CN114019157A - 联检免疫层析试纸条和检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种联检免疫层析试纸条和检测试剂盒，该试纸条包括底板和位于底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫，结合垫上设置有能与N种标志物特异性结合的N种标志物抗体，其中，N种标志物抗体属于不同亚型的IgG抗体，层析膜上设置有间隔的N条检测线和N条质控线，不同质控线上包被有有结合不同亚型IgG的抗体；其中，N为大于1的整数。上述联检免疫层析试纸条联检时线性范围较宽，准确性好。

Description

联检免疫层析试纸条和检测试剂盒

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，特别是涉及一种联检免疫层析试纸条和检测试剂盒。

背景技术

免疫层析检测领域，常常需要对同一样品的多个指标进行联合检测。例如，蛋白酶原I(Pepsinogen I，PGI)和蛋白酶原II(Pepsinogen II，PGII)。蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的无活性前体，在胃内转变为具有活性的胃蛋白酶。大部分PG进入胃腔，遇酸后肽链分解活化为胃蛋白酶而发挥其消化蛋白质的作用；小部分PG则透过胃粘膜毛细血管进入血循环。PG有多种同工酶，根据生化和免疫特点可将其分为PGI和PGII两个亚群，两者具有各自的生化和免疫特点。PGI由胃体和胃底腺分泌，PGII除了由胃底腺分泌外，幽门腺和近端十二指肠也可以分泌。血清中的胃蛋白酶原可反映胃粘膜的分泌水平、胃粘膜功能和胃部形态变化，其浓度与慢性胃炎、胃癌、幽门螺杆菌感染等相关。PGI水平下降，表示胃黏膜分泌能力下降或胃黏膜腺体萎缩，PGI升高，则胃酸分泌增多。胃癌是常见的恶性肿瘤病之一，由于PG含量可直接反应胃黏膜的功能。因此，PGI、PGII和PGI/PGII(比值)有助于胃癌的鉴别诊断。

针对这种市场需求，目前已存在多种联检免疫层析试纸条。这类产品主要由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水垫和底板等组成，其中，结合垫中包被有针对不同标志物的标志物抗体，硝酸纤维素膜中设置有一条共用的质控线和各标志物的检测线。然而，目前的联检免疫层析试纸条大多只能作为定性检测。若使用这些联检试剂条进行定量检测，检测结果与单独定量检测相比，准确性较差。

发明内容

基于此，有必要提供一种联检免疫层析试纸条，该联检免疫层析试纸条准确性较好。

此外，还有必要提供一种线性较好、准确性较高的检测试剂盒。

一种联检免疫层析试纸条，试纸条包括底板和位于所述底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述结合垫上设置有能与N种标志物特异性结合的N种标志物抗体，其中，N种所述标志物抗体属于不同亚型的IgG，所述层析膜上设置有间隔的N条检测线和N条质控线，不同质控线上包被有结合不同亚型IgG的抗体；

其中，N为大于1的整数。

经本申请研究发现，传统联检免疫层析试纸条共有质控线，而各标志物抗体在质控线上的信号会容易同时受待测样本中的不同标志物浓度的影响，各标志物抗体在质控线上的信号会相互干扰，样本中的各标志物浓度高时质控线的信号容易因干扰而信号值较低或检测不到，这使得传统联检免疫层析试纸条用于定量检测时，线性较差，特异性较低，灵敏度较低，进而使得准确性较低。而上述联检免疫层析试纸条的不同标志物有各自的质控线，各质控线上包被的抗抗体是仅能与各自标志物的标志物抗体特异性结合的抗体，且各标志物抗体属于不同亚型的IgG抗体，各抗抗体也属于不同亚型的IgG抗体，标志物抗体与对应的抗抗体为同一亚型，这使得各质控线上的信号变化因素单一，不容易受待测样本中标志物浓度的影响，从而使得联检时线性较好，灵敏度较高和特异性较好，进而提高检测的准确性。

在其中一个实施例中，所述标志物抗体偶联有标记物。

在其中一个实施例中，所述标记物为小分子荧光素、荧光蛋白、荧光染料、稀土离子及其螯合剂、半导体纳米微晶粒、胶体金或胶体银。

在其中一个实施例中，不同检测线上包被有不同标志物对应的捕获抗体，所述捕获抗体是能特异性结合其标志物或标志抗体的抗体。

在其中一个实施例中，所述不同亚型的IgG是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

在其中一个实施例中，所述联检免疫层析试纸条用于检测不同的第一标志物和第二标志物，所述结合垫上设置有第一标志物抗体和第二标志物抗体，所述第一标志物抗体和所述第二标志物抗体属于不同亚型的抗体，所述层析膜上设置有第一检测线、第二检测线、第一质控线和第二质控线，所述第一检测线上包被有与所述第一标志物对应的第一捕获抗体，所述第二检测线上包被有与所述第二标志物对应的第二捕获抗体，所述第一质控线上包被有抗所述第一标志物抗体的抗体，所述第二质控线上包被有抗所述第二标志物抗体的抗体。

在其中一个实施例中，所述第一检测线较所述第一质控线更靠近所述样品垫，所述第二检测线较所述第二质控线更靠近所述样品垫。

在其中一个实施例中，所述联检免疫层析试纸条用于检测PGI和PGII，所述第一检测线上包被有用于捕获PGI与PGI标志物抗体所形成的复合物的PGI捕获抗体，所述PGI标志物抗体为鼠IgG1；所述第一质控线上包被有羊抗鼠IgG1，所述第二检测线上包被有用于捕获PGII与PGII标志物抗体形成的复合物的PGII捕获抗体，所述PGII标志物抗体为鼠IgG2a，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG2a。

在其中一个实施例中，所述联检免疫层析试纸条用于检测CK-MB和Myo，所述第一检测线上包被有用于捕获CK-MB与CK-MB标志物抗体所形成的复合物的CK-MB捕获抗体，所述CK-MB标志物抗体为鼠IgG1，所述第一质控线上包被有羊抗鼠IgG1；所述第二检测线上包被有用于捕获Myo与Myo标志物抗体形成的复合物的Myo捕获抗体，所述Myo标志物抗体为鼠IgG2a，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG2a。

一种检测试剂盒，包括上述的联检免疫层析试纸条。

附图说明

图1为一实施例的联检免疫层析试纸条的示意图；

图2为另一实施例的联检免疫层析试纸条的示意图；

图3为实施例1中共用质控线联检免疫层析试纸条检测PGI的结果；

图4为实施例1中共用质控线联检免疫层析试纸条检测PGII的结果；

图5为实施例1中独立质控线联检免疫层析试纸条检测PGI的结果；

图6为实施例1中独立质控线联检免疫层析试纸条检测PGII的结果；

图7为实施例2中共用质控线联检免疫层析试纸条检测CK-MB的结果；

图8为实施例2中共用质控线联检免疫层析试纸条检测Myo的结果；

图9为实施例2中独立质控线联检免疫层析试纸条检测CK-MB的结果；

图10为实施例2中独立质控线联检免疫层析试纸条检测Myo的结果。

附图标记：

10、联检免疫层析试纸条；110、底板；120、样品垫；130、结合垫；140、层析膜；150、吸水垫；141、第一检测线；142、第二检测线；143、第一质控线；144、第二质控线。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本发明公开内容更加透彻全面。

需要说明的是，当元件被表述“固定于”另一个元件，它可以直接在另一个元件上、或者其间可以存在一个或多个居中的元件。当一个元件被表述“连接”另一个元件，它可以是直接连接到另一个元件、或者其间可以存在一个或多个居中的元件。当使用术语“垂直的”、“水平的”、“左”、“右”、“上”、“下”、“内”、“外”、“底部”等指示方位或位置关系时，是为基于附图所示的方位或位置关系，仅为了便于描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本申请的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

请参阅图1，本申请一实施方式提供了一种联检免疫层析试纸条10，该联检免疫层析试纸条10用于检测至少两种不同的标志物。具体地，该联检免疫层析试纸条10包括底板110和位于底板110上的样品垫120、层析膜140和吸水垫150。其中，N种标志物抗体属于不同亚型的IgG抗体，层析膜140上设置有间隔的N条检测线和N条质控线，不同质控线上包被有不同且能与其中一种标志物抗体特异性结合的抗抗体。更具体地，样品垫120、层析膜140和吸水垫150从底板110的一端至另一端依次连接，层析膜140上设置有与不同标志物对应的且相互间隔的质控线和检测线，各标志物对应的检测线较其质控线更靠近样品垫120，各检测线上包被有与标志物对应的捕获抗体，各质控线上包被有仅能与各自标志物的标志物抗体特异性结合的抗体(即抗抗体)，各抗抗体为不同亚型的IgG抗体，标志物抗体与其对应的抗抗体为同一亚型的IgG抗体。

上述联检免疫层析试纸条10通过双抗体夹心法的原理实现检测。具体地，在使用时，将含有不同标志物的待检测样本和与不同标志物对应的标志物抗体混合后加到样品垫120上，标志物与对应的标志物抗体特异性结合形成的标志物-标志物抗体复合物，在毛细管力的作用下，该复合物向吸水垫150运动。在各自的检测线上，标志物-标志物抗体复合物与对应的捕获抗体发生特异性结合形成标志物抗体-标志物-捕获抗体复合物而被固定在检测线上，并产生信号。当各标志物的游离标志物抗体运动到各自的质控线上时，各自的游离标志物抗体与各自质控线上包被的仅能与各自抗抗体特异性结合而被固定在各自的质控线上并产生信号。并且，各检测线上的信号强度与对应的质控线上的信号强度呈反比。因此，通过各自质控线与检测线的结合可以对不同标志物进行定量的检测。

经本申请研究发现，传统联检免疫层析试纸条共有质控线，而各标志物抗体在质控线上的信号会同时受待测样本中的不同标志物浓度的影响，各标志物抗体在质控线上的信号会相互干扰，样本中的标志物浓度高时质控线的信号容易因干扰而信号值较低或检测不到，这使得传统联检免疫层析试纸条用于定量检测时，线性较差，特异性较低，灵敏度较低，准确性较低。而上述联检免疫层析试纸条10的不同标志物有各自的质控线，各质控线上包被的抗抗体是仅能与各自标志物的标志物抗体特异性结合的抗体，且各抗抗体为同一类型抗体的不同亚型，标志物抗体与对应的抗抗体为同一亚型，这使得各质控线上的信号变化因素单一，不容易受待测样本中标志物浓度的影响，从而使得联检时线性较好，灵敏度和特异性较高，从而提高联检时的准确性。

可选地，各标志物分别独立地选自PGI、PGII、C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A、PGII、白细胞介素6、尿微量白蛋白、β2-微球蛋白、视黄醇结合蛋白、胱抑素C、人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、D-二聚体、肌钙蛋白I、肌钙蛋白T、N末端脑钠肽、CK-MB、脑尿钠肽、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌红蛋白(Myo)中的一种。可以理解的是，标志物不限于上述。

抗体以一个或者多个“Y”字形单体存在，每个“Y”字形单体由4条多肽链组成，包含两条相同的重链和两条相同的轻链。通常，抗体的种类由重链决定。例如哺乳动物Ig的重链一共有五类，分别用希腊字母α、δ、ε、γ和μ来命名，相对应组成的抗体就称为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。其中，人的γ可以进一步细分为γ1、γ2、γ3、γ4等亚类，分别对应IgG1，IgG2，IgG3和IgG4四个亚型；小鼠γ可以进一步细分为γ1、γ2a、γ2b和γ3四个亚类，分别对应IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3四个亚型。在一些实施例中，各标志物抗体属于同一类型抗体的不同亚型。具体地，各标志物抗体分别独立地为鼠IgG1、鼠IgG2a、鼠IgG2b或鼠IgG3；各抗抗体分别独立地为羊抗鼠IgG1、羊抗鼠IgG2a、羊抗鼠IgG2b或羊抗鼠IgG3。IgG2a和IgG2b都可归纳属于IgG2亚型抗体。

具体地，底板110为其他部件提供支撑；样品垫120用于加样；吸水垫150用于使得样品在联检免疫层析试纸条10上能自样品垫120、经层析膜140上的检测线向质控线运动。可选地，层析膜140为硝酸纤维素、醋酸纤维素膜、尼龙膜、PVDF膜或Fusion 5滤纸。可选地，吸水垫150为吸水垫。可以理解的是，层析膜140不限于上述。

在一些实施例中，样品垫120与层析膜140部分重叠，层析膜140与吸水垫150部分重叠。在一个可选地具体示例中，样品垫120的与层析膜140重叠的部分位于层析膜140远离底板110的一侧，层析膜140的与吸水垫150重叠的部分位于吸水垫150靠近底板110的一侧。

请参阅图2，在一些实施例中，联检免疫层析试纸条10还包括结合垫130。具体地，结合垫130位于底板110上，结合垫130位于样品垫120和层析膜140之间且与样品垫120和层析膜140相接，结合垫130上包被有各标志物对应的标志物抗体。

在其中一个实施例中，标志物抗体偶联有标记物。可选地，标记物为小分子荧光素、荧光蛋白、荧光染料、稀土离子及其螯合剂、半导体纳米微晶粒、胶体金或胶体银。具体地，各标志物抗体均标记有信号物质。可选地，各信号物质分别独立地选自发色团、地高辛标记探针、电子致密物质、胶体金及产生可检测信号的酶中的至少一种。可选地，发色团选自荧光基团、量子点、荧光微球、发光化合物和染料中的至少一种。在一些实施例中，发色团为发光化合物。例如，吖啶酯及其衍生物、金刚烷、鲁米诺、异鲁米诺等。可选地，吖啶酯及其衍生物选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺及吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的至少一种。可选地，电子致密物质为放射性分子。例如³²P，³⁵S或¹²⁵I。可选地，产生可检测信号的酶选自辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶中的一种。可以理解的是，信号物质不限于上述，还可以是其他能够被肉眼直接观察到或借助仪器检测到的具有颜色的物质。

可选地，结合垫130与样品垫120部分重叠，结合垫130与层析膜140部分重叠。在一个可选地具体示例中，样品垫120的与结合垫130重叠的部分位于结合垫130远离底板110的一侧，结合垫130的与层析膜140重叠的部分位于层析膜140远离底板110的一侧。可以理解的是，在上述联检免疫层析试纸条10包括结合垫130时，待测样本在加到样品垫120之前，不必先与各标志物的标志物抗体混合。此时，待测标志物是在结合垫130上与结合垫130上包被的各标志物对应的标志物抗体特异性结合。

请参阅图2，在一些实施例中，上述联检免疫层析试纸条10用于检测不同的第一标志物和第二标志物。对应地，层析膜140上设置有相互间隔的第一检测线141、第二检测线142、第一质控线143和第二质控线144，第一检测线141较第一质控线143更靠近样品垫120，第二检测线142较第二质控线144更靠近样品垫120，第一检测线141上包被有与第一标志物对应的第一捕获抗体，第二检测线142上包被有与第二标志物对应的第二捕获抗体，第一质控线143上包被有抗所述第一标志物抗体的抗体，第二质控线144上包被有抗所述第二标志物抗体的抗体。

可选地，第一检测线141、第一质控线143、第二检测线142和第二质控线144在沿层析膜140的靠近样品垫120的一端向层析膜140的靠近吸水垫150的一端的方向上依次间隔设置。

可选地，第一检测线141、第二检测线142、第一质控线143和第二质控线144在沿层析膜140的靠近样品垫120的一端向层析膜140的靠近吸水垫150的一端的方向上依次间隔设置。

可选地，上述用于检测两种不同标志物的联检免疫层析试纸条10还包括结合垫130。具体地，结合垫130上包被有能与第一标志物特异性结合的第一标志物抗体和能与第二标志物特异性结合的第二标志物抗体。当然，此时结合垫130与其他部件的位置如上文所述，第一标志物抗体和第二标志物抗体所标记的信号物质也如上文所述。

在一些实施例中，上述联检免疫层析试纸条10用于检测PGI和PGII。具体地，第一检测线141上包被有用于捕获PGI与PGI标志物抗体所形成的复合物的PGI捕获抗体，第一质控线143上包被有仅能与PGI标志物抗体特异性结合的PGI抗抗体；第二检测线142上包被有用于捕获PGII与PGII标志物抗体形成的复合物的PGII捕获抗体，第二质控线144上包被有仅能与PGII标志物抗体特异性结合的PGII抗抗体；PGI抗抗体与PGII抗抗体为同一类型抗体的不同亚型，PGI标志物抗体与PGI抗抗体为同一亚型的抗体，PGII标志物抗体与PGII抗抗体为同一亚型的抗体。

可选地，PGI标志物抗体和PGII标志物抗体分别独立地为鼠IgG1、鼠IgG2a、鼠IgG2b或鼠IgG3。PGI抗抗体和PGII抗抗体分别独立地为羊抗鼠IgG1、羊抗鼠IgG2a、羊抗鼠IgG2b或羊抗鼠IgG3。在一个具体的示例中，PGI标志物抗体为鼠IgG1，第一质控线143上包被有羊抗鼠IgG1(即PGI抗抗体为羊抗鼠IgG₁)；PGII标志物抗体为鼠IgG2a，第二质控线144上包被有羊抗鼠IgG2a(即PGII抗抗体为羊抗鼠IgG2a)。

在其中一个实施例中，上述用于检测PGI和PGII的联检免疫层析试纸条10还包括结合垫130，结合垫130上包被有PGI标志物抗体和PGII标志物抗体。当然，此时结合垫130与其他部件的位置如上文所述，PGI标志物抗体和PGII标志物抗体所标记的信号物质也如上文所述。

在另一些实施例中，上述联检免疫层析试纸条10用于检测CK-MB和Myo。第一检测线141上包被有用于捕获CK-MB与CK-MB标志物抗体所形成的复合物的CK-MB捕获抗体，第一质控线143上包被有仅能与CK-MB标志物抗体特异性结合的CK-MB抗抗体；第二检测线142上包被有用于捕获Myo与Myo标志物抗体形成的复合物的Myo捕获抗体，第二质控线144上包被有仅能与Myo标志物抗体特异性结合的Myo抗抗体；CK-MB抗抗体与Myo抗抗体为同一类型抗体的不同亚型，CK-MB标志物抗体和CK-MB抗抗体为同一亚型的抗体，Myo标志物抗体和Myo抗抗体为同一亚型的抗体。

可选地，CK-MB标志物抗体和CK-MB标志物抗体分别独立地为鼠IgG1、鼠IgG2a、鼠IgG2b或鼠IgG3。CK-MB抗抗体和Myo抗抗体分别独立地为羊抗鼠IgG1、羊抗鼠IgG2a、羊抗鼠IgG2b或羊抗鼠IgG3。在一个具体的示例中，CK-MB标志物抗体为鼠IgG1，第一质控线143上包被有羊抗鼠IgG1(即CK-MB抗抗体为羊抗鼠IgG₁)；Myo标志物抗体为鼠IgG2a，第二质控线144上包被有羊抗鼠IgG2a(即Myo抗抗体为羊抗鼠IgG2a)。

在其中一个实施例中，上述用于检测CK-MB和Myo的联检免疫层析试纸条还包括结合垫130，结合垫130上包被有CK-MB标志物抗体和Myo标志物抗体。当然，此时结合垫130与其他部件的位置如上文所述，CK-MB标志物抗体和Myo标志物抗体所标记的信号物质也如上文所述。

此外，本申请一实施方式还提供了一种检测试剂盒，该检测试剂盒包括上述任一实施例的联检免疫层析试纸条10。

具体地，上述检测试剂盒包括壳体和密封件，联检免疫层析试纸条10固定于壳体内，壳体包括盒体和盖体，盖体盖合于盒体上而形成容纳联检免疫层析试纸条10的容纳腔，密封件位于盖体和盒体之间，密封件用于密封盖体与盒体的连接处的缝隙。试纸条被固定于盒体内且密封件密封了盒体与盖体连接处的缝隙，这使得联检免疫层析试纸条10不容易在壳体内晃动，且试纸条上的试剂不容易挥发而影响上述检测试剂盒的检测稳定性。

上述检测试剂盒包括上述联检免疫层析试纸条10，具有上述联检免疫层析试纸条10相应的优点。

此外，本申请一实施方式还提供了一种同时检测不同标志物的方法，该方法包括以下步骤：使用上述联检免疫层析试纸条10对待测样本进行定性或定量检测。

在一些实施例中，上述方法为定性检测方法。此时，上述方法包括以下步骤：将待测样本加到上述联检免疫层析试纸条10的样品垫120上后，观察检测线和质控线；及根据观察结果对待测样本中的标志物进行定性。在检测线和对应的质控线上均有信号时，判定待测样本中存在与质控线上相同的标志物；在检测线上无信号且对应的质控线上有信号时，判定待测样本中没有待测标志物；在检测线上有信号但对应的质控线上无信号时，判定检测无效。

在一些实施例中，上述方法为定量检测方法。此时，上述方法包括以下步骤：将待测样本加到上述联检免疫层析试纸条10的样品垫120上后，检测检测线和质控线上的信号强度；及根据检测结果对待测样本中的标志物进行定量。各标志物对应的检测线上的信号强度与其质控线上的信号强度呈反比。通过检测不同浓度下的不同标志物的信号强度，制备各标志物浓度与其信号强度之间的关系曲线，从而根据待测样本中不同标志物的信号强度和对应的关系曲线，计算待测样本中各标志物的浓度。在一个具体的示例中，根据检测结果对待测样本中的标志物进行定量的步骤包括：根据检测结果和标准曲线，对待测样本中的标志物进行定量，其中标准曲线为标志物浓度和检测线的信号强度与对应的质控线信号强度的比值之间的关系曲线。

在其中一个实施例中，标志物为两种，信号强度为荧光强度。

上述同时检测不同标志物的方法采用上述联检免疫层析试纸条10检测待测样本，线性范围较宽，线性更好，特异性好，灵敏度更高，检测结果更加准确。

具体实施例

以下结合具体实施例进行详细说明。以下实施例如未特殊说明，则不包括除不可避免的杂质外的其他组分。实施例中采用试剂和仪器如非特别说明，均为本领域常规选择。实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者生产厂家推荐的方法实现。

实施例1

采用独立质控线联检免疫层析试纸条和共用质控线联检免疫层析试纸条分别对30例临床样本进行检测，以评价不同试纸条的性能。其中：

独立质控线联检免疫层析试纸条结构如图2所示，由底板和位于底板上的样品垫、结合垫和NC膜(硝酸纤维素膜)和吸水垫组成。结合垫上包被有能与PGII特异性结合的PGII荧光标志物抗体(鼠IgG2a，菲鹏生物)和能与PGI特异性结合的PGI荧光标志物抗体(鼠IgG1，菲鹏生物)。NC膜上包被四条带，从样品垫端至吸水垫端分别是T1带、C1带、T2带和C2带；T1带上包被有PGI的捕获抗体(购自菲鹏生物)，能捕捉来自结合垫上的PGI标志物-PGI荧光标志物抗体复合物，并形成“PGI抗体-PGI标志物-PGI荧光标志物抗体”复合物；C1带上包被有PGI(羊抗鼠IgG1，购自菲鹏生物)，可与游离的PGI荧光标志物抗体结合；T2带上包被有PGII捕获抗体(购自菲鹏生物)，能捕捉来自结合垫上的PGII标志物-PGII荧光标志物抗体复合物，形成“PGII抗体-PGII标志物-PGII荧光标志物抗体”复合物；C2带上包被有PGII(羊抗鼠IgG2a，购自菲鹏生物)，可与游离的PGII荧光标志物抗体结合。即独立质控线联检免疫层析试纸条上存在单独的PGI和PGII检测系统，T1带和C1带对应PGI检测，T2带和C2带对应PGII检测。

在使用时，将待检测样本加入样品垫上，在侧向毛细管作用下，待检测样本先经过结合垫时PGI和PGII标志物分别与结合垫上的PGI荧光标志物抗体、PGII荧光标志物抗体发生特异的免疫结合，再经过T1带，PGI标志物-PGI荧光标志物抗体复合物与PGI捕获抗体发生特异的免疫结合，形成“PGI抗体-PGI标志物-PGI荧光标志物抗体”复合物，T1带产生荧光信号。当经过T1的待测样本流经C1带时，游离的PGI荧光标志物抗体与C1上包被的PGI标志物发生特异的免疫结合，从而被固定在C1带中产生荧光信号。当经过C1的待测样本流经T2带时，PGII标志物-PGII荧光标志物抗体复合物与PGII捕获抗体发生特异的免疫结合，形成“PGII抗体-PGII标志物-PGII荧光标志物抗体”复合物，T2带产生荧光信号。当经过T2的样本流经C2带时，游离的PGII荧光标志物抗体与C2上包被的PGII标志物发生特异的免疫结合，从而被固定在C2带中产生荧光信号。然后，采用荧光免疫分析仪检测出的四条带的荧光强度以峰面积体现，并通过仪器自身的计算软件计算T1/C1值、T2/C2(T1峰面积/C1峰面积、T2峰面积/C2峰面积)，拟合至已设定的标准曲线，荧光免疫分析仪自动换算出相应待检样本中PGI、PGII的浓度值。当然，T1带、T2带分别与C1带、C2带的荧光强度成反比，从而可以矫正样本个体差异，计算T/C可以增加不同浓度样本间的信号差值。

共用质控线试纸条的结构大致与独立质控线联检免疫层析试纸条相同，其不同在于，质控线为一条，即，在NC膜上包被三条带，从样品垫端至吸水垫端分别是T1带、T2带和C带，C带上包被的是1mg/mL的羊抗鼠IgG。荧光免疫分析仪检测出的三条带的荧光强度以峰面积体现，并通过仪器自身的计算软件计算T1/C值(T1峰面积/C峰面积)、T2/C值(T2峰面积/C峰面积)，拟合至已设定的标准曲线，荧光免疫分析仪自动换算出相应待检样本中PGI、PGII的浓度值。

检测结果如表1所示。

表1

对表1的数据进行分析，结果如图3～图6所示。其中，图3为共用质控线联检免疫层析试纸条检测PGI的结果；图4为共用质控线联检免疫层析试纸条检测PGII的结果；图5为独立质控线联检免疫层析试纸条检测PGI的结果；图6为独立质控线联检免疫层析试纸条检测PGII的结果。

将上述30例临床样本进行灵敏度、特异性和相关系数分析，结果如表2所示。

表2

由上述可知，按照本申请的原理制备的两条独立质控线的联检免疫层析试纸条在检测PGI和PGII时，灵敏度、特异性和相关系数都明显优于共用质控线的联检免疫层析试纸条，准确性高。

实施例2

采用独立质控线联检免疫层析试纸条和共用质控线联检免疫层析试纸条分别对30例临床样本进行检测，以评价不同试纸条的性能。其中：

本实施例的独立质控线联检免疫层析试纸条与实施例1的独立质控线联检免疫层析试纸条大致相同，其不同在于：

本实施例的独立质控线联检免疫层析试纸条的样品垫上包被的是CK-MB荧光标志物抗体(鼠IgG1，购自菲鹏生物)和Myo荧光标志物抗体(鼠IgG2a，购自菲鹏生物)，而实施例1独立质控线联检免疫层析试纸条的结合垫上包被的是PGI荧光标志物抗体、PGII荧光标志物抗体；本实施例的T1带上包被的是CK-MB捕获抗体，能捕捉来自结合垫上的CK-MB-CK-MB荧光标志物抗体复合物，并形成CK-MB抗体-CK-MB标志物-CK-MB荧光标志物抗体复合物，而实施例1的T1带上包被的是PGI捕获抗体；本实施例的C1包被的是CK-MB抗抗体(羊抗鼠IgG1)，而实施例1的C1带上包被的是PGI抗抗体；本实施例的T2带上包被的是Myo捕获抗体，能捕捉来自结合垫上的Myo-Myo荧光标志物抗体复合物，并形成Myo抗体-Myo标志物-Myo荧光标志物抗体复合物，而实施例1的T2带上包被的是PGII捕获抗体；本实施例1的C2包被的是Myo抗抗体(羊抗鼠IgG2a)，而实施例1的C2带上包被的是PGII抗抗体。

本实施例的共用质控线试纸条的结构大致与本实施例的独立质控线联检免疫层析试纸条相同，其不同在于，质控线为一条，即，在NC膜上包被三条带，从样品垫端至吸水垫端分别是T1带、T2带和C带，C带上包被的是浓度为1mg/mL的羊抗鼠IgG。

检测结果如表3所示。

表3

对表3的数据进行分析，结果如图7～图10所示。其中，图7为共用质控线联检免疫层析试纸条检测CK-MB的结果；图8为共用质控线联检免疫层析试纸条检测Myo的结果；图9为独立质控线联检免疫层析试纸条检测CK-MB的结果；图10为独立质控线联检免疫层析试纸条检测Myo的结果。

对上述取30例临床样本进行灵敏度、特异性和相关系数分析，结果如表4所示。

表4

按照本申请的原理制备的两条独立质控线的联检免疫层析试纸条在检测CK-MB和Myo时，灵敏度、特异性和相关系数都明显优于共用质控线的联检免疫层析试纸条，准确性高。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解的是，在本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种联检免疫层析试纸条，其特征在于，试纸条包括底板和位于所述底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸水垫，所述结合垫上设置有能与N种标志物特异性结合的N种标志物抗体，其中，N种所述标志物抗体属于不同亚型的IgG，所述层析膜上设置有间隔的N条检测线和N条质控线，不同质控线上包被有结合不同亚型IgG的抗体；

其中，N为大于1的整数。

2.根据权利要求1所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述不同亚型的IgG是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

3.根据权利要求1所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述标志物抗体偶联有标记物。

4.根据权利要求3所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述标记物为小分子荧光素、荧光蛋白、荧光染料、稀土离子及其螯合剂、半导体纳米微晶粒、胶体金或胶体银。

5.根据权利要求1所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，不同检测线上包被有不同标志物对应的捕获抗体，所述捕获抗体是能特异性结合其标志物或标志抗体的抗体。

6.根据权利要求1～5任一项所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述联检免疫层析试纸条用于检测不同的第一标志物和第二标志物，所述结合垫上设置有第一标志物抗体和第二标志物抗体，所述第一标志物抗体和所述第二标志物抗体属于不同亚型的抗体，所述层析膜上设置有第一检测线、第二检测线、第一质控线和第二质控线，所述第一检测线上包被有与所述第一标志物对应的第一捕获抗体，所述第二检测线上包被有与所述第二标志物对应的第二捕获抗体，所述第一质控线上包被有抗所述第一标志物抗体的抗体，所述第二质控线上包被有抗所述第二标志物抗体的抗体。

7.根据权利要求6所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述第一检测线较所述第一质控线更靠近所述样品垫，所述第二检测线较所述第二质控线更靠近所述样品垫。

8.根据权利要求6所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述联检免疫层析试纸条用于检测PGI和PGII，所述第一检测线上包被有用于捕获PGI与PGI标志物抗体所形成的复合物的PGI捕获抗体，所述PGI标志物抗体为鼠IgG1；所述第一质控线上包被有羊抗鼠IgG1，所述第二检测线上包被有用于捕获PGII与PGII标志物抗体形成的复合物的PGII捕获抗体，所述PGII标志物抗体为鼠IgG2a，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG2a。

9.根据权利要求6所述的联检免疫层析试纸条，其特征在于，所述联检免疫层析试纸条用于检测CK-MB和Myo，所述第一检测线上包被有用于捕获CK-MB与CK-MB标志物抗体所形成的复合物的CK-MB捕获抗体，所述CK-MB标志物抗体为鼠IgG1，所述第一质控线上包被有羊抗鼠IgG1；所述第二检测线上包被有用于捕获Myo与Myo标志物抗体形成的复合物的Myo捕获抗体，所述Myo标志物抗体为鼠IgG2a，第二质控线上包被有羊抗鼠IgG2a。

10.一种检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～9任一项所述的联检免疫层析试纸条。

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