CN114137116A - 一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，以0.02mol/l四丁基氢氧化铵溶液（取水950ml与40%四丁基氢氧化铵16.7ml混合，用冰醋酸调节pH至4.5）‑甲醇（95：5）为流动相进行等度洗脱。本发明通过对高效液相色谱分析中的色谱柱、流动相等条件进行筛选，选用合适的缓冲溶液体系，在流动性的比例调节上，保证稀释剂和辅料不干扰样品中烟酰胺的检测，保证烟酰胺的理论塔板数和拖尾因子符合要求，最终建立了等度洗脱的HPLC分析方法，实现了对甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测与控制。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体为一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法。
背景技术
甲硝唑，主要用于治疗或预防厌氧菌引起的系统或局部感染，如腹腔、消化道、女性生殖系、下呼吸道、皮肤及软组织、骨和关节等部位的厌氧菌感染，对败血症、心内膜炎、脑膜感染以及使用抗生素引起的结肠炎也有效。治疗破伤风常与破伤风抗毒素(TAT)联用。还可用于口腔厌氧菌感染。甲硝唑凝胶主要用于炎症性丘疹、脓疱疮、酒渣鼻红斑的局部治疗。
甲硝唑，英文名称为metronidazole；化学名称为2-(2-Methyl-5-nitro-1H-imidazol-1-yl)ethanol；分子式为C6H9N3O3；CAS号为443-48-1，化学结构式如图2所示。
目前甲硝唑凝胶仅在国外上市，尚未进口到国内；甲硝唑凝胶被国内外药典收录，但没有烟酰胺的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，可以有效的保证药品的安全性和有效性，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，包括以下步骤：
S1：溶液的配制：称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取1%甲硝唑凝胶0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；
取烟酰胺对照25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
S2：精密量取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
S3：精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
更进一步地，S2中高效液相色谱仪条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，250*4.6mm，5μm；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
流动相：0.02mol/l四丁基氢氧化铵溶液和甲醇。
更进一步地，四丁基氢氧化铵溶液的配比为：取水950ml与40%四丁基氢氧化铵16.7ml混合，用冰醋酸调节pH至4.5。
更进一步地，甲醇的浓度配比为水：甲醇=95:5。
更进一步地，记录色谱图时按烟酰胺峰计，塔板数不小于3000，拖尾因子不大于2.0。
更进一步地，烟酰胺含量在1.125%-1.375%之间。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，通过对高效液相色谱分析中的色谱柱、流动相等条件进行筛选，选用合适的缓冲溶液体系，在流动性的比例调节上，保证稀释剂和辅料不干扰样品中烟酰胺的检测，保证烟酰胺的理论塔板数和拖尾因子符合要求，最终建立了等度洗脱的HPLC分析方法，实现了对甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测与控制。
附图说明
图1为本发明实施例1检测甲硝唑凝胶中的烟酰胺的对照品溶液图。
图2为本发明甲硝唑的化学结构式图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，包括以下步骤：
第一步：溶液的配制：称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取1%甲硝唑凝胶0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；取烟酰胺对照25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
第二步：精密量取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，高效液相色谱仪条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，250*4.6mm，5μm；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
流动相：0.02mol/l四丁基氢氧化铵溶液（取水950ml与40%四丁基氢氧化铵16.7ml混合，用冰醋酸调节pH至4.5）-甲醇（95：5）；
第三步：精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按烟酰胺峰计，理论塔板数应不小于3000，拖尾因子不大于2.0。
为了进一步更好的解释说明本发明，还提供如下具体的实施例：
实施例一：
检测甲硝唑凝胶中的烟酰胺：按照高效液相色谱法测定（中国药典2015年版通则0512）。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（250*4.6mm，5μm）；以0.02mol/l四丁基氢氧化铵溶液（取水950ml与40%四丁基氢氧化铵16.7ml混合，用冰醋酸调节pH至4.5）-甲醇（95：5）为流动相，柱温为30℃；检测波长为254nm；流速为1.0ml/min。取烟酰胺对照约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按烟酰胺峰计，理论塔板数应不小于3000，拖尾因子不大于2.0。
如图1所示，测定法：称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取1%甲硝唑凝胶约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。按外标法计算，烟酰胺含量应在1.125%-1.375%之间。
1、系统适用性试验：
取烟酰胺对照约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按烟酰胺峰计，理论塔板数应不小于3000，拖尾因子不大于2.0。
2、专属性试验：
称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取1%甲硝唑凝胶约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；取烟酰胺对照约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取甲硝唑凝胶（不含烟酰胺）约0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为空白辅料溶液。试验结果如下：
3、烟酰胺的线性回归：
称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取烟酰胺对照约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，作为线性贮备液；分别移取线性贮备液1.5ml、1.2ml、1.0ml、0.8ml、0.5ml置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为150%、120%、100%、80%、50%的线性溶液。试验结果如下：
试验结果表明，烟酰胺在0.0246mg/ml-0.0738mg/ml的范围内，溶液浓度与其峰面积呈良好的线性关系，线性方程为y = 31149x +8.4890，线性相关系数R为1.000，结果符合要求。
4、烟酰胺的回收率：
称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取烟酰胺对照约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，作为回收率贮备液；
50%供试品溶液：取空白辅料约80mg，精密称定，置20ml量瓶中，精密加入回收率贮备液0.5ml，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
100%供试品溶液：取空白辅料约80mg，精密称定，置20ml量瓶中，精密加入回收率贮备液1.0ml，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
150%供试品溶液：取空白辅料约80mg，精密称定，置20ml量瓶中，精密加入回收率贮备液1.5ml，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。
对照品溶液：取烟酰胺对照约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀。试验结果如下：
由上述试验结果表明：本方法的回收率试验结果符合药典规定。
综上所述：本发明提供的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，通过对高效液相色谱分析中的色谱柱、流动相等条件进行筛选，选用合适的缓冲溶液体系，在流动性的比例调节上，保证稀释剂和辅料不干扰样品中烟酰胺的检测，保证烟酰胺的理论塔板数和拖尾因子符合要求，最终建立了等度洗脱的HPLC分析方法，实现了对甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测与控制。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：溶液的配制：称取乙酸钠6.8g，加水100l使溶解，用冰醋酸调节pH至4.7，作为稀释剂；取1%甲硝唑凝胶0.2g，精密称定，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；
取烟酰胺对照25mg，精密称定，置25ml量瓶中，用20%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密移取该溶液1ml至20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
S2：精密量取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
S3：精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
2.如权利要求1所述的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，其特征在于，S2中高效液相色谱仪条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，250*4.6mm，5μm；
柱温：30℃；
检测波长：254nm；
流速：1.0ml/min；
流动相：0.02mol/l四丁基氢氧化铵溶液和甲醇。
3.如权利要求2所述的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，其特征在于，四丁基氢氧化铵溶液的配比为：取水950ml与40%四丁基氢氧化铵16.7ml混合，用冰醋酸调节pH至4.5。
4.如权利要求2所述的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，其特征在于，甲醇的浓度配比为水：甲醇=95:5。
5.如权利要求2所述的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，其特征在于，记录色谱图时按烟酰胺峰计，塔板数不小于3000，拖尾因子不大于2.0。
6.如权利要求1所述的一种甲硝唑凝胶中烟酰胺含量的检测方法，其特征在于，烟酰胺含量在1.125%-1.375%之间。
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