CN114134154B - IbMYB1-3基因、特异性分子标记及应用和一种植物育种的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于农作物遗传育种的领域，涉及IbMYB1‑3基因、特异性分子标记及应用和一种植物育种的方法。本发明提供了IbMYB1基因家族的一个新成员IbMYB1‑3，该基因的功能明显区别于国内外已报导的其他IbMYB1基因。利用该基因的功能特性能可有效创制紫色茎叶的甘薯种质资源，为彩色甘薯种质资创制提供了一个新的优异基因资源，对甘薯遗传育种具有重要应用价值。
Description
技术领域
本发明属于农作物遗传育种的领域，具体涉及IbMYB1-3基因、特异性分子标记及应用和一种植物育种的方法。
背景技术
甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)俗称红薯、番薯、山芋、红苕、地瓜等，是世界上重要的粮食作物，因其粮食、饲料、蔬菜及加工原料兼宜，为保障国家粮食安全、提高人民健康水平做出了重要贡献。我国甘薯产业的发展逐步由满足饱腹需求转变为保健需求，食品加工用、蔬菜用、观赏用、保健用等类型的甘薯产业发展迅速，产业的经济效益提升显著。甘薯富含的花色苷成分在植物的同类天然提取物中最为稳定，作为天然色素已成为食品加工中重要的添加原料。同时，甘薯花色苷积累极为丰富的多态性，为甘薯茎叶提供了极为亮丽色彩，使得甘薯跻身为绿化植物的典范。
人们最早对高花青素型甘薯种质资源的利用是紫心甘薯品种的选育。上世纪70年代日本专家梅林芳树从甘薯品种资源中筛选了富含紫色花青素的材料，经过多代杂交和后代筛选，于1982年杂交培育获得的“山川紫”。日本先后利用‘Yamagawamurasaki’、‘Chiranmurasaki紫色甘薯种质资源，培育出‘Ayamurasaki’、“Murasakimasari”、“Akemurasaki”等紫心甘薯新品种。甘薯中IbMYB1基因家族是目前唯一被克隆的调控薯块紫色素积累的主效基因，研究发现该基因在甘薯薯块中特异性表达，在地上部茎叶几乎不表达。甘薯基因组中至少存在IbMYB1-1、IbMYB1-2a与IbMYB1-2b三个基因成员。IbMYB1-1为一个假基因，与甘薯花青素积累无必然关系。IbMYB1-2a与IbMYB1-2b是紫心甘薯花色苷积累调控的主效位点，大部分紫心甘薯品种携带有IbMYB1-2a与IbMYB1-2b基因。我国对高花青素型甘薯种质资源的挖掘与利用工作起步较晚，官方有记录的引进紫薯的时间是2002年，然而目前已培育出近100个紫心甘薯品种，相关产业蓬勃发展。我国较大部分紫心甘薯品种携带有IbMYB1-2a与IbMYB1-2b基因拷贝，引进的紫心甘薯种质资源血统对我国紫心甘薯育种工作的影响较大。
20世纪90年代初，美国北卡罗来纳州立大学从全球范围内开始了彩色茎叶甘薯种质资源的收集工作，并通过遗传育种改良培育出了Sweet Caroline Purple等彩色系列观赏型甘薯品种，其后美国创制出一大批适宜于园艺种植的种质资源材料。以SweetCaroline系列为母本培育出的“Blackie”是第一个用于绿化产业的观赏甘薯品种。该系列材料在美国多数已获得了知识产权保护，然而调控其紫色性状的关键基因尚不清楚。虽然花色苷合成相关酶基因、其他参与花色苷调控的转录因子基因都参与了花色苷的积累调控，但是不少研究认为IbMYB1能在叶片中表达，且IbMYB1的表达决定了甘薯茎叶是否呈现紫色。我们发现这种茎叶紫色的甘薯种质资源与已知的IbMYB1-2a与IbMYB1-2b基因无必然关系，推测该性状主要受IbMYB1基因家族其他成员的遗传调控，但是目前未见任何相关研究的具体报告。
发明内容
为了解决上述甘薯中调控紫色素积累的主效基因数量单一和茎叶紫色的甘薯种质资源相关优异基因挖掘力度不足的问题，本发明提供如下技术方案：
一种IbMYB1-3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
IbMYB1-3基因的启动子核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。
检测IbMYB1-3基因的特异性分子标记，特异性分子标记包括正向引物和反向引物。
正向引物包括如SEQ ID NO:2-13所示的核苷酸序列中至少一种；反向引物包括SEQ ID NO:14-19所示的核苷酸序列中至少一种。
特异性分子标记在鉴定甘薯种质资源彩色基因中的应用。
一种植物育种的方法：选择携带IbMYB1-3基因的种质资源为亲本，与其他茎叶非紫色的甘薯进行定向(或放任授粉)杂交，挑选后代获得茎叶紫色的甘薯种质资源。
本发明提供了IbMYB1基因家族的一个新成员IbMYB1-3，该基因的功能明显区别于国内外已报导的其他IbMYB1基因成员。利用该基因的功能特性能可有效创制紫色茎叶的甘薯种质资源，为彩色甘薯种质资创制提供了一个新的优异基因资源，对甘薯遗传育种具有重要应用价值。
附图说明
图1为相关材料及对照材料植株的照片。
图2为相关材料及对照材料叶片花色苷合成相关基因的表达分析(A，转录组分析花色苷合成通路的表达；B，RT-qPCR分析花色苷合成关键基因的表达)。
图3为RT-PCR分析相关材料根、茎、叶中IbMYB1基因的表达量及分子标记检测不同材料之间IbMYB1基因家族成员的基因型分布，其中Actin为内参基因。
图4为RT-qPCR分析相关材料根、茎、叶中IbMYB1基因的表达量。
图5为“紫叶观赏薯”与“湘薯99”的杂交分离群体。
图6为杂交子代继续做杂交的分离群体。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1基因IbMYB1-3的核苷酸序列(SEQ ID NO:1)：
AGCGGATCCTACGGCATGAATAATAATTAGAAGTGCAAGCTGGATAATAAATGTGCCAAGTTGGAACTTGGTATGACTACGAGGAAAGGTGGTTGGATGCCAAGGTTGTCACAGCGCCAGCCCGGCAGCCCAACTCCCTCTTTGGCTCATTTATTCATTTATGTCGCTATTGAACCGTATTGTCATCGCTGCATTTGTCCATTCAAATTAATATAAGTGTTCATCAAGTTGATTGGTTGTTAATTAATGTACAAAGTACTCTCTCTATCCTCATTGAAGTATAATGTTCACCTCTACCACACGCATAATTATTTAAGACAATAATTATTATAAGCGTTAATGACGGAGAAAATACAATTAAAATAATGGAGATGTAGTGACAGATTTTTGCTTTGAAAGGTTGTGAAGAGGACAAGCCAAATAATGGAGTTTAGCAGTGTCACACCAATGCAGTTAGTAGTTAAATAAAACTAGGTCATATACTATAGGGTGTGTTGGTTTTATAACTATGATAGTTATTAACGGTCATCCAACATAAACCAAATGGGGTAAAATTGCTAATGACGATAAGAATTAAGTTATTGCTTTGGTAGTAGAATATTACAAATTCTTTACTAGTCATTTTTCAAGGTTGAATGCATTTGGTCAAATTAGGAAACTGAATCCATAAAATATATTAATTGTTTAGATTCTGAATAAGCACGGTAAAATCTCTTTAAATTATGATAACAAATGACAAATCACTCTAATTTATCGTTCCATAAATAATTAAAAAAATACAAGTTGACTGCTTCGAGATCAACCACTCACCCGAGGACAAGAACCACAAGTCAGCTGAGGATGACCATTGGACTACTTGTCCTAACCCATTAGAGTGTATTATCCCATTTATTGAGCCTAATATAAGAGGATGGGTATATGAGAGTCAAACATCCCACTTGTTAGACTAATCTTTCAGAATGAGTTTTTTTTTTTCCTTGAGGGGTATAGGAGAGTGGAGAGAAGCTTCATCTCATTTGCTATGTGACTTCTGACTAACTTACACACCCATTGCCAAAGACCTTGTGTTCTAGTGATACTCGGTGTCCCGATTTACACTGTAGTACTCAAAAAAAAAAAACTTATACACCCCTTCACTCTCAATAATTACCATAATTATTGCAATTATTATTATTATTATTTGGTGAATCAATTGTAGTGATTGTGAATTAATGGAGTAAAATCACATGGAATGATTAAGACGAGAAACAAAAGAGAAATTGGAAAGATAAAATCAAACAGTTGGCAGGCAGATAATTGGGTAAGGGTAGGACAGTTACAGAGTATTAAATTCAGTTCCTTGTGGCTAACTACCACCTGCCCAACCATCTACTTTCCACACTCTTTAAATGTTGCCTTTCCACCTTCATTGTTGTCATTTAAAATACCCCCACACACCACCCTCACTGTAACTCTTTCTTGGACCGCCAACCTCGATCGCTGTATATAATCTACTCTATAACTGCATTCCTAACTCAGTGGTATATATAGTAGCTGTGCTAACTATATTGCAGGGCATACTTATACCAATAATTGGATGCTGCGCTATCTTCTATTATATTACTCAAGGTCGTTTCTCCATCTTTTCTTCACTTTTTTTTTCCGGAATTTTGGTGCTACCACACCCAAGTAGCCTACCTATACTACAACAACCTTAGCTAAGAATTTCCGACACCCTTCAATATATATAATGGTTATTTCATCTGTATGGTCGGGATCGTCTTCGAGAGTGAGAAAAGGTTCATGGTCCGAAGAAGAAGACCAACTTTTGAGGGAGTGCATTCAGAAATATGGTGAAGGAAAATGGCATCTAATTCCCCTTAGAGCTGGTAATTTAACCTGAATATATATTATAATTAAACTAACATTTCTATTATCACTTCATGCATGAATTTATTACTAATATTATTTTTACAGACTAAATATATATGTAGTAATCGCATATTTGTAACAATTGCAGGATTGAATAGGTGCAGAAAAAGTTGTAGATTAAGATGGTTGAATTATCTCCGTCCCGATATAAAGAGAGGCGAATTTAGTCCCGATGAAATTGATCTCATTCTGCGCCTCCATAGGCTCTTAGGCAACAGGCAAGTTCAACATATGTACTGTAGCGAGCTAGGGTTTGCTGTTTAGTTATTTTTAAAGTTAATATTTTGTGTTTAATTGATAGTAGTATGTTGGGATTGCAGCTTAGAGGGTCGAATTCAAAATATTAGGATCGAACTATGGCTTATTGTTAAATGGTTTTAAGAAAGATATGACAACTAGATAATTAAAAAATTCCATAGTTAAGTGTACTTGACTTGGTCTGTCCAATGATTGTGCTGAGAAGTAAGCATAGTGCCACTGCTGAGATCCACCGTAGCAGTAATTCCTTGTATGCTGCTAACATGTGCTTAGGTGGTCGCTTATTGCTGGAAGAATTCCGGGAAGAACAGCAAACGATGTGAAGAATTTATGGAACACCCATCTTCAGAAGAAGGTGTCTGCCATGGCTTCTTCAAGGCAAGATAATTATTGGAAGGGCAAAGCCCCAGAAATCACGGAAAACACCGTCGTTAGGCCTCGACCTCGGAGATTCTTAAAGGCCTCATCATCTCCGACGACTCTATTGACCGGAAATGCTACCATGGTTGCCTATGATGGTCAACTCCAAGAACATATGACGACACAACCGGAAACAACGTCGGACTTGCTAATGGAAAATGTCCAACAAAAAAACTTAACAACCACTTTGCCTTCAGCACTAGAAACAACGCCACACGACAATGTGAAGTGGTGGGAAGATGTACTCTCCGACAAGGAACTCAATGAGGAAGGACAAATCTGTTGGAGTGAGTTTCCAACTGATATAGACCTACTGTCAGAACTGTTAAGCTAA
该基因序列的特征有：
1、该基因为一类茎叶紫色的甘薯种质资源特有(表1，图3)。
我们对几个典型代表的甘薯种质资源进行基因型分型与比较，发现bMYB1-3为某些茎叶紫色的甘薯种质资源特有。
表1相关材料的基因型检测
| 紫叶观赏薯 | 19-Z1-1 | D7*CIP1 | 浙紫薯1号 | 湘薯99 | 湘菜薯2号 | |
| IbMYB1-1 | + | + | - | + | + | + |
| IbMYB1-2a/b | - | - | - | + | - | - |
| IbMYB1-3 | + | + | + | - | - | - |
| IbMYB2-1 | + | + | + | + | + | + |
| IbMYB2-2 | + | + | + | + | + | + |
| IbMYB2-3 | + | - | + | - | - | - |
| IbMYB2-4 | - | + | - | - | - | - |
| IbMYB2 | + | + | + | + | + | + |
| IbbHLH1 | + | + | + | + | + | + |
| IbbHLH2 | + | + | + | + | + | + |
(“+”表示检测出该基因型，“-”表示未检测出该基因型。)
基因型检测所用的引物信息如下表2：
各引物组合在PCR反应中使用的Tm值均为54℃，延伸时间按照各Taq酶试剂延伸速度与产物实际长度计算。IbMYB1-3基因检测的引物组合可以选用正向引物包括如SEQ IDNO:2-13所示的核苷酸序列中至少一种；反向引物包括SEQ ID NO:14-19所示的核苷酸序列中至少一种。
表2基因型检测所用的引物信息如下
此外，我们对“宁紫薯1号”、“宁紫薯4号”、“宁紫薯8号”、“湘紫薯174”、“徐紫薯8号”、“湘薯20”、“湘薯19”、“桂紫薇薯”、“湛59”、“紫心”、“徐1402-12”、“泉菜薯11303”、“广菜薯8号”、“湘菜薯4号”、“E8058”、“澳洲紫白”、“泰中6号”等材料进行检测(见下表3)，发现几乎所有品种携带有IbMYB1-1基因；IbMYB1-2a/b基因仅为“宁紫薯1号”、“宁紫薯8号”、“湘紫薯174”、“徐紫薯8号”、“宁紫薯8号”、“宁紫薯4号”等紫心甘薯特有，与茎叶紫色无必然关系；而IbMYB1-3基因仅存在于“徐1402-12”、“泉菜薯11303”等紫色茎叶菜用甘薯品种特有，说明IbMYB1-3基因普遍分布于这种茎叶紫色的材料。该类材料可能来源于同一个携带有IbMYB1-3基因的原始亲本材料，该基因早已被无意识的应用于紫色茎叶菜用甘薯品种的选育工作中。
表3对甘薯材料进行检测结果表
2、该基因虽然mRNA序列与氨基酸序列与已报导的IbMYB1基因完全相同，但是基因的启动子序列(如SEQ ID NO:20所示)完全区别于已公开报导的IbMYB1家族的任何基因成员。启动子的变异导致IbMYB1-3主要在茎、叶片中表达，从而获得新的表型，且IbMYB1-3基因的表达水平与叶片花色苷积累量高度相关(图2，3，4)。
3、IbMYB1-3基因为一个单基因位点控制的显性遗传基因。
携带该基因的杂合型遗传材料茎叶为紫色，其与茎叶非紫色的材料定向杂交，F1代(由于亲本本身为杂合，为实质上的F2代)紫色与非紫色性状的分离比约为1：1，IbMYB1-3的分离与紫色性状的共分离，且高度连锁，可用于分子标记开发。
表4
“紫叶31”、“紫叶38”株系后经确定为顶叶紫色、茎与成熟叶片为绿色的表型，不属于茎叶紫色类型的材料，因此未能检测出IbMYB1-3。需要注意的是，这种类型的株系虽然未检测到IbMYB1-3，但是其表型容易被统计进入茎叶紫色株系，对表型统计分析造成干扰。
4、该基因可广泛应用于彩色茎叶型甘薯种质资源的创制
应用携带有IbMYB1-3基因的紫色茎叶类型甘薯做亲本杂交，有约50％的杂交子代茎叶呈现不同程度的紫色，这种紫色的多态性为彩色甘薯种质资源的创制提供了丰富的材料。
5、本发明中针对IbMYB1-3基因检测的特异性分子标记广泛适用于甘薯种质资源彩色基因的检测。注意：并非所有的紫色茎叶甘薯都携带有该基因。
本方案中涉及的分子标记中，新开发的检测IbMYB1-3基因的正向引物有：SEQ IDNO:2-13
TRIPF1 5’-ATTCAGTTCCTTGTGGCTAA-3’(SEQ ID NO:2)
TRIPF2 5’-TTCAGTTCCTTGTGGCTAAC-3’(SEQ ID NO:3)
TRIPF3 5’-GTCATTTAAAATACCCCCACAC-3’(SEQ ID NO:4)
TRIPF4 5’-TTGGACCGCCAACCTCGAT-3’(SEQ ID NO:5)
TRIPF5 5’-GGACAAGCCAAATAATGGAGTT-3’(SEQ ID NO:6)
TRIPF6 5’-CCACTTGTTAGACTAATCTTTCAG-3’(SEQ ID NO:7)
TRIPF7 5’-GTATTATCCCATTTATTGAGCC-3’(SEQ ID NO:8)
TRIPF8 5’-CCCATTAGAGTGTATTATCCCA-3’(SEQ ID NO:9)
TRIPF9 5’-ACCCGAGGACAAGAACCACAAG-3’(SEQ ID NO:10)
TRIPF10 5’-CGGTCATCCAACATAAACCAAAT-3’(SEQ ID NO:11)
TRIPF11 5’-TATTGAACCGTATTGTCATCGC-3’(SEQ ID NO:12)
TRIPF12 5’-GACTACGAGGAAAGGTGGTTGG-3’(SEQ ID NO:13)
检测IbMYB1-1的特异性正向引物来源于参考文献(Tanaka et al.2011)：Pro_MF_M 5’-ACCTGAACCGGCCCTTATTATG-3’；
检测IbMYB1-2a与IbMYB1-2b特异性正向引物来源于参考文献(Tanaka etal.2011)：Pro_MF_A 5’-GTGGAAAACATGTGCAGTGTCATC-3’；
检测IbMYB1基因家族通用的反向引物来源于参考文献有(Tanaka et al.2011)(Dongwei et al.2015：Isolation and analysis of the promoter of IbMYB1 genefrom storage roots of purple-fleshed sweetpotato.)。
PRO_MR 5’-GGACCATGAACCTTTTCTCACTCT-3’(SEQ ID NO:14)
SP1 5’-CGATCCCGACCATACAGATGAAATAACC-3’(SEQ ID NO:15)
SP2 5’-CCTTCACCATATTTCTGAATGCACTCCC-3’(SEQ ID NO:16)
SP3 5’-CGGGACGGAGATAATTCAACCATCTTAATC-3’(SEQ ID NO:17)
MYB1-R 5’-CTTCCCACCACTTCACAT-3’(SEQ ID NO:18)
MYB1-RTR 5’-TTCTGAAGATGGGTGTTCCAT-3’(SEQ ID NO:19)
分子标记检测时，所有上游引物与下游引物任意组合皆可获得特异性分子标记的条带，这些分子标记可对IbMYB1-1、IbMYB1-2、IbMYB1-3基因进行准确的分型检测。
该基因的发现过程：
我们收集到一份甘薯种质资源“紫叶观赏薯”，其茎叶全紫色，叶片背面呈完整的紫色，薯块为红皮浅桔红肉(图1)。转录组与RT-qPCR检测发现“紫叶观赏薯”的叶片中IbMYB1表达水平较高(图2，图3，图4)，但是未在其基因组中检测到IbMYB1-2a与IbMYB1-2b基因(表1，图3)。图3(图中Actin为甘薯β-actin的内参基因)中RT-PCR分析，采用RT-qPCR分析同样的样品处理方法、引物组合及PCR反应条件，内参基因选择Actin基因，DNA中的基因型分析采用之前基因型检测的方法与条件，1.2％浓度的琼脂糖凝胶电泳检测目的条带，内参基因的循环数为28，其余目的基因的循环数为30。
转录组数据已提交到NCBI公开，详细见NCBI Short Read ArchiveNo.PRJNA721067。
RT-qPCR分析过程：
采用TRIzol的方法提取植株样品的RNA(Tiangen Biotech Co.,Ltd,Beijing,China)，以总RNA为模板合成cDNA，使用Vazyme Biotech Co.,Ltd,Nanjing,China试剂盒合成cDNA，反转录合成cDNA之前总mRNA做DNA去除处理。RT-qPCR的检测使用AceQ SYBR qPCRMaster Mix试剂(Vazyme Biotech Co.,Ltd.)与
960,Roche Diagnostics,Basel,Switzerland仪器。
RT-qPCR分析使用的引物如下表5所示，Tm值为54℃，延伸时间均为45s，检测循环数为40。表达量的分析以18s rRNA,TUA和ACT三个内参ct值的几何平均值作为内参表达量，相对表达量分析采用2-△△ct的方法计算，以“紫叶观赏薯”顶叶样品对应基因表达量为对照值“1”。
表5 RT-qPCR分析使用的引物
以IbMYB1的cDNA序列为基础设计引物，利用FNPI-PCR方法完成了IbMYB1基因5’UTR端侧翼序列的克隆，获得IbMYB1基因上游一段1.7kb的核苷酸序列，https:// www.dna.affrc.go.jp/PLACE/？％20action＝newplace与http://oberon.fvms.ugent.be: 8080/PlantCARE/预测，该序列中CAAT-BOX与TATA-BOX等启动子区的顺式作用元件极为丰富，具有启动子序列的基本特性。尽管该基因产生的mRNA序列与氨基酸序列与已知的IbMYB1基因完全相同，但是其启动子序列区别于IbMYB1基因家族已知的任何一个基因拷贝，因而确定该基因序列为IbMYB1基因家族的一个新成员，命名为IbMYB1-3基因。
我们利用这个紫色茎叶的种质资源做母本，用IbMYB1-2a，IbMYB1-2b基因缺失的“湘薯99“做父本进行定向杂交构建遗传分离群体。利用特异性分子标记检测，发现已知的IbMYB1基因家族的4个成员中，仅IbMYB1-3基因的分子标记分离比≈1：1，且杂交分离群体都不携带有IbMYB1-2a与IbMYB1-2b基因。遗传群体中紫色茎叶与非紫色茎叶的分离比≈1：1，且该性状与IbMYB1-3基因共分离，存在高度连锁关系。由于IbMYB1-3基因为此种质资源特有，因此可以确定该基因是控制紫色茎叶性状的主效基因。
实施案例
1.“紫叶观赏薯”与“湘薯99”的杂交分离群体分析
2018年冬季，我们利用“紫叶观赏薯”与“湘薯99“进行定向杂交(表型见图1)，其中“紫叶观赏薯”携带有IbMYB1-3基因，“湘薯99“不携带。2019年春季播种杂交子代后，获得约600个单株(如图5)，统计发现这些单株中有约50％呈现不同程度的紫色，紫色：非紫色分离比为1：0.9792，具体表现为：紫色单株成熟叶片背面基本呈现完整紫色，正面紫色深浅不一，但是茎顶端不完全是紫色，提供了丰富的茎叶彩色的材料。用分子标记随机抽检了50份紫色单株与50份非紫色单株，发现仅紫色单株携带有IbMYB1-3基因，说明该基因与茎叶紫色性状共分离。
2.杂交子代继续做杂交的分离群体
2019年冬季，我们用“紫叶观赏薯”的杂交子代“D7*CIP1“做母本，与”湘菜薯2号“进行定向杂交(图6)。“D7*CIP1“携带有IbMYB1-3基因，“湘菜薯2号“不携带有IbMYB1-3基因。2020年我们统计发现其杂交子代同样有接近一半单株茎叶为紫色，分子标记检测发现IbMYB1-3基因与紫色性状共分离。这充分说明本方法中IbMYB1-3的基因功能特性可广泛适用于紫色茎叶性状的种质资源材料的创制。
序列表
<110> 湖南省作物研究所
<120> IbMYB1-3基因、特异性分子标记及应用和一种植物育种的方法
<141> 2021-09-30
<160> 20
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2923
<212> DNA
<213> Ipomoea batatas
<400> 1
agcggatcct acggcatgaa taataattag aagtgcaagc tggataataa atgtgccaag 60
ttggaacttg gtatgactac gaggaaaggt ggttggatgc caaggttgtc acagcgccag 120
cccggcagcc caactccctc tttggctcat ttattcattt atgtcgctat tgaaccgtat 180
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Claims (5)
1.一种IbMYB1-3基因，其特征在于，所述IbMYB1-3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的IbMYB1-3基因，其特征在于，所述IbMYB1-3基因的启动子核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。
3.检测权利要求1或2所述IbMYB1-3基因的引物，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO:2-13所示的核苷酸序列中至少一种，所述反向引物包括SEQ ID NO:14-19所示的核苷酸序列中至少一种。
4.权利要求3所述的引物在鉴定甘薯种质资源彩色基因中的应用。
5.一种植物育种的方法，其特征在于，所述方法：选择携带权利要求1或2所述的IbMYB1-3基因的种质资源为亲本，与其他茎叶非紫色的甘薯进行定向杂交，从杂交后代挑选获得符合育种目标的茎叶紫色的甘薯种质资源。
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| 甘薯盐胁迫诱导IbDEAD1基因的克隆、生物信息学及表达分析;朱明库;孟小庆;蔡敬;李格;李宗芸;;江苏师范大学学报(自然科学版)(第03期);全文 * |
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