CN114062555B - 一种膳食补充剂类产品中nmn含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，它是采用高效液相色谱法进行测定，其中色谱柱为HILIC色谱柱。本发明方法先通过NMN标准曲线的绘制，得到NMN标准曲线线性回归方程；再对待测样品进样检测，测得被检测组分的峰面积，代入NMN标准曲线线性回归方程得出NMN测定浓度值。本发明方法填补了目前NMN膳食补充剂类产品中尚无NMN含量检测方法的漏洞，为制定NMN膳食补充剂类产品中NMN含量的检测方法标准奠定了方法学基础，对于提高NMN相关产品质量、促进相关产业的便捷监管具有深远意义。

Description

一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，属于成分分析技术领域。
背景技术
NMN，即β-烟酰胺单核苷酸，是一种具有生物活性的核苷酸，由磷酸基和含核苷的核糖与烟酰胺反应自然形成。在动物细胞中，NMN是一种细胞能量来源，是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)生物合成的代谢物，在细胞增殖和功能中起着至关重要的作用。人体的衰老过程伴随着体内NAD+含量的减少，研究表明，补充NMN可以提高体内NAD+含量，延缓细胞衰老过程，从而改善、防止衰老诱导的代谢紊乱、老年疾病等问题。临床实验发现，NMN具有治疗帕金森病、阿尔兹海默症、改善听力等方面的功效。NMN的功效引起了广泛关注，目前市场上出现了很多以NMN为主要成分的保健品、药物和化妆品。
人体自身可合成少量NMN，也会通过摄食西兰花、卷心菜等果蔬补充NMN。但由于这些果蔬中NMN含量都较少，如果想通过食物来补充NMN非常困难。所以近年来，以NMN为主要活性物质的膳食补充剂在消费市场上掀起了新热潮。NMN市场火爆的同时，诸多乱象也如影随形，其中最严重的就是部分NMN产品其中根本不含有NMN或者其中NMN含量远少于其标称，达到以次充好的目的，成为虚假宣传“重灾区”。而且这类产品售价普遍十分高昂，最便宜的也要1500元/瓶，贵的甚至有20000元/瓶，如果没有做好产品质量控制，将严重损害消费者权益。
NMN具有极性大、不易挥发、分子内成盐、易溶于水、难溶于有机溶剂的性质，因而制约了很多常规定量分析方法的应用。目前，对NMN的定量检测方法主要为液相色谱-紫外法(HPLC-UV)，具有操作简单、普适性好、应用广泛等优点，但目前对于NMN的定量检测主要集中于细胞提取物、果蔬等基质，而胶囊、片剂等固体剂型的NMN膳食补充剂由于还含有其它的组成成分，现有的基质中NMN的含量检测方法并不适用于NMN膳食补充剂中NMN含量的检测。
目前，国际上还没有膳食补充剂类产品中NMN含量测定方法的标准，无法对此类产品中NMN含量进行准确测定，因而无法对相关食品进行监管。研制NMN膳食补充剂类产品中NMN含量的检测方法标准，可以有效解决目前NMN行业中以次充好的问题，达到实现净化市场的目的，有效实现对NMN膳食补充剂类产品的监管。
发明内容
有鉴于此，针对现有技术的不足，本发明提供了一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，该方法具有操作简便、检测效率高、准确性好等优点，填补了目前NMN膳食补充剂类产品中尚无NMN含量检测方法的漏洞，为制定NMN膳食补充剂类产品中NMN含量的检测方法标准奠定了方法学基础，对于提高NMN相关产品质量、促进相关产业的便捷监管具有深远意义。
为解决以上技术问题，本发明的技术方案提供了一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，它是采用高效液相色谱法进行膳食补充剂类产品中NMN含量的测定，具体包括以下步骤：
(1)高效液相色谱条件：色谱柱为HILIC色谱柱，进样体积为10μL，流动相流速为1mL/min，流动相A为水溶液，流动相B为甲醇溶液，洗脱条件为等度洗脱；
(2)绘制NMN标准曲线：
准确称取10mg NMN标准品，用50％甲醇水溶液溶解并配制成浓度为1000μg/mL的标准储备液；以50％甲醇水溶液为溶剂，将标准储备液稀释，得到系列标准工作液；将配制好的系列标准工作液按高效液相色谱条件进样分析，以NMN的浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，绘制得到NMN标准曲线，进行线性回归，得到NMN标准曲线线性回归方程；
(3)供试品检测：
准确称取供试品0.5g，加入25mL的50％甲醇水溶液溶解，超声提取后，获得提取液，以10000rpm的速度离心5min，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤后得供试品溶液，取25μL供试品溶液用50％甲醇水溶液定容至1mL后按高效液相色谱条件进样检测，测得被检测组分的峰面积，代入NMN标准曲线线性回归方程得出NMN测定浓度值；
所述供试品为粉碎后的NMN膳食补充剂类产品(片剂或胶囊)。
优选的是，所述流动相A为含0.1％甲酸的水溶液，所述流动相B为含0.1％甲酸的甲醇溶液。对于可离子化的样品，甲酸具有改善峰形的作用，本发明在流动相中加入甲酸，使得被测组分的峰型得到良好改善。
优选的是，所述洗脱条件为15％A-85％B等度洗脱0-8min。对于片剂供试品，当使用85％B等度洗脱时分离效果最好，NMN的出峰时间较短，峰形也基本满足高斯分布，可以达到基质中杂质峰与被分析物色谱峰分离的效果，降低了杂质峰干扰的可能，从而省去对提取液进行净化处理的步骤，而且可以将分析方法的总体时间控制在8min内完成，使得操作简便、耗时较短，极大的提高了分析检测效率。对于基质较为简单的胶囊供试品，使用85％B等度洗脱，具有最好的分离效果、峰形和分析效率。
进一步的，所述HILIC色谱柱的柱温为35℃，可提高色谱柱的分离度，提高NMN含量的测量精度。
进一步的，高效液相色谱检测器采用紫外检测器，检测波长为235nm。
进一步的，所述供试品的称取精度为0.001g。
进一步的，所述供试品的细度为80目筛。
进一步的，所述超声提取的提取时间为20min，提取次数为2次。
进一步的，所述系列标准工作液为浓度分别是500μg/mL、250μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL、5μg/mL的系列标准工作液。
有益技术效果
本发明考虑到NMN具有较大的极性，所以使用HILIC色谱柱进行样品的分离，HILIC色谱柱对于极性样品的分离效果较好；为尽可能的将待测的NMN与胶囊或片剂样品基质中的其他成分分离开，本发明采用15％A-85％B等度洗脱条件，分离效果最好，同时在流动相中加入甲酸，进一步使待测NMN的峰形得到良好的改善。本发明以50％甲醇水溶液作为提取溶剂，样品的回收率可以控制在90％-110％之间，同时结果RSD最小，结果具有更好的稳定性。
本发明方法在5～500μg/mL范围内有较好的线性关系，NMN的检出限(LOD，S/N＝3)为1.0mg/kg，定量限(LOQ，S/N＝10)为3.0mg/kg。本发明方法具有较好的重现性、精密度、稳定性和重复性，NMN片剂和NMN胶囊样品中NMN的检测回收率在90.9％-108.9％之间，相对标准偏差均小于1.9％，表明本发明方法回收率好，结果准确可靠，可用于实际样品中NMN含量的准确测定。
与现有技术相比，本发明采用高效液相色谱法来对NMN膳食补充剂类产品中的NMN含量进行测定，具有操作简便、检测效率高、准确性好等优点，填补了目前NMN膳食补充剂类产品中尚无NMN含量检测方法的漏洞，为制定NMN膳食补充剂类产品中NMN含量的检测方法标准奠定了方法学基础，对于提高NMN相关产品质量、促进相关产业的便捷监管具有深远意义。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为NMN片剂样品基质的流动相优化分离色谱图；
图2为NMN胶囊样品基质的流动相优化分离色谱图；
图3为甲酸加入前后NMN片剂样品基质分离色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者装置不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者装置所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括该要素的过程、方法、物品或者装置中还存在另外的相同要素。
如在本说明书中使用的，术语“大约”，典型地表示为所述值的+/-5％，更典型的是所述值的+/-4％，更典型的是所述值的+/-3％，更典型的是所述值的+/-2％，甚至更典型的是所述值的+/-1％，甚至更典型的是所述值的+/-0.5％。
在本说明书中，某些实施方式可能以一种处于某个范围的格式公开。应该理解，这种“处于某个范围”的描述仅仅是为了方便和简洁，且不应该被解释为对所公开范围的僵化限制。因此，范围的描述应该被认为是已经具体地公开了所有可能的子范围以及在此范围内的独立数字值。例如，范围的描述应该被看作已经具体地公开了子范围如从1到3，从1到4，从1到5，从2到4，从2到6，从3到6等，以及此范围内的单独数字，例如1，2，3，4，5和6。无论该范围的广度如何，均适用以上规则。
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
实施例一：材料与方法
(1)材料与仪器
1.1NMN标准品：β-烟酰胺单核苷酸(C11H15N2O8P)；CAS：1094-61-7，纯度≥98％，上海源叶生物科技有限公司。
1.2甲醇(CH4O)：色谱纯，德国Merck公司。
1.3甲酸(CH2O2)：色谱纯，国药集团化学试剂有限公司。
1.4待测样品：NMN膳食补充剂
1.4.1NMN膳食补充剂1，厂家1，剂型(片剂)，NMN含量：75000mg/kg，购于天猫，用于测定方法的研发和优化；
1.4.2NMN膳食补充剂2，厂家2，剂型(片剂)，NMN含量：520325mg/kg，购于天猫；
1.4.3NMN膳食补充剂3，厂家3，剂型(片剂)，NMN含量：188300mg/kg，购于天猫；
1.4.4NMN膳食补充剂4，厂家4，剂型(片剂)，NMN含量：500000mg/kg，购于天猫；
1.4.5NMN膳食补充剂5，厂家5，剂型(胶囊)，NMN含量：产品上未标注产品标量，购于天猫；以及
1.4.6NMN膳食补充剂6，厂家6，剂型(胶囊)，NMN含量：500000mg/kg，购于天猫，用于测定方法的研发和优化。
1.5仪器：
iChrom5100分析型国产液相色谱仪，配DAD检测器，大连依利特分析仪器有限公司；Venusil HILIC色谱柱(4.6mm×250mm，5μm，)，天津博纳艾杰尔科技有限公司；Thmorgan-VM200型涡旋振荡器，托摩根生物科技有限公司；HITACHI-CF15RXII离心机，日立公司；sartorius分析天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；ELGA纯水仪，北京诚驿恒仪科技有限公司；LMDTC-15F超声波清洗仪，北京绿棉科技有限公司。
(2)溶液配制
2.1流动相的配制：
2.1.1流动相A为含0.1％甲酸的水溶液，水由实验室纯水仪自制，电导率为18.2MΩ，使用前经水相滤膜抽滤，超声脱气20min。
2.1.2流动相B为含0.1％甲酸的甲醇溶液(色谱纯)，使用前经有机相滤膜抽滤，超声脱气20min。
2.2标准储备液的配制：
准确称取10mg NMN标准品置于15mL容量瓶中，用50％甲醇水溶解并定容至10mL，配制成浓度为1000μg/mL标准储备液，避光保存于4℃冰箱备用，有效期3个月。
2.3标准工作溶液的配制：
以50％甲醇水溶液为溶剂，将NMN标准储备液稀释至500μg/mL、250μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL、5μg/mL的系列标准工作溶液，此溶液需现用现配。
(3)待测样品前处理
片剂待测样品：100g于石英研钵中，研磨至碎，过80目筛备用；
胶囊待测样品：去除胶囊后过80目筛备用。
准确称取待测样品0.5g(精确到0.001g)于50mL容量瓶中，加入25mL 50％甲醇水溶液溶解，超声20min让其充分溶解，提取两次，合并提取液，以10000rpm的速度离心5min，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤，取25μL样品溶液用50％甲醇水定容至1mL后进样检测。
(4)液相色谱条件
色谱柱为Venusil HILIC(4.6mm×250mm，5μm，)，进样体积为10μL，流速1mL/min，柱温：35℃，检测波长为235nm，流动相A相为0.1％甲酸水溶液，流动相B相为0.1％甲酸甲醇溶液，等度洗脱条件为0-8min，15％A-85％B。
(5)标准曲线的绘制
将配制好的5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、250μg/mL、500μg/mL的标准工作溶液按上述“(4)液相色谱条件”进样分析，以NMN的浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，绘制NMN标准曲线，进行线性回归，得到NMN的标准曲线线性回归方程。
(6)精密度试验方法
按照“2.3标准工作溶液的配制”方法配制90μg/mL浓度的工作溶液，在相同仪器条件下，按“(4)液相色谱条件”重复进样6次，测得各被检测组分的峰面积，代入标准曲线线性回归方程得出测定浓度值，再计算测定浓度的相对标准偏差RSD。
(7)稳定性试验方法
按照“(3)待测样品前处理”方法分别处理待测样品1.4.1(片剂)和1.4.6(胶囊)，得到待测液，在相同仪器条件下，在同一天内，按“(4)液相色谱条件”进样分析，每2小时测定一次，总共测定6次，测得被检测组分的峰面积，代入标准曲线线性回归方程得出测定浓度值，再计算测定浓度的相对标准偏差RSD。
(8)重复性试验方法
按照“(3)待测样品前处理”方法分别处理待测样品1.4.1(片剂)和1.4.6(胶囊)，得到待测液，在相同的仪器条件下，按“(4)液相色谱条件”进样分析，测得样品中NMN的峰面积，代入标准曲线方程得出测定浓度值，计算测定浓度的标准偏差RSD。
(9)定量限、检出限的测定方法
将“2.3”配制的标准工作溶液按“(4)液相色谱条件”进样测定，测得NMN的峰面积，带入相应物质的标准曲线回归方程中。以最低水平标准溶液中目标组分的3倍平均信噪比为检出限(LOD)，10倍平均信噪比为定量限(LOQ)，计算得本方法的LOD和LOQ。
(10)加标回收率的测定方法
按照“(3)待测样品前处理”方法处理待测样品1.4.1(片剂)和1.4.6(胶囊)，分别处理各12份，编号1-12，其中1-3号作为本底待测液(基质样品)，4-6号是加标量为5μg/mL的待测液，7-9号是加标量为10μg/mL的待测液，10-12号是加标量为50μg/mL的待测液，将处理好的待测液经HPLC分析，测得峰面积，计算回收率。
(11)数据处理
本申请所述的标准曲线线性回归方程及相关系数由依利特ichrom5100workstation处理所得，其他数据采用Origin 6.0和Excel2010软件对数据进行处理并作图，实验数据取3次平行实验的平均值。
实施例二：结果与分析
(1)液相色谱条件优化
考虑到NMN较大的极性，所以使用对于极性样品分离效果较好的HILIC色谱柱进行样品的分离。
为尽可能的将待测的NMN与胶囊和片剂样品基质中其他成分分离开，首先对流动相梯度程序进行了优化。用50％甲醇水作为提取液溶解胶囊和片剂样品配制成待测液，以85％B、95％B、50％B的等度分离方式对胶囊和片剂的样品进行色谱分离，通过单标法对峰的归属进行了确证，由此判断检测时最佳的流动相比例，分析谱图如图1、图2所示，其中图1为NMN片剂的分离谱图，图2为NMN胶囊的分离谱图。从图中可以看出，随着流动相中甲醇含量的增大，NMN的出峰时间逐渐后移。对于片剂样品以50％B等度洗脱时，NMN与基质无法得到有效分离，而使用95％等度洗脱时NMN的出峰时间较晚，影响分析方法的效率，而且也伴随着峰展宽。当使用85％B等度洗脱时分离效果最好，NMN的出峰时间较短，峰形也基本满足高斯分布，可以达到基质中杂质峰与被分析物色谱峰分离的效果，降低了杂质峰干扰的可能，从而省去对提取液进行净化处理的步骤，而且可以将分析方法的总体时间控制在8min内完成，使得操作简便、耗时较短，极大的提高了分析检测效率。对于基质较为简单的胶囊样品，可以看出同样使用85％B等度洗脱，具有最好的分离效果、峰形和分析效率。所以采用85％B等度洗脱进行后续实验。
对于可离子化的样品，甲酸具有改善峰形的作用，因此，本申请对流动相中甲酸的加入进行优化对比，以85％B等度洗脱条件下，考察了甲酸加入前后NMN片剂样品基质中各被测组分分离效果，结果如图3所示。结果表明，不加甲酸，NMN的峰拖尾现象明显，甲酸的加入使得各被测组分的峰形得到了良好的改善，所以在流动相中加入甲酸进行后续实验。
综上，对于NMN片剂和NMN胶囊基质，可以采用添加甲酸的方式改善NMN峰形，同时采用甲醇与水的比例在85：15的流动相进行分离。
(2)提取溶剂优化
根据NMN的理化性质，NMN在水中溶解度较大，在甲醇中溶解度较小，所以在仪器及实验条件相同情况下，本申请选择了水溶液、50％甲醇水溶液和85％甲醇水溶液3种溶剂作为提取溶剂进行实验。由于NMN在甲醇中几乎不溶，故不选择用纯甲醇作为提取溶剂。取0.5g粉碎后的片剂待测样品1.4.1和胶囊待测样品1.4.6，向其中各添加10μg/mL的NMN标准工作溶液，采用“(3)待测样品前处理”方法，分别用上述3种提取溶剂进行提取，得到待测液，并以加标量为10μg/mL上述“(10)加标回收率的测定方法”测定加标回收率，结果如下表1所示。从表1中可以看出，以50％甲醇水溶液作为提取溶剂，样品的回收率可以控制在90％-110％之间，同时结果RSD最小，结果具有更好的稳定性。因此，在后续实验中采用50％甲醇水提取溶剂进行提取。
表1：不同溶剂对NMN提取效率的影响
(3)标准曲线、定量限、检出限的测定结果
按照上述方法对NMN标准工作溶液进行测定，通过ichrom5100 workstation绘制标准曲线回归方程，其线性范围、相关系数r、检出限LOD及定量限LOQ如下表2所示。
表2：NMN的线性范围、LOD和LOQ
由表2中数据可知，本发明方法在5～500μg/mL范围内有较好的线性关系，相关系数r>0.999。经计算，NMN的检出限(LOD，S/N＝3)为1.0mg/kg，定量限(LOQ，S/N＝10)为3.0mg/kg。
(4)精密度实验结果
按照上述精密度试验方法，对浓度为90μg/mL的NMN标准溶液进行6次平行测定，将测得的NMN的响应值带入线性方程计算得到溶液中NMN的含量，并计算6次测定结果的RSD如下表3所示。
表3：精密度实验结果(μg/mL)
由上表3的数据可知，本方法精密度实验结果为RSD＝0.33％，表明本申请所提供的液相色谱方法精密度较好，具有较好的重现性，可以用于后续实际样品中NMN含量的测定。
(5)稳定性实验结果
按照上述的稳定性试验方法进行操作，考察方法的稳定性，经过6次平行实验，测得片剂和胶囊样品中NMN的浓度与RSD如表4所示。
表4：稳定性实验结果(mg/kg)
由上表4中数据可知，对于NMN片剂和NMN胶囊，6次测定结果RSD均较小，说明结果都保持高度一致，说明本文发展的液相色谱方法可有效分辨NMN片剂和NMN胶囊中的NMN和基质杂质，并能保证方法的稳定性。
(6)重复性实验结果
按照上述的重复性试验方法，将测得的NMN片剂、胶囊原液的6组平行样品中NMN的浓度及RSD计算汇总，结果如下表5中所示。
表5：重复性实验结果(mg/kg)
由上表5中数据可知，两种样品重复性实验的RSD在0.6％-1.8％之间，表明本发明方法重复性较好，说明本申请中待测样品的前处理方法结合HPLC方法可以用于NMN片剂和NMN胶囊中的NMN含量测定，并保持结果具有良好的重复性。
(7)加标回收率实验结果
按照上述的加标回收率的测定方法进行操作，对制备的5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg的低、中、高三种加标水平的NMN片剂和NMN胶囊剂样品中NMN含量进行了测定，并计算回收率和RSD，结果如表6所示。
表6：加标回收率实验结果
由上表6中数据可知，NMN片剂和NMN胶囊样品中NMN的检测回收率在90.9％-108.9％之间，相对标准偏差均小于1.9％，表明本发明方法回收率好，结果准确可靠，可用于实际样品中NMN含量的准确测定。
(8)实际样品测定
按照本申请方法对待测样品中的NMN含量进行分析测试，检测结果见表7。
表7：NMN膳食补充剂产品中NMN含量(mg/kg)(n＝3)
从实际样品检测结果可以直观看出，部分NMN产品的标称含量与其实际值有所差别。因此，本发明提供的测定方法，能够有效检测不同的以NMN为主要活性物质的膳食补充剂中NMN的实际含量，检测效率高、准确性好，具有实际应用价值。
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上面结合附图对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (7)

1.一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法进行膳食补充剂类产品中NMN含量的测定，具体包括以下步骤：
(1)高效液相色谱条件：色谱柱为HILIC色谱柱，进样体积为10μL，流动相流速为1mL/min，流动相A为含0.1％甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％甲酸的甲醇溶液，洗脱条件为15％流动相A-85％流动相B等度洗脱0-8min；
(2)绘制NMN标准曲线：
准确称取10mg NMN标准品，用50％甲醇水溶液溶解并配制成浓度为1000μg/mL的标准储备液；以50％甲醇水溶液为溶剂，将标准储备液稀释，得到系列标准工作液；将配制好的系列标准工作液按高效液相色谱条件进样分析，以NMN的浓度为横坐标，峰面积响应值为纵坐标，绘制得到NMN标准曲线，进行线性回归，得到NMN标准曲线线性回归方程；
(3)供试品检测：
准确称取供试品0.5g，加入25mL的50％甲醇水溶液溶解，超声提取后，获得提取液，以10000rpm的速度离心5min，取上清液经0.22μm有机滤膜过滤后得供试品溶液，取25μL供试品溶液用50％甲醇水溶液定容至1mL后按高效液相色谱条件进样检测，测得被检测组分的峰面积，代入NMN标准曲线线性回归方程得出NMN测定浓度值；
所述供试品为粉碎后的NMN膳食补充剂类产品。
2.根据权利要求1所述的一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：所述HILIC色谱柱的柱温为35℃。
3.根据权利要求1所述的一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：采用紫外检测器，检测波长为235nm。
4.根据权利要求1所述的一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：所述供试品的称取精度为0.001g。
5.根据权利要求1所述的一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：所述供试品的细度为80目筛。
6.根据权利要求1所述的一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：所述超声提取的提取时间为20min，提取次数为2次。
7.根据权利要求1所述的一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法，其特征在于：所述系列标准工作液为浓度分别是500μg/mL、250μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、10μg/mL、5μg/mL的系列标准工作液。
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