CN114134215A - 一种多通道核酸二次扩增试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多通道核酸二次扩增试剂盒及其检测方法，包括盒体(1)，盒体(1)上设置有多个横向依次排列的一分多腔室(2)，一分多腔室(2)上方设有横向连通的主通道(3)；主通道(3)一端连通有加样腔(4)，另一端设有一分多气孔(8)；所述加样腔(4)设有加样孔(11)和加样腔气孔(10)；每个一分多腔室(2)分部通过下侧的弯折液路(5)与第二次PCR反应仓(6)连通。本发明能够同时进行多个不同体系下的核酸二次扩增，效率极高，而且无需转移样本容易，可避免引入外界污染，检测精度更高。
Description
技术领域
本发明涉及一种多通道核酸二次扩增试剂盒及其检测方法，属于医学检测技术领域。
背景技术
聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析。PCR检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。
PCR反应是利用扩增核酸片段的特异性，使用一对引物去扩增完整的核酸片段。为了能够进一步提高PCR反应的特异性，通过需要使用另一对引物对第一次PCR产物进行第二次PCR反应进行二次扩增，有时为了检测对比，还需要使用不同的引物进行不同体系的二次扩增。但是目前没有一种试剂盒能够同时进行多个不同体系下的二次扩增。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种多通道核酸二次扩增试剂盒及其检测方法。它能够同时进行多个不同体系下的核酸二次扩增，效率极高，而且无需转移样本容易，可避免引入外界污染，检测精度更高。
本发明的技术方案：一种多通道核酸二次扩增试剂盒，其特点是：包括盒体，盒体上设置有多个横向依次排列的一分多腔室，一分多腔室上方设有横向连通的主通道；主通道一端连通有加样腔，另一端设有一分多气孔；所述加样腔设有加样孔和加样腔气孔；每个一分多腔室分部通过下侧的弯折液路与第二次PCR反应仓连通。
上述的多通道核酸二次扩增试剂盒中，所述主通道的另一侧设有废液仓。
前述的多通道核酸二次扩增试剂盒中，所述弯折液路与第二次PCR反应仓之间还设有二次加样腔，二次加样腔上设有二次加样孔。
前述的多通道核酸二次扩增试剂盒中，所述二次加样孔上设有胶塞。胶塞在压入时可以将加入的实际在气压下挤入二次加样腔。
前述的多通道核酸二次扩增试剂盒中，所述一分多腔室底部倾斜，靠近加样腔一侧的底面较高，所述弯折液路连通至底面较低一侧。
前述的多通道核酸二次扩增试剂盒中，所述盒体为扁平结构，包括耗材主体和复合在耗材主体上的封闭膜(可以一侧使用封闭膜，也可以两侧都使用封闭膜)，盒体中的一分多腔室、加样腔、主通道、弯折液路和第二次PCR反应仓均由两侧的耗材主体和封闭膜围合而成，可以简化试剂盒的结构，便于加工制造。
使用前述的多通道核酸二次扩增试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
①在加样腔中加入已经经过一次PCR反应的样本溶液，封闭加样孔；
②通过加样腔气孔向加样腔充气，在气压作用下，样本溶液经主通道以溢流的方式依次装满每个一分多腔室；
③关闭一分多气孔，继续向加样腔充气，在气压作用下，每个一分多腔室内的样本溶液被挤压穿过弯折液路至第二次PCR反应仓中与反应液进行第二次PCR反应。
前述的检测方法中，所述步骤③中的反应液通过二次加样孔添加在二次加样腔内，当样本溶液穿过二次加样腔时，反应液和样本溶液一并进入第二次PCR反应仓。
与现有技术相比，本发明可以利用气压变化使PCR反应产物进行精准的均分，然后分配到各个第二次PCR反应仓进行二次扩增，整个过程连贯、封闭，不易引入外界污染，因此精度更高，从而使得本发明能够在一个试剂盒能完整地实现多通道的二次PCR反应，不仅效率高，而且精度更高。
附图说明
图1是本发明试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例1：一种多通道核酸二次扩增试剂盒，如图1所示：包括盒体1，盒体1上设置有多个横向依次排列的一分多腔室2(本实施例举例为1分8)，一分多腔室2上方设有横向连通的主通道3；主通道3一端连通有加样腔4，另一端设有一分多气孔8；所述加样腔4设有加样孔11和加样腔气孔10；每个一分多腔室2通过下侧的弯折液路5与第二次PCR反应仓6连通。所述主通道3的另一侧设有废液仓7。所述弯折液路5与第二次PCR反应仓6之间还设有二次加样腔，二次加样腔上设有二次加样孔9。所述二次加样孔9上设有胶塞。所述一分多腔室2底部倾斜，靠近加样腔4一侧的底面较高，所述弯折液路5连通至底面较低一侧。所述盒体1为扁平结构，包括耗材主体和复合在耗材主体上的封闭膜，盒体1中的一分多腔室2、加样腔4、主通道3、弯折液路5和第二次PCR反应仓6均由两侧的耗材主体和封闭膜围合而成。
使用所述的多通道核酸二次扩增试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
①在加样腔4中加入已经经过一次PCR反应的样本溶液，封闭加样孔；
②通过加样腔气孔10向加样腔4充气，在气压作用下，样本溶液经主通道3以溢流的方式依次装满每个一分多腔室2；
③关闭一分多气孔8，继续向加样腔4充气，在气压作用下，每个一分多腔室2内的样本溶液被挤压穿过弯折液路5至第二次PCR反应仓6中与反应液进行第二次PCR反应。
所述步骤③中的反应液通过二次加样孔9添加在二次加样腔内，当样本溶液穿过二次加样腔时，反应液和样本溶液一并进入第二次PCR反应仓6。
本发明中的一分多结构，根据一分多腔室2的大小，可形成多份定量溶液。
弯折液路5(S型液路)的截面应足够小，确保在分液过程中，一分多气孔封堵之前，一分多腔室2中的溶液不会经弯折液路5流出。
二次加样孔9位于一分多腔室2与第二次PCR反应仓6之间的液路中，其孔径不应过大，避免溶液挂壁，无法流到反应腔；其孔径不应过小，避免造成加样困难或无法容纳二次加样溶液。
第二次PCR反应仓6的液路入口角度和位置应设计合理，使得两种溶液经液路流入后能直接到达反应腔底部，且不会产生气泡。
Claims (8)
1.一种多通道核酸二次扩增试剂盒，其特征在于：包括盒体(1)，盒体(1)上设置有多个横向依次排列的一分多腔室(2)，一分多腔室(2)上方设有横向连通的主通道(3)；主通道(3)一端连通有加样腔(4)，另一端设有一分多气孔(8)；所述加样腔(4)设有加样孔(11)和加样腔气孔(10)；每个一分多腔室(2)通过下侧的弯折液路(5)与第二次PCR反应仓(6)连通。
2.根据权利要求1所述的多通道核酸二次扩增试剂盒，其特征在于：所述主通道(3)的另一侧设有废液仓(7)。
3.根据权利要求1所述的多通道核酸二次扩增试剂盒，其特征在于：所述弯折液路(5)与第二次PCR反应仓(6)之间还设有二次加样腔，二次加样腔上设有二次加样孔(9)。
4.根据权利要求3所述的多通道核酸二次扩增试剂盒，其特征在于：所述二次加样孔(9)上设有胶塞。
5.根据权利要求1所述的多通道核酸二次扩增试剂盒，其特征在于：所述一分多腔室(2)底部倾斜，靠近加样腔(4)一侧的底面较高，所述弯折液路(5)连通至底面较低一侧。
6.根据权利要求1所述的多通道核酸二次扩增试剂盒，其特征在于：所述盒体(1)为扁平结构，包括耗材主体和复合在耗材主体上的封闭膜，盒体(1)中的一分多腔室(2)、加样腔(4)、主通道(3)、弯折液路(5)和第二次PCR反应仓(6)均由两侧的耗材主体和封闭膜围合而成。
7.使用权利要求1-6任一权利要求所述的多通道核酸二次扩增试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
①在加样腔(4)中加入已经经过一次PCR反应的样本溶液，封闭加样孔(11)；
②通过加样腔气孔(10)向加样腔(4)充气，在气压作用下，样本溶液经主通道(3)以溢流的方式依次装满每个一分多腔室(2)；
③关闭一分多气孔(8)，继续向加样腔(4)充气，在气压作用下，每个一分多腔室(2)内的样本溶液被挤压穿过弯折液路(5)至第二次PCR反应仓(6)中与反应液进行第二次PCR反应。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：所述步骤③中的反应液通过二次加样孔(9)添加在二次加样腔内，当样本溶液穿过二次加样腔时，反应液和样本溶液一并进入第二次PCR反应仓(6)。
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