合均匀。捕获率如实施例2方法获得，其余同实施例2。结果见表2，表明本方案能高效富集分离样品中的金黄色葡萄球菌。
实施例4
无菌蔬菜粉碎，按常规方式制成待测样品溶液，加入金黄色葡萄球菌调节菌落浓度至104CFU/mL。其余同实施例3。
表2
| 实际样品 | 聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子组捕获效率/％ |
| 实施例3 | 80.5 |
| 实施例4 | 87.3 |
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本申请的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本申请进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本申请的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换，其均应涵盖在本申请请求保护的技术方案范围当中。
Claims (7)
1.聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将磁性纳米粒子洗涤后重悬于无菌PBS溶液中；
2)将EDC和NHSS分别溶解于无菌PBS溶液，然后加入至步骤1)所得溶液，室温条件下活化1h，将活化后的磁性纳米粒子再次洗涤重悬；
3)将聚乙烯亚胺溶于无菌PBS溶液，然后加入至步骤2)活化后再次洗涤的磁性纳米粒子溶液，反应4h，所得反应产物洗涤重悬后得到聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物；
4)将步骤3)制备得到的聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子复合物加入至含金黄色葡萄球菌的溶液中，37℃条件下以180rpm混匀孵育2min，然后插入磁力架分离3min，分离产物洗涤后重悬即得金黄色葡萄球菌-聚乙烯亚胺-磁性纳米粒子复合物。
2.根据权利要求1所述聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤1)所述磁性纳米粒子表面修饰羧基，其粒径为180nm。
3.根据权利要求1所述聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述洗涤、重悬均采用无菌PBS溶液。
4.根据权利要求1或3所述聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，所述无菌PBS溶液的浓度为0.01M，pH为7.4。
5.根据权利要求1所述聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤3)所述聚乙烯亚胺为支链化，其分子量为5000Da。
6.根据权利要求1所述聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤1)所述磁性纳米粒子与步骤3)所述聚乙烯亚胺的质量比为4:3。
7.根据权利要求1所述聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于，步骤2)所述EDC和NHSS的质量比为2.90:3.25。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111438750.3A CN114181834B (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111438750.3A CN114181834B (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114181834A true CN114181834A (zh) | 2022-03-15 |
| CN114181834B CN114181834B (zh) | 2024-03-29 |
Family
ID=80602964
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111438750.3A Active CN114181834B (zh) | 2021-11-29 | 2021-11-29 | 聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114181834B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114806882A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-07-29 | 南昌大学第一附属医院 | 一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒及制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4935147A (en) * | 1985-12-20 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
| CN106987582A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-07-28 | 南昌大学 | 一种新型快速分离金黄色葡萄球菌的方法 |
| CN107557428A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-09 | 苏州大学 | 一种磁纳米颗粒及其制备方法与在病原菌检测中的应用 |
| CN107941779A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-04-20 | 中国人民解放军总医院 | 基于万古霉素修饰的金壳磁性纳米颗粒和纳米标签表面增强拉曼散射检测细菌的方法 |
| CN109741896A (zh) * | 2019-01-07 | 2019-05-10 | 北京大学 | 用于细菌广谱性捕获和活菌释放的功能化磁纳米颗粒 |
| CN109813701A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-05-28 | 徐州医科大学附属医院 | 一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法 |
| US20200033340A1 (en) * | 2016-11-29 | 2020-01-30 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Bacteriophage-based electrochemical bacterial sensors, systems, and methods |
-
2021
- 2021-11-29 CN CN202111438750.3A patent/CN114181834B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4935147A (en) * | 1985-12-20 | 1990-06-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Particle separation method |
| US20200033340A1 (en) * | 2016-11-29 | 2020-01-30 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Bacteriophage-based electrochemical bacterial sensors, systems, and methods |
| CN106987582A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-07-28 | 南昌大学 | 一种新型快速分离金黄色葡萄球菌的方法 |
| CN107941779A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-04-20 | 中国人民解放军总医院 | 基于万古霉素修饰的金壳磁性纳米颗粒和纳米标签表面增强拉曼散射检测细菌的方法 |
| CN107557428A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-09 | 苏州大学 | 一种磁纳米颗粒及其制备方法与在病原菌检测中的应用 |
| CN109741896A (zh) * | 2019-01-07 | 2019-05-10 | 北京大学 | 用于细菌广谱性捕获和活菌释放的功能化磁纳米颗粒 |
| CN109813701A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-05-28 | 徐州医科大学附属医院 | 一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CHEN BAOLI ET AL.,: ""Synthesis of PEI-Functionalized Magnetic Nanoparticles for Capturing Bacteria"" * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114806882A (zh) * | 2022-05-18 | 2022-07-29 | 南昌大学第一附属医院 | 一种快速富集分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的试剂盒及制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114181834B (zh) | 2024-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Stevens et al. | Bacterial separation and concentration from complex sample matrices: a review | |
| CN114460288A (zh) | 广谱性分离细菌的功能化磁珠制备方法 | |
| CN109741896B (zh) | 用于细菌广谱性捕获和活菌释放的功能化磁纳米颗粒 | |
| CN114181834B (zh) | 聚乙烯亚胺修饰的磁性纳米粒子快速富集分离金黄色葡萄球菌的方法 | |
| CN114480199A (zh) | 一种通用型分离细菌的磁性纳米材料制备方法 | |
| CN103293297A (zh) | 鼠伤寒沙门氏菌的快速分离方法 | |
| CN106947756A (zh) | 快速磁分离蜡样芽孢杆菌的方法 | |
| CN106987583A (zh) | 一种新型的分离败血症中革兰氏阳性病原菌的方法革兰氏阳性病原菌 | |
| CN113881790A (zh) | 磁性四氧化三铁@适配体及其与荧光试纸条联合在检测食源性致病菌方面的应用 | |
| CN114774508A (zh) | 一种磁珠富集金黄色葡萄球菌的方法 | |
| CN103275902B (zh) | 一种富集分离幽门螺杆菌的方法 | |
| CN106967709A (zh) | 抗生素修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法 | |
| CN101354938B (zh) | 分离用磁性颗粒及其制备方法和应用 | |
| CN106987581A (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌快速磁分离的方法 | |
| CN115010184A (zh) | 一种基于免疫磁珠的金黄色葡萄球菌重组酶聚合酶扩增检测方法 | |
| CN106957841A (zh) | 万古霉素结合聚乙二醇修饰的磁性纳米粒子快速富集分离单增李斯特菌的方法 | |
| CN106987582A (zh) | 一种新型快速分离金黄色葡萄球菌的方法 | |
| CN114807294A (zh) | 一种快速富集分离单核细胞增生李斯特氏菌的检测试剂盒及制备方法 | |
| CN111206069B (zh) | 一种利用纳米免疫磁珠快速捕获化妆品中三种致病菌的方法 | |
| CN115058359A (zh) | 一种磁分离富集蜡样芽胞杆菌的方法 | |
| CN106978412A (zh) | 万古霉素结合牛血清白蛋白包被的磁珠分离金黄色葡萄球菌的新方法 | |
| CN106916809A (zh) | 败血症中革兰氏阴性病原菌分离的新方法 | |
| CN114369551A (zh) | 一种快速分离两歧双歧杆菌的磁性纳米粒子的制备方法及应用 | |
| CN103320422B (zh) | 空肠弯曲菌的快速分离方法 | |
| CN116773808A (zh) | 一种伍尔夫型苯硼酸功能化磁珠及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |