CN114002172B - 一种可视化评价蜂王浆质量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种可视化评价蜂王浆质量的方法，属于食品检测技术领域，所述方法包括以下步骤：(1)10‑羟基‑2‑癸烯酸提取；(2)取Ag(I)与步骤(1)中10‑羟基‑2‑癸烯酸依次装载于容器中，进行孵育；(3)显色反应：取四甲基联苯胺加入步骤(2)中得到的混合液，进行孵育；(4)对步骤(3)中孵育后混合液进行分析，获取结果。10‑羟基‑2‑癸烯酸是评价蜂王浆质量的重要指标，本发明通过一种操作简单、成本低且结果可靠的方式实现了对10‑羟基‑2‑癸烯酸的检测，并达到了区分普通蜂蜜和蜂王浆，评价蜂王浆质量的目的。

Description

一种可视化评价蜂王浆质量的方法
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及可视化评价蜂王浆质量的方法。
背景技术
蜂王浆具有抗氧化、抗增殖、抗菌和神经保护等优越的生理功能，是最有前途的功能食品之一，在食品、制药、化妆品等行业得到广泛应用。蜂王浆与普通蜂蜜相比，最显著的是10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)，这是蜂王浆中存在的一种独特的功能成分，占游离脂肪酸的50％以上。10-羟基-2-癸烯酸作为蜂王浆中具有特殊保健和医疗功效的主要功能成分，已被发现具有抗微生物、抗炎、抗衰老、抗肿瘤、免疫调节等多种生理作用，对癌细胞有较强的抑制作用。此外，它还可用于治疗急性辐射损伤和修复化学物质造成的损伤。与蜂王浆中其他成分相比，10-羟基-2-癸烯酸的含量非常稳定，可以作为确定蜂王浆质量水平的关键生物标志物。
迄今为止，液相色谱-质谱联用和高效液相色谱(HPLC)等传统方法被公认为10-羟基-2-癸烯酸检测的金标准。此外，研究人员已经开发了薄层色谱、毛细管电泳和近红外光谱等方法，但在实际应用中并不普遍。复杂的萃取和衍生、耗时的操作以及对先进仪器和技术人员的需求等限制因素阻碍了传统方法在资源受限环境中的应用。在实际样品中进行10-羟基-2-癸烯酸检测时，如何快速、高灵敏度地分析蜂王浆中10-羟基-2-癸烯酸的含量并方便读取仍然是一个挑战。因此，开发一种简便、高效的10-羟基-2-癸烯酸检测方法对于区分普通蜂蜜和蜂王浆，评价蜂王浆质量具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简单、效率高、成本低且结果可靠的方式来实现可视化评价蜂王浆质量。
为了达到上述目的，本发明提供了一种可视化评价蜂王浆质量的方法，包括以下步骤：(1)10-羟基-2-癸烯酸提取：将蜂王浆样品溶解于盐酸和水混合液中，然后加入乙醇提取10-羟基-2-癸烯酸，随后超声水浴15分钟，300r/min离心10分钟，最后通过滤膜去除杂质备用；(2)取Ag(I)与步骤(1)中10-羟基-2-癸烯酸依次装载于容器中，进行孵育；(3)显色反应：取四甲基联苯胺加入步骤(2)中得到的混合液，进行孵育；(4)对步骤(3)中孵育后混合液的紫外-可见吸收光谱652nm处，进行分析，获取结果。
优选地，在步骤(4)，所述获取结果的方式为对混合液紫外-可见吸收光谱652nm处进行定量分析。
优选地，在步骤(1)，所述的10-羟基-2-癸烯酸，其储存温度为4℃。
优选地，在步骤(2)，所述孵育的温度为25℃，孵育的时长为5分钟。
优选地，在步骤(2)，所述Ag(I)的浓度为100μM。
优选地，在步骤(2)，所述10-羟基-2-癸烯酸与Ag(I)的体积比为1:1。
优选地，在步骤(3)，所述孵育时长为10分钟。
优选地，在步骤(3)，所述四甲基联苯胺的浓度为200μM。
优选地，在步骤(4)，所述获取结果的方式为采用智能手机读取混合液的RGB值进行半定量分析。
本发明的有益效果为：
(1)利用Ag(I)的竞争性消耗特性，实现对10-羟基-2-癸烯酸含量的检测，无需复杂的萃取和衍生、耗时的操作以及先进的仪器，具有操作简单、效率高、成本低且结果可靠的特点，适合在蜂王浆质量评价上进行应用推广。
(2)比色传感策略的显色性显著，可以肉眼直接对10-羟基-2-癸烯酸进行定性检测，也可以通过智能手机读取RGB值进行半定量分析，提高了检测的可适用性。
附图说明
图1为本发明提供的一种可视化评价蜂王浆质量的方法流程图。
图2为本发明基于Ag(I)和四甲基联苯胺的比色传感法对10-羟基-2-癸烯酸进行检测的线性范围。
图3为本发明分别采用比色传感法和高效液相色谱法对蜂王浆样品进行检测的结果。
图4通过智能手机读取混合液RGB值，采用红蓝比(R/B值)进行半定量分析。
其中(A0-A)/A0表示四甲基联苯胺的氧化状态，A表示有10-羟基-2-癸烯酸存在时，体系在652nm处的吸光度，A0表示没有10-羟基-2-癸烯酸时的吸光度。
具体实施方式
下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的技术手段。
实施例1使用比色传感法对纯品10-羟基-2-癸烯酸进行检测
取纯品10-羟基-2-癸烯酸，基于Ag(I)和四甲基联苯胺的比色传感法，通过调整10-羟基-2-癸烯酸浓度从0μM增加到30μM，对10-羟基-2-癸烯酸的灵敏性进行了检测。
Ag(I)作为一种重要的中间体，可以与10-羟基-2-癸烯酸螯合，同时可以氧化四甲基联苯胺生成浅蓝色的ox-四甲基联苯胺，使10-羟基-2-癸烯酸检测的灵敏度提高。灵敏性检测结果如图(2)所示，随着10-羟基-2-癸烯酸浓度从0μM增加到30μM,652nm处吸收峰下降，溶液由亮蓝色变为无色。根据(A0-A)/A0值，10-羟基-2-癸烯酸检测的线性范围为1～10μM,R2＝0.9898，10-羟基-2-癸烯酸的检出限为0.13μM(S/N＝3)。
实施例2使用比色传感法对蜂王浆样品进行检测
取15个蜂王浆样品，按照优等品、合格品、不合格品分成三组。使用本方法对分组样品一一进行检测，单一样品检测步骤如下：
(1)从样品中提取10-羟基-2-癸烯酸
取出0.5g蜂王浆样品，置于50mL烧瓶中。加入1mL 0.03M盐酸和2mL水来溶解样品。然后加入30mL乙醇提取10-羟基-2-癸烯酸，并补充至刻度线。随后超声水浴15分钟，300r/min离心10分钟，最后通过滤膜去除杂质，4℃保存备用。
(2)操作方法
在检测前，四甲基联苯胺溶解于DMSO中，Ag(I)溶于蒸馏水中。
在96孔板中，每个孔依次装载100μL不同浓度的10-羟基-2-癸烯酸和100μL终浓度约为100μM的Ag(I)。25℃孵育5min后，在孔中加入100μL四甲基联苯胺(终浓度为200μM)溶液进行显色反应，氧化反应持续约10分钟。随后在所得混合液紫外-可见吸收光谱652nm处进行定量分析。并结合智能手机等便携式设备读取混合液RGB值，采用红蓝比(R/B值)进行半定量分析。
(3)检测结果
定量分析结果如图(3)中比色传感法柱状图所示，半定量分析结果如图(4)所示。
实施例3使用传统的高效液相色谱法对蜂王浆样品进行检测
取15个与实施例2中相同的蜂王浆样品，按照优等品、合格品、不合格品分成三组。使用传统的高效液相色谱法对分组样品一一进行检测，检测结果如图(3)中高效液相色谱法柱状图所示。
由上述实施例可知，本发明提供的一种可视化评价蜂王浆质量的方法，操作简单、检测结果可靠、可适用性强，并达到了区分普通蜂蜜和蜂王浆，评价蜂王浆质量的目的。
尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。在本领域技术人员阅读了上述内容后，对于本发明的多种修改和替代都将是显而易见的。因此，本发明的保护范围应由所附的权利要求来限定。

Claims (5)

1.一种可视化评价蜂王浆质量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)10-羟基-2-癸烯酸提取：将蜂王浆样品溶解于由盐酸和水组成的混合液中，然后加入乙醇提取10-羟基-2-癸烯酸，随后超声水浴15分钟，300r/min离心10分钟，最后通过滤膜去除杂质备用；
(2)取Ag(I)与步骤(1)中10-羟基-2-癸烯酸依次装载于容器中，进行孵育；
(3)显色反应：取四甲基联苯胺加入步骤(2)中得到的混合液，进行孵育；
(4)对步骤(3)中孵育后混合液进行分析，获取结果；
在步骤(2)，所述Ag(I)的浓度为100μM；
在步骤(2)，所述10-羟基-2-癸烯酸与Ag(I)的体积比为1:1；
所述获取结果的方式为对混合液紫外-可见吸收光谱652nm处进行定量分析；
在步骤(3)，所述四甲基联苯胺的浓度为200μM；
10-羟基-2-癸烯酸检测的线性范围为1～10μM，R2＝0.9898，10-羟基-2-癸烯酸的检出限为0.13μM，S/N＝3。
2.如权利要求1所述的一种可视化评价蜂王浆质量的方法，其特征在于，在步骤(1)，所述的10-羟基-2-癸烯酸，其储存温度为4℃。
3.如权利要求1所述的一种可视化评价蜂王浆质量的方法，其特征在于，在步骤(2)，所述孵育的温度为25℃，孵育的时长为5分钟。
4.如权利要求1所述的一种可视化评价蜂王浆质量的方法，其特征在于，在步骤(3)，所述孵育时长为10分钟。
5.如权利要求1所述的一种可视化评价蜂王浆质量的方法，其特征在于，在步骤(4)，所述获取结果的方式还包括采用智能手机读取混合液的RGB值进行半定量分析。
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