CN114107362B

CN114107362B - 染色质调控因子Ahc1p在减少酿酒酵母尿素积累中的应用

Info

Publication number: CN114107362B
Application number: CN202111371287.5A
Authority: CN
Inventors: 余世琴; 周景文; 陈宇; 曾伟主; 陈坚
Original assignee: Jiangnan University
Current assignee: Jiangnan University
Priority date: 2021-11-18
Filing date: 2021-11-18
Publication date: 2023-07-25
Anticipated expiration: 2041-11-18
Also published as: CN114107362A

Abstract

本发明公开了染色质调控因子Ahc1p在减少酿酒酵母尿素积累中的应用，属于微生物遗传和分子生物学技术领域。本发明将酿酒酵母中的染色质调控因子Ahc1p基因序列连接到高拷贝质粒上，并转化到酿酒酵母中游离表达，使过量表达Ahclp基因的酿酒酵母在以天冬酰胺、精氨酸或脯氨酸为唯一氮源的培养基中的尿素积累量分别降低了51.55％、54.50％和37.21％。还增加了多种非偏好氮源的利用率，不仅有助于减少有害氮代谢物的积累，还有望大大提高原料中的非偏好氮源的利用率，减少原料的浪费。

Description

染色质调控因子Ahc1p在减少酿酒酵母尿素积累中的应用

技术领域

本发明涉及染色质调控因子Ahc1p在减少酿酒酵母尿素积累中的应用，属于微生物遗传和分子生物学技术领域。

背景技术

在传统发酵产品，如黄酒等的生产过程中，由于发酵过程中含氮化合物的不完全代谢，造成大量氮源的浪费和发酵食品中氨基甲酸乙酯等有害物质的积累。氨基甲酸乙酯具有神经毒性和较强的致癌性，被国际癌症研究所(IARC)评为2A类有害物质。尿素是氨基甲酸乙酯的重要前体之一，黄酒中约70％-90％的氨基甲酸乙酯是通过尿素与乙醇自发反应生成。

发酵过程中产生的尿素多来源于精氨酸的代谢，而精氨酸是黄酒发酵过程中重要的氮源。精氨酸经细胞膜上的精氨酸特异性透性酶(Can1p)、氨基酸透性酶(Gap1p)等转运至胞内，在精氨酸酶(Car1p)的作用下水解产物之一为尿素，尿素则可进一步被脲基酰胺酶(Dur1,2p)分解为氨和二氧化碳。然而，在发酵过程中酵母细胞由于受NCR调控，偏好性氮源会抑制尿素利用相关酶基因的表达造成胞内高浓度尿素的积累。

先前的一项研究分析了酿酒酵母S288C的核小体排列，发现在不同氮源存在下核小体的整体排列存在差异。与优选的氮源相比，在非优选的氮源存在下酿酒酵母的核小体丰度显着增加。通过核小体排列预测的大多数NCR相关基因被上调。核小体是真核染色质的组分。因此，结果表明染色质重塑可能与酿酒酵母中的氮代谢有关。因此筛选能够调节染色质重塑的染色质调控因子有助于实现对酿酒酵母针对不同氮源的利用率的调控作用。

发明内容

在本发明要解决的问题是通过改造染色质调控因子，降低酿酒酵母发酵过程中尿素积累的方法。

本发明提供了染色质调控因子Ahc1p在降低酿酒酵母发酵过程中尿素积累方面的应用。

在一种实施方式中，所述应用是在酿酒酵母中过量表达染色质调控因子Ahc1p。

在一种实施方式中，所述染色质调控因子Ahc1p的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在一种实施方式中，所述染色质调控因子Ahc1p的基因具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

在一种实施方式中，所述应用是在基因组上过量表达染色质调控因子Ahc1p。

在一种实施方式中，所述应用是将染色质调控因子Ahc1p的基因序列连接到高拷贝表达载体上得到重组质粒，然后将重组质粒转化到酿酒酵母细胞中表达。

在一种实施方式中，所述表达载体是pY26-GPD-TEF。

在一种实施方式中，所述酿酒酵母是酿酒酵母S288C-ura3单倍体。。

本发明还提供发酵过程中尿素积累能力降低的酿酒酵母，所述酿酒酵母过量表达了染色质调控因子Ahc1p。

在一种实施方式中，所述酿酒酵母在基因组上过量表达染色质调控因子Ahc1p或采用质粒过量表达染色质调控因子Ahc1p。

在一种实施方式中，所述用质粒过量表达是将染色质调控因子Ahc1p的基因序列连接到高拷贝表达载体上得到重组质粒，然后将重组质粒转化到酿酒酵母细胞中表达。

本发明还提供所述酿酒酵母的构建方法，包括如下步骤：(1)PCR扩增SEQ ID NO.1所示的酵母AHC1基因序列；(2)将AHC1基因序列连接到表达载体pY26-GPD-TEF上的TEF启动子后，得到重组质粒pY26-AHC1；(3)将步骤(2)构建的重组质粒pY26-AHC1转化酿酒酵母S288C-ura3单倍体菌株。

本发明还提供染色质调控因子Ahc1p在增加酿酒酵母非偏好氮源利用能力中的应用。

在一种实施方式中，氮源包括：天冬氨酸(Asp)、天冬酰胺(Asn)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、缬氨酸(Val)、酪氨酸(Tyr)、苏氨酸(Thr)、甲硫氨酸(Met)、亮氨酸(Leu)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)、异亮氨酸(Ile)、丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)或铵盐(NH₄ ⁺)中的至少一种。

本发明还提供所述酿酒酵母在降低发酵食品中的尿素或有害氮代谢物含量方面的应用。

有益效果：

本发明对酿酒酵母染色质调控因子Ahc1p进行了过量表达，在3种氮源条件下分别将尿素积累降低了51.55％、54.50％和37.21％。还增加了多种非偏好氮源的利用率，其中脯氨酸和酪氨酸的利用率显著提高了413.28％和339.04％。这对在工业生产中的应用具有重要意义，它不仅减少有害氮代谢物的积累，还有望大大提高原料中的非偏好氮源的利用率，减少了原料的浪费。

附图说明

图1：AHC1的过量表达对S288C单倍体菌株尿素积累的影响。

图2：AHC1的过量表达对S288C单倍体菌株对21种常用氮源利用的影响。

图3：AHC1的过量表达对S288C单倍体菌株氮代谢关键基因转录水平的影响。

图4：ELP3的过量表达对S288C单倍体菌株尿素积累的影响。

图5：ELP3的过量表达对S288C单倍体菌株对21种常用氮源利用的影响。

具体实施方式

(一)培养基

LB培养基：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L。配制固体培养基时加入20g/L琼脂粉。用于筛选E.coli JM109转化子时，培养基中添加终浓度为100μg/mL的氨苄青霉素。

YNB培养基：YNB合成培养基(含硫酸铵)67.4g/L，葡萄糖20g/L，按需要补加尿嘧啶0.1g/L。

YPD培养基：蛋白胨20g/L，酵母粉10g/L，葡萄糖20g/L。

氨基酸混合培养基：不含氨基酸和硫酸铵的YNB合成培养基(不含氨基酸和硫酸铵)1.7g/L，葡萄糖20g/L，21种氮源(组分及浓度如表1所示)。

单一氮源培养基：不含氨基酸和硫酸铵的YNB合成培养基1.7g/L，葡萄糖20g/L，分别加入终浓度为1g/L的天冬酰胺，精氨酸或脯氨酸。

模拟黄酒发酵培养基：糯米100g，生曲14g，熟曲4g，水170g，将糯米和水混合后，于105℃蒸煮30min，降温至室温后拌入生曲和熟曲。

表1 21种氮源在培养基中的终浓度

(二)酿酒酵母的构建及感受态制备：

酿酒酵母S288C-ura3的构建：

通过同源重组敲除酿酒酵母S288C的URA3基因。具体操作为利用PCR扩增URA3上游和下游500bp碱基序列，然后通过融合PCR连接两个片段，将融合片段转化S288C感受态细胞，在含有5-氟乳清酸和尿嘧啶的YNB平板上筛选阳性转化子。所用引物列于表2.

表2引物序列

酿酒酵母感受态制备使用Frozen-EZ Yeast Transformation II化转试剂盒，30℃，与10mL YPD培养基培养酿酒酵母菌至中数量级(OD₆₀₀＝0.8-1.0)。以下步骤室温进行。

1、3500rpm离心细胞5min，吸掉上清液；

2、加入10mL EZ1溶液清洗沉淀，重新离心沉淀细胞，吸掉上清液；

3、加入1mL EZ2溶液重悬沉淀细胞。

(三)酿酒酵母的转化：

1、取50μL感受态细胞与0.2-1μg DNA(体积少于5μl)混合；加入500μL EZ3溶液，完全混合；

2、30℃孵育45min，孵育过程中用手指轻弹或低俗涡旋2-3次让其混匀；

3、从转化混合液中取50-150μL到适当营养缺陷型平板上。

4、30℃平板孵育3天长出转化子。

(四)HPLC测定

尿素的测定：使用岛津高效液相色谱进行测定。HPLC条件：取400μL样品，加入600μL 0.02mol/L的9-羟基占吨醇溶液和100μL 1.5mol/L的盐酸溶液，混匀后避光反应30min。色谱条件：色谱柱为C18柱(4.6×150mm×3μm，Thermo Scientific,CA,USA)；柱温为35℃；流速设定为1mL/min；进样量为10μL；荧光检测器的激发波长和发射波长分别为213nm和308nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.02mol/L的乙酸钠(冰乙酸调pH至7.2)，超声脱气。

氨基酸的测定：样品与4M三氯乙酸一比一混匀，4℃静止4h。色谱条件：AJS-01氨基酸专用分析柱(C18，3μm，4.6×150mm)。柱温：50℃。UV检测器：338nm(一级氨基酸)，262nm(二级氨基酸)。流动相A：称取十二水合磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)9.0g，十水合四硼酸钠(Na₂B₄O₇·10H₂O)9.5g，加水2000mL，用36％盐酸(约3mL)调pH至8.2，用0.45μm滤膜过滤。流动相B：取甲醇450mL，乙腈450mL，水100mL，混匀，超声脱气。

(五)实时荧光定量PCR

将菌株细胞活化后转接到YPD培养基中，30℃(200r/min)培养12h。种子液于4℃条件下10000r/min离心5min，收集菌体后立即置于液氮中研磨，并用酵母总RNA提取试剂盒RNeasy Plant Mini Kit提取酵母总RNA。将酵母总RNA用gDNase 42℃处理3min，除去基因组DNA。随后用RNA反转录试剂盒制备cDNA。以所得酵母cDNA为模板，利用LightCycler480Ⅱ系统进行荧光定量PCR。以ACT1基因为内参基因。基因表达变化的计算采用2^–ΔΔCT法。RT-qPCR反应采用20μL体系，95℃40s、95℃5s和55℃30s，50个循环。所用引物如表3所示。

表3 RT-qPCR引物序列

(六)菌株信息如表4所示。

表4本发明中涉及的菌株

实施例1过量表达AHC1的菌株的构建

以pY26-GPD-TEF为载体，构建pY26-AHC1过表达质粒。用引物AHC1(F)和AHC1(R)从酿酒酵母S288C-ura3上PCR扩增AHC1基因序列(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)，用引物pY26(F)和pY26(R)PCR线性化pY26载体。然后通过一步克隆法连接基因片段和线性化质粒，转化到JM109菌株中。提取质粒，测序正确后醋酸锂法转化入S288C-ura3菌株中，菌落PCR筛选阳性转化子，获得过量表达AHC1的重组菌株。

将pY26-GPD-TEF空质粒转化入S288C-ura3菌株作为对照。

所有引物及基因序列均列在表5中。

表5引物序列

实施例2：AHC1的过量表达对尿素积累的影响

将实施例1构建的重组菌株和对照菌株(S288C-pY26)经30℃摇床200rpm培养18h活化(活化后的OD₆₀₀＝1.2)后，分别接种于以偏好氮源天冬酰胺为唯一氮源的单一氮源培养基、以中性氮源精氨酸为唯一氮源的单一氮源培养基和以非偏好氮源脯氨酸为唯一氮源的单一氮源培养基中，于30℃温度发酵48h，检测尿素积累量。检测结果如图1所示，在分别以天冬酰胺、精氨酸和尿素为唯一氮源的情况下，S288C-pY26-AHC1在48小时内产生的尿素量分别比对照菌株低51.55％、54.50％和37.21％。

实施例3：AHC1的过量表达对氨基酸利用的影响

将实施例1构建的重组菌株和对照菌株分别经30℃摇床200rpm培养18h活化(活化后的OD₆₀₀＝1.2)后，接种含21种常用氨基酸的混合培养基中，于30℃温度发酵48h，检测菌株对21种氮源的利用率。检测结果如图2所示，与对照菌株相比，过表达AHC1的酿酒酵母S288C-pY26-AHC1对于Pro、Tyr和Arg的利用率显著提高了413.28％、339.04％和32.83％，对Val、Thr、Gly和Leu的利用率分别提高了16.96％、15.44％、12.69％和10.07％。这些结果表明，AHC1的过表达增加了多种氮源的利用。这对在工业生产中的应用具有重要意义，它不仅减少有害氮代谢物的积累，还有望大大提高原料中的非偏好氮源的利用率，减少了原料的浪费。

实施例4：AHC1的过量表达对氮代谢关键基因转录水平的影响

SPS传感途径(Ssy1p-Ptr3p-Ssy5p)负责感受细胞外氨基酸和激活氨基酸转运蛋白的转录。氨基酸信号被感知后，其代谢相关基因的转录主要受NCR途径的调控。此外，氮代谢相关基因的翻译受GAAC(一般氨基酸控制途径)调控。通过实时荧光定量PCR检测实施例1构建的重组酿酒酵母AHC1的过量表达是否会引起一些关键氮代谢途径的改变。

检测结果表明(图3)，关于SPS感知途径，SPS复合物组分的编码基因SSY5和Ssy5p下游效应子Stp1/2p的编码基因STP1/2分别上调了3.59倍，1.95倍和1.43倍。另外，氨基酸转运蛋白GAP1、TAT1、MUP1和PUT4均有不同程度的上调，这可能是氨基酸利用增加的原因。除此之外，对于NCR途径，转录激活因子的编码基因GLN3的转录水平显着上调5.26倍。这也有利于非偏好氮源的利用。另外，尿素酰胺酶DUR1,2显著上调LE 10.33倍，增加了尿素的降解，可能是尿素积累量减少的原因。

实施例5：AHC1的过量表达对尿素积累的影响

将实施例1构建的重组菌株和对照菌株分别以10％(V/V)的接种量接入至模拟黄酒发酵培养基中，摇匀，加上发酵栓，置于恒温培养箱，30℃培养5d后，温度降至15℃，继续培养15d。发酵结束后，4000r/min离心10min，取上清液用于检测发酵体系中尿素的积累情况，结果显示，实施例1构建的重组菌株在黄酒模拟发酵体系中的尿素积累量显著降低，与对照菌株相比，降低30％以上。

对比例1：ELP3的过量表达对S288C菌株氨基酸利用和尿素积累的影响

过表达与Ahc1p类似的组蛋白乙酰转移酶复合体的亚基的染色质调控因子ELP3。按照实施例1～3相同的策略，过量表达染色质调控因子ELP3基因，并对尿素积累量和氨基酸利用率进行检测.检测结果表明，ELP3的过量表达不能减少尿素的积累量(图4)，另外，氨基酸的利用率也没有显著增加(图5)。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

SEQUENCE LISTING

<110> 江南大学

<120> 染色质调控因子Ahc1p在减少酿酒酵母尿素积累中的应用

<130> BAA211448A

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 566

<212> PRT

<213> Saccharomyces cerevisiae

<400> 1

Met Met Ser Pro Ala Gln Asp Lys Leu Gln His Gln His His Asn Pro

1 5 10 15

Asn Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Met Thr Asn Val Tyr Gln Val

20 25 30

Thr Thr Pro Lys Ser Pro Gln Asp Leu Glu Asn Asn Met Asp Glu Pro

35 40 45

Phe Lys Met Asp Thr Ala Thr Ser Asn Pro Asp Lys Asp Ser Glu Asn

50 55 60

Thr Gln Arg Leu Lys Tyr Glu Cys Ala Lys Gly Glu Ile Gln Asn Val

65 70 75 80

Leu Asn Leu His Ile Met Leu Asn His Lys His Val Arg His Leu Arg

85 90 95

Arg Asn Val Gln Lys Val Asn Ala Lys Leu Ala Leu Leu Glu Thr Leu

100 105 110

His Lys Asp Thr Gly Leu Leu Asn Lys Ile Glu Arg Thr Tyr Gln Leu

115 120 125

Lys Ile Lys Gln His Gln Gln His Ser Val Leu Gly Gly His Phe His

130 135 140

Asp Ser Thr Ala Thr Glu Asn Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Asn Leu Ser

145 150 155 160

Tyr Pro Val Leu Ser Asp Tyr Asn Ile Asn Cys Gln Pro Leu Ser Ser

165 170 175

Ser Ser Asn Arg Asn Leu Ser Thr Thr Arg Ile Pro His His His Tyr

180 185 190

His Thr Arg Ser Lys Ser Asn Gly Leu Leu Leu Glu Pro Ser Ala Leu

195 200 205

Arg Pro Ala Asn Ser Asn Ile Ile Asp Tyr Arg Leu Thr Gly Ser Lys

210 215 220

Ser Leu Ser Glu Ala Ile Thr Lys Pro Thr Pro Val Ser Leu Pro His

225 230 235 240

Ser Asn Ser Asp Gly Ile Ser Ser Pro Arg Ser Ser Ser Ile Ser Pro

245 250 255

Leu Asp Glu Gln Pro Gly Phe Gln Ile Leu Pro Phe Lys Pro Ser Gln

260 265 270

Met His Leu Asn His Arg Arg Asn Tyr Ser Ser Thr Cys Leu Thr Ser

275 280 285

Asn Ser Gly Ile Ile Gly Lys Thr Glu Asn Asn Glu Pro Ile Phe Arg

290 295 300

Arg Tyr Asp Gly Ile Leu Val Ile Ile Thr Cys Ser Lys Cys Asp Arg

305 310 315 320

Ser Gly Phe Thr Ser Ala Gln Gly Ile Val Asn His Thr Arg Leu Lys

325 330 335

His Ser Lys Leu Tyr Ser Ser Gln Pro Leu Ala Val Leu Asn Asn Gln

340 345 350

Lys Leu Leu Pro Asn Asp Lys Gln Asp Pro Glu Ile Leu Ser Lys Phe

355 360 365

Lys Lys Leu Asn Leu Asp Pro Asn Lys Asp Tyr Leu Pro Ser Asp Ile

370 375 380

Ala Ile Pro Lys Pro Gln Ser Pro Ile Asn His Ser Glu Asn His Thr

385 390 395 400

Arg Ala Pro Lys Thr Val Lys Asn Thr Pro His Leu Glu Lys Leu Tyr

405 410 415

Gln Asn Lys Glu Asp Phe Lys Lys Leu Ile Asp Met Val Asn Glu Thr

420 425 430

Pro Asp Asp Leu Asn Glu Tyr Leu Lys Gln Arg Glu Ile Gln Leu Arg

435 440 445

Tyr Gln Lys Glu Gln Glu Glu Glu Ser Ser Lys Ser Asp Asp Glu Ala

450 455 460

Ser Tyr Val Pro Ser Pro Ser Leu Ser Ala Thr Ala Thr Thr Thr Thr

465 470 475 480

Thr Thr Asp Pro Pro Ser Pro Pro Val Leu Ser Ser Ser Leu Gln Arg

485 490 495

Lys Leu Leu Arg Lys Arg Lys Leu Ser Leu Asn Ser Ser Thr Pro Met

500 505 510

Glu Asp Leu Pro Leu Arg Glu Arg Leu Arg Ala Asn Pro Thr Asp Lys

515 520 525

Lys Pro Arg Lys Ala Ala Leu Leu Thr Asn Glu Leu Glu Gly Pro Asp

530 535 540

Pro Ala Ala Lys Ser Ser Ser Tyr Tyr Asn Leu Arg Ser Lys Ser Arg

545 550 555 560

Leu Arg Gly Ser His Thr

565

<210> 2

<211> 1701

<212> DNA

<213> Saccharomyces cerevisiae

<400> 2

atgatgagtc ccgcccaaga taaactgcag caccagcatc ataatcctaa ttcttcctca 60

tcgtcatcct ctaagatgac gaacgtttat caggttacca cgccaaagtc tcctcaggat 120

ttggaaaaca acatggatga gcccttcaaa atggacaccg ccaccagtaa tccggacaag 180

gatagcgaaa atacccagcg gttgaagtac gaatgtgcca aaggggaaat acagaatgtt 240

ttgaacctac atataatgct aaaccacaag catgttaggc acttacgaag aaatgttcaa 300

aaggttaacg caaaactagc tctcttggaa accctgcata aggatactgg tctattgaac 360

aaaatcgaac ggacgtatca actcaaaata aaacaacatc agcagcatag cgtgctcggc 420

ggccactttc acgacagtac ggctacggaa aatacgaacg catcaaatta taacctgtca 480

tacccggttc tatcggatta taacatcaac tgtcagcctt tgtcttcgag cagcaacaga 540

aatctgtcaa caacacgcat accacaccac cattatcata ctagaagcaa gagtaacggg 600

cttttgctag aaccttctgc cctccgtccg gcaaattcga atataattga ttacaggcta 660

acaggttcta aatctctatc agaagccata accaagccca ctcccgtctc gcttcctcac 720

tctaattcgg atggcatttc ttcacctcgt tcctcctcaa tctccccctt agacgagcag 780

ccggggttcc agatactccc ttttaaacca agtcagatgc atcttaacca cagacgtaat 840

tacagtagca cttgtttgac gagcaatagc ggtatcatcg gtaagactga aaataatgag 900

cccattttta gaagatatga cggcattttg gttataatta cgtgctccaa atgtgaccgt 960

tccggtttca cttccgcgca aggtatcgtg aaccatactc gactaaaaca ttctaaacta 1020

tattcaagcc aaccattggc agttttaaac aaccaaaaac tacttcctaa tgataagcag 1080

gatccggaaa ttttatctaa gttcaagaaa ctaaatttgg acccaaacaa agactaccta 1140

ccctctgaca ttgcaatccc aaaaccacaa tcaccaatca accactccga gaaccatacg 1200

cgggctccaa agactgtcaa gaacactcct catttagaaa aactatacca aaataaagaa 1260

gacttcaaaa aactgattga catggttaat gaaactccgg atgatttgaa tgaatatttg 1320

aagcaacgtg aaattcaatt aagatatcaa aaggagcaag aagaggaatc ttccaaatct 1380

gatgacgaag cttcttacgt cccatcaccg tctctctcag caacggctac aacaacaacg 1440

actacggacc caccctctcc gccagtgcta tcctcctcct tacaaagaaa attgctgcgt 1500

aagagaaaac tgagcttgaa tagctctact cccatggaag atttaccttt aagagaaagg 1560

ttgagagcaa atcccactga caagaaacca agaaaagcgg cccttttgac taatgaactt 1620

gagggtcctg atcctgcagc aaaatcatca tcttattaca atctaaggtc gaaatcaaga 1680

ctgcgtggtt ctcatacata g 1701

Claims

1.染色质调控因子Ahc1p在减少酿酒酵母尿素积累中的应用，其特征在于，所述染色质调控因子Ahc1p氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述应用是在酿酒酵母中过量表达染色质调控因子Ahc1p，所述酿酒酵母是酿酒酵母S288C-ura3单倍体；所述酿酒酵母S288C-ura3单倍体是通过同源重组敲除了酿酒酵母S288C的URA3基因获得的菌株。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是在基因组上过量表达染色质调控因子Ahc1p。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用是将染色质调控因子Ahc1p的基因序列连接到高拷贝表达载体上得到重组质粒，然后将重组质粒转化到酿酒酵母细胞中表达。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述表达载体是pY26-GPD-TEF。

5.一种尿素积累能力降低的酿酒酵母，其特征在于，在酿酒酵母S288C-ura3单倍体中过量表达了染色质调控因子Ahc1p，所述Ahc1p的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述酿酒酵母S288C-ura3单倍体是通过同源重组敲除了酿酒酵母S288C的URA3基因获得的菌株。

6.根据权利要求5所述的酿酒酵母，其特征在于，所述酿酒酵母在基因组上过量表达染色质调控因子Ahc1p或采用质粒过量表达染色质调控因子Ahc1p。

7.权利要求5或6所述的酿酒酵母在降低发酵食品中的尿素含量方面的应用。