CN113993614A - 用于基板处理和印刷的方法和设备 - Google Patents
用于基板处理和印刷的方法和设备 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113993614A CN113993614A CN202080042185.6A CN202080042185A CN113993614A CN 113993614 A CN113993614 A CN 113993614A CN 202080042185 A CN202080042185 A CN 202080042185A CN 113993614 A CN113993614 A CN 113993614A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- printing
- test material
- slides
- slide
- printed
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000007639 printing Methods 0.000 title claims abstract description 143
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 85
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 98
- 238000012545 processing Methods 0.000 title description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 107
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 155
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 108
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 74
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 60
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 58
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims description 47
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 38
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 19
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 claims description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 2
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 claims description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 abstract description 17
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 52
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 52
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 31
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 14
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 6
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 6
- 238000003498 protein array Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 238000003374 lysate array Methods 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007641 inkjet printing Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 238000011898 label-free detection Methods 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011528 liquid biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000001531 micro-dissection Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J19/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J19/0046—Sequential or parallel reactions, e.g. for the synthesis of polypeptides or polynucleotides; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making molecular arrays
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/00351—Means for dispensing and evacuation of reagents
- B01J2219/00378—Piezoelectric or ink jet dispensers
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00277—Apparatus
- B01J2219/00497—Features relating to the solid phase supports
- B01J2219/00527—Sheets
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00583—Features relative to the processes being carried out
- B01J2219/00603—Making arrays on substantially continuous surfaces
- B01J2219/00659—Two-dimensional arrays
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/0068—Means for controlling the apparatus of the process
- B01J2219/00693—Means for quality control
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
- B01J2219/0072—Organic compounds
- B01J2219/00725—Peptides
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J2219/00—Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
- B01J2219/00274—Sequential or parallel reactions; Apparatus and devices for combinatorial chemistry or for making arrays; Chemical library technology
- B01J2219/00718—Type of compounds synthesised
- B01J2219/0072—Organic compounds
- B01J2219/0074—Biological products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B60/00—Apparatus specially adapted for use in combinatorial chemistry or with libraries
- C40B60/08—Integrated apparatus specially adapted for both creating and screening libraries
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/00029—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor provided with flat sample substrates, e.g. slides
- G01N2035/00099—Characterised by type of test elements
- G01N2035/00158—Elements containing microarrays, i.e. "biochip"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices
- G01N2035/1027—General features of the devices
- G01N2035/1034—Transferring microquantities of liquid
- G01N2035/1041—Ink-jet like dispensers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用于制造微阵列的方法和装置，其中，微阵列包括多个点，用于测试生物分子的相互作用。本文公开的是一种用于提高布置成阵列的多个载玻片或板上点位置的覆盖印刷效率的方法，其中，载玻片或板顺序由行和列提供。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于制造微阵列的方法和装置，其中，微阵列包括多个点，用于测试生物分子的相互作用。
背景技术
微阵列在生物分子(例如基因组DNA、cDNA、寡核苷酸序列、蛋白质和抗体等)的研究中很重要。微阵列可用于生物分子相互作用的分析，例如测量蛋白质结合。将生物分子印刷到基板上允许对大量样品进行分析。
微阵列可以印刷在基材(适当地为载玻片(slide))上，以在基材上提供试剂或生物分子的有序阵列。印刷可以借助包括分配印刷头(例如喷墨印刷头)的阵列印刷机。
使用喷墨印刷头，包含试剂和/或生物分子的液体点可以准确地位于基材上。通常，分配印刷头装载有试剂或生物分子。正常地，待印刷的基板被装载到盘上，并且印刷头在随后的印刷阶段(print pass)中相对于盘移动以在完成印刷作业时印刷所有基板。多个盘可以按行和列提供，每个盘包括待在其上印刷试剂的基板。
当制造微阵列时，正常需要将每种液体的一个、两个、三个或更多个点印刷到大量(数十到数百个)基板/载玻片中的每一个上。鉴于此，通常会有非常大量(数百至数万)不同的液体待印刷到基板上，因此印刷过程可能会很长。
专利申请WO 02/11889公开了一种方法，其中具有多个腔室的喷墨印刷头可用于同时印刷多种不同的液体，每个腔室与喷嘴相关联。尽管腔室通过印刷头内部的一个或多个歧管连接，但印刷可以在液体之间没有交叉污染的情况下进行。液体经由连续的喷嘴组被引入到相关联的腔室中，并在它们有时间通过扩散混合之前被印刷。因此，处理多种液体提供了减少微阵列生产中所需的大量印刷所花费的时间的可能性。
如果大量基板(例如载玻片)待打印，则基板的面积可能太大而无法允许它们布置在一个平面中，以便在印刷期间轻松访问。因此，在用于印刷的平面中布置更小的基板(载玻片或板)组是唯一可行的。然后，没有正在被印刷的组的载玻片可以被存储或保持在与印刷平面不同的平面中。由于载玻片不占用大量体积，因此将载玻片存储在多层堆叠体(multilayer stack)中可能会很方便。然而，转入和转出存储不可避免地要占用一些时间，这与使制造时间最小化的需求相冲突。
可以获得用以鉴定可能涉及疾病过程或涉及治疗疾病或病症的感兴趣的化合物或分子的测定。例如，目前使用液体活检或细胞和组织裂解物的反相蛋白质阵列(reversephase protein array,RPPA)，该反相蛋白质阵列允许从人血清、唾液、尿液、显微解剖或其他生物流体或组织制备的样品的生物标志物筛选。在这类反相蛋白质阵列中，可以将蛋白质样品印刷到基板上以形成微阵列。这些微阵列可以提供高密度的蛋白质样品。通常，在蛋白质样品印刷到基板上之后，蛋白质样品会被阻断以减少与样品的非特异性结合，然后基板与靶向生物标志物的抗体和互补标记的抗体偶联物顺序温育，在每次温育之间和每次温育之后进行洗涤步骤(可以应用其他步骤来放大获得的信号)。然后，获得标记样品的定量测量，以提供每个经印刷蛋白质样品中存在的特定蛋白质水平的详细信息。使用基于平面波导的场荧光激发的进步已经显著提高了读出灵敏度(Ayoglu等,2011,专家评论(ExpertReviews),使用微阵列的基于系统性抗体和抗原的蛋白质组学分析(Systematic antibodyand antigen based proteomic profiling with microarrays))。然而，由于沉积在阵列表面上的样品体积非常小，因此存在与此类反相阵列应用相关联的固有读出灵敏度。因此，反相蛋白质阵列通常仅适用于分析中等至高丰度的蛋白质靶标。
为提供足够的通量(throughput)时间，鉴定涉及疾病过程或参与治疗疾病或病症的感兴趣的化合物或分子的先前的测定方法通常涉及试剂全面处理阵列表面(blankettreating the array surface)，包括洗涤步骤、结合配偶体(binding partner)和抗原结合配偶体。在这类情况下，阵列的两个斑点之间的表面类似地用试剂处理。这可能会导致高背景噪音问题，特别是如果抗原结合成分(antigen binding member)对抗原缺乏高度特异性。
发明内容
本发明人开发了一种用于点对点印刷(spot on spot printing)的系统，而不是全面处理阵列表面。在这类点对点印刷系统中，在基板上印刷第一次处理、将基板移出印刷床(以在经印刷基板上执行临时处理或为在其他基板上的临时印刷留出空间)、然后在基板上印刷第二次处理时，需要高水平的准确性。存在准确性缺乏或准确性不足可能引发印刷错误的风险，例如由于印刷床高度和基板位置的微小变化，这足以由于微阵列印刷所需的高容差而使测定无效。本发明使这种不准确性的风险最小化。
本发明的方法可以特别用于组合文库筛选。组合文库筛选可以是一种测定，在该测定中，筛选第一潜在结合配偶体的文库，以用于第一潜在结合配偶体与一个或多个第二潜在结合配偶体的相互作用。在组合文库筛选期间，将通量最大化很重要，因为增加潜在结合配偶体的数量会以指数方式增加待筛选的第一潜在结合配偶体和第二潜在结合配偶体的组合数量。对于待筛选多个第二潜在结合配偶体的组合文库筛选测定，情况尤其如此。优化组合文库筛选方法需要组织效率。
由于在分析结合分子之间的相互作用时、用反相蛋白质阵列方法的局限性，因此，有利的是，如果可以印刷包含潜在结合配偶体对(partner pair)的第一成分的第一点，然后印刷覆盖第一点的第二点，其中第二斑点包含潜在结合配偶体对的第二成分。本发明人认为，本发明人人考虑覆盖印刷(也称为点对点印刷)以减少当试图检测潜在结合配偶体对的第一成分与潜在结合配偶体对的第二成员之间的相互作用时的总体背景信号。然而，由于在点对点印刷中基板的位置和方向的可重复性至关重要，特别是在基板上印刷至少一个第一点并将基材移出印刷床(以在经印刷基板上执行临时处理或为在其他基板上的临时印刷留出空间)、然后在基板上印刷至少一个第二点的应用中，点对点印刷在大量载玻片上的印刷中面临技术挑战。如果在至少一个第二点的印刷期间，基板(载玻片)不在与前一层的印刷中所使用的相同位置和方向上，由于微阵列点对点印刷所需的公差，则下一点很可能不会显著覆盖前一点，从而使测定无效。例如，用于在第一次印刷时保持在第一位置和在第二次印刷中保持在第二位置的基板的印刷床的安装导轨的微小变化可能会妨碍准确的点对点印刷，并使测定无效。
本发明人确定了一种使用点对点印刷并提供改进的分析物检测的方法。不希望受理论束缚，认为改进的检测是由于以下因素而提供的：
-例如当与反相蛋白质微阵列相比时，观察到的背景降低；和
-由于因为两种组分的印刷将它们提供到相同位置，改进特异性结合成分(例如抗体或其片段和分析物/抗原(例如由细胞裂解物提供))的接近性(proximity)，因此改进反应动力学。
因此，本发明的第一方面提供了一种方法，该方法用于提高布置成阵列的多个载玻片或板上的点位置的覆盖印刷的效率，其中，载玻片或板顺序由行和列提供，该方法包括以下步骤：
-以印刷顺序将第一测试材料的至少一个点印刷到n列阵列中板的第一行(r1)板上，以至少在板r1n1和复制板(replicate plate)r1n2上提供第一测试材料，该第一测试材料包含第一类型的第一潜在结合配偶体对；
-以印刷顺序将第二测试材料的至少一个斑点印刷到n列阵列中板的第二行(r2)上，以至少在板r2n1和复制板r2n2上提供第二测试材料，该第二测试材料包含第二类型的第一潜在结合配偶体对；
-印刷第一覆盖材料的点，以覆盖至少第一测试材料的点和/或至少第二测试材料的点，该第一覆盖材料包含第一类型的第二潜在结合配偶体对，其中，当印刷覆盖材料时，在与施用测试材料的相同位置处提供板。
适当地，在测试材料与覆盖材料的印刷之间，阵列中的板被重新布置(重新排序)以将板重新排序，从而使覆盖材料的印刷效率最大化。
适当地，在板的重新布置或重新排序之后，提供第一覆盖材料以覆盖至少第一测试材料的点和/或至少第二测试材料的点，而不需要在行之间移动印刷头。
有利地，该方法允许更高通量的印刷，并因此允许更高通量的筛选。
有利地，每个板或载玻片需要处于相同的载玻片位置和“行”以进行印刷1(裂解物或第一结合配偶体)和印刷2(杂交瘤或第二结合配偶体)。这确保了位置的准确性。
如将在本文中理解的，盘(tray)位置描述了行位置，而载玻片位置描述了列位置。
在本申请中，根据以下条件鉴定载玻片：
-载玻片位置(列)：S
-盘：T
-样品名称(例如裂解物)：L
因此，印刷运行(print run)可能包括：
S1T4L16＝载玻片1、盘4、裂解物16
S1T3L11＝载玻片1、盘3、裂解物11
S1T2L6＝载玻片1、盘2、裂解物6
S1T1L1＝载玻片1、盘1、裂解物1
有利地，在实施方案中，该方法允许多种不同裂解物的印刷，例如在一次印刷运行中印刷100种不同的裂解物，然后将这些裂解物放置在与它们被印刷的相同位置上，使得可以提供覆盖印刷运行。
有利地，该方法允许确定特异性结合成分(亲和试剂，适当地为抗体)与未知分析物的经印刷微阵列形式上的分析物(适当地为未知分析物、适当地为细胞或细胞衍生产物)之间的正相互作用。适当地，分析物可以包括至少一种细胞或细胞裂解物，例如分析物可以是癌症细胞或癌症细胞裂解物、或来自测试受试者的血液或组织的细胞或裂解物。适当地，分析物可以是来自至少一种细胞裂解物的蛋白质。
适当地，为了允许以改进的检测水平检测结合配偶体之间的结合，可以有利地利用改进的阻断和标记技术来提高结合配偶体(例如印刷到基板上的蛋白质/细胞样品中的结合蛋白质配偶体)的检测。额外地，可以优化已经在其上印刷了蛋白质/细胞样品的基板，以允许改进的蛋白质样品的结合和呈现。
进行覆盖印刷的困难包括：待印刷到基板上的大量不同液体、印刷过程可能非常漫长、以及对能够将一个点印刷在另一个点顶部上的印刷技术的准确性要求。
相对于印刷运行所需的量，分配印刷头的装载可能需要显著量的试剂或生物分子，因此进行印刷使得装载步骤的数量最小化是有利的。此外，在引入下一液体集之前印刷头的清洁需要时间，因此进行印刷使得清洁步骤的数量最小化是有利的；因此，一旦已经将液体集引入印刷头中，有利地，该液体集应该在另一液体集被装载之前印刷到所有载玻片上。
为了通过使清洁步骤的数量最小化来使通量的增加最大化，使用大量载玻片是有益的。在另一液体集被装载之前印刷到所有载玻片上通过所使用的载玻片数量来限制测定。如前所述，如果载玻片的表面积太大而无法允许载玻片在多层印刷期间被布置在平面中以便于访问，则布置更小的基板(载玻片或板)组进行印刷是可行的，从而将基板组存储在印刷层之间的多层堆叠体中。
为了克服通过组合筛选测定的印刷中的结合配偶体中途被污染或印刷错误的问题，以及防止由于在印刷层之间的不同位置和方向上印刷板而导致的印刷错误，发明人开发了一种选择性基板(载玻片或板)重新排序的方法，该方法在不受可用印刷区域限制的情况下通过使清洁步骤最小化而使通量最大化。
适当地，在该方法中，提供测试材料的多个点以复制行(r)或特定盘(如上所述的t)中的载玻片或板，例如用第一测试材料的至少一斑点依序印刷r1n1和r1n2的所有板。
适当地，当板设置在印刷机中与施用测试材料时相同的位置处时，沿着连续的载玻片行，将覆盖材料提供到测试材料的点。例如，当覆盖第一材料时，覆盖材料的印刷不需要印刷头在行之间移动。
适当地，在该方法中，载玻片可以是矩形的，每个载玻片具有两个长边和两个短边。
适当地，在该方法中，在每一行中，多个载玻片(Sr)’的子组可以用第一测试材料(t1)印刷。这提供了复制载玻片，每个复制载玻片提供行中列的第一位置(例如：r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1)。
有利地，为了处理10,000个杂交瘤，可以提供每种测试材料(裂解物)5个载玻片以允许5轮20次串级印刷运行(concatenated print run)。
有利地，可以提供每种测试材料(裂解物)1、2、3、4、5、6、8、12、24、25个载玻片的子组。在该方法的实施方案中，可以提供25个载玻片的盘。在这些实施例中，盘提供成行，但是将理解的是，该盘提供了行的子组。对于2、3、4、6、8、12和24，每个盘的最大载玻片数可以是24。然而，如将理解的，如果提供包含超过25个载玻片的盘，则可以提供不同的印刷格式。
在实施方案中，例如在子组是5个载玻片的情况下，在该方法中，在每行中，用第一测试材料(t1)印刷五个复制载玻片，每个复制板提供行中列的第一位置(例如：r1n1t1、r1n2t1、r1n3t1、r1n4t1、r1n5t1)。
适当地，可以基于以下输入(ArrayPlex确定)来确定要使用的测试材料(例如裂解物数量(L))：
·结合配偶体印刷运行(例如杂交瘤印刷运行数量(H))
·载玻片数量(S)
·盘数量(T)
·每个子运行的载玻片(Sr)＝5
·运行次数/周期(Rc)＝20
·每次总运行的载玻片(St)＝100
·每个盘的载玻片＝25
基于以上数据，计算出以下偏移量：
结合配偶体偏移(例如杂交瘤偏移)＝MOD(Rc*(Sr-(H-1))，St)；这提供了(基于以上)：
结合配偶体偏移(例如杂交瘤偏移)＝Ho＝MOD(20*(5-(H-1))，100)；
载玻片位置＝Sp＝MOD(S-1,25)+1；
载玻片偏移＝So＝MOD((载玻片位置-1)*20，100)；
子运行偏移＝Sro＝QUOTIENT(Sp-1,5)；
盘偏移＝To＝(T-1)*5；
测试材料(例如裂解物)＝L＝MOD(Ho+So+Sro+To，100)；
其中，MOD是模块运算(一个数除以另一个数后的余数)。图19显示了使用这些参数的结果。如将理解的，如果子运行中的载玻片数量从5变化，则ArrayPlex确定也相应改变。
适当地，在这些实施方案中，在相邻载玻片布置成行的情况下，至少5个复制载玻片布置成行，使得载玻片的短边在行中彼此相邻。适当地，载玻片布置成列，使得载玻片的长边在列中彼此相邻。
在图13-15中示出了这种选择性基板重新排序的实施方案。
适当地，如图13所示，在第1行第1、2、3、4和5列印刷至少第一测试材料的5个复制品。适当地，可以在第1行第6、7、8、9和10列印刷第二测试材料。适当地，可以在第1行第11、12、13、14和15列印刷第三测试材料。适当地，可以在第1行其他列中、例如第1行第25列印刷其他测试材料。
适当地，如图所示，可以在第2行第1、2、3、4和5列印刷其他测试材料。适当地，在第二行中，可以在第2行第6、7、8、9和10等列印刷额外测试材料。
适当地，如图所示，可以在第3行第1、2、3、4和5列印刷其他测试材料。适当地，在第三行中，可以在第3行第6、7、8、9和10等列印刷额外测试材料。
适当地，如图所示，可以在第4行第1、2、3、4和5列印刷其他测试材料。适当地，在第4行中，可以在第4行第6、7、8、9和10等列印刷额外测试材料。
因此，在该实施方案中，每行中5个载玻片或板的块(block)可以提供有单独的测试材料。出于说明目的，图13已细分为5个子组，然而，该表旨在以25列×5行为连续的。如将理解的，第一材料不仅可以被印刷或沉积到四行，而且可以根据需要扩展以提供要测定的结合配偶体的总数。这是有利的，因为批(batch)顺序印刷允许使用待在第二印刷运行中使用的、例如第二/第三/第四或第五批中印刷的载玻片，以便点对点地印刷第二材料。
这导致每个板/载玻片包括至少一种测试材料的板/载玻片的不同排序，其中每个板/载玻片可以由行(盘)和载玻片(列)位置定义。这在例如图14中示出。
适当地，在覆盖材料的印刷之前，载玻片/板被选择性地重新排序，使得基板保持相同的载玻片和盘位置，但基板被重新排序以允许第一、第二和第三批在相同的印刷运行中用不同的覆盖材料印刷，这大幅增加了被测样品的数量，从而增加了通量。
如图15所示，通过将覆盖物1印刷在第1行第1-25列上，将覆盖物2印刷在第2行第1-25列上等，这种选择性的重新排序使得覆盖材料可以跨单行地连续地印刷。这使印刷头中材料的改变最小化，并因此通过减少清洁步骤的数量而增加了通量。
同时，通过用与测试材料印刷期间相同的列和行位置上的载玻片印刷覆盖材料，印刷床高度和基板位置的差异被最小化，从而确保了位置准确性并允许准确的、可重复的点对点印刷，其中由于基板总体上大于可用印刷区域，基板必须在印刷层(例如存储在多层堆叠体中的)之间移动。
覆盖印刷的替代实施方案是在多行上印刷相同的覆盖材料。这在盘中产生各基板的“重复(repeat)”。此实施方案防止了贯穿印刷运行中途出现污染或印刷错误——例如，在盘长度为5(因此单位单元为5列×5行)、且在第4行期间出现印刷覆盖材料印刷错误的策略中，所有测试材料将具有至少3次重复，这足以达到统计显著性(尽管5+是优选的)。
适当地，还可以通过测试材料重复载玻片、然后使用相同的覆盖材料，来提供相同测试的重复。
上述实施方案的替代方案是载玻片在印刷层之间不重新排序；在覆盖材料在第4行期间出现印刷错误的这种场景下，将不会再第5行中进行测试材料的实验。由于这些实验可能非常耗时且昂贵，因此此类场景尤其浪费。本方法特别适合于昂贵、稀有、耗时或易于印刷错误的覆盖材料。
适当地，为每次覆盖印刷运行提供四行和25列，并提供覆盖测试材料的五次印刷运行，其中载玻片被重新排序，使得：
1.将第一测试材料印刷运行的第一行位置和第一列位置的载玻片设置为第一覆盖材料印刷运行的第一行位置和第一列位置。
2.将第一测试材料印刷运行的第一行位置和第二列位置的载玻片设置为第二覆盖材料印刷运行的第一行位置和第二列位置，
3.将第一测试材料印刷运行的第一行位置和第三列位置的载玻片设置为第三覆盖材料印刷运行的第一行位置和第三列位置，
4.将第一测试材料印刷运行的第一行位置和第四列位置的载玻片设置为第四覆盖材料印刷运行的第一行位置和第四列位置；
5.将第一测试材料印刷运行的第一行位置和第五列位置的载玻片设置为第五覆盖材料印刷运行的第一行位置和第五列位置；
6.使得在印刷运行中，将裂解物印刷运行中每个载玻片的行和列位置用覆盖材料保持。
本发明的另一实施方案在图17-18中示出，使用行(重复5次的盘1-4，(T))×25列(载玻片位置，S)的基板来用四种覆盖材料(T)测定100种测试材料(裂解物(L))。
最初，如图17所示，测试材料沿行(即第1行第1-25列，然后是第2行第1-25列，然后是第3行第1-25列等)印刷，然后如图18所示，基板被选择性重新布置，且覆盖材料沿行(即第1行第1-25列，然后是第2行第1-25列，然后是第3行第1-25列等)印刷。
从第一测试材料的印刷到第二覆盖材料的载玻片移动可以描述为如附图中所提供的。
适当地，第一潜在结合配偶体(测试材料)可以是分析物，例如分析物可以是蛋白质、蛋白质片段、完整细胞、完整细胞上提供的受体、细胞裂解物中提供的受体、融合蛋白或核酸序列等。
适当地，第二潜在结合配偶体(覆盖材料)可以是特异性结合分子，适当地选自包括抗体或抗体片段(例如单链抗体)、小分子、适体(aptamer)、核酸分子的组，例如siRNA、DNA、PCR扩增子或合成的生物分子(例如嵌合蛋白)。
将理解的是，作为测试材料的组分的第一潜在结合配偶体和作为覆盖材料的组分的第二潜在结合配偶体的位置可以颠倒，即第一潜在结合配偶体作为覆盖材料的组分，并且第二潜在结合配偶体作为测试材料的组分。
适当地，提供了一种用于对特异性结合分子的分析物的检测的方法，该特异性结合分子例如是抗原结合成分(抗体或其片段)，该方法包括：
i)
a)将测试材料印刷到基板上，该测试材料例如是细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分；
b)将覆盖材料印刷到在步骤a)中提供在基板上的细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分上，该覆盖材料例如是对测试材料具有结合特异性(例如对待检测的分析物具有结合特异性)的抗原结合成分；
并且然后
c)将测试材料和覆盖材料温育，以使待检测的测试材料和覆盖材料之间发生结合，例如将测试材料和抗原结合成分温育，以使抗原结合成分和待检测的分析物之间发生任何特异性结合；
d)检测测试材料和覆盖材料的结合，例如在步骤c)之后检测抗原结合成分与分析物的结合。
认为与通过反相蛋白质阵列(RPPA)方法的检测相比，本方法将提供分析物检测的改进。适当地，与RPPA相比，检测的改进检测到至少两倍、至少三倍、至少四倍、至少五倍、至少六倍、至少七倍、至少八倍、至少九倍、至少十倍的点对点印刷。
适当地，抗原结合成分可以由抗体或杂交瘤或另一种抗体产生细胞、或适体或小分子或任何其他亲和试剂提供。
适当地，该方法包括用细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分印刷基板，然后通过将特异性结合分子/抗原结合成分直接印刷到分析物上，将细胞、细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分暴露于特异性结合分子/抗原结合成分，其中特异性结合分子/抗原结合成分以及细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物或细胞裂解物的一部分被温育约0.1、1、5、10、20、30、40、50小时以使抗原结合分子和分析物之间发生任何特异性结合。
适当地，细胞、细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分可以是或来自动物细胞(特别是人细胞)、细菌细胞、真菌细胞或植物细胞。适当地，细胞、细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分可以来自癌症细胞。适当地，细胞或细胞裂解物组合物可以来自细菌。适当地，细胞或细胞裂解物可以来自植物。适当地，细胞裂解物组合物可以是纯化的肽或蛋白质。
适当地，检测步骤可以利用任何免疫组织化学方法，例如荧光、比色、量子点、生物素/亲和素或无标记检测技术(例如表面细胞质基因组共振(surface plasmonresonance))。分析物与特异性结合分子/抗原结合成分之间的正关联的鉴定可以通过本领域已知的适当技术(例如荧光、比色免疫测定、聚合法)来确定。适当的荧光标记可以包括例如荧光、异硫氰酸酯(isothiocyante)、双丹酰氯(didansyl chloride)、镧系元素或本领域已知的其他荧光标记。
适当地，该方法还可包括以下步骤：将特异性结合分子与第一细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分的结合图案、与特异性结合分子与第二细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分的结合图案进行比较。
适当地，基板可以是生物测试中常用的任何基板，例如玻璃载玻片、功能化玻璃载玻片、塑料、硝化纤维、尼龙膜、SPR棱镜、MEMS装置、微流体芯片、聚苯乙烯、聚碳酸酯、PVDF(聚偏二氟乙烯)、金属或这些材料的组合物和混合物等。适当地，可以用有助于细胞或细胞悬浮液或细胞材料与基板的结合的组合物或化合物来涂覆基板。适当地，可以向基板提供组合物或化合物，以在分析物被印刷到基板上时帮助在基板表面上形成离散的点或图案。适当地，该方法的灵敏度可以通过将细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分的多个液滴印刷到吸收性基板的相同位置上来提高，该吸收性基板将分析物(例如蛋白质)捕获在它们遇到的初始孔/结合位点内并允许溶剂和离子溶质通过。这应该允许增加固定的分析物的量，例如每单位面积的蛋白质。
温育后，可以检测印刷在基板上的分析物与印刷在分析物上的抗原结合成员之间的任何关联。分析物与抗原结合成分之间的检测可以通过本领域已知的任何方法进行。适当地，检测可以使用可与特异性结合分子/抗原结合成分相关联的标记亲和试剂来进行。亲和试剂的标记可以通过例如使用荧光标记、比色标记、放射性标记或用于增强化学发光的酶进行。
本发明的方法允许鉴定和表征先前未知或未定义的分析物，例如受体、或细胞上的蛋白质或细胞衍生组合物，例如组合物可以是从细胞(例如细胞因子)分泌的；或者是在细胞(例如细胞质、细胞核或细胞膜组分)的裂解或透化(permeabilisation)时释放的组合物。
细胞裂解物组合物可以包括生物聚合物，例如DNA和RNA以及蛋白质、糖蛋白、聚糖、脂质和糖脂或任何其他生物聚合物。细胞组合物可以直接或适当地印刷到基板上，基板可以被功能化以允许细胞或细胞组合物的结合或改进的结合。适当的细胞或细胞组合物可以包含来自正常或癌性组织的单细胞或细胞悬浮液。适当地，组织可以选自心脏、脑、肝脏、前列腺、乳腺、结肠、肺、皮肤或身体的其他癌性组织。
在实施例中，本发明的方法提供了鉴定杂交瘤及其靶抗原/分析物的高通量方法，其中靶抗原/分析物是未知的。在这样的实施例中，可以从B淋巴细胞创建杂交瘤的初级文库，该B淋巴细胞从患有一种或多种癌症的动物(特别是人)中分离。适当地，细胞或细胞裂解物的二级文库的离散液滴被印刷到基板上。例如，细胞或细胞裂解物可以来自健康或携带疾病(例如癌症)的动物来源的组织活检。细胞或细胞裂解物可以印刷在基板上的预定位置处以提供裂解物特征的阵列。杂交瘤上清液的初级文库可以被精确地印刷在基板上印刷的细胞或细胞裂解物的顶部上，并温育以允许由杂交瘤上清液提供的抗体与印刷的细胞或细胞裂解物组合物中提供的靶抗原/分析物之间的结合。
该方法还可以包括在温育步骤之后洗涤基板以去除未与细胞或细胞裂解物组合物特异性结合的未结合抗原结合成分的步骤。适当地，检测步骤可以包括使用标记的二抗(例如荧光标记的抗体)检测阳性/特异性抗原结合成分与抗原/分析物结合。
适当地，检测步骤允许量化抗原结合成分的结合。适当地，检测步骤或进一步的步骤允许鉴定由印刷到细胞或细胞裂解物组合物上的抗原结合成分结合的抗原/分析物。
适当地，在步骤b)中的印刷步骤之前，提供阻断细胞或细胞裂解物的步骤。适当地，可以使用化学或生物阻断剂。适当地，可以使用牛血清白蛋白溶液。
适当地，可以使用杂交瘤提供抗原结合成分。杂交瘤可以通过已知方法提供，例如可以用一种抗原或多种抗原来使动物免疫。动物的脾可以被取出并破碎以形成悬浮液，并且悬浮的脾细胞可以与骨髓瘤细胞融合并培养数天，使得未融合的脾细胞和骨髓瘤细胞死亡，而融合的骨髓瘤和脾细胞存活。
替代地，抗原结合成分可以由杂交瘤或抗体等的文库提供。替代地，可以通过合成克隆技术、或通过使用来自表现出疾病状态或感染的受试者的脾的B细胞，来产生杂交瘤。
适当地，可以通过非接触式压电喷墨印刷将抗原结合成分(例如，抗体或杂交瘤)提供到印刷到基板上的细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分上，使得抗原结合成分与分析物接触并暴露于分析物，以允许抗原结合成分与分析物之间的特异性结合。替代地，可以通过能够点对点印刷的任何其他沉积或印刷技术将抗原结合成分提供给基材。适当地，可以采集个体肿瘤的样品或活检，并将将样品印刷到基板上，并且可以针对这些印刷的样品筛选抗原结合成分、抗体或杂交瘤，且可以确定抗原结合成分与提供在基板上的未知分析物的特异性结合。
能够与来自细胞或细胞悬浮液的分析物特异性结合的抗原结合成分的鉴定可以允许新疗法的开发或疾病和病症的治疗。例如，治疗性抗体、特别是治疗性单克隆抗体的鉴定。
该筛选方法能够高通量和快速分析无限增值化B细胞(immortalised B-cell)的大型文库群，以鉴定那些能够产生抗体的B细胞克隆，该抗体能够特异性结合提供在基板上的分析物。
本文中公开的方法可用于鉴定印刷在基板上的未知分析物，该未知分析物可与未知抗原结合成分特异性结合。未知抗原结合成分可以从文库等提供。适当地，细胞裂解物文库可以从活检样品或培养细胞中制备。适当地，细胞裂解物文库可以通过在裂解缓冲液(例如RIPA缓冲液)中均质化细胞来获得。适当地，可以改变裂解物浓度以提供500μg/μl的浓度。裂解物文库可以在特定的印刷条件(例如4℃和75％RH)下印刷到基板(例如硝化纤维素)上。基板可以在4℃和75％RH下温育过夜以允许固定。适当地，可以提供至少第二温育期(例如30℃持续1小时)以完成固定。适当地，基板可以被阻断，例如使用2.5％BSA(不含IgG)。阻断可以在室温下持续约90分钟。可以用合适的缓冲液洗涤基板并干燥(例如通过离心)。基板可以放置在阵列器中以在其上进一步印刷。杂交瘤/抗体文库可以通过在裂解物阵列的顶部上印刷来提供。杂交瘤/抗体文库可以以特定浓度提供，例如0.01至10μg/ml。适当地，杂交瘤/抗体文库可以在RPMI培养基和甘油(例如80％RPMI和20％甘油)中提供。基板可以例如在4℃和75％RH下温育过夜。然后，可以洗涤和干燥基板。可以将二抗施用到基板或施用到基板的印刷区域。基板可以在室温下温育例如90分钟。可以将基板洗涤，然后干燥。可以使用本领域合适的任何方法来检测杂交瘤/抗体文库与裂解物阵列的结合。可以分析从检测步骤获得的数据。
适当地，本发明的方法每次测试可仅使用100pL～1mg/ml的裂解物和100pL抗体。
根据本发明的另一方面，提供了一种诊断病症的方法，该方法包括：
使用本发明的第一方面的方法确定测试材料样品中分析物的存在，
其中，当检测到特异性结合分子(在覆盖材料中提供的)和分析物复合物(complex)时，指示病症。
如将理解的，特异性结合分子和分析物复合物的检测可能需要从特异性结合分子和分析物复合物之间的结合的对照水平改变以指示病症。
根据本发明的另一方面，提供了一种用于提供本发明的第一方面的方法的系统，其中该系统包括印刷机，该印刷机适于：
a)以下中的一种：
i)细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分；或
ii)对分析物具有结合特异性的特异性结合分子；
被印刷到基板上；
b)印刷以下中的另一种：
i)对在步骤a)i)中提供在基板上的细胞或细胞悬浮物或细胞裂解物组合物或它们的一部分上的待检测分析物具有结合特异性的特异性结合分子，或
ii)提供在特异性结合分子上的细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分，该特异性结合分子对步骤a)ii)中提供在基板上的待检测的分析物具有结合特异性。
适当地，该系统可以包括在印刷机或印刷头周围的环境受控模块。适当地，该模块在印刷机和正在印刷的载玻片周围提供温度受控环境。适当地，温度可以控制在0至25℃的范围内，适当地在0至10℃的范围内，适当地在2至4℃的范围内。适当地，该模块在印刷机周围提供4℃+/-2℃的温度受控环境。适当地，环境受控模块可以是绝缘腔室以控制印刷载玻片的温度。适当地，这样的腔室可以被密封，使得腔室内的湿度可以被控制。
控制载玻片/基板的印刷和存储的环境可以有利地防止在温育之前和温育期间印刷材料的干燥，使得可以在第一结合成分与第二结合成分之间发生结合。适当地，对载玻片的环境的控制使印刷中使用的材料(包括测试材料和覆盖材料)的变性最小化。控制湿度可以调节溶剂(包括水)进入和离开点的扩散速率，从而调节基板上的液滴润湿、以及在其中的化合物因干燥而面临变性风险之前点对点印刷之间所允许的时间。
适当地，该系统包括在印刷机/印刷头周围的环境受控模块，并使得印刷的载玻片可以在该模块内温育。
适当地，环境控制模块可以允许在载玻片的印刷和/或载玻片的温育期间印刷机/印刷头周围的湿度受到控制。适当地，可以控制湿度，使得在印刷期间湿度为60％RH，并且在温育期间湿度为80％RH。适当地，腔室可以由低体积腔室提供，该腔室可以被密封以允许当在印刷运行之间印刷和存储载玻片时、载玻片处的温度和/或湿度受到控制。适当地，低体积腔室可具有小于4立方米、适当地小于或等于2立方米的空气体积。如本领域中将理解的，较低的空气体积通常更容易控制。
根据本发明的另一方面，提供了一种用于提供本发明第一方面的方法的试剂盒，其中该试剂盒包括基板，在基板上：
i)细胞或细胞悬浮液、或细胞裂解物组合物或它们的一部分，或
ii)对分析物具有结合特异性的特异性结合分子，
中的一种被印刷，以用于印刷系统中，该印刷系统可以印刷以下中的另一种：
-对在步骤i)中提供在基板上的细胞或细胞悬浮物或细胞裂解物组合物或它们的一部分上的待检测的分析物具有结合特异性的特异性结合分子，或-提供在特异性结合分子上的细胞或细胞悬浮液或细胞裂解物组合物或它们的一部分，该特异性结合分子对步骤ii)中提供在基板上的待检测的分析物具有结合特异性。
该试剂盒可以包括使用该试剂盒的说明。该试剂盒可以包含用于检测特异性结合成分与分析物的结合的试剂。
附图说明
现在将仅通过示例的方式参考以下附图描述本发明的各种实施方案，在附图中：
图1示出了用分析物/抗原(例如细胞裂解物)文库印刷的功能化玻璃载玻片；
图2示出了直接印刷在抗原文库顶部上的分析物/抗原结合剂(例如杂交瘤)文库；
图3示出了洗涤步骤之后非结合分析物/抗原结合剂被洗掉；
图4示出了用标记的二级亲和试剂(例如抗体)检测的分析物/抗原的特异性结合；
图5示出了直接印刷在印刷的裂解物文库上的分析物/抗原结合剂文库的高分辨率扫描；
图6示出了从点对点印刷实施例中生成的数据，在该实施例中，针对十六种细胞裂解物以四种不同的浓度筛选了四种不同的抗体。平行地，进行了两个RPPA实验，比较了单一浓度(0.1μg/mL)的两种对照抗体(EGFR和2C8)对包括在点对点印刷实施例中的十四种细胞裂解物(A431、A549和SKMEL28)的反应性。在点对点阵列图像中，框标签突出显示了每种抗体+裂解物组合四个点的组，并且图表上的数据代表0.1μg/mL抗体(在图像上，这是从每个框顶部起的第三个点)；
图7示出了点对点研究，其中针对16种细胞裂解物筛选了四种浓度四种抗体和上清液；
图8示出了从两种对照抗体(EGFR和2C8)对三种细胞裂解物(A431、A549和SKMEL28)的反应性的比较研究中生成的数据；
图9示出了RPPA实验，其中相对于细胞裂解物A431、A549和SKMEL28，抗体2C8以0.1μg/mL提供；
图10示出了RPPA实验，其中相对于细胞裂解物A431、A549和SKMEL28，EGFR抗体以0.1μg/mL提供；
图11示出了从四种裂解物(A431、A549、SKMEL28和HT29)与抗体2C8(0.1μg.ml)的相互作用的比较中生成的数据，并显示使用点对点(B)的信号比使用RPPA(A)的信号高出＞10倍；
图12是用于印刷的设备的平面图；
图13A示出了在水平布置的子组中的基板配置上测试材料的印刷运行，而图B示出了在垂直布置的子组测试材料的印刷运行；
图14示出了图13的基板的选择性重新排序；
图15示出了在图14中示出的重新排序的基板上印刷覆盖材料；
替代地，图16示出了在基板配置上测试材料的印刷运行、基板的选择性重新排序和覆盖材料的两种印刷策略；
图17示出了板上测试材料的盘布置；
图18示出了针对20种不同的测试材料的测试材料的第一印刷层的印刷图案；
图19示出了覆盖材料的印刷图案；
图20示出了使用这里指定的参数的模块操作的使用，以示出印刷期间载玻片的移动；
图21在A中示出了位置1的所有载玻片被指定为S1，在B中示出了在同一盘或行中的载玻片由第二位置指示符T1、T2、T3或T4指定，在本实施例中，裂解物为5批；
图22示出了在重新排序的载玻片中第二结合成分(杂交瘤)的印刷以及第一印刷结合成分(裂解物)的保持位置；
图23A、B、C和D以展开图示出了图13B；
图24以放大图示出了图14；以及
图25以放大图示出了图15。
定义
在整个说明书中，除非上下文另有要求，否则术语“包括(comprise)”或“包含(include)”、或诸如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”、“包含(includes)”或“包含(including)”的变体将被理解为暗示包括所陈述的整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。
在说明书和权利要求中使用的表示数量、百分比或比例以及其他数值的所有数字应理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。
应当理解，本文所用的术语“一”和“一个”是指“一个或多个”所列举的组分。本领域普通技术人员将清楚，除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。
如本文所用，除非上下文另有要求，否则术语“基板”、“载玻片”和“板”将被视为可互换的同义词。
具体实施方式
如本文中所述的印刷方法可以利用本领域已知的专利申请WO2004/028683中所讨论的印刷设备。因此，适当地，印刷设备可以包括压板(platen)、四个保持架(cage)和线性导轨。每个保持架可以是矩形金属框架，该框架具有一系列垂直堆叠的基板(板或载玻片)盘支承件，该支承件为向内突出的壁架(ledge)形式。保持架可以成形为接收多个基板盘，并且每个盘保持待印刷的载玻片的线性阵列。每个载玻片盘可以纵向定向城横跨压板的宽度，并且盘的长度可以大于压板的宽度。
在本文讨论的特定实施方案中，盘内载玻片的布置是载玻片的线性阵列，例如二十五个载玻片的线性阵列。
现在将描述印刷第一点的设备的操作。本发明通过提供载玻片的存储、检索、印刷和重新排序的快速手段，提供了印刷大量基板的有效手段。
该布置减少了用不同液体重新装载印刷头的需求。这在液体有价值且仅少量可用的情况下特别合适。如上所述，将液体装载到印刷头中不可避免地是浪费的，因为每种液体只有一部分被有效地印刷。喷墨印刷头会产生非常小的液滴，因此一旦将液体被引入印刷头中，印刷头就可以印刷非常大量的点。
这种方法的另一个优点是可以印刷比适合压板的盘数量更多的托盘：一个或多个保持架可用于在不印刷盘时存储盘、将盘送入压板进行印刷、之后将盘移除。在每个保持架中，多个盘可以在架子上叠放；一个或多个保持架可以垂直向下移动，以便将盘依次放置在压板上以准备印刷。垂直向上移动的一个或多个其他保持架可以在之后将盘移除。在印刷头的印刷行程期间，保持架可以在压板固定的情况下执行这些功能。因此，将盘装载到压板上和从压板上卸下不需要增加在机器中印刷载玻片的总数所花费的时间；该方案在速度上相当于使用大到无法容纳所有盘的压板的系统。这例如在WO2004/028683中进行了讨论。
这种方法的另一个优点是保持架及其运动不需要是精确的：如果盘配备有与压板上的匹配特征接合的位置特征，则将每个盘装载到压板上的动作确保了盘相对于压板的准确定位。唯一需要准确的参数是印刷头安装、印刷头的运动、压板的位置特征及其运动。这两种运动都是一维的。
发明人已经确定了，本文中描述的点对点方法可以提供分析物与特异性结合分子之间结合的检测的改进灵敏度(更高的信噪比)。额外地，认为点对点方法可以提供改进的阳性与阴性样品(杂交瘤上清液)之间的区分、改进的通量和更低的背景。
认为该方法比其他筛选技术(如RPPA(反相蛋白质阵列)、质谱、蛋白质印迹或ELISA)具有优势，因为该方法允许未知抗体的大型文库与待特异性检测的未知分析物/抗原中的大型文库以高通量的方式结合。作为参考，认为单个操作员将被限制在一个工作周内使用ELISA或蛋白质印迹生成估计2000个数据点(即一种抗原结合剂与一种分析物的结合能力的特定测试)，这将允许与本测试相同的灵敏度，而本方法可以在同一时期中提供例如200万个数据点。
还认为，本文中描述的点对点方法可以有利地提供特异性结合分子数量的减少——例如利用的抗体，例如对于等效测试，比RPPA少四个数量级的抗体(例如，RPPA将使用～100μl的一抗来检测100种裂解物，而本方法可能使用～0.01μl)。认为本方法每次测试仅需要100pL的～1mg/ml的裂解物和100pL的抗体。认为使用ELISA、蛋白质印迹或质谱法测试结合需要显著增加体积的裂解物和/或抗体。
还认为本方法是有利的，因为本方法允许在单个实验中针对抗体文库筛选裂解物文库，例如因为可以在细胞裂解物的点位置处印刷不同的抗体，而RPPA通常只允许要针对裂解物文库筛选单一抗体。例如，本发明的方法可以允许在包含62,500个特征的基板(载玻片)的单一部分上针对250个杂交瘤筛选250种裂解物，而RPPA将需要250个载玻片。
本方法可以有利地允许鉴定特异性结合成分与分析物之间的正相互作用。虽然质谱法可以提供样品中可能存在的一种或多种蛋白质的增加的粒度，但解决这些问题是质谱法的固有挑战，因为丰度最高的蛋白质(例如肌动蛋白)将与丰度较低(但更感兴趣)的蛋白质(例如细胞因子)竞争检测。从信息学的角度来看，质谱法也是资源密集型的。如上所述，本发明的方法可以允许在单个实验中针对多种抗体筛选裂解物文库。质谱法通常只允许针对单一分析物筛选单一抗体。
实施例
实施例1
在2x蛋白质印刷缓冲液C(Arrayjet Ltd，英国)(PPBCx2)中以1:1稀释之前，将裂解物文库归一化至2.5mg/mL。在PPBCx2中以1:1稀释之前，将阴性对照样品(PBS中的BSA)归一化至1mg/mL。在PPBCx2中以1:1稀释之前，以2μg/mL制备阳性对照样品(PBS中的IgG)。
在4℃和80％相对湿度(％RH)下，使用Arrayjet Marathon系列喷墨生物印刷机(Arrayjet Ltd，英国)将200pL的裂解物文库和对照样品印刷到PATH硝酸纤维素载玻片(亘喜生物公司(Grace Bio,Inc.),俄勒冈州,美国)上。载玻片在4℃和80％RH下温育过夜。然后，载玻片在30℃下温育1小时。然后，载玻片在PBS-T(不含IgG)中用5％BSA阻断30分钟。用PBS-T、PBS和蒸馏水连续三次洗涤30分钟，洗掉过量的阻断试剂。将载玻片干燥。将印刷缓冲液中的200pL特异性结合剂(抗体)印刷到每个裂解物文库上，从而确保了将特异性结合剂直接在所印刷的裂解物点的顶部上印刷。使用4℃和80％RH的印刷条件。
用PBS-T、PBS和蒸馏水连续三次洗涤30分钟，洗掉过量的特异性结合剂。载玻片在室温下与BSA(在PBS-T中为1％)中稀释1/1000的标记二抗(避光90分钟)一起温育。用PBS-T(×3)、PBS(×3)和蒸馏水(×3)连续九次洗涤5分钟，洗掉过量的二抗。将载玻片干燥。使用共聚焦激光微阵列扫描仪(Innoscan710AL,Innopsys，法国)，扫描载玻片并提取数据用于分析。当与阴性对照样品相比时，特异性结合剂与分析物之间的特异性结合由升高的荧光水平指示。
实施例2
在测试相同裂解物集时，点对点方法比RPPA更灵敏(图11)，表明点对点技术的真阳性率更高。这是通过增加信号和减少背景来实现的，从而使信噪比提高了约十倍。实现这一目标的关键步骤之一是将抗原结合成分印刷到裂解物上；这意味着抗原结合成分仅与分析物结合，而不与载玻片的整个表面结合，与载玻片的整个表面结合是RPPA方法中的情况。
随后，当施用标记的二抗时，不太可能产生背景信号。
实施例3
提供了一个实施例测定，包括针对100种不同裂解物的约10,000个杂交瘤样品。适当地，讨论了每周约1,000,000次测试的测定。
每个测试一式两份地进行，即每周总共进行多达2,000,000次测试。
为了进行裂解物印刷，利用了100张载玻片的5个印刷运行。因此，这提供了500张载玻片的印刷，这500张载玻片由针对每种裂解物5个相同的载玻片构成，即5张载玻片×100种裂解物＝500张载玻片。
如图13所示，这意味着，印刷运行1将印刷裂解物1至裂解物20；印刷运行2将印刷裂解物21至裂解物40；印刷运行3将印刷裂解物41至裂解物60；印刷运行4将印刷裂解物61至裂解物80；印刷运行5将印刷裂解物81至裂解物100。
每种裂解物的点总数将为20160。这足以一式两份地印刷10,000个杂交瘤(第二测试材料)，如果需要，有空间来添加缓冲点。
待印刷的第二测试材料(在本实施例中为杂交瘤)用不同的裂解物印刷，使得一式两份地提供多达10,080个杂交瘤。适当地，杂交瘤可以在10％甘油中提供。
适当地，可以提供算法以允许载玻片装载以用于杂交瘤印刷。适当地，该系统提供裂解物数量的从左到右移动，使得载玻片位置和盘总是恒定的。在本文所述的实施方案中，向右旋转5个载玻片产生序列，使得载玻片处于杂交瘤印刷运行的正确位置。这例如在图15和图16中示出。提供颜色序列以更清楚地示出该序列，使得当载玻片与裂解物印刷处于相同位置时提供载玻片的杂交瘤印刷。
实施例4
参考图21和图22，第一印刷运行印刷5批裂解物(L)，因此前五个载玻片都是裂解物1L1，载玻片5至10印刷裂解物L2，依此类推，直到20种裂解物均被印刷。
然后，在载玻片重新排序后，在覆盖印刷中提供杂交瘤，使得参数S和T保持不变：因此S1 T1应放置在载玻片1盘1中，等等。在该实施方案中，在一次印刷运行中提供100种不同的裂解物，然后将它们放置在相同的位置以进行覆盖印刷，在该相同位置，在裂解物印刷运行期间印刷裂解物，例如第一裂解物2在位置6处印刷，因此需要在覆盖印刷中在S6 T1中提供第一裂解物2。
裂解物3在位置11被印刷，等等。
因为在该实施方案中，在连续印刷运行的第一批中印刷20种裂解物：“S”和“T”保持不变，“L”的等式为：裂解物1的下一种裂解物应该是1+20
在盘内：在5组中：
Lx；L(x+20)，L(x+40)，L(x+60)，L(x+80)
盘间：裂解物应与前一个盘中的一样+5
盘1：L(x)；
盘2：L(x+5)
盘3：L(x+10)
盘4：L(x+15)
对于以下杂交瘤运行，5个载玻片之间发生旋转：裂解物1现在位于位置2，因此旋转系统将裂解物81带到位置1(参见图22第二印刷运行)
盘间和以前一样是“+5”
对于下一次杂交瘤运行，旋转继续，裂解物1现在位于位置3(参见图22第三印刷运行)。
如将理解的，第四印刷运行将裂解物1定位在位置4处，并且旋转系统将带来
对本领域技术人员来说显而易见的是，可以在本发明的范围内对上述实施方案进行各种改变。
可以在本文中预期的本发明的范围内进行各种修改和改进。
Claims (13)
1.一种用于提高布置成阵列的多个载玻片上点位置的覆盖印刷的效率的方法，所述方法包括以下步骤：
-以印刷顺序将第一测试材料的至少一个点印刷到n列阵列中载玻片的第一行(r1)上，以至少在载玻片r1n1和复制载玻片r1n2上提供所述第一测试材料，所述第一测试材料包含第一类型的第一潜在结合配偶体对；
-以印刷顺序将第二测试材料的至少一个点印刷到n列阵列中载玻片的第二行(r2)上，以至少在载玻片r2n1和复制载玻片r2n2上提供所述第二测试材料，所述第二测试材料包含第二类型的第一潜在结合配偶体对；
-将所述载玻片重新排序；
-印刷至少第一覆盖材料的点，以覆盖至少所述第一测试材料的所述点和/或至少所述第二测试材料的所述点，所述第一覆盖材料包含第一类型的第二潜在结合配偶体对，其中，当印刷所述覆盖材料时，在所述阵列中与施用所述测试材料相同位置处提供载玻片，并且在覆盖所述第一覆盖材料时，所述覆盖材料在不需要在行之间移动印刷头的情况下来提供。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，当印刷至少两种不同覆盖材料时，在所述阵列中与施用所述第一测试材料相同位置处提供所述载玻片。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中，所述测试材料包含分析物，特别是细胞、细胞衍生产物、细胞裂解物、蛋白质、蛋白质片段、完整细胞上提供的受体、细胞裂解物中提供的受体、融合蛋白或核酸序列等。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，(在所述覆盖材料中提供的)第二潜在结合配偶体为特异性结合分子，所述特异性结合分子选自包括抗体或抗体片段、小分子、适体或核酸分子的组。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，多个载玻片(Sr)'的子组可以用第一测试材料(t1)印刷以提供复制载玻片，各复制载玻片提供行中列的第一位置(例如：r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1、r1n(Sr)'t1)。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述子组为5个载玻片，使得在所述方法中，在每行中，用第一测试材料(t1)印刷五个复制载玻片，各复制板提供行中列的第一位置：r1n1t1、r1n2t1、r1n3t1、r1n4t1、r1n5t1。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，在基于以下输入确定的所述载玻片的重新排序之后，印刷所述覆盖材料：
·结合配偶体印刷运行(覆盖杂交瘤印刷运行数量(H))
·载玻片数量(S)
·盘数量(T)
·每个子运行的载玻片(Sr)＝5
·运行次数/周期(Rc)＝20
·每个总运行的载玻片(St)＝100
·每个盘的载玻片＝25
结合配偶体偏移(例如，杂交瘤偏移)＝MOD(Rc*(Sr-(H-1)),St)；这提供了(基于以上)：
结合配偶体偏移(例如，杂交瘤偏移)＝Ho＝MOD(20*(5-(H-1)),100)；
载玻片位置＝Sp＝MOD(S-1,25)+1；
载玻片偏移＝So＝MOD((载玻片位置-1)*20,100)；
子运行偏移＝Sro＝QUOTIENT(Sp-1,5)；
盘偏移＝To＝(T-1)*5；
测试材料(例如裂解液)＝L＝MOD(Ho+So+Sro+To,100)；
其中，MOD是模块运算(一个数除以另一个数后的余数)。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法用于对特异性结合分子的分析物的检测，所述方法包括：
-温育所印刷的测试材料和所述覆盖材料，以允许在所述测试材料和所述覆盖材料中提供的分析物与特异性结合成分之间发生结合；
-检测所述测试材料和所述覆盖材料中提供的分析物与特异性结合成分之间的任何结合。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述检测步骤是免疫组织化学检测步骤，可选地其中，所述检测包括检测荧光、比色、量子点、生物素/亲和素、表面细胞质基因组共振，以鉴定结合。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在所述覆盖材料的印刷之前提供阻断步骤。
11.一种诊断病症的方法，所述方法包括：
使用权利要求1至10中任一项所述的方法，确定测试材料样品中分析物的存在；
其中，当检测到提供在覆盖材料中的特异性结合分子与在所述测试材料中的分析物的结合时，指示所述病症。
12.一种用于提供根据权利要求1至10中任一项所述的方法的系统，其中，所述系统包括印刷机，所述印刷机适用于：将测试材料印刷到基板上，以印刷顺序提供n列阵列中的第一行(r1)载玻片，以至少在载玻片r1n1和复制载玻片r1n2上提供所述第一测试材料；以印刷顺序将第二测试材料的至少一个点印刷到n列阵列中的第二行(r2)载玻片上，以至少在载玻片r2n1和复制载玻片r2n2上提供所述第二测试材料；印刷至少第一覆盖材料的点以覆盖至少所述第一测试材料的点和/或至少所述第二测试材料的点，其中，当印刷所述覆盖材料时，在所述阵列中与施用所述测试材料相同位置处提供载玻片，并且在覆盖所述第一覆盖材料时，所述覆盖材料在不需要在行之间移动印刷头的情况下来提供。
13.根据权利要求11所述的系统，其中，所述系统包括在所述印刷机周围的环境受控模块。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1905181.2 | 2019-04-11 | ||
| GBGB1905181.2A GB201905181D0 (en) | 2019-04-11 | 2019-04-11 | Method and apparatus for substrate handling and printing |
| PCT/GB2020/050945 WO2020208377A1 (en) | 2019-04-11 | 2020-04-14 | Method and apparatus for substrate handling and printing |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113993614A true CN113993614A (zh) | 2022-01-28 |
| CN113993614B CN113993614B (zh) | 2023-07-11 |
Family
ID=66810010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202080042185.6A Active CN113993614B (zh) | 2019-04-11 | 2020-04-14 | 用于基板处理和印刷的方法和设备 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220206025A1 (zh) |
| EP (1) | EP3953030A1 (zh) |
| CN (1) | CN113993614B (zh) |
| GB (1) | GB201905181D0 (zh) |
| WO (1) | WO2020208377A1 (zh) |
Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002025288A2 (en) * | 2000-09-22 | 2002-03-28 | Clontech Laboratories Inc. | Highly sensitive proteomic analysis methods and kits and systems for practicing the same |
| CN1438327A (zh) * | 2003-03-20 | 2003-08-27 | 何农跃 | 活版化合物微阵列及其制备方法 |
| US20030198967A1 (en) * | 2002-04-23 | 2003-10-23 | Matson Robert S. | Multi-functional microarrays and methods |
| US20040145631A1 (en) * | 2000-08-03 | 2004-07-29 | Manning Howard John | Highly parallel fabrication of microarrays by ink jet printheads |
| WO2004073988A2 (en) * | 2003-02-20 | 2004-09-02 | Arrayjet Limited | Printing method and apparatus |
| US20070087348A1 (en) * | 2003-11-12 | 2007-04-19 | Notcovich Ariel G | System and method for carrying out multiple binding reactions in an array format |
| US20080242559A1 (en) * | 2007-03-28 | 2008-10-02 | Northwestern University | Protein and peptide arrays |
| US20100248994A1 (en) * | 2008-06-19 | 2010-09-30 | Gale Bruce K | Tip overlay for continuous flow spotting apparatus |
| CN101883865A (zh) * | 2007-09-18 | 2010-11-10 | 普里莫里根生物科技有限责任公司 | 无框多重微阵列 |
| WO2013040445A1 (en) * | 2011-09-15 | 2013-03-21 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Arrays for cell-based screening and uses thereof |
| CN107438759A (zh) * | 2015-04-20 | 2017-12-05 | 皇家飞利浦有限公司 | 用于控制样本上的覆盖层打印的打印控制设备 |
| CN108348547A (zh) * | 2015-08-28 | 2018-07-31 | 纽约市哥伦比亚大学信托人 | 用于匹配肿瘤学特征的系统和方法 |
| US20180217136A1 (en) * | 2015-07-20 | 2018-08-02 | Sentilus Holdco LLC | Chips, detectors, and methods of making and using the same |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0684079B2 (ja) * | 1988-07-05 | 1994-10-26 | セイコー電子工業株式会社 | ドット位置ずれ補正回路 |
| DE60030882T2 (de) * | 2000-01-06 | 2007-04-05 | Caliper Life Sciences, Inc., Mountain View | Vorrichtungen und verfahren für hochdurchsatz-probenentnahme und analyse |
| US20040014102A1 (en) * | 2000-02-22 | 2004-01-22 | Shiping Chen | High density parallel printing of microarrays |
| EP1276702A2 (en) * | 2000-03-31 | 2003-01-22 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for detecting and quantifying gene expression |
| ATE315957T1 (de) * | 2000-09-25 | 2006-02-15 | Picoliter Inc | Schallausstoss von fluiden aus mehreren behältern |
| US20030044389A1 (en) * | 2001-07-02 | 2003-03-06 | Brown Patrick O. | Microarrays for cell phenotyping and manipulation |
| US7902121B2 (en) * | 2001-07-02 | 2011-03-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | MHC-antigen arrays for detection and characterization of immune responses |
| GB0222397D0 (en) | 2002-09-27 | 2002-11-06 | Arrayjet Ltd | Method and apparatus for substrate handling and printing |
| WO2008015645A2 (en) * | 2006-08-02 | 2008-02-07 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | A method of determining the concentration of an analyte using analyte sensor molecules coupled to a porous membrane |
| WO2008116471A1 (en) * | 2007-03-26 | 2008-10-02 | Toxispot A/S | Quantification of analyte molecules using multiple reference molecules and correlation functions |
| JP5597844B2 (ja) * | 2009-04-29 | 2014-10-01 | テレコム・イタリア・エッセ・ピー・アー | 基板上へ生物流体を付着させるための方法及び装置 |
| US10823728B2 (en) * | 2015-07-08 | 2020-11-03 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Integrated microarray printing and detection system for molecular binding analysis |
-
2019
- 2019-04-11 GB GBGB1905181.2A patent/GB201905181D0/en not_active Ceased
-
2020
- 2020-04-14 CN CN202080042185.6A patent/CN113993614B/zh active Active
- 2020-04-14 US US17/602,082 patent/US20220206025A1/en active Pending
- 2020-04-14 EP EP20721687.0A patent/EP3953030A1/en active Pending
- 2020-04-14 WO PCT/GB2020/050945 patent/WO2020208377A1/en unknown
Patent Citations (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040145631A1 (en) * | 2000-08-03 | 2004-07-29 | Manning Howard John | Highly parallel fabrication of microarrays by ink jet printheads |
| AU2001276486B2 (en) * | 2000-08-03 | 2006-07-27 | Arrayjet Limited | Highly parallel fabrication of microarrays by ink jet printheads |
| WO2002025288A2 (en) * | 2000-09-22 | 2002-03-28 | Clontech Laboratories Inc. | Highly sensitive proteomic analysis methods and kits and systems for practicing the same |
| US20030198967A1 (en) * | 2002-04-23 | 2003-10-23 | Matson Robert S. | Multi-functional microarrays and methods |
| CN1646908A (zh) * | 2002-04-23 | 2005-07-27 | 贝克曼考尔特公司 | 多功能微阵列和方法 |
| WO2004073988A2 (en) * | 2003-02-20 | 2004-09-02 | Arrayjet Limited | Printing method and apparatus |
| US20070034104A1 (en) * | 2003-02-20 | 2007-02-15 | Manning Howard J | Printing method and apparatus |
| CN1438327A (zh) * | 2003-03-20 | 2003-08-27 | 何农跃 | 活版化合物微阵列及其制备方法 |
| US20070087348A1 (en) * | 2003-11-12 | 2007-04-19 | Notcovich Ariel G | System and method for carrying out multiple binding reactions in an array format |
| US20080242559A1 (en) * | 2007-03-28 | 2008-10-02 | Northwestern University | Protein and peptide arrays |
| CN101883865A (zh) * | 2007-09-18 | 2010-11-10 | 普里莫里根生物科技有限责任公司 | 无框多重微阵列 |
| US20100248994A1 (en) * | 2008-06-19 | 2010-09-30 | Gale Bruce K | Tip overlay for continuous flow spotting apparatus |
| WO2013040445A1 (en) * | 2011-09-15 | 2013-03-21 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Arrays for cell-based screening and uses thereof |
| CN107438759A (zh) * | 2015-04-20 | 2017-12-05 | 皇家飞利浦有限公司 | 用于控制样本上的覆盖层打印的打印控制设备 |
| US20180217136A1 (en) * | 2015-07-20 | 2018-08-02 | Sentilus Holdco LLC | Chips, detectors, and methods of making and using the same |
| CN108348547A (zh) * | 2015-08-28 | 2018-07-31 | 纽约市哥伦比亚大学信托人 | 用于匹配肿瘤学特征的系统和方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MOONHYUN CHOI等: "Multicomponent High-throughput Drug Screening via Inkjet Printing to Verify the Effect of Immunosuppressive Drugs on Immune T Lymphocytes", 《SCIENTIFIC REPORTS》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20220206025A1 (en) | 2022-06-30 |
| EP3953030A1 (en) | 2022-02-16 |
| GB201905181D0 (en) | 2019-05-29 |
| CN113993614B (zh) | 2023-07-11 |
| WO2020208377A1 (en) | 2020-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pawlak et al. | Zeptosens' protein microarrays: a novel high performance microarray platform for low abundance protein analysis | |
| FitzGerald et al. | Development of a high-throughput automated analyzer using biochip array technology | |
| US20050135974A1 (en) | Device for preparing multiple assay samples using multiple array surfaces | |
| US20070111322A1 (en) | Novel method of using inject printing for creating microarrays | |
| US6921637B2 (en) | Colloid compositions for solid phase biomolecular analytical, preparative and identification systems | |
| US20040171068A1 (en) | Method for producing stable, regeneratable antibody arrays | |
| JP2002542487A (ja) | ポリペプチドのマイクロアレイ | |
| JP2005524059A (ja) | 多機能マイクロアレイおよび方法 | |
| US20130203631A1 (en) | Frameless multiplexed microarrays | |
| CA2424176A1 (en) | Multiplexed cell analysis system | |
| US20040049351A1 (en) | Immunosorbent assay in microarray format | |
| CN113993614B (zh) | 用于基板处理和印刷的方法和设备 | |
| US20060210984A1 (en) | Use of nucleic acid mimics for internal reference and calibration in a flow cell microarray binding assay | |
| US20070141576A1 (en) | Biological chip and use thereof | |
| CN110261592B (zh) | 一种被分析物定性定量测定方法 | |
| JP2008134188A (ja) | プローブ固相化反応アレイおよび該アレイの製造方法 | |
| JP5301234B2 (ja) | タンパク質サンプルの大規模収集方法 | |
| O'Connor et al. | Protein chips and microarrays | |
| WO2003091731A1 (en) | System and method for multiparameter analysis of analytes | |
| Kricka et al. | Analytical ancestry: evolution of the array in analysis | |
| Sage | Product Review: Protein biochips go high tech | |
| Nedelkov et al. | Antibody microarrays using resonance light-scattering particles for detection | |
| CN109647552B (zh) | 集成式的微阵列生物芯片及识别方法 | |
| Normandeau | Slide spatial bias in antibody microarrays: from characterization to minimization | |
| JP2004333255A (ja) | プローブ固相化反応アレイ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |