CN114007608A - 在儿科患者中治疗无义突变介导的杜氏肌营养不良症的方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了一种在有需要的儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症(nmDMD)的方法，所述方法包括对患者给予有效量的阿塔鲁伦(ataluren)。

Description

在儿科患者中治疗无义突变介导的杜氏肌营养不良症的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年4月10日提交的美国临时专利申请号62/831,931的优先权，该申请的全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本文提供了一种在有需要的儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症(nonsense mutation mediated Duchenne muscular dystrophy,nmDMD)的方法，所述方法包括对患者给予有效量的阿塔鲁伦(ataluren)。

背景技术

无义突变杜氏肌营养不良症(nmDMD)是一种罕见的X连锁遗传疾病，它会导致肌肉功能下降、行走能力丧失以及因呼吸或心脏衰竭而过早死亡。^1,2,3大约10％～15％DMD患病男孩具有无义突变，无义突变导致DMD基因中的提前终止密码子和功能性抗肌萎缩蛋白的缺失。^1,4,5,6抗肌萎缩蛋白生产的缺失导致肌纤维因反复收缩而撕裂，从而导致肌肉损伤和损失，最终逐渐出现功能的丧失。⁷阿塔鲁伦促进DMD基因中提前终止密码子的核糖体读取，从而形成全长功能性抗肌萎缩蛋白，它是解决nmDMD根本病因的唯一治疗选择。^8,9,10,11

已知nmDMD的发病机理发生在出生前，因为与年龄一致的同龄人相比，nmDMD患病婴儿和男孩在出生时血清肌酸激酶水平显著升高，并且在3岁之前存在显著的粗大和精细运动功能缺陷。¹⁴美国食品药品监管管理局(FDA)已指出，在因抗肌萎缩蛋白的病理性缺失导致大量肌肉损失和纤维化发展之前，对nmDMD疾病过程进行早期干预至关重要。在出现DMD相关损伤的标志性症状之前，在较小的年龄开始抗肌萎缩蛋白恢复治疗，可能因此获益最大。^{10,14,15,16,17}即使与DMD相关不可避免地出现功能下降，在小于五岁时得到阿塔鲁伦的抗肌萎缩蛋白恢复治疗可确保功能保持更长的时间，这因此满足急切未满足的医疗需求。

概述

本文提供的一个方面是在nmDMD人类儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症(nmDMD)的方法，所述方法包括根据患者体重，对年龄在大于或等于两岁至小于五岁之间的患者给予治疗有效量的阿塔鲁伦口服以达到在24小时内至少约1μg/mL至约20μg/mL的平均血药浓度。

本文提供的另一个方面是在nmDMD人类儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症(nmDMD)的方法，所述方法包括根据患者体重，对年龄在大于或等于6个月至小于两岁之间的患者给予治疗有效量的阿塔鲁伦口服以达到在24小时内至少约1μg/mL至约20μg/mL的平均血药浓度。

在一个方面，经批准的治疗有效量的阿塔鲁伦为根据患者体重每日40mg/kg的阿塔鲁伦；所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。在本文提供的另一个方面，所述每日40mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂10mg/kg、中午一剂10mg/kg和晚上一剂20mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

在另一个方面，所述治疗有效量的阿塔鲁伦为根据患者体重每日80mg/kg的阿塔鲁伦；所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。在本文提供的另一个方面，所述每日约80mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂20mg/kg、中午一剂20mg/kg和晚上一剂40mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

在本文提供的另一个方面，所述一剂可选地在进餐30分钟内给药。

在本文提供的一个方面，在nmDMD人类儿科患者中改善或控制nmDMD的方法中给予的治疗有效量提供选自以下各项的效果：i).提高患者肌肉中抗肌萎缩蛋白的表达；ii).改善患者在计时功能测试中的表现；iii).改善患者在动态评估或生活质量评估中的表现；iv).改善或控制行走能力丧失的发生、发展和/或进展；v).改善或控制与nmDMD相关的心肺功能丧失的发生、发展和/或进展和抗肌萎缩蛋白的缺失；vi).改善或控制与nmDMD相关的心脏功能丧失的发生、发展和/或进展；和vii).改善或控制与nmDMD相关的肺功能丧失的发生、发展和/或进展。

附图说明

图1A显示出基线期与第28周和第52周完成走下4级楼梯的计时功能测试所需的平均时间的差异；图1B显示出基线期与第28周和第52周完成爬上4级楼梯的计时功能测试所需的平均时间的差异；图1C显示出基线期与第28周和第52周完成仰卧起立的计时功能测试所需的平均时间的差异；以及图1D显示出基线期与第28周和第52周跑步/行走10米所需的平均时间的差异。

图2A显示了16项NSAA(北极星移动评价量表)的结果；图2B显示了8项NSAA的结果；图2C显示了3项NSAA的结果。第28周的3项NSAA总分的平均(SD)值(n＝13)是5.8(±0.38)，比基线值5.4(±0.65)提高了10.26％。

发明详述

本文提供的一个方面是在nmDMD人类儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症(nmDMD)的方法，所述方法包括根据患者体重，对年龄在大于或等于两岁至小于五岁之间的患者给予治疗有效量的阿塔鲁伦口服以达到在24小时内至少约1μg/mL至约20μg/mL的平均血药浓度。

本文提供的另一个方面是在nmDMD人类儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症(nmDMD)的方法，所述方法包括根据患者体重，对年龄在大于或等于6个月至小于两岁之间的患者给予治疗有效量的阿塔鲁伦口服以达到在24小时内至少约1μg/mL至约20μg/mL的平均血药浓度。

在一个方面，经批准的治疗有效量的阿塔鲁伦为根据患者体重每日40mg/kg的阿塔鲁伦；所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。在本文提供的另一个方面，所述每日40mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂10mg/kg、中午一剂10mg/kg和晚上一剂20mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

在另一个方面，所述治疗有效量的阿塔鲁伦为根据患者体重每日80mg/kg的阿塔鲁伦；所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。在本文提供的另一个方面，所述每日约80mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂20mg/kg、中午一剂20mg/kg和晚上一剂40mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

在本文提供的另一个方面，所述一剂可选地在进餐30分钟内给药。

在本文提供的一个方面，在nmDMD人类儿科患者中改善或控制nmDMD的方法中给予的治疗有效量提供选自以下各项的效果：i).提高患者肌肉中抗肌萎缩蛋白的表达；ii).改善患者在计时功能测试中的表现；iii).改善患者在动态评估或生活质量评估中的表现；iv).改善或控制行走能力丧失的发生、发展和/或进展；v).改善或控制与nmDMD相关的心肺功能丧失的发生、发展和/或进展和抗肌萎缩蛋白的缺失；vi).改善或控制与nmDMD相关的心脏功能丧失的发生、发展和/或进展；和vii).改善或控制与nmDMD相关的肺功能丧失的发生、发展和/或进展。

定义

如本文所用，术语“阿塔鲁伦(ataluren)”指3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-恶二唑-3-基]苯甲酸化合物，所述化合物具有以下化学式(I)结构：

在本文提供的一个方面，阿塔鲁伦可按照以下文献描述的方法制备或表征：美国专利号6,992,096、美国专利号7,202,262、美国专利号7,419,991、美国专利号8,227,494、美国专利号8,486,982、美国专利号8,975,287,、美国专利号9,205,088、美国专利号10,071,081、美国专利号7,863,456、美国专利号8,101,641、美国专利号8,394,966、美国专利号8,691,511、美国专利号8,748,625、美国专利号9,309,206、美国专利号10,028,939、美国专利号7,678,922、美国专利号8,129,540和美国专利号8,367,841，以上每篇文献公开的内容通过引用全部并入本文。

在本文提供的另一个方面，阿塔鲁伦可按照以下文献描述的方法使用：美国专利号7,772,259、美国专利号8,796,322、美国专利号9,861,617、美国专利号8,716,321、美国专利号9,474,743、美国专利号10,034,863、美国专利号7,683,082、美国专利号8,017,636、美国专利号8,183,782、美国专利号8,299,105、美国专利号9,226,919、美国专利号9,522,137、美国专利号9,737,513、美国专利号9,877,952和美国专利号10,172,836，以上文献公开的内容通过引用全部并入本文。

在本文提供的另一个方面，在通过基因检测确定抗肌萎缩蛋白基因中存在无义突变后，阿塔鲁伦被建议用于治疗由DMD基因的无义突变引起的杜氏肌营养不良症。2014年7月31日，欧洲药品管理局(European Medicines Agency,EMA)批准阿塔鲁伦用于治疗基因检测显示患有nmDMD的年龄大于或等于5岁的儿童，此项批准基于大量临床试验研究结果，相关研究发表在Clinical Trials.gov上：

具体地，NCT00264888临床IIa期研究证明了使用阿塔鲁伦作为抗肌萎缩蛋白恢复治疗的可行性。NCT00592553在174名nmDMD患者中进行的随机、双盲、安慰剂对照、剂量范围、多中心的IIb期研究，显示出与先前的研究一致的阿塔鲁伦有利的益处/风险比(benefit/risk ratio)和安全性。^9,11NCT01826487在约7岁至约16岁的nmDMD患病男孩中进行的多中心、随机、双盲、安慰剂对照的III期研究，结果表明阿塔鲁伦整体上耐受性良好，并支持阿塔鲁伦在保持肌肉功能方面的益处。^12,13

在本文提供的另一个方面，阿塔鲁伦已表现出用于改善或控制无义突变介导的疾病或选自以下疾病的治疗活性：三好氏远端肌肉病变(Wang,J.等人,Membrane blebbingas an assessment of functional rescue of dysferlin-deficient human myotubesvia nonsense suppression,J.Appl.Physiol.[膜出泡作为由无义抑制的dysferlin蛋白缺失的人肌管的功能挽救的评估,应用生理学杂志],2010,109,901-905)、婴儿神经元蜡样脂褐质沉积症(INCL)(Sarkar,C.等人,Stop codon read-through with PTC124 inducespalmitoyl-protein thioesterase-1activity,reduces thioester load andsuppresses apoptosis in cultured cells from INCL patients,Mol.Genet.Metab.[PTC124终止密码子通读诱导棕榈酰蛋白硫酯酶-1活性，减少硫酯负载并抑制INCL患者的培养细胞的凋亡,分子遗传学与代谢],2011,104(3),338-345)、晚期婴儿蜡样脂褐质沉积症(LINCL)(Miller.J.N.等人,The role of nonsense-mediated decay in neuronalceroid lipofuscinosis,Human Molecular Genetics[无义介导的衰变在神经元蜡样脂褐质沉积症中的作用,人类分子遗传学],2013,22(13)2723-2734)、共济失调毛细血管扩张症(Du,L.等人,A new series of small molecular weight compounds induce readthrough of all three types of nonsense mutations in the ATM gene,Mol.Therapy[一系列新的小分子量化合物诱导ATM基因中三种类型的无义突变的通读,分子治疗],2013,21(9),1653-1660)、乌谢尔综合征(Usher Syndrome,USCH1C)(Goldmann,T.等人,PTC124-mediated translational readthrough of a nonsense mutation causingUsher syndrome type 1C,Human Gene Therapy[PTC124介导的导致1C型乌谢尔综合征的无义突变的翻译通读，人类基因治疗],May 2011,22,537-547；和Goldmann,T.等人,Acomparative evaluation of NB30,NB54 and PTC124 in translational read-throughefficacy for treatment of an USH1C nonsense mutation.EMBO Mol.Med.[NB30、NB54和PTC124在治疗USH1C无义突变的翻译通读有效性方面的比较评估,欧洲分子生物学组织分子医学杂志],2012,4,1186-1199)、长QT综合征(Yu,H.等人,Comparison of read-through effects of aminoglycosides and PTC124 on rescuing nonsense mutationsof HERG gene associated with long QT syndrome,Intl.Journal of Mol.Med.[氨基糖苷类药物与PTC124在挽救与长QT综合征相关的HERG基因的无义突变方面的通读效果比较,国际分子医学杂志],2014,33,729-735)、弹性假黄瘤(Pseudoxanthoma Elasticum)(Zhou,Y.等人,Premature Termination Codon Read-Through in the ABCC6 Gene:PotentialTreatment for Pseudoxanthoma Elasticum,Journal of Investigat.Derm.[ABCC6基因中的提前终止密码子通读：弹性假黄瘤的潜在治疗,研究性皮肤病学杂志],2013,133,2672-2677)、着色性干皮病(Kuschal,C.等人,Repair of UV photolesions in xerodermapigmentosum group C cells induced by translational readthrough of prematuretermination codons,PNAS[由提前终止密码子的翻译通读诱导的色素性干皮病C组细胞紫外光损伤的修复,美国国家科学院院刊],2013,110(48),19483-19488)、无脉络膜症(Moosajee,M.等人,Clinical utility gene card for:Choroideremia,EuropeanJournal of Human Genetics[临床实用基因卡：无脉络膜症,欧洲人类遗传学杂志],2014,22,e1-e4)无虹膜症(Gregory-Evans,C.Y.等人,Postnatal manipulation of Pax6dosage reverses congenital tissue malformation defects,J.Clin.Invest.[产后调整Pax6剂量可逆转先天性组织畸形缺陷,临床研究杂志],2014,124(1),111-116)、遗传性肺动脉高压(Drake,K.M.等人,Correction of Nonsense BMPR2 and SMAD9 Mutations byAtaluren in Pulmonary Arterial Hypertension,Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.[阿塔鲁伦纠正肺动脉高压的BMPR2和SMAD9无义突变,美国呼吸系统细胞和分子生物学杂志],Sep2013,49(3),403-409)肉毒碱棕榈酰转移酶1A缺乏症(Tan,L.等人,PTC124 improvesreadthrough and increases enzymatic activity of the CPT1A R160X nonsensemutation,J.Inherit.Metabol.Dis.[PTC124提高CPT1A R160X无义突变的通读并增加酶活性,遗传性代谢病杂志],2011,34,443-447)、丙酸血症(Sanchez-Alcudia,R.等人,Feasibility of Nonsense Mutation Readthrough as a Novel TherapeuticalApproach in Propionic Acidemia,Human Mutation[无义突变通读作为丙酸血症新治疗方法的可行性,人类突变],2012,33,973-980)、粘多糖病VI型(Maroteaux-Lamy SyndromeMPS VI)(Bartolomeo,R.等人,Pharmacological read-through of nonsense ARSBmutations as a potential therapeutic approach for mucopolysaccharidosis VI,J.Inherit.Metab.Dis.[药理学的ARSB无义突变通读作为粘多糖病VI型的潜在治疗方法,遗传性代谢病杂志],2013,36,363,371)、赫勒氏综合征(Hurler’s Syndrome)(Keeling,未发表)、或Shwachmann-Diamond综合征(Bezzerri,V.等人,Ataluren-driven restorationof Shwachman-Bodian-Diamond syndrome protein function in Shwachman-Diamondsyndrome bone marrow,American Journal of Hematology[阿塔鲁伦驱动的Shwachman-Diamond综合征骨髓中Shwachman-Bodian-Diamond综合征蛋白功能的恢复,美国血液学杂志],2018年4月,93(4),527-536)。

在本文提供的另一方面，阿塔鲁伦具有改善或控制无义突变介导的疾病或病症的潜在治疗活性，所述疾病或病症选自色盲、脑白质肾上腺素萎缩症、Alagille综合征、奥尔波特综合征(Alport Syndrome)、无虹膜症、共济失调毛细血管扩张症、常染色体显性多囊肾病(ADPKD)、进行性神经性腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth Syndrome)(X-连锁)、癌症、考登病(Cowden Disease)、达利尔氏病(Darier Disease)、埃-德型肌营养不良(Emery-Dreifuss Muscular Dystrophy)、大疱性表皮松解症、癫痫、法布里病(Fabry Disease)、遗传性出血性毛细血管扩张、遗传性痉孪性截瘫、赫勒氏综合征、马方综合征(MarfanSyndrome)、MPS I、MPS II、MPS IV、多发性遗传性外生骨疣、先天性肌强直(隐性)、强直性肌营养不良(Myotonic Dystrophy)、指甲-髌骨综合征、1型神经纤维瘤病、2型神经纤维瘤病、眼白化病(Ocular Albinism)、成骨不全症(Osteogenesis Imperfecta)、视神经萎缩、掌跖角化-牙周破坏综合征(Papillon-Lefevre Syndrome)、帕金森病(家族性)、黑斑息肉综合征(Peutz-Jeghers Syndrome)、原发性纤毛运动障碍、肾细胞癌、色素性视网膜炎、视网膜母细胞瘤、瑞特综合征(Rett Syndrome)、脊髓性肌萎缩、结节性硬化症、乌谢尔综合征(Usher Syndrome)、Von Hippel-Lindau综合征、Wermer综合征、威尔逊氏病(Wilson'sDisease)、Wolfram综合征或无丙种球蛋白血症(X-连锁)。

在本文提供的一个方面，阿塔鲁伦是用于本文提供的药物组合物、工艺和方法的药学上可接受的游离酸。在本文提供的另一个方面，阿塔鲁伦是用于本文提供的药物组合物、工艺和方法的药学上可接受的盐。在本文提供的另一方面，阿塔鲁伦是用于本文提供的药物组合物、工艺和方法的药学上可接受的无水游离酸或盐。

如本文所用，术语“儿科患者”可用于指年龄在约婴儿至约18岁范围内的患者。在一个方面，儿科患者的年龄为约婴儿至18岁(包括婴儿和18岁)。在另一个方面，儿科患者的年龄为约婴儿至2岁(包括婴儿和2岁)。在另一个方面，儿科患者是年龄在约2个月至约6个月、约4个月至约6个月或大于约6个月的范围内的婴儿。在另一个方面，儿科患者的年龄为2岁至5岁(包括2岁和5岁)。在另一个方面，儿科患者的年龄为5岁至18岁(包括5岁和18岁)。

如本文所用，术语“无义突变”是指编码提前终止密码子突变的DNA中的单点遗传或体细胞改变，当转录时，导致通常编码氨基酸谷氨酰胺的信使核糖核酸(mRNA)三联体(例如，CAG)被转化为解释为终止密码子(即提前终止密码子)的三联体(例如，UAG)。mRNA中提前终止密码子的存在会导致截短的、无功能的蛋白的产生和随之产生的疾病。

如本文所用，术语“提前终止密码子”是指在mRNA中编码终止密码子而不是氨基酸的DNA突变的结果。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指根据患者体重给予患者的足以达到24小时内至少约1μg/mL至约20μg/mL的平均血药浓度的阿塔鲁伦的量。具体地，来自临床研究结果(NCT00264888)的建模数据表明，24小时内的平均血药浓度为至少约0.9μg/mL至约17.6μg/mL。如6分钟步行距离(6MWD)所示，提供最大益处的有效血药浓度范围显示为2至19ug/mL，通常在早上给药后2小时内发现。

在一个方面，阿塔鲁伦的治疗有效量为根据患者体重约每日40mg/kg；所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。在本文提供的另一个方面，所述每日约40mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂10mg/kg、中午一剂10mg/kg和晚上一剂20mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

在一个方面，阿塔鲁伦的治疗有效量为根据患者体重约每日80mg/kg；其中在24小时内所达到的平均血药浓度至少约1μg/mL至约20μg/mL。在本文提供的另一个方面，所述每日约80mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂20mg/kg、中午一剂20mg/kg和晚上一剂40mg/kg；所述早上给药与中午给药的时间间隔为6小时；所述中午给药与晚上给药的时间间隔为6小时；且所述晚上给药与次日的早上给药的时间间隔为12小时。

在本文提供的另一个方面，所述一剂可选地在进餐30分钟内给药。

在本文提供的一个方面，在nmDMD人类儿科患者中改善或控制nmDMD的方法中给予的治疗有效量提供选自以下各项的效果：i).提高患者肌肉中抗肌萎缩蛋白的表达；ii).改善患者在计时功能测试中的表现；iii).改善患者在动态评估或生活质量评估中的表现；iv).改善或控制行走能力丧失的发生、发展和/或进展；vi).改善或控制与nmDMD相关的心肺功能丧失的发生、发展和/或进展；vi).改善或控制与nmDMD相关的心脏功能丧失的发生、发展和/或进展；和vii).改善或控制与nmDMD相关的肺功能丧失的发生、发展和/或进展。

如本文所用，术语“功能性”在功能性通读蛋白的范畴内是指产生足量的用于治疗、预防或改善因缺乏该蛋白而导致的疾病的蛋白。此外，该术语是指具有足够野生型蛋白的功能活性以在细胞或受试者中产生有益效果的蛋白，与之相反的是，由于编码蛋白的核酸序列(例如，基因)中的突变(例如，无义突变)而不会产生或产生不足量的野生型蛋白。在一个具体的方面，功能性通读蛋白基本上执行全长野生型蛋白的功能，即改善或控制疾病。在另一个具体的方面，功能性通读蛋白执行全长野生型蛋白的一种、两种、三种或多种功能。在某些方面，产生的功能性通读蛋白是功能性非野生型蛋白。在某些方面，产生的功能性通读蛋白是功能性野生型蛋白。在一些方面，产生的功能性非野生型蛋白是全长蛋白。在一些方面，产生的功能性野生型蛋白是全长蛋白。在其他方面，功能性非野生型蛋白不是全长蛋白。在其他方面，产生的功能性野生型蛋白不是全长蛋白。

如本文所用，术语“基本上执行全长野生型蛋白的功能”在功能性通读蛋白的范畴内是指功能性通读蛋白执行全长野生型蛋白的至少一种、两种、三种或多种功能。

如本文所用，术语“无义突变介导的DMD”是指杜氏肌营养不良症，其中抗肌萎缩蛋白基因中的无义突变编码mRNA中的提前终止密码子，它导致不会产生功能性抗肌萎缩蛋白。

如本文所用，“联合”在给予治疗的范畴内是指使用不止一种治疗。术语“联合”的使用不限制对患病受试者给予治疗的顺序。在某些方面，对患病受试者给予一种或多种治疗包括但不限于第一治疗，可以在给予第二治疗之前(例如，1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、给予第二治疗同时或之后(例如，1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)对患过病、正在患病或易患病的受试者给予所述第一治疗。以一定顺序和时间间隔对受试者给予治疗，使得如本文所述的单位剂型(unitdosage form)可以与另一种治疗共作用，以提供比单独给予治疗更多的益处。

如本文所用，术语“改善或控制”或“改善或控制”是指儿科患者从如本文所提供的治疗上有效量的阿塔鲁伦给药中获得的有益效果，它减缓了与nmDMD相关的不可避免的功能丧失，从而影响nmDMD的症状。当儿科患者被诊断出患有与遗传或体细胞的无义突变相关的nmDMD时，可以对儿科患者给予如本文所述的有效量的阿塔鲁伦，以通过提供选自以下各项的治疗上有益的效果来改善或控制在nmDMD患者中的nmDMD：i).提高患者肌肉中抗肌萎缩蛋白的表达；ii).改善患者在计时功能测试中的表现；iii).改善患者在动态评估或生活质量评估中的表现；iv).改善或控制行走能力丧失的发生、发展和/或进展；vi).改善或控制与nmDMD相关的心肺功能丧失的发生、发展和/或进展；vi).改善或控制与nmDMD相关的心脏功能丧失的发生、发展和/或进展；和vii).改善或控制与nmDMD相关的肺功能丧失的发生、发展和/或进展。

如本文所用，术语“约”或“大约”是指由本领域普通技术人员确定的具体值的可接受误差，它部分地取决于如何测量或确定该值。在某些方面，术语“约”或“大约”是指在1、2、3或4个标准偏差内。在某些方面，术语“约”或“大约”是指在给定值或范围的50％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％或0.05％以内。

如本文所用，术语“野生型”在蛋白的范畴内是指在自然界中发现(通常但不一定是主要蛋白，它的缺失会导致疾病)并且被指定为标准或参考蛋白的蛋白。

阿塔鲁伦的盐形式

在某些方面，本文提供的方法包括使用阿塔鲁伦的盐形式，包括选自L-精氨酸、L-组氨酸、L-赖氨酸、N-甲基葡糖胺、甲醇镁、氢氧化钾、氢氧化钠或氨丁三醇的盐(PCT申请号PCT/US2015/018889，提交于2015年3月5日，公开为国际专利申请号WO2015/134711，通过引用以其全文并入本文)。更具体地，本文提供的方法包括使用选自L-赖氨酸、钠和氨丁三醇的阿塔鲁伦的盐形式。

药物组合物

包含有效量的阿塔鲁伦的药物组合物和单一单位剂型可用于本文提供的方法。单个剂型可适用于口服、皮肤、粘膜(包括但不限于舌下、颊、直肠、鼻或阴道)或肠胃外(包括但不限于皮下、肌内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、滑膜内、膀胱内或静脉内)或眼部给药。优选的药物组合物和单一单位剂型适用于口服给药。

在某些方面，药物组合物包含约0.1％至约99％、约5％至约90％、约5％至约50％、约10％至约40％、约20％至约30％、约0.1％至约5％、约0.1％至约2.5％、约0.1％至约1％或约0.25％至约0.5％重量百分比的阿塔鲁伦。在某些方面，药物组合物包含约0.1％、约0.25％、约0.5％、约1％、约2％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％或约90％重量百分比的阿塔鲁伦。在某些方面，药物组合物包含约0.25％、约0.5％或约1％重量百分比的阿塔鲁伦。

在某些方面，本文提供的药物组合物包含约1mg至约5,000mg、约10mg至约2,000mg、约50mg至约1,000mg、约100mg至约1,000mg或约100mg至约500mg的阿塔鲁伦。在某些方面，本文提供的药物组合物包含约125mg、约200mg、约325mg、约400mg或约500mg的阿塔鲁伦。在某些方面，本文提供的药物组合物包含约120mg至约130、约195mg至约205mg、约320mg至约330mg、约395mg至约405mg或约495mg至约505mg的阿塔鲁伦。

在某些方面，本文提供的药物组合物中的阿塔鲁伦是本文提供的阿塔鲁伦的游离酸。

在某些方面，本文提供的药物组合物中的阿塔鲁伦是本文提供的阿塔鲁伦的盐形式。

本文提供的药物组合物可以以单位剂型或多剂型的形式提供。如本文所用，单位剂型(unit dosage form)是指适合使用本领域已知的包装对人或动物受试者给药的物理离散单位。每个单位剂量包含预定量的足以产生所需治疗效果的活性成分，所需治疗效果与所需的药物载体或赋形剂有关。单位剂型的实例包括但不限于单独包装的小包、小袋或瓶或滴管。单位剂型可以分次或多次给药。多剂型(multiple-dosage form)是包装在单个容器中的多个相同的单位剂型，以作为分开的或组合的单位剂型给药。多剂型的实例包括用于肠胃外、口服或通过滴管眼部给药的小包或小袋装的颗粒剂或粉剂、小瓶或瓶装的片剂或胶囊、或液体盎司、品脱或加仑的瓶装液体溶液。

本文提供的药物组合物可以在一段时间内分剂量给药。应当理解，治疗的精确剂量和持续时间可能随受治疗患者的年龄、体重和状况而变化，并且可以使用已知的测试方案凭经验确定或通过从体内或体外测试或诊断数据推断或通过观察某些临床因素确定。还应理解，对于任何特定个体，可根据个体需要和给药或监督药物组合物给药的人员的专业判断随时间调整具体的剂量方案。

口服制剂

配制本文提供的药物组合物用于口服给药。在某些方面，本文提供的用于口服给药的药物组合物提供为用于口服给药的固体、半固体或液体剂型。如本文所用，口服给药还包括颊、舌和舌下给药。合适的口服剂型包括但不限于片剂、舌下或颊膜片(即“速溶剂”)、咀嚼片、泡腾片、分散片、小片、胶囊、丸剂、条剂、锭剂、糖锭剂、软锭剂、口腔膜剂、扁囊剂(cachets)、小丸、药用咀嚼口香糖、散装粉剂或颗粒剂、泡腾或非泡腾粉剂或颗粒剂、口腔喷雾剂、溶液、乳液、混悬液、糯米纸囊剂(wafers)、散剂(sprinkles)、酏剂和糖浆剂。除活性成分外，药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，包括但不限于粘合剂、填充剂、稀释剂、崩解剂、湿润剂、表面活性剂、润滑剂、助流剂、pH调节剂、着色剂、染料迁移抑制剂、甜味剂、调味剂、乳化剂、悬浮剂和分散剂、防腐剂、溶剂、溶剂化试剂(solvating agents)、非水性液体、有机酸和二氧化碳源。

粘合剂或成粒剂赋予片剂粘结性以确保片剂在压缩后保持完整。合适的粘合剂或成粒剂包括但不限于淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预糊化淀粉(例如，STARCH1500)；明胶；糖类，例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糖蜜和乳糖；天然和合成的胶，例如阿拉伯树胶、海藻酸、海藻酸盐、鹿角菜(Irish moss)提取物、panwar树胶(panwar gum)、印度树胶(ghattigum)、洋车前籽壳(isabgol husks)胶浆、羧甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、硅酸镁铝Veegum、落叶松阿拉伯半乳聚糖(larch arabogalactan)、西黄蓍胶粉(powdered tragacanth)和瓜尔胶；纤维素，例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素(CMC)、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素(HEC)、羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)；微晶纤维素，例如

PH-101、

-PH-103、

RC-581、

-PH-105(富美实公司,Marcus Hook,PA)；及其混合物。合适的填充剂包括但不限于滑石粉、碳酸钙、微晶纤维素、粉状纤维素、葡萄糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预糊化淀粉及其混合物。

合适的稀释剂包括但不限于磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、山梨糖醇、蔗糖、肌醇、纤维素、高岭土、甘露醇、氯化钠、干淀粉和糖粉。某些稀释剂，例如甘露醇、乳糖、山梨糖醇、蔗糖和肌醇，当其足量时，可以赋予某些压制片剂允许通过咀嚼在口中崩解的特性。这类压制片剂可用作咀嚼片。

合适的崩解剂包括但不限于琼脂；膨润土；纤维素，例如甲基纤维素和羧甲基纤维素；木材制品；天然海绵；阳离子交换树脂；褐藻酸；胶，例如瓜尔胶和

HV；柑橘果渣；交联纤维素，例如交联羧甲基纤维素；交联聚合物，例如交联聚维酮；交联淀粉；碳酸钙；微晶纤维素，例如羟基乙酸淀粉钠；波拉克林钾(polacrilin potassium)；淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、木薯淀粉、预糊化淀粉；粘土；aligns；及其混合物。本文提供的药物组合物可包含约0.5％至约15％或约1％至约5％重量百分比的崩解剂。

合适的润滑剂包括但不限于硬脂酸钙；硬脂酸镁；矿物油；轻质矿物油；甘油；山梨糖醇；甘露醇；二醇类，例如山嵛酸甘油酯(glycerol behenate)和聚乙二醇(PEG)；硬脂酸；月桂基硫酸钠；滑石粉；氢化植物油，包括花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油、豆油；硬脂酸锌；油酸乙酯；月桂酸乙酯；琼脂；淀粉；石松子；二氧化硅或硅胶，例如

200(格雷斯公司(W.R.Grace Co.,Baltimore,MD))和CAB-O-

(卡博特公司(Cabot Co.of Boston,MA))；及其混合物。本文提供的药物组合物可包含约0.1％至约5％重量百分比的润滑剂。

合适的助流剂包括但不限于胶体二氧化硅、CAB-O

(波士顿马赛诸塞州的卡博特公司(Cabot Co.of Boston,MA))和无石棉滑石粉。合适的着色剂包括但不限于任何经批准(经认证)的水溶性FD&C染、悬浮在氧化铝水合物上的非水溶性FD&C染料、色淀及其混合物。色淀是通过将水溶性染料吸附到重金属的水合氧化物上而形成的不溶形式的染料。合适的调味剂包括但不限于从植物(例如水果)中提取的天然香料，以及产生愉悦味觉的化合物(例如薄荷和水杨酸甲酯)的合成混合物。合适的甜味剂包括但不限于蔗糖、乳糖、甘露醇、糖浆、甘油和人造甜味剂，例如糖精和阿斯巴甜。合适的乳化剂包括但不限于明胶、阿拉伯胶、西黄蓍胶、膨润土和表面活性剂，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(

20)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯80(

80)和三乙醇胺油酸酯。合适的悬浮剂和分散剂包括但不限于羧甲基纤维素钠、果胶、西黄蓍胶、硅酸镁铝(Veegum)、阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。合适的防腐剂包括但不限于甘油、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、苯甲酸、苯甲酸钠和醇。合适的湿润剂包括但不限于丙二醇单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、二甘醇单月桂酸酯和聚氧乙烯月桂醚。合适的溶剂包括但不限于甘油、山梨糖醇、乙醇和糖浆。用于乳液的合适的非水性液体包括但不限于矿物油和棉籽油。合适的有机酸包括但不限于柠檬酸、富马酸、抗坏血酸和酒石酸。合适的二氧化碳源包括但不限于碳酸氢钠和碳酸钠。应当理解，许多载体和赋形剂可以起到多种功能，甚至在同一制剂中。

本文提供的用于口服给药的片剂的药物组合物可以提供为压制片、片剂研磨剂(tablet triturates)、咀嚼糖锭剂、速溶片、泡腾片、小片、小珠、包衣小珠、复压片(multiple compressed tablets)或肠溶衣片、糖衣片或薄膜包衣片。肠溶衣片是包覆有抗胃酸作用但在肠内溶解或崩解的物质的压制片，从而保护活性成分免受胃的酸性环境的影响。肠溶包衣包括但不限于脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、虫胶、氨化虫胶和邻苯二甲酸醋酸纤维素。糖衣片是被糖衣包覆的压制片，这可能有助于掩盖令人不快的味道或气味并保护药片免受氧化。薄膜包衣片是包覆有薄层的水溶性材料的压制片。薄膜包衣包括但不限于羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸醋酸纤维素。薄膜包衣具有与糖衣相同的一般特性。复压片是经过一个以上的压制循环制成的压制片，包括分层片、压制包衣片或干包衣片。

片剂剂型可由粉末、结晶或颗粒形式的活性成分单独制备或与本文所述的一种或多种载体或赋形剂组合制备，所述载体或赋形剂包括粘合剂、崩解剂、控释聚合物、润滑剂、稀释剂和/或着色剂。调味剂和甜味剂尤其适用于形成咀嚼片和糖锭剂。

本文提供的用于口服给药的药物组合物可以提供为软胶囊或硬胶囊的形式，胶囊可由明胶、甲基纤维素、淀粉或藻酸钙制成。硬明胶胶囊，也称为干填充胶囊(DFC)，它由两部分组成，一部分包在另一部分中，从而完全包封了活性成分。软弹性胶囊(SEC)是一种软性的球状外壳，例如通过添加甘油、山梨糖醇或类似的多元醇对其进行增塑的明胶外壳。软明胶外壳可包含防腐剂以防止微生物生长。合适的防腐剂是如本文所述的那些防腐剂，包括尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，以及山梨酸。本文提供的液体、半固体和固体剂型可封装在胶囊中。合适的液体和半固体剂型包括碳酸丙烯酯、植物油或甘油三酯中的溶液和混悬液。也可以如本领域技术人员已知的那样对胶囊进行包衣以改变或维持活性成分的溶解。

本文提供的用于口服给药的药物组合物可以提供为液体和半固体剂型的形式，包括乳液、溶液、混悬液、酏剂和糖浆剂。乳液是一种两相系统，其中一种液体以小球的形式分散在另一种液体中，该液体可以是水包油或油包水。乳液可包括药学上可接受的非水性液体或溶剂、溶剂化试剂或乳化剂和防腐剂。混悬液可包括药学上可接受的助悬剂和防腐剂。含水醇溶液可包括药学上可接受的缩醛(acetal)，例如低级烷基醛的乙醛缩二(低级烷基)，例如乙醛缩二乙醇；和具有一个或多个羟基的水溶性溶剂(water-misciblesolvent)，例如丙二醇和乙醇。酏剂是澄清加糖的水醇溶液。糖浆剂是糖(例如蔗糖)的浓缩水溶液，也可包含防腐剂。对于液体剂型，例如，聚乙二醇中的溶液可以用足量的药学上可接受的液体载体例如水稀释以便于给药测量。

其他有用的液体和半固体剂型包括但不限于那些包含本文提供的活性成分和二烷基化的单或聚亚烷基二醇的剂型，二烷基化的单或聚亚烷基二醇包括1,2-二甲氧基甲烷、二乙二醇二甲醚、三乙二醇二甲醚、四乙二醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550、750是指聚乙二醇的近似平均分子量。这些制剂还可包含一种或多种抗氧化剂，例如二丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、没食子酸丙酯、维生素E、乙二胺四乙酸(EDTA)、对苯二酚、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨糖醇、磷酸、亚硫酸氢盐、焦亚硫酸钠、硫代二丙酸及其酯和二硫代氨基甲酸酯。

本文提供的用于口服给药的药物组合物也可以提供为脂质体、胶束、微球或纳米系统的形式。

本文提供的用于口服给药的药物组合物可以提供为非泡腾片剂或泡腾片剂或颗粒剂和粉剂的形式，以重构成液体剂型。用于非泡腾颗粒剂或粉剂的药学上可接受的载体和赋形剂可包括稀释剂、甜味剂和湿润剂。用于泡腾颗粒剂或粉剂的药学上可接受的载体和赋形剂可包括有机酸和二氧化碳源。

在某些方面，药物组合物被配制成固体口服剂型。在某些方面，药物组合物被配制成液体口服剂型。在某些方面，在与药学上可接受的液体或半固体溶剂化试剂混合后，单位剂型提供为混悬液，所述溶剂化试剂包括但不限于水、奶、碳酸饮料、汁液、果汁、果汁饮料、苹果酱、酸奶、布丁、冰淇淋、婴儿食品、婴儿配方奶粉或以大豆或谷物为基础的产品。

在某些方面，本文提供了包含其药学上可接受的盐和一种或多种附加的药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂(micronized powder)。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。在另一个方面，一种或多种赋形剂选自由聚葡萄糖、甘露醇、泊洛沙姆(poloxamer)、聚乙二醇、羟乙基纤维素、交联聚维酮、人造调味剂和硬脂酸镁组成的组。在某些方面，人造调味剂是人造香草香料。

此外，本文还提供包含约25％重量百分比的阿塔鲁伦、约1％重量百分比的胶体二氧化硅、和一种或多种附加的药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在某些方面，本文提供的药物组合物包含阿塔鲁伦和一种或多种赋形剂，所述赋形剂选自聚葡萄糖、泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆407)、聚乙二醇(例如，聚乙二醇3350)、甘露醇、羟乙基纤维素、人造香草调味剂、交联聚维酮、胶体二氧化硅和(例如植物来源的)硬脂酸镁。在某些方面，本文提供的药物组合物包含阿塔鲁伦和一种或多种赋形剂，所述赋形剂选自助悬剂、可提供掩味作用的粘合剂、表面活性剂、崩解剂和其他可存在的赋形剂。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。在另一个方面，阿塔鲁伦以例如约25％重量百分比的量存在。在另一个方面，一种或多种赋形剂选自由聚葡萄糖、甘露醇、泊洛沙姆、聚乙二醇、羟乙基纤维素、交联聚维酮、人造香草香料和硬脂酸镁组成的组。在另一个方面，一种或多种赋形剂(及其在总制剂重量中的比例)选自助悬剂(例如约26％重量百分比的

Ultra[精制聚葡萄糖])、粘合剂(例如约26％重量百分比的甘露醇)、表面活性剂(例如约10.0％重量百分比的聚乙二醇3350和约4％重量百分比的

micro F127[泊洛沙姆407粉剂])、崩解剂(例如约5％重量百分比的交联聚维酮)和其他分别小于约2％重量百分比的赋形剂(例如Cab-O-Sil^TM、羟乙基纤维素、约1％重量百分比的硬脂酸镁[非牛的]和约1％重量百分比的胶体二氧化硅。

本文进一步提供包含约25％重量百分比的阿塔鲁伦、约26％重量百分比的聚葡萄糖、约26％重量百分比的甘露醇、约3％重量百分比的泊洛沙姆、约10％重量百分比的聚乙二醇、约2％重量百分比的羟乙基纤维素、约5％重量百分比的交联聚维酮、约1％重量百分比的人造香草香料、约1％重量百分比的胶体二氧化硅和约1％重量百分比的和硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约120mg至约1005mg的阿塔鲁伦、约133mg至约1030mg的聚葡萄糖、约137mg至约901mg的甘露醇，约19mg至约147mg的泊洛沙姆、约52mg至约402mg的聚乙二醇，约7mg至约59mg的羟乙基纤维素，约26mg至约201mg的交联聚维酮、约3mg至约29mg的人造香草香料、约5mg至约39mg的胶体二氧化硅和约5mg至约39mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约130mg的阿塔鲁伦、约133mg的聚葡萄糖、约137mgg的甘露醇，约19mg的泊洛沙姆、约52mg的聚乙二醇，约7mg的羟乙基纤维素，约26mg的交联聚维酮、约3mg的人造香草香料、约5mg的胶体二氧化硅和约5mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约205mg的阿塔鲁伦、约210mg的聚葡萄糖、约216mgg的甘露醇，约30mg的泊洛沙姆、约82mg的聚乙二醇，约12mg的羟乙基纤维素，约41mg的交联聚维酮、约6mg的人造香草香料、约8mg的胶体二氧化硅和约8mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约330mg的阿塔鲁伦、约338mg的聚葡萄糖、约348mgg的甘露醇，约48mg的泊洛沙姆、约132mg的聚乙二醇，约19mg的羟乙基纤维素，约66mg的交联聚维酮、约9mg的人造香草香料、约13mg的胶体二氧化硅和约13mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约405mg的阿塔鲁伦、约415mg的聚葡萄糖、约427mgg的甘露醇，约59mg的泊洛沙姆、约162mg的聚乙二醇，约24mg的羟乙基纤维素，约81mg的交联聚维酮、约12mg的人造香草香料、约16mg的胶体二氧化硅和约16mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约505mg的阿塔鲁伦、约518mg的聚葡萄糖、约453mgg的甘露醇，约74mg的泊洛沙姆、约202mg的聚乙二醇，约30mg的羟乙基纤维素，约101mg的交联聚维酮、约15mg的人造香草香料、约20mg的胶体二氧化硅和约20mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

本文进一步提供了药物组合物，所述药物组合物包含约1005mg的阿塔鲁伦、约1030mg的聚葡萄糖、约901mgg的甘露醇，约147mg的泊洛沙姆、约402mg的聚乙二醇，约59mg的羟乙基纤维素，约201mg的交联聚维酮、约29mg的人造香草香料、约39mg的胶体二氧化硅和约39mg的硬脂酸镁。在一个方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。

在某些方面，单位剂型包含约35mg至约5,600mg的阿塔鲁伦、约35mg至约2,800mg的阿塔鲁伦、约35mg至约1,400mg的阿塔鲁伦、约125mg至约1,000mg的阿塔鲁伦、约250mg至约1,000mg的阿塔鲁伦、约325mg至约1,000mg的阿塔鲁伦或约500mg至约1,000mg的阿塔鲁伦。

在某些方面，单位剂型包含约35mg、约50mg、约70mg、约100mg、约125mg、约140mg、约175mg、约200mg、约250mg、约280mg、约325mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约560mg、约700mg、约750mg、约1,000mg、约1,400mg、约2800mg或约5600mg的阿塔鲁伦。

在一个具体的方面，单位剂型包含约125mg、约250mg或约1,000mg的阿塔鲁伦。

在一个更具体的方面，单位剂型包含125mg、250mg或1,000mg的阿塔鲁伦。

在某些方面，药物组合物被配制成粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成微粉化粉剂。在一个方面，药物组合物被配制成纳米颗粒剂。在一个方面，药物组合物被配制成颗粒剂。在某些方面，本文提供的药物组合物被包装在小包或小袋中。在某些方面，本文提供的药物组合物被包装在热封层压铝的小包或小袋中。在某些方面，本文提供的药物组合物被包装在防止儿童抚弄的小包或小袋中。在某些方面，本文提供的药物组合物被包装在包含聚对苯二甲酸乙二醇酯层、聚乙烯层、铝箔层、粘合剂层和密封膜层的小包或小袋中。在某些方面，药物组合物可以提供为包括但不限于高密度聚乙烯(HDPE)瓶装的形式。

在某些方面，本文提供的药物组合物被配制成用于重构的颗粒剂。在某些方面，本文提供的药物组合物被配制成用于重构为口服混悬液的颗粒剂。

在某些方面，重构本文提供的药物组合物，在给药前通过将其与药学上可接受的液体或半固体溶剂化试剂混合形成混悬液，所述溶剂化试剂包括但不限于水、奶、碳酸饮料、汁液、果汁、果汁混合饮料(fruit punch)、苹果酱、酸奶、布丁、冰淇淋、婴儿食品、婴儿配方奶粉或以大豆或谷物为基础的产品。

在某些方面，重构本文提供的药物组合物，在给药前通过将其与水混合形成混悬液。在一个方面，通过将至少约5mL的水直接加入含阿塔鲁伦的瓶中进行125mg单位剂量阿塔鲁伦制剂的重构，从而达到在混悬液总体积中至少约25mg/mL的标称浓度。在另一个方面，通过将至少约10mL的水直接加入含阿塔鲁伦的瓶中进行250mg单位剂量阿塔鲁伦制剂的重构，从而达到在混悬液总体积中至少约25mg/mL的标称浓度。在另一个方面，通过将至少约20mL的水直接加入含阿塔鲁伦的瓶中来进行500mg单位剂量阿塔鲁伦制剂的重构，从而达到在混悬液总体积中至少约25mg/mL的标称浓度。在另一个方面，通过将至少约40mL的水直接加入含阿塔鲁伦的瓶中来进行1000mg单位剂量阿塔鲁伦制剂的重构，从而达到在混悬液总体积中至少约25mg/mL的标称浓度。

在其他方面，包含本文提供的药物组合物的单位剂型仅在剂量配制时被打开。每个单位剂型的全部内容物与液体或半固体溶剂化试剂混合成混悬液，其中所述液体溶剂化试剂为至少30mL(1盎司)或所述半固体溶剂化试剂为至少3汤匙。配制好的剂量在给药前应充分混合。液体或半固体溶剂化试剂的量可以根据患者的偏好增加。

在某些方面，本文提供的药物组合物包含游离酸或药学上可接受的盐的形式的阿塔鲁伦，其中所述药学上可接受的盐是镁盐、钾盐、钠盐、氨基丁三醇盐(tromethaminesalt)、L-赖氨酸盐、L-精氨酸盐、N-甲基葡糖胺盐或L-组氨酸盐。

颗粒大小

在某些方面，本文提供的药物组合物包含具有增强的溶解度的微粉化形式的阿塔鲁伦。在某些方面，本文提供的药物组合物包含具有增强的溶解度和/或溶解速率的纳米颗粒形式的阿塔鲁伦。

在具体的方面，本文提供的药物组合物包含微粉化形式的阿塔鲁伦，其中>90％的阿塔鲁伦颗粒的直径(D₉₀值)为约1～10微米，所述阿塔鲁伦具有增强的溶解度。在某些方面，本文提供的药物组合物包含微粉化形式的阿塔鲁伦，其D₉₀值为约10微米、约9微米、约8微米、约7微米、约6微米、约5微米、约4微米、约3微米、约2微米或约1微米，所述阿塔鲁伦具有增强的溶解度。在某些方面，本文提供的药物组合物包含微粉化形式的阿塔鲁伦，其D₉₀值为约1～5微米，所述阿塔鲁伦具有增强的溶解度和/或溶解速率。在某些方面，本文提供的药物组合物包含微粉化形式的阿塔鲁伦，其D₉₀值为约5微米、约4微米、约3微米、约2微米或约1微米，所述阿塔鲁伦具有增强的溶解度和/或溶解速率。在某些方面，本文提供的药物组合物包含纳米颗粒形式的阿塔鲁伦，所述阿塔鲁伦具有增强的溶解度。在具体的方面，本文提供的药物组合物包含纳米颗粒形式的阿塔鲁伦，其中>90％的阿塔鲁伦颗粒的D₉₀值为约0.1微米、约0.09微米、约0.08微米、约0.07微米、约0.06微米、约0.05微米、约0.04微米、约0.03微米、约0.02微米或约0.01微米。

本文提供了微粉化形式的阿塔鲁伦的体积加权平均直径D[4,3]为约2μm至约12μm。本文还提供了微粉化形式的阿塔鲁伦的表面加权平均直径D[3,2]为约1μm至约3μm。本文还进一步地提供了阿塔鲁伦的D₉₀颗粒大小为约5μm至约26μm，D₅₀颗粒大小为约1μm至约6μm，或D₁₀颗粒大小为约0.1μm至约1.5μm。

试剂盒

本文提供的药物组合物可以提供为使用本领域技术人员公知的包装材料的制造品。药物包装材料的例子包括但不限于泡罩包(blister pack)、瓶、小包、小袋、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、滴管，以及任何适用于所选制剂和预期给药和治疗模式的包装材料。

本文提供了试剂盒，当执业医师使用所述试剂盒时，可以简化地对受试者给予适当量的活性成分。在某些方面，本文提供的试剂盒包括本文提供的药物制剂的容器和剂型及其使用说明书。在某些方面，包含在试剂盒中的说明书提供了关于阿塔鲁伦给药的剂量和/或给药方案的指导。

在某些方面，试剂盒包括含本文提供的药物制剂的剂型的容器，在所述容器中包含本文所述的一种或多种其他治疗剂。在某些方面，药物制剂提供为白色至米黄色的口服混悬粉剂(powder for oral suspension)。在某些方面，药物制剂包含基质和/或助悬剂、表面活性剂和/或赋形剂。在某些方面，药物制剂提供为口服混悬颗粒剂(granules fororal suspension)。在某些方面，用于口服混悬液的药物制剂被包装在防止儿童抚弄的铝箔小袋(小包)中，其剂量强度为包含125、250或1000mg活性药物。在某些方面，所述试剂盒包括包含一种或多种剂量强度的口服混悬剂药物制剂(125、250或1000mg或匹配的安慰剂)的小包或小袋。

本文提供的试剂盒还可包括用于给予所述活性成分的装置。这类装置的例子包括但不限于注射器、无针注射器、滴液袋、贴片、滴管和吸入器。

本文提供的试剂盒可进一步地包括可用于给予所述活性成分的药学上可接受的载体。例如，如果所述活性成分以固体形式(所述固体形式必须重构为适用于肠胃外给药)提供，则所述试剂盒可包含合适载体的密封容器，其中所述活性成分可溶解形成无颗粒的无菌溶液，所述无菌溶液适用于肠胃外给药或可以重构为适用于口服给药的混悬液。药学上可接受的载体的例子包括但不限于：水性载体，所述水性载体包括但不限于注射液USP用水、氯化钠注射液、林格注射液(Ringer’s Injection)、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液以及乳酸林格注射液；水混溶性载体，所述水混溶性载体包括但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；和非水性载体，所述非水性载体包括但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

使用方法

阿塔鲁伦被建议用于治疗门诊患者中由DMD基因无义突变引起的杜氏肌营养不良症，所述门诊患者为在欧洲成员国、冰岛、列支敦士登和挪威的2岁及以上的患者，或在以色列、韩国、智利和乌克兰的5岁及以上的患者。其中，抗肌萎缩蛋白基因是否存在无义突变应通过基因检测来确定。相比之下，评估任何抗肌萎缩蛋白恢复治疗对低龄患者(例如，小于5岁)的有效性一直具有挑战性，这是因为在这个年龄范围内被诊断为nmDMD的患者数量很少。此外，5岁以下的儿童，由于成长和成熟，肌肉功能趋于稳定或改善。因此，用于评估肌肉功能的常规措施不太可能检测到有益的药物作用。¹⁴在≥2岁至<5岁年龄组中还缺乏经验证的有效性评估。在一个例子中，例如6分钟步行距离(6MWD)评估需要患者的配合，因此可能不适用于低龄儿童。¹⁴此外，自然史数据表明，在≥2岁至<5岁年龄组中的nmDMD患病儿童也可能在一些常规用于评估发育肌肉功能的方法(例如TFT)中表现出改善和/或稳定。¹⁴在另一个例子中，对于小于4岁的男孩，正常发育的男孩尚未可靠地执行北极星移动评价量表(NSAA)(常用的nmDMD功能评估)中的许多功能，包括单腿站立和单足跳跃等功能。¹⁸至三岁，85％正常发育的男孩能够完全执行NSAA的17项中的8项(站立、步行10m、从椅子上由坐到站、爬步-右腿、爬步-左腿、坐下、跳跃、跑步)并且100％能够执行3项(站立、步行10m，从椅子上由坐到站)，而至4岁，85％正常发育的男孩能够完成全部17项NSAA项目。因此，修订NSAA量表使其仅包括≥2岁和<5岁年龄组(即8项和3项NSAA)的男孩可以可靠地执行的项目是对于这个低龄年龄组最合适的功能评估的方法。¹⁸

由于在低龄男孩中进行抗肌萎缩蛋白恢复治疗可能会产生最大的长期益处¹⁶，因此如本文所述的NCT02819557 II期、多剂量开放标签试验(multiple dose open-labeltrial)旨在评估阿塔鲁伦在≥2岁至<5岁nmDMD患病男孩中的安全性和PK。在这个低龄患者群体中的相对安全性和PK也可能支持对阿塔鲁伦有效性数据的推断，并可能有助于克服与研究低龄儿童nmDMD治疗相关的一些挑战。NCT02819557试验可以评估阿塔鲁伦对肌肉功能的影响。考虑到在≥2岁至<5岁的患者中证明有效性的内在挑战以及缺乏对照组，此类研究的可行性有限，因此无法推断出阿塔鲁伦有效性的最终评估。虽然在如本文所述的研究中使用的TFT和NSAA次要终点(secondary endpoint)必须针对这个年龄段的患者进行谨慎解释，但它们可以预测nmDMD患者的功能丧失，包括行走能力丧失的速度和进展。¹⁹因此，当没有其他方法时，TFT和NSAA是评估药物益处的有用方法。

由于在患罕见遗传病的低龄群体中评估有效性的难度，公认的实践表明，从低龄患者群体获得的PK和安全性数据一旦证明与对照的高龄患者群体相关，则将允许从高龄患者群体中推断有效性数据。这种比较是一种可接受的方法，并且可能是证明药物对≥2岁至<5岁nmDMD患者群体有益的唯一可行方法。相对血药水平和药物安全性(相对于在高龄儿童中的血药水平和药物安全性)可能表明在低龄群体中具有相对有效性和有利的获益风险特征。除了PK和安全性数据外，有效性的推断还可以基于其他因素，包括使用相同的研究药物、相对剂量水平、作用机制、预期的疾病进展以及可测量的生物标志物的产生。

NCT02819557研究的局限性包括样本量小和缺乏用于正式有效性评估的对照组。在低龄患者群体中推荐使用稀疏PK采样，结合使用受限于使用传统方法计算PK参数的程度的群体PK分析。此外，还必须谨慎解释对有关群体(2～5岁年龄范围内的nmDMD患者)的有效性评估，因为该年龄组的儿童预期在这段时间内会改善和/或开始稳定他们的运动功能。因此，目前尚不清楚有多少功能改善可归因于阿塔鲁伦治疗。¹⁴此外，如本文所述的TFT和NSAA结果表明，阿塔鲁伦治疗对低龄nmDMD患者有益，如在阿塔鲁伦治疗第28周和第52周获得的数据所示。如本文所述由TFT结果所证明的阿塔鲁伦治疗效果与时间相关：1).走下4级楼梯，2).爬上4级楼梯，3).仰卧起立，和4).步行/跑步10米，在整个研究期间，以上各项均显示出相对于基线期(baseline)的整体改善。此外，平均16项NSAA得分显示出相对于基线期的改善，类似的改善也见于8项和3项NSAA评估，尽管由于后者评估中的封顶效应(ceilingeffect)而程度较低。

在nmDMD急患群体(instant nmDMD patient population)中，在≥2岁至<5岁的患者中达到阿塔鲁伦的最佳血药浓度范围有望证明在≥5岁的患者中观察到的类似的长期治疗益处。因此，通过将本研究中获得的低龄患者群体(≥2岁至<5岁)中的阿塔鲁伦的安全性和PK结果与早期的研究中从高龄nmDMD群体(≥5岁)中获得的阿塔鲁伦的安全性和PK结果进行比较，可以推断出对低龄群体有效性的可能性。

由于针对低龄nmDMD患者群体缺乏治疗选择，预期从高龄nmDMD患者群体中推断出阿塔鲁伦的安全性、有效性和PK结果可能表明，尽管与DMD相关的功能下降不可遏止，但低龄nmDMD患者群体的抗肌萎缩蛋白恢复治疗可以确保功能维持更长的一段时间，因此满足急切未满足的医疗需求。

实例

在早期的研究中，对从高龄nmDMD群体(≥5岁)获得的阿塔鲁伦的安全性、有效性和PK结果进行比较，是一种统计学上可接受的证明对低龄nmDMD群体(≥2岁至<5岁)疗效可能性的方法，它依据针对低龄nmDMD群体获得的安全性和PK结果。

低龄群体中阿塔鲁伦的血药水平和安全性被确定为与见于高龄儿童中的相似的。因此，可以预期具有类似的有效性和获益风险特征。本研究的局限性在于样本量小且缺乏用于正式有效性评估的对照组。使用初始PK(在第0、1、2、4、6、8、10小时采样)，然后进行群体PK分析(根据24小时内估计的暴露量(estimated exposure)确定平均血药浓度)，限制可以用常规方法计算的PK参数。在任何情况下，对儿科nmDMD群体的任何有效性评估都必须与该年龄组患者在运动功能开始稳定时预期达到的发育转折点相平衡。因此，由于随着低龄患者的年龄增长，运动功能不可避免地逐渐受损，必须评估此类并发因素(如本文所述和所显示的TFT和NSAA结果)。

对如下所述的儿科患者进行与阿塔鲁伦治疗相关的安全性和PK的检查，阿塔鲁伦治疗根据如下表I中简述的NCT02819557临床试验：

表1：临床方案概要

研究药物

本研究中使用的研究药物阿塔鲁伦呈白色至米黄色混悬粉末/颗粒形式，被包装在防止儿童抚弄的铝箔小包或小袋中。每个小包或小袋包含占总制剂重量25％的药物。

研究设计

研究药物总剂量每日40mg/kg，每日分三剂给药。第一剂给药：早上10mg/kg，第二剂给药：中午10mg/kg，和第三剂给药：晚上20mg/kg。

剂量根据患者基线期时的体重。在每次就诊时评估体重。如果患者体重较基线变化≥10％，则重新计算实际剂量。

在诊所给予第一剂研究药物并记录给药日期和时间。在研究的PK部分给药持续4周，并在扩展期再持续给药48周。扩展期旨在评估阿塔鲁伦在这个患者群体中的长期安全性和有效性。

评估包括基因测序的血液采样、阿塔鲁伦PK的血液采样、生命体征、身高、体重、健康体检、血液学尿液分析、12导联心电图、适口性问卷(palatability questionnaire)、不良事件(AE)、合并用药(concomitant medication)和非DMD相关的不良事件。为获得单剂量和稳态血药浓度，在第1天(第2次就诊)和第28天(第3次就诊)给药前和给药后1、2、4、6、8和10小时采集血样。使用经验证的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定阿塔鲁伦血药浓度，定量下限(LOQ)为0.500μg/mL。有效性评估包括如下所述修订的TFT和NSAA。

治疗方案

如上所述，患者接受了52周的阿塔鲁伦治疗。每名患者开始服用的剂量取决于他们的体重(以公斤为单位)。研究药物采用TID给药，早上一剂10mg/kg、中午一剂10mg/kg和晚上一剂20mg/kg。由单位剂量包的组合中根据患者体重给予剂量，单位剂量包(unit dosepackage)选自一个或多个包含125、250或1000mg研究药物的箔纸小包或小袋。

剂量根据患者基线期时的体重。在每次就诊时评估体重。如果患者体重较基线变化≥10％，则重新计算给药剂量。

每份药剂在饭后约30分钟内服用。给药间隔为早上一剂和中午一剂之间约6小时(±1小时)，中午一剂和晚上一剂之间约6小时(±1小时)，晚上一剂和次日早上一剂之间约12小时(±1小时)。每份制备的药剂在制备后立即给药。如果冷藏(2℃至8℃)条件下制备后24小时内未服用，或在室温(15℃至30℃)条件下3小时内未服用，则制备的药剂应丢弃。诊所工作人员向每名患者或父母/护理人员说明对于每份药剂从每个试剂盒中取出的具体小袋数量，并提供有关药物制备的详细口述指导。此外，在分发药物时，向患者或父母/护理人员提供关于药物混合和剂量的详细书面说明。

统计学上的考虑

本研究的12名患者的目标样本量并非基于正式的统计学上的考虑。群体PK模拟的初步结果表明，即使通常存在受试者中途退出和/或样本缺失的可能性，本研究设计(样本量和稀疏抽样策略(sample size and sparse sampling strategy))会为PK参数(CL/F和Vd/F)的预测提供足够的精度。^20,21

在每次就诊和时间点按剂量水平总结阿塔鲁伦的血药浓度观察值。计算了描述性统计数据(n、平均值、标准偏差[SD]、变异系数[CV％]、中位数、最小值和最大值)和几何平均值及其CV％。使用实际采样和给药次数得出PK参数(AUC_0-6、AUC_0-10、C_max(0-6h)、Ctrough(0-6h)、tmax(0-6h)、积累比(AR)(AUC)、AR(C_max))。为了计算非房室模型分析(NCA)参数，将低于LOQ的浓度设置为零。

对于计时功能测试(TFT)，分别对四个测试进行结果分析，结果总结了基线值(研究第1天)、基线后值和较基线值的变化，包括完成以下各项所需的时间i)步行/跑步10米，ii).爬上4级楼梯，iii).走下4级楼梯，和iv).仰卧位起立。10m步行/跑步测试评估1次。如果执行TFT的时间超过30秒，或者如果受试者由于疾病进展而无法执行TFT，则为了总结分析设置30秒的值。使用描述性统计数字总结了以秒为单位的时间值：n、平均值、标准偏差、中位数、区间和95％置信区间。针对评估群体，相应地总结了观察值以及TFT中较基线的变化。

修订了NSAA 16分制量表的某些评估以反映儿科患者群体的发育阶段，例如从总体中删除了“抬头(Lifts Head)”，进一步修订了NSAA量表上的第3项和第8项，以测出在低龄儿科患者中的变化。^18,22对所有受试者(n＝14)使用相同的分析。

结果

共筛选入组14名nmDMD儿科患者；所有患者均纳入安全性、PK和可评估群体，并且都完成了研究，包括PK和扩展阶段。所有受试者均为男性，平均年龄为3.4岁(2岁至4岁)；6名(占42.9％)受试者在基线期时服用皮质类固醇。阿塔鲁伦的剂量根据每公斤(kg)患者体重毫克(mg)药物，每12周评估1次。所有患者均在研究的PK部分期间持续4周和扩展期期间持续48周每日给予40mg/kg剂量的阿塔鲁伦，每日分三次给药，分别为早上10mg/kg、中午10mg/kg和晚上20mg/kg。扩展期旨在评估阿塔鲁伦在这个患者群体中的长期安全性和有效性。获得的结果提供了对阿塔鲁伦的安全性、PK和潜在临床益处的必要评估，其中阿塔鲁伦在这个儿科群体中持续52周给药。

现有群体药代动力学模型

扩展模型(2013/2014)适用于按时间排序的数据集，数据集包括来自研究026和030的数据，这些数据与之前用于开发模型的数据(不包括来自nmCF患者的数据)汇总。由2013/2014的群体PK分析发现使用具有一级吸收率(first order absorption)和线性清除率(linear clearance)的二室模型实现了对来自健康成人、nmDMD患者和nmCF患者的汇总数据的最稳健拟合。吸收率取决于剂量，以及相对生物利用度取决于时间(随时间降低)、制剂(第1天)或疾病状态(稳态)。表观口服清除率和中央室的体积与体重有关，昼夜变化的影响也包括在清除率中。此模型在本文中称为“nmDMD相对F模型(2017)”，被认为是健康志愿者和2岁及以上nmDMD患病儿童的最终群体PK模型。

使用nmDMD相对F模型(2017)和nmDMD清除模型(2017)比较稳态暴露量(Steady-State Exposures)

为了评估nmDMD患者中预测阿塔鲁伦的暴露量的灵敏度，使用以下两种模型计算了AUC_0-24、C_ave和C_max的事后估计值：nmDMD相对F模型(2017)和nmDMD清除模型(2017)。如表2所示，竞争模型倾向于预测第1天的较低暴露量和稳态时的较高暴露量。虽然无法明确评估哪个模型提供更准确的暴露量，但重要的是注意到，从两个模型预测的暴露量的差异总体上相对较小。因此，当比较两个模型时，C_ave的整体分布在稳态下没有显著差异。

表2：单个暴露量估计值的百分比差异

Note:Abbreviations are provided in the Abbreviation Listing.

药代动力学

表3中提供了平均(SD)阿塔鲁伦血药浓度-时间曲线。曲线在第1天和第28天遵循类似模式，对于大多数受试者，在早上一剂后约2小时和早上一剂后8小时(即中午一剂后2小时)观察到峰值浓度。在第一剂后6小时给予第二剂。如表3所示，一些PK参数的值在每次就诊(visit)中相似，并支持每次给药没有药物累积，其中提供AUC以(h*μg/mL)为单位，血药浓度以(μg/mL)为单位，tmax(0-6h)为(h)为单位，以及AUC_0-6的累积比(AccumulationRatio,AR)和Cmax(0-6h)的累积比分别为0.99和1.02，这表明没有明显的累积。

表3.阿塔鲁伦血浆药代动力学结果

药代动力学结果

计算所有14名受试者的阿塔鲁伦PK。对于第2次就诊和第3次就诊提供了AUC_0-6,AUC_0-10,C_max(0-6h),C_trough@6h和t_max(0-6h)的数据。在两次PK就诊时，平均血药浓度-时间曲线遵循相似的模式。AUC_0-6和C_max的累积比分别为0.99和1.02。

有效性评估

图中显示治疗28和52周后对阿塔鲁伦有效性的评估。在第28周和第52周，使用阿塔鲁伦治疗显示计时功能测试较基线的改善。在这些分析中，1名患者在第28周未完成任何TFT，因此未包括在任何第28周的TFT分析中。除了该患者之外，第2名患者缺乏走下4级楼梯的基线时间，因此未包括在28周或52周的走下4级楼梯的分析中。

在研究中获得的功能性结果如图1A、1B、1C和1D所示。如图1A所示，在第28周(在本分析中包括的12名患者中)，走下4级楼梯所需的平均时间(SD)较平均基准7.1秒减少了0.6(±1.93)秒，在第52周(在包括的13名患者中)，走下4级楼梯所需的平均时间较平均基准7.5秒减少了2.2(±2.58)秒。对比结果表明，第28周和第52周的平均改善程度百分比(SD)分别为7.17(±26.43)％和24.22(±28.32)％。

如图1B所示，在第28周(N＝13)(在数据采集的13名患者中)，爬上4级楼梯的平均时间减少了1.8(±4.85)秒，在第52周(在数据采集的14名患者中)，爬上4级楼梯的平均时间减少了2.6(±5.0)秒。比较第28周和第52周的结果表明各自的平均改善百分比(SD)分别为9.10(±29.63)％和23.36(±26.25)％。

如图1C所示，仰卧站立的评估在第28周评估的患者(N＝13)和第52周评估的患者(N＝14)中，相比基准的平均改善程度相似。

如图1D所示，基线期10米步行/跑步评估的平均时间为6.7(±2.46)秒(在评估的13名患者中)，并且显示在第28周平均值较基线值减少0.8(±1.54)秒和在第52周平均值较基线值较少1.1(±1.35)秒(在评估的14名患者中)。对比结果表明，第28周和第52周的平均改善程度百分比分别为8.35％和14.54％。

如图2A、2B和2C所示，在本研究中获得了北极星移动评价量表(NSAA)结果。与TFT分析中讨论的结果相似，在第28周未完成NSAA的患者被排除在分析之外。然而，所有患者都包括在基线期和第52周评估中。

如图2A所示，比较了在第28周和第52周获得的16项NSAA的结果。在第28周，NSAA总分的平均(SD)值为19.8(±6.17)(N＝13)(在数据采集的13名患者中)，相比基线值16.2(±4.76)，提高了3.5(±3.43)分，或24.88％。在第52周，NSAA总分的平均(SD)值为21.5(±6.48)(N＝14)(在数据采集的14名患者中)，相比基线值16.0(±4.66)，提高了5.5(±4.43)分或36.63％。

如图2B所示，比较了在第28周和第52周获得的8项NSAA的结果。在第28周，8项NSAA评分的平均(SD)值为12.1(+3.12)(N＝13)，相比基线值10.5(±2.67)，提高了15.14％。在第52周，8项NSAA评分的平均(SD)值为12.8(+3.12)(N＝14)，相比基线值10.5(±2.56)，提高了23.31％。

如图2C所示，比较了在第28周和第52周获得的3项NSAA的结果。在第28周，3项NSAA评分的平均(SD)值为5.8(±0.38)(N＝13)，相比基线值5.4(±0.65)提高了10.26％。在第52周，3项NSAA评分的平均(SD)值为5.6(+0.63)(N＝14)，相比基线值5.4(±0.63)，提高了6.31％。

有效性结果

全部计时功能测试评估都显示出相对于基线的整体改进。

在第28周(第5次就诊)和第52周(第7次就诊)，走下4级标准楼梯所需的平均(SD)时间分别减少了7.17(26.433)％和24.22(28.322)％。爬楼梯测试也出现了相似的趋势，第28周和第52周的平均(SD)改善程度分别为9.10(29.630)％和23.36(26.249)％。

第28周与第52周的仰卧站立的评估的改善程度相似。十米跑步/步行评估显示，第28周和第52周的平均(SD)改善程度分别为8.35(22.778)％和14.54(14.862)％。与基线值16.0(4.66)相比，16项NSAA总分的平均值(SD)有所提高。

第28周的总分的平均(SD)值(n＝13)是19.8(6.17)，提高了24.88(27.203)％。第52周的总分的平均(SD)值(n＝13)是21.5(6.48)，提高了36.63(29.956)％。

在8项和3项NSAA分量表中得出了相似的改善，但程度较小。在适口性方面，10名(71.5％)调查对象根据孩子的反应同意或强烈同意药物令人愉快，而2名(14.3％)调查对象不同意。只有2名(14.3％)调查对象表示在给患者服用药物时遇到了问题。

可以对如下所述的儿科患者进行与阿塔鲁伦治疗相关的安全性和PK的检查，阿塔鲁伦治疗根据如下表2中简述的NCT02819557临床试验：

表2：临床方案概要

参考文献

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⁹Bushby K,Finkel R,Wong B,等人；PTC124-GD-007-DMD STUDY GROUP[PTC124-GD-007-DMD研究组].Ataluren treatment of patients with nonsense mutationdystrophinopathy.Muscle Nerve.2014Oct[阿塔鲁伦治疗无义突变肌营养不良症患者.肌肉神经.2014年10月]；50(4):477-87.doi:10.1002/mus.24332

¹⁰McDonald CM,Campbell C,Torricelli RE,等人；Clinical EvaluatorTraining Group；ACT DMD Study Group[临床评价员培训组；ACT DMD研究组].Atalurenin Patients With Nonsense Mutation Duchenne Muscular Dystrophy(ACT DMD):amulticentre,randomised,double-blind,placebo-controlled,phase3trial.Lancet.2017Sep 23[阿塔鲁伦治疗无义突变杜氏肌营养不良症(ACT DMD)患者:一项多中心、随机、双盲、安慰剂对照的III期试验.柳叶刀.2017年9月23日]；390(10101):1489-1498.doi:10.1016/S0140-6736(17)31611-2

¹¹PTC Therapeutics.2014.PTC Therapeutics receives conditional approvalin the European Union for Translarna^TMfor the treatment of nonsense mutationDuchenne muscular dystrophy[PTC治疗公司.2014年.PTC治疗公司获得欧盟有条件批准Translarna^TM用于治疗无义突变杜氏肌营养不良症].获取自:http://ir.ptcbio.com/releasedetail.cfm？releaseid＝863914

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¹⁷Connolly AM,Florence JM,Cradock MM,Eagle M,Flanigan KM,McDonald CM,等人.One-year outcome of boys with Duchenne muscular dystrophy using theBayley-III scales of infant and toddler development.Pediatr Neurol.2014Jun[使用贝利III型婴幼儿发育量表获得杜氏肌营养不良症男孩的1年结果.小儿神经病学杂志.2014年6月]；50(6):557-63

¹⁸Mercuri E,Coratti G,Messina S,Ricotti V,Baranello G,D'Amico A,PeraMC,Albamonte E,Sivo S,Mazzone ES,Arnoldi MT,Fanelli L,De Sanctis R,Romeo DM,Vita GL,Battini R,Bertini E,Muntoni F,Pane M.Revised North Star AmbulatoryAssessment for Young Boys with Duchenne Muscular Dystrophy.PLoS One.2016Aug 5[经修订的针对杜氏肌营养不良症低龄男孩的北极星移动评价量表.美国公共科学图书馆期刊.2016年8月5日]；11(8):e0160195.doi:10.1371/journal.pone.0160195

¹⁹McDonald CM,Henricson EK,Abresch RT,等人.The 6-minute walk test andother endpoints in Duchenne muscular dystrophy:longitudinal natural historyobservations over 48weeks from a multicenter study.Muscle Nerve[杜氏肌营养不良症的6分钟步行试验和其他终点:多中心研究中超过48周的纵向自然史观察.肌肉神经],2013；48:343-56

²⁰US Food and Drug Administration[美国食品药品监管管理局].GeneralClinical Pharmacology Considerations for Pediatric Studies for Drugs andBiological Products.Guidance for industry[药物和生物制品在儿科研究中的一般临床药理学注意事项.行业指南].2014.https://www.fda.gov/downloads/drugs/guidances/ucm425885.pdf

²¹Wang Y,Jadhav PR,Lala M,Gobburu J.Clarification on precisioncriteria to derive sample size when designing pediatric pharmacokineticstudies.J Clin Pharmacol[关于在设计儿科药代动力学研究时推导出样本量的精确性标准的阐述.临床药理学杂志].2012；52:1601-1606.2012

²²Mayhew AG,Cano SJ,Scott E,等人.Detecting meaningful change using thenorth star ambulatory assessment in Duchenne muscular dystrophy.Dev Med ChildNeurol[在杜氏肌营养不良症中使用北极星动态评估检测有意义的变化。Dev Med儿童神经元].2013；55(11):1046–52

^23:Institute for Clinical Pharmacodynamics,Inc.[临床药理学研究所有限公司]Population pharmacokinetic analysis of ataluren in healthy subjects andpatients with either nonsense mutations cystic fibrosis or nonsense mutationdystrophinopathy.Final Report.ICPD no.00321-1.October 20,2014[阿塔鲁伦在健康受试者和无义突变囊性纤维化患者或无义突变肌营养不良症患者中的群体药代动力学分析.国际人口与发展会议总结报告编号00321-1.2014年10月20日]

应当理解，虽然在此描述的具体方面是出于说明的目的，但是本说明书的范围不受在此公开的具体方面的限制。这些方面旨在作为说明书的几个方面的说明。任何等效方面都旨在包含于本说明书的范围。实际上，除了本文所示和所描述的那些内容，对本说明书的各种修改对本领域技术人员来说将变得显而易见于前述描述，所述修改也旨在包含于本说明书的范围。

Claims (7)

1.一种在杜氏肌营养不良症(nmDMD)人类儿科患者中改善或控制无义突变介导的杜氏肌营养不良症的方法，所述方法包括根据患者体重，对年龄在大于或等于两岁至小于五岁之间的患者给予治疗有效量的阿塔鲁伦口服以达到在24小时内至少约1μg/mL至约20μg/mL的平均血药浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述患者的年龄在大于或等于6个月至小于两岁之间。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述治疗有效量的阿塔鲁伦为根据患者体重每日40mg/kg的阿塔鲁伦；且所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述每日40mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂10mg/kg、中午一剂10mg/kg和晚上一剂20mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述治疗有效量的阿塔鲁伦为根据患者体重每日80mg/kg的阿塔鲁伦；且所述达到的平均血药浓度在24小时内为至少约1μg/mL至约20μg/mL。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述每日80mg/kg的治疗有效量按以下方式给药：早上一剂20mg/kg、中午一剂20mg/kg，和晚上一剂40mg/kg；所述早上一剂与中午一剂的时间间隔为6小时；所述中午一剂与晚上一剂的时间间隔为6小时；且所述晚上一剂与次日的早上一剂的时间间隔为12小时。

7.根据权利要求4或6所述的方法，其中所述一剂可选地在进餐30分钟内给药。

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