CN114129572B - 一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物 - Google Patents

一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物 Download PDF

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CN114129572B CN202111543542.XA CN202111543542A CN114129572B CN 114129572 B CN114129572 B CN 114129572B CN 202111543542 A CN202111543542 A CN 202111543542A CN 114129572 B CN114129572 B CN 114129572B
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Abstract

本发明公开了一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物，属于医药技术领域；所述药物组合物包括熊果酸和甘草次酸，或者包括齐墩果酸和甘草次酸；本发明的药物组合物能够显著缓解汉防己甲素诱导的肝脏HepG2细胞凋亡，以及汉防己甲素诱导的小鼠肝损伤，且二者具有协同作用，保护效果明显优于单一药物，为保证含有汉防己甲素的药物制剂的用药安全性提供了有效方法，在药物的肝毒性防治领域有较好的应用前景。

Description

一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物。
背景技术
药源性肝损伤(drug-induced liver injury)，又称药物性肝损害或药物性肝病，是指由各类处方或非处方的化学药物、生物制剂、传统中药、天然药、保健品、膳食补充剂及其代谢产物乃至辅料等所诱发的肝损伤，由于其发病机制尚不清晰，缺乏有效治疗手段成为药物安全性评价中的重要环节。其中中草药引发的药物性肝损伤的安全性问题持续引起广泛的关注。
药物性肝损伤的发病机制复杂，通常概括为药物的直接肝毒性和特异质性肝毒性作用。药物的直接肝毒性作用是指药物本身或其代谢产物对肝脏的直接损伤，具有剂量依赖性，通常可以预测。特异质肝毒性与机体对药物产生的免疫应答有关，通常很难在动物模型上复制。目前药物性肝损伤的药物治疗手段包括使用N-乙酰半胱氨酸、糖皮质激素、异甘草酸镁。有研究表明，轻至中度肝细胞损伤型和混合型药物性肝病，炎症较重者可使用双环醇和甘草酸制剂；炎症较轻者可试用水飞蓟素。胆汁淤积型药物性肝病可选用熊去氧胆酸；有报道腺苷蛋氨酸对治疗胆汁淤积型药物性肝病有效(于乐成,茅益民,陈成伟.药物性肝损伤诊治指南[J].肝脏,2015,20(10):750-767.)。
汉防己甲素(Tetrandrine，TET)是中药防己的主要成分，结构式为
Figure BDA0003415113280000011
具有多种生物活性，临床上常用于高血压、矽肺及类风湿性关节炎的治疗。研究表明，汉防己甲素在肝脏中经由CYP450s酶系代谢为甲醌代谢产物引发肝毒性(Qi,X.,et al.,ROS generated by CYP450,especiallyCYP2E1,mediate mitochondrial dysfunction induced by tetrandrine in rathepatocytes.Acta pharmacologica Sinica,2013.34(9):p.1229-1236.)，属于药物的直接肝毒性作用。
熊果酸(Ursolic Acid，UA)，结构式为
Figure BDA0003415113280000021
是一类广泛存在于蔬菜、水果及多种中药材中的五环三萜类化合物，具有抗癌、抗氧化、抗细胞凋亡等多种药理活性，齐墩果酸，结构式为
Figure BDA0003415113280000022
是一类广泛存在于蔬菜、水果以及多种中药材中的五环单萜类化合物，其化学结构与熊果酸类似，与熊果酸互为同分异构体。齐墩果酸是具有保肝作用的天然化合物，以齐墩果酸为主要成分的齐墩果酸片临床上常用于治疗慢性肝炎。甘草次酸(Glycyrrhetinic acid，GA)，结构式为
Figure BDA0003415113280000023
是甘草主要成分甘草酸的代谢产物，甘草酸具有抗炎、降压等药理作用，甘草酸通过其代谢产物甘草次酸发挥药理作用。公开号为CN103830247、CN104147017及CN113173966的中国专利申请文件中公开了甘草次酸与其他成分联合使用在治疗肝脏疾病，包括肝硬化及肝纤维化等领域的应用。
目前，尚未有使用熊果酸与甘草次酸联合使用来专属性抑制汉防己甲素诱导的肝损伤的报道。
发明内容
为克服现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物。本发明提供的包括熊果酸和甘草次酸的组合物能够显著缓解汉防己甲素诱导的肝脏HepG2细胞凋亡，以及汉防己甲素诱导的小鼠肝损伤，且二者具有协同作用，其保护效果明显优于单一药物使用。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物，所述药物组合物包括熊果酸和甘草次酸。
进一步地，所述药物组合物包括齐墩果酸和甘草次酸。
进一步地，基于细胞水平，所述甘草次酸的浓度为0.2nM时，熊果酸与甘草次酸的摩尔比为(12.5～200)∶1；所述熊果酸浓度为5nM时，熊果酸与甘草次酸的摩尔比为(5～25)∶1。进一步优选，所述熊果酸与甘草次酸的摩尔比为15∶1。
进一步地，基于细胞水平，所述甘草次酸的浓度为0.2nM时，齐墩果酸与甘草次酸的摩尔比为(12.5～200)∶1；所述齐墩果酸浓度为5nM时，齐墩果酸与甘草次酸的摩尔比为(6～25)∶1。
进一步地，在动物水平，所述熊果酸与甘草次酸的质量比为15∶1。
进一步地，在动物水平，所述齐墩果酸与甘草次酸的质量比为15∶1。
本发明还提供了上述药物组合物在制备缓解或治疗汉防己甲素引起的肝损伤的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明所提供的药物组合物具有较好的抑制汉防己甲素诱导的肝损伤的效果，能够有效抑制肝细胞的凋亡，降低血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平，并具有协同增效作用，为含有汉防己甲素的药物制剂的用药安全性提供了保护手段，在药物的肝毒性防治领域有较好的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为汉防己甲素诱导HepG2细胞凋亡的量效关系研究结果图；
图2为熊果酸、齐墩果酸抑制汉防己甲素诱导HepG2细胞凋亡的药效研究结果图；
图3为甘草次酸抑制汉防己甲素诱导HepG2细胞凋亡的药效研究结果图；
图4为熊果酸联合甘草次酸的协同指数CI研究结果图。
图5为齐墩果酸联合甘草次酸的协同指数CI研究结果图。
图6为熊果酸联合甘草次酸最佳比例的响应面分析图；其中a为等高线图，b为三维响应面示意图；
图7中，a为腹腔注射不同剂量的汉防己甲素对小鼠血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平的影响结果图，b为采用熊果酸、齐墩果酸及甘草次酸对汉防己甲素诱导的小鼠肝损伤进行解毒后，小鼠血清中谷丙转氨酶的水平测定结果图，c为采用熊果酸、齐墩果酸及甘草次酸对汉防己甲素诱导的小鼠肝损伤进行解毒后，小鼠血清中谷草转氨酶的水平测定结果图；
图8为熊果酸与甘草次酸联合应用及单独用药时对汉防己甲素诱导的肝损伤的抑制作用，其中a为血清谷丙转氨酶水平测定结果图，b为血清谷草转氨酶水平测定结果图；
图9为齐墩果酸与甘草次酸联合应用及单独用药时对汉防己甲素诱导的肝损伤的抑制作用，其中a为血清谷丙转氨酶水平测定结果图，b为血清谷草转氨酶水平测定结果图；
图10为灌胃给药不同剂量的汉防己甲素片剂对小鼠血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平的影响图；
图11为不同浓度熊果酸与甘草次酸联合应用对汉防己甲素诱导的肝损伤的抑制作用，其中a为血清谷丙转氨酶水平测定结果图，b为血清谷草转氨酶水平测定结果图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。
另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
以下实施例中采用的汉防己甲素购自北京索莱宝生物科技有限公司，货号ST8130；熊果酸购自北京索莱宝生物科技有限公司，货号SU8020；齐墩果酸购自北京索莱宝生物科技有限公司，货号SO8030；甘草次酸购自北京索莱宝生物科技有限公司，货号SE8280；谷丙转氨酶及谷草转氨酶检测试剂盒购自天津帝迈生物技术有限公司，货号WNX.002；CCK-8细胞活力检测试剂盒购自MedChemExpress公司，货号HY-K0301；HepG2细胞为人肝癌细胞，购自Procell，武汉，货号为CL-0103；以下不再重复描述。
实施例1
本发明所用的细胞为HepG2细胞。为了检测汉防己甲素对该细胞凋亡的影响，将HepG2细胞接种于96孔细胞培养板中，分为空白对照组及汉防己甲素给药组(8，9，10，20，30，40，50，60，70，80μM)。细胞生长至80％～90％时，给药不同浓度汉防己甲素，培养24小时后，使用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测细胞活力，使用GraphPad Prism 5.0计算半数抑制浓度IC50，结果如图1所示。由图1可知，汉防己甲素能够抑制HepG2细胞的细胞活力，其IC50值为33.10μM。因此选用30μM汉防己甲素作为后续细胞损伤模型的给药剂量。
实施例2
熊果酸、齐墩果酸给药后对汉防己甲素诱导的HepG2细胞损伤的保护作用的研究：HepG2细胞接种于96孔板过夜培养，实验分为空白组、汉防己甲素组(30μM)造模组、不同浓度熊果酸(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)给药组，不同浓度齐墩果酸(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)给药组，分别给药处理24小时后，利用CCK-8试剂盒检测细胞活力，考察熊果酸、齐墩果酸对汉防己甲素诱导的细胞凋亡的抑制作用。结果如图2所示，与空白组相比，汉防己甲素能够降低HepG2细胞的细胞活力，在10-8至10-5mol/L的范围内，熊果酸能够显著抑制汉防己甲素诱导的细胞凋亡，熊果酸最佳剂量为10-7mol/L，最佳浓度范围是10-9-10-7mol/L，说明熊果酸在低浓度条件下，能够有效缓解汉防己甲素诱导的细胞凋亡；而齐墩果酸能够抑制汉防己甲素诱导的细胞凋亡，有效剂量范围在10-9mol/L-10- 5mol/L，最佳剂量范围是10-9-10-7mol/L，最佳剂量为10-7mol/L。而熊果酸10-8，10-7，10-6及10-5mol/L组与等剂量的齐墩果酸组相比，无显著性差异，说明二者对汉防己甲素诱导的细胞凋亡的抑制作用具有等效性。###P<0.001表示与溶剂组相比；***P<0.001，表示与汉防己甲素组相比。
实施例3
甘草次酸给药后对汉防己甲素诱导的HepG2细胞损伤的保护作用：HepG2细胞接种于96孔板过夜培养，实验分为空白组、汉防己甲素组(30μM)造模组、不同浓度熊果酸(10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)给药组，分别给药处理24小时后，利用CCK-8试剂盒检测细胞活力，考察甘草次酸对汉防己甲素诱导的细胞凋亡的抑制作用。结果如图3所示，与空白组相比，汉防己甲素能够降低HepG2细胞的细胞活力，在10-10至10-6mol/L的浓度范围内，甘草次酸能够显著抑制汉防己甲素诱导的细胞凋亡，最佳给药浓度为10-8mol/L，最佳浓度范围是10-10-10-8mol/L，说明低浓度甘草次酸对汉防己甲素诱导的细胞凋亡具有更好的抑制作用。###P<0.001表示与溶剂组相比；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，表示与汉防己甲素组相比。
实施例4
熊果酸联合甘草次酸给药对汉防己甲素诱导的HepG2细胞损伤的保护作用的研究：HepG2细胞接种于96孔板过夜培养，实验采用汉防己甲素组(30μM)造模、同时给予不同浓度熊果酸和甘草次酸。根据实例2所得给药熊果酸的最佳浓度范围为10-9-10-7mol/L，即1～100nM，因此确定熊果酸给药剂量为2.5、5、10、20、40nM；根据实例3所得给药甘草次酸的最佳浓度范围是10-10-10-8mol/L，即0.1-10nM，因此甘草次酸的给药剂量确认为0.2、0.4、0.6、0.8、1nM。熊果酸和甘草次酸的配比见表1，给药处理24小时后，根据CCK-8试剂盒进行细胞活力检测，记录不同组别吸光度值A，按照细胞活力(％)＝A给药组/A溶剂组×100％计算联合用药组对细胞活力的影响；应用CompuSyn软件分析两种药物联合作用后的CI值，<1代表具有协同作用，＝1为相加作用，>1为拮抗作用，结果如表1和图4所示。
表1HepG2细胞中熊果酸联合甘草次酸的协同保护作用的协同指数CI值
Figure BDA0003415113280000071
由表1和图4可知，在HepG2细胞中，不同浓度的熊果酸和甘草次酸联合使用后，在部分浓度配伍条件下，其对汉防己甲素诱导的细胞凋亡具有协同抑制作用，具体为：0.2nM的甘草次酸与熊果酸联合使用具有协同作用的配伍摩尔比例为，熊果酸∶甘草次酸＝12.5:1～200:1。5nM的熊果酸与甘草次酸联合使用具有协同作用的配伍摩尔比例为，熊果酸∶甘草次酸＝5:1～25:1。
实施例5
齐墩果酸联合甘草次酸给药对汉防己甲素诱导的HepG2细胞损伤的保护作用的研究：HepG2细胞接种于96孔板过夜培养，实验采用汉防己甲素组(30μM)造模、同时给予不同浓度齐墩果酸和甘草次酸。根据实例2所得给药齐墩果酸的最佳浓度范围为10-9-10-7mol/L，即1～100nM，因此确定其给药剂量为2.5、5、10、20、40nM；根据实例3所得给药甘草次酸的最佳浓度范围是10-10-10-8mol/L，即0.1-10nM，因此甘草次酸的给药剂量确认为0.2、0.4、0.6、0.8、1nM。齐墩果酸和甘草次酸的配比见表2，给药处理24小时后，根据CCK-8试剂盒进行细胞活力检测，记录不同组别吸光度值A，按照细胞活力(％)＝A给药组/A溶剂组×100％计算联合用药组对细胞活力的影响；应用CompuSyn软件分析两种药物联合作用后的CI值，<1代表具有协同作用，＝1为相加作用，>1为拮抗作用，结果如表2和图5所示。
表2HepG2细胞中齐墩果酸联合甘草次酸的协同保护作用的协同指数CI值
Figure BDA0003415113280000081
由表2和图5可知，在HepG2细胞中，不同浓度的熊果酸和齐墩果酸联合使用后，在部分浓度配伍条件下，其对汉防己甲素诱导的细胞凋亡具有协同抑制作用，具体为：0.2nM的甘草次酸与齐墩果酸联合使用具有协同作用的配伍摩尔比例为，齐墩果酸∶甘草次酸＝12.5:1～200:1。5nM的齐墩果酸与甘草次酸联合使用具有协同作用的配伍摩尔比例为，齐墩果酸∶甘草次酸＝6:1～25:1。
实施例6
熊果酸及甘草次酸联合使用的最佳配比的确定：以熊果酸和甘草次酸的剂量为自变量，以HepG2细胞活力为因变量，利用Design Expert软件依据Centrol-Composite中心组合试验原理设计实验，通过构建响应面分析优化二者比例，实验结果见图6，等高线形状表示其交互作用的强弱，圆形说明作用弱，椭圆形说明作用强，越靠近圆形中心说明作用效果越强(图6a)。结果发现熊果酸和甘草次酸存在交互作用。通过Design Expert计算得二者最佳摩尔比为：熊果酸∶甘草次酸＝15:1。
采用上述相同方法得到齐墩果酸与甘草次酸联合使用的最佳摩尔比为：齐墩果酸∶甘草次酸＝15:1。
实施例7
汉防己甲素注射剂对实验动物肝损伤的影响的研究：实验动物品种选用昆明小鼠，雄性，体重18～20g。通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平考察汉防己甲素的肝毒性的剂量。
将实验动物随机分为4组，包括空白组，汉防己甲素的低(TET,10mg/Kg/day)、中(TET,30mg/Kg/day)、高(TET,100mg/Kg/day)剂量组，每组6只。空白组腹腔注射200μL生理盐水，其他组分别腹腔注射不同浓度汉防己甲素，连续给药7天，分别收集小鼠血清，用于谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平检测。结果如图7a显示，与空白组相比，100mg/Kg/day汉防己甲素能够显著升高血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，诱导小鼠肝脏损伤(***P<0.001)，因此选用该剂量用于后续药源性肝损伤的造模剂量。
利用该剂量的汉防己甲素诱导小鼠肝损伤模型，评价熊果酸、齐墩果酸及甘草次酸的解毒效果。将实验动物分为空白组，汉防己甲素组，谷胱甘肽组，熊果酸组(30mg/Kg)，齐墩果酸组(30mg/Kg)，甘草次酸组(2mg/Kg)，检测血清中的谷丙转氨酶及谷草转氨酶的水平变化。结果显示，与汉防己甲素组相比，熊果酸组、齐墩果酸组及甘草次酸组均降低血清中谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，这说明熊果酸、齐墩果酸及甘草次酸对汉防己甲素诱导的肝损伤具有缓解作用。同时，熊果酸组与齐墩果酸组相比，其效果无显著性差异，这说明二者的药效相似(图7b、7c)。
实施例8
熊果酸与甘草次酸药物组合对汉防己甲素注射剂诱导的药源性肝损伤的缓解作用的研究：通过熊果酸和甘草次酸单独以及联合给药的方式，在动物水平考察熊果酸联合甘草次酸的协同保护效果。
实验动物为雄性昆明小鼠(18～22g)，购自北京维通利华实验动物中心。实验动物随机分为6组，每组6只，分别为①空白组(i.p.生理盐水)；②模型组(i.p.TET，100mg/Kg/day)；③阳性对照组(GSH)(i.p.TET+GSH 120mg/Kg/day)；④甘草次酸组(GA)(i.p.TET+GA2mg/Kg/day)；⑤熊果酸组(UA)(i.p.TET+UA 30mg/Kg/day)；⑥联合组1(i.p.TET+GA1.5mg/Kg/day+UA 30mg/Kg/day)。采用腹腔注射汉防己甲素(100mg/Kg/day)建立小鼠肝损伤模型，连续腹腔注射给予对应药物7天，收集小鼠血清，检测血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，结果如图8所示，与空白组相比，汉防己甲素组显著升高谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平；与汉防己甲素组相比，单独使用熊果酸与甘草次酸均能够有效降低二者水平；而本发明中所使用的组合物(15∶1)，熊果酸和甘草次酸联合给药后，能够显著抑制血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，抑制作用明显优于单独使用(图8a，b)。***P<0.001，表示与空白组相比；###P<0.001，表示与汉防己甲素组相比；ΔΔP<0.01，ΔΔΔP<0.001，表示熊果酸组与联合使用组(GA+UA)相比；▼P<0.05，▼▼▼P<0.001，表示甘草次酸组与联合使用组(GA+UA)相比。
实施例9
齐墩果酸与甘草次酸药物组合对汉防己甲素注射剂诱导的药源性肝损伤的缓解作用的研究：通过齐墩果酸和甘草次酸单独以及联合给药的方式，在动物水平考察齐墩果酸联合甘草次酸的协同保护效果。
实验动物为雄性昆明小鼠(18～22g)，购自北京维通利华实验动物中心。实验动物随机分为6组，每组6只，分别为①空白组(i.p.生理盐水)；②模型组(i.p.TET，100mg/Kg/day)；③阳性对照组(GSH)(i.p.TET+GSH 120mg/Kg/day)；④甘草次酸组(GA)(i.p.TET+GA2mg/Kg/day)；⑤齐墩果酸组(OC)(i.p.TET+OC 30mg/Kg/day)；⑥联合组1(i.p.TET+GA1.5mg/Kg/day+OC 30mg/Kg/day)。采用腹腔注射汉防己甲素(100mg/Kg/day)建立小鼠肝损伤模型，连续腹腔注射给予对应药物7天，收集小鼠血清，检测血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，结果如图9所示，与空白组相比，汉防己甲素组显著升高谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平；与汉防己甲素组相比，单独使用齐墩果酸与甘草次酸均能够有效降低二者水平；而本发明中所使用的组合物(15∶1)，齐墩果酸和甘草次酸联合给药后，能够显著抑制血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，抑制作用明显优于单独使用(图9a，b)。***P<0.001，表示与空白组相比；###P<0.001，表示与汉防己甲素组相比；ΔΔP<0.01，ΔΔΔP<0.001，表示熊果酸组与联合使用组(GA+OC)相比；▼P<0.05，▼▼▼P<0.001，表示甘草次酸组与联合使用组(GA+OC)相比。
实施例10
汉防己甲素片剂对实验动物肝损伤的影响的研究：实验动物品种选用昆明小鼠，雄性，体重18～20g。通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平考察汉防己甲素的肝毒性的剂量。
将实验动物随机分为4组，包括空白组，汉防己甲素的低(TET,30mg/Kg/day)、中(TET,100mg/Kg/day)、高(TET,300mg/Kg/day)剂量组，每组6只。空白组通过灌胃给药200μL生理盐水，其他组分别灌胃给药不同浓度汉防己甲素，连续给药7天，分别收集小鼠血清，用于谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平检测，结果如图10显示，与空白组相比，300mg/Kg/day汉防己甲素能够显著升高血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，诱导小鼠肝脏损伤(***P<0.001)，因此选用该剂量用于后续药源性肝损伤的造模剂量。
实施例11
熊果酸与甘草次酸药物组合对汉防己甲素片剂诱导的药源性肝损伤的缓解作用的研究：通过给药不同浓度的熊果酸及甘草次酸药物组合物(10mg/Kg UA+0.6mg/Kg GA、30mg/Kg UA+2mg/Kg GA、90mg/Kg UA+6mg/Kg GA；二者比例为15∶1)，在动物水平考察熊果酸联合甘草次酸的协同保护效果。
实验动物为雄性昆明小鼠(18～22g)，购自北京维通利华实验动物中心。实验动物随机分为6组，每组6只，分别为①空白组(生理盐水)；②模型组(TET，300mg/Kg)；③阳性对照组(GSH)(TET+GSH 120mg/Kg)；④组合物低剂量组(10mg/Kg UA+0.6mg/Kg GA+TET300mg/Kg)；⑤组合物中剂量组(30mg/Kg UA+2mg/Kg GA+TET 300mg/Kg)；⑥组合物高剂量组(90mg/Kg UA+6mg/Kg GA+TET 300mg/Kg)。采用灌胃给药汉防己甲素(300mg/Kg/day)建立小鼠肝损伤模型，连续腹腔注射给予对应药物7天，收集小鼠血清，检测血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平，结果如图11所示，与空白组相比，汉防己甲素组显著升高谷丙转氨酶和谷草转氨酶水平；与汉防己甲素组相比，本发明中所使用的组合物(15:1)，熊果酸和甘草次酸联合给药后，能够显著抑制血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平(图11a，b)，最佳剂量组为组合物中剂量组(30mg/Kg UA+2mg/Kg GA)。###P<0.001，表示与空白组相比；**P<0.001，***P<0.001，表示与汉防己甲素组相比。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本领域技术人员可以借鉴本文内容适当改进。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (2)

1.一种协同抑制汉防己甲素诱导的药源性肝损伤的药物组合物，其特征在于，
在动物水平，所述熊果酸与甘草次酸的质量比为15∶1，
所述的药物组合物中熊果酸的给药浓度为30mg/Kg，甘草次酸的给药浓度为2mg/kg。
2.权利要求1所述的药物组合物在制备缓解或治疗汉防己甲素引起的肝损伤的药物中的应用。
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