CN1140258A - 检测乙型肝炎病毒抗体的免疫胶体金试剂及方法 - Google Patents
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Abstract
一种检测乙型肝炎病毒抗体的免疫胶体金试剂,在1000ml试剂中含氯金酸0.01~1g,含葡萄球菌A蛋白0.004~0.1g。用本试剂检测乙型肝炎病毒抗体的方法为:将乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分区滴在硝酸纤维或醋酸纤维的微孔滤膜上,干燥后加血清,经渗滤,加本发明试剂,渗滤后加磷酸钾盐或磷酸钠盐或三羟甲基氨基甲烷—盐酸,出现红色斑点者为阳性,无色者为阴性。本试剂及方法具有操作简便、快速、敏感、经济等优点。
Description
本发明属于采用免疫测定法检测肝炎所用的试剂及方法技术领域。
目前在临床上用于检测乙型肝炎病毒表面抗体,核心抗体、e抗体所用的一种检测仪器为γ计数仪,采用放射免疫测定法来检测,该仪器所用的放射性同位素很容易污染环境,不利于操作人员的身体健康,而且这种仪器价格昂贵、操作复杂,不利于广泛推广使用。另一种检测仪器为酶联检测仪,采用酶联免疫吸附试验法来检测,该仪器同样价格昂贵、而且采用活性较好的酶进行标记,实验流程长,操作复杂。上述两种检测仪器及检测方法仅能在科研单位和较大型医院使用,很难得到广泛推广使用。
本发明的目的在于克服上述两种测试仪器及检测方法的缺点,提供一种不需要测试仪器、简单、快速、敏感性高、重复性好、操作简单,能准确快速地检测乙型肝炎病毒表面抗体、核心抗体、e抗体所用的检测试剂以及方法。
为达到上述目的,本发明采用的解决方案是以下述配比的组分为原料制成的检测试剂:
氯金酸 0.01~1g
葡萄球菌A蛋白 0.004~0.1g
蒸馏水 加至1000ml
应用上述试剂检测乙型肝炎病毒抗体的方法按以下次序的几个步骤进行:
将乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分区滴在硝酸纤维或醋酸纤维或醋酸纤维与硝酸纤维混合物的微孔滤膜上,干燥后加血清4~15μl;经渗滤,加本发明检测试剂3~15μl;渗滤后,加磷酸钾盐或磷酸钠盐或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液50~500μl,单项阳性者出现单个红色斑点,多项阳性者出现多个红色斑点,无色者为阴性。
采用本发明试剂及方法可在3至5分钟内同时检测出乙型肝炎病毒表面抗体、核心抗体、e抗体的结果,也可在3至5分钟检测出乙型肝炎表面抗体、核心抗体、e抗体中的任意一项或任意两项的结果,所用的检测样本量比酶联检测仪少10~100倍,而检测结果与酶联检测仪相当。本发明与γ记数仪、与酶联检测仪,以及检测方法相比,具有操作简便、快速、特异敏感、重复性好、经济等优点,可在大小医疗单位广泛推广使用。
发明人给出了本发明第一个实施例(以生产本发明产品1000ml为例)所用的原料及其配比为:
氯金酸
0.5g
葡萄球菌A蛋白 0.05g
蒸馏水 加至1000ml
其制备工艺如下:
1、原材料预处理
对已购买的氯金酸和葡萄球菌A蛋白的质量进行检测,其中的有效成份含量均应符合规定的范围,按配比称取各原料。
蒸馏水中应无杂质,用蒸馏水器将蒸馏水重新蒸馏一次,或用离子交换树脂制成去离子水。
将氯金酸溶解于蒸馏水中,配制成0.05%的氯金酸水溶液,葡萄球菌A蛋白用蒸馏水配制成0.005g/ml的水溶液。
2、氯金酸胶体金溶液的制备
采用柠檬酸三钠还原法制备氯金酸胶体金溶液。取0.01%的氯金酸水溶液100ml,加温至沸腾,加入4ml1%的柠檬酸三钠水溶液,用搅拌器充分搅拌至均匀混合,加温煮沸,制成氯金酸胶体金溶液。
3、成品制作
将已配制好的葡萄球菌A蛋白水溶液倒入已制备的氯金酸胶体金溶液,用搅拌器充分搅拌至均匀混合,倒入低速离心机,经低速离心机旋转分离后,取上清液,再倒入高速离心机,经高速离心机旋转分离后,去除上清液,取沉淀物,加入1%的小牛血清白蛋白1~5g,加蒸馏水至1000ml,制成本发明试剂,经质量检查合格后,放入冰箱保存备用。
发明人给出了本发明第二个实施例(以生产本发明产品1000ml为例)所用的原料及其配比为:
氯金酸 0.015g
葡萄球菌A蛋白 0.005g
蒸馏水 加至1000ml
其制备工艺与第一个实施例完全相同。
发明人给出了本发明第三个实施例(以生产本发明产品1000ml为例)所用的原料及其配比为:
氯金酸 0.8g
葡萄球菌A蛋白 0.09g
蒸馏水 加至1000ml
其制备工艺与第一个实施例完全相同。
发明人给出了采用本发明试剂检测乙型肝炎病毒抗体的方法的一个实施例如下:
将乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分区滴在硝酸纤维素膜上,干燥后加血清8μl,经渗滤,加本发明第一个实施例检测试剂10μl,渗滤后,加磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液200μl,单项阳性者出现单个红色斑点,多项阳性者出现多个红色斑点,无色者为阴性。
发明人采用本发明第一个实施例制备的检测乙型肝炎病毒抗体的免疫胶体金试剂,采用本发明检测乙型肝炎病毒抗体的方法的一个实施例与用酶联检测仪采用酶联免疫吸附试验法对乙型肝炎病毒表面抗体、核心抗体、e抗体进行了对比检测血清标本149份,测试结果如下:
用酶联检测仪采用酶联免疫吸附试验法测得抗乙型肝炎病毒表面抗体阳性5份、抗乙型肝炎病毒核心抗体阳性30份、抗乙型肝炎病毒e抗体阳性11份、抗乙型肝炎病毒核心抗体和e抗体双阳性5份。用本发明检测试剂以及采用本发明检测方法,除抗乙型肝炎病毒表面抗体阳性为6份、抗乙型肝炎病毒e抗体阳性为10份外,其余结果均与酶联检测仪采用酶联免疫吸附试验法测得的结果相符。采用两种检测手段和两种检测方法的总符合率为98.6%。随机抽取20份阳性标本,用本发明检测试剂以及检测方法进行重复试验4次,试验结果完全相符。若以酶联免疫吸附试验法为标准,本发明的检测方法的检测灵敏度为98%、特异度为98.9%。
本发明检测试剂以及检测方法还可用于检测其它的病原微生物特异性免疫球蛋白G(IgG)。
Claims (2)
1.一种检测乙型肝炎病毒抗体的免疫胶体金试剂,其特征在于它是以下述配比的组分为原料制成的检测试剂:
氯金酸 0.01~1g
葡萄球菌A蛋白 0.004~0.1g
蒸馏水 加至1000ml
2.一种应用权利要求1所述的试剂检测乙型肝炎病毒抗体的方法,其特征在于它按以下次序的几个步骤进行:
将乙型肝炎病毒表面抗原、核心抗原、e抗原分区滴在硝酸纤维或醋酸纤维或醋酸纤维与硝酸纤维混合物的微孔滤膜上,干燥后加血清4~15μl;经渗滤,加本发明检测试剂3~15μl;渗滤后,加磷酸钾盐或磷酸钠盐或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液50~500μl,单项阳性者出现单个红色斑点,多项阳性者出现多个红色斑点,无色者为阴性。
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CN101799473B (zh) * | 2010-01-13 | 2014-07-16 | 王信 | Spa-抗体三聚体、含有该三聚体的细胞处理试剂盒及其制备方法和用途 |
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1995
- 1995-07-05 CN CN 95113602 patent/CN1140258A/zh active Pending
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