CN114174339A - 高亲和力抗cd3抗体及其产生和使用方法 - Google Patents

高亲和力抗cd3抗体及其产生和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了对CD3具有高亲和力和所期望的可开发性概况的抗体及其抗原结合片段，以及它们的制备和使用方法。

Description

高亲和力抗CD3抗体及其产生和使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2019年6月7日提交的美国临时申请号62/858,949的优先权，该临时申请的内容以全文引用的方式并入。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并且据此以全文引用的方式并入。所述ASCII副本创建于2020年6月3日，被命名为1160430o001813.txt，大小为92,322字节。
技术领域
本发明尤其涉及抗分化簇3(CD3)抗体(包括多特异性抗体及其功能片段)、以及其鉴定、分离、制备和使用的方法和试剂。
背景技术
细胞增殖性障碍诸如癌症的特征在于细胞亚群的不受控制生长。它们是发达国家死亡的主要原因，并且也是发展中国家死亡的第二主要原因，预计到2030年每年新的癌症病例总数将增加到2360万例。国家癌症研究所(National Cancer Institute)估计在美国将诊断出近200万新的癌症病例，并且在2018年将有大于60万美国人死于癌症。因此，癌症护理代表着重大且日益增加的社会负担。
使用T细胞的细胞毒性能力通过使用CD3靶向双特异性抗体来杀死肿瘤细胞的想法可追溯到1980年代中期。(Staerz等人，Nature 1985 314:628-32)。迄今为止开发的许多双特异性抗体含有用于T细胞募集和活化的对CD3具有特异性的第一结合位点、以及针对靶向疾病相关抗原(诸如由肿瘤细胞产生的抗原)的第二结合位点。CD3双特异性抗体通过与在肿瘤上表达的其第二靶蛋白结合来触发T细胞上的CD3表面受体，使得可用的T细胞可以通过CD3双特异性抗体的桥接而与靶向表达细胞结合，而不管其T细胞受体的肽/MHC特异性如何。(参见，例如，Bassan,2012,Blood 120:5094-95)。使用CD3双特异性抗体桥接T细胞和肿瘤细胞可以诱导晚期恶性肿瘤的显著消退，并且在一些情况下导致完全缓解。目前，超过25种不同的CD3双特异性抗体处于通过分别靶向CD19、CD20、CD33和CD123、或者EpCAM、HER2、PSMA和CEA来治疗血液恶性肿瘤或实体癌症的临床开发中。(参见，例如，Liu等人，Front Immunol 2017 8:38)。
虽然对于治疗和检测癌症而言双特异性抗体已显示出优于单特异性抗体的显著益处，但是双特异性抗体的广泛商业应用由于缺乏有效/低成本生产方法、双特异性多肽缺乏稳定性以及在人体中缺乏长的半衰期而受到阻碍。在过去几十年中，已经开发出产生双特异性单克隆抗体的各种方法。然而，针对所关注的靶标具有精细选择性和高效力的许多候选双特异性抗体在下游开发和临床功效活性方面经常存在问题，包括多特异性结合(或“多特异性”)；脱靶结合；非特异性结合；在真核宿主细胞(诸如哺乳动物宿主细胞和酵母细胞)中的表达水平或表达谱不佳；差的化学和物理特性，诸如在储存期间的差的稳定性(例如，差/低的“保质期”稳定性)、差的(低)溶解度、差的(高)粘度、聚集倾向等；以及不良的临床和生物生理特性，诸如药代动力学特性差、药效学特性差、体内清除率快或差、循环半衰期短，其中有一些导致其开发终止。
存在某些技术和测定用于评估在下游开发活动的背景下所发现抗体(“发现后抗体”)的许多上述可开发性特征，诸如CIC、SIC、BVP-ELISA、TMA和其他测定；然而，此类测定通常不适合在早期抗体发现平台中的高通量形式。此外，对这些属性的评估通常需要毫克至克量的蛋白质，因此经常对可以实际考虑用于开发的先导物的数量施加事实上的限制，并且因此降低了项目成功的可能性。因此，经常消耗大量的资源，试图修复在开发后期阶段中几乎没有可用的备份的表现不佳的先导物候选物。
多种抗CD3抗体在本领域中是已知的，包括单克隆抗体和双特异性抗体形式。参见例如美国专利号7,262,276；7,635,472；7,862,813；9,587,021；和10,174,124。然而，许多这些CD3抗体具有可开发性问题(诸如上文概述的那些)和/或特定多特异性形式或嵌合抗原受体(CAR)形式或递送方法等对CD3的结合亲和力不够高。因此，在双特异性抗体领域中存在对抗CD3抗体的未满足的需求，所述抗CD3抗体显示出所期望的可开发性概况并且对用于癌症治疗的CD3具有高亲和力。
发明内容
本公开涉及抗CD3抗体及其使用方法，所述抗体对CD3具有特别高的亲和力，例如单价KD为约250皮摩尔或更小。
本公开提供了包含轻链可变区中的互补决定区(CDR)CDRL3的抗CD3抗体和/或抗原结合片段，其中所述CDRL3包含氨基酸序列X1QSYFRRT(SEQ ID NO:1)，其中X1是K、A、T或V。在一些实施方案中，X1是A、T或V。在某些实施方案中，CDRL3包含AQSYFRRT(SEQ ID NO:2)；TQSYFRRT(SEQ ID NO:3)；VQSYFRRT(SEQ ID NO:4)；或KQSYFRRT(SEQ ID NO:5)。
在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或抗原结合片段还包含重链可变区中的互补决定区(CDR)CDRH3，其中所述CDRH3包含氨基酸序列X3RDAYGX4YFYDV(SEQ ID NO:6)，其中X3是A或V，并且X4是R或Q。在某些实施方案中，X3是A。
在其他实施方案中，抗CD3抗体和/或抗原结合片段还包含轻链可变区中的互补决定区(CDR)CDRL1，其中所述CDRL1包含氨基酸序列KSSQLLNARTX5KNYLA(SEQ ID NO:7)，其中X5是G、M、N或R。在某些实施方案中，X5是G或R。在一些实施方案中，CDRL1可以包含KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)或KSSQSLLNARTRKNYLA(SEQ ID NO:9)。
在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或抗原结合片段还包含轻链可变区中的互补决定区(CDR)CDRL2，其中所述CDRL2包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:10)或WASTRSS(SEQID NO:11)。
在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或抗原结合片段还包含重链可变区中的互补决定区(CDR)CDRH1，其中所述CDRH1包含氨基酸序列FNX6KDYYX7H(SEQ ID NO:12)，其中X6是I、N或V，并且X7是M或I。在某些实施方案中，X6是I和/或X7是M。在某些实施方案中，CDRH1包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)。
在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或抗原结合片段还包含重链可变区中的互补决定区(CDR)CDRH2，其中CDRH2包含氨基酸序列WIDLX8NANTVYDX9KX10QG(SEQ ID NO:14)，其中X8是E或N，X9是A、H或T，并且X10是F或L。在某些实施方案中，X8是E和/或X9是A和/或X10是F。在某些实施方案中，CDRH2包含WIDLENANTIYDAKFQG(SEQ ID NO:15)或WIDLENANTIYDAKFQG(SEQ ID NO:16)。
在一些实施方案中，本公开提供了包含CDRL1、CDRL2和CDRL3中的一者或多者的抗CD3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，这样的抗体还包含CDRH1、CDRH2和CDRH3。
在一些实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段包含的结合亲和力(KD)为约500pM或更小。在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或其抗原结合片段包含的结合亲和力(KD)为约250pM或更小。在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或其抗原结合片段包含的结合亲和力(KD)为约100pM或更小。
此外，本公开整体涉及抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含：a.可变重(VH)链多肽，所述可变重链多肽包含：i.FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH CDR1(CDRH1)；ii.WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH CDR2(CDRH2)；iii.ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH CDR3(CDRH3)；和/或b.可变轻(VL)链多肽，所述可变轻链多肽包含：i.KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL CDR1(CDRL1)；ii.WASTRX1S(SEQ ID NO:133)的VL CDR2(CDRL2)；和iii.X2QSYFRRT(SEQ ID NO:134)的VL CDR3(CDRL3)；X1和X2各自独立地是任何氨基酸。在一些实施方案中，X1是E或S；和/或X2是K或V。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的CDRL2；和/或SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:4的CDRL3。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段选自由以下各项组成的组：a.抗CD3抗体或抗原结合抗体片段：其包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH链CDR1(CDRH1)、WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ IDNO:15)的VH链CDR2(CDRH2)和ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH链CDR3(CDRH3)；和/或KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL链CDR1(CDRL1)、WASTRES(SEQ ID NO:10)的VL链CDR2(CDRL2)和KQSYFRRT(SEQ ID NO:5)的VL链CDR3(CDRL3)；以及b.抗CD3抗体或抗原结合抗体片段：其包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH链CDR1(CDRH1)、WIDLENANTVYDAKFQG(SEQID NO:15)的VH链CDR2(CDRH2)和ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH链CDR3(CDRH3)；和/或KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL链CDR1(CDRL1)、WASTRSS(SEQ ID NO:11)的VL链CDR2(CDRL2)和VQSYFRRT(SEQ ID NO:4)的VL链CDR3(CDRL3)；
在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18或SEQID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQID NO:17具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；和VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段以约500pM或更小、约450pM或更小、约400pM或更小、约350pM或更小、约300pM或更小、约250pM或更小、约200pM或更小、约150pM或更小或者约100pM或更小的解离常数(KD)结合至CD3，任选地其中所述CD3是人和/或食蟹猴，进一步任选地，其中所述结合亲和力通过表面等离子共振来测量。在一些实施方案中，其中所述KD是单价KD，和/或其中所述KD使用所述抗CD3抗体或抗体片段的scFv片段来测量。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段引发T细胞活化或T细胞杀伤，同时显示出将引发细胞因子产量到能够诱导细胞因子释放综合征的水平的倾向降低。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包括多特异性抗体。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包括双特异性抗体。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包括scFv。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含与肿瘤学靶标特异性地结合的至少第二抗原结合结构域；免疫肿瘤学靶标；神经退行性疾病靶标；自身免疫性障碍靶标；感染疾病靶标；代谢疾病靶标；认知障碍靶标；血脑屏障靶标；或血液疾病靶标。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含与选自由以下各项组成的组的抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域：17-IA、4-1BB、4Dc、6-酮基-PGFla、8-异-PGF2a、8-氧代-dG、Al腺苷受体、A33、ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RUB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM 15、ADAM 17/T ACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-l-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗剂、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、青蒿琥酯、抗-Id、ASPARTIC、心房钠尿因子、av/b3整联蛋白、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴细胞刺激剂(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bel、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BFM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3成骨素、BMP-4BMP-2b、BMP-5、BMP-6Vgr-1、BMP-7(OP-1)、BMP-8(BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II(BRK-3)、BMP、b-NGF、BOK、铃蟾肽、骨源性神经营养因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、补体因子3(C3)、C3a、C4、C5、C5a、CIO、CA125、CAD-8、降钙素、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌相关抗原、组织蛋白酶A、组织蛋白酶B、组织蛋白酶C/DPPI、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V、组织蛋白酶X/Z/P、CBL、CCI、CCK2、CCL、CCL1、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CDlla、CDllb、CDllc、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33(p67蛋白)、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80(B7-1)、CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、CFTR、cGMP、CINC、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)毒素、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)毒素、CKb8-l、CLC、CMV、CMV UL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、CX3CR1、CXCL、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、细胞角蛋白肿瘤相关抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰变加速因子、des(l-3)-IGF-I(大脑IGF-1)、Dhh、地高辛、DNAM-1、DNA酶、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、EN A、内皮素受体、脑啡肽酶、eNOS、Eot、嗜酸性粒细胞趋化因子l、EpCAM、肝配蛋白B2/EphB4、EPO、ERCC、E-选择素、ET-1、因子Ila、因子VII、因子VIIIc、因子IX、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、Fas、FcRl、FEN-1、铁蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纤维蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促卵泡激素、Fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas 6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3(Vgr-2)、GDF-5(BMP-14、CDMP-1)、GDF-6(BMP-13、CDMP-2)、GDF-7(BMP-12、CDMP-3)、GDF-8(肌肉生长抑制素)、GDF-9、GDF-15(MIC-1)、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-αl、GFR-α2、GFR-α3、GITR、胰高血糖素、Glut 4、糖蛋白Ilb/IIIa(GP Ilb/IIIa)、GM-CSF、gpl30、gp72、GRO、生长激素释放因子、半抗原(NP-cap或NIP-cap)、HB-EGF、HCC、HCMV gB包膜糖蛋白、HCMV)gH包膜糖蛋白、HCMV UL、造血生长因子(HGF)、Hep B gpl20、类肝素酶、Her2、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)、Her4(ErbB-4)、单纯疱疹病毒(HSV)gB糖蛋白、HSV gD糖蛋白、HGFA、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV gpl20、HIV IIIB gp 120V3环、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFGPEM、HRG、Hrk、人心脏肌球蛋白、人巨细胞病毒(HCMV)、人生长激素(HGH)、HVEM、1-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受体、IgE、IGF、IGF结合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-18R、IL-23、干扰素(INF)-α、INF-β、IFN-γ、抑制素、iNOS、胰岛素A链、胰岛素B链、胰岛素样生长因子1、整联蛋白α2、整联蛋白α3、整联蛋白α4、整联蛋白α4/βl、整联蛋白α4/β7、整联蛋白α5(αV)、整联蛋白α5/βl、整联蛋白α5/β3、整联蛋白α6、整联蛋白βl、整联蛋白β2、干扰素γ、IP-10、1-TAC、JE、激肽释放酶2、激肽释放酶5、激肽释放酶6、激肽释放酶11、激肽释放酶12、激肽释放酶14、激肽释放酶15、激肽释放酶LI、激肽释放酶L2、激肽释放酶L3、激肽释放酶L4、KC、KDR、角质形成细胞生长因子(KGF)、层粘连蛋白5、LAMP、LAP、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bpl、LBP、LDGF、LECT2、Lefty、路易斯Y抗原、路易斯Y相关抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-选择素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面活性物质、促黄体生成激素、淋巴毒素β受体、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金属蛋白酶、MGDF受体、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、粘蛋白(Mucl)、MUC18、缪勒管激素抑制物质、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-钙粘蛋白、NCA90、NCAM、NCAM、脑啡肽酶、神经营养因子-3、神经营养因子-4或神经营养因子-6、神经秩蛋白、神经元生长因子(HGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、pl50、p95、PADPr、甲状旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-钙粘蛋白、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、PIGF、PLP、PP14、胰岛素原、松弛素原、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、松弛素A链、松弛素B链、肾素、呼吸道合胞病毒(RSV)F、RSV Fgp、Ret、类风湿因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T细胞受体(例如，T细胞受体α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睾丸PLAP样碱性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-β泛特异性、TGF-βRI(ALK-5)、TGF-βRII、TGF-βRllb、TGF-βRIII、TGF-βl、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、胸腺Ck-1、促甲状腺激素、Tie、TIMP、TIQ、组织因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAIL Rl Apo-2、DR4)、TNFRSFIOB(TRAIL R2DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C(TRAIL R3DcRl、LIT、TRID)、TNFRSF10D(TRAIL R4 DcR2、TRUNDD)、TNFRSF11A(RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSFllB(OPG OCIF、TR1)、TNFRSF12(TWEAK RFN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFF R)、TNFRSF14(HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITRAITR)、TNFRSF19(TROY TAJ、TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSFIA(TNF RI CD120a、p55-60)、TNFRSFIB(TNF RIICD120b、p75-80)、TNFRSF26(TNFRH3)、TNFRSF3(LTbR TNF RIII、TNFC R)、TNFRSF4(OX40ACT35、TXGP1 R)、TNFRSF5(CD40 p50)、TNFRSF6(Fas Apo-1、APT1、CD95)、TNFRSF6B(DcR3M68、TR6)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF9(4-1BB CD137、ILA)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF22(DcTRAIL R2 TNFRH2)、TNFRST23(DcTRAIL Rl TNFRH1)、TNFRSF25(DR3 Apo-3、LARD、TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10(TRAIL Apo-2配体、TL2)、TNFSF11(TRANCE/RANK配体ODF、OPG配体)、TNFSF12(TWEAK Apo-3配体、DR3配体)、TNFSF13(APRIL TALL2)、TNFSF13B(BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14(LIGHT HVEM配体、LTg)、TNFSF15(TLIA/VEGI)、TNFSF18(GITR配体AITR配体、TL6)、TNFSFIA(TNF-a连接素、DIF、TNFSF2)、TNFSF1B(TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3(LTb TNFC、p33)、TNFSF4(OX40配体gp34、TXGP1)、TNFSF5(CD40配体CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6(Fas配体Apo-1配体、APT1配体)、TNFSF7(CD27配体CD70)、TNFSF8(CD30配体CD153)、TNFSF9(4-1BB配体CD137配体)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAIL R、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、转移受体、TRF、Trk、TROP-2、TSG、TSLP、肿瘤相关抗原CA 125、表达路易斯Y相关碳水化合物的肿瘤相关抗原、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白-2、VEFGR-1(flt-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VFM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整联蛋白、血管性血友病因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)、TIM-3(T细胞免疫球蛋白和粘蛋白-3)、激素受体和生长因子。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含与选自以下项的抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域：BCMA、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因3)、TIM-3、CD20、CD2、CD19、Her2、EGFR、EpCAM、FcyRIIIa(CD16)、FcyRIIa(CD32a)、FcyRIIb(CD32b)、FcyRI(CD64)、Toll样受体(TLR)、TLR4、TLR9、细胞因子、IL-2、IL-5、IL-13、IL-6、IL-17、IL-12、IL-23、TNFa、TGFb、细胞因子受体、IL-2R、趋化因子、趋化因子受体、生长因子、VEGF和HGF。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段被包含在嵌合抗原受体(CAR)中，所述嵌合抗原受体任选地包含至少一个跨膜结构域、和来自T细胞受体任选地CD3ζ亚基的至少一个细胞内结构域、以及至少一个共刺激结构域。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含scFv2-Fc2和/或scFv-IgG。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含IgG恒定结构域。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含与抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域，其中所述抗体包含选自以下项的多特异性形式：Fab-Fc-scFv、“开瓶器(bottle-opener)”、Mab-scFv、Mab-Fv、双scFv、中心Fv、中心scFv、单臂中心scFv、Fab-Fab、Fab-Fv、mAb-Fv、mAb-Fab、DART、BiTE、共同轻链-IgG、TandAb、交叉-Mab、SEED、BEAT、TrioMab和DuetMab。此外，本公开整体涉及编码如本文所述的抗体或抗原结合抗体片段的分离的或重组的核酸序列。此外，本公开整体涉及包含如本文所述的分离的或重组的核酸序列的表达载体。此外，本公开整体涉及用核酸序列转染、转化或转导的宿主细胞，任选地哺乳动物或酵母细胞，或者含有如本文所述的核酸序列的载体。
此外，本公开整体涉及包含如本文所述的抗体或抗原结合抗体片段的药物组合物；以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
此外，本公开整体涉及一种治疗需要治疗的哺乳动物的障碍的方法，其中所述障碍包括增殖性障碍、肿瘤障碍、免疫肿瘤障碍、神经障碍、神经退行性疾病或自身免疫性疾病，所述方法包括施用有效量的一种或多种如本文所述的抗体或抗体片段，或者表达如本文所述的抗体或抗体片段中的一者的宿主细胞，任选地免疫细胞，进一步任选地，T或NK细胞。在一些实施方案中，所述方法还包括向所述哺乳动物施用另外的治疗剂，任选地其中所述哺乳动物是人。
此外，本公开整体涉及抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含Ab1-Ab50中的任何一者或多者的一个或多个CDR。此外，本公开整体涉及抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含一个或多个VH和/或VL链，所述VH和/或VL链包含选自表4中的氨基酸序列。
具体实施方式
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。如本文所用，术语“约”当参考特定列举的数值使用时意指所述值可以与所列举值相差不超过1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101以及介于其之间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
应当理解，本文所述的本发明的方面和实施方案包括“包含(comprising)”方面和实施方案、“由”方面和实施方案“组成(consisting)”和“基本上由”方面和实施方案“组成(consisting essentially of)”。
本文提供了对CD3具有高亲和力(KD)的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗CD3的KD为约500pM或更小。在一些实施方案中，KD为约250pM或更小。在一些实施方案中，KD为约100pM或更小。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段以约500pM或更大、约500pM或更小、约470pM或更小、约450pM或更小、约400pM或更小、约350pM或更小、约300pM或更小、约250pM或更小、约200pM或更小、约150pM或更小或者约100pM或更小的解离常数(KD)结合至CD3，任选地其中所述CD3是人和/或食蟹猴，进一步任选地，其中所述结合亲和力通过表面等离子共振来测量。在一些实施方案中，所述KD是单价KD，和/或其中所述KD使用所述抗CD3抗体或抗体片段的scFv片段来测量。在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或其抗原结合片段包含某些CDR序列基序。在一些实施方案中，CDR序列基序包含含有SEQ ID NO:1的CDRL3。在一些实施方案中，抗CD3抗体具有有利的可开发性概况。
示例性高亲和力抗CD3抗体及其抗原结合片段
“分化簇3”或“CD3”通常是指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如，人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠))的任何天然CD3，除非另有说明，包括例如CD3ε链、CD3γ链、CD3α链和CD3β链。所述术语涵盖“全长”、未处理的CD3(例如，未处理或未经修饰的CD3ε或CD3γ)、以及由在细胞中的处理产生的任何形式的CD3。所述术语还涵盖CD3的天然存在的变体，包括例如剪接变体或等位基因变体。CD3包括例如长度为207个氨基酸的人CD3ε蛋白(NCBI RefSeq No.NP—000724)和长度为182个氨基酸的人CD3γ蛋白(NCBI RefSeq No.NP—000064)。所述术语还指人或食蟹猴CD3ε蛋白，它们的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:131和132(表7)。“CD3 N27”和“CD3 N13”分别是指CD3的N末端27个氨基酸和N末端13个氨基酸，并且任选地含有对其进行的化学修饰或缀合。
“抗CD3抗体”是指能够与CD3结合的抗体或其抗原结合片段，例如CD3ε和/或CD3γ，例如具有足够的亲和力和/或特异性使得抗体可用作靶向CD3的诊断剂和/或治疗剂的人CD3ε和/或CD3γ。本文所述的抗CD3抗体及其抗原结合片段对CD3具有特别高的亲和力。
术语“高亲和力”是指对CD3具有结合亲和力(以KD表示)的那些抗体。在一些实施方案中，KD为约5×10-10M或更小。在一些实施方案中，KD为约2.5×10-10M或更小。在一些实施方案中，KD为约1×10-11M或更小。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段以约500pM或更大、约500pM或更小、约470pM或更小、约450pM或更小、约400pM或更小、约350pM或更小、约300pM或更小、约250pM或更小、约200pM或更小、约150pM或更小或者约100pM或更小的解离常数(KD)结合至CD3，任选地其中所述CD3是人和/或食蟹猴，进一步任选地，其中所述结合亲和力通过表面等离子共振来测量。在一些实施方案中，通过表面等离子体共振(例如BIACORE)、使用例如FORTEBIO Octet HTX仪器(Pall Life Sciences)的生物层干扰量度法、或溶液亲和性ELISA来测量KD。在一些实施方案中，使用抗CD3抗体的scFv片段测量KD。在一些实施方案中，测量单价KD。
在一些实施方案中，抗CD3抗体以小于约500pM(5×10-10M)的解离常数(KD)结合至CD3。在一些实施方案中，抗CD3抗体以小于约250pM的解离常数(KD)结合至CD3。在一些实施方案中，抗CD3抗体以约100pM的解离常数(KD)结合至CD3。在某些实施方案中，抗CD3抗体结合至CD3的表位，所述表位在来自不同物种(例如人和食蟹猴)交叉反应性的CD3中是保守的。
KD可以使用技术人员熟知的测定法来测量，所述测定法包括但不限于：生物层干涉法(BLI)、表面等离子共振(SPR)、基于溶液平衡的动力学排除测定法、KinExA直接关联、使用FORTEBIO仪器和试剂(诸如Octet RED 384和基于HTX BLI的仪器)的测定法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)或放射免疫测定法(RIA)。KD测量可以利用完整的抗CD3抗体或其抗原结合片段(例如，scFv)，使用
Figure BDA0003339538060000121
表面等离子共振测定法来进行。
虽然高亲和力CD3结合剂与触发或促成患者的细胞因子释放综合征(CRS)相关，但是抗体对CD3的结合亲和力并不是CRS的唯一决定因素。例如，以双特异性形式使用的高亲和力抗CD3抗体(～低个位数nM KD)成功展示了对具有有限细胞因子(IFNγ、IL-6、TNFα)释放的靶标肿瘤细胞的有效T细胞毒性(参见，例如，Mol Cancer Ther.2016年9月；15(9)；2155-65和APTEVO AACR关于APOV436的临床前研究的海报，2018年4月16日提交)。不受理论束缚，高亲和力抗CD3抗体可以特别有益于在具有某些形式(例如，scFv2-Fc2或scFv-IgG或其他类似聚合形式)的多特异性抗体或嵌合抗原受体(各种组件以不同的顺序组装)中提供特异性靶向和最小CRS风险。
术语“细胞因子释放综合征”(或“CRS”)是指在细胞因子与免疫细胞之间的促炎性正反馈环，导致免疫系统内的细胞过度或不受控制的促炎性细胞因子释放(参见例如Lee等人，Blood,第124卷,第188-195页(2014)以及Tisoncik等人,Microbiol Mol Biol Rev,第76卷,第16-32页(2012))。在刺激和活化时，T细胞释放一系列细胞因子至产生不利的不同程度和严重性的生物学/生理学效应的水平和程度，包括特征在于例如泛红(发红)、肿胀或水肿、灼热(发热)、痛(疼痛)和“机能丧失”(功能丧失)的急性炎症。当定位于皮肤或其他组织中时，生物学/生理学效应包括增加的血流，使血管白细胞和血浆蛋白能够到达损伤的血管外部位，增加局部温度和产生疼痛、组织水肿和血管外压力以及组织灌注减少。其他生物学/生理学效应包括器官和系统功能障碍，诸如心功能障碍、成人呼吸窘迫综合征、神经毒性、肾和/或肝衰竭和弥散性血管内凝血。在T细胞刺激时，IFNγ、IL-6、TNFα、TGFβ、IL-2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-10、IL-8、IL-5和/或fractalkine的水平升高牵涉CRS的预测和/或成因或引发CRS的倾向。
在某些实施方案中，调整和/或修饰本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段，以降低由抗体诱导的CRS的可能性或严重性。非限制性示例性修饰可以包括沉默Fc区(例如，完全去除Fc或修饰Fc区以减少或消除效应子功能)、和/或掩蔽(例如，定位为使得其降低或抑制抗体或其抗原结合片段特异性地结合至CD3的能力的多肽掩蔽物)。
术语“抗体”在本文中在最广义上使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和/或抗体片段(优选地表现出所需抗原结合活性的那些片段)。
“单克隆抗体”或“mAb”是指从基本上同质的抗体群体获得的抗体，即除了可能的变体抗体(例如，含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂生产期间产生的)(此类变体一般以少量存在)之外构成群体的单独抗体是相同的和/或结合相同的表位。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体都针对抗原上的单个决定簇。
关于多特异性抗体，此类抗体包含识别并特异性地结合至少两个不同抗原的至少两个不同抗原结合结构域。关于双特异性抗体，此类抗体包含识别并特异性地结合至少两个不同抗原的两个不同的抗原结合结构域。“不同抗原”可以指不同的和/或独特的多个蛋白质、多肽或分子；以及不同的和/或独特的多个表位，所述表位可以被包含在一个蛋白质、多肽或其他分子内。
术语“表位”是指与抗体分子的可变区中的特异性抗原结合位点相互作用的抗原决定簇，称为互补位。单个抗原可以具有多于一个表位。因此，不同的抗体可以结合抗原上的不同区域，并且可以具有不同的生物学效应。术语“表位”还指抗原上B细胞和/或T细胞所响应的位点。其还指由抗体结合的抗原区域。表位可以被定义为结构的或功能的。功能表位通常是结构表位的子集，并且具有直接促成相互作用亲和力的那些残基。表位也可以是构象的，即，由非线性氨基酸构成。在某些实施方案中，表位可以包括作为分子诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基基团或磺酰基基团的化学活性表面分组的决定簇，并且在某些实施方案中，可以具有特定的三维结构特征和/或特定的电荷特征。
在一些情形中，抗体包含四条多肽链：通过二硫键互相连接的两条重(H)链和两条轻(L)链。抗体有五大类别：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且几个这些类别可以进一步分为子类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别的免疫球蛋白对应的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
在其他情形中，抗体可以替代地包含其多聚体(例如IgM)或其抗原结合片段。每条重链由重链可变区(“VH”)和重链恒定区(“CH”)构成，所述CH由结构域CH1、CH2和CH3构成。每条轻链由轻链可变区(“VL”)和轻链恒定区(“CL”)构成。VH区和VL区可以进一步细分为高变区(称为互补性决定区(CDR))，所述高变区之间散布有更保守的区(称为框架区(FR))。每个VH和VL由从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的某些实施方案中，抗体(或其抗原结合片段)的FR可以与人生殖系序列相同，或者可以是经天然或人工修饰的。可以基于两个或更多个CDR的并排分析来定义氨基酸共有序列。因此，重链中的CDR分别被命名为“CDRH1”、“CDRH2”和“CDRH3”，并且轻链中的CDR被命名为“CDRL1”、“CDRL2”和“CDRL3”。
除非另有特别说明，否则如本文所用的术语“抗体”涵盖包含两条免疫球蛋白重链和两条免疫球蛋白轻链的分子(即，“全抗体分子”或“完整抗体”)以及其抗原结合片段。
“抗原结合片段”是指完整抗体的一部分，其结合完整抗体所结合的抗原(在这种情况下，CD3)。术语“全长抗体”、“完整抗体”和“整个抗体”等在本文中可互换使用，并且是指具有与天然抗体基本上相似的结构的抗体。
抗体的抗原结合片段包括特异性地结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白。示例性抗体片段包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，仅scFv或VH或VL结构域)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施方案中，本文所述的抗CD3抗体的抗原结合片段是scFv。
与全抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段可以包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性地结合单独的抗原或同一抗原上的不同表位。多种多特异性抗体形式可以用于本文所述的抗CD3抗体的抗原结合片段的背景下。多特异性和双特异性形式的非限制性实例包括例如Fab-Fc-scFv(“开瓶器”)(XENCOR)、Mab-scFv(XENCOR)、Mab-Fv(XENCOR)、双scFv(XENCOR)、中心Fv(XENCOR)、中心scFv(XENCOR)、单臂中心scFv(XENCOR)、Fab-Fab(XENCOR)、Fab-Fv(XENCOR)、mAb-Fv(XENCOR)、mAb-Fab(XENCOR)、DART(MACROGENICS)、BiTE(AMGEN/MICROMET)、KiTE、共同轻链-IgG(Genentech)、TandAb(SFFIMED)、交叉-Mab(ROCHE)、SEED(EMD SERONO)、BEAT(GLENMARK)、TrioMab(TRIONPHARMA/FRESENIUS BIOTECH)、DuetMab(MEDIMMUNE)等等，如在例如WO 95/09917；WO 2008/119566；WO 2008/119567；WO2011/121110；WO 2010/037835；WO 2007/042261；WO 2007/110205；WO 2011/121110；WO 2012/055961；WO 2012/16067；WO 2016/086189；WO 2016/182751；WO 2015/006749；WO 2014/049003；WO 2013/177101；WO 2015/128509；US 7,951,917；US 2009/0252729；US 2014/0348839；US 7,183,076；Mazor等人,Mabs,第7卷,第377-389页(2015)；Muda等人,Protein Engineering,Design,&Selection,第24卷,第447-454页(2011)；以及Del Bano等人,Antibodies,第5卷,第1-23页(2016)中所公开的。在一些实施方案中，本文所述的抗CD3 scFv片段包含多特异性(例如，双特异性)抗体的一个或多个可变结构域。
在某些实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段被包含在多特异性抗体中，特别是对于第二抗原具有结合特异性的双特异性抗体中。这样的第二抗原可以是与第一靶标完全不同的靶标，或存在于同一靶标上的不同表位。在一些实施方案中，结合特异性针对CD3的两个不同表位(例如，CD3ε或CD3γ)。在其他实施方案中，结合特异性中的一个针对CD3(例如，CD3ε或CD3γ)，而另一个针对不同的生物分子(例如，细胞表面抗原，例如肿瘤抗原)。
双特异性抗体(包括如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段)针对的第二抗原的非限制性实例包括选自由以下各项组成的组的靶标：17-IA、4-1BB、4Dc、6-酮基-PGFla、8-异-PGF2a、8-氧代-dG、Al腺苷受体、A33、ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RUB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-l-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗剂、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、青蒿琥酯、抗-Id、ASPARTIC、心房钠尿因子、av/b3整联蛋白、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴细胞刺激剂(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bel、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BIM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3成骨素、BMP-4BMP-2b、BMP-5、BMP-6Vgr-1、BMP-7(OP-1)、BMP-8(BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II(BRK-3)、BMP、b-NGF、BOK、铃蟾肽、骨源性神经营养因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、补体因子3(C3)、C3a、C4、C5、C5a、CIO、CA125、CAD-8、降钙素、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌相关抗原、组织蛋白酶A、组织蛋白酶B、组织蛋白酶C/DPPI、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V、组织蛋白酶X/Z/P、CBL、CCI、CCK2、CCL、CCLl、CCLll、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCLl7、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CDlla、CDllb、CDllc、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33(p67蛋白)、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80(B7-1)、CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、CFTR、cGMP、CINC、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)毒素、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)毒素、CKb8-l、CLC、CMV、CMV UL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、CX3CR1、CXCL、CXCLl、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、细胞角蛋白肿瘤相关抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰变加速因子、des(l-3)-IGF-I(大脑IGF-1)、Dhh、地高辛、DNAM-1、DNA酶、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、EN A、内皮素受体、脑啡肽酶、eNOS、Eot、嗜酸性粒细胞趋化因子l、EpCAM、肝配蛋白B2/EphB4、EPO、ERCC、E-选择素、ET-1、因子Ila、因子VII、因子VIIIc、因子IX、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、Fas、FcRl、FEN-1、铁蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纤维蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促卵泡激素、Fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas 6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3(Vgr-2)、GDF-5(BMP-14、CDMP-1)、GDF-6(BMP-13、CDMP-2)、GDF-7(BMP-12、CDMP-3)、GDF-8(肌肉生长抑制素)、GDF-9、GDF-15(MIC-1)、GDNF、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-αl、GFR-α2、GFR-α3、GITR、胰高血糖素、Glut 4、糖蛋白Ilb/IIIa(GP Ilb/IIIa)、GM-CSF、gpl30、gp72、GRO、生长激素释放因子、半抗原(NP-cap或NIP-cap)、HB-EGF、HCC、HCMV gB包膜糖蛋白、HCMV)gH包膜糖蛋白、HCMV UL、造血生长因子(HGF)、Hep B gpl20、类肝素酶、Her2、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)、Her4(ErbB-4)、单纯疱疹病毒(HSV)gB糖蛋白、HSV gD糖蛋白、HGFA、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV gpl20、HIV IIIB gp 120V3环、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFGPEM、HRG、Hrk、人心脏肌球蛋白、人巨细胞病毒(HCMV)、人生长激素(HGH)、HVEM、1-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受体、IgE、IGF、IGF结合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-18R、IL-23、干扰素(INF)-α、INF-β、IFN-γ、抑制素、iNOS、胰岛素A链、胰岛素B链、胰岛素样生长因子1、整联蛋白α2、整联蛋白α3、整联蛋白α4、整联蛋白α4/βl、整联蛋白α4/β7、整联蛋白α5(αV)、整联蛋白α5/βl、整联蛋白α5/β3、整联蛋白α6、整联蛋白βl、整联蛋白β2、干扰素γ、IP-10、1-TAC、JE、激肽释放酶2、激肽释放酶5、激肽释放酶6、、激肽释放酶11、激肽释放酶12、激肽释放酶14、激肽释放酶15、激肽释放酶LI、激肽释放酶L2、激肽释放酶L3、激肽释放酶L4、KC、KDR、角质形成细胞生长因子(KGF)、层粘连蛋白5、LAMP、LAP、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bpl、LBP、LDGF、LECT2、Lefty、路易斯Y抗原、路易斯Y相关抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-选择素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面活性物质、促黄体生成激素、淋巴毒素β受体、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金属蛋白酶、MGDF受体、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、粘蛋白(Mucl)、MUC18、缪勒管激素抑制物质、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-钙粘蛋白、NCA 90、NCAM、NCAM、脑啡肽酶、神经营养因子-3、神经营养因子-4或神经营养因子-6、神经秩蛋白、神经元生长因子(HGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、pl50、p95、PADPr、甲状旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-钙粘蛋白、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、P1GF、PLP、PP14、胰岛素原、松弛素原、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、RANTES、松弛素A链、松弛素B链、肾素、呼吸道合胞病毒(RSV)F、RSV Fgp、Ret、类风湿因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T细胞受体(例如，T细胞受体α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睾丸PLAP样碱性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-β泛特异性、TGF-βRI(ALK-5)、TGF-βRII、TGF-βRllb、TGF-βRIII、TGF-βl、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、胸腺Ck-1、促甲状腺激素、Tie、TIMP、TIQ、组织因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAIL Rl Apo-2、DR4)、TNFRSFIOB(TRAIL R2 DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C(TRAIL R3 DcRl、LIT、TRID)、TNFRSF10D(TRAIL R4 DcR2、TRUNDD)、TNFRSF11A(RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSFllB(OPG OCIF、TR1)、TNFRSF12(TWEAK RFN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFF R)、TNFRSF14(HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITR AITR)、TNFRSF19(TROY TAJ、TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSFIA(TNF RI CD120a、p55-60)、TNFRSFIB(TNF RIICD120b、p75-80)、TNFRSF26(TNFRH3)、TNFRSF3(LTbR TNF RIII、TNFC R)、TNFRSF4(OX40ACT35、TXGP1 R)、TNFRSF5(CD40 p50)、TNFRSF6(Fas Apo-1、APT1、CD95)、TNFRSF6B(DcR3M68、TR6)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF9(4-lBB CD137、ILA)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF22(DcTRAIL R2 TNFRH2)、TNFRST23(DcTRAIL Rl TNFRH1)、TNFRSF25(DR3 Apo-3、LARD、TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10(TRAIL Apo-2配体、TL2)、TNFSF11(TRANCE/RANK配体ODF、OPG配体)、TNFSF12(TWEAK Apo-3配体、DR3配体)、TNFSF13(APRIL TALL2)、TNFSF13B(BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14(LIGHT HVEM配体、LTg)、TNFSF15(TL1A/VEGI)、TNFSF18(GITR配体AITR配体、TL6)、TNFSFIA(TNF-a连接素、DIF、TNFSF2)、TNFSF1B(TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3(LTb TNFC、p33)、TNFSF4(OX40配体gp34、TXGP1)、TNFSF5(CD40配体CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6(Fas配体Apo-1配体、APT1配体)、TNFSF7(CD27配体CD70)、TNFSF8(CD30配体CD153)、TNFSF9(4-lBB配体CD137配体)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAIL R、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、转移受体、TRF、Trk、TROP-2、TSG、TSLP、肿瘤相关抗原CA 125、表达路易斯Y相关碳水化合物的肿瘤相关抗原、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白-2、VEFGR-1(flt-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VIM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整联蛋白、血管性血友病因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)、TIM-3(T细胞免疫球蛋白和粘蛋白-3)、激素的受体和生长因子。
包含本文所公开的抗CD3抗体和抗原结合片段的多特异性抗体可以根据多种技术制备，所述多种技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见，Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983)),WO 93/08829,以及Traunecker等人,EMBO J.10:3655(1991))、“杵臼(knob-in-hole)”工程化(参见例如，美国专利号5,731,168)；免疫球蛋白交换体(也称为Fab结构域交换或交叉Mab形式)技术(参见例如，WO2009/080253；Schaefer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,108:11187-11192(2011))；用于抗体Fc-异源二聚体分子的工程化静电转向效应(WO 2009/089004A1)；交联两种或更多种抗体或片段(参见例如，美国专利号4,676,980，以及Brennan等人,Science,229:81(1985))；亮氨酸拉链(参见例如Kostelny等人,J.Immunol,148(5):1547-1553(1992))；“双抗体”技术(参见例如，Hollinger等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；单链Fv(sFv)二聚体(参见例如，Gruber等人,J.ImmunoL,152:5368(1994))；和三特异性抗体，如在例如Tutt等人J.ImmunoL 147:60(1991)中所述。
本公开还涵盖本文所公开的抗CD3抗体的修饰，此类修饰包括在重链和轻链可变结构域的FR区和/或CDR区中的一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失。一旦获得，就可以测试此类衍生抗体和/或抗原结合片段的一种或多种所需特性，诸如改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善的可开发性等。
在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或其抗原结合片段包含重链(HC)序列、轻链(LC)序列、CDRH3序列、CDRH2序列、CHRH1序列、CDRL3序列、CDRL2序列、CDRL1序列和/或框架序列。在一些实施方案中，抗CD3抗体和/或其抗原结合片段与表4中所公开的抗CD3抗体(Ab1-Ab50)的对应序列的氨基酸序列同一性为至少约100％、至少约99％、至少约98％、至少约97％、至少约96％、至少约95％、至少约94％、至少约93％、至少约92％、至少约91％、至少约90％、至少约89％、至少约88％、至少约87％、至少约86％、至少约85％、至少约84％、至少约83％、至少约82％、至少约80％；和/或介于其之间的所有同一性百分比。在一些实施方案中，通过序列同一性的任何熟知的算法(诸如FASTA、BLAST或GAP)来测量同一性百分比。
在一些实施方案中，不相同的残基位置因保守氨基酸置换而不同。“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残基被含具有相似化学特性(例如，电荷或疏水性)的侧链(R基团)的另一个氨基酸残基置换的一种氨基酸置换。一般来说，保守氨基酸置换将基本上不会改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列因保守置换而彼此不同的情况下，可以向上调节相似性的百分比或程度以校正置换的保守性质。用于进行这种调节的手段是本领域技术人员熟知的。(参见例如，Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331)。含具有相似化学特性的侧链的氨基酸组的实例包括1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，以及7)含硫侧链：半胱氨酸和蛋氨酸。在一些实施方案中，保守氨基酸置换组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。可替代地，在一些实施方案中，保守置换包含在以下文献中所公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化：Gonnet等人(1992)Science 256:1443 45。在一些实施方案中，“适度保守”置换包括在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何变化。
一个或多个CDR残基的置换或一个或多个CDR的省略也是可能的。已经描述了其中可以分配一个或两个CDR以改变科学文献中的结合的抗体。Padlan等人(1995FASEB J.9:133-139)基于所公开的晶体结构分析了在抗体与其抗原之间的接触区域，并且得出结论，仅约五分之一至三分之一的CDR残基实际上接触其相关抗原。Padlan还发现其中一个或两个CDR具有与抗原接触的零氨基酸的许多抗体(还参见Vajdos等人2002J Mol Biol 320:415-428)。可以基于先前研究(例如，CDRH2中的残基H60-H65通常不需要)，从位于ChothiaCDR之外的Kabat CDR的区域，通过分子建模和/或凭经验鉴定不接触抗原的CDR残基。如果省略CDR或其残基，则其通常被占据另一个人抗体序列中的对应位置的氨基酸或此类序列的共有序列置换。还可以凭经验选择在CDR内用于置换的位置和待置换的氨基酸。
在某些实施方案中，置换、插入或缺失可以发生在本文所述的抗CD3抗体的一个或多个CDR内，只要此类改变基本上不降低抗体结合其抗原的能力即可。例如，可以在CDR中做出基本上不降低结合亲和力的保守改变(例如，如本文所提供的保守置换)。此类改变可以例如位于CDR中的抗原接触残基之外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个CDR未改变，或含有不超过一个、两个或三个氨基酸置换。
用于鉴定可以被靶向诱变的抗体残基或区域的有效方法被称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所述。在此方法中，鉴定一个残基或一组靶残基(例如，带电荷残基，诸如arg、asp、his、lys和glu)并将其替换为中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)，以确定抗体与抗原的相互作用是否受影响。可以在氨基酸位置处引入另外的置换，展示对初始置换的功能敏感性。可替代地或另外，抗原-抗体复合物的晶体结构，以识别抗体与抗原之间的接触点。此类接触残基和邻近残基可以作为置换候选物被靶向或消除。可以筛选变体以确定它们是否含有所需特性。
氨基酸序列插入包括从一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的长度范围的氨基-和/或羧基-末端融合物，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括与抗体的N末端或C末端融合成增加抗体血清半衰期的酶(例如，对于ADEPT)或多肽。
如全文所述，如本文所提供的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段具有有利的可开发性，并且因此相对可开发。
术语“可开发”是指多种多肽中的一种或多种多肽具有所需特征的程度，所述所需特征例如为例如在哺乳动物细胞中的所需表达；溶解度；粘度；聚集；化学和/或物理稳定性；所需保质期；解链温度；药代动力学概况；循环半衰期；和清除特征。此类特征可以独立地充当标记；作为此类标记的子集的组合；或者整体地，有可能此类一种或多种多肽可以被成功地开发为治疗候选物，并且最终成为批准的药物。因此，如本领域中所理解的，通常，具有所需可开发性特征的多肽拥有例如相对高的溶解度、相对低的粘度、相对低的聚集倾向、相对高的化学稳定性、相对高的物理稳定性、相对长的保质期、相对高的解链温度、相对长的循环半衰期、相对长的清除时间等。具有不期望的可开发性特征的多肽拥有例如相对低的溶解度、相对高的粘度、相对高的聚集倾向、相对差的化学稳定性、相对差的物理稳定性、相对短的保质期、相对低的解链温度、相对短的循环半衰期、相对短的清除时间等。
可以用于确定多肽(诸如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段)拥有所需的可开发性特征的程度的方法和测定在本领域中是可获得的，并且包括例如：PSR测定(WO2014/179363以及Xu等人,Protein Eng Des Sol,第26卷,第663-670页(2013))；SMP和SCP测定等；交叉相互作用色谱(CIC)；自身相互作用色谱(SIC)；动态光散射；尺寸排阻色谱(SEC)、动态光散射(DLS)光谱；光子相关性光谱；准弹性光散射、圆二色谱(CD)、粘度测量；全细胞结合；组织微阵列方法；BVP ELISA测定；AC-SINS测定(Liu等人；MAbs,第6卷,第483-492页(2014))；差示扫描量热法；等等(参见例如，He等人,J.Pharm.Sci.,第100(4)卷,第1330-1340页(2011)；Wagner等人,Pharm.Develop.&Technol(在线公布2012；超文本传送协议：informahealthcare.com/doi/abs/10.3109/10837450.2011.649851)；Hotzel等人,mAbs,第4(6)卷,第753-7601页(2012)；Weiqiang等人,J.Pharm.Sci.,第101(5)卷,第1701-1720页(2012)；Banks等人,J.Pharm.Sci.,第101(8)卷,第2720-2732页(2012)；Lie等人,J.Pharm.Sci.,第94(9)卷,第1928-1948页(2005)；以及Payne等人,Biopolymers,第85(5)卷,第527-533页(2006))。
在一些实施方案中，被鉴定为拥有降低的可开发性的抗体通过其与多特异性试剂(“PSR”)的相互作用来如此检测，并且因此被称为“多特异性”多肽。此类多特异性抗体可以被称为相对“不可开发”或相对“非可开发”。
“可开发性概况”是指在评估抗体的可开发性时可以分配给抗体的指数。可开发性概况是可以评估、比较和/或排列抗CD3抗体的可开发性的量度或度量。此类可开发性概况用作CD3结合剂和包含其的抗体的相互作用程度的量度。可以通过本领域中可用的任何数目的手段来评估相互作用程度，所述手段提供与多肽对其所结合的部分的强度或亲和力相关的输出值。示例性手段包括流式细胞术手段，诸如FACS；ELISA；定量免疫亲和力测定或免疫沉淀测定；哺乳动物双杂交或酵母双杂交测定等。在FACS的背景下，如实施例中所展示，可以通过以下方式来确定在所述多种多肽中的多肽与PSR之间的相互作用程度：产生针对所检测的每种多肽-PSR相互作用的平均荧光强度(MFI)，并且然后以升序或降序排序MFI，从而根据在每种检测到的多肽与PSR之间的相对相互作用程度对在所述多种多肽中的多肽进行排名。这样的排名提供了所述多种多肽的多肽的排名，使得容易地确定拥有增强的可开发性的那些多肽，还有拥有降低的可开发性的那些多肽。
可开发性概况还可以采取归一化得分的形式，例如通过将本文所述的抗CD3抗体的可开发性归一化为标准(或对照)抗体(例如抗HEL抗体)的可开发性。
在某些实施方案中，可以进一步修饰本发明的CD3结合结构域和包含其的抗体，以含有本领域已知的并且易于获得的另外的非蛋白质部分。适合用于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)、以及葡聚糖或聚(正乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、聚乙二醇均聚物、聚丙烯氧化物/环氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇、以及它们的混合物。聚乙二醇丙醛由于其在水中的稳定性而在制备中具有优点。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是支链的或非支链的。与抗体附接的聚合物的数量可以变化，并且如果附接多于一种聚合物，则它们可以是相同或不同的分子。一般来说，用于衍生化的聚合物的数量和/或类型可以基于如下考虑事项来确定，所述考虑事项包括但不限于待改进的抗体的特定特性或功能、抗体衍生物是否在限定条件下用于疗法等。
在某些实施方案中，提供了本发明的CD3结合结构域和包含其的抗体，它们显示出增强的可开发性概况。通过执行PSR测定中的一种或多种获得抗CD3抗体的可开发性概况；SCP测定；AC-SINS；ELISA；DSF测定；Tm测定；HIC测定；CIC检测；或它们的组合。
在其他实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段显示出在约0.0和约0.45之间；在约0.0和约0.4之间；在约0.0和约0.35之间；在约0.0和约0.3之间；在约0.0和约0.25之间；在约0.0和约0.2之间；在约0.0和约0.15之间；或在约0.0和约0.1之间的多特异性试剂(PSR)得分。0.0-0.1的得分是“干净PSR”。.1至.33的得分是“低PSR”。0.33至0.66的得分是“中等PSR”。0.66-1.00的得分是“高PSR”。高PSR得分指示降低(或差)的可开发性。通常，PSR得分越低，抗体的可开发性越有利。
在仍其他实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体或其抗原结合片段显示出小于约10.5分钟(干净至低HIC得分)；在约10.5分钟和11.5分钟之间(中等HIC得分)；或大于约11.5分钟(高HIC得分)的HIC得分。通常，HIC得分越低，抗体的可开发性越有利。
在又其他实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段显示出小于约95％的SEC得分，这指示抗体是单体，即不聚集。
在仍其他实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段显示出小于约65℃的Tm。
在一些实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段可以被进一步修饰以最小化效应子功能，例如沉默Fc。
“效应子功能”是指可归因于抗体Fc区的生物学活性，其随抗体同种型而变化。示例性效应子功能包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；下调细胞表面受体(例如，B细胞受体)；和B细胞活化。
“Fc区”是含有至少一部分恒定区的免疫球蛋白重链C末端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。人IgG重链Fc区可以从Cys226或从Pro230延伸到重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文另外指明，否则在Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU指数，如在Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.,1991中所述。
在某些实施方案中，可以将一个或多个氨基酸修饰引入本公开的抗CD3抗体的Fc区中，从而产生Fc区变体(参见例如US 2012/0251531)。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸修饰(例如，置换)的人Fc区序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc区)。
在某些实施方案中，本公开设想了拥有一些但并非全部效应子功能的抗CD3抗体变体，这使其成为用于体内抗体半衰期是重要的、但是某些效应子功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的应用的期望候选物。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认CDC和/或ADCC活性的减少/消减。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定，以确保抗体缺乏FcγR结合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn结合能力。用于介导ADCC的原代细胞(例如，NK细胞)仅表达FcγRIII，然而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达汇总于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页的表3中。评估所关注分子的ADCC活性的体外测定的非限制性实例描述于美国专利号5,500,362(参见例如Hellstrom,I.等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))以及Hellstrom,I等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；美国专利号5,821,337(参见Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。可替代地，可以采用非放射性测定(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定(Cell Technology,Inc.Mountain View,Calif.)；和CytoTox
Figure BDA0003339538060000241
非放射性细胞毒性测定(Promega,Madison,Wis.))。用于此类测定的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。可替代地或另外，所关注分子的ADCC活性可以在体内评估，例如在动物模型(诸如在Clynes等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中所公开的动物模型)中评估。还可以进行C1q结合测定，以确认抗体不能结合C1q并且因此缺乏CDC活性。参见例如在WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体活化，可以执行CDC测定(参见例如Gazzano-Santoro等人J.ImmunoL Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等人Blood.101:1045-1052(2003)；以及Cragg,M.S.和M.J.Glennie Blood.103:2738-2743(2004))。还可以使用本领域已知的方法进行FcRn结合和体内清除/半衰期确定(参见例如，Petkova,S.B.等人Int'l.ImmunoL 18(12):1759-1769(2006))。
在一些实施方案中，具有降低的效应子功能的抗体包括具有Fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个的置换的抗体(美国专利号6,737,056和8,219,149)。在一些实施方案中，Fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或更多个处具有置换的Fc突变体，包括具有残基265和297至丙氨酸的置换的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利号7,332,581和8,219,149)。
在其他实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段被进一步修饰以包括经由可切割接头连接的掩蔽剂，例如多肽掩蔽物。
在一些实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段与治疗部分缀合，从而形成免疫缀合物。“免疫缀合物”是与一种或多种异源分子(例如抗生素、第二抗CD3抗体、疫苗或类毒素或任何其他治疗部分)缀合的抗体。
在某些实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段被改变以增加或减少抗体被糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列使得创建或去除一个或多个糖基化位点，方便地对本公开的抗CD3抗体添加或缺失糖基化位点。
此外，本公开整体涉及抗CD3抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含：a.可变重(VH)链多肽，所述可变重链多肽包含：i.FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH CDR1(CDRH1)；ii.WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH CDR2(CDRH2)；iii.ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH CDR3(CDRH3)；和/或b.可变轻(VL)链多肽，所述可变轻链多肽包含：i.KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL CDR1(CDRL1)；WASTRX1S(SEQID NO:133)的VL CDR2(CDRL2)；和X2QSYFRRT(SEQ ID NO:134)的VL CDR3(CDRL3)；其中X1和X2各自独立地是任何氨基酸。在一些实施方案中，X1是E或S。在一些实施方案中，X2是K或V。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的CDRL2。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:4的CDRL3。
在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH链CDR1(CDRH1)、WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH链CDR2(CDRH2)和ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH链CDR3(CDRH3)；和/或KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ IDNO:8)的VL链CDR1(CDRL1)、WASTRES(SEQ ID NO:10)的VL链CDR2(CDRL2)和KQSYFRRT(SEQ IDNO:5)的VL链CDR3(CDRL3)。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合抗体片段包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH链CDR1(CDRH1)、WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH链CDR2(CDRH2)和ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH链CDR3(CDRH3)；和/或KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL链CDR1(CDRL1)、WASTRSS(SEQ ID NO:11)的VL链CDR2(CDRL2)和VQSYFRRT(SEQ ID NO:4)的VL链CDR3(CDRL3)；在一些实施方案中，抗CD3抗体可以包含称为Ab1的抗体的任何一个或多个CDR和/或称为Ab13的抗体的任何一个或多个CDR。在一些实施方案中，抗CD3抗体可以结合至与Ab1和/或Ab13相同的或基本上相似的CD3的一个或多个表位。
在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18或SEQID NO:34的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQID NO:17具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；和VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18或SEQID NO:34的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段以约500pM或更小、约470pM或更小、约450pM或更小、约400pM或更小、约350pM或更小、约300pM或更小、约250pM或更小、约200pM或更小、约150pM或更小或者约100pM或更小的解离常数(KD)结合至CD3，任选地其中所述CD3是人和/或食蟹猴，进一步任选地，其中所述结合亲和力通过表面等离子共振来测量。在一些实施方案中，所述KD是单价KD，和/或其中所述KD使用所述抗CD3抗体或抗体片段的scFv片段来测量。
此外，本公开整体涉及抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含Ab1-Ab50中的任何一者或多者的一个或多个CDR和/或结合至与Ab1-Ab50中的任何一者或多者相同的一个或多个表位。此外，本公开整体涉及抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含一个或多个VH和/或VL链，所述VH和/或VL链包含选自表4中的氨基酸序列。
抗CD3抗体及其抗原结合片段的生产
可以使用重组方法生产抗CD3抗体和/或其抗原结合片段。例如，提供了编码如本文所述的抗CD3抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码包含抗体的VL的氨基酸序列和/或包含VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另外的实施方案中，提供了包含此类核酸的一个或多个载体(例如，表达载体)。在另外的实施方案中，提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用以下项转化)：(1)包含核酸序列的载体，所述核酸序列编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)包含编码包含抗体VL的氨基酸序列的核酸的第一载体、以及包含编码包含抗体VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了制备抗CD3抗体的方法，其中所述方法包括在适合于表达抗体的条件下培养如上文所提供的包含编码抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
术语“宿主细胞”是指已经引入外源性核酸序列的细胞，包括此类细胞的子代。宿主细胞包括转化体和转化的细胞，其包括原代转化的细胞和源自其的子代，而不管传代次数。
为了重组生产抗CD3抗体，将例如如上文所述的编码抗体的核酸分离并且插入一个或多个载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序(例如，通过使用能够特异性地结合编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)将此类核酸容易地分离和测序。
用于克隆和/或表达编码抗体的载体的合适宿主细胞包括原核或真核细胞。例如，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时，可以在细菌中生产抗体。关于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(另外参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),第245-254页，它描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达。)在表达后，抗体可以以可溶性级分从细菌细胞糊中分离并且可以进一步纯化。除原核生物之外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是编码抗体的载体的合适的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已被“人源化”的真菌和酵母品系，从而生产具有部分或完全人糖基化模式的抗体。参见例如，Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)，以及Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)；WO 2009/036379；WO 2010/105256；和WO 2012/009568。也可以将植物细胞培养物用作宿主。参见例如美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中生产抗体的PLANTIBODIESTM技术)。也可以将病毒细胞用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(如描述于例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中的293或293细胞)；婴儿仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利细胞(sertoli cells)(如描述于例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中的TM4细胞)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人子宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如在例如Mather等人,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编辑,HumanaPress,Totowa,N.J.),第255-268页(2003)。
抗CD3抗体和/或其抗原结合片段可以通过本领域已知的各种测定(例如ELISA、Western印迹等)来鉴定、筛选、选择或表征其物理/化学特性和/或生物学活性，或者竞争测定可以用于鉴定与本发明的抗CD3抗体竞争结合至CD3的抗体。在示例性竞争测定中，在包含结合CD3的第一标记的抗体和正被测试其与第一抗体竞争结合CD3的能力的第二未标记的抗体的溶液中孵育固定的CD3。第二抗体可以存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一标记的抗体而不是第二未标记的抗体的溶液中孵育固定的CD3。在允许第一抗体与CD3结合的条件下孵育之后，去除过量的未结合抗体，并且测量与固定的CD3相关的标记的量。如果相对于对照样品在测试样品中与固定的CD3相关的标记的量实质上减少，则指示第二抗体与第一抗体竞争结合CD3。参见例如，Harlow和Lane(1988)Antibodies:A LaboratoryManual.第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,N.Y.)。
可以使用标准方法鉴定拥有生物学活性的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段。生物学活性可以包括例如与T细胞表面上的CD3的体内、体外或离体结合。在多特异性抗CD3抗体的情况下(诸如具有结合至CD3的一个臂和结合不同靶标(例如细胞表面抗原，例如肿瘤抗原)的另一个臂的双特异性抗体)，生物学活性还可以包括效应细胞活化(诸如CD8+和/或CD4+T细胞活化)、效应细胞群体扩增(即，T细胞计数增加)、靶细胞群体减少(即，在其细胞表面上表达所述第二生物分子的细胞群体的减少)、和/或靶细胞杀伤。
抗CD3抗体及其抗原结合片段的诊断和治疗用途
本文所述的抗CD3抗体和/或抗原结合片段可以用于诊断和/或检测。如本文所用，“检测”涵盖定量或定性检测。在一个实施方案中，提供了一种检测生物样品中的CD3存在的方法。这种方法包括(i)在允许抗CD3抗体与CD3结合的条件下使生物样品接触如本文所述的抗CD3抗体，以及(ii)检测是否在抗CD3抗体和CD3之间形成复合物。这种方法可以是体外或体内方法。在某些实施方案中，生物样品包括一种或多种细胞或组织。
在某些实施方案中，提供了标记的抗CD3抗体。如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段包括直接(诸如荧光、发色、电子聚光、化学发光和放射性标记)或间接(诸如酶或配体)被检测的标记或部分。非限制性示例性标记包括放射性同位素，诸如32P、14C、125I、3H和131I；荧光团，诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹磺酰(dansyl)、伞形酮、萤光素酶(例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利号4,737,456))、萤光素、2,3-二氢酞嗪二酮、辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；与采用过氧化氢来氧化染料前体诸如HRP、乳过氧化物酶或微过氧化物酶的酶偶联的杂环氧化酶(诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)；生物素/亲合素；旋转标签；细菌噬菌体标签；稳定的自由基；等等。
如本文所述的CD3抗体和/或其抗原结合片段以及此类抗体的药物组合物可以用于治疗方法中。在一个实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段或包含此类抗体的药物组合物可以用于治疗或延迟细胞增殖性障碍或自身免疫性障碍的进展。
“障碍”是指将从治疗中获益的任何病症或疾病，包括但不限于慢性和急性障碍或疾病，包括使哺乳动物易患所讨论障碍的那些病理病症。
术语“细胞增殖性障碍”和“增殖性障碍”是指与某种程度的异常细胞增殖相关的障碍。细胞增殖性障碍包括癌症，例如肿瘤。
如本文所用，“肿瘤”是指所有肿瘤细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，以及所有癌前和癌细胞和组织。
“癌症”是指哺乳动物中特征在于未调节的细胞生长的生理状况。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤以及白血病或淋巴恶性肿瘤；更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃部或胃癌(包括胃肠道癌和胃肠道间质癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿路癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝脏癌、肛癌、阴茎癌、黑色素瘤、浅表扩散性黑色素瘤、雀斑痣性恶性黑色素瘤、肢端雀斑痣性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤(包括低级别/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)NHL；中等级别/滤泡性NHL；中等级别弥漫性NHL；高级别免疫母细胞NHL；高级别成淋巴细胞性NHL；高级别小非裂解细胞NHL；大块疾病NHL；套细胞淋巴瘤；与AIDS相关的淋巴瘤；和华氏巨球蛋白血症)；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；和移植后淋巴增殖性障碍(PTLD)、以及与斑痣性错构瘤病相关的异常血管增生、水肿(诸如与脑肿瘤相关的水肿)、Meigs综合征、脑和头颈癌、以及相关转移。在某些实施方案中，适合于通过本公开的抗体治疗的癌症包括乳腺癌、结直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西肉瘤、类癌性癌、头颈部癌、卵巢癌、间皮瘤和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症选自：小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、胃癌、结直肠癌(CRC)和肝细胞癌。然而，在一些实施方案中，癌症选自：非小细胞肺癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤和乳腺癌，包括那些癌症的转移性形式。在其他实施方案中，所述癌症选自一类成熟B细胞癌，其不包括霍奇金淋巴瘤，但包括生殖中心B细胞样(GCB)DLBCL、活化的B细胞样(ABC)DLBCL、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴样白血病(CLL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、小淋巴细胞性白血病(SLL)、淋巴质浆细胞性淋巴瘤(LL)、华氏巨球蛋白血症(WM)、中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)、伯基特淋巴瘤(BL)、B细胞前淋巴细胞性白血病、脾边缘区淋巴瘤、毛细胞白血病、脾淋巴瘤/白血病(无法分类)、脾弥漫性红髓小B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病变体、华氏巨球蛋白血症、重链疾病、a重链疾病、γ重链疾病、μ重链疾病、浆细胞骨髓瘤、骨的单发性浆细胞瘤、骨外浆细胞瘤、粘膜相关淋巴组织的结节外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)、结节边缘区淋巴瘤、小儿结节边缘区淋巴瘤、小儿滤泡性淋巴瘤、原发性皮肤滤泡中心淋巴瘤、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤、CNS的原发性DLBCL、原发性皮肤DLBCL(腿类型)、老年人的EBV阳性DLBCL、与慢性炎症相关的DLBCL、淋巴瘤样肉芽肿、原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、ALK阳性大B细胞淋巴瘤、浆母细胞淋巴瘤、在HHV8相关的多中心淋巴结增生(Castleman)疾病中出现的大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤；具有在弥漫性大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之间的中间特征的无法分类的B细胞淋巴瘤、以及具有在弥漫性大B细胞淋巴瘤与经典霍奇金淋巴瘤之间的中间特征的无法分类的B细胞淋巴瘤。
如本文所用，“治疗(treatment)”或“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指尝试改变所治疗个体的自然过程的临床干预，并且可以用于预防或在临床病理学期间进行。治疗的期望效应包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状减轻、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展率、疾病状态的改善或缓和、以及缓解或改善的预后。
如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”是指预防或抑制障碍或疾病的发展或发作。
如本文所用，术语“改善”和“减轻”是指病症或其任何症状的严重性降低或减少。
在一些实施方案中，本发明的抗体用于延迟障碍或疾病的发展或者延迟障碍或疾病的进展。如本文所用，障碍或疾病的“延迟进展”意指延迟、阻碍、减慢、阻止、稳定和/或推迟疾病或障碍(例如，细胞增殖性障碍，例如癌症)的发展。延迟可以具有不同的时间长度，这取决于所治疗的疾病和/或个体的历史。
可以将有效量的此类抗体或组合物施用至患有癌症或关节炎、类风湿性关节炎、结肠炎、炎性肠病、自身免疫性I型糖尿病等的个体。本文所公开的抗CD3抗体或包含这种抗体的组合物(例如，药物组合物)的“有效量”是实现期望的治疗或预防结果(例如特定障碍(例如细胞增殖性障碍，例如癌症)的可测量改善或预防，优选地具有最小或没有毒性或有害作用)所需的至少最小量。有效量可以根据尤其是患者的疾病状态、年龄、性别和重量、以及抗体(或其抗原结合片段)在个体中引发期望的反应的能力并且在一些情形中由于共同施用一种或多种另外的治疗剂而变化。
在一些实施方案中，如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段可以用于增强患有细胞增殖性障碍或自身免疫性障碍的个体的免疫功能。在施用后，这种抗体或组合物可以通过活化效应细胞(例如，T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞，包括Treg)、扩增(增加)效应细胞群体、减少靶细胞群体(例如，表达由本发明的抗CD3抗体(诸如双特异性抗体)识别的第二生物分子的细胞)、和/或杀死靶细胞(例如，靶肿瘤细胞)来增强患有细胞增殖性障碍或自身免疫性障碍的个体的免疫功能。
如本文所公开的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段可以用于治疗障碍，所述障碍包括但不限于增殖性障碍、肿瘤学障碍、免疫肿瘤学障碍、神经障碍、认知障碍、神经退行性障碍、自身免疫性障碍。在一个实施方案中，可以将有效量的这种抗CD3抗体单独或与至少一种另外的药剂组合施用至患有这种障碍的个体。这种“个体”可以是哺乳动物，并且特别是人。
非限制性示例性另外的治疗剂包括化学治疗剂、抗体-药物缀合物(ADC)和/或生物修饰剂。化学治疗剂可以选自环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙(CHOP)。ADC可以选自抗CD79b抗体药物缀合物(诸如抗CD79b-MC-vc-PAB-MMAE、或在美国专利号8,088,378和/或US 2014/0030280中所描述的抗CD79b抗体药物缀合物、或泊洛妥珠单抗MMAE偶联物(polatuzumab vedotin))、抗CD19抗体药物缀合物、抗CD22抗体药物缀合物、抗CD45抗体药物缀合物和抗CD32药物缀合物。生物修饰剂可以选自BCL-2抑制剂(诸如GDC-0199/ABT-199)；来那度胺
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PI3K-δ抑制剂(诸如艾代拉里斯(idelalisib)
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)；PD-1轴结合拮抗剂；激动剂(例如，激动剂抗体，针对活化共刺激分子，例如CD40、CD226、CD28、OX40(例如，AgonOX)、GITR、CD137(也称为TNFRSF9、4-1BB、或ILA)、CD27(例如，CDX-1127)、HVEM、或CD127)；拮抗剂(例如，拮抗剂抗体，针对抑制性共刺激分子，例如，CTLA-4(也称为CD152)、PD-1、TIM-3、BTLA、VISTA、LAG-3、B7-H3、B7-H4、IDO(例如，1-甲基-D-色氨酸(也称为1-D-MT))、TIGIT、MICA/B、GITR(例如，TRX518)或精氨酸酶)；伊匹木单抗(也称为MDX-010、MDX-101、或
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)；曲美木单抗(也称为替西木单抗(ticilimumab)或CP-675,206)；乌瑞芦单抗(urelumab)(也称为BMS-663513)；MGA271；针对TGFβ的拮抗剂(例如，美替木单抗(也称为CAT-192)、夫苏木单抗(fresolimumab)(也称为GC1008)、LY2157299k)；以及表达嵌合抗原受体(CAR)T细胞(例如，细胞毒性T细胞或CTL)的过继转移(例如，包含显性阴性TGFβ受体(例如，显性阴性TGFβII型受体)的T细胞的过继转移)。
如本文所公开的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段可以用于增强患有障碍的个体(例如人，患有这种障碍的个体)中的免疫功能。在一个实施方案中，增强免疫功能的方法包括向个体施用有效量的抗CD3抗体以活化效应细胞(例如，T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)、扩增(增加)效应细胞群体、减少靶细胞群体和/或杀死靶细胞(例如，靶肿瘤细胞)。
在另外的方面，还提供了包含如本文所述的抗CD3抗体和/或抗原结合片段的药物配制品，例如用于任何上述治疗方法中。“药物配制品”是指呈允许在其中所含的活性成分(诸如本文所述的抗CD3抗体)的生物活性是有效的这样的形式并且优选地不含对将施用该配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外组分的制剂。
在一个实施方案中，药物配制品包含本文所公开的抗CD3抗体和药学上可接受的载体中的任一种。“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除活性成分之外的的成分，其对受试者是无毒的。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂或防腐剂。在另一个实施方案中，药物配制品包含本文提供的抗CD3抗体和至少一种另外的治疗剂中的任一种。
本公开的抗体可以单独或与其他药剂组合用于疗法中，例如抗CD3抗体和/或其抗原结合片段可以与至少一种另外的治疗剂共同施用。在某些实施方案中，另外的治疗剂是化学治疗剂、生长抑制剂、细胞毒性剂、用于放射疗法的药剂、抗血管生成剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、或其他药剂诸如表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如，酪氨酸激酶抑制剂)、HER1/EGFR抑制剂(例如，厄洛替尼(TarcevaTM))、血小板衍生的生长因子抑制剂(例如，GleevecTM(伊马替尼甲磺酸盐))、COX-2抑制剂(例如，塞来昔布)、干扰素、细胞因子、除本发明的抗CD3抗体之外的抗体(诸如结合一种或多种以下靶标的抗体：ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BIyS、APRIL、BCMA VEGF、或VEGF受体、TRAIL/Apo2、PD-1、PD-L1、PD-L2)、或另一种生物活性或有机化学剂。
在一些实施方案中，本公开提供了一种方法，其中所述另外的治疗剂是糖皮质激素。在一个实施方案中，糖皮质激素是地塞米松。
上文所述的此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂被包括在相同或单独的配制品中)和分开施用(在此情况下，本公开抗体的施用可以在另外的治疗剂或药剂的施用之前、同时和/或之后发生。在一个实施方案中，抗CD3抗体的施用和另外的治疗剂的施用发生在彼此的约一个月内、或在约一周、两周或三周内、或在约一天、二天、三天、四天、五天或六天内。本发明的抗CD3抗体(例如，与CD3和第二生物分子(例如细胞表面抗原，例如肿瘤抗原)结合的本发明的双特异性抗CD3抗体，诸如本公开的TDB抗体或其变体)也可以与放射疗法组合使用。
本公开的抗体(和/或任何另外的治疗剂)可以通过任何合适的手段施用，所述任何合适的手段包括肠胃外、肺内和鼻内施用、以及(如果需要进行局部治疗)病灶内施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，抗体通过皮下施用来施用。在一些实施方案中，与通过静脉内注射施用的相同抗CD3抗体相比，通过皮下注射施用抗CD3抗体在患者中表现出更少的毒性反应。剂量可以通过任何合适的途径，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射，部分地取决于施用是短暂的还是长期的。本文涵盖各种给药时间表，包括但不限于在不同时间点上的单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。
本公开的抗体将按照良好医学实践的方式配制、给药和施用。在这种背景下考虑的因素包括所治疗的特定障碍、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、障碍的成因、药剂的递送部位、施用方法、施用的时间表以及医师已知的其他因素。抗体不需要但可以任选地与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论障碍的试剂一起配制。此类其他药剂的有效量取决于配制品中存在的抗体的量、障碍或治疗的类型以及上文讨论的其他因素。这些通常以如本文所述的相同的剂量和施用途径、或约1％至99％的本文所述的剂量、或以凭经验/临床确定为适当的任何剂量和任何途径使用。
对于疾病的预防或治疗，本公开的抗体的适当剂量(当单独使用或与一种或多种其他另外的治疗剂组合使用时)将取决于待治疗的疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重性和过程、所述抗体是出于预防还是治疗目的施用、先前疗法、患者的临床病史和对抗体的反应、以及主治医师的判定。抗体在一次或在一系列治疗中适当地施用至患者。
作为一般主张，施用至人的治疗有效量的抗CD3抗体将在约0.01至约100mg/kg的患者体重的范围内，无论是通过一次或多次施用。在一些实施方案中，所使用的抗体以例如每日约0.01至约45mg/kg、约0.01至约40mg/kg、约0.01至约35mg/kg、约0.01至约30mg/kg、约0.01至约25mg/kg、约0.01至约20mg/kg、约0.01至约15mg/kg、约0.01至约10mg/kg、约0.01至约5mg/kg、或约0.01至约1mg/kg施用。在一个实施方案中，本文所述的抗CD3抗体在21天周期的第1天以约100mg、约200mg、约300mg、约400mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg或约1400mg的剂量施用至人。剂量可以作为单剂量或作为多剂量(例如，2个或3个剂量)诸如输注施用。对于数天或更长时间内的重复施用，取决于病症，治疗一般将持续直到出现期望的疾病症状抑制。抗体的一个示例性剂量将在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围内。因此，可以向患者施用约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何组合)的一个或多个剂量。此类剂量可以间歇地施用，例如每周或每三周一次(例如，使得患者接受约二至约二十个剂量，或例如约六个剂量的抗CD3抗体)。可以施用初始较高负荷剂量，随后施用一个或多个较低剂量。通过常规技术和测定容易地监测这种疗法的进展。
在一些实施方案中，本公开的方法还可以包括另外的疗法。另外的疗法可以是放射疗法、手术、化学疗法、基因疗法、DNA疗法、病毒疗法、RNA疗法、免疫疗法、骨髓移植、纳米疗法、单克隆抗体疗法或前述的组合。另外的疗法可以是辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，另外的疗法是小分子酶促抑制剂或抗转移剂的施用。在一些实施方案中，另外的疗法是施用副作用限制剂(例如，旨在减少治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，诸如抗恶心药剂等)。在一些实施方案中，另外的疗法是放射疗法。在一些实施方案中，另外的疗法是手术。在一些实施方案中，另外的疗法是放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，另外的疗法是伽马射线照射。在一些实施方案中，另外的疗法可以是单独施用一种或多种上文所述的治疗剂。
在本公开的另一个方面，提供含有可用于治疗、预防和/或诊断上文所述的障碍的材料的制品。制品包括容器和在容器上或与容器相关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以由各种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳有本身或与另一种组合物组合可有效治疗、预防和/或诊断病症的组合物，并且可以具有无菌进入端口(例如，容器可以是静脉内输液袋或具有可通过皮下注射针穿透的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装说明书指示所述组合物用于治疗选择的病症。此外，制品可以包含(a)在其中含有的组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体；和(b)在其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包含另外的细胞毒性剂或其他治疗剂。本发明的该实施方案中的制品还可以包含包装说明书，所述包装说明书指示所述组合物可以用于治疗特定病症。可替代地或另外，制品还可以包含第二(或第三)容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，诸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。其还可以包含从商业和用户角度期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针和注射器。
因此，还设想了制备和/或制备包含如本文所公开的抗CD3抗体和/或抗原结合片段的药物组合物。所述组合物可以单独或与其他活性剂组合用于治疗细胞增殖性障碍(例如，癌症)或自身免疫性障碍(例如，关节炎、类风湿性关节炎、结肠炎、炎性肠病、自身免疫性I型糖尿病等)。
在一些实施方案中，例如通过将具有所需纯度程度的这种抗体与一种或多种任选的药学上可接受的载体(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980))混合来制备包含如本文所述的抗CD3抗体和/或其抗原结合片段的药物组合物，其呈冻干配制品或水性溶液的形式，任选地制备用于改良(例如，持续)释放。示例性的冻干抗体配制品描述于美国专利号6,267,958中。水性抗体配制品包括在美国专利号6,171,586和WO2006/044908中公开的那些，后一配制品包含组氨酸-乙酸盐缓冲剂。
药学上可接受的载体一般在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，诸如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物(包括葡萄糖、甘露糖或糊精)；螯合剂诸如EDTA；糖诸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性药学上可接受的载体还包括间质药物分散剂，诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(
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BaxterInternational,Inc.)。包括rHuPH20在内的某些示例性sHASEGP和使用方法描述于美国专利公开号2005/0260186和2006/0104968中。
此类配制品可以含有对于所治疗的特定适应症所必需的多于一种活性成分，优选地具有不会彼此产生不利影响的互补活性以及以对于预期目的有效的量存在的那些活性成分。例如，可能期望进一步提供另外的治疗剂(例如，化学治疗剂、细胞毒性剂、生长抑制剂和/或抗激素剂)。
可以将活性成分包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如分别在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中或在大乳剂中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中。此类技术公开于Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)中。
实施例
表1.双特异性形式的示例性高亲和力抗CD3抗体的结合数据。
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表2.双特异性形式的抗CD3抗体的可开发性概况。
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表3.示例性抗CD3抗体的热稳定性测量。
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材料和方法
除了上文提供的描述之外，以下材料和方法用于实施例中。
FACS亲和压力选择方法。简言之，将酵母细胞(至少约2x 107个细胞/标记条件)与足以表示相对于平均IgG呈递编号的化学计量过量的一定体积的生物素化抗原一起孵育。抗原标记条件在平衡条件下为100至1nM，通常在FACS洗涤缓冲液(磷酸盐缓冲盐水(PBS)/0.1％牛血清白蛋白(BSA))中在室温下进行20分钟至数小时。在用洗涤缓冲液洗涤三次之后，然后将酵母用1:100稀释的二级试剂抗人轻链FITC缀合物(LC-FITC)、以及1:500稀释的链霉亲和素-633(SA-633)或1:50稀释的extravidin-phycoerythrin(EA-PE)在4℃下染色15分钟。在用冰冷的洗涤缓冲液洗涤两次之后，将细胞沉淀以至少1mL/1×107个酵母的典型体积重悬于洗涤缓冲液中，并转移到带过滤器盖的分选管中。使用FACS ARIA分选器(BDBiosciences)进行分选，并且确定分选门控以选择结合剂。在最后一轮分选之后，将酵母平板接种并挑取单个菌落用于表征。
FACS热压选择方法。亲本抗体通过易错PCR进行多样化，以在酵母中获得优化文库。该酵母文库首先使用CD3 N27通过正向抗原选择轮来选择表达结合剂。然后，使该富集群体经历一系列热压条件，范围从～50℃直到65℃，持续10分钟，以室温作为对照。最佳加压条件对LC呈递(抗人λPE)和抗原结合(SA-APC)进行门控，这反映了残留的折叠IgG能够结合选择试剂。对分选的细胞进行沉淀并使用商业化酵母质粒纯化试剂盒(Zymo Research)提取质粒，其中酵母细胞壁用消解酶裂解，随后通过DNA微型柱来纯化DNA。然后将质粒DNA转化到大肠杆菌中进行扩增，然后用大肠杆菌质粒纯化试剂盒(Qiagen)对质粒DNA进行小量制备分离。然后制备质粒DNA，用于转化到合适的酵母菌株中，用于后续循环选择或测序和IgG产生。
易错PCR优化。使用标准分子生物学技术对重链(VH)和/或轻链(VL)进行的基于易错PCR的诱变引入了随机多样性。简而言之，将诱变核苷酸类似物dPTP和8-氧代-dGTP以1μM的浓度掺入到VH和VL扩增过程中，以将碱基错误掺入频率增加至最多大约0.01bp。突变的PCR产物通过与含有HC或LC恒定区序列的线性化载体的同源重组来进行原位重组。这通常产生1×107-8多样性的文库。通过在降低抗原浓度(平衡压力)或与亲本Fab竞争(平衡和动力学压力)下温育抗原抗体酵母复合物不同的时间来施加亲和力和表达共压力，以在FACS上以连续几个选择轮来选择最高亲和力抗体。
基于寡核苷酸的CDR H3诱变。已发现的或此前优化的抗体可以通过CDR H3序列的多样化进行另外的优化。为此，对起始抗体的轻链可变区进行PCR扩增，然后使用酵母同源重组将所述轻链可变区插入含有轻链空载体的酵母菌株中。这构成了亲本轻链酵母菌株。起始抗体的重链与种系特异性引物结合用作PCR输入，产生含有重链的框架1至框架三的PCR产物。这种扩增使用诱变核苷酸8-氧代-dGTP来进行，以在扩增的重链区中提供另外的低水平诱变。为了在起始抗体的CDR H3区产生设计的多样性，可以产生/订购(即，从IDT)CDR H3寡核苷酸文库。寡核苷酸库使用含有5'尾的引物进行扩增，以允许与扩增的FW1-FW3区和空区域进行种系特异性重组。FW4使用通用3'引物。或者，可以进行诱变PCR，使用种系特异性5'引物、通用3'引物和VH DNA将8-氧代-dGTP纳入PCR反应中。一旦产生LC菌株、HCFW1-FW3和多样化的CDR H3-FW4输入，即可通过将两个HC组件和一个HC空载体引入LC菌株中来进行三件转换。随后，细胞在选择压力下生长，以确保存在HC和LC组件。
抗体酵母生产和纯化。将酵母克隆生长至饱和，并且然后在30℃下伴随摇动诱导48小时。在诱导后，将酵母细胞沉淀并收获上清液用于纯化。使用蛋白质A柱纯化IgG，并用乙酸pH 2.0洗脱。通过木瓜蛋白酶消化产生Fab片段，并且在KappaSelect或CaptureSelectIgG-CH1(GE Healthcare LifeSciences)上进行纯化。
抗体HEK生产和纯化。IgG的哺乳动物表达通过以下方式来完成：将抗体亚克隆到新的表达载体中，随后在HEK293ADI1(一种源自针对无团块生长、生长速率和可转染性选择的HEK293(DSMZ)的单克隆细胞系)中瞬时转染和表达。简言之，通过与转染试剂复合、随后暴露于HEK细胞一小时、随后将培养基稀释至每mL400万个细胞的最终密度来转染含有所关注的抗体的表达载体。然后每48小时用新鲜的补料培养基培养细胞7天。在7天之后，在离心后收集上清液，并且使用蛋白质A进行纯化。如果有必要，添加CHT柱纯化以达到>95％单体。
ForteBio KD测量(生物层干扰量度法；BLI)。大体上如先前所述(Estep,P.等人,High throughput solution-based measurement of antibody-antigen affinity andepitope binning.MAbs,2013.5(2):第270-8页.)进行ForteBio亲和力测量。简而言之，通过在线将IgG加载到AHQ传感器上来进行ForteBio亲和力测量。将传感器在测定缓冲液中离线平衡30分钟，并且然后在线监测60秒以进行基线建立。将具有加载的IgG的传感器暴露于100nM抗原持续5分钟，随后将它们转移到测定缓冲液中5分钟进行离速测量。使用1:1结合模型来分析动力学。
BiaCore KD测量(表面等离子共振；SPR)。使用与CM5传感器芯片对接的Biacore8K光学生物传感器(GE Healthcare,Marlboro,MA)在HBS-EP缓冲体系(10mM HEPES pH7.3、150mM NaCl、3mM EDTA、0.05％表面活性剂P20)中在25℃下进行生物传感器分析。将样品旅馆维持在10℃下。使用标准胺偶联化学将山羊抗人IgG捕获抗体(Jackson ImmunoResearchLaboratories,Inc.,West Grove,PA；109-005-098)固定(11700+/-400RU)至传感器芯片的两个流动池。这种表面类型提供了在每个再生步骤后可重复捕获新鲜分析抗原的形式。流动池2用于分析捕获的抗原(35.7+/-0.8RU)，而流动池1用作参考流动池。在运行缓冲液中制备范围为100至0.412nM(3倍稀释)的Fab浓度。每个Fab样品浓度都作为单个重复运行。还运行了两次空白(缓冲液)注射，用于评估和减去系统伪影。在30μL/min流速下，监测所有Fab浓度的结合和解离期各180秒。表面用10mM甘氨酸pH1.5再生30秒，流速为30μL/分钟。使用Biacore8K评估软件1.0版对数据进行对齐、双重引用和拟合。
Octet Red384表位框并/配体阻断。使用标准夹心形式交叉阻断测定法来进行表位框并/配体阻断。将对照抗靶标IgG上样到AHQ传感器上，并且用不相关的人IgG1抗体来阻断传感器上未占用的Fc结合位点。然后将传感器暴露于100nM靶抗原，然后暴露于第二抗靶标抗体或配体。使用ForteBio数据分析软件7.0来处理数据。在抗原缔合后第二抗体或配体的另外的结合表示未占用的表位(非竞争剂)，而不结合表示表位阻断(竞争剂或配体阻断)。
尺寸排阻色谱。使用TSKgel SuperSW mAb HTP色谱柱(22855)以0.4mL/min对酵母和哺乳动物产生的mAb进行快速SEC分析，循环时间为6分钟/运行。200mM磷酸钠和250mM氯化钠用作流动相。
动态扫描荧光测量(DSF)。将10μL 20×Sypro Orange添加至20μL 0.2-1mg/mlmAb或Fab溶液中。使用RT-PCR仪器(BioRad CFX96 RT PCR)将样品板温度以0.5℃的增量从40℃跃升至95℃，在每个温度下平衡2分钟。原始数据的一阶导数的负数被用于提取Tm。
PSR制备。如例如WO 2014/179363和Xu等人,mAbs,2013中所述制备多特异性反应性试剂(PSR)。简言之，将2.5升CHO-S细胞用作起始材料。在填装至400mL的500mL离心瓶中将细胞以2,400x g沉淀5分钟。将细胞沉淀合并，并且然后重悬于25ml缓冲液B中，并以2,400x g沉淀3分钟。将缓冲液倾析，并且将洗涤重复一次。使用polytron均化器将细胞沉淀重悬于3×沉淀体积的含有1x蛋白酶抑制剂(Roche，完全，无EDTA)的缓冲液B中，细胞保持在冰上。然后将匀浆以2,400x g离心5分钟，并且将上清液保留并再沉淀一次(2,400x g/5分钟)，以确保去除未破碎的细胞、细胞碎片和细胞核；所得上清液是总蛋白制剂。然后将上清液转移到两个Nalgene Oak Ridge 45mL离心管中，并且在4℃下以40,000×g沉淀40分钟。然后将含有分离细胞溶质蛋白(SCP)的上清液转移到干净的Oak Ridge管中，并再以40,000×g离心一次。平行地，保留含有膜级分(EMF)的沉淀，并以40,000离心20分钟以去除残余上清液。然后用缓冲液B冲洗EMF沉淀。然后将8mL缓冲液B添加到膜沉淀中以移去沉淀并转移到Dounce均化器中。在使沉淀均质化之后，将它们转移到50mL锥形管中，并代表最终的EMF制剂。
将约106–107个细胞/mL的十亿个哺乳动物细胞(例如，CHO、HEK293、Sf9)从组织培养环境中转移到4×250mL锥形管中，并以550×g沉淀3分钟。所有后续步骤在4℃下或在冰上用冰冷的缓冲液进行。将细胞用100mL PBSF(1x PBS+1mg/mL BSA)洗涤，并合并到一个锥形管中。在去除上清液之后，然后将细胞沉淀重悬于30mL缓冲液B(50mM HEPES，0.15MNaCl，2mM CaCl2，5mM KCl，5mM MgCl2，10％甘油，pH7.2)中，并以550×g沉淀3分钟。倾析缓冲液B上清液，并且将细胞重悬于3×沉淀体积的缓冲液B加2.5×蛋白酶抑制剂(Roche，完全，无EDTA)中。在缓冲液B中的蛋白酶抑制剂从此处向前都包括在内。将细胞均质化四次持续30秒脉冲(Polyton均化器，PT1200E)，并且将膜级分在4℃下以40,000x g沉淀1小时。用1mL缓冲液B冲洗沉淀；保留上清液并代表s。将沉淀转移到具有3mL缓冲液B的Dounce均化器中，并且通过缓慢地上下移动研棒以进行30-35次行程而重悬。将富集的膜级分(EMF)移动到新的收集管中，冲洗研棒以收集所有潜在的蛋白质。使用Dc-蛋白质测定试剂盒(BioRad)确定纯化EMF的蛋白质浓度。为了溶解EMF，转移到溶解缓冲液(50mM HEPES、0.15M NaCl、2mM CaCl2、5mM KCl、5mM MgCl2、1％正十二烷基-b-D-麦芽糖基吡喃糖苷(DDM)、1×蛋白酶抑制剂(pH7.2)中至最终浓度1mg/mL。将混合物在4℃旋转下旋转过夜，随后在50mL OakRidge管(Fisher Scientific,050529-ID)中以40,000x g离心离心1小时。收集代表可溶性膜蛋白(SMP)的上清液，并如上所述定量蛋白质产率。
对于生物素化，根据制备商的方案(Pierce,Thermo Fisher)制备NHS-LC-生物素储备溶液。简而言之，每1mg EMF样品添加20μl生物素试剂，并在4℃下伴随轻轻搅拌孵育3小时。用缓冲液B调整体积至25mL，并转移至Oak Ridge离心管中。将生物素化EMF(b-EMF)以40,000x g沉淀1小时，并在不干扰沉淀的情况下用3mL缓冲液C(缓冲液B减去甘油)冲洗两次。去除残余溶液。如先前所述，用Dounce均化器将沉淀重悬于3mL缓冲液C中。重悬浮的沉淀现在代表生物素化的EMF(b-EMF)。如上所述溶解以制备b-SMP。
PSR结合分析。一般如例如例如以下文献中所述进行测定：Xu等人为了表征在酵母上呈现的单克隆抗体的PSR谱，将200万个呈现IgG的酵母转移到96孔测定板中，并以3000×g沉淀3分钟以去除上清液。将沉淀重新悬浮于50μl新鲜制备的1:10稀释的b-PSR储液中，并在冰上孵育20分钟。用200μl冷的PBSF洗涤细胞两次，并将沉淀重悬于50μl二级标记混合物(Extravidin-R-PE、抗人LC-FITC和碘化丙啶)中。将混合物在冰上孵育20分钟，随后用200μl冰冷的PBSF洗涤两次。将细胞重悬于100μl冰冷的PBSF中，并使用HTS样品进样器在FACSCanto(BD Biosciences)上运行板。针对R-PE通道中的平均荧光强度分析流式细胞术数据，并将其归一化至适当对照，以便评估非特异性结合。在酵母表面上呈递或展示抗体或抗体片段的多种方法此前已经有所描述，所有这些方法都与该方案一致(Blaise等人,2004,Boder和Wittrup,1997,Kuroda和Ueda,2011,Orcutt和Wittrup,2010,Rakestraw等人,2011,Sazinsky等人,2008,Tasumi等人,2009,Vasquez等人,2009)。
ForteBio动力学。FortBio Octet HTX仪器用于配备有AHC、SA或AHQ传感器的12通道模式(每个通道8个传感器，每个实验96个传感器)。仪器由制备商供应的软件(版本8.2和9.0)驱动。将样品名称和浓度输入到板数据页中，并且在传感器数据页上的“信息”列中识别传感器相关蛋白。用90或180s基线、180s关联期和180s解离期收集动力学实验。框并实验以5个步骤收集：90s的基线1、90s的传感器与二级结合剂的结合检查、90s的基线2、180s的关联和180s的在含有二级mAb的孔中的解离。以识别实验格式的命名惯例将所有文件保存到共享网络驱动器中。
HIC。使用Zeba 40kDa 0.5mL旋转柱(Thermo Pierce，商品目录号87766)将IgG1样品缓冲液交换成1M硫酸铵和0.1M磷酸钠(pH 6.5)。在Dionex ProPac HIC-10柱上建立从1.8M硫酸铵、0.1M磷酸钠(pH 6.5)至不含硫酸铵的相同条件的盐梯度。梯度以0.75ml/分钟的流速运行17分钟。在运行结束时添加乙腈洗涤步骤以去除任何剩余的蛋白质，并且在下一个进样周期之前在7个柱体积内重新平衡柱。在A280吸光度下监测峰保留时间，并且基于梯度和流速计算洗脱时的硫酸铵浓度。
LCMS。通过DTT减少mAb样品，随后在与Agilent 1100HPLC(Agilent)偶联的BrukermaXis4G质谱仪上进行中降LCMS分析。使用POROS R2 10μm(2.1x30mm)反相柱去除样品中的盐。在2mL/min下的快速LC流速允许分离样品和盐，洗脱样品，并在2.1分钟的周期内完成柱的再生。T形结用于仅将0.15mL/min的样品流递送至质谱仪中用于样品分析。Bruker maXis4G质谱仪以正离子模式运行，在750至2500m/z的范围内进行检测。其余的源参数设置如下；将毛细管设定为5500V，将雾化器设定为4.0巴，将干燥气体设定为4.0l/分钟，并将干燥温度设定为200C。
使用Bruker Data Analysis 4.1版分析MS光谱，并使用质量范围为20至30kDa的最大熵反褶积完成反褶积。
表4中提供了非正式序列列表。非正式序列列表提供了重链可变区(“HC”)氨基酸序列(其中重链可变区CDR中的每一个加下划线)、以及轻链可变区(“LC”)(其中轻链可变区CDR中的每一个加下划线)。
表4.非正式序列表。
Figure BDA0003339538060000441
Figure BDA0003339538060000451
Figure BDA0003339538060000461
Figure BDA0003339538060000471
Figure BDA0003339538060000481
Figure BDA0003339538060000491
Figure BDA0003339538060000501
Figure BDA0003339538060000511
表5.抗体VH序列信息。
Figure BDA0003339538060000521
Figure BDA0003339538060000531
Figure BDA0003339538060000541
Figure BDA0003339538060000551
Figure BDA0003339538060000561
Figure BDA0003339538060000571
Figure BDA0003339538060000581
表6.抗体VL序列信息。
Figure BDA0003339538060000591
Figure BDA0003339538060000601
Figure BDA0003339538060000611
Figure BDA0003339538060000621
Figure BDA0003339538060000631
Figure BDA0003339538060000641
表7.人和食蟹猴CD3ε序列
Figure BDA0003339538060000651
序列表
<110> 阿迪玛布有限责任公司（ADIMAB, LLC）
<120> 高亲和力抗CD3抗体及其
产生和使用方法
<130> 1160430.001813
<150> 62/858,949
<151> 2019-06-07
<160> 134
<170> PatentIn 版本3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是K、A、T或V（Lys、Ala、Thr或Val）
<400> 1
Xaa Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 2
Ala Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 3
Thr Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 4
Val Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 5
Lys Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Ala或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Arg或Gln
<400> 6
Xaa Arg Asp Ala Tyr Gly Xaa Tyr Phe Tyr Asp Val
1 5 10
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Gly、Met、Asn或Arg
<400> 7
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Xaa Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 8
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 9
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 10
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 11
Trp Ala Ser Thr Arg Ser Ser
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Ile、Asn或Val
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Met或Ile
<400> 12
Phe Asn Xaa Lys Asp Tyr Tyr Xaa His
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 13
Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Glu或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> Ala、His或Thr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> Phe或Leu
<400> 14
Trp Ile Asp Leu Xaa Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Xaa Lys Xaa Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 15
Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 16
Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Ile Tyr Asp Ala Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 18
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 19
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 19
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 20
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Ala Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 21
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 21
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ile Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 22
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Ala Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 23
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 23
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Val Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 24
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Gly Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 25
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 26
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 28
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
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65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Val Gln
85 90 95
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100 105 110
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Glu Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 31
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
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Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
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115
<210> 32
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 34
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
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<210> 35
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
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100 105 110
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 38
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
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<210> 39
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 39
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Glu Leu Leu Asn Ala
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<210> 40
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
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100 105 110
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115
<210> 41
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 41
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
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100 105 110
<210> 42
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 42
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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100 105 110
<210> 43
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 43
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
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<210> 44
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
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100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 45
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
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Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 46
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 46
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Thr Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
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Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 47
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 47
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
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85 90 95
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100 105 110
<210> 48
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 48
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Arg Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Gly Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 49
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
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85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 51
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 52
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Ala Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 53
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 53
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Val Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 54
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Ala Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 55
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Ile Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 56
Gln Ala Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Thr Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 57
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp His Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 58
Gln Ala Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Gly Thr Ala His
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Asn Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 61
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 61
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 62
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Gly Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 64
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Val Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 65
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 65
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Thr Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 66
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Thr Ser Gln Gly Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
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Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Val Gln
85 90 95
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100 105 110
<210> 67
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 67
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 68
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 68
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala
20 25 30
Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Tyr Phe Arg Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 69
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 69
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Asn Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 70
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 71
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 72
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 72
Gln Ala Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 73
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 73
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Glu Glu Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 74
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 74
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Pro Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 75
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 76
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 77
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Glu Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 78
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 78
Phe Asn Asn Lys Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 79
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 79
Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 80
Phe Asn Val Lys Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 81
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 81
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 82
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Pro Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 83
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 83
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Leu Gly
1 5 10
<210> 84
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 84
Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 85
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 85
Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Thr Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 86
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 86
Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp His Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 87
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 87
Trp Ile Asp Leu Asn Asn Ala Asn Thr Val Tyr Asp Ala Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 88
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 88
Trp Ile Asp Leu Glu Asn Ala Asn Ala Val Tyr Asp Ala Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 89
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 89
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 90
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 90
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Asn Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 91
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 91
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 92
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 92
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 93
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 93
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Gly Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 94
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 94
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Gly Thr Ala His Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 95
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 95
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Ile Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 96
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 96
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Ala Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 97
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 97
Arg Val Ala Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 98
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 98
Arg Val Thr Ile Ala Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 99
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 99
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Ala Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 100
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 100
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Gly Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 101
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 101
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 102
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 102
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Gly Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 103
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 103
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val
1 5 10
<210> 104
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 104
Ala Arg Asp Ala Tyr Gly Gln Tyr Phe Tyr Asp Val
1 5 10
<210> 105
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 105
Val Arg Asp Ala Tyr Gly Arg Tyr Phe Tyr Asp Val
1 5 10
<210> 106
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 106
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 107
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 107
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 108
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 108
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 109
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 109
Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 110
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 110
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 111
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 111
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Ile Ile Asn Cys
20
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 112
Lys Thr Ser Gln Gly Leu Leu Asn Ala Arg Thr Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 113
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 113
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Arg Arg Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 114
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 114
Lys Ser Ser Gln Glu Leu Leu Asn Ala Arg Thr Gly Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 115
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 115
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Met Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 116
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 116
Lys Thr Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ala Arg Thr Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 117
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 117
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 118
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 118
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Glu Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 119
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 119
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 120
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 120
Trp Ala Ser Ala Arg Glu Ser
1 5
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 121
Trp Gly Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 122
Trp Ala Phe Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 123
Trp Ala Ser Met Arg Glu Ser
1 5
<210> 124
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 124
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Asn
1 5
<210> 125
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 125
Ala Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 126
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 126
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 127
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 127
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 128
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 128
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 129
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 129
Ser Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5
<210> 130
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 130
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 131
<211> 335
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 131
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro
20 25 30
Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp
35 40 45
Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys
50 55 60
Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg
65 70 75 80
Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg
85 90 95
Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Gly Gly Ser Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 132
<211> 326
<212> PRT
<213> 食蟹猴（Cynomolgus）
<400> 132
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Gln
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Ser Gln His Leu
20 25 30
Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys Asn Lys Glu Asp Ser
35 40 45
Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu Met Glu Gln Ser Gly
50 55 60
Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro Glu Asp Ala Ser His
65 70 75 80
His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp
85 90 95
Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
100 105 110
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala
165 170 175
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列：合成肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 133
Trp Ala Ser Thr Arg Xaa Ser
1 5
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人工序列：合成肽
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 134
Xaa Gln Ser Tyr Phe Arg Arg Thr
1 5

Claims (24)

1.一种抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含：
a.可变重(VH)链多肽，所述可变重链多肽包含：
i.FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH CDR1(CDRH1)；
ii.WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH CDR2(CDRH2)；
iii.ARDAYGRYFYDV(SEQ ID NO:103)的VH CDR3(CDRH3)；和/或
b.可变轻(VL)链多肽，所述可变轻链多肽包含：
i.KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL CDR1(CDRL1)；
ii.WASTRX1S(SEQ ID NO:133)的VL CDR2(CDRL2)；和
iii.X2QSYFRRT(SEQ ID NO:134)的VL CDR3(CDRL3)；
其中X1和X2各自独立地是任何氨基酸。
2.如权利要求1所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中：
a.X1是E或S；和/或
b.X2是K或V。
3.如权利要求1或权利要求2所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗体或抗原结合抗体片段包含：
a.SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11的CDRL2；和/或
b.SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:4的CDRL3。
4.如前述权利要求中任一项所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段选自由以下各项组成的组：
a.抗CD3抗体或抗原结合抗体片段：其包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH链CDR1(CDRH1)、WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH链CDR2(CDRH2)和ARDAYGRYFYDV(SEQ IDNO:103)的VH链CDR3(CDRH3)；和/或KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL链CDR1(CDRL1)、WASTRES(SEQ ID NO:10)的VL链CDR2(CDRL2)和KQSYFRRT(SEQ ID NO:5)的VL链CDR3(CDRL3)；和
b.抗CD3抗体或抗原结合抗体片段：其包含FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)的VH链CDR1(CDRH1)、WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)的VH链CDR2(CDRH2)和ARDAYGRYFYDV(SEQ IDNO:103)的VH链CDR3(CDRH3)；和/或KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)的VL链CDR1(CDRL1)、WASTRSS(SEQ ID NO:11)的VL链CDR2(CDRL2)和VQSYFRRT(SEQ ID NO:4)的VL链CDR3(CDRL3)。
5.如前述权利要求中任一项所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含：
a.VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
b.VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；
c.VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34的氨基酸序列；
d.VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
e.VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；和/或
f.VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。
6.如前述权利要求中任一项所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含：
a.VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
b.VL链多肽，所述VL链多肽包含与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；和VH链多肽，所述VH链多肽包含与SEQ ID NO:17具有至少95％序列同一性的氨基酸序列；
c.VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；
d.VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQID NO:17的氨基酸序列；和/或
e.VL链多肽，所述VL链多肽包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列；和VH链，所述VH链包含SEQID NO:17的氨基酸序列。
7.如前述权利要求中任一项所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段以约500pM或更小、约450pM或更小、约400pM或更小、约350pM或更小、约300pM或更小、约250pM或更小、约200pM或更小、约150pM或更小或者约100pM或更小的解离常数(KD)结合至CD3，任选地其中所述CD3是人和/或食蟹猴，进一步任选地，其中所述结合亲和力通过表面等离子共振来测量。
8.如权利要求7所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中所述KD是单价KD，和/或其中所述KD使用所述抗CD3抗体或抗体片段的scFv片段来测量。
9.如前述权利要求中任一项所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中：
a.所述抗体或抗原结合抗体片段引发T细胞活化或T细胞杀伤，同时显示出将引发细胞因子产量到能够诱导细胞因子释放综合征的水平的倾向降低；
b.所述抗体或抗原结合抗体片段包括多特异性抗体；
c.所述抗体或抗原结合抗体片段包括双特异性抗体；
d.所述抗体或抗原结合抗体片段包括scFv；
e.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与肿瘤学靶标特异性地结合的至少第二抗原结合结构域；免疫肿瘤学靶标；神经退行性疾病靶标；自身免疫性障碍靶标；感染疾病靶标；代谢疾病靶标；认知障碍靶标；血脑屏障靶标；或血液疾病靶标；
f.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与选自由以下各项组成的组的抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域：17-IA、4-1BB、4Dc、6-酮基-PGFla、8-异-PGF2a、8-氧代-dG、Al腺苷受体、A33、ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RUB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM 17/T ACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-l-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗剂、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、青蒿琥酯、抗-Id、ASPARTIC、心房钠尿因子、av/b3整联蛋白、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴细胞刺激剂(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bel、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BFM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3成骨素、BMP-4BMP-2b、BMP-5、BMP-6Vgr-1、BMP-7(OP-1)、BMP-8(BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II(BRK-3)、BMP、b-NGF、BOK、铃蟾肽、骨源性神经营养因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、补体因子3(C3)、C3a、C4、C5、C5a、CIO、CA125、CAD-8、降钙素、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌相关抗原、组织蛋白酶A、组织蛋白酶B、组织蛋白酶C/DPPI、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V、组织蛋白酶X/Z/P、CBL、CCI、CCK2、CCL、CCL1、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CDlla、CDllb、CDllc、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33(p67蛋白)、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80(B7-1)、CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、CFTR、cGMP、CINC、肉毒梭菌毒素、产气荚膜梭菌毒素、CKb8-l、CLC、CMV、CMV UL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、CX3CR1、CXCL、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、细胞角蛋白肿瘤相关抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰变加速因子、des(l-3)-IGF-I(大脑IGF-1)、Dhh、地高辛、DNAM-1、DNA酶、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、EN A、内皮素受体、脑啡肽酶、eNOS、Eot、嗜酸性粒细胞趋化因子l、EpCAM、肝配蛋白B2/EphB4、EPO、ERCC、E-选择素、ET-1、因子Ila、因子VII、因子VIIIc、因子IX、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、Fas、FcRl、FEN-1、铁蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纤维蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促卵泡激素、Fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas 6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3(Vgr-2)、GDF-5(BMP-14、CDMP-1)、GDF-6(BMP-13、CDMP-2)、GDF-7(BMP-12、CDMP-3)、GDF-8(肌肉生长抑制素)、GDF-9、GDF-15(MIC-1)、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-αl、GFR-α2、GFR-α3、GITR、胰高血糖素、Glut 4、糖蛋白Ilb/IIIa(GP Ilb/IIIa)、GM-CSF、gpl30、gp72、GRO、生长激素释放因子、半抗原(NP-cap或NIP-cap)、HB-EGF、HCC、HCMV gB包膜糖蛋白、HCMV)gH包膜糖蛋白、HCMV UL、造血生长因子(HGF)、Hep B gpl20、类肝素酶、Her2、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)、Her4(ErbB-4)、单纯疱疹病毒(HSV)gB糖蛋白、HSV gD糖蛋白、HGFA、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV gpl20、HIVIIIB gp 120V3环、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFGPEM、HRG、Hrk、人心脏肌球蛋白、人巨细胞病毒(HCMV)、人生长激素(HGH)、HVEM、1-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受体、IgE、IGF、IGF结合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-18R、IL-23、干扰素(INF)-α、INF-β、IFN-γ、抑制素、iNOS、胰岛素A链、胰岛素B链、胰岛素样生长因子1、整联蛋白α2、整联蛋白α3、整联蛋白α4、整联蛋白α4/βl、整联蛋白α4/β7、整联蛋白α5(αV)、整联蛋白α5/βl、整联蛋白α5/β3、整联蛋白α6、整联蛋白βl、整联蛋白β2、干扰素γ、IP-10、1-TAC、JE、激肽释放酶2、激肽释放酶5、激肽释放酶6、、激肽释放酶11、激肽释放酶12、激肽释放酶14、激肽释放酶15、激肽释放酶LI、激肽释放酶L2、激肽释放酶L3、激肽释放酶L4、KC、KDR、角质形成细胞生长因子(KGF)、层粘连蛋白5、LAMP、LAP、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bpl、LBP、LDGF、LECT2、Lefty、路易斯Y抗原、路易斯Y相关抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-选择素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面活性物质、促黄体生成激素、淋巴毒素β受体、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金属蛋白酶、MGDF受体、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、粘蛋白(Mucl)、MUC18、缪勒管激素抑制物质、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-钙粘蛋白、NCA 90、NCAM、NCAM、脑啡肽酶、神经营养因子-3、神经营养因子-4或神经营养因子-6、神经秩蛋白、神经元生长因子(HGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、pl50、p95、PADPr、甲状旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-钙粘蛋白、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、PIGF、PLP、PP14、胰岛素原、松弛素原、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、松弛素A链、松弛素B链、肾素、呼吸道合胞病毒(RSV)F、RSV Fgp、Ret、类风湿因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T细胞受体(例如，T细胞受体α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睾丸PLAP样碱性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-β泛特异性、TGF-βRI(ALK-5)、TGF-βRII、TGF-βRllb、TGF-βRIII、TGF-βl、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、胸腺Ck-1、促甲状腺激素、Tie、TIMP、TIQ、组织因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAIL Rl Apo-2、DR4)、TNFRSFIOB(TRAIL R2 DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C(TRAIL R3 DcRl、LIT、TRID)、TNFRSF10D(TRAIL R4 DcR2、TRUNDD)、TNFRSF11A(RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSFllB(OPG OCIF、TR1)、TNFRSF12(TWEAK RFN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFF R)、TNFRSF14(HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITR AITR)、TNFRSF19(TROY TAJ、TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSFIA(TNF RI CD120a、p55-60)、TNFRSFIB(TNF RIICD120b、p75-80)、TNFRSF26(TNFRH3)、TNFRSF3(LTbR TNF RIII、TNFC R)、TNFRSF4(OX40 ACT35、TXGP1 R)、TNFRSF5(CD40 p50)、TNFRSF6(Fas Apo-1、APT1、CD95)、TNFRSF6B(DcR3 M68、TR6)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF9(4-1BB CD137、ILA)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF22(DcTRAIL R2 TNFRH2)、TNFRST23(DcTRAIL Rl TNFRH1)、TNFRSF25(DR3 Apo-3、LARD、TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10(TRAIL Apo-2配体、TL2)、TNFSF11(TRANCE/RANK配体ODF、OPG配体)、TNFSF12(TWEAK Apo-3配体、DR3配体)、TNFSF13(APRIL TALL2)、TNFSF13B(BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14(LIGHT HVEM配体、LTg)、TNFSF15(TLIA/VEGI)、TNFSF18(GITR配体AITR配体、TL6)、TNFSFIA(TNF-a连接素、DIF、TNFSF2)、TNFSF1B(TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3(LTb TNFC、p33)、TNFSF4(OX40配体gp34、TXGP1)、TNFSF5(CD40配体CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6(Fas配体Apo-1配体、APT1配体)、TNFSF7(CD27配体CD70)、TNFSF8(CD30配体CD153)、TNFSF9(4-1BB配体CD137配体)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAIL R、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、转移受体、TRF、Trk、TROP-2、TSG、TSLP、肿瘤相关抗原CA 125、表达路易斯Y相关碳水化合物的肿瘤相关抗原、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白-2、VEFGR-1(flt-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VFM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整联蛋白、血管性血友病因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)、TIM-3(T细胞免疫球蛋白和粘蛋白-3)、激素受体和生长因子；
g.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与选自以下项的抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域：BCMA、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因3)、TIM-3、CD20、CD2、CD19、Her2、EGFR、EpCAM、FcyRIIIa(CD16)、FcyRIIa(CD32a)、FcyRIIb(CD32b)、FcyRI(CD64)、Toll样受体(TLR)、TLR4、TLR9、细胞因子、IL-2、IL-5、IL-13、IL-6、IL-17、IL-12、IL-23、TNFa、TGFb、细胞因子受体、IL-2R、趋化因子、趋化因子受体、生长因子、VEGF和HGF；
h.所述抗体或抗原结合抗体片段被包含在嵌合抗原受体(CAR)中，所述嵌合抗原受体任选地包含至少一个跨膜结构域、和来自T细胞受体任选地CD3ζ亚基的至少一个细胞内结构域、以及至少一个共刺激结构域；
i.所述抗体或抗原结合抗体片段包括scFv2-Fc2和/或scFv-IgG；
j.所述抗体或抗原结合抗体片段包含IgG恒定结构域；和/或
k.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域，其中所述抗体或抗原结合抗体片段包含选自以下项的多特异性形式：Fab-Fc-scFv、“开瓶器”、Mab-scFv、Mab-Fv、双scFv、中心Fv、中心scFv、单臂中心scFv、Fab-Fab、Fab-Fv、mAb-Fv、mAb-Fab、DART、BiTE、共同轻链-IgG、TandAb、交叉-Mab、SEED、BEAT、TrioMab和DuetMab。
10.一种分离的或重组的核酸序列，所述分离的或重组的核酸序列编码如前述权利要求中任一项所述的抗体或抗原结合抗体片段。
11.一种表达载体，所述表达载体包含如权利要求10所述的分离的或重组的核酸序列。
12.一种宿主细胞，所述宿主细胞用如权利要求10所述的核酸序列转染、转化或转导，任选地哺乳动物或酵母细胞，或者含有所述核酸序列的载体。
13.一种药物组合物，所述药物组合物包含如前述权利要求中任一项所述的抗体或抗原结合抗体片段；以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
14.一种治疗需要治疗的哺乳动物的障碍的方法，其中所述障碍包括增殖性障碍、肿瘤障碍、免疫肿瘤障碍、神经障碍、神经退行性疾病或自身免疫性障碍，所述方法包括施用有效量的如权利要求1-9中任一项所述的一种或多种抗体或抗体片段，或者表达如权利要求12所述的抗体或抗体片段中的一者的宿主细胞，任选地免疫细胞，进一步任选地，T或NK细胞。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述方法还包括向所述哺乳动物施用另外的治疗剂，任选地其中所述哺乳动物是人。
16.一种抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含：
a.可变轻(VL)链多肽，所述可变轻链多肽包含X1QSYFRRT(SEQ ID NO:1)的VL CDR3(CDRL3)，任选地其中X1是K、A、T或V；
b.可变重(VH)链多肽，所述可变重链多肽包含X3RDAYGX4YFYDV(SEQ ID NO:6)的VHCDR3(CDRH3)，任选地其中X3是A或V，并且X4是R或Q；
c.可变轻(VL)链多肽，所述可变轻链多肽包含KSSQLLNARTX5KNYLA(SEQ ID NO:7)的VLCDR1(CDRL1)，任选其中X5是G、M、N或R；
d.可变轻(VL)链多肽，所述可变轻链多肽包含WASTRES(SEQ ID NO:10)或WASTRSS(SEQID NO:11)的VL CDR2(CDRL2)；
e.可变重(VH)链多肽，所述可变重链多肽包含FNX6KDYYX7H(SEQ ID NO:12)的VH CDR1(CDRH1)，其中X6是I、N或V，并且X7是M或I；和/或
f.可变重(VH)链多肽，所述可变重(VH)链多肽包含WIDLX8NANTVYDX9KX10QG(SEQ ID NO:14)的VH CDR2(CDRH2)，其中X8是E或N，X9是A、H或T，并且X10是F或L。
17.如权利要求16所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中：
a.X1是A、T或V；
b.所述CDRL3包含氨基酸序列AQSYFRRT(SEQ ID NO:2)；TQSYFRRT(SEQ ID NO:3)；VQSYFRRT(SEQ ID NO:4)；或KQSYFRRT(SEQ ID NO:5)；
c.X3是A；
d.X5是G或R；
e.所述CDRL1包含氨基酸序列KSSQSLLNARTGKNYLA(SEQ ID NO:8)或KSSQSLLNARTRKNYLA(SEQ ID NO:9)；
f.所述CDRL2包含氨基酸序列WASTRES(SEQ ID NO:10)；
g.所述CDRL2包含氨基酸序列WASTRSS(SEQ ID NO:11)；
h.X6是I；
i.X7是M；
j.所述CDRH1包含氨基酸序列FNIKDYYMH(SEQ ID NO:13)；
k.X8是E；
l.X9是A；
m.X10是F；
n.所述CDRH2包含氨基酸序列WIDLENANTVYDAKFQG(SEQ ID NO:15)；和/或
o.所述CDRH2包含氨基酸序列WIDLENANTIYDAKFQG(SEQ ID NO:16)。
18.如权利要求16或权利要求17所述的抗CD3抗体或抗原结合抗体片段，其中：
a.所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段以约500pM或更大、约500pM或更小、约450pM或更小、约400pM或更小、约350pM或更小、约300pM或更小、约250pM或更小、约200pM或更小、约150pM或更小或者约100pM或更小的解离常数(KD)结合至CD3，任选地其中所述CD3是人和/或食蟹猴，进一步任选地，其中所述结合亲和力通过表面等离子共振来测量；
b.所述抗体或抗原结合抗体片段引发T细胞活化或T细胞杀伤，同时显示出将引发细胞因子产量到能够诱导细胞因子释放综合征的水平的倾向降低；
c.所述抗体或抗原结合抗体片段包括多特异性抗体；
d.所述抗体或抗原结合抗体片段包括双特异性抗体；
e.所述抗体或抗原结合抗体片段包括scFv；
f.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与肿瘤学靶标特异性地结合的至少第二抗原结合结构域；免疫肿瘤学靶标；神经退行性疾病靶标；自身免疫性障碍靶标；感染疾病靶标；代谢疾病靶标；认知障碍靶标；血脑屏障靶标；或血液疾病靶标；
g.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与选自由以下各项组成的组的抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域：17-IA、4-1BB、4Dc、6-酮基-PGFla、8-异-PGF2a、8-氧代-dG、Al腺苷受体、A33、ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RUB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM 17/T ACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-l-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗剂、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、青蒿琥酯、抗-Id、ASPARTIC、心房钠尿因子、av/b3整联蛋白、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴细胞刺激剂(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bel、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BFM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3成骨素、BMP-4BMP-2b、BMP-5、BMP-6Vgr-1、BMP-7(OP-1)、BMP-8(BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II(BRK-3)、BMP、b-NGF、BOK、铃蟾肽、骨源性神经营养因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、补体因子3(C3)、C3a、C4、C5、C5a、CIO、CA125、CAD-8、降钙素、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌相关抗原、组织蛋白酶A、组织蛋白酶B、组织蛋白酶C/DPPI、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V、组织蛋白酶X/Z/P、CBL、CCI、CCK2、CCL、CCL1、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CDlla、CDllb、CDllc、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33(p67蛋白)、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80(B7-1)、CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、CFTR、cGMP、CINC、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)毒素、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)毒素、CKb8-l、CLC、CMV、CMV UL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、CX3CR1、CXCL、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、细胞角蛋白肿瘤相关抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰变加速因子、des(l-3)-IGF-I(大脑IGF-1)、Dhh、地高辛、DNAM-1、DNA酶、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、EN A、内皮素受体、脑啡肽酶、eNOS、Eot、嗜酸性粒细胞趋化因子l、EpCAM、肝配蛋白B2/EphB4、EPO、ERCC、E-选择素、ET-1、因子Ila、因子VII、因子VIIIc、因子IX、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、Fas、FcRl、FEN-1、铁蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纤维蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促卵泡激素、Fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3(Vgr-2)、GDF-5(BMP-14、CDMP-1)、GDF-6(BMP-13、CDMP-2)、GDF-7(BMP-12、CDMP-3)、GDF-8(肌肉生长抑制素)、GDF-9、GDF-15(MIC-1)、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-αl、GFR-α2、GFR-α3、GITR、胰高血糖素、Glut 4、糖蛋白Ilb/IIIa(GP Ilb/IIIa)、GM-CSF、gpl30、gp72、GRO、生长激素释放因子、半抗原(NP-cap或NIP-cap)、HB-EGF、HCC、HCMV gB包膜糖蛋白、HCMV)gH包膜糖蛋白、HCMVUL、造血生长因子(HGF)、Hep B gpl20、类肝素酶、Her2、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)、Her4(ErbB-4)、单纯疱疹病毒(HSV)gB糖蛋白、HSV gD糖蛋白、HGFA、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV gpl20、HIVIIIB gp 120V3环、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFG PEM、HRG、Hrk、人心脏肌球蛋白、人巨细胞病毒(HCMV)、人生长激素(HGH)、HVEM、1-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受体、IgE、IGF、IGF结合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-18R、IL-23、干扰素(INF)-α、INF-β、IFN-γ、抑制素、iNOS、胰岛素A链、胰岛素B链、胰岛素样生长因子1、整联蛋白α2、整联蛋白α3、整联蛋白α4、整联蛋白α4/βl、整联蛋白α4/β7、整联蛋白α5(αV)、整联蛋白α5/βl、整联蛋白α5/β3、整联蛋白α6、整联蛋白βl、整联蛋白β2、干扰素γ、IP-10、1-TAC、JE、激肽释放酶2、激肽释放酶5、激肽释放酶6、、激肽释放酶11、激肽释放酶12、激肽释放酶14、激肽释放酶15、激肽释放酶LI、激肽释放酶L2、激肽释放酶L3、激肽释放酶L4、KC、KDR、角质形成细胞生长因子(KGF)、层粘连蛋白5、LAMP、LAP、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bpl、LBP、LDGF、LECT2、Lefty、路易斯Y抗原、路易斯Y相关抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-选择素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面活性物质、促黄体生成激素、淋巴毒素β受体、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金属蛋白酶、MGDF受体、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、粘蛋白(Mucl)、MUC18、缪勒管激素抑制物质、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-钙粘蛋白、NCA 90、NCAM、NCAM、脑啡肽酶、神经营养因子-3、神经营养因子-4或神经营养因子-6、神经秩蛋白、神经元生长因子(HGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、pl50、p95、PADPr、甲状旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-钙粘蛋白、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、PIGF、PLP、PP14、胰岛素原、松弛素原、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、松弛素A链、松弛素B链、肾素、呼吸道合胞病毒(RSV)F、RSV Fgp、Ret、类风湿因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T细胞受体(例如，T细胞受体α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睾丸PLAP样碱性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-β泛特异性、TGF-βRI(ALK-5)、TGF-βRII、TGF-βRllb、TGF-βRIII、TGF-βl、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、胸腺Ck-1、促甲状腺激素、Tie、TIMP、TIQ、组织因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAIL Rl Apo-2、DR4)、TNFRSFIOB(TRAIL R2 DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C(TRAIL R3 DcRl、LIT、TRID)、TNFRSF10D(TRAIL R4 DcR2、TRUNDD)、TNFRSF11A(RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSFllB(OPG OCIF、TR1)、TNFRSF12(TWEAK RFN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFF R)、TNFRSF14(HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITR AITR)、TNFRSF19(TROY TAJ、TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSFIA(TNF RI CD120a、p55-60)、TNFRSFIB(TNF RIICD120b、p75-80)、TNFRSF26(TNFRH3)、TNFRSF3(LTbR TNF RIII、TNFC R)、TNFRSF4(OX40 ACT35、TXGP1 R)、TNFRSF5(CD40 p50)、TNFRSF6(Fas Apo-1、APT1、CD95)、TNFRSF6B(DcR3 M68、TR6)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF9(4-1BB CD137、ILA)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF22(DcTRAIL R2TNFRH2)、TNFRST23(DcTRAIL Rl TNFRH1)、TNFRSF25(DR3 Apo-3、LARD、TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10(TRAIL Apo-2配体、TL2)、TNFSF11(TRANCE/RANK配体ODF、OPG配体)、TNFSF12(TWEAK Apo-3配体、DR3配体)、TNFSF13(APRIL TALL2)、TNFSF13B(BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14(LIGHT HVEM配体、LTg)、TNFSF15(TLIA/VEGI)、TNFSF18(GITR配体AITR配体、TL6)、TNFSFIA(TNF-a连接素、DIF、TNFSF2)、TNFSF1B(TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3(LTb TNFC、p33)、TNFSF4(OX40配体gp34、TXGP1)、TNFSF5(CD40配体CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6(Fas配体Apo-1配体、APT1配体)、TNFSF7(CD27配体CD70)、TNFSF8(CD30配体CD153)、TNFSF9(4-1BB配体CD137配体)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAIL R、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、转移受体、TRF、Trk、TROP-2、TSG、TSLP、肿瘤相关抗原CA 125、表达路易斯Y相关碳水化合物的肿瘤相关抗原、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白-2、VEFGR-1(flt-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VFM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整联蛋白、血管性血友病因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原-4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因-3)、TIM-3(T细胞免疫球蛋白和粘蛋白-3)、激素受体和生长因子；
h.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与选自以下项的抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域：BCMA、CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞抗原4)、PD1(程序性细胞死亡蛋白1)、PD-L1(程序性细胞死亡配体1)、LAG-3(淋巴细胞活化基因3)、TIM-3、CD20、CD2、CD19、Her2、EGFR、EpCAM、FcyRIIIa(CD16)、FcyRIIa(CD32a)、FcyRIIb(CD32b)、FcyRI(CD64)、Toll样受体(TLR)、TLR4、TLR9、细胞因子、IL-2、IL-5、IL-13、IL-6、IL-17、IL-12、IL-23、TNFa、TGFb、细胞因子受体、IL-2R、趋化因子、趋化因子受体、生长因子、VEGF和HGF；
i.所述抗体或抗原结合抗体片段被包含在嵌合抗原受体(CAR)中，所述嵌合抗原受体任选地包含至少一个跨膜结构域、和来自T细胞受体任选地CD3ζ亚基的至少一个细胞内结构域、以及至少一个共刺激结构域；
j.所述抗体或抗原结合抗体片段包括scFv2-Fc2和/或scFv-IgG；
k.所述抗体或抗原结合抗体片段包含IgG恒定结构域；和/或
l.所述抗体或抗原结合抗体片段包含与抗原特异性地结合的至少第二抗原结合结构域，其中所述抗体包含选自以下项的多特异性形式：Fab-Fc-scFv、“开瓶器”、Mab-scFv、Mab-Fv、双scFv、中心Fv、中心scFv、单臂中心scFv、Fab-Fab、Fab-Fv、mAb-Fv、mAb-Fab、DART、BiTE、共同轻链-IgG、TandAb、交叉-Mab、SEED、BEAT、TrioMab和DuetMab。
19.一种抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含Ab1-Ab50中的任何一者或多者的一个或多个CDR。
20.一种抗分化簇三(“CD3”)抗体或抗体片段，其中所述抗CD3抗体或抗原结合抗体片段包含一个或多个VH和/或VL链，所述VH和/或VL链包含选自表4中的氨基酸序列。
21.一种分离的或重组的核酸序列，所述分离的或重组的核酸序列编码如权利要求16-20中任一项所述的抗体或抗原结合抗体片段。
22.一种表达载体，所述表达载体包含如权利要求21所述的分离的或重组的核酸序列。
23.一种宿主细胞，所述宿主细胞用如权利要求21所述的核酸序列转染、转化或转导，任选地哺乳动物或酵母细胞，或者含有所述核酸序列的载体。
24.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求16-20中任一项所述的抗体或抗原结合抗体片段；以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
一种治疗需要治疗的哺乳动物的障碍的方法，其中所述障碍包括增殖性障碍、肿瘤障碍、免疫肿瘤障碍、神经障碍、神经退行性疾病或自身免疫性障碍，所述方法包括施用有效量的如权利要求16-20中任一项所述的一种或多种抗体或抗体片段，或者表达如权利要求23所述的抗体或抗体片段中的一者的宿主细胞，任选地免疫细胞，进一步任选地，T或NK细胞。
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