CN114058557B

CN114058557B - 一株巨大芽孢杆菌多功能生防降解菌株及其应用

Info

Publication number: CN114058557B
Application number: CN202111546121.2A
Authority: CN
Inventors: 王金花; 温胜芳; 朱鲁生; 王军; 王兰君; 杜仲坤
Original assignee: Shandong Agricultural University
Current assignee: Shandong Agricultural University
Priority date: 2021-12-16
Filing date: 2021-12-16
Publication date: 2023-09-01
Anticipated expiration: 2041-12-16
Also published as: CN114058557A

Abstract

本发明公开了一株巨大芽孢杆菌多功能生防降解菌株及其应用，属于农业微生物技术领域。所述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW‑6，其保藏编号为：CCTCC NO：M 20211133，该该巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)对部分土传病原菌有生防效果，同时具有促进植物生产的作用，可应用于水体、土壤中，以达到修复毒死蜱和泰乐菌素污染土壤、防治土传病害以及促生的目的。

Description

一株巨大芽孢杆菌多功能生防降解菌株及其应用

技术领域

本发明涉及农业微生物技术领域，具体涉及一株巨大芽孢杆菌多功能生防降解菌株及其应用。

背景技术

毒死蜱(Chlorpyrifos)又名氯吡硫磷，其化学名为O,O-二乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸，分子式为C₉H₁₁Cl₃NO₃PS，分子量是350.6，化学结构式如下：

毒死蜱原药是白色的颗粒状晶体，室温下比较稳定，具有硫醇臭味，比重是1.398(43.5℃)，熔点为41.5-43.5℃，蒸气压为18.7×10^-5毫米汞柱(25℃)，其溶解度在水中为1.2mg/kg，可以溶于大部分有机溶剂，在碱性介质中容易分解，具有良好的疏水性。是一种非内吸性广谱杀虫、杀螨剂，在土壤中挥发性较高。作为目前全世界范围内生产和销售量最大的杀虫剂之一，毒死蜱也是世界卫生组织唯一许可使用的有机磷品种，已经在超过14个国家包括中国、欧盟、美国等进行登记注册和使用。有研究报道美国毒死蜱每年的使用量在5000t左右，欧盟每年也会使用50t的毒死蜱。由于毒死蜱具有高效的特点，全球的毒死蜱需求数量依然在大幅度增长，具有非常广阔的市场和应用前景。但是与其他有机磷农药相同，毒死蜱也存在残留和对生态环境的潜在威胁性，在我国由于大量以及不合理的使用，使得毒死蜱在稻米及蔬菜中的农残超标，成为发达国家设置绿色贸易壁垒的重要手段，对我国农产品出口造成重大的影响。

抗生素在疾病治疗和畜禽养殖过程的需求非常大，因此，导致直接或间接进入环境中的抗生素数量也在逐年增加。进入环境的抗生素给水环境以及土壤环境带来一定程度的污染，更严重的后果是促使大量的细菌产生抗药性。有研究发现，动物摄入兽用抗生素后，大部分抗生素会随着畜禽分粪便以原药或者代谢产物的形式排除体外。排除体外的药物以不同的方式比如迁移、淋溶或者渗透等进入到环境中，其在土壤、水体中都可以累积，再通过食物链的方式进入人体，对人体造成潜在的健康隐患。大环内酯类抗生素泰乐菌素是世界上应用最多的兽用抗生素之一，在不同的环境中均可以检测到泰乐菌素的存在，而泰乐菌素可以对耳蜗神经以及前庭造成损害。

土传病害一般危害植物的根和茎，作物生长前期一旦发生病害，幼苗根腐烂或是茎腐烂猝倒，幼苗很快就会死亡，严重影响作物生产。作物生长后期发生病害，一般年份减产20％-30％，严重年份减产50％-60％，甚至绝收。土传病害发病后，比较难以防治，病菌在土壤中越冬，很难被杀死，来年继续侵害作物，如此循环，病害越来越严重。生防菌通过对病原菌的拮抗作用、对作物的诱导作用和对作物生长的促进作用等机制来防治病害的发生。

利用微生物修复污染环境是近年来新兴的一种生物学污染修复方法，以其低成本、效率高、无二次污染等优点被广大学者所青睐。因此，开发集农药和抗生素降解、土传病害防治、促生功能于一体的多功能微生物，其对于生物学污染修复的推广利用将具有十分重要的意义。

发明内容

针对上述现有技术，本发明筛选出一株具有高效降解毒死蜱，同时具有降解泰乐菌素能力的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，该巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)对部分土传病原菌有生防效果，同时具有促进植物生产的作用，可应用于水体、土壤中，以达到修复毒死蜱和泰乐菌素污染土壤、防治土传病害以及促生的目的。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

本发明的第一方面，提供一株巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6，该菌株已于2021年09月3日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址为：中国武汉，武汉大学)，其保藏编号为：CCTCC NO：M 20211133。

所述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6，分离自长期使用毒死蜱的农田土壤中，其具有如下特征：

菌落呈米白色，不透明，表面光滑，革兰氏染色呈阳性。具有芽孢形态，芽孢杆状，中生或次端生。

含有上述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6的菌剂也属于本发明的保护范围。

所述菌剂中除包含巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6外，还可包括辅料或载体基质等；如海藻糖、葡萄糖、羟甲基纤维素、糊精、可溶性淀粉、草炭、硅藻土等。

所述菌剂的剂型可以为液剂、乳剂、悬浮剂、颗粒剂、粉剂、可湿性粉剂或水分散剂。

所述菌剂中，巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6可以以被培养的活菌或者活菌的发酵液的形式存在。

本发明的第二方面，提供上述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6或者含有巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6的菌剂在如下(1)-(4)至少一项中的应用：

(1)降解毒死蜱；

(2)制备降解毒死蜱的产品；

(3)降解泰乐菌素；

(4)制备降解泰乐菌素的产品。

本发明的第三方面，提供上述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6或者含有巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6的菌剂在制备防治土传病害的药物制剂中的应用。

上述应用中，所述土传病害为小麦根腐病或辣椒根腐病。

本发明的第四方面，提供上述巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6或者含有巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6的菌剂在如下(1)或(2)中的应用：

(1)产氨；

(2)产IAA。

本发明的有益效果：

本发明的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6能够高效降解毒死蜱和泰乐菌素，2d内对50mg/L毒死蜱的降解率达到70％以上且趋于稳定；对10mg/L的泰乐菌素的降解率达到了47％。而且，本发明的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6对小麦根腐病和辣椒根腐病均有生防效果，抑菌率分别为24.67％和10.77％；此外，本发明的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6还具有很强的产氨能力以及较强的产生长素能力。

综上，本发明的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)CW-6集农药和抗生素降解、土传病害防治、促生功能于一体，是一种多功能生防降解菌株，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1为本发明菌株CW-6显微镜100倍镜下图片。

图2为本发明菌株CW-6菌落形态图。

图3为本发明菌株CW-6的系统发育树图。

图4为毒死蜱含量测定标准曲线。

图5为时间对菌株CW-6降解毒死蜱的降解率影响；

该图说明了菌株CW-6在2d时对毒死蜱的降解率就可达到70％左右。

图6为泰乐菌素的标准曲线。

图7为菌株CW-6对泰乐菌素降解效果测定；

该图说明了菌株CW-6在2d时对泰乐菌素的降解率达到47％左右。

图8为菌株CW-6与小麦根腐病菌对峙试验图。

图9为菌株CW-6与辣椒根腐病菌对峙试验图。

图10为菌株CW-6产氨能力结果图。

图11为菌株CW-6产生长素能力结果。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或者按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。其中，所使用的培养基的组成如下：

富集培养基：NaCl 10.0g，蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，蒸馏水1000mL，调节pH到7.0左右，在121℃条件下高压灭菌20min。

无机盐培养基：K₂HPO₄ 5.8g，KH₂PO₄ 4.5g，(NH₄)₂SO₄ 2.0g，MgSO₄ 0.16g，CaCl₂0.02g，Na₂MoO₄ 0.002g，FeSO₄ 0.001g，MnCl₂ 0.001g，蒸馏水1000mL，调节pH到7.0左右，在121℃条件下高压灭菌20min。

含碳源培养基：K₂HPO₄ 5.8g，KH₂PO₄ 4.5g，(NH₄)₂SO₄ 2.0g，MgSO₄ 0.16g，CaCl₂0.02g，Na₂MoO₄ 0.002g，FeSO₄ 0.001g，MnCl₂ 0.001g，蔗糖5.0g，蒸馏水1000mL，调节pH到7.0左右，在121℃条件下高压灭菌20min。

LB培养基：NaCl 10.0g，蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，琼脂粉15g，蒸馏水1000mL，调节pH到7.0左右，在121℃条件下高压灭菌20min。

PDA培养基：马铃薯(去皮)200g，蔗糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，不需要调节pH，在121℃条件下高压灭菌20min。

实施例1：多功能生防降解菌株CW-6的筛选与鉴定

1、菌株富集分离：

从山东省泰安市长期使用毒死蜱的农田土壤中分离毒死蜱降解菌。将采集的农田土壤采用液体富集培养的方法进行培养。

液体富集培养：将采集到的农田土壤按照10％(质量比)的比例接种到含有50mg/L毒死蜱的富集培养基中，在30℃、120r/min条件下摇床培养一周后再以10％(质量比)的接种量接种到新的含有50mg/L毒死蜱的富集培养基中，依次反复驯化，将最后一次培养液采用平板培养的方法进行分离纯化，编号保存。

在无菌操作台上用接菌环轻轻刮取培养了72h的培养皿内的菌落，将其转移到已经灭菌的三角瓶中，加入适量生理盐水得到一定浓度的菌体后放入恒温震荡箱内培养3h，后加入无菌水调整浓度，使菌体OD_400nm在1.0左右，备用。

取适量菌悬液加入到含有50mg/L毒死蜱的富集培养基中，在30℃，120r/min的条件下震荡培养，同时设定不接种菌悬液对照。定时培养取样，色谱条件温度条件：进样口为250℃；柱温为程序升温，初始为140℃以15℃/min升到200℃，保持1min；检测器温度为250℃；载气流量为13mL/min；压力为311.04KPa，恒压模式；空气流量为300mL/min，H₂流量为40mL/min；尾吹为40mL/min；进样量为1μL，保留时间2.5min，进行测定毒死蜱残留量，计算毒死蜱降解率，确定不同降解菌对毒死蜱的降解能力，选取其中降解率较高的菌株，命名为CW-6。

2、菌株鉴定：

(1)菌落形态和生理生化鉴定：

将上述获得的CW-6菌株进行菌落形态和生理生化鉴定，该菌株的显微镜100倍照片如图1所示。该菌株的主要生物学特征为：菌落呈米白色，不透明，表面光滑，菌落为圆形，四周规则，显微镜下观察细胞呈杆状(图2)；革兰氏染色阳性。该菌株最适宜的生长条件为pH值8.0，温度30℃。

(2)16S rDNA分子学鉴定：

1)菌组DNA的提取：

挑取菌株CW-6单菌落在无菌条件下接种于LB培养基，在30℃、120r/min条件下，恒温震荡培养24h，待用。

取1mL的菌株CW-6的培养液加入含有100μL无菌水的灭菌EP管中，经漩涡震荡后置于80℃的沸水浴5min，后用速离心机12000rpm条件下离心5min，得到的上层液体，即为菌株CW-6基因组DNA。

2)菌株CW-6的16S rDNA序列分析：

以菌株CW-6的基因组DNA为模板，利用细菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增，引物序列如下：

27F:5'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3'；(SEQ ID NO.2)

1492R:5'-GGC TAC CTT GTT ACG ACT-3'。(SEQ ID NO.3)

PCR反应体系为：

模板0.5μL

正向引物0.5μL

反向引物0.5μL

2×Taq Master Mix 12.5μL

无菌dd H₂O 11μL

总体积25μL

PCR反应程序：预变性：94℃、5min；循环条件：94℃、1min，55℃、1min，72℃、1min，循环30次；后延伸：72℃、10mim。在反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳。

PCR扩增反应产物检测与测序：

PCR扩增产物的测序工作是由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示。将测序结果上传到NCBI中的Genbank，进行序列比较和分析，确定菌株CW-6的种类。

根据Gene Bank序列同源性比较，菌株CW-6与Bacillus megaterium同处于一个分支，其同源性高达100％(图3)。结合菌株的生理生化特征，将菌株CW-6鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，命名为多功能生防降解菌株CW-6(Bacillus megaterium CW-6)。并对该菌株进行生物保藏，保藏信息如下：

菌种名称：巨大芽孢杆菌CW-6

拉丁名：Bacillus megaterium

保藏机构：中国典型培养物保藏中心

保藏机构简称：CCTCC

地址：中国武汉武汉大学

保藏日期：2021年9月3日

保藏中心登记入册编号：CCTCC NO：M 20211133。

实施例3：多功能生防降解菌株CW-6对毒死蜱的降解特性

溶液中毒死蜱的提取：降解实验培养周期结束之后，加入石油醚及适量NaCl，在旋涡振荡器上充分震荡2min后静置待分层，取上层石油醚溶液进进样瓶待测。

毒死蜱的测定：安捷伦7890B高效气相色谱仪，FID检测器，温度条件：进样口为250℃；柱温为程序升温，初始为140℃以15℃/min升到200℃，保持1min；检测器温度为250℃；载气流量为13mL/min；压力为311.04KPa，恒压模式；空气流量为300mL/min，H₂流量为40mL/min；尾吹为40mL/min；进样量为1μL，保留时间2.5min。

添加回收率计算公式：

毒死蜱降解率计算：

式中：x：多功能生防降解菌株CW-6的降解率(％)；C_X：接菌处理培养液中毒死蜱的浓度；C_CK：未接菌对照培养液中毒死蜱的浓度。

以石油醚为溶剂，配制梯度浓度分别为5、10、20、50、100、200mg/L的毒死蜱标准溶液，在选定的气相色谱条件下进样，以毒死蜱浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标，绘制毒死蜱标准曲线，结果如图4所示。其线性方程为y＝4.1633x+1.5234，相关系数为0.9998，以此表明毒死蜱的浓度与其峰面积有良好的线性关系。

以石油醚为提取溶剂，在添加浓度为5.15、10.38、51.55、103.09mg/L的毒死蜱培养基中加入相同体积的石油醚进行提取，每个浓度重复三次。在选定的气相色谱条件下进样测定。毒死蜱的添加回收率的范围在96.9％～110.8％之间，变异系数为0.7～3.4之间，采用石油醚为提取剂，气相色谱测定的方法可以满足实验的要求。

时间对降解菌降解率影响：初始pH为7.0，在毒死蜱浓度为50mg/L的无机盐培养中3％(体积比)的接菌量接种多功能生防降解菌株CW-6，在30℃，120r/min条件下震荡培养，后分别于12h、24h、48h、72h、96h取样测定并计算毒死蜱降解率。结果如图5所示，随着时间的推移，多功能生防降解菌株CW-6对毒死蜱的降解率不断的增大，在第48h的时候降解已经趋于稳定状态，降解率达到70％以上，以此说此降解菌对毒死蜱具有高效降解的效果，在第96h的时候降解率达到73.6％。

通过以上实验证明：多功能生防菌CW-6对毒死蜱降解率在48h时降解已经趋于稳定状态，降解率达到70％以上。

实施例4：多功能生防降解菌株CW-6对泰乐菌素的降解研究

泰乐菌素的测定：高效液相色谱的条件为柱温25℃，波长275nm，1mL/min，进样量10μL，流动相的水相为0.05mol/L磷酸，有机相为色谱纯乙腈，流动相比例为73:27(体积比)。

以甲醇为溶剂，配置500、250、125、50、10、5mg/L的不同梯度浓度的泰乐菌素标准溶液。在选定的液相色谱条件进行测定，每个样品进样三次，取平均峰面积为纵坐标，泰乐菌素浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果如图6所示，相关线性方程为y＝7.5443x+0.0517相关系数为0.9993，以此表明泰乐菌素的浓度与其峰面积有良好的线性关系。

泰乐菌素降解效果测定：

初始pH为7.0，分别在经过高温灭菌的泰乐菌素浓度为10mg/L的无机盐培养基和含碳源培养基中均按3％(体积比)的接菌量接种多功能生防降解菌株CW-6，置于30℃，120r/min条件下震荡培养3d后，将降解后的培养液经0.45μm的微孔滤膜过滤后上机待测。结果如图7所示，在无机盐培养基中，多功能降解菌CW-6对泰乐菌素的降解效果不是很明显，但是在培养液中加入外加碳源之后，其对泰乐菌素的降解率有一定的升高，达到了47％。

添加回收率计算公式：

泰乐菌素降解率计算：

式中：x：多功能生防降解菌株CW-6的降解率(％)；C_X：接菌处理培养液中泰乐菌素的浓度；C_CK：未接菌对照培养液中泰乐菌素的浓度。

通过以上实验证明：多功能生防降解菌株CW-6对抗生素泰乐菌素的降解率达到了47％，说明多功能生防降解菌株CW-6是一种降解泰乐菌素能力较强的菌株。

实施例5：多功能生防降解菌株CW-6对土传病原菌的防治效果研究

平板对峙法：以土传病原菌为靶标菌，将直径为7mm的靶标菌菌饼接种于PDA平板中心，在距离平板中心2.5cm处对称的两个点上点接菌株CW-6，以不接种菌株CW-6的平板为对照，每个处理重复3次，倒置于28±2℃培养箱中培养，待对照菌落长满时，测量各对峙菌落直径并计算抑菌率。

本实施例中所使用土传病原菌分别为小麦根腐病(根腐平脐蠕孢Bipolarissorokinlana(Sacc)Shoem)和辣椒根腐病(腐皮镰孢菌Fusarium solani(Mart.)App.etWollenw)，由山东农业大学植物保护学院植物病理实验室提供。

结果如图8、9以及表1所示，多功能生防降解菌株CW-6对小麦根腐病和辣椒根腐病均有一定的生防效果，抑菌率分别为24.67％和10.77％。

表1：CW-6菌株与土传病原菌对峙试验结果

实施例6：多功能生防降解菌株CW-6促生潜力的研究

Salkowski’s显色剂：1mL0.5mol/L FeCl₃，50mL 35％高氯酸溶液。

蛋白胨氨化培养基：蛋白胨5g，去离子水1000mL，pH 7.2，121℃灭菌20min。

(1)拮抗菌产氨能力的测定

将筛选得到的多功能生防降解菌株CW-6接种至LB液体培养基活化，使用无菌水将菌株菌液稀释至OD₆₀₀≈1.0，分别取10μL菌液接种至蛋白胨氨化培养基中，以未接种拮抗菌的培养基为对照，每个处理重复3次，28±2℃，180rpm震荡培养5d。培养结束后，10000rpm离心10min，向上清液中加入1mL纳氏试剂，观察溶液变化，若产生橙色或黄色沉淀则说明菌株具有产氨能力，沉淀越多产氨能力越强。结果如图10和表2所示，多功能生防降解菌株CW-6产氨能力强，说明CW-6具有脱氨酶，能使氨基酸发生脱氨反应，生成氨和各种酸类，从而有利于植物生长发育。

(2)拮抗菌产生长素能力的测定

将筛选得到的多功能生防降解菌株CW-6接种至LB液体培养基活化培养，使用无菌水将各菌株菌液稀释至OD₆₀₀≈1.0，分别取10μL菌液接种至含有色氨酸的LB液体培养基中(每升LB液体培养基含有色氨酸5mmol)，以未接种拮抗菌的培养基为对照，每个处理重复3次，28±2℃，180rpm震荡培养2d。培养结束后，10000rpm离心10min，取1mL上清液，加入等量的Salkowski’s显色剂，避光静置30min使培养液显色，然后观察溶液颜色变化，若溶液变为粉色则说明该拮抗菌具有产IAA的能力，颜色越深菌株产IAA的能力越强。结果如图11和表2所示，多功能生防降解菌株CW-6产生长素能力较强，有利于促进植物生长发育。

表2：CW-6菌株促生试验结果

注：“+”表示阳性反应，“-”表示阴性反应,“+”越多，表示产氨能力越强。

综上所述，多功能生防降解菌株CW-6是一株能够高效降解毒死和泰乐菌素、对土传病菌小麦根腐病和辣椒根腐病具有一定的生防效果且具有产氨和产生长素的促生能力的菌株。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 山东农业大学

<120> 一株巨大芽孢杆菌多功能生防降解菌株及其应用

<130> 2021

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1354

<212> DNA

<213> Bacillus megaterium

<400> 1

agctccttac ggttactcca ccgacttcgg gtgttacaaa ctctcgtggt gtgacgggcg 60

gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct gatccgcgat tactagcgat 120

tccagcttca tgtaggcgag ttgcagccta caatccgaac tgagaatggt tttatgggat 180

tggcttgacc tcgcggtctt gcagcccttt gtaccatcca ttgtagcacg tgtgtagccc 240

aggtcataag gggcatgatg atttgacgtc atccccacct tcctccggtt tgtcaccggc 300

agtcacctta gagtgcccaa ctaaatgctg gcaactaaga tcaagggttg cgctcgttgc 360

gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacaa ccatgcacca cctgtcactc 420

tgtcccccga aggggaacgc tctatctcta gagttgtcag aggatgtcaa gacctggtaa 480

ggttcttcgc gttgcttcga attaaaccac atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca 540

attcctttga gtttcagtct tgcgaccgta ctccccaggc ggagtgctta atgcgttagc 600

tgcagcacta aagggcggaa accctctaac acttagcact catcgtttac ggcgtggact 660

accagggtat ctaatcctgt ttgctcccca cgctttcgcg cctcagcgtc agttacagac 720

caaaaagccg ccttcgccac tggtgttcct ccacatctct acgcatttca ccgctacacg 780

tggaattccg cttttctctt ctgcactcaa gttccccagt ttccaatgac cctccacggt 840

tgagccgtgg gctttcacat cagacttaag aaaccgcctg cgcgcgcttt acgcccaata 900

attccggata acgcttgcca cctacgtatt accgcggctg ctggcacgta gttagccgtg 960

gctttctggt taggtaccgt caaggtacaa gcagttactc ttgtacttgt tcttccctaa 1020

caacagagtt ttacgacccg aaagccttca tcactcacgc ggcgttgctc cgtcagactt 1080

tcgtccattg cggaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtctgggc cgtgtctcag 1140

tcccagtgtg gccgatcacc ctctcaggtc ggctatgcat cgttgccttg gtgagccgtt 1200

acctcaccaa ctagctaatg caccgcgggc ccatctgtaa gtgatagccg aaaccatctt 1260

tcaatcatct cccatgaagg agaagatcct atccggtatt agcttcggtt tcccgaagtt 1320

atcccagtct tacaggcagg ttgcccacgt gtta 1354

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

ggctaccttg ttacgact 18

Claims

1.一株巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CW-6，其保藏编号为：CCTCC NO：M20211133。

2. 含有权利要求1所述巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CW-6的菌剂。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中还包括辅料。

4.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于，所述辅料选自海藻糖、葡萄糖、羟甲基纤维素、糊精、可溶性淀粉、草炭、硅藻土中的一种或多种。

5.根据权利要求2或3所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂的剂型为液剂或粉剂。

6. 权利要求1所述的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CW-6或者权利要求2-5任一项所述的菌剂在如下（1）-（4）至少一项中的应用：

（1）降解毒死蜱；

（2）制备降解毒死蜱的产品；

（3）降解泰乐菌素；

（4）制备降解泰乐菌素的产品。

7. 权利要求1所述的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CW-6或者权利要求2-5任一项所述的菌剂在制备防治土传病害的药物制剂中的应用；

所述土传病害为小麦根腐病或辣椒根腐病。

8. 权利要求1所述的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CW-6或者权利要求2-5任一项所述的菌剂在如下（1）或（2）中的应用：

（1）产氨；

（2）产IAA。