CN114099675B - x-ray激发的光动力治癌纳米复合颗粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种x‑ray激发的光动力治癌纳米复合颗粒及其制备方法。纳米复合颗粒由可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒以及负载于该纳米颗粒上的光敏剂分子组成。超声均匀Mg(NO3)2溶液、Sr(NO3)2溶液、Eu(NO3)3溶液和Dy(NO3)2溶液,加介孔二氧化硅,超声,烘干,湿磨,退火,得可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒,加入光敏剂和少量无水乙醇,避光搅拌,离心洗涤,烘干,制得x‑ray激发的光动力治癌纳米复合材料。该纳米复合材料停止X射线激发后仍持续产生单线态氧以杀死癌细胞,极大地减小了对正常组织的辐照损伤,光动力疗法带来的副作用。而且,X射线激发源完全不受限于肿瘤的组织深度。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及一种x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料及其制备方法。
背景技术
恶性肿瘤已成为危害人类生命的头号杀手。癌症更是一直威胁着人类的健康。通常采用高能放射线(如X射线等)直接照射的放疗法杀死癌细胞。但癌细胞具有一定的放射损伤修复能力,为了防止癌症复发,需要增加放疗时的辐射剂量。而高剂量的X射线辐照不仅会杀灭癌细胞,也会对正常组织造成不可避免的损伤,从而产生副作用,甚至病变。
光动力诊疗(PDT)是相对于放疗法提出的一种副作用较小且温和的癌症治疗方式,传统光动力治疗由三种基本成分组成:光照、氧气和光敏剂。其机理是:光敏剂经过光照使周围含氧组织产生单线态氧,单线态氧即可杀死癌细胞进而起到治疗的效果。该种方法的主要特点是:治疗方式微创、低系统毒性且累积毒性小。但是由于可见光在组织中的穿透深度较浅,无法治疗位于皮肤深层的肿瘤,故在临床治疗中存在极大的局限性。为了实现更好的光动力治疗效果,人们利用近红外光、上转换荧光、X射线等多种激发源替代传统的紫外-可见光,极大地推动了PDT在生物医学中的发展。然而,有研究指出近红外光在生物组织中的最佳穿透深度为1~2cm,仍然存在组织深度局限。而X射线由于具有较强的组织穿透能力,近来多用作激发源以形成新的治疗方式(X-PDT)。同时为了最大限度降低辐射副作用,应用新型材料以减少X射线辐照时间和辐射剂量。
长余辉材料是一种在激发光停止后仍能持续发出余辉(Persistentluminescence)的材料,其用于X-PDT时不仅可以克服传统原位激发的限制,还可以促使光敏剂持续产生能杀死肿瘤细胞的单线态氧,进而大大降低激发源的辐照时间和辐射剂量,从而减小正常组织的辐射损伤。目前制备长余辉材料的方法主要有:高温固相法,溶胶-凝胶法、水热合成法,静电纺丝法等。经高温煅烧后,通过上述方法制备的材料通常呈团聚结块的状态,且颗粒尺寸较大。根据纳米粒子在肿瘤部位的高渗透长滞留(EPR)效应,大尺寸和不具备单分散性的颗粒难以进行生物应用。因此开发出尺寸可调、单分散性好且发光性能兼备的长余辉纳米颗粒,并与对应匹配的光敏剂连接得到纳米复合颗粒成为当下迫切需要解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种能用于光动力治疗中的x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料。
本发明的另一个目的是提供一种上述纳米复合材料的制备方法。
为实现上述目的,本发明所采用的技术方案是:一种x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料,由可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒以及负载于该纳米颗粒上的光敏剂分子组成;该可被X射线激发的硅酸盐长余辉发光纳米颗粒的化学式为Sr2MgSi2O7:Eu2+,Dy3 +,可被剂量小于1.18Gy的X射线激发发光。
本发明所采用的另一个技术方案是:一种上述纳米复合材料的制备方法,具体按以下步骤进行:
步骤1:分别配制各成相所需离子的硝酸盐溶液,即配制摩尔体积浓度1~2mol/L的 Mg(NO3)2溶液、摩尔体积浓度1~2mol/L的Sr(NO3)2溶液、摩尔体积浓度0.1~0.3mol/L的Eu(NO3)3溶液和摩尔体积浓度0.1~0.3mol/L的Dy(NO3)2溶液;分别取Mg(NO3)2溶液160~260μL、Sr(NO3)2溶液200~400μL、Eu(NO3)3溶液10~20μL和Dy(NO3)2溶液20~60μL,混合,超声均匀,加入100~200mg介孔二氧化硅,混匀,使介孔二氧化硅充分浸渍,再超声15~30min,使完全混合均匀,得乳浊液,置于烘箱中,在50~80℃温度下烘干,用无水乙醇湿磨5min,在700~1000℃温度下退火1~3h,制得可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒(SMSO);
步骤2:按质量比1︰1~2,分别取可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒和光敏剂(Ru),混合,加入少量无水乙醇,室温下避光搅拌12~24h,经去离子水离心洗涤三次后烘干,制得x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料(SMSO@Ru)。
根据现有技术公开的制备介孔二氧化硅方法,通过调节无水乙醇和去离子水的体积比在7︰10~25的范围内变化,制得粒径50~200nm的介孔二氧化硅颗粒。再用该介孔二氧化硅颗粒制备可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒,使得介孔二氧化硅颗粒制备可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒的粒径可在50~200nm内调节,最终得到粒径可在50~200nm内调节的纳米复合材料。
光敏剂采用三联吡啶钌([Ru(bpy)3]2+)。
称取一定量的纳米复合材料,配成一定浓度的悬浮液,与癌细胞共同孵育一定时间使其完全进入细胞内,经剂量小于1.18Gy的X射线辐照后,复合材料会产生单线态氧,单线态氧进而杀死癌细胞。用CCK8试剂进行细胞毒性检测,以验证单线态氧对于癌细胞的杀伤能力。
制得的可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒的透射电镜图,如图1所示。由图1可知,该纳米颗粒尺寸均一,为单分散的平均粒径为60 nm左右的球形颗粒。该可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒的粒径分布图,如图2,可以看出,该长余辉纳米颗粒的粒径可在50~200nm范围内调节。
用手持式紫外手电(254nm)照射制得的纳米复合材料(SMSO@Ru )10min,再利用F7000型荧光分光光度计测量其余辉光谱,测试时激发狭缝调至最小并运用挡板以隔绝仪器内部激发源,得图3所示的余辉光谱图,从图3可以看出,负载光敏剂的长余辉纳米颗粒的余辉光谱上依然存在位于590nm左右的光敏剂的发射峰,证明SMSO的余辉光传递给了光敏剂,使光敏剂发光,因而长余辉材料与光敏剂之间发生了能量传递。
将SMSO@Ru纳米复合材料配成一定浓度的混悬液,将该混悬液与1,3-二苯基异苯并呋喃(DPBF)混合,形成DPBF-SMSO@Ru;将SMSO与DPBF混合,形成DPBF-SMSO;将DPBF与Ru混合,形成DPBF-Ru;以DPBF为对照组。用紫外可见分光光度计检测DPBF-SMSO@Ru、DPBF-SMSO、DPBF-Ru和DPBF的吸光度。然后将DPBF-SMSO@Ru、DPBF-SMSO和DPBF-Ru分别经UV(254nm)激发2min后,再用紫外可见分光光度计检测吸光度,得图4所示的紫外吸收图。图中共有七条曲线,分为四组:DPBF组(对照组)、SMSO组、Ru组和SMSO@Ru组,其中DPBF的曲线为一条,另外六条曲线中三条线是没有经UV照射的DPBF-SMSO@Ru、DPBF-SMSO和DPBF-Ru,剩余三条线是DPBF-SMSO@Ru、DPBF-SMSO和DPBF-Ru经UV照后的。最下面三条线几乎重合。从图4可以看出,经UV照射后, DPBF-SMSO@Ru和DPBF-Ru在410nm处的吸光度值明显下降,表明经UV照射后二者均可产生单线态氧。
对经UV照射后DPBF-Ru和DPBF-SMSO@Ru依次扫4条曲线后发现, DPBF中加入SMSO@Ru纳米复合颗粒后,在410nm处的吸光度值连续下降;而DPBF中加入光敏剂后,对应的吸光度值几乎不变,如图5所示。因此证明本发明纳米复合材料可以持续产生单线态氧。
将HGC-27细胞(人胃癌细胞)接种于96孔板中,并在培养基中孵育24h后,平均分成四组。第一组用质量体积浓度5~10μg/mL的三联吡啶钌溶液处理24h,第二组用质量体积浓度150~300μg/mL的 SMSO溶液处理24h ,第三组用质量体积浓度150~300μg/mL的 SMSO@Ru溶液处理24h,第四组为对照组(Control)。取其中一块板进行X射线辐照后, 在各组细胞中加入CCK8(10~20μL)试剂并置于培养箱中2~3h,最后用酶标仪测定各孔od值,得图6所示的细胞毒性检测柱状图。从图6可以看出,经X射线辐照后,SMSO组和Ru组的癌细胞均有轻微损伤,而SMSO@Ru组杀伤效果显著,说明本发明纳米复合材料经X射线辐照后,能够产生大量单线态氧,从而起到杀死癌细胞的作用。
本发明采用介孔二氧化硅模板法制备出性能优异的硅酸盐长余辉纳米颗粒,以搅拌方式混合使光敏剂吸附于纳米介孔球的孔道中,将硅酸盐长余辉纳米颗粒与光敏剂结合,实现了长余辉发光材料与光敏剂之间的持续能量传递。当移除x-ray辐照后,制得的纳米复合材料能够持续产生具有细胞毒性的单线态氧,对癌细胞杀伤能力显著,因此,本发明纳米复合材料潜在的光动力诊疗应用价值巨大。
本发明具有如下优点:
1)硅酸盐长余辉纳米颗粒具有尺寸均一、粒径小、单分散性好、稳定性高以及发光性能优良的特点。
2)硅酸盐长余辉纳米颗粒可将小剂量X射线短时间辐照的激发能储蓄起来,关闭激发源后,硅酸盐长余辉纳米颗粒能够缓慢释放储蓄的能量持续发光,进而传递能量给光敏剂,使其产生单线态氧。
3)将本发明纳米复合材料停止X射线激发后仍能持续产生单线态氧以杀死癌细胞,极大地减小了对正常组织的辐照损伤,克服了传统光动力疗法带来的副作用。而且,X射线激发源完全不受限于肿瘤的组织深度。
4)通过“介孔硅模板法”制备出硅酸盐长余辉纳米颗粒,进一步成功制备了负载光敏剂的复合粒子,该纳米颗粒具有制备工艺简单、重复性好、生物相容性好以及可自动富集于肿瘤部位的特点。
5)制备的纳米复合材料属于硅酸盐类,硅作为人体必需的微量元素之一,适当的摄入对代谢机制有益。该纳米复合材料可被剂量小于1.18Gy的X射线反复激发,且在停止激发后仍能持续产生单线态氧,极大地减小了对正常组织的辐照损伤,同时X射线辐照也为深组织治疗提供了可能。本次构建的长余辉纳米颗粒尺寸可控,单分散性好,是均一的介孔球形,因此在运用于光动力治疗时能有效富集于肿瘤部位,进而提高对肿瘤的治疗效果。
附图说明
图1是本发明制得硅酸盐长余辉纳米颗粒的透射电镜图。
图2是本发明制得不同尺寸硅酸盐长余辉纳米颗粒的粒径分布图。
图3是本发明纳米复合材料的余辉光谱图。
图4是本发明纳米复合材料产生单线态氧的紫外吸收图。
图5是本发明纳米复合材料的持续产生单线态氧的吸光度变化趋势折线图。
图6是本发明纳米复合材料的细胞毒性检测柱状图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进行详细说明。
实施例1
分别配制摩尔体积浓度2mol/L 的Mg(NO3)2溶液、摩尔体积浓度2mol/L 的Sr(NO3)2溶液、摩尔体积浓度0.1mol/L的 Eu(NO3)3溶液和摩尔体积浓度0.3mol/L的 Dy(NO3)2溶液。分别取Mg(NO3)2溶液160μL、Sr(NO3)2溶液200μL、Eu(NO3)3溶液20μL和Dy(NO3)2溶液20μL,混合超声均匀,加入100mg介孔二氧化硅,混匀,超声15min,使完全均匀混合,得乳浊液;置于烘箱中,50℃温度下烘干,无水乙醇湿磨5min,在900℃下退火3h,制得可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒(Sr2MgSi2O7:Eu2+,Dy3+@SiO2,记作SMSO)。按质量比1︰1,分别取SMSO和三联吡啶钌,加入烧杯并加少量无水乙醇,室温下避光搅拌24h,去离子水离心洗涤三次后烘干,制得x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料。
实施例2
分别配制各成相所需离子的硝酸盐溶液,即配制摩尔体积浓度1mol/L的 Mg(NO3)2溶液、摩尔体积浓度1mol/L的Sr(NO3)2溶液、摩尔体积浓度0.3mol/L的Eu(NO3)3溶液和摩尔体积浓度0.2mol/L的Dy(NO3)2溶液;分别取Mg(NO3)2溶液260μL、Sr(NO3)2溶液400μL、Eu(NO3)3溶液10μL和Dy(NO3)2溶液40μL,混合,超声均匀,加入200mg介孔二氧化硅,混匀,使介孔二氧化硅充分浸渍,再超声30min,使完全混合均匀,得乳浊液,置于烘箱中,在80℃温度下烘干,用无水乙醇湿磨5min,在1000℃温度下退火1h,制得可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒(SMSO);按质量比1︰1.5,分别取可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒和三联吡啶钌,混合,加入少量无水乙醇,室温下避光搅拌12h,去离子水离心洗涤三次,烘干,制得x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料。该纳米复合材料的粒径可在50~200nm内调节。
实施例3
分别配制各成相所需离子的硝酸盐溶液,即配制摩尔体积浓度1.5mol/L的 Mg(NO3)2溶液、摩尔体积浓度1.5mol/L的Sr(NO3)2溶液、摩尔体积浓度0.2mol/L的Eu(NO3)3溶液和摩尔体积浓度0.1mol/L的Dy(NO3)2溶液;分别取Mg(NO3)2溶液210μL、Sr(NO3)2溶液300μL、Eu(NO3)3溶液15μL和Dy(NO3)2溶液60μL,混合,超声均匀,加入150mg介孔二氧化硅,混匀,使介孔二氧化硅充分浸渍,再超声28min,使完全混合均匀,得乳浊液,置于烘箱中,在70℃温度下烘干,用无水乙醇湿磨5min,在700℃温度下退火2h,制得可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒(SMSO);按质量比1︰2,分别取可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒和三联吡啶钌,混合,加入少量无水乙醇,室温下避光搅拌18h,去离子水离心洗涤多次,烘干,制得x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料。
Claims (1)
1.一种x-ray激发的光动力治癌纳米复合颗粒的制备方法,其特征在于,该制备方法具体按以下步骤进行:
步骤1:分别配制摩尔体积浓度1~2mol/L的 Mg(NO3)2溶液、摩尔体积浓度1~2mol/L的Sr(NO3)2溶液、摩尔体积浓度0.1~0.3mol/L的Eu(NO3)3溶液和摩尔体积浓度0.1~0.3mol/L的Dy(NO3)2溶液;分别取Mg(NO3)2溶液160~260μL、Sr(NO3)2溶液200~400μL、Eu(NO3)3溶液10~20μL和Dy(NO3)2溶液20~60μL,混合,超声均匀,加入100~200mg粒径50~200nm的介孔二氧化硅,混匀,再超声,得乳浊液,置于烘箱中在50~80℃温度下烘干,用无水乙醇湿磨,在700~1000℃温度下退火1~3h,制得粒径50~200nm的可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒;
步骤2:按质量比1︰1~2,分别取可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒和三联吡啶钌,混合,加入少量无水乙醇,室温下避光搅拌12~24h,去离子水离心洗涤数次,烘干,制得x-ray激发的光动力治癌纳米复合材料;
该x-ray激发的光动力治癌纳米复合颗粒,可被剂量小于1.18Gy的X射线激发发光,由可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒以及负载于该可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒上的光敏剂分子组成;该可被X射线激发的硅酸盐长余辉纳米颗粒的化学式为Sr2MgSi2O7:Eu2+,Dy3+。
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