CN114072130A - 表面有硫酸根基团的微粒和纳米粒子 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了聚合物颗粒，所述聚合物颗粒在颗粒表面包含负电荷。优选的，所述颗粒包括PLGA和硫酸盐聚合物。本发明还提供了由本发明所述方法制备的聚合物颗粒。

Description

表面有硫酸根基团的微粒和纳米粒子
相关申请
本申请要求2019年5月28日递交的美国临时申请第62/853,302号的优先权，该专利申请的全部内容通过引证在此全部并入本文。
摘要
本发明提供一种包含微粒和纳米颗粒的药物组合物，所述微粒和纳米颗粒包含医药上可接受的聚合物和至少一种硫酸化试剂。本发明还提供了制备所述药物组合物的方法。
背景技术
许多治疗药物需要输送到人体内的特定靶点。这种靶点可以是器官、某种组织或细胞上的特定受体。由于缺乏靶向性，许多药物不能充分发挥其最佳治疗效果，甚至产生不良反应。例如，只有一小部分全身给药的化疗药物到达肿瘤部位。在免疫学和免疫肿瘤学领域，通常需要将药物分子输送到特定类型的细胞上。靶向细胞的一种策略是使用抗体结合感兴趣细胞上的受体。药物分子可以与抗体结合，抗体引导药物进入细胞，然后抗体结合细胞受体，药物被细胞内化。药物也可以被封装成纳米颗粒，然后抗体与所述载药纳米颗粒结合。因此，抗体将纳米粒子引导至靶向细胞。
使用这种抗体纳米颗粒策略将药物运送到靶点已经取得了一些成功。然而，这种方法也有缺点。例如，抗体易于在体液中水解和降解，因此，给药的抗体的很大一部分可能由于水解和降解而失去其活性。此外，开发和生产抗体的成本很高。
我们已经提供了具有高度负ζ电位的微粒和纳米颗粒并将其用于治疗多种疾病，所述微粒和纳米颗粒通过将聚阴离子聚合物(如聚丙烯酸和透明质酸)加入PLGA颗粒中形成。参见WO2014/089160，其全文通过引用并入本文。
仍然需要制备带负电的具有提高的治疗效果的微粒和纳米颗粒。
发明内容
本发明的一个方面提供了具有高负表面电荷或ζ电位的微粒和纳米颗粒及其制备方法。微粒和/或纳米颗粒优选包含聚乳酸-乙醇酸(PLGA)、硫酸化聚合物(例如硫酸化多糖)和(可选的)活性剂。硫酸化多糖优选以有效施加负ζ电位的量添加，该负ζ电位具有至少25mV、优选至少约30mV且更优选至少约35mV的绝对值。硫酸化聚合物在本文中也称为“阴离子聚合物”或“带负电的试剂”。
硫酸化聚合物可以是合成的或天然的。初始未硫酸化的聚合物可以通过化学方法硫酸化，成为硫酸化聚合物。根据试剂被硫酸化的程度，硫酸化聚合物可以是轻微硫酸化的或高度硫酸化的。高度硫酸化聚合物可向所述微粒和纳米颗粒的表面提供更高的负电荷。硫酸化多糖的实施例包括硫酸乙酰肝素、卡拉胶、岩藻聚糖和石莼聚糖(Ludmylla Cunhaand Ana Grenha,Mar.Drugs 2016,14,42；Medeiros,G.F.et al,Biochimica etBiophysica Acta(BBA)–General Subjects,1475(3):287-294；Emiliano Bedini,et al,Carbohydrate Polymers,174(2017),1224-1239；Dai-Hung Ngo and Se-Kwon Kim,Inter.J.Bio.Macrom.,62(2013),70-75.)优选的，硫酸化聚合物不是肝素。
本发明包括一种制备微粒或纳米颗粒的方法，其包括：(1)将PLGA(以及任选的活性剂，例如药物成分(API)或水溶性差的化合物)溶解在第一溶剂中以形成PLGA溶液；(2)在第二溶剂的溶液中乳化聚合物溶液以形成乳液，其中第一溶剂不可与第二溶剂混溶或部分混溶，并且其中第二溶剂的溶液包含硫酸化聚合物，所述第二溶剂溶液任选地进一步包含可溶于所述第二溶剂的表面活性剂和/或API；以及(3)去除第一溶剂以形成具有负表面电荷的所述微粒或纳米颗粒。
本发明还提供了一种制备具有负表面电荷的微粒或纳米粒子的方法，所述方法包括：(1)将PLGA(以及任选的活性剂、API或水溶性差的化合物)溶解在第一溶剂中以形成聚合物溶液；(2)向所述聚合物溶液中添加第二溶剂以形成混合物，其中所述第一溶剂与所述第二溶剂不可混溶或部分混溶，并且其中所述第二溶剂的所述第一溶液任选地包含相同或不同的活性剂；(3)乳化该混合物以形成第一乳液；(4)在所述第二溶剂的第二溶液中乳化所述第一乳液以形成第二乳液，其中所述第二溶剂的第二溶液包含硫酸化聚合物，并且任选地进一步包含表面活性剂；以及(5)去除第一溶剂以形成具有负表面电荷的微粒或纳米粒子。
优选地，该方法还包括洗涤所述微粒或纳米颗粒，和/或将所述微粒或纳米颗粒浓缩至所需的体积。
优选地，所述负表面电荷可以承受某些洗涤试验，例如在这里举例说明的洗涤试验，而不会明显损失由ζ电位测定的负表面电荷(例如，不会变为明显更小的负值-，即比原始负值更接近0的负值)。
优选地，在所述洗涤或洗涤试验之后，通过ζ电位测量，所述微粒或纳米颗粒保留至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％的负表面电荷。
优选地，所述PLGA的平均分子量为约500至约1000000Da，优选约1000至约100000Da。
优选地，所述PLGA的乳酸/羟基乙酸比为约100/0至0/100，约95/5至5/95，约85/15至15/85以及约50/50。
优选地，所述PLGA含有多个带负电荷的末端基团，例如羧基基团。
优选地，微粒或纳米颗粒具有约-25mV或更低、约-30mV或更低、约-35mV或更低、约-40mV或更低、约-45mV或更低或约-50mV或更低的ζ电位。例如-40mV至-65mV的ζ电位。
优选地，所述第一溶剂是二氯甲烷、乙酸乙酯或氯仿。
优选地，所述第二溶剂的溶液是水性溶剂并且优选的包含表面活性剂，该表面活性剂包括有机的或无机的药物赋形剂、各种聚合物、低聚物、天然产物、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或离子表面活性剂以及它们的混合物。优选的表面活性剂包括聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、吐温系列表面活性剂、布吉(Brij)系列表面活性剂、普朗尼克系列、泊洛沙姆系列或曲拉通X-100或其盐、衍生物、共聚物或混合物。
优选地，所述乳化步骤包括均质化、机械搅拌和/或微流化。
优选地，通过溶剂交换和/或蒸发除去第一溶剂。
优选地，所述微粒或纳米颗粒包含活性试剂，例如API(活性药物成分)。
优选地，所述活性药物成分包封在所述微粒或纳米颗粒内。
作为选择或者另外，所述活性药物成分通过共价键共价连接或者离子连接至所述微粒或纳米颗粒的表面。例如，所述API可以通过能够促进体内释放的水溶性键(例如，酯键或者酰胺)与颗粒表面共价连接。
优选的，在乳化过程中在将第一溶剂的PLGA溶液加入到第二溶剂的溶液中之前，所述第二溶剂的溶液还包含第一溶剂或者被第一溶剂饱和。这可能是有益的，因为当被加入到第二溶剂的溶液中进行乳化时，第一溶剂中的PLGA不太可能沉淀。优选地，第一溶剂是乙酸乙酯，第二溶剂的溶液(例如水溶液或含水溶液)包含约7-8％(v/v)的乙酸乙酯。
应当理解，本文描述的本发明的任何优选特征可以与任何其他优选特征结合，包括仅在本发明的一个方面描述的优选特征，以及仅在实施例中描述的优选特征。
具体实施方式
1.概述：
在药物和生物技术领域，通常需要将药物/活性药物成分包封在聚合物颗粒中。例如，可以将药物包封到诸如聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)的可生物降解的聚合物的微球中，用于长效、持续的释放。商业化产品的实施例包括醋酸亮丙瑞林、艾塞那肽、利培酮和纳曲酮的聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物或聚乳酸微球。
除微球制剂外，药物分子还可以被包封在聚合物纳米颗粒中，用于靶向药物递送，所述靶向药物递送涉及将药物递送至特定的部位、细胞、器官和受体。例如，纳米颗粒可利用“增强的渗透和滞留效应”或EPR效应将药物递送到肿瘤组织中。EPR效应是某些分子或颗粒在肿瘤组织中比在正常组织中更容易累积的特性(Matsumura and Maeda,CancerResearch.46(12Pt1):6387-6392,1986；Duncan and Sat,Ann.Oncol.9,Suppl.2:39,1998；Kaye,et al.Clinical Cancer Research.5(1):83–94,1999)。
也可以通过首先将药物包封到纳米颗粒中，然后将靶向剂连接到纳米颗粒的表面上来实现靶向药物递送。在大多数情况下，需要通过化学结合作用将靶向剂连接到表面上。通常，这种结合作用涉及靶向剂与纳米颗粒表面上的适当反应性基团之间的化学反应。常见的反应性基团包括羧基、氨基、硫醇、醛、马来酰亚胺、环氧化物和酸酐。
聚乳酸(PLA)、聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物(PLGA)、聚已内酯(PCL)和几种其他可生物降解和生物相容的聚合物已被用于包封活性药物成分以用于多种应用。
这种聚合物颗粒的表面性质对于靶向药物递送非常重要。至少有以下两个方面涉及需要考虑的载药颗粒的表面性质：
1)表面电荷-对于每种特定的药物递送应用，颗粒表面可能需要为正电性的、负电性的或中性的，并且δ电位可能需要在特定的范围内。
2)表面上的官能团-为了能够在载药颗粒的表面上结合生物实体或靶向剂，必须将功能性反应性基团，例如羧基、氨基、硫醇、醛、马来酰亚胺、缩水甘油基和酸酐添加到表面上。
在某些情况下，可以通过单一解决方案实现这两个目标。例如，可以将硫酸根添加到载有药物的聚合物颗粒的表面上，以同时在表面上产生负电荷和官能团。
这里描述的本发明提供了包含微粒和纳米颗粒的药物制剂(具有或不具有药剂/药物/活性药物成分负载)，以及改善的方法，所述方法能够仅使用药学上可接受的成分生产这种药物制剂，所述药物制剂包括微颗粒和纳米颗粒，所述微颗粒和纳米颗粒具有高表面密度的硫酸根和高度带负电的表面电荷。
本发明部分基于以下发现：按照本发明方法由疏水的和/或中性的生物相容性聚合物(例如PLGA或PLA)与硫酸盐聚合物(例如聚丙烯酸)发生共沉淀或凝聚制备的微粒和纳米颗粒在颗粒的表面上提供高密度的阴离子，从而改善了免疫原性，使得其能够以高负载量包封活性剂。不受任何理论束缚，认为聚合物主链在乳液的有机相中交织，而亲水性阴离子有利于乳液液滴的表面。由此形成的互连网络形成一种颗粒，在该颗粒中，原本水溶性的聚阴离子聚合物不能被洗掉并同时保留有利于包封的疏水微环境。
如本文所用，“少(量)”在涉及溶剂的量的上下文中指的是与具有PLGA聚合物的第一溶剂的体积相比，第二溶剂的第一溶液的量/体积相对较少，从而使得第二溶剂的第一溶液在第一溶剂的聚合物溶液中乳化形成乳液(即第一乳液)，其中连续相为聚合物溶液。通常，该少量的第二溶剂的第一溶液与第一溶剂之间的体积比至少为约1比n，其中，n可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100。
如本文所用，“大(量)”是指与第一乳液的体积相比，第二溶剂的第二溶液的相对较大的量/体积，从而使得第一乳液在第二溶剂的第二溶液中乳化形成乳液(即，第二乳液)，其中连续相为第二溶剂的第二溶液。通常，第一乳液与该大量的第二溶剂的第二溶液之间的体积比至少为约1比m，其中，所述m可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100。
优选地，大规模生产得到具有约-40mV或更低、约-45mV或更低或约-50mV或更低的ζ电位的微粒或纳米颗粒。另一种描述这种性质的方式是所述zata电位是负电位，并且ζ电位的绝对值大于40mV、或者大于45mV或者大于50mV。
使用本发明的方法，将硫酸盐聚合物紧密地集成到所制备的微粒或纳米粒子中。因此，优选地，将硫酸盐聚合物并入所述微粒或纳米粒子上并增加所述微粒或纳米粒子上的负表面电荷。
将药学上可接受的带负电剂掺入微粒或纳米颗粒中是稳定且紧密的。因此，优选地，该方法还包括洗涤所述微粒或纳米颗粒，和/或将所述微粒或纳米颗粒浓缩至所需的体积。
虽然不希望受任何特定理论的束缚，但负表面电荷(由于硫酸根的存在而带负电荷)紧密地锚定在所述微粒和纳米颗粒的表面上，并因此可以承受各种洗涤条件或洗涤试验，而不会造成这种负的表面电荷和/或硫酸基的明显损失。
使用本发明的方法制备的微粒和纳米颗粒可以常规地进行洗涤，作为去除杂质和/或浓缩所制备的微粒和纳米颗粒的纯化过程的一部分。
使用本发明的方法制备的微粒和纳米颗粒也可以承受更严格的洗涤试验，例如作为质量控制过程的一部分，以确保负的表面电荷和/或羧基稳定地掺入到所制备的微粒和纳米颗粒中。
优选地，洗涤试验使用与下列实施例中例举的那些相同的或相似的条件。优选地，在洗涤试验之后，微粒和纳米粒子不会明显损失由ζ电位测定的负的表面电荷(例如，不会变为明显更小的负值-即比原始负值更接近0的负值)。
优选地，在洗涤之后，通过ζ电位测量，所述微粒或纳米颗粒保留至少约75％、80％、85％、90％、95％或99％的负的表面电荷。
结合以上关于本发明的一般性地描述，在以下部分中进一步描述本发明的具体方面。
2.定义：
如本文所用，“药学上可接受的”包括在合理的医学判断范围内适合于医学或兽医用途的那些化合物、材料、组合物和/或剂型，当其以在产品中存在的浓度、剂型或者剂量与人和动物的组织接触时不会产生过多的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。优选地，药学上可接受的材料(例如，聚合物、赋形剂、表面活性剂、溶剂或由其制备的微粒/纳米颗粒)适合于或被批准用于人类医学用途。
如本文所用，“微粒”的形状优选是大致为圆形、球形或类球形，并且通过例如激光衍射测量通常在例如约1-1000μm之间或约10-100μm之间的尺寸范围内。所述微粒还可包括不太可能在体内成团聚集的颗粒。但是应该理解，其他颗粒形态可以可能的，包括棒型、板状、片状和针型。通常，可以理解，颗粒尺寸反映了测试产品样品的体积中值几何尺寸。
如本文所用，“纳米颗粒”的形状优选为大致为圆形、球形或类球形，并且通过例如激光衍射测量或者动态光散射测量通常在例如约1-1000nm之间，约10-1000nm之间或约50-1000nm之间或约100-500nm之间的尺寸范围内。所述纳米颗粒还可包括不太可能在体内聚集的颗粒。
颗粒尺寸和粒度分布可通过动态光散射仪器测量，例如使用马尔文纳米粒度仪(MalvernZsizer)测量。替代性技术包括，例如，沉降场流分级、光子相关光谱、光散射、动态光散射、光衍射和盘式离心。术语“微粒"”和“纳米颗粒”不旨在表达任何特定的形状限制。这些颗粒包括，但不限于，具有通常的多面体或球形几何形状的颗粒。优选的颗粒的特征在于通常通过基于乳液的包封方法产生的球形几何形状。应理解，术语“微粒”和“纳米颗粒”在本文中可互换使用，除非附有尺寸的具体描述。例如，当称为“微粒和/或纳米颗粒”时，除非上下文另有要求，否则术语“微粒”也旨在包括“纳米颗粒”。
虽然每个微粒或纳米颗粒的大小通常足以引发抗原呈递细胞(APC)或其他单核巨噬细胞系统(MPS)细胞的吞噬作用，但每个微粒或纳米颗粒的大小不必是均匀的。优选地，所述微粒和纳米颗粒具有足以引发抗原提呈细胞或其他MPS细胞的吞噬作用的直径。
根据本发明，所述微粒或纳米颗粒具有负的(表面)电荷。硫酸化微粒和纳米颗粒上的负电荷密度可以通过“ζ电位”来量化。具有负表面电荷的微粒和纳米颗粒的ζ电位通常在颗粒的水悬浮液中在pH4至10，优选5至8的pH下测量。优选地，通过本发明的方法制备的微粒或纳米颗粒可具有约-20mV至约-200mV、优选约-30mV至约-100mV、最优选-35mV至-85mV的ζ电位。比约-40mV更负的ζ电位在本文中称为“高度带负电的颗粒”。
如本文所用，“约”通常指最多为所修饰的特定术语的±10％。
术语“硫酸盐聚合物”在本文中用于定义聚合物，所述聚合物包含一个或多个具有侧链硫酸盐部分的单体。硫酸盐聚合物可以是合成的，也可以是天然存在的。最初未硫酸化的聚合物可以通过化学方法硫酸化，成为硫酸盐聚合物。根据被硫酸化的试剂的程度，硫酸盐聚合物可以是轻微硫酸化或高度硫酸化。高度硫酸化聚合物可向所述微粒和纳米颗粒的表面提供更高的负电荷。优选地，聚合物主链为多糖，硫酸盐聚合物为硫酸盐多糖。
3.PLGA
PLGA通常通过丙交酯和乙交酯的开环聚合作用制备。在该反应中，辛酸亚锡通常用作催化剂，但也可以使用其他催化剂。通常使用引发剂(例如醇)来引发聚合反应。如果没有有意地添加引发剂，则痕量的含有活性质子的极性化合物(例如醇和水)可以作为引发剂。聚合通常发生在链末端具有羧基的PLGA聚合物，如下所示：
R-OH+L(丙交酯单体)+G(乙交酯单体)＝PLGA-COOH
因此，每个PLGA聚合物分子通常是线性的，并且通常在链末端包含单个COOH基团。因此，由这种PLGA聚合物制备的常规PLGA颗粒仅在表面上具有少量的COOH基团，并且其上的负电荷可能不足以用于某些用途，例如治疗炎性疾病。此外，可能没有足够数量的COOH基团将活性药物成分或其他化学部分(例如蛋白质配体或其他靶向剂)共价连接到所述微粒和纳米颗粒的表面。此类蛋白质配体或其他靶向剂可以与靶细胞、组织、器官或部位表面上的受体或结合配偶体结合。
本发明提供了各种方法或其组合，用于在PLGA/PLA颗粒表面上制备具有附加的带负电基团(例如羧基)的PLGA/PLA颗粒。具有增加的净负表面电荷的这种PLGA/PLA颗粒特别有用，例如，用于治疗某些疾病(例如炎性疾病)并促进活性药物成分或其他化学实体与微粒和纳米颗粒的结合。
优选地，所述药学上可接受的聚合物PLGA的平均分子量在所需的范围内。
该范围的下限优选不小于约100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1200、1500、2000、2500或3000Da。所需的范围具有为任何上述值的下限。
该范围的上限优选不超过500,000、400,000、300,000、200,000、100,000、75,000、50,000、40,000、35,000、30,000、25,000、20,000、15,000、10,000、7,500或者5,000Da。所需的范围具有为任何上述值的上限。
例如，所需的范围可为约500至约200,000Da，或约1,000至约10,000Da。
优选地，PLGA的平均分子量为约500至约1,000,000Da，优选约1,000至约100,000Da。
对于PLGA，平均分子量可以用其他物理性质表示，例如固有粘度。固有粘度(IV)是测量分子大小的粘度测量方法。固有粘度是基于相对于纯溶剂通过毛细管的流动时间，聚合物溶液通过窄毛细管的流动时间。对于本申请中的确定性度量(certainty measure)，所用溶剂通常为氯仿，聚合物浓度为约0.5％(w/v)。测量粘度的温度为约30℃。固有粘度的单位通常以分升每克(dL/g)表示。因此，例如，本发明中使用的PLGA可具有约0.01至约20dL/g或约0.05至约2.0dL/g的固有粘度。
所述PLGA聚合物的组成和生物降解性部分地由聚合物中丙交酯(L)与乙交酯(G)单元的摩尔比或L/G比决定。本发明中PLGA聚合物的L/G比可以为100/0至0/100。如本文所用，L/G比“100/0”是指聚丙交酯或PLA，而L/G比“0/100”是指聚乙交酯或PGA。优选地，PLGA聚合物的L/G比为约100/0至0/100，或约95/5至5/95，更优选为约85/15至15/85。本发明中最优选的L/G比为约50/50。
在制备PLGA微粒和纳米颗粒时，可以将其他聚合物与PLGA聚合物混合。例如，通常将聚乙二醇或PEG加入PLGA中以提高性能。聚乙二醇化颗粒是有用的，因为它们通常在人体或动物体内具有增加的循环时间。
优选地，也可以使用PEG与PLGA的共聚物。
由PEG与PLGA的混合物或PEG与PLGA的共聚物制备的微粒和纳米颗粒称为聚乙二醇化的PLGA微粒和纳米颗粒。
这种“聚乙二醇化”过程也可以在形成微粒和纳米颗粒之后进行。在这种情况下，PEG聚合物或含有PEG单元的其他聚合物通过物理吸附涂覆到PLGA微粒和纳米颗粒上。
PEG单元也可以通过共价键连接到PLGA微粒或纳米颗粒的表面。这种过程通常被称为“结合”。在结合过程中，含有PEG单元的反应性实体与微粒和纳米颗粒表面上的某些官能团反应以形成化学键。
因此，优选地，药学上可接受的聚合物是PLGA，并且微粒或纳米颗粒是聚乙二醇化的。通过在制备微粒和纳米颗粒期间与聚乙二醇或含有聚乙二醇的实体混合，可以使微粒或纳米颗粒聚乙二醇化。还可以通过使用PEG和PLGA的共聚物使微粒或纳米颗粒聚乙二醇化。还可以通过将PEG聚合物或含有PEG单元的聚合物物理吸附到PLGA微粒和纳米颗粒上，使微粒或纳米颗粒聚乙二醇化。此外，还可以通过共价键将PEG单元结合到PLGA微粒或纳米颗粒的表面，使微粒或纳米颗粒聚乙二醇化。
4.硫酸盐聚合物
硫酸盐聚合物可以是合成的，也可以是天然存在的。最初未硫酸化的聚合物可以通过化学方法硫酸化，成为硫酸化聚合物。根据被硫酸化的试剂的程度，硫酸盐聚合物可以是轻微硫酸化或高度硫酸化。高度硫酸化聚合物可向所述微粒和纳米颗粒的表面提供更高的负电荷。优选地，聚合物主链为多糖，硫酸盐聚合物为硫酸盐多糖。
硫酸化多糖的实施例，例如硫酸化糖胺多糖(GAG)，包括硫酸乙酰肝素、卡拉胶、岩藻聚糖、石莼聚糖和硫酸化结肠胺酸(Ludmylla Cunha and Ana Grenha,Mar.Drugs 2016,14,42；Medeiros,G.F.et al,Biochimica et Biophysica Acta(BBA)–General Subjects,1475(3):287-294；Emiliano Bedini,et al,Carbohydrate Polymers,174(2017),1224-1239；Dai-Hung Ngo and Se-Kwon Kim,Inter.J.Bio.Macrom.,62(2013),70-75.)
优选的硫酸乙酰肝素包括线性多糖，所述线性多糖包含氨基糖(例如N-乙酰-D-葡萄糖胺和/或N-乙酰-D-半乳糖胺)和糖醛酸(例如D-葡萄糖醛酸或L-异糖醛酸)，并且通常具有示意性结构：→4GlcAβ1→4GlcNAcα1→.硫酸乙酰肝素可以是合成的或从天然组织中分离。硫酸乙酰肝素优选为5-70kDa或更大；每己糖胺含有约0.8至1.8或更多硫酸盐。优选低分子量硫酸乙酰肝素酯，例如小于约15kDa。氨基糖(s)和糖醛酸(s)的比率不是关键因素，并且可以在0到100％范围内，优选25到75％，例如在30到70％之间。
从绿色海藻中可以分离出天然存在的石莼聚糖(硫酸鼠李聚糖)。然而，也可以使用合成的石莼聚糖。石莼聚糖通常以糖醛酸和鼠李糖硫酸盐为特征，可具有示意性结构：→4βGlcA1→4αL-Rhaα3S1→4αL-IdoA1→Rhaα3S1→。石莼聚糖的分子量可以在1到2000kDa之间，例如10-100kDa。优选低分子量石莼聚糖，例如小于约15kDa。硫酸化程度(已硫酸化的鼠李糖百分比)可以在1％到75％之间，例如在1％到40％之间。
卡拉胶是一种硫酸化聚半乳聚糖，通常由D-半乳糖和3,6-脱水半乳糖通过α-1,3和β-1,4键连接而成。通常，卡拉胶可以具有10-50％或更多的硫酸盐基团，例如约22-35％的硫酸盐。分子量可在5kDa至800kDa之间，例如20kDa至30kDa(降解卡拉胶)或200kDa至400kDa。优选低分子量卡拉胶，例如小于约15kDa。
岩藻聚糖的典型特征是岩藻糖和葡萄糖醛酸的硫酸酯，其分子量可在约5至30kDa或更大之间。硫酸化程度(已硫酸化的岩藻糖的百分比)可为至少约25％，例如至少约50％或至少约90％或更高。优选低分子量岩藻聚糖，例如小于约15kDa。
多糖是指由多种糖组成的聚合物。糖可以是天然存在的(例如，葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、核糖、脱氧核糖、木糖、红糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、山梨糖、塔格糖、来苏糖、核酮糖、赤藓糖、苏氨酸、岩藻糖和鼠李糖)。糖也可以是被修饰的，例如胺化糖(例如，氨基半乳糖、氨基葡萄糖或唾液酸)、乙酰化氨基糖、氟化糖、脱氧糖(例如，岩藻糖或鼠李糖)等。糖单体可在制备多糖之前硫酸化和/或多糖可硫酸化。可以相信，本发明的多糖将具有改进的清除特性和代谢作用。
硫酸化醇或胺聚合物也可以是理想的。硫酸化醇聚合物的实施例包括硫酸化聚乙烯醇(PVAS)或乙烯醇与丙烯酸的硫酸化共聚物(PAVAS)。硫酸化程度可至少约为10％(硫酸化乙烯醇百分比)，例如至少约为40％或至少约为70％。
可以使用本领域已知的任何技术来测量负表面电荷，例如通过测量ζ电位(参见实施例)。
优选的聚合物具有的分子量至少为1000(1K)g/mol、优选至少3K、至少5K、至少10K、至少15K、至少20K、至少25K、至少30K、至少35K、至少40K、至少45K、至少50K、至少75K、至少100K、至少150K、至少200K、至少250K、至少300K、至少350K的优选聚合物，至少400K、至少450K、至少500K、至少550K或至少600K或以上。优化聚合物链有助于形成持久的互穿网络。如果聚合物太小，聚合物的表面活性剂性质可能会干扰网络的形成。然而，过长或支链过多的链会妨碍良好的缠结。优选低分子量硫酸盐多糖，例如，在约200Da和15kDa之间，优选在约5kDa和15kDa之间。
此外，聚合物可沿链的长度或在链的末端以共价或离子方式取代。例如，一个或多个多糖可被靶向部分取代，例如细胞配体(或片段)、肽或唾液酸。靶向部分的取代或共轭步骤可在微粒形成之前或之后发生。
基于制剂中使用的医药上可接受的聚合物(例如PLGA)的重量，本发明中使用的硫酸盐聚合物的量可为0.01％至30％，优选0.1％至15％。
5.具有增强的负电荷表面的纳米颗粒或微粒的制备
本文所述的发明提供了几种制备具有高度带负电的表面电荷的颗粒的基本方法。这些方法不是相互排斥的，并且可以彼此组合以产生叠加的甚或协同的效果，以制备具有高度带负电的表面的微粒和纳米颗粒。
因此，在一个方面，本发明提供了一种制备包含具有负的表面电荷的微粒或纳米颗粒的组合物的方法，该方法包括使用乳液法或沉淀法(优选乳液法，包括双乳液法)，用药学上可接受的聚合物(例如PLGA)制备微粒或纳米颗粒，其中该方法包括下述任何一个或多个特征，或其组合。
具体地，本发明的方法的一个特征包括在具有促进药学上可接受的聚合物电离的pH的水溶液中实施乳液法或沉淀法。虽然不希望受任何特定理论的束缚，但与其非离子化形式相比，离子化的基团或部分更倾向于暴露在使用本发明的方法制备的最终形成的微粒或纳米颗粒的表面上，并且倾向于较少地被埋在最终形成的微粒或纳米颗粒内。
任何本领域公知的乳液法均可用于本发明的方法中。优选地，所述微粒和纳米颗粒(例如，PLGA微粒和纳米颗粒)可以通过乳化过程制备，所述乳化过程包括以下步骤(不一定按此顺序)：1)将药学上可接受的聚合物(例如，PLGA)溶解在第一溶剂(例如，二氯甲烷)中以形成聚合物溶液；2)在第二溶剂的溶液(例如，水溶液或有机溶剂)中乳化所述聚合物溶液(例如，PLGA溶液)以形成乳液，其中第一溶剂与第二溶剂不混溶或部分混溶，并且其中第二溶剂的溶液任选地包含阴离子聚合物(例如岩藻聚糖、石莼聚糖或硫酸乙酰肝素)；以及3)除去第一溶剂以形成具有负的表面电荷的微粒或纳米颗粒。
优选地，纳米颗粒或微粒中存在至少一种活性药物成分，并且乳化方法包括：(1)将所述至少一种活性药物成分和药学上可接受的聚合物(例如，PLGA)溶解在第一溶剂(例如，有机溶剂)中以形成聚合物-活性药物成分溶液；(2)将阴离子聚合物(例如岩藻聚糖、石莼聚糖或硫酸乙酰肝素)溶解在第二溶剂(例如含水溶液)中，所述第二溶剂任选包含溶解于其中的表面活性剂或表面稳定剂；(3)在所述第二溶剂/含水溶液中乳化聚合物-活性药物成分溶液；和(4)通过诸如溶剂蒸发法或溶剂交换法除去第一/有机溶剂。
优选地，在乳化过程中，PLGA溶液与水溶液的重量比通常为1:1000至10:1，优选1:100至1:1。
如本文所用，可混溶性定义为液体以任意比例混合形成均匀溶液的性质。如果在某种比例下物质/液体不形成溶液，则物质/液体被称为非混溶或不混溶。
可与水混溶的示例性溶剂包括丙酮、四氢呋喃(THF)、乙腈、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)。
另一种本领域公知的乳液法通常称为双乳液法，所述双乳液法在下述情况下可能特别有用：当首先用药学上可接受的聚合物溶液乳化活性药物成分(例如在含水溶液中制备的基于蛋白质的治疗剂)以形成第一乳液，使得基于蛋白质的治疗剂被包封在聚合物溶液中。然后，在形成微粒或纳米颗粒之前，将聚合物和包封在其中的治疗剂再次在更大体积的溶剂中乳化以形成第二乳液(例如，水包油包水或水/油/水型双乳液)。
例如，在上述水/油/水技术中，可将相对较少量的第二溶剂的第一溶液(例如，蛋白质含水溶液)(例如，有机溶剂的约20％、15％、10％、5％(v/v))引入溶解有疏水聚合物PLGA的相对较大量的第一溶剂(例如，诸如二氯甲烷或乙酸乙酯的有机溶剂)中。然后使用合适的方法(例如探针超声处理或均质化)形成第一乳液。在形成第一乳液后，通过将第一乳液引入含有乳化剂(例如聚乙烯醇)的更大体积(例如，为第一乳液的约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、10倍)的第二溶剂的第二溶液来形成第二乳液。同样，用均质化法形成第二乳液。接下来进行一段时间的溶剂蒸发，通常通过几个小时的搅拌，使聚合物硬化。结果，蛋白质溶液被捕获到PLGA聚合物的相对疏水的基质中，形成小的夹杂物。最后，收集形成的微粒或纳米颗粒，通过反复离心或过滤进行洗涤(例如用蒸馏水)，然后通常通过冷冻干燥进行脱水。
因此，优选地，所述微粒和纳米颗粒(例如，PLGA微粒和纳米颗粒)可以通过双乳化法制备，所述双乳化法包括以下步骤(不一定按此顺序)：1)将药学上可接受的聚合物(例如，PLGA)溶解在第一溶剂(例如，诸如二氯甲烷的有机溶剂)中以形成聚合物溶液；2)向聚合物溶液中加入相对较少量(例如，与有机溶剂相比，约20％、15％、10％、5％(v/v))的第二溶剂的第一溶液以形成混合物，其中第一溶剂与第二溶剂不混溶或部分混溶，并且其中第二溶剂的第一溶液任选地包含活性药物成分；3)乳化混合物以形成第一乳液；4)在更大体积(例如，为第一乳液的约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、10倍)的第二溶剂的第二溶液中乳化第一乳液，以形成第二乳液，其中第二溶剂的溶液任选地包含阴离子聚合物，并且任选地还包含表面活性剂；和5)除去第一溶剂以形成具有负表面电荷的所述微粒或纳米颗粒。
优选地，纳米颗粒或微粒中存在至少一种活性药物成分(API)，并且乳液方法包括：(1)将药学上可接受的聚合物(例如，PLGA)和任选的活性药物成分溶解在第一溶剂(例如，有机溶剂)中以形成溶液A；(2)将所述活性药物成分溶解在第二溶剂的第一溶液(例如，第一含水溶液)中以形成溶液B；(3)将阴离子聚合物溶解在第二溶剂的第二溶液(例如，第二含水溶液)中以形成溶液C，所述第二水溶液任选包含溶解于其中的表面活性剂或表面稳定剂；(4)在溶液A中乳化溶液B以形成第一乳液；(5)在溶液C中进一步乳化第一乳液以形成第二乳液；和(6)通过诸如溶剂蒸发法或溶剂交换法除去第二乳液中的有机溶剂。
优选地，基于PLGA溶液的体积，添加到聚合物溶液中用于产生第一乳液的少量第二溶剂溶液的体积通常为0.01％至50％，优选0.1％至10％。
优选地，如上述步骤4)中描述的第一乳液与第二溶剂的第二溶液的体积比通常为10:1至1:10,000，优选1:1至1:100，例如1:10或1:4-5。
任何本领域公知的沉淀法均可用于本发明的方法中。优选地，所述微粒和纳米颗粒(例如，PLGA微粒和纳米颗粒)可以通过包括以下步骤(不一定按此顺序)的沉淀法制备：1)将药学上可接受的聚合物(例如，PLGA)溶解在第一溶剂(例如，丙酮)中以形成聚合物溶液；2)制备第二溶剂的溶液(例如，含水溶液，例如1mM NaOH溶液)，其中第一溶剂可与第二溶剂混溶，并且其中第二溶剂的溶液任选地包含药学上可接受的带负电剂，并任选包含表面活性剂；和3)在混合的同时将聚合物溶液加入到第二溶剂的溶液中，从而形成具有负的表面电荷的微粒或纳米颗粒，其中第二溶剂的溶液任选为含水溶液。
优选地，沉淀法包括：(1)将药学上可接受的聚合物(例如，PLGA)和至少一种活性药物成分溶解在第一溶剂(例如，有机溶剂)中以形成聚合物-活性药物成分溶液，所述有机溶剂可与水混溶；(2)将阴离子聚合物溶解在第二溶剂(例如水溶液)中，所述第二溶剂/水溶液任选地包含溶解于其中的表面活性剂或表面稳定剂；和(3)在混合的同时将聚合物-活性药物成分溶液合并(例如添加)到水溶液中，从而形成表面具有负电荷和羧基的负载活性药物成分的纳米颗粒或微粒。
优选地，在沉淀法中，PLGA溶液与水溶液的体积比通常为10:1至1:1,000，优选1:1至1:10。
优选地，作为沉淀法中步骤3)的替代步骤，可以将第二溶剂的溶液(例如水溶液)加入到聚合物溶液(例如PLGA溶液)中。
在上述涉及乳化方法的任何方面中，优选地，第一溶剂是二氯甲烷、乙酸乙酯或氯仿。优选地，第二溶剂的第二溶液包含表面活性剂，所述表面活性剂包含有机药物赋形剂或无机药物赋形剂、各种聚合物、低聚物、天然产物、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或离子表面活性剂、以及它们的混合物。表面活性剂可包括聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨醇酯(吐温系列)表面活性剂、聚环氧乙烷-聚环氧丙烷三嵌段共聚物PEO-PPO-PEO(普朗尼克系列或泊洛沙姆系列)表面活性剂或叔辛基苯基聚氧乙烯(曲拉通X-100)表面活性剂或其盐、衍生物、共聚物或混合物。优选地，表面活性剂是聚乙烯醇(参见实施例)。
优选地，乳化步骤包括均质化、机械搅拌和/或微流化。
优选地，通过溶剂交换和/或蒸发除去第一溶剂。
优选地，微粒或纳米颗粒具有负(表面)电荷。硫酸化微粒和纳米粒子上的负电荷密度可通过ζ电位进行量化。硫酸化微粒和纳米颗粒的ζ电位通常在pH值为4至10、优选为5至8的微粒水悬浮液中测量。Malvern粒度分析仪，如Nanosizer纳米分析仪(英国伍斯特郡)，可根据工厂使用说明书测量ζ电位。优选地，通过本发明方法制备的微粒或纳米颗粒可具有约-5mV至约-200mV、优选约-15mV至约-100mV、最优选约-35mV至-85mV的ζ电位。
优选地，微粒或纳米颗粒具有约-40mV或更低、约-45mV或更低、或约-50mV或更低的ζ电位，例如-40mV至-65mV。
6.溶剂和表面活性剂
在聚合物的溶解步骤中使用的溶剂可以是溶解聚合物(例如PLGA)的任何类型的溶剂。但是，优选使用挥发性溶剂以便于去除。例如，用于形成PLGA溶液的优选溶剂包括二氯甲烷、乙酸乙酯和氯仿。
在乳化步骤中，(含水)溶液可包含表面活性剂或表面稳定剂。表面活性剂通常包括降低液体表面张力、两种液体之间的界面张力或液体和固体之间的界面张力的化合物。表面活性剂可用作洗涤剂、润湿剂、乳化剂、发泡剂和分散剂。表面活性剂通常是两亲性的有机化合物，其含有疏水性基团(通常为支链、直链或芳香烃链、氟碳链或硅氧烷链，作为“尾”)和亲水性基团(通常为头)。最为通常的情况下，表面活性剂根据其极性头部基团分类：非离子表面活性剂在其头部没有电荷基团；离子型表面活性剂带有净电荷-如果该电荷为负，则表面活性剂为阴离子表面活性剂，如果该电荷为正，则表面活性剂为阳离子表面活性剂。如果表面活性剂包含具有两个带相反电荷的基团的头部，则称为两性离子表面活性剂。优选地，阴离子表面活性剂或两性离子表面活性剂，例如含有羧基(“羧酸盐”)的表面活性剂，优选用于本发明。羧酸盐是最常见的表面活性剂，包括烷基羧酸盐(例如硬脂酸钠、月桂酰肌氨酸钠)，和基于羧酸盐的含氟表面活性剂，例如全氟壬酸盐、全氟辛酸盐(PFOA或PFO)。
虽然不希望受任何特定理论的束缚，但表面活性剂可用于乳液液滴的形成和稳定。表面活性剂还可包含有机药物赋形剂或无机药物赋形剂、各种聚合物、低聚物、天然产物、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或离子表面活性剂、以及它们的混合物。
可用于制备所述(PLGA)微粒/纳米颗粒的表面活性剂包括聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、吐温系列，普朗尼克系列、泊洛沙姆系列、曲拉通X-100等等。下文提供了其它合适的表面活性剂。
乳化过程可以通过本领域公知的任何方法进行，例如均质化、超声波处理、机械搅拌、微流化或其组合。
通常通过例如溶剂交换和蒸发来实现溶剂的去除。
优选地，为了确保大多数羧基在所述(例如，PLGA)微粒和纳米颗粒的表面上存在，将含水溶液调节至促进聚合物上的部分(moiety)的电离的pH，例如用于PLGA上的羧基的碱性pH。取决于可被电离以携带负电荷的聚合物基团的pKa，pH优选在约4-14、6-14、6-10或约8-12的范围内。通过添加例如碱或其溶液，例如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸氢钾、碳酸钾等，可以将水溶液的pH调节至优选范围。
一种以上表面活性剂的组合可用于本发明。可用于本发明的有用的表面活性剂或表面稳定剂包括，但不限于，已知的有机药物赋形剂和无机药物赋形剂。这些赋形剂包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和表面活性剂。表面活性剂或表面稳定剂包括非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和离子表面活性剂。
其它有用的表面活性剂或表面稳定剂的代表性实施例包括羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、二辛基硫代琥珀酸钠、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、葡聚糖、阿拉伯树胶、胆固醇、黄蓍胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、十六十八醇、聚西托醇(cetomacrogol)乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯烷基醚(例如，聚乙二醇醚，例如聚西托醇1000)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯(例如市售的
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例如，TWEENS
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和TWEENS
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(ICI专用化学品))；聚乙二醇类(例如，CARBOWAXS
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和
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(联合碳化物公司))、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸盐、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸铝镁、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、4-(1,1,3,3-四甲基丁基)-酚与环氧乙烷和甲醛的聚合物(也称为泰洛沙泊、superione和曲通)、泊洛沙姆(例如，PLURONICS
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和
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它们是环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物)；泊洛沙胺(例如TETRONIC
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也叫做泊洛沙胺
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其是一种四官能嵌段共聚物，由环氧丙烷和环氧乙烷顺序加成到乙二胺而得到(巴斯夫怀恩多特公司(BASF WyandotteCorporation)，帕西波尼，新泽西州))；TETRONIC
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(T-1508)(巴斯夫怀恩多特公司)，TRITONS
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(其是烷基芳基聚醚磺酸盐(罗门哈斯公司))；CRODESTAS
Figure BDA00033807500000002512
(其是蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物(禾大公司))；对-异壬基苯氧基聚(缩水甘油)，也称为
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或者SURFACTANT
Figure BDA00033807500000002514
(奥林化学品公司(OlinChemicals)，斯坦福，康涅狄格州)；Crodestas SL-40(禾大公司)；SA9OHCO(其为C18H37CH2(CON(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2(伊斯曼柯达公司))；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正癸基β-D-吡喃葡萄糖苷；正癸基β-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷；正十二烷基β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正庚基-p-D-吡喃葡萄糖苷；正庚基β-D-硫代葡糖苷；正己基β-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正壬基β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正辛基β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基β-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG衍生的磷脂、PEG-衍生的胆固醇、PEG衍生的胆固醇衍生物、PEG衍生的维生素A、PEG衍生的维生素E、溶菌酶、乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的无规共聚物、聚乙烯醇烷化酯(Brij系列表面活性剂)等等。
有用的阳离子表面活性剂或表面稳定剂的实施例包括但不限于聚合物、生物聚合物、多糖、纤维素、藻酸盐、磷脂和非聚合化合物，例如两性离子稳定剂、聚-n-甲基吡啶鎓、蒽基吡啶鎓氯化盐、阳离子磷脂、壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯基咪唑、聚凝胺、聚甲基丙烯酸甲酯三甲基溴化铵(PMMTMABr)、己基二苯乙酮基三甲基溴化铵(HDMAB)、聚乙烯吡咯烷酮-2-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸二甲基硫酸酯、1,2-双棕榈酰基-sn-丙三氧基-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)(2000)](钠盐)(也称为DPPE-PEG(2000)-胺钠)(阿凡提极性脂质(Avanti Polar Lipids)，阿拉巴斯特，阿拉巴马州)、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基三甲基溴化铵)(Polysciences公司，沃灵顿，宾夕法尼亚州)(也称为S1001)、泊洛沙胺(例如，TETRONIC
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也被称为POLOXAMINE
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)，是一种四官能嵌段共聚物，由环氧丙烷和环氧乙烷到乙二胺的顺序加成得到(巴斯夫怀恩多特公司，帕西波尼，新泽西州))、溶菌酶、长链聚合物(例如海藻酸、角叉菜胶(FMC公司)和保益乐(POLYOX，陶氏公司，米德兰德，密歇根州))。
其它有用的阳离子稳定剂包括但不限于阳离子脂质、锍、鏻和季铵化合物，例如硬脂基三甲基氯化铵、苄基-二(2-氯乙基)乙基溴化铵、椰子三甲基氯化铵或椰子三甲基溴化铵、椰子甲基二羟乙基氯化铵或椰子甲基二羟乙基溴化铵、癸基三乙基氯化铵、癸基二甲基羟乙基氯化铵或癸基二甲基羟乙基溴化铵、C12-15二甲基羟乙基氯化铵或C12-15二甲基羟乙基溴化铵、椰子二甲基羟乙基氯化铵或椰子二甲基羟乙基溴化铵、肉豆蔻基三甲基铵甲基硫酸盐、月桂基二甲基苄基氯化铵或月桂基二甲基苄基溴化铵、月桂基二甲基(乙烯氧基)4氯化铵或月桂基二甲基(乙烯氧基)4溴化铵、N-烷基(C12-18)二甲基苄基氯化铵、N-烷基(C14-18)二甲基苄基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、二甲基二癸基氯化铵、N-烷基和(C12-14)二甲基1-萘甲基氯化铵、三甲基卤化铵、烷基-三甲基铵盐和二烷基二甲基铵盐、十二烷基三甲基氯化铵、乙氧基化烷基酰氨基烷基二烷基铵盐和/或乙氧基化三烷基铵盐、二烷基苯二烷基氯化铵、N-二癸基二甲基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、N-烷基(C12-14)二甲基1-萘基甲基氯化铵和十二烷基二甲基苄基氯化铵、二烷基苯烷基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、烷基苄基甲基氯化铵、烷基苄基二甲基溴化铵、C12、C15、C17三甲基溴化铵、十二烷基苄基三乙基氯化铵、聚二烯丙基二甲基氯化铵(DADMAC)、二甲基氯化铵、烷基二甲基卤化铵、三鲸蜡基甲基氯化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三乙基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、甲基三辛基氯化铵(ALIQUAT 336TM)、POLYQUAT 10TM、四丁基溴化铵、苄基三甲基溴化铵、胆碱酯(例如脂肪酸胆碱酯)、苯扎氯铵、硬脂酰氯化合物(例如硬脂基三甲基氯化铵和二硬脂基二甲基氯化铵)、十六烷基吡啶溴化物或十六烷基吡啶氯化物、季铵化聚氧乙基烷基胺的卤化物盐、MIRAPOLTM和ALKAQUATTM(购自Alkaril化学公司)、烷基吡啶盐；胺类(例如烷基胺、二烷基胺、链烷醇胺、聚乙烯多胺、N,N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯和乙烯基吡啶)、胺盐(例如月桂基胺乙酸盐、十八烷基胺乙酸盐、烷基吡啶鎓盐和烷基咪唑鎓盐)以及氧化胺；咪唑啉盐(imide azoliniumsalt)；质子化的四级丙烯酰胺；甲基化四级聚合物，例如聚[二烯丙基二甲基氯化铵]和聚[N-甲基乙烯基吡啶氯化物]；和阳离子瓜尔胶。
这种示例性阳离子表面活性剂或表面稳定剂和其它有用的阳离子表面活性剂或表面稳定剂描述于以下文献中：J.Cross and E.Singer,Cationic Surfactants:Analytical and Biological Evaluation(Marcel Dekker,1994)；P.and D.Rubingh(Editor),Cationic Surfactants:Physical Chemistry(Marcel Dekker,1991)；和J.Richmond,Cationic Surfactants:Organic Chemistry,(Marcel Dekker,1990)，以上各文献通过引用整体并入本文。
非聚合阳离子表面活性剂或表面稳定剂为任何非聚合化合物，例如苯扎氯铵、碳鎓化合物、鏻化合物、氧鎓化合物、卤鎓化合物、阳离子有机金属化合物、季磷化合物、吡啶鎓化合物、苯铵化合物、铵化合物、羟基铵化合物、伯铵化合物、仲铵化合物、叔铵化合物和式NR1R2R3R4(+)的季铵化合物。对于式NR1R2R3R4(+)的化合物作如下说明：(i)R1-R4均不是CH3；(ii)R1-R4中的一个是CH3；(iii)R1-R4中的三个是CH3；(iv)所有R1-R4均为CH3；(v)R1-R4中的两个是CH3，R1-R4中的一个是C6H5CH2，R1-R4中的一个是具有7个或更少的碳原子的烷基链；(vi)R1-R4中的两个是CH3，R1-R4中的一个是C6H5CH2,并且R1-R4中的一个是具有十九个碳原子或更多个碳原子的烷基链；(vii)R1-R4中的两个是CH3并且R1-R4中的一个是C6H5(CH2)n，其中，n>1；(viii)R1-R4中的两个是CH3，R1-R4中的一个是C6H5CH2，并且R1-R4中的一个包含至少一个杂原子；(ix)R1-R4中的两个是CH3，R1-R4中的一个是C6H5CH2，并且R1-R4中的一个包含至少一个卤素；(x)R1-R4中的两个是CH3，R1-R4中的一个是C6H5CH2，并且R1-R4中的一个包含至少一个环状片段；(xi)R1-R4中的两个是CH3并且R1-R4中的一个是苯环；或(xii)R1-R4中的两个是CH3，并且R1-R4中的两个是纯脂肪族片段。
这些化合物包括但不限于山嵛基苄基二甲基氯化铵(behenalkonium chloride)、苄索氯铵、氯化十六烷基吡啶、山嵛基三甲基氯化铵、劳拉氯铵、西他氯铵、西曲溴铵、西曲氯铵、十六烷基胺氢氟化物(cethylaminehydrofluoride)、氯化氯烯丙基六亚甲基四胺(季铵盐-15)、二硬脂基二甲基氯化铵(季铵盐-5)、十二烷基二甲基乙基苄基氯化铵(季铵盐-14)、季铵盐-22、季铵盐-26、季铵盐-18锂蒙脱石、二甲基氨基乙基氯化物盐酸盐、半胱氨酸盐酸盐、二乙醇铵POE(10)油醚磷酸酯、二乙醇铵POE(3)油醚磷酸酯、牛脂基二甲基苄基氯化铵(tallow alkonium chloride)、二甲基二十八烷基铵膨润土、司拉氯铵、溴化度米芬、苯酸苄铵酰铵、肉豆蔻基苄基二甲基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、二盐酸乙二胺、盐酸胍、盐酸吡哆醇、盐酸碘非他胺、盐酸葡甲胺、氯化苄乙氧铵、肉豆蔻基三甲基溴化铵、油基三甲基氯化铵、聚季铵盐-1、盐酸普鲁卡因、椰油基甜菜碱、司拉氯铵膨润土、司拉氯铵水辉石、硬脂基三羟乙基丙二胺二氢氟化物、牛脂基三甲基氯化铵和十六烷基三甲基溴化铵。
这些表面活性剂或表面稳定剂中的大多数是已知的药物赋形剂，并且详细描述于下述文献中：《药物赋形剂手册》(Handbook of Pharmaceutical Excipients)，由美国药物协会和大不列颠药物协会联合出版(The Pharmaceutical Press,2000)，特别地，该文献通过引用并入本文。
表面活性剂或表面稳定剂可从商业上购买获得和/或可通过本领域已知的技术制备。
优选地，所述微粒或纳米颗粒的表面由使颗粒表面和间质之间的非特异性的或不需要的生物相互作用最小化的材料组成，例如，颗粒表面可以涂覆有防止或减少非特异性相互作用的材料。如由皮下注射后淋巴吸收的改善所证明的，通过用亲水性层(例如聚乙二醇及其共聚物(例如普朗尼克(PLURONICS)，包括聚乙二醇-嵌段-聚丙二醇-嵌段-聚乙二醇的共聚物))涂覆颗粒来进行立体稳定化，可以减少与间质蛋白质的非特异性相互作用。
7.颗粒尺寸
所述微粒和纳米颗粒的尺寸为约1nm至约1000μm，优选约10nm至约100μm，最优选约20nm至约5μm，最优选约50nm至约2μm。例如，微粒和纳米颗粒的平均颗粒尺寸在100到900nm范围内，例如，可具有约100、300、500、700或900nm的平均尺寸。
如本文所用，颗粒尺寸可通过本领域技术人员熟知的任何常规的颗粒尺寸测量技术来测定。这些技术包括，例如，沉降场流分级、光子相关光谱、光散射、动态光散射、光衍射和盘式离心。
8.其他组分
优选地，本发明的颗粒还可含有其他组分。例如，载体可以具有掺入或缀合到载体的成像剂。具有目前可商购的成像剂的载体纳米球的实施例是Kodak X-sight纳米球。无机量子限制发光纳米晶体，称为量子点(QD)，已成为荧光共振能量转移(FRET)应用中的理想供体：它们的高量子产率和可调的尺寸依赖性斯托克斯位移使得不同尺寸能够在单一紫外激发下发射蓝色到红外光(Bruchez et al.,Science,1998,281:2013；Niemeyer,C.M.,Angew.Chem.Int.Ed.,2003,42:5796；Waggoner,A.Methods Enzymol.,1995,246:362；Brus,L.E.,J.Chem.Phys.,1993,79,5566)。量子点，例如基于一类称为树枝状聚合物的混合有机/无机量子点，可用于生物标记、成像和光学生物传感系统(Lemon et al.,J.Am.Chem.Soc.,2000,122:12886)。与传统的无机量子点的合成不同，这些混合量子点纳米颗粒的合成不需要高温或高毒性、不稳定的试剂(Etienne et al.,Appl.Phys.Lett.,87:181913,2005)。
9.API
本发明的另一方面提供了一种组合物，其包含具有负的表面电荷的所述微粒或纳米颗粒，其中该组合物由根据本文所述的任何一种方法或其组合来制备。
所述组合物可以不含有其他活性药物成分或API，例如附着的肽或抗原部分。据了解，API可被非治疗性化合物(例如诊断剂、农用剂或化学剂)取代。因此，应该理解在使用术语API的每种情况下均可以被替换成术语“活性试剂”，包括诊断剂、农用剂或化学剂。
该组合物可包含API，并且该API可通过共价键(例如蛋白质的酰胺基与微粒或纳米粒子表面上的羧基之间形成的键)共价或离子连接到微粒或纳米粒子的表面。API也可以封装在微粒或纳米颗粒内。
活性药物成分的量可以是微粒或纳米颗粒的约0.01-50％(w/w)，或者是微粒或纳米颗粒的约0.05-25％，约0.1-10％，约0.2-5％，0.5-3％，1-5％，或2-5％(w/w)。
优选地，该组合物包括可代替活性药物成分或者除了药物活性成分之外的靶向部分，例如共价连接于微粒或纳米颗粒表面的肽或蛋白质配体或结构域，该靶向部分特异性地或优先地结合靶位点(例如用于靶向部分的细胞表面受体或结合配偶体)，从而使得带有这种靶向部分的微粒或纳米颗粒将在体内特异性地或优先地靶向靶位点。带有靶向部分的微粒或纳米颗粒可以进一步包含被包封或嵌入微粒或纳米颗粒内的活性药物成分，所述活性药物成分可以在靶位点释放或以其他方式起作用。事实上，硫酸盐聚合物(例如，岩藻糖胶或唾液酸)本身可以是癌症细胞的靶向部分。
通过具有靶向部分，靶向特异性的纳米颗粒能够有效地结合或以其他方式与生物实体(例如，膜成分或细胞表面受体)结合。治疗剂的靶向(例如，针对特定组织或细胞类型，针对特定病变组织但不针对正常组织等)对于治疗组织特异性疾病(例如癌症(例如前列腺癌))是理想的。例如，与细胞毒性抗癌剂的全身给药不同，靶向给药可以防止该药物杀死健康细胞。此外，靶向给药将允许给予较低剂量的药物，这可以减少通常与传统化疗相关的不良副作用。如上所述，本发明纳米颗粒的靶向特异性将通过优化纳米颗粒上的配体密度而最大化。靶向部分可以共价结合到纳米颗粒或微粒的表面。例如，靶向部分可与硫酸盐聚合物共价结合(例如，通过偶联一个或多个羧酸部分)、PLGA/PLA(例如，通过聚合物末端)或通过将另一分子或聚合物并入互穿网络。例如，靶向部分可共价连接到聚乙二醇(PEG)分子或PLGA-PEG二嵌段，并与硫酸盐聚合物一起添加到乳液中。
例如，靶向部分可以是能够结合或以其他方式与生物实体相关联的部分，例如，膜成分、细胞表面受体、前列腺特异性膜抗原等。在本发明的情况下，靶向部分是低分子量PSMA配体。如本文所使用的术语“结合(bind)”或“结合(binding)”是指表现出相互亲和力或结合能力的对应分子对或其部分之间的相互作用，通常由于特定或非特异性结合或相互作用，包括，但不限于，生化相互作用、生理相互作用和/或化学相互作用。“生物结合”定义了一种发生在成对分子之间的相互作用，所述成对分子包括蛋白质、核酸、糖蛋白、碳水化合物、激素等。术语“结合伙伴”指能够与特定分子结合的分子。“特异性结合”是指能够结合或识别结合伙伴(或有限数量的结合伙伴)的分子，如多核苷酸，其结合程度远远高于其他类似生物实体。在一组实施方案中，靶向部分具有小于约1微摩尔、至少约10微摩尔或至少约100微摩尔的亲和力(通过解离常数测量)。
在优选的实施方案中，本发明的靶向部分为小分子。在某些实施方案中，术语“小分子”是指具有相对低分子量且不是蛋白质、多肽或核酸的有机化合物，所述有机化合物既可以是自然存在的也可以是人工产生的(例如，通过化学合成)。小分子通常具有多个碳-碳键。在某些实施方案中，小分子的尺寸小于约2000g/mol。在一些实施方案中，小分子小于约1500g/mol或小于约1000g/mol。在一些实施方案中，小分子小于约800g/mol或小于约500g/mol。
在特别优选的实施方案中，小分子靶向部分靶向前列腺癌肿瘤，并且具体而言，小分子靶向部分是PSMA肽酶抑制剂。这些部分在本文中也称为“低分子量PSMA配体”。与正常组织中的表达相比，前列腺特异性膜抗原(PSMA)在恶性前列腺中的表达比正常组织高至少10倍，并且随着疾病进展到转移期，PSMA表达水平进一步上调(Silver等人，1997年，临床癌症研究，3:81)，如美国专利申请第2014/0235706号所述。
在一些实施方案中，可用于靶向与前列腺癌肿瘤相关的细胞的小分子靶向部分包括PSMA肽酶抑制剂，例如2-PMPA、GPI5232、VA-033、苯基烷基膦酰胺(Jackson et al.,2001,Curr.Med.Chem.,8:949；Bennett et al,1998,J.Am.Chem.Soc.,120:12139；Jacksonet al.,2001,J.Med.Chem.,44:4170；Tsulcarnoto et al,2002,Bioorg.Med.Chem.Lett.,12:2189；Tang et al.,2003,Biochem.Biophys.Res.Commun.,307:8；Oliver et al.,2003,Bioorg.Med.Chem.,11:4455；和Maung et al.,2004,Bioorg.Med.Chem.,12:4969),及其类似物和衍生物。在一些实施方案中，可用于靶向与前列腺癌肿瘤相关的细胞的小分子靶向部分包括硫醇和吲哚硫醇衍生物，例如2-MPPA和3-(2-巯基乙基)-1H-吲哚-2-羧酸衍生物(Majer et al.,2003,J.Med.Chem.,46:1989；和美国专利申请公开号第2005/0080128号)。在一些实施方案中，小分子靶向部分可以被用于靶向与前列腺癌肿瘤相关的细胞，这种小分子靶向部分包括羟肟酯衍生物(Stoermer et al.,2003,Bioorg.Med.Chem.Lett.,13:2097)。在一些实施方案中，小分子靶向部分可以被用于靶向与前列腺癌肿瘤相关的细胞，这种小分子靶向部分包括PBDA-基抑制剂和尿素-基抑制剂，例如，ZJ 43、ZJ 11、ZJ 17、ZJ 38(Nan et al.2000,J.Med.Chem.,43:772；和Kozikowskiet al.,2004,J.Med.Chem.,47:1729),和/或其类似物和衍生物。在某些实施方案中，小分子靶向部分可以被用于靶向与前列腺癌肿瘤相关的细胞，这种小分子靶向部分包括腐胺、精胺和亚精胺，雄激素受体靶向剂(ARTAs)，例如在以下专利中的描述：美国专利7,026,500；7,022,870；6,998,500；6,995,284；6,838,484；6,569,896；6,492,554；和美国申请公开号2006/0287547；2006/0276540；2006/0258628；2006/0241180；2006/0183931；2006/0035966；2006/0009529；2006/0004042；2005/0033074；2004/0260108；2004/0260092；2004/0167103；2004/0147550；2004/0147489；2004/0087810；2004/0067979；2004/0052727；2004/0029913；2004/0014975；2003/0232792；2003/0232013；2003/0225040；2003/0162761；2004/0087810；2003/0022868；2002/0173495；2002/0099096；2002/0099036。本发明的一个相关方面提供了一种药物组合物，其包含上述组合物和医药上可接受的载体或赋形剂。下文在单独一部分中更详细地描述药物组合物。
所述活性药物成分可以是水溶性的或者具有相对差的水溶性。例如，在将活性药物成分溶液与包含PLGA的第一溶剂混合之前，可将活性药物成分溶解在用于溶解PLGA的相同的第一溶剂中，或者溶解在合适的溶剂(可以与第一溶剂相同或不同)中以形成活性药物成分溶液，从而使得活性药物成分和PLGA都保留在所得溶液中。
在将活性药物成分溶液加入第二溶剂之前，可以首先将活性药物成分溶解在其自身的溶剂(可以与第二溶剂相同或不同)中以形成活性药物成分溶液。
活性药物成分或治疗剂可包括多种不同的化合物，包括化学化合物和化学化合物的混合物，例如小的有机分子或无机分子；糖精；寡糖；多糖；生物大分子，例如肽、蛋白质和肽类似物及衍生物；模拟肽(peptidomimetic)；抗体及其抗原结合片段；核酸；核酸类似物和衍生物；由诸如细菌、植物、真菌或动物细胞等生物材料制成的提取物；动物组织；天然存在的或合成的组合物；及它们的任何组合。优选地，所述治疗剂是小分子。
如本文所用，术语“小分子”可以指“天然产物样”的化合物，然而，术语“小分子”不限于“天然产物样”的化合物。相反，小分子的典型特征在于它含有数个碳-碳键，并且分子量小于5000道尔顿(5kDa)，优选小于3kDa，更优选小于2kDa，最优选小于1kDa。在某些情况下，优选小分子的分子量等于或小于700道尔顿。
示例性治疗剂包括，但不限于，经FDA批准的治疗剂、向FDA提出新药申请的治疗剂、处于临床试验或临床前研究中的治疗剂。
活性药物成分或治疗剂包括本文公开的类别和具体的实施例。所述类别不受具体实施例的限制。根据本发明，本领域普通技术人员还将确认属于这些类别并且有用的许多其他化合物。实施例包括放射增敏剂、类固醇、黄嘌呤、β-2-激动剂支气管扩张剂、抗炎剂、镇痛剂、钙拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、β-阻断剂、中枢活性α-激动剂、α-1-拮抗剂、抗胆碱能/解痉剂、加压素类似物、抗心律失常药、抗帕金森病药、抗心绞痛/抗高血压药、抗凝血剂、抗血小板药、镇静剂、溶血剂、肽剂、生物聚合剂、抗肿瘤药、缓泻药、止泻剂、抗微生物剂、抗真菌剂、疫苗、蛋白质或核酸。另一方面，药物活性剂可以是香豆素，白蛋白，类固醇(例如倍他米松、地塞米松、甲基强的松龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安奈德、布地奈德、氢化可的松和药学上可接受的氢化可的松衍生物)；黄嘌呤(例如茶碱和多索可可碱)；β-2-激动剂支气管扩张剂(例如沙丁胺醇、非诺特罗(fenterol)、克伦特罗、班布特罗、沙美特罗、酚丙喘宁(fenoterol)；抗炎药，包括抗哮喘抗炎药、抗关节炎抗炎药和非甾体抗炎药，其实施例包括但不限于硫化物、美沙拉嗪、布地奈德、柳氮磺吡啶、双氯芬酸、药学上可接受的双氯芬酸盐、尼美舒利、萘普生、对乙酰氨基酚、布洛芬、酮洛芬和吡罗昔康；镇痛剂，例如水杨酸盐；钙通道阻滞剂，例如硝苯地平、氨氯地平和尼卡地平；血管紧张素转换酶抑制剂，例如卡托普利、盐酸贝那普利、福辛普利钠、群多普利、雷米普利、赖诺普利、依那普利、盐酸喹那普利和盐酸莫西普利；β受体阻滞剂(即β-肾上腺素能阻滞剂)，例如盐酸索他洛尔、马来酸噻吗洛尔、盐酸艾司洛尔、卡替洛尔、盐酸普萘洛尔、盐酸倍他洛尔、硫酸巴替洛尔、酒石酸美托洛尔、琥珀酸美托洛尔、盐酸醋丁洛尔、阿替洛尔、吲哚洛尔和富马酸比索洛尔；中枢活性α-2-激动剂，例如可乐定；α-1-拮抗剂，例如多沙唑嗪和哌唑嗪；抗胆碱能/抗痉挛药，例如盐酸双环胺、氢溴酸东莨菪碱、格隆溴铵、克利溴铵、黄酮酸盐和奥昔布宁；加压素类似物，例如加压素和去氨加压素；抗心律失常药，例如奎尼丁、利多卡因、盐酸托西坦、盐酸美西律、地高辛、盐酸维拉帕米、盐酸普罗帕酮、醋酸氟卡尼、盐酸普鲁卡因胺、盐酸莫雷西嗪和磷酸二丙酰胺等；抗帕金森病药，例如多巴胺、左旋多巴/卡比多巴、司来吉兰、二氢麦角环肽、培高利特、麦角乙脲、阿扑吗啡和溴隐亭；抗心绞痛药和抗高血压药，例如单硝酸异山梨酯、硝酸异山梨酯、心得安、阿替洛尔和维拉帕米；抗凝血剂和抗血小板药，例如香豆素、华法林、乙酰水杨酸和噻氯匹定；镇静剂，例如苯二氮卓类和巴比妥类；溶血剂，例如劳拉西泮、溴西泮和地西泮；肽剂和生物聚合剂，例如降钙素、亮丙瑞林和其他LHRH激动剂、水蛭素、环孢菌素、胰岛素、生长抑素、普罗瑞林、干扰素、去氨加压素、生长激素、胸腺五肽、匹多莫德、促红细胞生成素、白细胞介素、褪黑激素、粒细胞/巨噬细胞-CSF和肝素；抗肿瘤药，例如依托泊苷、依托泊苷磷酸盐、环磷酰胺、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、长春新碱、多柔比星、顺铂、羟基脲、甲酰四氢叶酸钙、他莫昔芬、氟他胺、天冬酰胺酶、六甲蜜胺、米托坦和盐酸丙卡巴肼；缓泻药，例如番泻叶浓缩物、鼠李蒽酚、比沙可啶和匹可硫酸钠；止泻剂，例如盐酸地诺考因、盐酸洛哌丁胺、呋喃唑酮、盐酸地芬诺酯和微生物；疫苗，例如细菌疫苗和病毒疫苗；抗微生物剂，例如青霉素、头孢菌素和大环内酯类；抗真菌剂，例如咪唑和三唑衍生物；和核酸，例如编码生物蛋白质的DNA序列和反义寡核苷酸。
合适的活性药物成分的实施例包括英夫利昔单抗、依那西普、贝伐单抗、雷珠单抗、阿达木单抗、赛妥珠单抗、戈利木单抗、白细胞介素1(IL-1)阻断剂(例如阿那白滞素)、T细胞共刺激阻断剂(例如阿巴西普)、白细胞介素6(IL-6)阻断剂(例如托珠单抗)；白细胞介素l3(IL-13)阻滞剂(例如罗氏单抗lebrikizumab)；干扰素α(IFN)阻断剂(例如罗利珠单抗(Rontalizumab))；β7整合素阻断剂(例如rhuMAbβ7)；IgE途径阻断剂(例如抗-M1Prime)；分泌的同源三聚体LTa3和膜结合的异源三聚体LTα1/β2阻断剂，例如抗淋巴毒素α(Lta)或抗VEGF剂等。
为方便起见，本文使用术语“API(活性药物成分)”。应理解，该术语可在本说明书中与术语生物分子、蛋白质和核酸替换，如在每种情况下具体叙述的那样。
本发明特别适用于抗癌试剂的给药。例如，所述试剂可以是DNA去甲基试剂5-氮胞苷(氮胞苷)或5-氮杂-2'-脱氧胞苷(地西他滨)，(阿糖胞苷或ara-C)；伪异胞苷(psi-ICR)；5-氟-2'-脱氧胞苷(FCdR)；2'-脱氧-2'，2'-二氟胞苷(吉西他滨)；5-氮杂-2'-脱氧-2'，2'-二氟胞苷；5-氮杂-2'-脱氧-2'-氟胞苷；胞苷脱氨酶抑制剂(Zebularine)；2'，3'-二脱氧-5-氟-3'-噻胞苷(Emtriva)；2'-环胞苷(安替他滨)；法扎拉宾或ara-C；6-氮杂胞苷(6-aza-CR)；5,6-二氢-5-氮杂胞苷(dH-aza-CR)；N.sup.4-戊氧基-羰基-5'-脱氧-5-氟胞苷(卡培他滨)；N4十八烷基阿糖胞苷；或反油酸阿糖胞苷。胞苷类似物也可在结构上与胞苷或脱氧胞苷相关，并在功能上模拟和/或拮抗胞苷或脱氧胞苷的作用。这些药物还可以包括5-氟尿嘧啶、阿非他尼、阿帕霉素、阿那曲唑、蒽环类药物、阿昔替尼、AVL-101、AVL-291、苯达莫司汀、博莱霉素、硼替佐米、博斯汀尼、苔藓虫素-1、白消安、卡利霉素、喜树碱、卡铂、10-羟基喜树碱、卡莫司汀、塞来昔布、氯霉素、顺铂、COX-2抑制剂、伊立替康(CPT-11)、SN-38、卡铂、克拉屈滨、喜树碱、环唑替尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、达沙替尼、地那昔布、多西紫杉醇、达卡霉素、柔红霉素、DM1、DM3、DM4、阿霉素、2-吡咯烷多柔比星(2-PDox)，2-PDox(pro-2-PDox)的前药型式，氰基吗啉多柔比星，阿霉素葡醛酸苷，内皮抑制素，表柔比星葡醛酸苷，厄洛替尼，雌孕酮，表鬼臼毒素，厄洛替尼，恩替诺司他，雌激素受体结合剂，足叶乙甙(VP16)，足叶乙甙葡醛酸苷，磷酸足叶乙甙，依西美坦，芬戈利莫，氟尿苷(FUdR)，3'，5'-O-二油酰基-FudR(FudR-dO)，氟达拉宾，氟他胺，法尼基蛋白转移酶抑制剂，黄吡利多，福斯他马替尼，甘尼替匹布，GDC-0834，GS-1101，吉非替尼，吉西他滨，羟基脲，伊布替尼，伊达柔比星，依地拉利昔布，异环磷酰胺，伊马替尼，拉帕替尼，来诺达胺，亚叶酸，LFM-A13，洛莫司汀，甲雷他明，美法仑，巯基嘌呤、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌、密特拉霉素、丝裂霉素、丝裂坦、一甲基奥斯汀F(MMAF)、一甲基奥斯汀D(MMAD)、一甲基奥斯汀E(MMAE)、纳维本、奈拉替尼、尼罗替尼、硝基苏拉、奥拉帕利、普利康霉素、原卡巴嗪、紫杉醇、PCI-32765、戊他汀、PSI-341、雷洛昔芬、塞莫司汀、SN-38、，索拉非尼、链脲佐菌素、SU11248、舒尼替尼、三苯氧胺、替马唑胺、反铂、沙利度胺、硫鸟嘌呤、硫替帕、替尼泊苷、拓扑替康、尿嘧啶芥子气、瓦塔拉尼、长春瑞滨、长春花碱、长春新碱和ZD1839或其药学上可接受的盐。
抗癌试剂包括，但不限于，基因、配体、受体、蛋白质、因子的抑制剂、激动剂、拮抗剂、配体、调节剂、刺激剂、阻滞剂、激活剂或抑制剂，所述基因、配体、受体、蛋白质、因子例如腺苷受体(例如A2B、A2a、A3)、Abelson鼠白血病病毒癌基因同源物1基因(ABL，例如ABL1)，乙酰辅酶A羧化酶(如ACC1/2)、促肾上腺皮质激素受体(ACTH)、活化CDC激酶(ACK，如ACK1)、腺苷脱氨酶、腺苷酸环化酶、ADP核糖环化酶-1、溶氧素、血管紧张素原(AGT)基因、小鼠胸腺瘤病毒癌基因同源物1(AKT)蛋白激酶(如AKT1、AKT2、AKT3)、AKT1基因、碱性磷酸酶、α1肾上腺素受体、α2肾上腺素受体、α酮戊二酸脱氢酶(KGDH)，氨基肽酶N、精氨酸脱氨酶、β肾上腺素受体、间变性淋巴瘤激酶受体、间变性淋巴瘤激酶(ALK，如ALK1)、ALK-5蛋白激酶、AMP活化蛋白激酶、雄激素受体、血管生成素(如配体-1、配体-2)、载脂蛋白A-I(APOA1)基因、凋亡信号调节激酶(ASK，如ASK1)，凋亡诱导因子、凋亡蛋白(如1，2)、精氨酸酶(I)、天冬酰胺酶、小行星同源物1(ASTE1)基因、共济失调毛细血管扩张症和Rad3相关(ATR)的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、Axl酪氨酸激酶受体、芳香化酶、极光蛋白激酶(如1，2)、碱性蛋白酶、BCR(断点簇区)蛋白和基因，B细胞淋巴瘤2(BCL2)基因、Bc12蛋白、Bc12结合成分3、BCL2L11基因、杆状病毒IAP重复序列5(BIRCS)基因、B-Raf原癌基因(BRAF)、Brc-Abl酪氨酸激酶、β-连环蛋白、B-淋巴细胞抗原CD19、B-淋巴细胞抗原CD20、B-淋巴细胞刺激配体、B-淋巴细胞粘附分子、骨形态发生蛋白-10配体、骨形态发生蛋白-9配体调节剂、短链蛋白、缓激肽受体、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、溴多巴胺和外域(BET)含溴多巴胺的蛋白质(如BRD2、BRD3、BRD4)、钙调素、钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK，如CAMKII)、癌睾丸抗原2、癌睾丸抗原NY-ESO-1、，大麻素受体(如CB1、CB2)、碳酸酐酶、半胱氨酸蛋白酶8凋亡相关半胱氨酸肽酶CASP8 FADD样调节因子、半胱氨酸蛋白酶(如半胱氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸蛋白酶-7、半胱氨酸蛋白酶-9)，半胱氨酸蛋白酶募集结构域蛋白-15、组织蛋白酶G、趋化因子(C-C基序)受体(如CCR2、CCR4、CCR5)、CCR5基因、趋化因子CC21配体、分化簇(CD)如CD4、CD27、CD29、CD30、CD33、CD37、CD40、CD40受体、CD40配体、CD40LG基因、CD44、CD45、CD47、CD49b、CD51、CD52、CD55、CD58、CD66e、CD70基因、CD74、CD79、CD79b、CD79b基因、CD80、CD95、CD99、CD117、CD122、CDw123、CD134、CDw137、CD158a、CD158b1、CD158b2、CD223、CD276抗原；绒毛膜促性腺激素，细胞周期蛋白G1，细胞周期蛋白D1、细胞周期素依赖性激酶(CDK，如CDK1、CDK1B、CDK2-9)、酪蛋白激酶(CK，如CM、CMI)、c-Kit(酪氨酸蛋白激酶试剂盒或CD117)、c-Met(肝细胞生长因子受体(HGFR))、CDK激活激酶(CAK)、检查点激酶(如CHK1、CHK2)、胆囊收缩素CCK2受体、连接蛋白(如6、18)、凝聚素、补体C3、COP9信号体亚单位5、CSF-1(集落刺激因子1受体)、CSF2基因、凝聚素(CLU)基因、结缔组织生长因子、环氧合酶(如1、2)、癌/睾丸抗原1B(CTAG1)基因、CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞蛋白4)受体、CYP2B1基因、半胱氨酸棕榈酰转移酶豪猪、细胞因子信号-1、细胞因子信号-3，细胞色素P450 11B2，细胞色素P450还原酶，细胞色素P450 3A4、细胞色素P450 17A1、细胞色素P450 17、细胞色素P450 2D6(前提是它们是抗癌剂或细胞色素修饰剂，而不是化学抑制剂)，细胞质异柠檬酸脱氢酶、胞嘧啶脱氨酶、胞嘧啶DNA甲基转移酶、细胞毒性T淋巴细胞蛋白-4、趋化因子(C--X--C基序)受体(如CXCR4、CXCR1和CXCR2)，δ样蛋白配体(如3，4)，脱氧核糖核酸酶，Dickkopf-1配体，二氢嘧啶脱氢酶，DNA结合蛋白(如HUβ)，DNA依赖性蛋白激酶，DNA旋转酶，DNA甲基转移酶，DNA聚合酶(如α)，DNA引物，盘状结构域受体(DDR，如DDR1)，DDR2基因，二氢叶酸还原酶(DHFR)、二肽基肽酶IV、左旋多巴胺互变异构酶、dUTP焦磷酸酶、棘皮动物微管样蛋白4、表皮生长因子受体(EGFR)基因、EGFR酪氨酸激酶受体、真核细胞翻译起始因子5A(EIFSA)基因、弹性蛋白酶、延伸因子1α2、延伸因子2、内切胶质、内切核酸酶、内质素、内切唾液酸、内皮抑素、内皮素(如ET-A、ET-B)、玉米淀粉同源物2增强子(EZH2)、表皮生长因子、表皮生长因子受体(EGFR)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、肝配蛋白(EPH)酪氨酸激酶(如Epha3、Ephb4)、肝配蛋白B2配体、Epigen、Erb-B2(v-Erb-B2禽红细胞白血病病毒癌基因同源物2)酪氨酸激酶受体、Erb-b3酪氨酸激酶受体、Erb-b4酪氨酸激酶受体、细胞外信号调节激酶(ERK)、E-选择素、雌二醇17β脱氢酶、雌激素受体(如α、β)、雌激素相关受体、出口蛋白1、细胞外信号相关激酶(如1、2)、因子(如Xa、VIIa)、Fas配体、脂肪酸合成酶、铁蛋白、粘着斑激酶(FAK，如FAK2)、成纤维细胞生长因子(FGF，如FGF1、FGF2、FGF4)、FGF-2配体、FGF-5配体、纤维连接蛋白、，Fms相关酪氨酸激酶3(Flt3)、法尼类x受体(FXR)、叶酸、叶酸转运体1、叶酸受体(如α)、叶酸水解酶前列腺特异性膜抗原1(FOLH1)、成对碱性氨基酸裂解酶(FURIN)、FYN酪氨酸激酶、半乳糖基转移酶、半乳糖基转移酶-3、，糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR受体、糖皮质激素、β-葡萄糖醛酸酶、谷氨酸羧肽酶II、谷氨酰胺酶、谷胱甘肽S-转移酶P、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、糖原合成酶激酶(GSK，如3-β)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)配体、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)受体、促性腺激素释放激素(GNRH)、生长因子受体结合蛋白2(GRB2)、分子伴侣GREL2基因、Grp78(78kDa葡萄糖调节蛋白)钙结合蛋白、印迹母体表达转录本(H19)基因，热稳定肠毒素受体，乙酰肝素酶，肝细胞生长因子，热休克蛋白基因，热休克蛋白(如27，70，90α，β)，刺猬蛋白，HERV-H LTR结合蛋白2，己糖激酶，酪氨酸蛋白激酶HCK，组胺H2受体，组蛋白脱乙酰酶(HDAC，如1，2，3，6，10，11)组蛋白H1、组蛋白H3、组蛋白甲基转移酶(DOT1L)、人类白细胞抗原(HLA)、HLA I类抗原(A-2α)、HLA II类抗原、同源框蛋白NANOG、丝裂原活化蛋白激酶激酶1(MAP4K1、HPK1)、HSPB1基因、人乳头瘤病毒(如E6、E7)蛋白、透明质酸酶、透明质酸、缺氧诱导因子-1α、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、免疫球蛋白(如G、G1、G2、K、M)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO，如IDO1)、吲哚胺吡咯2,3-双加氧酶1抑制剂、I-κB激酶(IKK，如IKKβε)、免疫球蛋白Fc受体、免疫球蛋白γFc受体(如I、III、IIIA)，白介素1配体，白介素2配体，白介素2，白介素2基因，白介素1α，白介素1β，白介素2，白介素2受体α亚单位，白介素3受体，白介素4，白介素6，白介素7，白介素8，白介素12，白介素15，白介素12基因，白介素17，白介素13受体α2，白介素29配体，白介素1受体相关激酶4(IRAK4)，胰岛素样生长因子(如1，2)，胰岛素受体，整合素α-V/β-3，整合素α-V/β-5，整合素α-V/β-6，整合素α-5/β-1、整合素α-4/β-1、整合素α-4/β-7、黑色素瘤2中缺失的干扰素诱导蛋白(AIM2)、干扰素(如α、α2、β、γ)、干扰素I型受体、异柠檬酸脱氢酶(如IDH1、IDH2)、Janus激酶(JAK，如JAK1、JAK2)、Jun N末端激酶、激酶插入域受体(KDR)，杀伤细胞免疫球蛋白样受体，吻素(KISS-1)受体，v-kit Hardy-Zuckerman 4猫肉瘤病毒癌基因同源物(kit)酪氨酸激酶，KIT基因，驱动蛋白样蛋白KIF11，激肽释放酶相关肽酶3(KLK3)基因，Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)基因，乳铁蛋白，淋巴细胞激活基因3蛋白(LAG-3)，溶酶体相关膜蛋白家族(LAMP)基因，羊毛甾醇-14去甲基化酶，LDL受体相关蛋白-1，白三烯A4水解酶，李斯特菌溶素，L-选择素，黄体生成素受体，裂解酶、淋巴细胞抗原75、赖氨酸脱甲基酶(如KDM1、KDM2、KDM4、KDM5、KDM6、A/B/C/D)、淋巴细胞功能抗原-3受体、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)、淋巴细胞趋化素、Lyn(LCK/是新的)酪氨酸激酶、溶血磷脂酸-1受体、赖氨酰氧化酶蛋白(LOX)、赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXL，如LOXL2)，赖氨酰氧化酶同系物2，巨噬细胞迁移抑制因子，黑色素瘤抗原家族A3(MAGEA3)基因，MAGEC1基因，MAGEC2基因，主要穹窿蛋白，肉豆蔻酰化富含丙氨酸蛋白激酶C底物(MARKS)蛋白，Melan-A(MART-1)黑色素瘤抗原，肿瘤相关G蛋白偶联受体、基质金属蛋白酶(MMP，如MMP2、MMP9)、髓细胞白血病1(MCL1)基因、Mcl-1分化蛋白、巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)配体、黑色素瘤相关抗原(如1、2、3、6)、黑素细胞刺激素配体、黑素细胞蛋白Pmel 17、膜铜胺氧化酶、间皮素、代谢型谷氨酸受体1、丝裂原活化蛋白激酶(MEK，如MEK1、MEK2)、肝细胞生长因子受体(MET)基因、MET酪氨酸激酶、甲硫氨酸氨基肽酶-2、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、Mdm2 p53结合蛋白、Mdm4蛋白、金属还原酶1(前列腺1的六种跨膜上皮抗原)，转移抑素、甲基转移酶、线粒体3酮酰辅酶A硫酶、MAPK活化蛋白激酶(如MK2)、mTOR(雷帕霉素的机械靶点(丝氨酸/苏氨酸激酶)、mTOR复合物(如1，2)、粘蛋白(如1，5A，16)、mut T同源物(如MTH，如MTH1)，Myc原癌基因蛋白，NAD ADP核糖基转移酶，利钠肽受体C，神经细胞粘附分子1，神经激肽受体，神经激肽2，一氧化氮合酶，核因子(NF)κB，NFκB激活蛋白，神经激肽1(NK1)受体，NK细胞受体，NK3受体，NKG2 A B激活NK受体，NIMA相关激酶9(NEK9)、去甲肾上腺素转运体、Notch(如Notch-2受体、Notch-3受体)、核磷蛋白间变性淋巴瘤激酶(NPM-ALK)、2,5-寡腺苷酸合成酶、核红系2-相关因子2、核仁磷脂、核磷蛋白、O-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶、鸟氨酸脱羧酶、乳清酸磷酸核糖转移酶、孤儿核激素受体NR4A1、阿片受体(如δ)、骨钙素、破骨细胞分化因子、骨桥蛋白、OX-40(肿瘤坏死因子受体超家族成员4TNFRSF4或CD134)受体、2-氧谷氨酸脱氢酶、嘌呤能受体P2X配体门控离子通道7(P2X7)、甲状旁腺激素配体、p53抑癌蛋白、P3蛋白、程序性细胞死亡1(PD-1)、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(PIM，如PIM-1、PIM-2、PIM-3)、聚ADP核糖聚合酶(PARP，如PARP1、2和3)、p38激酶、p38 MAP激酶、血小板衍生生长因子(PDGF，如α、β)、P糖蛋白(如1)、血小板衍生生长因子(PDGF，如α、β)、PKN3基因、P-选择素、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K，如α、δ、γ)、磷酸化酶激酶(PK)、胎盘生长因子、多效性耐药转运体、丛蛋白B1、Polo样激酶1、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR，如α、δ、γ)，在黑色素瘤(PRAME)基因中优先表达抗原，可能的转录因子PML，程序性细胞死亡配体1抑制剂(PD-L1)，孕酮受体，前列腺特异性抗原，前列腺酸性磷酸酶，前列腺样受体(EP4)，蛋白酶体，蛋白法尼基转移酶、蛋白激酶(PK，如A、B、C)、蛋白E7、蛋白酪氨酸激酶、蛋白酪氨酸磷酸酶β、polo样激酶(PLK)、PLK1基因、丙炔基结合蛋白(PrPB)、原卟啉原氧化酶、原载脂蛋白(PSAP)基因、磷酸酶和张力蛋白同系物(PTEN)、嘌呤核苷磷酸化酶、丙酮酸激酶丙酮酸脱氢酶(PDH)，丙酮酸脱氢酶激酶，Raf蛋白激酶(如1，B)、RAF1基因、Ras GTP酶、Ras基因、5-α-还原酶、RET基因、RET酪氨酸激酶受体、视网膜母细胞瘤相关蛋白、维甲酸受体(如γ)、维甲酸X受体、Rheb(富含脑的Ras同源物)GTPase、Rho(Ras同源物)相关蛋白激酶2、核糖核酸酶、，核糖核苷酸还原酶(如M2亚单位)、核糖体蛋白S6激酶、RNA聚合酶(如I、II)、Ron(受体)酪氨酸激酶、ROS1(ROS原癌基因1、受体酪氨酸激酶)基因、Ros1酪氨酸激酶、Runt相关转录因子3、5100钙结合蛋白A9、肉瘤内质钙ATP酶、γ分泌酶、分泌型卷曲相关蛋白-2、信号素-4D、SL细胞因子配体、丝氨酸蛋白酶、信号淋巴细胞激活分子(SLAM)家族成员7、脾酪氨酸激酶(SYK)、Src酪氨酸激酶、，肿瘤进展基因座2(TPL2)、丝氨酸/苏氨酸激酶(STK)、信号转导和转录(STAT，如STAT-1、STAT-3、STAT-5)、第二线粒体衍生的半胱天冬酶激活剂(SMAC)蛋白、平滑(SMO)受体、磷酸钠协同转运体2B、碘化钠协同转运体、生长抑素受体(如1、2、3、4、5)、音速刺猬蛋白、特异蛋白1(Sp1)转录因子、鞘磷脂合酶、鞘氨醇-1-磷酸受体-1、鞘氨醇激酶(如1、2)、SRC基因、STAT3基因、前列腺六种跨膜上皮抗原(STEAP)基因、类固醇硫酸酯酶、干扰素基因刺激因子蛋白、干扰素基因刺激因子(STING)受体、，基质细胞衍生因子1配体，SUMO(小泛素样修饰物)，超氧化物歧化酶，维持素蛋白，突触蛋白3，粘结蛋白聚糖-1，突触核蛋白α，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(TBK，如TBK1)，TATA盒结合蛋白相关因子RNA聚合酶I亚单位B(TAF1B)基因，T细胞表面糖蛋白CD8，T细胞CD3糖蛋白ζ链、T细胞分化抗原CD6、T细胞表面糖蛋白CD28、Tec蛋白酪氨酸激酶、Tek酪氨酸激酶受体、端粒酶、Tenascin、端粒酶逆转录酶(TERT)基因、转化生长因子(TGF，如β)激酶、TGFβ2配体、T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域含-3(TIM-3)、组织因子、，肿瘤坏死因子(TNF，如α、β)、TNF相关凋亡诱导配体、TNFR1相关死亡域蛋白、TNFSF9基因、TNFSF11基因、滋养层糖蛋白(TPBG)基因、转铁蛋白、原肌球蛋白受体激酶(Trk)受体(如TrkA、TrkB、TrkC)、滋养层糖蛋白、胸苷酸合成酶、具有免疫球蛋白样和EGF样结构域(TIE)受体的酪氨酸激酶、Toll样受体(TLR如1-13)、拓扑异构酶(如I、II、III)、肿瘤蛋白53(TP53)基因、转录因子、转移酶、转化生长因子TGF-β。受体激酶、转谷氨酰胺酶、易位相关蛋白、跨膜糖蛋白NMB、肿瘤坏死因子13C受体、胸苷激酶、胸苷磷酸化酶、胸苷酸合成酶、胸腺肽(如α1)、甲状腺激素受体、Trop-2钙信号转换器、促甲状腺激素受体、，色氨酸5-羟化酶，酪氨酸酶，酪氨酸激酶(TK)，酪氨酸激酶受体，酪氨酸蛋白激酶ABL1抑制剂，坦克结合激酶(TBK)，血小板生成素受体，TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体，微管蛋白，肿瘤抑制候选基因2(TUSC2)，酪氨酸羟化酶，泛素结合酶E2I(UBE2I，UBC9)，泛素，泛素羧基水解酶同工酶L5，泛素硫酯酶-14，尿素酶，尿激酶纤溶酶原激活剂，子宫珠蛋白，香草醛VR1，血管细胞粘附蛋白1、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、T细胞活化V域Ig抑制因子(VISTA)、VEGF-1受体、VEGF-2受体、VEGF-3受体、VEGF-A、VEGF-B、波形蛋白、维生素D3受体、原癌基因酪氨酸蛋白激酶是、Wee-1蛋白激酶、威尔姆斯肿瘤蛋白、威尔姆斯肿瘤抗原1、凋亡蛋白X-连锁抑制剂、锌指蛋白转录因子或其任何组合。
抗癌试剂包括根据其作用机制或类别定义的制剂，包括：抗代谢产物/抗癌试剂，例如嘧啶类似物氟尿苷、卡培他滨、阿糖胞苷、CPX-351(阿糖胞苷脂质体、柔红霉素)、TAS-118；嘌呤类似物、叶酸拮抗剂(如普拉特雷酯)和相关抑制剂；抗增殖/抗有丝分裂剂，包括天然产物，如长春花生物碱(长春花碱、长春新碱)和微管，如紫杉烷(紫杉醇、多西紫杉醇)、长春花素、诺可达唑、埃博噻隆、长春瑞滨(长春花碱)和附睾毒素(依托泊苷、替尼泊苷)；DNA损伤剂，如放线菌素、氨沙林、白消安、卡铂、氯霉素、顺铂、环磷酰胺(环磷酰胺)(环磷酰胺)、达克霉素、柔红霉素、阿霉素、表阿霉素、异环磷酰胺、美法仑、甲胺汞、丝裂霉素C、米托蒽醌、亚硝基脲、丙卡巴嗪、紫杉醇、泰索帝、替尼泊甙、足叶乙甙、和三乙烯基硫代磷酰胺；DNA低甲基化剂，如胍地西他滨(SGI-110)抗生素，如达卡霉素、柔红霉素、阿霉素、伊达霉素、蒽环类、米托蒽醌、博莱霉素、褶皱霉素(密特拉霉素)和；酶，例如系统代谢L-天冬酰胺并剥夺细胞合成自身天冬酰胺能力的L-天冬酰胺酶；抗血小板药物；靶向Bcl-2的DNAi寡核苷酸，如PNT2258；激活或重新激活潜在人类免疫缺陷病毒(HIV)的试剂，如帕诺比诺司他或罗米地蛋白酶天冬酰胺酶刺激剂，如克立他酶(crisantaspase)(Erwinase.RTM.)和GRASPA(ERY-001，ERY-ASP)；pan-Trk、ROS1和ALK抑制剂，如恩曲替尼间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂，如阿雷替尼抗增殖/抗有丝分裂烷基化剂，如氮芥、环磷酰胺和类似物(美法仑、氯苯脲、六甲基三聚氰胺和硫替帕)、烷基亚硝基脲(卡莫司汀)和类似物,链脲佐菌素和三氮烯(达卡巴嗪)；抗增殖/抗有丝分裂抗代谢物，如叶酸类似物(甲氨蝶呤)；铂配合物(顺铂、奥昔洛铂和卡铂)、丙卡巴嗪、羟基脲、米托坦和氨基谷氨酰胺；激素、激素类似物(雌激素、三苯氧胺、戈舍雷林、比卡鲁胺和尼鲁他胺)和芳香化酶抑制剂(来曲唑和阿那曲唑)；抗凝剂，如肝素、合成肝素盐和其他凝血酶抑制剂；组织纤溶酶原激活剂、链激酶、尿激酶、阿司匹林、双嘧达莫、噻氯匹定和氯吡格雷等纤溶剂；抗迁移剂；抗分泌剂(breveldin)；免疫抑制剂他克莫司、西罗莫司、硫唑嘌呤和霉酚酸酯；化合物(TNP-470，染料木素)和生长因子抑制剂(血管内皮生长因子抑制剂和成纤维细胞生长因子抑制剂，如FPA14；血管紧张素受体阻滞剂，一氧化氮供体；反义寡核苷酸，如AEG35156；DNA干扰寡核苷酸，如PNT2258，AZD-9150抗体，如曲妥珠单抗和利妥昔单抗；抗HER3抗体，如LJM716抗HER2抗体，如玛格妥昔单抗(margetuximab)；抗HLA-DR抗体，如IMMU-114；抗IL-3抗体，如JNJ-56022473；抗OX40抗体，如MEDI6469抗EphA3抗体，如KB-004；抗CD20抗体，如阿托珠单抗(obinutuzumab)；抗程序性细胞死亡蛋白1(抗PD-1)抗体，如纳武单抗(nivolumab)(OPDIVO，BMS-936558，MDX-1106)，帕博丽珠单抗(pembrolizumab)(KEYTRUD，MK-3477，SCH-900475，派姆单抗(lambrolizumab，CAS注册号1374853-91-4)，匹迪利珠单抗和抗程序性死亡配体1(抗PD-L1)抗体，如BMS-936559，阿替唑珠单抗(MPDL3280A)，杜瓦鲁单抗(MEDI4736)，阿维鲁单抗(MSB0010718C)和MDX1105-01，CXCR4拮抗剂如BL-8040；CXCR2拮抗剂如AZD-5069；GM-CSF抗体，例如仑兹鲁单抗(lenzilumab)。选择性雌激素受体下调因子(SERD)，如氟维司坦(Faslodex)；转化生长因子-β(TGF-β)激酶拮抗剂，如galunisertib；一种双特异性抗体，如MM-141(IGF-1/ErbB3)、MM-111(Erb2/Erb3)、JNJ-64052781(CD19/CD3)。突变选择性EGFR抑制剂，如PF-06747775、EGF816、ASP8273、ACEA-0010、BI-1482694。α-酮戊二酸脱氢酶(KGDH)抑制剂如CPI-613，XPO1抑制剂如塞利尼索(selinexor)(KPT-330)。异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)抑制剂如依那西替尼(AG-221)，IDH1抑制剂如AG-120和AG-881(IDH1和IDH2)。靶向白细胞介素-3受体(IL-3R)的药物，如SL-401。精氨酸脱氨酶刺激剂，如聚乙二醇亚胺酶(ADI-PEG-20)抗体-药物结合物，如MLN0264(抗GCC，鸟苷酸环化酶C)、T-DM1(曲妥珠单抗-美坦新偶联物，Kadcycla)、米拉组单抗(milatuzumab-doxorubicin)(hCD74-DOX)、维布妥昔单抗(brentuximab-vedotin)、DCDT2980S、波妥珠单抗维多丁(Polatuzumab vedotin)、SGN-CD70A、SGN-CD19A、奥英妥珠单抗(Inotuzumab Ozogamicin)、莫星-洛沃妥珠单抗(lorvotuzumab mertansine)、SAR3419、isactuzumab govitecan、抗连接蛋白-18.2抗体，如IMAB362。β-连环蛋白抑制剂，如CWP-291和CD73拮抗剂，如MEDI-9447；c-PIM抑制剂，如PIM447，BRAF抑制剂，如达布拉非尼、维穆拉非尼，鞘氨醇激酶-2(SK2)抑制剂，如耶利娃。(ABC294640)细胞周期抑制剂，如塞洛美替尼(MEK1/2)，沙巴替滨，AKT抑制剂，如MK-2206，依帕替尼，阿富列西替布，抗CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞蛋白-4)抑制剂，如银耳单抗，c-MET抑制剂，如AMG-337，萨沃利替尼，替凡尼(ARQ-197)，卡马替尼，CSF1R/KIT和FLT3的替泊替尼抑制剂，如PLX3397，激酶抑制剂，如樊得他尼；E选择素拮抗剂如GMI-1271，分化诱导剂如维甲酸；表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂，如奥西米替尼(AZD-9291)拓扑异构酶抑制剂(阿霉素、柔红霉素、达卡霉素、伊尼泊苷、表阿霉素、依托泊苷、伊达柔比星、伊立替康、米托蒽醌、哌蒽醌、索布唑嗪、拓扑替康和伊立替康，MM-398(伊立替康脂质体)，沃沙罗辛和皮质类固醇(可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基强的松龙、强的松和强的松龙)；生长因子信号转导激酶抑制剂；功能障碍诱导剂；核苷类似物，如DFP-10917Axl抑制剂，如BGB-324；BET抑制剂，如INCB-054329，PARP抑制剂，如奥拉帕利，鲁卡帕利，维利帕尼(Veliparib)，蛋白酶体抑制剂，如伊沙佐米(Ixazomib)，卡非佐米(carfilzomib)(商品名为凯洛斯(Kyprolis))；谷氨酰胺酶抑制剂，如CB-839；疫苗，如肽疫苗TG-01(RAS)，细菌载体疫苗，如CRS-207/GVAX，自体Gp96疫苗，树突状细胞疫苗，OncQuest-L疫苗，DPX-生存素，ProstAtak，DCVAC，ADXS31-142，登赛珠单抗(抗DLL4，δ样配体4，Notch途径)，纳巴布卡西(BBI-608)平滑(SMO)受体抑制剂，例如Odomzo.RTM。(索尼德吉(Sonidegib(商品名Odomzo))，前身为LDE-225)、LEQ506、维莫德吉(Vismodegib)(GDC-0449)、BMS-833923、格拉吉布(glasdegib)(PF-04449913)、LY2940680和伊曲康唑；干扰素α配体调节剂，如干扰素α-2b、干扰素α-2a生物类似物(生物基因组学)、罗布金特费隆α-2b(AOP-2014、P-1101、聚乙二醇干扰素α-2b)，多重干扰素(阿尔法那特、维拉根)、干扰素α1b、干扰素-A(坎弗隆、Ro-25-3036)、干扰素α-2a后续生物制剂(Biosidus)(Inmutag、INTR 2a)、干扰素α-2b后续生物制剂(BiosidusBiosifon、Citopheron、Ganapar)(北京卡文科技有限公司卡弗隆)(AXXO干扰素α-2b)、干扰素α-2b、聚乙二醇化干扰素α-1b、，聚乙二醇干扰素α-2b后续生物制剂(Amega)、重组人干扰素α-1b、重组人干扰素α-2a、重组人干扰素α-2b、维妥珠单抗(veltuzumab)干扰素α-2b结合物、Dynavax(SD-101)和干扰素α-n1(Humoferon，SM-10500，Sumiferon)；干扰素-γ配体调节剂，如干扰素-γ(OH-6000，Ogamma 100)；IL-6受体调节剂，如托昔单抗、西妥昔单抗、as-101(CB-06-02，IVX-Q-101)；端粒酶调节剂，如特托莫肽(GV-1001，HR-2802，Riavax)和伊美司他(GRN-163，JNJ-63935937)DNA甲基转移酶抑制剂，如替莫唑胺(CCRG-81045)，地西他滨，胍地西他滨(S-110，SGI-110)，KRX-0402和阿扎胞苷；DNA回旋酶抑制剂，如哌蒽醌和索布唑烷；Bcl-2家族蛋白抑制剂ABT-263、维奈托克(venetoclax)(ABT-199)、ABT-737和AT-101；Notch抑制剂，如LY3039478、塔替单抗(抗Notch2/3)、BMS-906024抗肌生长抑制素抑制剂，如兰度戈组单抗、透明质酸酶刺激剂，如PEGFH-20、Wnt途径抑制剂，如SM-04755、PRI-724、伽马分泌酶抑制剂，如PF-03084014、IDO抑制剂，如吲哚昔莫、Grb-2(生长因子受体结合蛋白-2)抑制剂BP1001(脂质体Grb-2)、TRAIL途径诱导化合物(如ONC201)、粘着斑激酶抑制剂(如VS-4718)、德法替尼、刺猬抑制剂(如沙利吉布、索尼地吉布(LDE225)、格拉斯吉布和维斯莫吉布、极光激酶抑制剂(如阿利替布)(MLN-8237)、HSPB1活性调节剂(热休克蛋白27、HSP27)，如溴夫定、阿托森、ATR抑制剂如AZD6738和VX-970、mTOR抑制剂如Sapaniertib、Hsp90抑制剂如AUY922。小鼠双分钟(mdm2)癌基因抑制剂，例如DS-3032b CD137激动剂，比如脲单抗，抗KIR单克隆抗体，例如利利单抗(IPH-2102)。抗原CD19抑制剂，例如MOR208、MEDI-551、AFM-11、CD44结合物，例如A6、CYP17抑制剂，例如VT-464、ASN-001、ODM-204。RXR激动剂，例如IRX4204，TLRs(Toll样受体)激动剂，例如IMO-8400，刺猬/平滑(hh/Smo)拮抗剂，例如taladegib。免疫调节剂，如补体C3调节剂，如Imprime PGG。瘤内免疫肿瘤药物，如G100(TLR4激动剂)、IL-15激动剂，如ALT-803EZH2(zeste同源物2增强子)抑制剂，如他泽米司他。溶瘤病毒，如Pelarorep和talimogene laherparepvec)。DOT1L(组蛋白甲基转移酶)抑制剂，如美托司他(EPZ-5676)，毒素，如霍乱毒素、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素、白喉毒素和半胱天冬酶激活剂；染色质。DNA质粒，如BC-819。PLK 1、2和3的PLK抑制剂，如伏拉色替(PLK1)。凋亡信号调节激酶(ASK)抑制剂：ASK抑制剂包括ASK1抑制剂。ASK1抑制剂的示例包括但不限于WO 2011/008709(吉利德科学)和WO 2013/112741(吉利德科学)中所述的抑制剂。布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂：BTK抑制剂的示例包括但不限于，(s)-6-氨基-9-(1-(但-2-炔酰基)吡咯烷基-3-基)-7-(4-苯氧基苯基)-7H-pur-in-8(9H)-酮、阿卡鲁替尼(ACP-196)、BGB-3111、HM71224、伊布替尼、M-2951、ONO-4059、PRN-1008、司布替尼(CC-292)、TAK-020。细胞周期素依赖性激酶(CDK)抑制剂：CDK抑制剂包括CDK 1、2、3、4、6和9的抑制剂，如阿贝马西林、阿维西肽(HMR-1275，黄吡利多)、AT-7519、FLX-925、LEE001、帕博西林、核糖环利布、里戈西替布、塞林索、UCN-01和TG-02。盘状结构域受体(DDR)抑制剂：DDR抑制剂包括DDR1和/或DDR2抑制剂。DDR抑制剂的实施例包括但不限于WO 2014/047624(Gilead Sciences公司)、US2009-0142345(武田制药)、US 2011-0287011(肿瘤学制药)、WO 2013/027802(Chugai制药)和WO 2013/034933(帝国创新)中披露的抑制剂。组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂：HDAC抑制剂的实施例包括，但不限于，阿贝西诺司他、ACY-241、AR-42、BEBT-908、贝尼司他、CKD-581、CS-055(HBI-8000)、CUDC-907、恩替诺特、吉维司他、莫西汀、帕诺比诺司他、普拉西诺司他、奎西诺司他(JNJ-26481585)、雷斯米诺司他、利可林司他、SHP-141、丙戊酸(VAL-001)，伏立诺斯塔。詹讷斯激酶(JAK)抑制剂：JAK抑制剂抑制JAK1、JAK2和/或JAK3。JAK抑制剂的实施例包括但不限于AT9283、AZD1480、巴利西替尼、BMS-911543、非拉替尼、非戈替尼(GLPG0634)、甘多替尼(LY2784544)、INCB039110、莱索替尼、莫莫莫洛替尼(CYT0387)、NS-018、帕西替尼(SB1518)、培非替尼(ASP015K)、鲁索利替尼、托法替尼(以前的塔西替尼)和XL019。赖氨酰氧化酶样蛋白(LOXL)抑制剂：LOXL抑制剂包括LOXL1、LOXL2、LOXL3、LOXL4和/或LOXL5的抑制剂。LOXL抑制剂的实施例包括但不限于WO 2009/017833(Arresto Biosciences公司)中描述的抗体。LOXL2抑制剂的实施例包括但不限于WO 2009/017833(Arresto Biosciences公司)、WO 2009/035791(Arresto Biosciences公司)和WO 2011/097513(Gilead Biosics公司)中所述的抗体。基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂：MMP抑制剂包括MMP1至10的抑制剂。MMP9抑制剂的示例包括但不限于马马司他(BB-2516)、西马司他(Ro32-3555)和WO 2012/027721(Gilead Biologics)中所述的抑制剂。丝裂原活化蛋白激酶(MEK)抑制剂：MEK抑制剂包括安托喹诺尔、比尼替尼、科比替尼(GDC-0973、XL-518)、MT-144、塞洛替尼(AZD6244)、索拉非尼、曲美替尼(GSK1120212)、乌罗西替尼+曲美替尼。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂：PI3K抑制剂包括PI3Kγ、PI3Kδ、PI3β、PI3Kα和/或pan-PI3K的抑制剂。PI3K抑制剂的示例包括但不限于ACP-319、AEZA-129、AMG-319、AS252424、BAY 10824391、BEZ235、布帕尼盘(BKM120)、BYL719(alpelisib)、CH5132799、科潘利西(BAY80-6946)、杜维利西、GDC-0941、GDC-0980、GSK2636771、GSK2269557、Idelisib(Zydelig.RTM.)、IPI-145、IPI-443、KAR4141、LY294002、Ly-3023414、MLN111A、，PA799、PX-866、RG7604、rigosertib、RP5090、taselisib、TG100115、TGR-1202、TGX221、WX-037、X-339、X-414、XL147(SAR245408)、XL499、XL756、wortmannin、ZSTK474以及WO 2005/113556(ICOS)、WO 2013/052699(GileadCalistoga)、WO 2013/116562(Gilead Calistoga)、WO 2014/100765(Gilead Calistoga)、WO 2014/100767中描述的化合物(基列卡利斯托加)和WO 2014/201409(基列科学)。脾脏酪氨酸激酶(SYK)抑制剂：SYK抑制剂的实施例包括但不限于6-(1H-吲唑-6-基)-N-(4-吗啉苯基)咪唑[1,2-吡嗪-8-胺，BAY-61-3606，赛度替尼(Cerdulatinib)(PRT-062607)，内抑素，福他替尼(R788)，HMPL-523，NVP-QAB 205AA，R112，R343，他马替尼(R406)酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)：TKIs可靶向表皮生长因子受体(EGFR)和成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)和血管内皮生长因子(VEGF)受体。TKIs的示例包括但不限于：阿法替尼、博司替尼、百加替尼、卡波坦替尼、克洛替尼、达考替尼、达沙替尼、多维替尼、E-6201、厄洛替尼、吉非替尼、吉替替尼(ASP-2215)、HM61713、伊科替尼、伊马替尼、KX2-391(Src)、拉帕替尼、列斯托替尼、米多司他林、尼答尼布、奥西替尼、奥西替尼(AZD-9291)波那替尼、波齐奥替尼、奎扎替尼、拉多替尼、罗西替尼、舒尼替尼和TH-4000。其他抗癌试剂包括：烷基化剂，如硫替帕和环磷酰胺(环磷酰胺)；烷基磺酸盐，如白消安、英普苏凡和皮普苏凡；氮丙啶类化合物，如苯并噻吩、碳醌、二甲双胍和脲；亚乙基胺和甲胺，包括奥替瑞胺、三乙烯基三聚氰胺、三乙烯基磷酰胺、三乙烯基硫代磷酰胺和三甲基甲酰胺；丙酮类，尤其是牛拉他星和牛拉他星酮；一种喜树碱，包括合成模拟物拓扑替康；苔藓虫素、胼胝抑素；CC-1065，包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物；隐藻毒素，尤其是隐藻毒素1和隐藻毒素8；多拉他汀；杜卡霉素，包括合成类似物KW-2189和CBI-TMI；埃列瑟罗宾；5-氮胞苷；胰抑素；肉蜥蜴；海绵素；氮芥，如氯苯脲、氯丙嗪、环磷酰胺、葡糖酰胺、吴茱萸酰胺、苯达莫司汀、雌霉素、异环磷酰胺、甲氯乙胺、甲氯乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新比钦、苯酯酶、泼尼莫司汀、特罗福胺和尿嘧啶芥末；亚硝基脲，如卡莫司汀、氯唑霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷尼霉素；抗生素，如烯二炔类抗生素(例如，卡利霉素，尤其是卡利霉素gammaII和卡利霉素phiI1)，强尼霉素，包括强尼霉素A，双磷酸盐，如氯膦酸盐，一种埃斯帕米星，新卡那他丁生色团和相关生色蛋白烯二炔类抗生素生色团，阿克拉霉素，放线菌素，阿曲霉素，阿扎丝氨酸、博莱霉素、仙人掌毒素、carabicin、洋红霉素、嗜癌素、色霉素、放线菌素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-去甲亮氨酸、多柔比星(包括吗啉-多柔比星、氰基吗啉-多柔比星、2-吡咯-多柔比星和脱氧多柔比星)、表阿霉素、埃索比星、伊达柔比星、马塞霉素；丝裂霉素，如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、波罗霉素、嘌呤霉素、奎拉霉素、罗托霉素、链霉素、链脲佐菌素、结核菌素、乌本美司、吉诺他丁和唑柔比星；抗代谢产物如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如去甲蝶呤、甲氨蝶呤、蝶呤和三甲氧基苯甲酸；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、噻咪嗪和硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、多西氟啶、依诺西他滨和氟尿苷；雄激素，如卡卢斯酮、丙酸屈莫司他龙、表雄醇、甲匹噻烷和睾丸内酯；抗肾上腺药物，如氨基谷氨酰胺、米托坦和曲洛坦；叶酸补充剂，如弗罗林酸；放射治疗剂，如镭-223；毛霉素，尤其是T-2毒素、维拉库林A、罗立定A和胍；紫杉醇(紫杉醇)、艾布拉烷、多西紫杉醇(泰索帝)、卡巴齐他塞尔、BIND-014等紫杉类；铂类似物，如顺铂和卡铂，NC-6004纳米铂；乙酰甲胺酮；醛缩磷苷；氨基乙酰丙酸；依那普利；氨吖啶；海斯特拉布西；双芳烯；依达拉奉；毁林饥荒；德梅科辛；二嗪醌；艾尔福霉素；乙酸椭圆铵；埃博噻隆；依托胶酸；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；亚叶酸；洛尼达明；美丹素类化合物，如美丹素和安萨米托素；米托瓜宗；米托蒽醌；莫匹达莫；硝胺；抑制素；非那米特；吡柔比星；洛沙坦酮；氟嘧啶；叶酸；鬼臼酸；2-乙基肼；丙卡巴嗪；多糖-K(PSK)；唑烷；根霉素；西索菲兰；螺旋锗；噻诺酮酸；曲白细胞素，三嗪醌；2,2',2”-三氟三胺；聚氨酯；长春地辛；达卡巴嗪；甘露霉素；米托溴醇；米托内酯；哌泊溴烷；胞嘧啶；阿糖胞苷(“Ara-C”)；环磷酰胺；硫花瓣；苯丙胺；吉西他滨(GEMZARTM)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；二尖瓣环酮；香草碱；长春瑞滨(NAVELBINETM)；诺凡特罗；替尼泊甙；乙氨蝶呤；柔红霉素；氨基蝶呤；塞奥洛达；伊班膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DFMO)；维甲酸等维甲酸；卡培他滨；FOLFIRI(氟尿嘧啶、亚叶酸和伊立替康)；以及上述任何一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
抗癌试剂的定义中还包括抗激素剂，如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERM)、芳香化酶抑制剂、抗雄激素以及上述任何一种药物上可接受的盐、酸或衍生物，其作用是调节或抑制激素对肿瘤的作用。抗雌激素和血清的实施例包括，例如，三苯氧胺(包括诺瓦德)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基三苯氧胺、三羟昔芬、凯奥昔芬、LY117018、奥那普利斯通和托瑞米芬(法雷斯顿)。芳香化酶抑制剂调节肾上腺中雌激素的产生。实施例包括4(5)-咪唑类、氨基谷丙酰胺类、醋酸甲地孕酮类(MEGACE)、依西美坦类、福美坦(formestan)类、法曲唑类、伏罗唑类(RIVISOR)、来曲唑类(FEMARA)和阿那曲唑类(ARIMIDEX)。抗雄激素的实施例包括阿扑鲁胺、阿比特龙、恩扎鲁胺、氟他胺、加列特酮、尼鲁他胺、比卡鲁胺、亮丙瑞林、戈舍瑞林、ODM-201、APC-100、ODM-204。孕酮受体拮抗剂的实施例包括奥那普利斯通。
抗血管生成药物包括但不限于维甲酸及其衍生物、2-甲氧基雌二醇、血管抑制素、内皮抑制素、雷戈拉非尼、奈库帕拉尼、苏拉明、角鲨胺、金属蛋白酶组织抑制剂-1、金属蛋白酶组织抑制剂-2、纤溶酶原激活物抑制剂-1、纤溶酶原激活物抑制剂-2、，软骨衍生抑制剂、紫杉醇(nab紫杉醇)、血小板因子4、硫酸鱼精蛋白(clupeine)、硫酸化几丁质衍生物(从皇后蟹壳制备)、硫酸化多糖肽聚糖复合物(sp-pg)、星形孢菌素、基质代谢调节剂，包括脯氨酸类似物，如1-氮胞苷-2-羧酸(LACA)，顺羟脯氨酸，d,I-3,4-脱氢丙氨酸，硫脯氨酸，α,α'-联吡啶，β-氨基丙腈富马酸，4-丙基-5-(4-吡啶基)-2(3h)-恶唑酮，甲氨蝶呤，米托蒽醌，肝素，干扰素，2-巨球蛋白血清，鸡金属蛋白酶抑制剂-3(ChIMP-3)，凝乳抑素，β-环糊精-十四硫酸酯，依泊霉素，富马西林、硫代苹果酸金钠、d-青霉胺、β-1-抗胶原酶-血清、α-2-抗血浆蛋白、双香菇烯、洛贝扎利二钠、n-2-羧基苯基-4-氯代蒽酸二钠或“CCA”、沙利度胺、血管抑制剂类固醇、羧基氨基咪唑、金属蛋白酶抑制剂(如BB-94)、S100A9抑制剂(如塔奎尼莫)。其他抗血管生成剂包括抗体，优选针对这些血管生成生长因子的单克隆抗体：β-FGF、α-FGF、FGF-5、VEGF亚型、VEGF-C、HGF/SF和Ang-1/Ang-2。
抗纤维化试剂包括但不限于一些化合物，例如β-氨基丙腈(BAPN)，以及美国专利申请第4965288号中公开的关于赖氨酰氧化酶抑制剂及其在治疗与胶原异常沉积相关的疾病和条件中的应用，以及美国专利第4997854号中公开的涉及抑制LOX用于治疗各种病理性纤维化状态的化合物，其通过引用并入本文。进一步的示例性抑制剂描述在美国专利第4,943,593号中，其中涉及化合物，例如2-异丁基-3-氟、氯或溴代烯丙胺；美国专利第5,021,456号；美国专利第5,059,714号；美国专利第5,120,764号；美国专利第5,182297号；美国专利第5,252,608号，涉及2-(1-萘氧基甲酰基)-3-氟烯丙胺和美国专利号2004-0248871，通过引用并入本文。
示例性抗纤维化剂还包括伯胺，所述伯胺与赖氨酰氧化酶活性部位的羰基发生反应，更具体地说，包括那些在与羰基结合后产生产物的伯胺，所述产物可以通过共振稳定，例如以下伯胺：烯丙基胺、肼、苯肼，及其衍生物；氨基脲和尿素衍生物；氨基腈，如BAPN或2-硝基乙胺；不饱和或饱和卤胺，例如2-溴乙胺、2-氯乙胺、2-三氟乙胺、3-溴丙胺和对卤苄胺；硒单半胱氨酸内酯。
其他抗纤维化剂是渗透或不渗透细胞的铜螯合剂。示例性化合物包括间接抑制剂，所述间接抑制剂阻断醛衍生物，所述醛衍生物是通过赖氨酰和羟基赖氨酰残基被赖氨酰氧化酶氧化脱氨基而产生的。实施例包括硫胺，尤其是D-青霉胺，及其类似物，例如2-氨基-5-巯基-5-甲基己酸、D-2-氨基-3-甲基-3-((2-乙酰胺基)二硫代)丁酸、p-2-氨基-3-甲基-3-((2-氨基乙基)二硫代)丁酸、钠-4-((p-1-二甲基-2-氨基-2-羧乙基)二硫代)丁烷磺酸，2-乙酰胺乙基-2-乙酰胺乙硫醇硫酸盐和4-巯基丁烷磺酸钠三水合物。
免疫治疗剂包括但不限于适合治疗患者的治疗性抗体。治疗性抗体的一些实施例包括辛妥单抗、阿巴戈单抗、阿德卡妥单抗、阿富图单抗、阿来单抗、阿他单抗、阿那图单抗、阿西图单抗、巴维妥昔单抗、贝伐单抗、比伐单抗、布利那单抗、布伦图单抗、坎图单抗、卡妥单抗、西妥昔单抗、西他单抗、西妥单抗、西妥单抗、西妥单抗、西妥单抗、西妥单抗、克伐珠单抗、康那单抗、达鲁珠单抗、，多利戈图单抗、杜西吉单抗、德妥单抗、达曲单抗、达洛妥单抗、迪诺妥昔单抗、埃洛妥单抗、埃米贝图单抗、增敏妥昔单抗、厄尔妥单抗、埃塔曲单抗、法利妥单抗、菲卡曲珠单抗、菲格妥单抗、法洛妥单抗、富妥昔单抗、甘尼妥单抗、吉伦妥昔单抗、格列巴妥单抗、伊布妥单抗、伊格妥单抗、伊格妥单抗、伊诺妥单抗、伊妥单抗、伊诺妥单抗、，伊普利单抗(YERVOY、MDX-010、BMS-734016和MDX-101)，伊拉图单抗、拉贝珠单抗、来沙木单抗、林妥珠单抗、洛沃妥珠单抗、卢卡木单抗、马帕木单抗、马妥珠单抗、米拉组单抗、明瑞莫单抗、米妥莫单抗、莫格利组单抗、Moxetumab、pasudotox、那呐妥单抗、卡伦达珠单抗、耐昔妥珠单抗、尼妥珠单抗、若莫单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥比图单抗、奥卡妥珠单抗、奥法图单抗、奥法木单抗、奥法木单抗、欧伐托单抗(Ofatumab)、奥兰替珠单抗(Oratuzumab)、Olaraturatumab、Oratumab，帕萨图单抗、帕特里图单抗、培瘤单抗、培瘤单抗、平瘤单抗、普瑞图单抗、瑞曲单抗、瑞曲单抗、瑞曲单抗(Cyramza.RTM.)、利曲单抗、利妥昔单抗、瑞曲单抗、利妥昔单抗、沙曲单抗、西布罗单抗、沙曲单抗、索洛单抗、他卡图单抗、塔普利单抗、替那图单抗、替罗单抗、替加单抗、妥昔单抗、曲单抗、曲珠单抗、ABP-980、图可单抗、ubilituximab、维妥珠单抗、沃斯妥珠单抗、伏妥莫单抗、扎鲁木单抗、CC49、OBI-833和3F8。利妥昔单抗可用于治疗惰性B细胞癌，包括边缘区淋巴瘤、WM、CLL和小淋巴细胞淋巴瘤。利妥昔单抗和化疗药物的联合使用尤其有效。
示例性的治疗性抗体可进一步标记或与诸如铟-111、钇-90(90Y-克利妥珠单抗)或碘-131的放射性同位素粒子组合。
10.示例性用途
本发明的方法可用于制备具有多种应用的纳米颗粒和微粒。
优选地，纳米颗粒和微粒可用于治疗有需要的个体的疾病或病症的方法，或者减少有需要的个体的疾病或病症的持续时间或严重程度的方法，其中所述疾病或病症可用具有负的表面电荷的微粒或纳米颗粒(任选地具有特定API)治疗，所述治疗方法包括向个体施用包含微粒或纳米颗粒的组合物或药物组合物，从而治疗疾病或病症。
在相关方面，本发明提供一种调节有需要的个体(优选哺乳动物，更优选人)的免疫应答的方法，该方法包括向个体施用包含微粒或纳米颗粒的组合物或药物组合物，从而调节免疫应答。本发明提供的免疫调节方法包括压抑和/或抑制先天免疫应答或适应性免疫应答(包括但不限于免疫刺激多肽或病毒或细菌成分刺激的免疫应答)的方法。以足以调节免疫应答的量施用所述颗粒。如本文所述，免疫应答的调节可以是体液的和/或细胞的，并且使用本领域的标准技术并如本文所述进行测量。
优选地，疾病或病症的特征在于炎性免疫应答。
可治疗的疾病或病症包括但不限于：自身免疫疾病，例如多发性硬化症、硬皮病、I型糖尿病、类风湿性关节炎、甲状腺炎、系统性红斑狼疮、Reynauud综合征、斯耶格伦综合征、自身免疫性葡萄膜炎、自身免疫性心肌炎、或克罗恩病。优选地，自身免疫疾病是多发性硬化。患有自身免疫疾病或炎性疾病的个体是具有现有自身免疫疾病或炎性疾病的可识别症状的个体。
自身免疫疾病可分为两大类：器官特异性的和全身性的自身免疫疾病。自身免疫疾病包括但不限于类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)、I型糖尿病、II型糖尿病、多发性硬化症(MS)、免疫介导的不育症(例如卵巢早衰)、硬皮病、干燥综合征(Sjogren’sdisease)、白癜风、脱发(秃)、多发性衰竭、格雷夫斯病、甲状腺功能减退症、多发性肌炎、寻常性天疱疮、落叶型天疱疮、炎症性肠病(包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、自身免疫性肝炎(包括与乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)相关的肝炎)、垂体功能低下、移植物抗宿主病(GvHD)、心肌炎、艾迪生病、自身免疫性皮肤病、葡萄膜炎、恶性贫血和甲状旁腺功能减退症。
自身免疫疾病还可包括但不限于桥本氏甲状腺炎、I型和II型自身免疫性多腺体综合征、副肿瘤性天疱疮、牛瘟类天疱疮、疱疹样皮炎、线性IgA病、大疱性表皮松解症、结节性红斑、妊娠性类天疱疮、瘢痕性类天疱疮、原发性混合型冷球蛋白血症、儿童慢性大疱性疾病、溶血性贫血、血小板减少性紫癜、Goodpasture综合征、自身免疫性中性粒细胞减少症、重症肌无力、Eaton-Lambert肌无力综合征、僵硬综合征、急性播散性脑脊髓炎、格林-巴利综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、多灶性运动神经病变伴传导阻滞、慢性神经病变伴单克隆丙种球蛋白病、眼阵挛-肌阵挛综合征、小脑退化症、脑脊髓炎、视网膜病变、原发性胆汁硬化、硬化性胆管炎、麸质敏感性肠病、强直性脊柱炎、反应性关节炎、多发性肌炎/皮肌炎、混合性结缔组织病、Behcet综合征、牛皮癣、结节性多动脉炎、过敏性血管炎和肉芽肿病(Churg-Strauss病)、多血管炎重叠综合征、过敏性血管炎、Wegener肉芽肿病、颞动脉炎、Takayasu动脉炎、川崎病、孤立中枢神经系统血管炎、血栓闭塞性脉管炎、结节病、肾小球肾炎和冷冻病。这些病症在医学领域中是众所周知的，并且描述于，例如，以下文献中：Harrison’s Principles of Internal Medicine,14th edition,Fauci,A.S.et al.,Eds.,New York:McGraw-Hill,1998.
优选地，所述疾病或病症包括过敏性病症或病症，例如过敏性疾病、变态反应、湿疹、哮喘、过敏性鼻炎或皮肤过敏症。患有过敏性疾病或哮喘的个体是具有现有过敏性疾病或哮喘的可识别症状的个体。
优选地，所述疾病或病症包括细菌感染或病毒感染。患有细菌感染或病毒感染的个体是具有现有细菌感染或病毒感染的可识别症状的个体。
优选地，个体患有病毒感染。优选地，病毒感染是疱疹病毒感染、肝炎病毒感染、西尼罗河病毒感染、黄病毒感染、流感感染、鼻病毒感染、乳头瘤病毒感染、副粘病毒感染或副流感病毒感染。优选地，病毒感染所述个体的中枢神经系统。优选地，病毒感染引起病毒性脑炎或病毒性脑膜炎。
优选地，个体患有细菌感染。可用本发明的所述颗粒治疗的细菌感染的非限制性例子包括葡萄球菌感染、链球菌感染、分枝杆菌感染、杆菌感染、沙门氏菌感染、弧菌感染、螺旋体感染和奈瑟菌感染。优选的是感染个体的中枢神经系统的细菌。最优选的是引起脑炎或脑膜炎的细菌。
优选地，当向患有细菌感染或病毒感染的个体施用时，本发明的方法诱导免疫耐受。优选地，当向患有细菌感染或病毒感染的个体施用时，该方法改善或抑制炎性免疫应答。
优选地，个体是移植受体。移植是指将组织样本或移植物从供体个体转移到受体个体，并且经常在需要组织的人类接受者上进行以恢复由组织提供的生理功能。移植的组织包括(但不限于)整个器官，例如肾、肝、心脏、肺；器官成分，例如皮肤移植物和眼角膜；细胞悬浮液，例如骨髓细胞和从骨髓或循环血液中选择和扩增的细胞培养物，以及全血输注。
任何移植的严重潜在并发症都源于宿主受体和移植组织之间的抗原差异。取决于差异的性质和程度，可能存在由宿主对移植物或者由移植物对宿主进行的免疫攻击或者两者都可能发生的风险。通过跟踪具有相似表型的类似治疗的个体群体中的反应模式，并根据普遍接受的临床程序将各种可能的促成因素相关联来确定风险的程度。免疫攻击可以是预先存在的免疫应答(例如预先形成的抗体)的结果，或者是在移植时刻(例如TH细胞产生时)开始的免疫攻击的结果。抗体、辅助T细胞(TH细胞)或细胞毒性T细胞(Tc)可以彼此任意组合并与各种效应分子和细胞组合。然而，参与免疫应答的抗原通常是未知的，因此在设计抗原特异性疗法或诱导抗原特异性耐受方面造成困难。本发明的改性的颗粒在防止器官排斥方面特别有用，因为为了使所述颗粒能够有效地诱导耐受或改善炎性免疫应答，不需要将连接的肽或抗原与所述改性的颗粒共轭结合
优选地，本发明涉及降低导致受体排斥组织移植物的宿主抗移植物疾病的风险。可以进行治疗以预防或减少超急性、急性或慢性排斥反应的影响。优选在移植前足够长的时间开始治疗，以便在安装移植物时能够耐受；但是如果不可能，可以在移植的同时或之后开始治疗。无论开始时间如何，治疗通常至少在移植后的第一个月定期进行。如果移植物充分适应，则可能不需要后续给药(follow-up dose)，但是如果有任何移植物排斥或炎症的迹象，则可以恢复后续给药。当然，本发明的耐受建立方法(tolerization procedure)可以与其他形式的免疫抑制组合以达到更低的风险水平。
优选地，所述疾病或病症包括不需要的免疫激活，例如动脉粥样硬化、缺血性再灌注损伤和心肌梗塞。
优选地，本发明涉及与不需要的超敏反应有关的病理状况的治疗。超敏反应可以是I、II、III和IV型中的任何一种，可以是速发型(I型)超敏反应。施用频率通常与过敏原暴露的时间相对应。合适的动物模型是本领域已知的(例如，Gundel et al.,Am.Rev.Respir.Dis.,146:369,1992,Wada et al,J.Med.Chem.,39:2055,1996；和WO 96/35418).
优选地，可治疗的疾病或病况包括由炎性单核细胞引发的疾病、自身免疫作用、心血管疾病(例如心脏缺血或心脏梗死和移植后的缺血再灌注损伤)、病毒性脑炎、多发性硬化(MS)、炎症性肠病(IBD)、腹膜炎、致死性黄病毒性脑炎、免疫病理性病毒感染(包括流感和西尼罗河病毒(WNV))、类风湿性关节炎、HIV脑炎、慢性肝病、动脉粥样硬化、心肌梗死、实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)及其相应疾病、结肠炎、溃疡性结肠炎等。
在要求保护的发明中使用的优选条件是治疗癌症。本文治疗的患者和癌症包括伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)、难治性iNHL、多发性骨髓瘤(MM)、慢性髓系白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞ALL、急性髓系白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)，小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增生性疾病(MPD)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、瓦尔德斯特罗姆巨球蛋白血症(WM)、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或边缘区淋巴瘤(MZL)。在一个实施方案中，癌症是最小残留疾病(MRD)。在其他实施方案中，所述癌症选自霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)和难治性iNHL。在某些实施方案中，所述癌症为惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)。在一些实施方案中，所述癌症是难治性iNHL。在一个实施方案中，所述癌症为慢性淋巴细胞白血病(CLL)。在另一实施方案中，癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在某些实施方案中，所述癌症为实体肿瘤且选自由以下所组成的组中：胰腺癌；膀胱癌；结直肠癌；乳腺癌，包括转移性乳腺癌；前列腺癌，包括雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌；肾癌或肾癌，包括转移性肾细胞癌等；肝细胞癌；肺癌，包括非小细胞肺癌(NSCLC)、细支气管肺泡癌(BAC)和肺腺癌；卵巢癌，包括进行性上皮癌或原发性腹膜癌；宫颈癌；胃癌；食管癌；头颈癌，包括，例如，头颈部鳞状细胞癌等；黑色素瘤；神经内分泌癌，包括转移性神经内分泌肿瘤；脑肿瘤，包括胶质瘤、间变性少突胶质细胞瘤、成人多形性胶质母细胞瘤和成人间变性星形细胞瘤；骨癌；软组织肉瘤、肝癌、直肠癌、阴茎癌、外阴癌、甲状腺癌、涎腺癌、子宫内膜癌或子宫癌、肝癌、肝细胞癌、肝癌、胃癌或胃癌，包括胃肠道癌、腹膜癌、肺鳞癌、胃食管癌、胆道癌、胆囊癌、结直肠癌/阑尾癌、鳞状细胞癌(如上皮鳞状细胞癌)。
所提供的任何治疗方法都可用于治疗不同阶段的癌症。举例来说，癌症阶段包括但不限于早期、晚期、局部晚期、缓解、难治性、缓解后复发期和进行期。
优选地，本发明的微粒或纳米微粒(例如，用本发明的方法生产的微粒或纳米微粒)可与第二治疗剂结合使用，该第二治疗剂可有效治疗任何一种可治疗病症。
优选地，所述主体是人类患者。优选地，所述主体是非人哺乳动物，例如非人灵长类动物、家畜动物(马、骡、牛、牛、羊、山羊、猪、骆驼等)、啮齿动物(兔子、仓鼠、老鼠、老鼠等)或宠物(猫、狗)。
优选地，该方法包括通过任何合适的手段或途径，例如通过口服给药、鼻内给药、静脉内给药、肌肉内给药、眼内给药、经皮给药、皮下给药、肿瘤内给药、膀胱内给药，关节内给药、颅内给药和腹腔内给药包含所述微粒或纳米颗粒(例如，硫酸化颗粒)的主体组合物或药物组合物。
优选的，对个体给药大约102到大约1020的颗粒。优选的，提供了大约103到大约1015个颗粒。优选的，提供了大约106到大约1012个颗粒。优选的，提供了大约108到大约1010个颗粒。优选的，优选剂量是0.1％固体/ml。因此，对于0.5μm的小珠，优选的剂量是大约4x109个小珠，对于直径为0.05μm的小珠，优选的剂量是大约4x1012个小珠，对于直径为3μm的小珠，优选的剂量是2x107的小珠。但是，本发明还包括能够有效治疗待治疗的特定病况的有效剂量。
优选地，当向需要的主体施用时，含有本发明微粒或纳米颗粒(例如，硫酸化微粒)的本发明组合物或药物组合物能够诱导免疫耐受作用。
优选地，含有本发明微粒或纳米颗粒(例如，硫酸化微粒)的本发明组合物或药物组合物在向需要它们的主体施用时可改善炎症免疫应答。
11.功效实验
可以使用多个功效试验(包括合适的动物模型)测试本发明的微粒和纳米颗粒对可治疗的疾病和病症的有效性。
致耐受性活性的一个表征(proxy)是颗粒刺激在靶位点处产生合适细胞因子的能力。由靶位点处的抑制性T细胞释放的免疫调节细胞因子被认为是TGF-β(Miller et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:421,1992)。在耐受期间可能产生的其他因子是细胞因子IL-4和细胞因子IL-10，以及介体PGE。相反，经历主动免疫破坏的组织中的淋巴细胞分泌细胞因子，例如IL-1、IL-2、IL-6和IFNγ。因此，可以通过测量颗粒刺激适当类型的细胞因子的能力来评估所述颗粒的功效。
例如，可使用动物模型系统对所述颗粒、有效粘膜结合成分、有效组合或粘膜施用的有效模式和时间表进行快速筛选试验。在粘膜表面使用测试颗粒组合物对动物进行治疗，并在一段时间内施用引起疾病的抗原或感染因子。分离脾细胞，并在引起疾病的抗原或来自感染因子的抗原存在下以约50μg/mL的浓度进行体外培养。细胞因子分泌到培养基中可以通过标准免疫测定来量化。
可以使用从用改性的颗粒免疫的动物中分离的细胞，或通过产生对引起疾病的抗原或病毒抗原靶抗原有响应的细胞系来确定所述颗粒抑制细胞活性的能力(Ben-Nun etal.,Eur.J.Immunol.,11195,1981)。在该实验的一个变体中，抑制细胞群被轻度照射(约1000至1250拉德)以防止增殖，抑制因子与应答细胞共培养，然后使用氚化胸苷掺入(或MTT)来量化应答细胞的增殖活性。在另一个变体中，在双室跨孔培养系统(克斯塔公司，剑桥，马萨诸塞州)的上层和下层中培养抑制细胞群和应答细胞群，该系统允许在彼此相距1mm的范围内共培养所述细胞群，由聚碳酸酯膜隔开(WO 93/16724)。在该方法中，不需要照射抑制细胞群，因为可以单独测量应答细胞的增殖活性。
也可以在相应的动物疾病模型中详述用于治疗特定疾病的组合物和施用方式的有效性。在疾病的循环生化和免疫标志、受影响组织的免疫组织学以及适用于所用模型的总体临床特征的水平上监测治疗减少或延迟疾病症状的能力。可用于试验的动物模型的非限制性实施例如下面所述。
例如，用于研究自身免疫疾病的动物模型是本领域已知的。与人类自身免疫疾病最相似的动物模型包括自发产生特定疾病的高发病率的动物品种。此类模型的实施例包括但不限于非肥胖糖尿病(NOD)小鼠(其发生类似于1型糖尿病的疾病)、以及狼疮样疾病易感动物，例如新西兰杂交小鼠、MRL-Faslpr小鼠和BXSB小鼠。已经诱导自身免疫疾病的动物模型包括但不限于实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)(其是多发性硬化的模型)、胶原诱导的关节炎(CIA)(其是类风湿性关节炎的模型)和实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)(其是葡萄膜炎的模型)。用于自身免疫疾病的动物模型也已通过遗传操作产生，并且包括例如针对炎性肠病的IL-2/IL-10敲除小鼠，针对SLE的Fas或Fas配体敲除，以及针对类风湿性关节炎的IL-1受体拮抗剂敲除。
本发明考虑通过调节TH1应答、TH2应答、TH17应答或这些应答的组合来调节耐受性。调节TH1应答包括改变例如干扰素-γ的表达。调节TH2应答包括改变例如IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的任何组合的表达。通常，TH2应答的增加(减少)包括IL-4、IL-5、IL-10或IL-13中至少一种的表达的增加(减少)；更典型地，TH2应答的增加(减少)包括IL-4、IL-5、IL-10或IL-13中至少两种的表达的增加，最典型地，TH2应答的增加(减少)包括IL-4、IL-5、IL-10或IL-13中至少三种的表达的增加，而理想情况下，TH2应答的增加(减少)包括所有IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的表达的增加(减少)。调节TH17包括改变例如TGF-β、IL-6、IL-21和IL-23的表达，并影响IL-17、IL-21和IL-22的水平。
通过多种机制实现对自身抗原和自身免疫疾病的耐受，所述机制包括胸腺中自身反应性T细胞的阴性选择，以及那些逃避胸腺缺失并且在外周发现的自身反应性T细胞的外周耐受机制。提供外周T细胞耐受的机制的实施例包括“忽视”自身抗原、对自身抗原的不应答或无反应、细胞因子免疫偏离和自身反应性T细胞的活化诱导的细胞死亡。此外，已证明调节性T细胞参与介导外周耐受。参见，例如，Walker et al.(2002)Nat.Rev.Immunol.,2:11-19；Shevach et al.(2001)Immunol.Rev.,182:58-67。在一些情况下，对自身抗原的外周耐受丧失(或破坏)并且随后发生自身免疫应答。例如，在EAE的动物模型中，通过TLR先天免疫受体激活抗原提呈细胞(APC)显示出破坏自身耐受性并导致EAE的诱导(Waldner etal.(2004)J.Clin.Invest.,113:990-997).
优选地，本发明提供增加抗原呈递同时抑制或减少TLR7/8、TLR9和/或TLR7/8/9依赖性细胞刺激的方法。如本文所述，特定所述颗粒的施用导致树突状细胞(DC)或抗原呈递细胞(APC)的抗原呈递，同时抑制与免疫刺激性多核苷酸相关的TLR7/8、TLR9和/或TLR7/8/9依赖性细胞应答。这种抑制可包括降低一种或多种TLR相关细胞因子的水平。
本发明还提供了具有可用于治疗Mac-1和LFA-1介导的疾病的生物学特性的新化合物。
12.药物组合物
本发明的一个方面提供药物组合物，该药物组合物包含所述微粒和纳米颗粒，并任选地包含药学上可接受的载体。优选地，这些组合物任选还包含一种或多种其他的治疗剂。或者，本发明的所述颗粒可以与一种或多种其他治疗剂组合施用给有需要的患者。例如，用于联合施用或包含在具有本发明化合物的药物组合物中的其他治疗剂可以是经批准的抗炎剂，或者所述其他治疗剂可以是经美国食品药品监督管理局批准的多种药剂中的任何一种，其最终获得批准治疗任何以不受控制的炎症免疫反应或细菌感染或病毒感染为特征的疾病。还应理解，本发明的某些所述颗粒可以以游离形式存在，或在适当情况下，以其药学上可接受的衍生物的形式存在，以用于治疗。
优选地，本发明的药物组合物另外包含药学上可接受的载体，如本文所用，所述载体包括适合于所需的特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂或其他液体载体、分散助剂或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。用于配制药物组合物及其制备的已知技术的各种载体公开于Remington’s PharmaceuticalSciences,Sixteenth Edition,E.W.Martin(Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,1980)。除非任何常规载体介质与本发明的化合物不相容，例如通过产生任何不希望的生物效应或以有害方式与药物组合物的任何其他组分相互作用，否则其使用被认为是在本发明的范围内。
可用作药学上可接受的载体的物质的一些实施例包括但不限于糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二羟基醇，例如丙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏液；乙醇、磷酸盐缓冲溶液以及其他无毒相容润滑剂(例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁)以及着色剂、释放剂、涂层剂、甜味剂、调味剂和芳香剂，根据配方设计师的判断，防腐剂和抗氧化剂也可以包括在组合物中。
用于口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯及它们的混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂，甜味剂，调味剂和芳香剂。
可以使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂根据已知技术配制可注射制剂，例如无菌可注射水性悬浮液或油性悬浮液。无菌可注射制剂还可以是存在于无毒的非肠道可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液(例如1,3-丁二醇的溶液)。可以使用的可接受的载体和溶剂包括水、林格氏溶液，U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸(例如油酸)用于制备注射剂。
可注射制剂可以通过以下方式被灭菌处理，例如，通过细菌截留过滤器过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，可以在使用前将该灭菌剂溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。
为了延长药物的作用，通常需要减缓经皮下注射或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用液体悬浮液或水溶性差的结晶或无定形物质来实现。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，将改性的颗粒与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体(例如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液缓凝剂，例如石蜡；f)吸收促进剂，例如季铵化合物；g)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸收剂，例如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、以及它们的混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。
类似类型的固体组合物也可用作使用诸如乳糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳(例如药物配制领域熟知的肠溶包衣和其它包衣)来制备。它们可以任选地含有遮光剂，并且还可以是这样的组合物，其中它们仅在肠道的某一部分或优选地在肠道的某一部分任选地以延迟的方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实施例包括聚合物质和蜡。类似类型的固体组合物也可用作使用诸如乳糖或奶制品糖以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软填充明胶胶囊和硬填充明胶胶囊中的填充剂。
微粒和纳米颗粒也可以是具有一种或多种上述赋形剂的微胶囊形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以用包衣和外壳(例如药物配制领域熟知的肠溶包衣、释放控制包衣和其它包衣)来制备。在这种固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂例如(蔗糖、乳糖和淀粉)混合。正常情况下，这些剂型还可包含除惰性稀释剂以外的其它物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。它们可以任选地含有遮光剂，并且还可以是这样的组合物，其中它们仅在肠道的某一部分或优选地在肠道的某一部分任选地以延迟的方式释放改性的颗粒。可以使用的包埋组合物的实施例包括聚合物质和蜡。
本发明包括羧基化微粒和纳米颗粒的药学上可接受的外用制剂。如本文所用，术语“药学上可接受的外用制剂”是指通过将制剂施加于表皮而皮内施用所述微粒/纳米颗粒的任何药学上可接受的制剂。优选地，本发明的外用制剂包含载体系统。药学上有效的载体包括但不限于溶剂(例如，醇、多元醇、水)、乳膏、洗液、软膏、油、膏药、脂质体、散剂、乳液、微乳液和缓冲溶液(例如，低渗盐水或缓冲盐水)或本领域已知的用于外部施用药物的任何其他载体。本领域标准的参考文献提供了更完整的本领域已知的载体的列表，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,16th Edition,1980and 17th Edition,1985,both published by Mack Publishing Company,Easton,Pa.，其公开内容通过引用整体并入本文。优选地，本发明的外用制剂可包含赋形剂。本领域已知的任何药学上可接受的赋形剂可用于制备本发明的药学上可接受的外用制剂。
可包括在本发明的外用制剂中的赋形剂的实施例包括但不限于防腐剂、抗氧化剂、保湿剂、润肤剂、缓冲剂、增溶剂、其他渗透剂、皮肤保护剂、表面活性剂和推进剂、和/或其他的与改性颗粒组合使用的治疗剂。合适的防腐剂包括但不限于醇、季胺、有机酸、对羟基苯甲酸酯和酚。合适的抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸及其酯、亚硫酸氢钠、丁基化羟基甲苯、丁基化羟基苯甲醚、生育酚和螯合剂(例如EDTA和柠檬酸)。合适的保湿剂包括但不限于甘油、山梨糖醇、聚乙二醇、尿素和丙二醇。适用于本发明的缓冲剂包括但不限于柠檬酸、盐酸和乳酸缓冲剂。合适的增溶剂包括但不限于季铵氯化物、环糊精、苯甲酸苄酯、卵磷脂和聚山梨醇酯。可用于本发明外用制剂的合适的皮肤保护剂包括但不限于维生素E油、尿囊素、聚二甲基硅氧烷、甘油、凡士林和氧化锌。
优选地，本发明的药学上可接受的外用制剂至少包含羧基化微粒和纳米颗粒以及渗透增强剂。外用制剂的选择取决于几个因素，包括待治疗的病症、颗粒和其它存在的赋形剂的物理化学特性、它们在制剂中的稳定性、可用的制造设备和成本限制。如本文所用，术语“渗透增强剂”是指能够输送药理活性化合物通过角质层并进入表皮或真皮的并且优选很少或没有全身吸收的试剂。已经评估了多种化合物在提高药物通过皮肤的渗透速率方面的有效性。参见，例如，Percutaneous Penetration Enhancers,Maibach H.I.and SmithH.E.(eds.),CRC Press,Inc.,Boca Raton,Fla.(1995)，该文献考察了各种皮肤渗透促进剂的使用和测试，以及Buyuktimkin et al.,Chemical Means of Transdermal DrugPermeation Enhancement in Transdermal and Topical Drug Delivery Systems,GoshT.K.,Pfister W.R.,Yum S.I.(Eds.),Interpharm Press Inc.,Buffalo Grove,111(1997)。优选地，用于本发明的渗透剂包括但不限于甘油三酯(例如大豆油)、芦荟组合物(例如芦荟凝胶)、乙醇、异丙醇、辛基苯基聚乙二醇、油酸、聚乙二醇400、丙二醇、N-癸基甲基亚砜、脂肪酸酯(例如肉豆蔻酸异丙酯、月桂酸甲酯、单油酸甘油酯和单油酸丙二醇酯)和N-甲基吡咯烷酮。
优选地，组合物可以是软膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂的形式。优选地，根据本发明的组合物的制剂是乳膏，该乳膏可以进一步含有饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸，例如硬脂酸、棕榈酸、油酸、棕榈油酸、鲸蜡醇或油醇，特别优选硬脂酸。本发明的乳膏还可含有非离子表面活性剂，例如聚氧硬脂酸酯。优选地，活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何所需的防腐剂或缓冲剂混合。眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也包括在本发明的范围内。此外，本发明考虑使用透皮贴剂，其具有提供化合物控制递送至身体的附加优点。通过将化合物溶解或分配在适当的介质中来制备这种剂型。如上所述，渗透增强剂也可用于增加化合物通过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。
可以通过气溶胶给药硫酸化的微粒和纳米颗粒。这是通过制备含水气溶胶、脂质体制剂或者包含所述改性颗粒的固体颗粒来实现的。还可以使用不含水的悬浮液(例如，氟碳推进剂)。
通常，通过将药剂的水溶液或悬浮液与常规的药学上可接受的载体和稳定剂一起配制来制备含水气溶胶。载体和稳定剂随特定化合物的要求而变化，但通常包括非离子表面活性剂(吐温、普朗尼克或聚乙二醇)、无害蛋白(例如血清白蛋白)、脱水山梨糖醇酯、油酸、卵磷脂、氨基酸(例如甘氨酸)、缓冲剂、盐、糖或糖醇。气溶胶通常由等渗溶液制备
还应理解，本发明的羧基化纳米颗粒和微粒和药物组合物可以配制并用于联合治疗，即，所述化合物和药物组合物可以与一种或多种其他所需的治疗剂或医疗程序一起配制或同时施用，或在一种或多种其他所需的治疗剂或医疗程序之前或之后施用。在联合治疗方案中使用的特定疗法组合(治疗剂或程序)将考虑所需治疗剂和/或程序的相容性以及要实现的所需治疗效果。还应当理解，所采用的疗法可以对相同的病症实现期望的效果(例如，本发明的化合物可以与另一种抗炎剂同时施用)，或者它们可以实现不同的效果(例如，控制任何不利的效果)。
优选地，含有本发明的羧基化颗粒的药物组合物还包含一种或多种其他的治疗活性成分(例如，抗炎和/或姑息治疗)。出于本发明的目的，术语“姑息治疗”(“Palliative”)是指集中于缓解疾病症状和/或治疗方案的副作用的治疗，但不是治愈性的。例如，姑息治疗包括止痛药、抗恶心药物和抗病药物。
给出以下实施例以说明本发明。然而，应该理解，本发明不限于这些实施例中描述的具体条件或细节。在整个说明书中，对公开可用文献的任何和所有引用，包括任何美国专利或公开的专利申请，都通过引用全部并入本文。
实施例
实施例1.表面具有硫酸乙酰肝素的PLGA纳米颗粒的制备
将200mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6013–2P)溶解在8毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与40毫升含有40毫克硫酸乙酰肝素(1mg/mL)的0.5％聚乙烯醇(89％)溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000761
DIGITAL
Figure BDA0003380750000000762
T25均质器以18000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为550nm，ζ电位为-35mV。
实施例2.表面具有卡拉胶的PLGA纳米颗粒的制备
将200mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6013–2P)溶解在8毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与40毫升含有40毫克卡拉胶(1mg/mL)的0.5％聚乙烯醇(89％)溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000763
DIGITAL
Figure BDA0003380750000000764
T25均质器以18000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为550nm，ζ电位为-36mV。
实施例3.表面具有石莼聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将200mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6013–2P)溶解在8毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与40毫升含有40毫克石莼聚糖(1mg/mL)的0.5％聚乙烯醇(89％)溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000765
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Figure BDA0003380750000000766
T25均质器以18000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为550nm，ζ电位为-35mV。
实施例4.表面具有硫酸乙酰肝素的PLGA纳米颗粒的制备
将50mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6010–2P)溶解在2毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与10毫升含有100毫克硫酸乙酰肝素(10mg/mL)的0.1％布吉(Brij)溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000771
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Figure BDA0003380750000000772
T25均质器以20000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为385.0nm，ζ电位为-40.4mV。
实施例5.通过单一乳化过程制备具有高度负电荷的PLGA纳米颗粒，所述纳米颗粒在表面上具有硫酸乙酰肝素并装载紫杉醇
将0.9g PLGA和18mg紫杉醇溶解于18mL乙酸乙酯中形成PLGA-紫杉醇溶液。将PLGA-紫杉醇溶液与含有180毫克硫酸乙酰肝素的80mL 0.1％Brij溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000773
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Figure BDA0003380750000000774
T25均质器在18000rpm下使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中，并以400rpm的速度磁力搅拌5小时，以允许溶剂蒸发。装载紫杉醇的纳米颗粒在冻干前用蒸馏水洗涤三次。可使用马尔文粒度分析仪(英国伍斯特郡)测定粒度和ζ电位。
实施例6.通过单一乳化过程制备具有高度负电荷的PLGA纳米颗粒，所述纳米颗粒在表面上具有岩藻聚糖并装载紫杉醇
将0.9g PLGA和18mg紫杉醇溶解于18mL乙酸乙酯中形成PLGA-紫杉醇溶液。将PLGA-紫杉醇溶液与含有180毫克岩藻聚糖的80mL 0.1％Brij溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000775
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Figure BDA0003380750000000781
T25均质器在18000rpm下使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中，并以400rpm的速度磁力搅拌5小时，以允许溶剂蒸发。装载紫杉醇的纳米颗粒在冻干前用蒸馏水洗涤三次。可使用马尔文粒度分析仪(英国伍斯特郡)测定粒度和δ电位。
实施例7.通过双乳化过程制备装载BSA的、带高度负电荷的PLGA纳米颗粒，所述纳米颗粒在表面上含有岩藻聚糖
将0.9g PLGA溶解于18mL乙酸乙酯中以形成PLGA溶液。制备由80ml 0.1％Brij溶液(在水中)、6.5ml乙酸乙酯和180mg岩藻聚糖组成的水溶液。将20mg牛血清白蛋白(BSA，一种模型治疗蛋白质)溶解于2.0mL水性缓冲液中以形成蛋白质溶液。将1.8mL BSA溶液与PLGA溶液混合，并使用均质器在24000rpm下使溶液均质化45秒。将所得乳液与Brij溶液混合，并使用另一个均质器在18000rpm下使溶液均质化1分钟。将所得最终乳液倒入1L玻璃烧瓶中，并在50mbar的真空下通过转子蒸发除去溶剂。在冻干之前，用蒸馏水将装载BSA的颗粒洗涤三次。可使用马尔文粒度分析仪(英国伍斯特郡)测定粒度和ζ电位。
实施例8.洗涤实验
将按照实施例7中描述制备的300mg装载有牛血清白蛋白的PLGA纳米颗粒在30mL去离子水中重构。在短暂的超声处理后，颗粒被很好地悬浮。取样用于测定Z电位。测得ζ电位为-42.7mV。
然后向这种纳米颗粒悬浮液中加入300mL去离子水。使用切向流过滤(TFF)装置将所得混合物浓缩至30mL，测得ζ电位为-44.5mV。该洗涤步骤再被重复两次，每次洗涤后得到的ζ电位分别为-43.0mV和-40.1mV。
实施例9.表面上具有岩藻聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将0.2016g PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6013–2P)溶解在8毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与40毫升含有40毫克岩藻聚糖(1mg/mL，来自囊胞岩藻)的0.5％聚乙烯醇(89％)溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000791
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Figure BDA0003380750000000792
T25均质器以18000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，允许蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为546.5nm，ζ电位为-28.5mV。
实施例10.表面上具有岩藻聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将0.1990g PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6010–2P)溶解在8毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与40毫升0.5％岩藻聚糖(5mg/mL，来自囊胞岩藻)溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000793
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Figure BDA0003380750000000794
T25均质器以24000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为639.6nm，ζ电位为-33.4mV。
实施例11.表面上具有岩藻聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将50mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6010–2P)溶解在2毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与10毫升含有100毫克岩藻聚糖(来自囊胞岩藻)的0.1％Brij溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000795
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Figure BDA0003380750000000801
T25均质器以20000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，允许蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为385.0nm，ζ电位为-40.4mV。
实施例12.表面上具有硫酸葡聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将50mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6010–2P)溶解在2毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与10毫升含有100毫克硫酸葡聚糖(10mg/mL)的0.1％Brij溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000802
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Figure BDA0003380750000000803
T25均质器以17000rpm使所得溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入玻璃容器中并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，允许蒸发溶剂。然后通过离心的方式用蒸馏水洗涤所得纳米颗粒两次。纯化后的颗粒具有的平均颗粒尺寸为523.5nm，ζ电位为-40.3mV。
实施例13.表面上具有岩藻聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将25mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6010–2P)溶解在0.5毫升的乙酸乙酯中。将所得PLGA溶液与2.5毫升含有125毫克岩藻聚糖(50mg/mL，来自囊胞岩藻)的0.1％Brij溶液混合并以50％的浓度使用Fisher Scientific CL-18超声处理45秒，将所得乳化液倒入20毫升0.1％的Brij溶液中使纳米颗粒迅速硬化并以400rpm的速度磁力搅拌3-5小时，允许蒸发溶剂。所得纳米颗粒具有的平均颗粒尺寸为201.3nm，ζ电位为-32.1mV。
实施例14.表面上具有岩藻聚糖的PLGA纳米颗粒的制备
将52.5mg PLGA(LACTEL可吸收聚合物B6010–2P)溶解于2ml乙酸乙酯中。将PLGA溶液与含有100mg(10mg/mL)岩藻多糖(来自囊泡岩藻)溶液的10mL 0.1％Brij溶液混合，并使用
Figure BDA0003380750000000812
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Figure BDA0003380750000000811
T25均质器在14000rpm下使溶液均质化1分钟。将所得乳化液倒入50mL 0.1％Brij溶液中以快速硬化纳米颗粒，并在400rpm下继续磁力搅拌3-5小时，以确保溶剂蒸发。通过切向流过滤(TFF)，用蒸馏水将纳米颗粒纯化三次。经过三次TFF洗涤后，纳米颗粒的平均粒径为638.8nm，ζ电位为-51.8mV。
虽然已经参考优选实施方案具体说明和描述了本发明，但是本领域的技术人员将理解，在不脱离所附权利要求所包含的本发明的范围的情况下，可以在形式上和细节上进行各种改变。

Claims (18)

1.具有负表面电荷的颗粒，其包括聚乳酸-乙醇酸(PLGA)和硫酸化聚合物，例如，硫酸化多糖，例如，硫酸乙酰肝素、卡拉胶、岩藻聚糖和石莼聚糖。
2.根据权利要求1所述的颗粒，其中，所述颗粒是微粒或者纳米颗粒。
3.根据权利要求1所述的颗粒，其中，所述颗粒的ζ电位的绝对值至少为大约25mV，例如至少是大约40mV。
4.根据权利要求1所述的颗粒，其中，所述PLGA和硫酸化聚合物形成互穿网络。
5.根据权利要求1所述的颗粒，其中，所述硫酸化聚合物是硫酸化多糖，其具有的分子量在200Da到15KDa之间。
6.根据权利要求1所述的颗粒，其中，进一步包括活性试剂。
7.一种制备微粒或纳米颗粒的方法，其包括：(1)将PLGA(以及任选的活性试剂，例如药物成分(API)或水溶性差的化合物)溶解在第一溶剂中以形成PLGA溶液；(2)在第二溶剂的溶液中乳化聚合物溶液以形成乳液，其中第一溶剂不可与第二溶剂混溶或部分混溶，并且其中第二溶剂的溶液包含硫酸化聚合物，所述第二溶剂溶液任选地进一步包含可溶于所述第二溶剂的表面活性剂和/或API；以及(3)去除第一溶剂以形成具有负表面电荷的所述微粒或纳米颗粒。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述方法包括：(1)将PLGA(以及任选的活性试剂、API或水溶性差的化合物)溶解在第一溶剂中以形成聚合物溶液；(2)向所述聚合物溶液中添加第二溶剂以形成混合物，其中所述第一溶剂与所述第二溶剂不可混溶或部分混溶，并且其中所述第二溶剂的所述第一溶液任选地包含相同或不同的活性试剂；(3)乳化该混合物以形成第一乳液；(4)在所述第二溶剂的第二溶液中乳化所述第一乳液以形成第二乳液，其中所述第二溶剂的第二溶液包含硫酸化聚合物，并且任选地进一步包含表面活性剂；以及(5)去除第一溶剂以形成具有负表面电荷的微粒或纳米粒子。
9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述方法还包括洗涤所述微粒或纳米颗粒，和/或将所述微粒或纳米颗粒浓缩至所需的体积。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，洗涤之后通过ζ电位测定负表面电荷维持负表面电荷。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，洗涤之后，通过ζ电位测定所述微粒或纳米颗粒保留至少约75％、80％、85％、
90％、95％或99％的负表面电荷。
12.根据权利要求7所述的方法，其中，所述PLGA的平均分子量为约500至约1,000,000Da，优选约1,000至约100,000Da，和/或所述PLGA的乳酸/羟基乙酸比为约100/0至0/100，约95/5至5/95，约85/15至15/85以及约50/50,和/或所述PLGA含有多个带负电荷的末端基团，例如羧基基团。
13.根据权利要求7所述的方法，其中，所述微粒或纳米颗粒具有约-25mV或更低、约-30mV或更低、约-35mV或更低、约-40mV或更低、约-45mV或更低或约-50mV或更低的δ电位，例如-40mV至-65mV的δ电位。
14.根据权利要求7所述的方法，其中，所述第一溶剂是二氯甲烷、乙酸乙酯或氯仿。
15.根据权利要求7所述的方法，其中，所述第二溶剂的溶液是水性溶剂并且优选的包含表面活性剂，该表面活性剂包括有机的或无机的药物赋形剂、各种聚合物、低聚物、天然产物、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂或离子表面活性剂以及它们的混合物，优选的表面活性剂选自聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、吐温系列表面活性剂、布吉(Brij)系列表面活性剂、普朗尼克系列、泊洛沙姆系列或曲拉通X-100或其盐、衍生物、共聚物或混合物。
16.根据权利要求7所述的方法，其中，所述乳化步骤包括均质化、机械搅拌和/或微流化。
17.根据权利要求7所述的方法，其中，通过溶剂交换和/或蒸发除去所述第一溶剂。
18.根据权利要求7所述的方法，其中，所述微粒或者纳米颗粒包括活性试剂，例如API(活性药物成分)，优选的所述API被包封在所述微粒或者纳米颗粒内。
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