CN113967200A - 一种吸入用苯酚溶液制剂、制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种吸入用苯酚溶液制剂、制备方法及其应用。本发明吸入用苯酚溶液制剂，包括苯酚、渗透压调节剂及溶剂。其可通过应用雾化装置，使药物形成气溶胶微粒，被吸入并沉积于鼻咽喉、各级支气管及肺泡内，发挥治疗作用。具有起效快、局部药物浓度高、用药量少、应用方便及全身不良反应少等诸多优点。

Description

一种吸入用苯酚溶液制剂、制备方法及其应用
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种吸入用苯酚溶液制剂、制备方法及其应用。
背景技术
苯酚又名石炭酸，为弱酸，1834年Runge从煤焦油中发现了苯酚，1841年Laurent首次制得结晶苯酚。苯酚为苯环上的一个氢原子被羟基取代的产物，酚以游离的形式或以衍生物的形式存在于自然界。苯酚的化学性质较活泼，纯品为白色或无色易潮解的结晶，在空气中或遇不洁物质逐渐变成微红色结晶，有特殊气味、有毒、有强腐蚀性，相对分子质量94.11，相对密度1.0576，熔点43℃。微溶于水(8.3g/20℃、混溶/40℃)，能溶于苯和碱性溶液中，易溶于乙醇、乙醚、氯仿、甘油等有机溶剂中。
苯酚是重要的有机化工原料及中间体，在烷基酚、合成纤维、塑料、合成橡胶、医药、农药、香料、染料、涂料和炼油等工业中有着重要用途。此外，由于苯酚可使蛋白质变性，故有杀菌作用，对很多微生物，如革兰阳性菌、革兰阴性菌、分枝杆菌和某些真菌及病毒表现出很强的抗菌活性，对结核杆菌、芽孢和耐酸菌的杀灭力较差。苯酚在酸性溶液中活性最强；温度增加也可提高其抗菌活性；但有机物的存在会使其活性消失。十九世纪英国医生意外发现石炭酸稀溶液用于外科手术消毒处理，可有效避免病人再发生感染等意外事故，此后，苯酚稀溶液被广泛用作消毒防腐剂。
关于苯酚的药物应用相对较少，仅CN102198091A的专利文献中记载了一种穴位注射剂，其组成为苯酚在常温下的饱和溶液和生理盐水，二者混合比例为0.5-2:100；进一步还可包含2％的利多卡因，即常温下的苯酚饱和溶液、生理盐水和2％利多卡因以0.5-2:100:5比例的混合物，并公开了其用于治疗慢性鼻炎、颈椎病和带状疱疹的应用。
人感染冠状病毒后可引起各种呼吸道疾病，如普通感冒、流感样病毒或流感、肺炎、气管炎等，经研究冠状病毒主要侵犯肺部，在肺部细胞内进行复制和繁殖。
本申请人进行了大量实验研究，获得了一种含有苯酚的吸入溶液制剂。该液体制剂符合吸入溶液制剂的质量要求，无菌无热源，pH 值和渗透压适宜，对人冠状病毒229E造成的小鼠肺炎有效、无刺激性、无过敏性。本发明苯酚溶液制剂可通过应用雾化装置，使药物形成气溶胶微粒，被吸入并沉积于鼻咽喉、各级支气管及肺泡内，发挥治疗作用。具有起效快、局部药物浓度高、用药量少、应用方便及全身不良反应少等诸多优点。
发明内容
本发明目的在于提供一种吸入用苯酚溶液制剂，所述制剂包括：苯酚、渗透压调节剂及溶剂。
以下，针对构成本发明所述的吸入用苯酚溶液制剂的各成分进行说明。
【苯酚】
苯酚以质量体积百分含量g/mL计的浓度为0.05％～0.5％，优选为 0.05％～0.25％，进一步优选为0.05％～0.12％。
本发明所述的苯酚吸入用溶液制剂含量为上述范围内时，可用于抑制冠状病毒，尤其是抑制人冠状病毒HCoV-229E，以及由冠状病毒感染引起的呼吸道疾病，如普通感冒、流感样病毒或流感、肺炎、气管炎等。
【渗透压调节剂】
由于高渗溶液及纯化水可引起气道高反应性，因此本发明吸入用苯酚溶液制剂中，需要加入渗透压调节剂将溶液调至等渗，其浓度为 8mg/ml～10mg/ml，渗透压调节剂选自氯化钠或者葡萄糖；优选的，所述渗透压调节剂的浓度为9mg/ml，所述渗透压调节剂为氯化钠。
【溶剂】
溶剂选自纯化水、注射用水或无菌注射用水。
进一步的，本发明吸入溶液配合雾化器使用，优选百瑞雾化器；当该吸入溶液经过雾化器雾化后，所述吸入制剂的质量中值空气动力学粒径(MMAD)为2.5～7.5μm，较佳为3.0～6.0μm；空气动力学粒径小于5μm的微细粒子百分比(FPF)为30％～70％。可见，本发明吸入溶液雾化后大部分粒径直径小于5μm，可有效沉积于肺部，治疗冠状病毒感染引起的肺部疾病。
本发明的目的还在于提供一种吸入用苯酚溶液制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)称取苯酚0.6～6g，渗透压调节剂8～12g，20℃～35℃下加入注射用水960～1500ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm或0.45μm微孔滤膜滤过；
(2)在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌 30min，灭菌或者不灭菌，经无菌过滤后直接灌装，即得。
本发明的目的还在于提供上述吸入用苯酚溶液在抗人冠状病毒中的应用。
所述冠状病毒是指人冠状病毒HCoV-229E。
具体是指冠状病毒感染引起的呼吸道疾病，如普通感冒、流感样病毒或流感、肺炎、气管炎等。
有益效果
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
1.本发明所述苯酚吸入溶液制剂制备工艺简单，不需加入助溶剂、表面活性剂及稳定剂等辅料，减少了上述辅料对呼吸道的刺激。
2.本发明所述苯酚吸入溶液制剂能靶向分布在肺组织，相对于 CN102198091A的穴位注射剂，具有有效剂量小、安全无副作用、无需添加其余化学活性成分药物，如镇痛药利多卡因等优点。
3.本发明所述吸入溶液制剂可有效抗冠状病毒，尤其是对人冠状病毒HCoV-229E具有较强的抑制作用，可为临床提供更多的用药选择。
具体实施方式
实施例1
处方组成：
苯酚 0.60g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚0.60g，氯化钠10.8g，20℃～35℃下加入注射用水1200ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm微孔滤膜滤过；
步骤2：在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，即得。
实施例2
处方组成：
苯酚 0.72g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚0.72g，氯化钠10.8g，20℃～35℃下加入注射用水1200ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm微孔滤膜滤过；
步骤2：在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，即得。
实施例3
处方组成：
苯酚 1.44g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚1.44g，氯化钠10.8g，加入20℃～35℃注射用水 1200ml稀释，搅拌均匀，经0.22μm微孔滤膜滤过。
步骤2：在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，即得。
实施例4
处方组成：
苯酚 3.0g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚3.0g，氯化钠10.8g，20℃～35℃下加入注射用水1200ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm微孔滤膜滤过；
步骤2：在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，即得。
实施例5
处方组成：
苯酚 6.0g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚6.0g，氯化钠10.8g，20℃～35℃下加入注射用水1200ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm微孔滤膜滤过。
步骤2：在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，即得。
实施例6
处方组成：
苯酚 1.44g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚6.0g，氯化钠10.8g，20℃～35℃下加入注射用水1200ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm微孔滤膜滤过。
步骤2：在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，即得。
实施例7
处方组成：
苯酚 1.44g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
制备工艺：
步骤1：称取苯酚6.0g，氯化钠10.8g，20℃～35℃下加入注射用水1200ml，稀释、搅拌均匀，经0.45μm微孔滤膜滤过。
步骤2：灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，即得。
试验例1：渗透压调节剂浓度筛选
处方1：
苯酚 1.2g
氯化钠 8.4g
注射用水 加至 1200ml
处方2：
苯酚 1.2g
氯化钠 9.6g
注射用水 加至 1200ml
处方3：
苯酚 1.2g
氯化钠 10.8g
注射用水 加至 1200ml
处方4：
苯酚 1.2g
氯化钠 11.4g
注射用水 加至 1200ml
处方5：
苯酚 1.2g
氯化钠 13.2g
注射用水 加至 1200ml
处方6：
苯酚 1.2g
葡萄糖 8.4g
注射用水 加至 1200ml
处方7：
苯酚 1.2g
葡萄糖 9.6g
注射用水 加至 1200ml
处方8：
苯酚 1.2g
葡萄糖 10.8g
注射用水 加至 1200ml
处方9：
苯酚 1.2g
葡萄糖 11.4g
注射用水 加至 1200ml
处方10：
苯酚 1.2g
葡萄糖 13.2g
注射用水 加至 1200ml
按上述处方分别制备不同浓度和种类渗透压调节剂的吸入用苯酚溶液，用渗透压摩尔浓度测定仪测定溶液渗透压摩尔浓度。结果显示，渗透压调节剂选择为葡萄糖时，使用依从性不如氯化钠。当渗透压调节剂选择为氯化钠，且浓度为8mg/ml～10mg/ml时，苯酚溶液制剂的渗透压摩尔浓度为285～310mOsmol/kg之间，接近于正常人体血液的渗透压摩尔浓度，即苯酚吸入溶液体系为等渗，有效避免高渗容易诱发的过敏性、刺激性等安全性问题。
试验例2：本发明吸入用苯酚溶液对人冠状病毒HCoV-229E小鼠肺炎模型的治疗作用
实验药物：本发明实施例1～5制得的吸入用苯酚溶液；
动物分组、模型制备及给药方法：BALB/c小鼠56只，按体重随机分为正常对照组，模型对照组，实施例1组、实施例2组、实施例3 组、实施例4组、实施例5组、每组8只，雌雄各半。除正常对照组外，其他各组小鼠乙醚轻度麻醉后，用100TCID50 HCoV-229E滴鼻感染，50μl/只，隔日1次，共感染2次。初次感染当天，各给药组给药，吸入用苯酚溶液为吸入给药，每天1次，连续4天。末次给药后一天称量体重后，解剖取肺并称量肺重。
实验仪器及材料：A2型生物安全柜(美国Thermo公司)、Buxco 小动物口鼻暴露塔(美国DSI公司)；人冠状病毒229E(HCoV-229E) (由中国医学科学院医药生物技术研究所提供)；人胚肺成纤维细胞 MRC5(购自北京北纳创联生物技术研究院)；BOY雾化器及LCsprint 蓝芯雾化杯(德国百瑞公司)
实验方法：小鼠称量体重后取血，解剖取肺组织并称量肺重，计算小鼠肺指数及抑制率，具体计算公式如下：
肺指数＝肺湿重(g)×100/体重(g)
Figure 1
数据采用(MEAN±SD)表示，组间差异采用T检验，P<0.05为差异具有统计学意义，见表1。
表1受试药物对人冠状病毒肺炎小鼠模型的影响
Figure BDA0002595740890000082
注：与正常对照组比较##P<0.01，与模型对照组比较**P<0.01；
与正常对照组比较#P<0.05，与模型对照组比较*P<0.05。
表1结果显示，本发明的吸入用0.05-0.5％苯酚溶液对人冠状病毒229E造成的小鼠肺炎有抑制作用，可使小鼠肺指数显著降低。
模型对照组小鼠肺指数与正常对照组比较，有显著性差异 (P<0.01)；实施例组小鼠肺指数与模型对照组比较，有显著性差异，其中实施例3(0.12％苯酚溶液)雾化吸入，每次20min，每天1次，连续4天后，小鼠肺指数显著降低，与模型对照组比较有非常显著差异(P<0.01)，抑制率分别为80.00％。
苯酚溶液对人冠状病毒229E造成的小鼠肺炎的抑制作用呈浓度依赖关系，在0.05％～0.12％浓度范围内，苯酚溶液浓度升高小鼠肺指数降低，抑制率升高；在0.12％～0.5％浓度范围内，苯酚溶液浓度升高小鼠肺指数升高，抑制率降低，是由于苯酚溶液浓度大，连续给药后对小鼠呼吸道及肺部组织造成刺激的原因导致。优选吸入用苯酚溶液浓度为0.05-0.12％。
试验例3：本发明吸入用苯酚溶液的雾化溶液质量评价实验 1、含量测定
色谱条件：Agilent 1260HPLC；色谱柱为Inertsil ODS (4.6×250mm，5μm)；流动相为甲醇-水(40:60)；流速为1.0ml·min-1；检测波长为270nm；柱温为30℃。
对照品溶液的制备：取苯酚对照品适量，用乙醇溶解，制成每ml含苯酚0.7mg的对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密吸取实施例1～5样品1ml，至10ml量瓶中，用用乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。
测定法：取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪中测定，计算苯酚溶液的含量。
2、微细粒子剂量的测定
依照《中国药典》2015年版四部0951装置3(NGI)中规定，测定实施例1～5制得的的雾化吸入用苯酚溶液的微细粒子剂量。装配微孔收集器(MOC)和滤纸，气流流速为15L/min，采用百瑞BOY雾化器及LC sprint蓝芯雾化杯；每次雾化测定2ml，平行测定3次，计算得药物回收率为90％～105％。沉积于仪器各部位(雾化杯、适配器+ 口喉、7级收集杯，MOC)的药物用50％乙醇淋洗回收，定容，高效液相法测定苯酚的含量，计算折合得各部位的沉积药量。以有效切割粒径的对数为横坐标，药物累积沉积百分数为纵坐标作图，累积沉积百分数为50％时对应的空气动力学粒径即为MMAD；沉积累积百分数为85％时对应的空气动力学粒径与MMAD的比值为GSD；空气动力学粒径小于5μm的累积沉积药量(也称微细粒子剂量)为FPD，其占输出药量的百分比为FPF，结果见表2。
表2微细粒子剂量测定结果(
Figure BDA0002595740890000101
n＝3)
Figure BDA0002595740890000102
实验结果表明，本发明的吸入用0.05％-0.5％苯酚溶液微细粒子剂量均大于50μg，质量中值空气动力学粒径MMAD均在3.0～6.0μm 之间，有效微细粒径百分比均大于37％，可有效沉积于肺部。
试验例4：不同粒径的雾化吸入用苯酚溶液药效考察
取实施例3制得的雾化吸入用苯酚溶液，A组采用百瑞BOY雾化器的LC sprint蓝芯雾化杯，配有流量计的压缩氧气钢瓶产生的气流 (替代百瑞BOY雾化器)进行雾化，控制流量为3-4L/min，进行雾化操作。B组参照试验例3的条件，进行雾化操作。
(1)参照试验例3中所述方法测定粒径，结果见表3。
表3微细粒子剂量测定结果(
Figure BDA0002595740890000103
n＝3)
Figure BDA0002595740890000104
Figure BDA0002595740890000111
(2)参照试验例2所述方法，考察吸入用苯酚溶液在不同雾化条件下对人冠状病毒229E小鼠肺炎模型的治疗效果，结果见表4。
表4受试药物对人冠状病毒肺炎小鼠模型的影响
Figure BDA0002595740890000112
注：与正常对照组比较##P<0.01，与模型对照组比较**P<0.01；与正常对照组比较#P<0.05，与模型对照组比较*P<0.05。
由表3和4可知，当粒径在6.732μm条件下，进行药效试验的结果与粒径在4.565μm条件下的结果显著不同。气溶胶粒径4.565μm条件下的肺指数和抑制率显著优于6.732μm。

Claims (10)

1.一种吸入用苯酚溶液制剂，包括：苯酚、渗透压调节剂及溶剂。
2.根据权利要求1所述的溶液制剂，其特征在于，所述苯酚以质量体积百分含量g/mL计的浓度为0.05％～0.5％，优选为0.05％～0.25％，进一步优选为0.05％～0.12％。
3.根据权利要求1所述的溶液制剂，其特征在于，所述渗透压调节剂的浓度为8mg/ml～10mg/ml；优选为9mg/ml。
4.根据权利要求1所述的溶液制剂，其特征在于，所述渗透压调节剂选自氯化钠或者葡萄糖；优选为氯化钠。
5.根据权利要求1所述的溶液制剂，其特征在于，所述溶剂选自纯化水、注射用水或无菌注射用水。
6.根据权利要求1所述的溶液制剂，其特征在于，所述溶液经过雾化器雾化后，质量中值空气动力学粒径为2.5～7.5μm，优选为3.0～6.0μm；空气动力学粒径小于5μm的微细粒子百分比为30％～70％。
7.权利要求1-6任一所述吸入用苯酚溶液制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)称取苯酚0.6～6g，渗透压调节剂8～12g，20℃～35℃下加入注射用水960～1500ml，稀释、搅拌均匀，经0.22μm或0.45μm微孔滤膜滤过；
(2)在无菌环境下灌封于棕色安瓿瓶中，115℃高压蒸汽灭菌30min，灭菌或者不灭菌，经无菌过滤后直接灌装，即得。
8.权利要求1-6任一所述溶液制剂在制备抗人冠状病毒药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述冠状病毒是指人冠状病毒HCoV-229E。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述抗人冠状病毒药物是指治疗冠状病毒感染引起的呼吸道疾病药物，具体为治疗普通感冒、流感样病毒或流感、肺炎和/或气管炎的药物。
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