CN114015742B - 一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置及其应用，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置包括：检测模块：检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；分析模块：根据统计结果，进行判断。本发明选择CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比作为衡量标准，预测样本对免疫检查点阻断疗法的响应情况，结果准确，适用性强。

Description

一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置及其应用
技术领域
本发明属于免疫治疗技术领域，尤其涉及一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置及其应用。
背景技术
免疫检查点阻断疗法显著改善了癌症的治疗效果，但是这一疗法只对一部分肿瘤患者有作用，因此需要预测癌症病人对该治疗的响应效果。一个常用的检测指标是肿瘤突变负荷TMB（Yarchoan等，2017，NEJM）。TMB越高，表明一个肿瘤的肿瘤抗原可能越多，因此激活的肿瘤特异T细胞可能越多。所以可以通过测序手段来检测TMB，TMB高的肿瘤患者接受免疫治疗后有疗效的可能性也越高。
除此之外，还有类似的检测指标，例如肿瘤中PD-L1的表达情况（Martin等，2016，NEJM）。临床医生通过检测肿瘤穿刺样本中PD-L1的蛋白丰度，来判断癌症病人是否适合接受免疫治疗。癌细胞和其他类型细胞表面的PD-L1配体会和肿瘤特异T细胞表面的PD-1抗体结合，抑制T细胞的功能。因此PD-L1蛋白丰度越高，肿瘤患者接受免疫检查点阻断（例如通过PD-1抗体或PD-L1抗体）有疗效的可能性也越高。
中国专利CN103384827A－“用于预测癌症免疫治疗效果的生物标记”公开的技术方案中提出肿瘤样本中标志物组合A（载脂蛋白A1、CCL17、嗜酸性粒细胞、单核细胞、CD95、乳酸脱氢酶、苏氨酸、IgE以及MMP-3）中的一个或多个指标和/或标志物组合B（CXCL13、中性粒细胞、IL-6和短链酰基肉毒碱）中的一个或多个指标可以预测癌症免疫治疗的效果。类似的，中国专利CN111257563A及其国际专利WO2021/147643A1－“CXCL13检测剂在制备预测免疫治疗效果的试剂盒中的用途”公开的技术方案中提出肿瘤样本中CXCL13单个基因的表达情况可以作为癌症免疫治疗效果的生物标志物。但是CXCL13单个基因的表达情况对很多癌症病人治疗的预测效果不好。
对于肿瘤免疫治疗效果的预测，虽然肿瘤的TMB指标和PD-L1的蛋白丰度具有一定的预测作用，但是在很多时候预测效果并不好（Braun等，2020，Nat. Med.）。TMB是肿瘤特异T细胞丰度的一个间接反映，TMB高，但肿瘤抗原并不一定高，激活的肿瘤特异T细胞也不一定多。类似的，PD-L1的蛋白丰度高，肿瘤中肿瘤特异T细胞并不一定多。肿瘤免疫疗法增强了肿瘤特异T细胞的功能，最终发挥癌细胞杀伤作用的是肿瘤特异T细胞。由于间接性，TMB和PD-L1的蛋白丰度这些预测指标对很多癌症病人治疗的预测效果并不理想。
因此，如何提供一种能够预测肿瘤患者对免疫检查点阻断疗法是否响应的产品及方法，已成为亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置及其应用，通过计算样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比，预测样本对免疫检查点阻断疗法是否可以有效响应，预测的准确性好，适用性强，为相关的治疗提供了依据。
为达此目的，本发明采用如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置包括：
检测模块：检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
分析模块：根据统计结果，进行判断。
本发明中，通过检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比，可以作为预测样本是否能够对免疫检查点阻断疗法响应的指标，为相关的免疫治疗提供了理论依据，相关性好，准确度高，可检测的样本类型丰富，适用性强，具有实际应用的价值。
本发明中，所述CD3包括CD3D、CD3E或CD3G中的任意一种或至少两种的组合；所述CD8包括CD8A或CD8B。
优选地，所述检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞的方法包括RNA染色技术和/或蛋白染色技术。
优选地，所述RNA染色技术包括RNAScope。
优选地，所述蛋白染色技术包括免疫荧光、多色免疫组化或CODEX中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
本发明中，以CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比为0.982%作为阈值，占比大于或等于0.982%，即认为该样本对免疫检查点阻断疗法有响应，可采用相关的治疗方法；占比小于0.982%，即认为该样本对免疫检查点阻断疗法无响应，不适合采用这一治疗方法；
本申请中，以CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比为0.864%作为阈值，占比大于或等于0.864%，即认为该样本对免疫检查点阻断疗法有响应，可采用相关的治疗方法；占比小于0.864%，即认为该样本对免疫检查点阻断疗法无响应，不适合采用这一治疗方法。
本发明中，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置可以预测包括乳腺癌、食管癌、肝癌、肺鳞癌、肺腺癌、黑色素瘤、MSI结直肠癌、MSS结直肠癌，鼻咽癌，卵巢癌，胰腺癌，肾癌、子宫内膜癌、非小细胞肺癌、基底细胞癌和鳞状细胞癌等在内的多种肿瘤类型，适用性极强。
作为优选技术方案，本发明所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，包括：
检测模块：通过RNA染色技术和/或蛋白染色技术检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
分析模块：根据统计结果，进行判断；
所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
第二方面，本发明提供了一种以非疾病诊断和/或治疗为目的的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的方法，所述方法包括：
检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
根据统计结果，进行判断。
优选地，所述检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞的方法包括RNA染色技术和/或蛋白染色技术。
优选地，所述RNA染色技术包括RNAScope。
优选地，所述蛋白染色技术包括免疫荧光、多色免疫组化或CODEX中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
作为优选技术方案，本发明所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的方法，包括以下步骤：
通过RNA染色技术和/或蛋白染色技术检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
根据统计结果，进行判断；
所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
第三方面，本发明提供一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的标志物，所述标记物为CD3 T细胞中CD3和CXCL13双阳性细胞的占比和/或CD8 T细胞中CD8和CXCL13双阳性细胞的占比。
第四方面，本发明提供第一方面所述的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置、第二方面所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的方法或第三方面所述的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的标志物中的任意一种或至少两种的组合在制备预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的产品中的应用。
第五方面，本发明提供一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的产品，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的产品通过检测并统计样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比，进而判断样本对免疫检查点阻断疗法的响应情况。
优选地，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的产品包括RNA染色试剂和/或蛋白染色试剂。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明选择CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比作为衡量标准，预测样本对免疫检查点阻断疗法的响应情况，为相关的治疗及用药提供了理论依据；对于多种肿瘤类型均可进行有效预测，适用性强；操作简便，预测结果准确，相关性好，AUC值大于0.85，预测准确率在80.1%以上，具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例1中CXCL13单个基因的表达情况与免疫治疗的响应率的相关性的结果图片；
图2为本发明实施例2中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比与免疫治疗的响应率的相关性的结果图片；
图3A为本发明实施例3中对治疗有响应和无响应的病人样本中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比以及CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比的统计图片；
图3B为本发明实施例3中根据CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比以及CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比预测样本对免疫治疗的响应情况的准确性的结果图片；
图4为本发明实施例5中RNAScope染色数据中CD3和CXCL13双阳性细胞或CD8和CXCL13双阳性细胞的密度和单细胞测序数据中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比的相关性结果图片；
图5为本发明实施例6中通过CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比预测免疫治疗效果的结果图片。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
材料与方法：
RNAscope®预处理试剂盒、RNAscope®Z型探针和RNAscope®检测试剂盒购自Advanced Cell Diagnostics公司；
抗原修复液和染料工作液购自佰诺全景公司；
CXCL13抗体购自Abcam公司；
CD8A抗体和CD3D抗体购自Cell Signaling Technology公司；
实验样本来自中国人民解放军总医院。
实施例1
本实施例验证CXCL13单个基因的表达情况与免疫治疗的响应率的相关性。
对来自TCGA数据库中18个癌症类型的基因表达数据进行分析，结果如图1所示。由图可以看出，癌症样本中CXCL13的基因表达情况（横轴）与该癌症类型对于免疫治疗的响应率（纵轴）的相关性很差。P值为0.14，表示在泛癌水平上CXCL13的基因表达情况与免疫治疗的响应率没有显著的相关性，说明了CXCL13单个基因的表达情况是一个较差的预测指标。
实施例2
本实施例验证CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比与免疫治疗的响应率的相关性。
对来自13种癌症类型（包括乳腺癌、食管癌、肝癌、肺鳞癌、肺腺癌、黑色素瘤、MSI结直肠癌、MSS结直肠癌、鼻咽癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌和子宫内膜癌）的单细胞转录组数据集进行分析，每种癌症类型包含多个病人的肿瘤样本。计算每种癌症类型中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比在多个肿瘤样本的中位值，并与该癌症类型已报导的免疫检查点阻断疗法的响应率进行对应，结果如图2所示。
由图可以看出，上述癌症类型中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比与该癌症类型对免疫检查点阻断疗法的响应率显著相关。
实施例3
本实施例以CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比为依据，预测样本对免疫治疗的响应情况，并对预测的准确性进行检验。
收集来自5个癌症的9个免疫检查点阻断疗法的单细胞转录组数据集，包括非小细胞肺癌（NSCLC）、乳腺癌（Breast cancer）、基底细胞癌（BCC）、鳞状细胞癌（SCC）和肾细胞癌（Renal cell carcinoma），这些数据包含来自治疗前后的103个病人的229个样本。将来自多个癌症种类的数据合并在一起，发现对治疗有响应病人的治疗前的肿瘤样本中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比以及CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比显著比无响应病人高（如图3A所示）。
通过绘制ROC曲线和计算AUC值来评估预测的准确性：AUC≤0.5，表示没有预测效果；0.5＜AUC≤0.7，表明有预测效果，但预测效果较低；0.7＜AUC≤0.85，表明预测效果良好；0.85＜AUC＜1，表明预测效果很好；AUC=1，表明可以完美预测。结果显示CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比的预测效果对应的AUC值高达0.85，CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比的预测效果对应的AUC值高达0.87（如图3B所示）。传统的TMB方法对治疗效果的预测的AUC值为0.5~0.7（Litchfield et al., Cell, 2021），上述结果表明本申请采用CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比进行预测，效果显著优于TMB，预测准确性很好。
根据分析结果，将CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比的阈值确定为0.847%，即大于或等于该阈值认为对免疫治疗有响应，小于该阈值认为对免疫治疗没有响应，结果显示81.6%以上的患者对治疗的响应情况可以被准确预测；将CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比的阈值确定为0.982%，即大于或等于该阈值认为对免疫治疗有响应，小于该阈值认为对免疫治疗没有响应，结果显示80.2%以上的患者对治疗的响应情况可以被准确预测。
实施例4
本实施例提供一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，包括：
检测模块：通过RNA染色技术和/或蛋白染色技术检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
分析模块：根据统计结果，进行判断；
所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
实施例5
本实施例验证RNAScope染色数据中CD3和CXCL13双阳性细胞或CD8和CXCL13双阳性细胞的密度和单细胞测序数据中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比的相关性。
对来自乳腺癌和肺癌的10例样本分别进行单细胞转录组测序和RNAScope染色，其中RNAScope染色包括以下步骤：
1. 透化：通过RNAscope®预处理试剂盒处理载玻片上固定好的组织，暴露目标RNA；
2. 探针杂交：使用RNAscope®Z型探针（RNAscope LS 2.5 Probe- Hs-CXCL13和RNAscope LS 2.5 Probe-Hs-CD8A，或RNAscope LS 2.5 Probe-Hs-CXCL13和RNAscope LS2.5 Probe-Hs-CD3E-C4）与目标RNA杂交；
3. 信号放大：使用RNAscope®检测试剂盒并按照说明书逐级信号放大；
4. 信号可视化：在普通光学显微镜或者多光谱荧光成像系统下观察，每一个目标RNA分子以一个点状信号的形式呈现；
5. 量化分析：显微镜下直接计数或者使用图像分析软件对每一个细胞中的RNA单分子信号进行定量分析，之后计算CD3和CXCL13双阳性细胞或CD8和CXCL13双阳性细胞的密度。
结果如图4所示。由图可以看出RNAScope染色数据中CD3E和CXCL13双阳性细胞的密度和单细胞测序数据中这群细胞的占比显著相关，同样的，在RNAScope染色数据中CD8A和CXCL13双阳性细胞的密度和单细胞测序数据中的占比也显著相关。
上述结果表明通过RNA染色鉴定CD3和CXCL13双阳性细胞或CD8和CXCL13双阳性细胞的密度与单细胞转录组测序得到了类似的效果，可以很好地预测癌症患者对免疫检查点阻断治疗的响应情况。
实施例6
本实施例使用实施例4中的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，通过多色免疫组化预测样本对免疫检查点阻断疗法的响应情况。
预测样本对免疫检查点阻断疗法治疗效果的方法包括以下步骤：
（1）通过多色免疫组化检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
其中多色免疫组化检测包括以下步骤：
1. 将石蜡切片放入60℃烤箱中1.5 h；
2. 新鲜二甲苯浸片10 min，重复3次；
3. 梯度乙醇浸片：100%乙醇浸泡5 min、95%乙醇浸泡5 min、70%乙醇浸泡2 min；
4. 灭菌水洗片1 min，重复3次；
5. 10%中性福尔马林浸片10 min，灭菌水洗片1 min，重复3次；
6. 将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用1×抗原修复液工作液浸没；
7. 将修复杯置于微波炉内高火煮沸，低火维持15 min，期间补液，防止蒸发过度导致干片；
8. 取出切片，自然冷却至室温；
9. 去除玻片上残存的洗液，用组化笔圈出玻片上的样本区域，滴加封闭液，覆盖样本区域，室温保湿震荡10 min；
10. 去除玻片上的封闭液，用移液器滴加稀释的一抗溶液（CXCL13抗体，稀释比例为1:100），浸没样本区域，室温保湿震荡孵育1 h；
11. 用1×TBST缓冲液浸洗玻片3 min，重复1次；
12. 去除玻片上残存的洗液，直接滴加HRP二抗工作液溶液，浸没样本区域，室温保湿孵育10 min；
13. 用1×TBST缓冲液浸洗玻片3 min，重复1次；
14. 去除玻片上残存的洗液，用移液器在玻片上滴加1×染料工作液（使用信号放大反应液按1:100稀释）100 μL，浸没样本区域，室温保湿震荡孵育10 min；
15. 用1×TBST缓冲液浸洗玻片，室温浸片3 min，重复3次；
16. 微波修复，自然冷却至室温；
17. 灭菌水洗片1次，用1×TBST缓冲液浸片2 min；
18. 重复步骤6~17，在步骤10时使用一抗为CD8A（稀释比例1:200）或CD3D（稀释比例1:200）；
19. 去除玻片上残存的洗液，滴加DAPI工作液，室温保湿孵育；
20. 用1×TBST缓冲液浸洗玻片，室温浸片3 min；
21. 用灭菌水洗片2 min，待玻片微干，用移液器在玻片上滴加超强抗淬灭封片剂，浸没样本区域，加盖玻片，指甲油封片；
22. 阅片，对染色后的组织片在荧光显微镜下观察并进行判读；
23. 根据染色数据，计算CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比，进而预测其对免疫检查点阻断疗法的响应情况。
（2）根据统计结果，进行判断；
所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
对来自乳腺癌和肺癌的38个样本进行CD3D、CD8A和CXCL13蛋白水平的多色免疫组化染色，并进行统计分析，结果如图5所示。结果显示在有响应患者的肿瘤当中含有更多的CD3D和CXCL13双阳性细胞以及CD8A和CXCL13双阳性细胞，并且这两群双阳性细胞的丰度可以很好地预测治疗效果，对应的AUC值分别为0.84（CD3D和CXCL13双阳性细胞）和0.88（CD8A和CXCL13双阳性细胞），对应的预测准确率分别为80.1%和82.6%，预测效果很好。
综上所述，本发明证明了样本中CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比与其对免疫检查点阻断疗法的响应情况密切相关，可以作为判断标准用来预测多种类型的样本对于免疫检查点阻断治疗的响应效果，相关性好，结果准确率高，具有极高的应用价值。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (4)

1.一种预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，其特征在于，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置包括：
检测模块：检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8T细胞中的占比；
分析模块：根据统计结果，进行判断；
所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
2.根据权利要求1所述的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，其特征在于，所述检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞的方法包括RNA染色技术和/或蛋白染色技术；
所述RNA染色技术包括RNAScope；
所述蛋白染色技术包括免疫荧光、多色免疫组化或CODEX中的任意一种或至少两种的组合。
3.根据权利要求1所述的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置，其特征在于，所述预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置包括：
检测模块：通过RNA染色技术和/或蛋白染色技术检测样本中的CD3和CXCL13双阳性细胞和/或CD8和CXCL13双阳性细胞，并统计所述CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比和/或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比；
分析模块：根据统计结果，进行判断；
所述判断的标准为：
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比大于或等于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD3和CXCL13双阳性细胞在CD3 T细胞中的占比小于0.982%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应；
或CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比大于或等于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法有响应；
CD8和CXCL13双阳性细胞在CD8 T细胞中的占比小于0.847%，样本对免疫检查点阻断疗法无响应。
4.权利要求1~3任一项所述的预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的装置在制备预测免疫检查点阻断疗法治疗效果的产品中的应用。
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