CN113956234A - 一种n-苯基取代1h-吲唑-3-胺类化合物及其制备和抗肿瘤活性的应用 - Google Patents

一种n-苯基取代1h-吲唑-3-胺类化合物及其制备和抗肿瘤活性的应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物化学领域，具体涉及一类以EGFRL858R为靶点的N‑取代(4‑(4‑乙基哌嗪‑1‑基)苯基)‑6‑苯基‑1H‑吲唑‑3‑胺类化合物。该化合物可以选择性的抑制EGFR激酶的磷酸化，从而治疗与此激酶密切相关的恶性肿瘤，同时能减少不良反应；能够用于治疗EGFR酶相关的肿瘤或疾病。本发明的化合物如通式(1)表示。其中R1可以多种取代基选择。本发明所述的以EGFR为靶点的N‑取代(4‑(4‑乙基哌嗪‑1‑基)苯基)‑6‑苯基‑1H‑吲唑‑3‑胺类化合物对EGFRL858R激酶具有良好的抑制作用和对EGFR依赖性肿瘤细胞株细胞具有抗增殖作用；可用于抗肿瘤药物，且抗肿瘤效果较好。

Description

一种N-苯基取代1H-吲唑-3-胺类化合物及其制备和抗肿瘤活 性的应用
技术领域
本发明属于医药化学技术领域，尤其涉及一种N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类结靶向EGFR L858R小分子抑制剂及其制备和抗肿瘤活性的应用。
背景技术
肺癌是当前发病率最高的癌症之一，其主要分为小细胞肺癌、肺腺癌、鳞状上皮细胞癌和大细胞肺癌，而随着病情进程的发展，有80％左右的肺癌患者将转变为非小细胞肺癌。随着分子生物学等学科的研究发展，表皮生长因子受体(EGFR)的靶向治疗逐渐成为研究热点。EGFR是治疗NSCLC最有潜力的药物靶点之一。它是ErbB家族的成员之一，在细胞增殖、存活、迁移、黏附和分化等方面具有重要意义。患者肿瘤基因组至少有一个激活突变，如外显子21(L858R)的单个氨基酸替换或外显子19的缺失(delE746-A750,del19)，它是EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)治疗产生明显反应所必需的。FDA批准第一代酪氨酸激酶抑制剂gefitinib(吉非替尼)和erlotinib(厄洛替尼)用于EGFR激活突变阳性NSCLC患者，在肺癌患者中导致肿瘤体积迅速缩小。
目前，针对非小细胞肺癌的小分子抑制剂主要是以喹唑啉结构的化合物改造发展起来的，例如，吉非替尼，厄洛替尼等。综合国内外研究发现，通过对喹唑啉母核的结构改造而形成七类EGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂，其中，只有喹唑啉类和2,4-二取代嘧啶类化合物对非小细胞肺癌具有较好抑制作用，对非小细胞肺癌的治疗存在母核结构少临床应用不广泛的缺点。对此我们率先提出以吲唑为母核的EGFR抑制剂，旨在增加对非小细胞肺癌的治疗存在母核结构少临床应用不广泛的缺点。
发明内容
本发明提供了一种N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFRL858R抑制剂及其制备和抗肿瘤活性的应用，该N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFR L858R抑制剂对EGFRL858R具有较高的抑制活性，可以作为一种潜在的抗肿瘤药物。
本发明采用如下技术方案：
一种以EGFRL858R为靶点的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物，具有以下通式：
R1基团选自取代或者未取代的芳基；
所述芳基上的取代基选自卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、三氟甲基、氰基或者CHO中的一个或者多个；
所述芳基为苯基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基或,3-二氢苯并呋喃基。
作为优选，R1基团可以选自下列任一取代基团
Figure BDA0003324481120000021
进一步地，所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFR L858R小分子抑制剂为化合物DF1-DF16中的一种，DF1-DF16中的R1如表1-1所示：
表1-1化合物DF1-DF16结构与产率
Figure BDA0003324481120000022
Figure BDA0003324481120000031
进一步的，所述的化合物为N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFR L858R小分子抑制剂(DF8)，化学结构如下：
Figure BDA0003324481120000032
本发明还提供了一种所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFR L858R小分子抑制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)中间体1的合成：步骤一：取一干净且干燥的50mL圆底烧瓶，放入搅拌子。将2g(10.15mmol)6-溴吲唑溶于20mL的无水THF，在冰浴下多次少量加入2.28g(20.30mmol)KOtBu，活化10分钟后再加入3.9g(15.37mmol)碘单质。在冰浴下继续反应。步骤二：用TLC监测反应进程判断反应终点，反应时间一般为2h。反应结束后，用饱和氯化铵溶液淬灭，EtOAc萃取(3×40mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体1。直接用于下一步。
(2)中间体2的合成：步骤一：取一干净且干燥的50mL圆底烧瓶，放入搅拌子。将2g(6.21mmol)中间体1溶于20mL的无水THF，加入1.7mL(7.45mmol)二碳酸二叔丁酯和76mg(0.621mmol)DMAP。在室温下搅拌反应。步骤二：用TLC监测反应进程判断反应终点，反应时间一般为2h。反应结束后，用饱和氯化铵溶液淬灭，EtOAc萃取(3×40mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体2。
(3)中间体3的合成：步骤一：取一干净且干燥的50mL双颈瓶，放入搅拌子。称取1.4g(3.32mmol)中间体2，680mg N-乙基哌嗪苯胺，30.4mg(0.00332mmol)Pd2(dba)3,38.4mg(0.00664mmol)Xantphos，2.16g(6.64mmol)碳酸铯。用三通阀抽真空，氮气置换三次，用注射器加入20mL的甲苯，在70℃下搅拌反应。步骤二：用TLC监测反应进程判断反应终点，反应时间一般为6h。反应结束后，用EtOAc萃取(3×30mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体3。
(4)化合物DF1-DF16的合成通法：步骤一：取一干净且干燥的25mL双颈瓶，放入搅拌子。称取200mg(0.4mmol)中间体3，0.8mmol各种取代基的苯硼酸，9.2mg(0.008mmol)Pd(pph3)4，32mg(0.8mmol)氢氧化钠。用三通阀抽真空，氮气置换三次，用注射器加入10mL的二氧六环和水(4:1)的混合溶剂。在90℃下搅拌反应,过夜。步骤二：反应结束后，用EtOAc萃取(3×20mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得产物DF1-DF16。浓缩后置于烘箱干燥，待产物干燥后，测量产率，将样品送质谱、核磁验证。待结构确认后，测量熔点与纯度。
本发明还提供了一种所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFR L858R小分子抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类靶向EGFRL858R小分子抑制剂表现出一定的抗肿瘤活性。
其中，相对较好的是化合物DF8。在1μmol下对EGFR L858R的抑制率大于50％。
一类以ERFRL858R为靶点的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物的用途，所述用途为制备抗肿瘤药物中的应用。
一种药物组合物，包括药用辅料和一类以ERFRL858R为靶点的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物
含有一类ERFRL858R为靶点的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物的药物组合物，所述的药物组合物的制剂形式为注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、软剂、控释剂、缓释剂或纳米制剂的任一种。
本发明的有益效果包括:本发明所述的以ERFRL858R为靶点的4-酰胺取代嘧啶类化合物对ERFRL858R激酶具有良好的抑制作用，可用于制备抗瘤药物，且抗肿瘤效果较好。
具体实施方式
下文将结合具体实施例详细描述本发明。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。
实施例1化合物的合成
1.1化合物的具体合成路线(路线中所列的碱、溶剂和缚酸剂仅仅为示例性的，不是对本发明的限制)如下所示:
Figure BDA0003324481120000051
反应式1化合物DF1-DF16的一般合成方法
反应试剂和反应条件:(a)iodine,KOtBu,THF,0℃,2h；(b)(Boc)2O,DMAP,THF,rt,2h；(c)Pd2(dba)3,Xantphos,Cs2CO3,N2,toluene,6h.(d)Pd(pph3)4,NaOH,dioxane:H2O(4:1),N2,90℃,反应过夜。
1.2合成步骤示例
(1)中间体1的合成：步骤一：取一干净且干燥的50mL圆底烧瓶，放入搅拌子。将2g(10.15mmol)6-溴吲唑溶于20mL的无水THF，在冰浴下多次少量加入2.28g(20.30mmol)KOtBu，活化10分钟后再加入3.9g(15.37mmol)碘单质，在冰浴下继续反应。步骤二：用TLC监测反应进程判断反应终点，反应时间一般为2h。反应结束后，用饱和氯化铵溶液淬灭，EtOAc萃取(3×40mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体1，直接用于下一步。
(2)中间体2的合成：步骤一：取一干净且干燥的50mL圆底烧瓶，放入搅拌子。将2g(6.21mmol)中间体1溶于20mL的无水THF，加入1.7mL(7.45mmol)二碳酸二叔丁酯和76mg(0.621mmol)DMAP。在室温下搅拌反应。步骤二：用TLC监测反应进程判断反应终点，反应时间一般为2h。反应结束后，用饱和氯化铵溶液淬灭，EtOAc萃取(3×40mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体2。
(3)中间体3的合成：步骤一：取一干净且干燥的50mL双颈瓶，放入搅拌子。称取1.4g(3.32mmol)中间体2，680mg N-乙基哌嗪苯胺，30.4mg(0.00332mmol)Pd2(dba)3,38.4mg(0.00664mmol)Xantphos，2.16g(6.64mmol)碳酸铯。用三通阀抽真空，氮气置换三次，用注射器加入20mL的甲苯，在70℃下搅拌反应。步骤二：用TLC监测反应进程判断反应终点，反应时间一般为6h。反应结束后，用EtOAc萃取(3×30mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体3。
(4)化合物DF1-DF16的合成通法：步骤一：取一干净且干燥的25mL双颈瓶，放入搅拌子。称取200mg(0.4mmol)中间体3，0.8mmol各种取代基的苯硼酸，9.2mg(0.008mmol)Pd(pph3)4,32mg(0.8mmol)氢氧化钠。用三通阀抽真空，氮气置换三次，用注射器加入10mL的二氧六环和水(4:1)的混合溶剂。在90℃下搅拌反应,过夜。步骤二：反应结束后，用EtOAc萃取(3×20mL)，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得产物DF1-DF16。浓缩后置于烘箱干燥，待产物干燥后，测量产率，将样品送质谱、核磁验证。待结构确认后，测量熔点与纯度。
1.3实验结果
合成的所有目标化合物结构如下表所示；
Figure BDA0003324481120000061
Figure BDA0003324481120000071
合成的包括活性化合物在内的目标化合物的MS、1H NMR和13C NMR等理化数据如下：
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(4-fluorophenyl)-1H-indazol-3-amine(DF1)
Figure BDA0003324481120000072
黄色固体，收率：32.34％，m.p：250.4-252.1℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.93(s，1H)，8.64(s，1H)，8.01(d，J＝8.4Hz，1H)，7.77(dd，J＝8.6，5.5Hz，2H)，7.60(d，J＝8.9Hz，2H)，7.52(s，1H)，7.31(t，J＝5.6Hz，2H)，7.29(d，J＝3.2Hz，1H)，6.91(d，J＝9.0Hz，2H)，3.05(s，4H)，2.57(s，4H)，2.43(d，J＝5.6Hz，2H)，1.05(t，J＝7.2Hz，3H).13CNMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：162.80，160.80，145.48，144.21，141.29，137.88，137.24，136.11，129.05，128.99，120.57，117.70，116.79，116.71，115.72，115.55，113.74，107.12，52.33，51.54，49.35，11.70.ESI-MS m/z：416.2(M+H)+
6-(4-chlorophenyl)-N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-1H-indazol-3-amine(DF2)
Figure BDA0003324481120000081
黄色固体，收率：35.24％，m.p：260.5-261.9℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.00(s，1H)，8.69(s，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，7.80(d，J＝8.4Hz，2H)，7.65(d，J＝8.7Hz，2H)，7.59(d，J＝5.1Hz，2H)，7.57(s，1H)，7.35(d，J＝8.5Hz，1H)，6.95(d，J＝8.8Hz，2H)，3.09(s，4H)，2.61(s，4H)，2.47(d，J＝6.1Hz，2H)，1.09(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：145.50，144.25，141.25，139.61，137.54，136.06，132.23，128.82，120.67，117.55，116.81，116.70，113.94，107.21，52.35，51.55，49.37，11.73.ESI-MS m/z：432.2(M+H)+
6-(3，5-dimethoxyphenyl)-N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-1H-indazol-3-amine(DF3)
Figure BDA0003324481120000082
黄色固体，收率：42.11％，m.p：219.5-221.2.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.91(s，1H)，8.65(s，1H)，8.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.61(d，J＝8.8Hz，2H)，7.55(s，1H)，7.32(d，J＝8.5Hz，1H)，6.90(d，J＝8.9Hz，2H)，6.85(d，J＝1.9Hz，2H)，6.53(s，1H)，3.83(s，6H)，3.04(s，4H)，2.54(s，4H)，2.41(d，J＝6.8Hz，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：160.79，145.46，144.24，143.04，141.20，138.92，120.38，117.89，116.77，116.68，107.32，105.23，99.41，55.27，52.40，51.58，49.42，11.80.ESI-MSm/z：458.3(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(3，4，5-trimethoxyphenyl)-1H-indazol-3-amine(DF4)
Figure BDA0003324481120000091
黄色固体，收率：38.21％，m.p：222.1-224.0℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.89(s，1H)，8.65(s，1H)，8.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.61(d，J＝8.9Hz，2H)，7.57(s，1H)，7.35(d，J＝8.5Hz，1H)，6.98(s，2H)，6.91(d，J＝8.9Hz，2H)，3.89(s，6H)，3.73(s，3H)，3.05(s，4H)，2.56(s，4H)，2.43(d，J＝6.0Hz，2H)，1.05(t，J＝7.2Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO)δ(ppm)：153.15，145.45，139.13，136.61，120.28，117.96，116.76，116.69，107.18，104.62，60.05，55.97，52.35，51.55，49.36，11.74.ESI-MS m/z：488.3(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(3-methoxyphenyl)-1H-indazol-3-amine(DF5)
Figure BDA0003324481120000092
黄色固体，收率：43.45％，m.p：205.2-207.0℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.90(s，1H)，8.62(s，1H)，8.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.60(d，J＝8.8Hz，2H)，7.55(s，1H)，7.41-7.36(m，1H)，7.32(d，J＝8.4Hz，1H)，7.24(s，1H)，6.95(d，J＝8.2Hz，1H)，6.90(d，J＝8.8Hz，2H)，3.85(s，3H)，3.04(s，4H)，2.53(s，4H)，2.39(dd，J＝13.7，6.7Hz，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)6(ppm)：159.65，145.66，144.13，141.97，141.36，138.86，136.07，130.23，129.86，120.44，117.84，116.80，116.67，107.25，55.13，52.44，51.59，49.50，11.85.ESI-MS m/z：428.3(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(2-fluoro-3-methoxyphenyl)-1H-indazol-3-amine(DF6)
Figure BDA0003324481120000101
黄色固体，收率：48.90％，m.p：226.5-228.1℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.00(s，1H)，8.73(s，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，Yellow solid，62.34％yield，m.p：124.2-125.8℃7.66(d，J＝8.8Hz，2H)，7.50(s，1H)，7.30-7.25(m，1H)，7.21(dd，J＝17.7，8.0Hz，2H)，7.15(t，J＝6.5Hz，1H)，6.96(d，J＝8.8Hz，2H)，3.93(s，3H)，3.16(s，4H)，2.79(s，4H)，2.65(s，2H)，1.14(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：149.79，147.85，147.76，145.48，143.84，140.79，136.35，133.38，129.53，129.45，124.46，121.91，120.16，119.36，116.90，116.82，113.83，112.90，109.64，56.13，51.86，51.32，48.76，11.01.ESI-MS m/z：446.2(M+H)+
6-(2，4-dimethoxypyrimidin-5-yl)-N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-1H-indazol-3-amine(DF7)
Figure BDA0003324481120000102
黄色固体，收率：32.49，m.p：201.3-202.9℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.93(s，1H)，8.65(s，1H)，8.44(s，1H)，7.98(d，J＝8.4Hz，1H)，7.60(d，J＝8.8Hz，2H)，7.47(s，1H)，7.15(d，J＝8.5Hz，1H)，6.91(d，J＝8.9Hz，2H)，3.96(d，J＝3.6Hz，6H)，3.06(s，4H)，2.61(s，4H)，2.47(s，2H)，1.06(t，J＝7.1Hz，3H).13C N MR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：167.65，163.96，157.93，145.44，144.12，140.75，136.15，131.25，119.89，119.31，116.74，115.94，113.62，109.54，54.54，54.00，52.23，51.49，49.21，11.57.11.57.ESI-MSm/z：460.2(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(5-methoxypyridin-3-yl)-1H-indazol-3-amine(DF8)
Figure BDA0003324481120000111
黄色固体，收率：30.39％，m.p：225.6-227.2℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.99(s，1H)，8.66(s，1H)，8.54(s，1H)，8.30(s，1H)，8.05(d，J＝8.4Hz，1H)，7.67(d，J＝17.2Hz，2H)，7.60(d，J＝8.8Hz，2H)，7.38(d，J＝8.4Hz，1H)，6.91(d，J＝8.9Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.06(s，4H)，2.58(s，4H)，2.44(d，J＝6.4Hz，2H)，1.06(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：155.60，145.52，144.25，141.15，140.11，137.06，136.41，136.04，135.51，120.74，118.66，117.80，116.83，116.72，114.18，107.81，55.64，52.32，51.54，49.32，11.67.ESI-MS m/z：429.2(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(o-tolyl)-1H-indazol-3-amine(DF9)
Figure BDA0003324481120000112
黄色固体，收率：39.10％，m.p：221.2-223.0℃.1H NMR(500MHz，TFA)δ(ppm)：7.81(d，J＝7.6Hz，3H)，7.68(d，J＝6.2Hz，2H)，7.53(s，1H)，7.40(d，J＝8.2Hz，1H)，7.29(s，2H)，7.23(s，2H)，4.47(d，J＝26.8Hz，2H)，4.29(dd，J＝23.3，12.6Hz，4H)，4.01(d，J＝25.7Hz，2H)，3.58(d，J＝5.9Hz，2H)，2.25(s，3H)，1.55(s，3H).13C NMR(126MHz，TFA)δ(ppm)：150.79，143.91，143.12，140.44，140.37，139.46，136.09，134.95，130.28，128.71，128.33，126.46，125.62，123.17，122.48，120.48，111.37，109.66，53.84，52.96，49.31，18.33，7.72.ESI-MS m/z：412.2(M+H)+
6-(2-chlorophenyl)-N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-1H-indazol-3-amine(DF10)
Figure BDA0003324481120000121
黄色固体，收率：40.20％，m.p：242.3-244.0℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：11.93(s，1H)，8.64(s，1H)，7.99(d，J＝8.2Hz，1H)，7.60(d，J＝8.2Hz，3H)，7.48(d，J＝6.6Hz，1H)，7.46-7.40(m，2H)，7.34(s，1H)，7.04(d，J＝8.3Hz，1H)，6.91(d，J＝8.6Hz，2H)，3.05(s，4H)，2.57(s，4H)，2.43(d，J＝5.9Hz，2H)，1.05(t，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：145.54，144.27，140.52，140.33，137.20，136.10，131.68，131.46，129.79，129.08，127.39，119.82，119.73，116.84，116.72，113.71，109.98，52.35，51.55，49.39，11.72.ESI-MS m/z：432.2(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(4-(trifluoromethyl)phenyl)-1H-indazol-3-amine(DF11)
Figure BDA0003324481120000122
黄色固体，收率：43.20％，m.p：248.3-250.0℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.07(s，1H)，8.74(s，1H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)，8.01(d，J＝8.0Hz，2H)，7.88(d，J＝8.1Hz，2H)，7.68(d，J＝8.0Hz，2H)，7.65(s，1H)，7.42(d，J＝8.4Hz，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，2H)，3.14(s，4H)，2.72(s，4H)，2.56(s，2H)，1.13(t，J＝7.0Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：145.51，137.26，127.87，125.71，120.82，117.70，116.81，114.27，107.81，52.12，51.43，49.05，11.32.ESI-MS m/z：466.2(M+H)+
4-(3-((4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)amino)-1H-indazol-6yl)benzonitrile(DF12)
Figure BDA0003324481120000131
黄色固体，收率：39.59％，m.p：242.5-244.0℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.03(s，1H)，8.67(s，1H)，8.06(d，J＝8.4Hz，1H)，7.97-7.91(m，4H)，7.65(s，1H)，7.60(d，J＝8.6Hz，2H)，7.38(d，J＝8.4Hz，1H)，6.90(d，J＝8.7Hz，2H)，3.04(s，4H)，2.53(s，4H)，2.39(d，J＝7.0Hz，2H)，1.04(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：145.55，145.36，144.38，141.12，136.91，135.93，134.58，132.76，130.95，127.98，120.87，118.87，117.60，116.84，116.66，114.39，109.89，107.93，52.44，51.59，49.46，11.85.ESI-MS m/z：423.2(M+H)+
6-(2，3-dihydrobenzofuran-5-yl)-N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-1H-indazol-3-amine(DF13)
Figure BDA0003324481120000132
黄色固体，收率：38.10％，m.p：256.2-258.2℃.1H NMR(500MHz，TFA)δ(ppm)：7.79(d，J＝8.4Hz，3H)，7.69(s，1H)，7.64(d，J＝8.0Hz，2H)，7.59(d，J＝8.8Hz，1H)，7.56(s，1H)，7.46(d，J＝8.2Hz，1H)，6.98(d，J＝8.3Hz，1H)，4.79(t，J＝8.4Hz，2H)，4.43(t，J＝12.1Hz，2H)，4.26(dd，J＝22.7，13.5Hz，4H)，3.97(t，J＝12.3Hz，2H)，3.56(d，J＝7.0Hz，2H)，3.36(t，J＝8.5Hz，2H)，1.52(t，J＝6.9Hz，3H).13C NMR(126MHz，TFA)δ(ppm)：154.51，149.00，143.84，143.71，140.41，136.05，133.55，128.07，127.61，124.12，123.08，122.43，121.33，109.75，109.61，108.33，71.93，53.80，52.90，49.26，28.30，7.69.ESI-MS m/z：440.2(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(pyridin-3-yl)-1H-indazol-3-amine(DF14)
Figure BDA0003324481120000141
黄色固体，收率：27.29％，m.p：238.3-240.1℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.01(s，1H)，8.96(s，1H)，8.63(d，J＝43.4Hz，2H)，8.10(dd，J＝30.0，7.1Hz，2H)，7.61(d，J＝9.1Hz，3H)，7.50(s，1H)，7.36(d，J＝7.8Hz，1H)，6.90(d，J＝7.8Hz，2H)，3.04(s，4H)，2.54(s，4H)，2.40(d，J＝5.3Hz，2H)，1.03(s，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：148.36，147.95，145.54，144.30，141.22，136.21，136.03，135.68，134.47，123.80，120.87，117.57，116.85，116.68，114.14，107.56，52.37，51.55，49.39，11.75.ESI-MS m/z：399.2(M+H)+
N-(4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)-6-(pyridin-4-yl)-1H-indazol-3-amine(DF15)
Figure BDA0003324481120000142
黄色固体，收率：26.37％，m.p：245.4-247.1℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.16(s，1H)，8.82(s，1H)，8.71(d，J＝5.1Hz，2H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)，7.84(d，J＝5.2Hz，2H)，7.78(s，1H)，7.69(d，J＝8.7Hz，2H)，7.49(d，J＝8.4Hz，1H)，7.00(d，J＝8.6Hz，2H)，3.23(s，4H)，2.94(d，J＝35.3Hz，4H)，2.57(s，2H)，1.29(s，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：150.13，129.62，123.69，121.64，120.91，117.21，116.98，116.92，116.86，116.78，116.74，116.37，52.27，51.52，49.24，11.58.ESI-MS m/z：399.2(M+H)+
3-(3-((4-(4-ethylpiperazin-1-yl)phenyl)amin0)-1H-indazol-6-yl)thiophene-2-carbaldehyde(DF16)
Figure BDA0003324481120000151
黄色固体，收率：24.36％，m.p：252.2-254.0℃.1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：12.02(s，1H)，9.89(s，1H)，8.69(s，1H)，8.18(d，J＝4.9Hz，1H)，8.07(d，J＝8.3Hz，1H)，7.60(d，J＝8.8Hz，2H)，7.53(s，1H)，7.50(d，J＝4.9Hz，1H)，7.24(d，J＝8.1Hz，1H)，6.90(d，J＝8.9Hz，2H)，3.04(s，4H)，2.51(d，J＝3.8Hz，4H)，2.38(q，J＝7.0Hz，2H)，1.03(t，J＝7.1Hz，3H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ(ppm)：184.11，151.37，145.64，144.43，140.65，137.82，135.89，135.20，131.78，131.29，120.55，119.95，116.89，116.66，114.36，110.58，54.83，52.45，51.60，49.49，11.87.ESI-MS m/z：432.2(M+H)+
本发明所合成目标化合物的性状及其溶解性如下：
目标化合物产率普遍较高。化合物DF1-DF16均为白色絮状固体；化合物易溶于乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、DMSO、DMF、DMAC；微溶于石油醚、甲醇、乙醇；不溶于甲苯。本发明合成的目标化合物，在MS谱图中均显示了[M+1]+峰，且信号较强，部分化合物存在着同位素峰。1H-NMR谱图结果显示，所有目标化合物的氢信号，以及其化学位移，在图谱上都能清晰的看出。以DMSO-d6为溶剂时，核磁氢谱数据显示完全，即化合物氢的理论个数，与核磁氢谱图上氢的个数相吻合；而以CDCl3为溶剂时，大多数的目标化合物的核磁氢谱数据显示不完全，核磁氢谱图上通常没有脲基胺上的两个氢。13C-NMR谱图结果显示，目标化合物碳峰位移及数目基本上与理论数据相符。
实施例2化合物抗肿瘤细胞活性(激酶实验)
2.1实验操作步骤
(1)配制1×Kinase buffer。
(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物测试浓度为10μM，复孔检测，在384孔板中配置成100倍终浓度的溶液。然后用Echo550转移250nl到384反应板中备用。阴性对照孔和阳性对照孔中分别加250nl的100％DMSO。
(3)用1×Kinase buffer配制2.5倍终浓度的激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加入10μL的2.5倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加10μL的1×Kinase buffer。
(5)1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)用1×Kinase buffer配制25/15倍终浓度的ATP和Kinase substrate的混合溶液。
(7)加入15μL的25/15倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育25分钟。
(9)加入30μL终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。
(10)用Caliper EZ Reader读取转化率。
(11)加入30μL终止检测液停止激酶反应，1000rpm离心30秒，振荡混匀。用CaliperEZ ReaderⅡ读取转化率。计算公式：Inhibition＝(Conversion％_max-Conversion％_sample)/(Conversion％_max-Conversion％_min)*100。其中：Conversion％_sample是样品的转化率读数；Conversion％_min：阴性对照孔均值，代表没有酶活孔的转化率读数；Conversion％_max：阳性对照孔比值均值，代表没有化合物抑制孔的转化率读数。
2.2实验结果
表2：激酶实验结果
Figure BDA0003324481120000161
Figure BDA0003324481120000171
2.3实验结果分析
上述激酶实验筛选出了对EGFRL858R效果好的化合物，其中DF8的在1μM下对DDR1的活性达到了51.9％。

Claims (9)

1.一种以EGFRL858R为靶点的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物，其特征在于，具有下列通式：
Figure FDA0003324481110000011
其中：R1基团选自取代或者未取代的芳基；
所述芳基上的取代基选自卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、三氟甲基、氰基或者CHO中的一个或者多个；
所述芳基为苯基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基或,3-二氢苯并呋喃基。
2.根据权利要求1所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物，其特征在于，所述的芳基上的取代基选自F、Cl、甲基、甲氧基、三氟甲基、氰基或者CHO中的一个或者多个。
3.根据权利要求1所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物，其特征在于，所述R1基团为取代的吡啶基；
所述的吡啶基上的取代基为甲氧基、乙氧基或者丙氧基。
4.根据权利要求1所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物，其特征在于，为化合物DF1～DF16中的一个：
Figure FDA0003324481110000012
Figure FDA0003324481110000021
Figure FDA0003324481110000031
5.一种如权利要求1～4任一项所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)中间体1的合成：将6-溴吲唑溶于无水THF，在冰浴下多次少量加入KOtBu，活化5～15分钟后再加入碘单质，在冰浴下继续反应；反应结束后，用饱和氯化铵溶液淬灭，EtOAc萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体1，直接用于下一步；
(2)中间体2的合成：将中间体1溶于无水THF，加入二碳酸二叔丁酯和DMAP，在室温下搅拌反应，反应结束后，用饱和氯化铵溶液淬灭，EtOAc萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体2；
(3)中间体3的合成：将中间体2，N-乙基哌嗪苯胺，Pd2(dba)3,Xantphos，碳酸铯混合，然后用三通阀抽真空，氮气置换三次，用注射器加入甲苯，在60～80℃下搅拌反应，反应结束后，用EtOAc萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得中间体3；
(4)化合物DF1-DF16的合成通法：称取中间体3，取代基的苯硼酸，Pd(pph3)4,氢氧化钠，用三通阀抽真空，氮气置换三次，用注射器加入二氧六环和水的混合溶剂，在85～95℃下搅拌反应，反应结束后，用EtOAc萃取，萃取液用饱和食盐水洗，无水MgSO4干燥，减压浓缩，硅胶柱层析进一步纯化得产物DF1-DF16。
6.一种如权利要求1～4任一项所述的一种N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物用于治疗癌症；
所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物用作靶向EGFRL858R小分子抑制剂。
7.根据权利要求6所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的N-取代(5-氯-6-(取代苯氧基)嘧啶-4-基)苯甲酰胺类化合物为化合物DF8，结构式如下:
Figure FDA0003324481110000041
8.根据权利要求6或7所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物用于抑制结肠癌或肺癌。
9.根据权利要求6或7所述的N-取代(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-6-苯基-1H-吲唑-3-胺类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肺癌为非小细胞肺癌。
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