CN113951414A - 一种含有gls1抑制剂的酵母发酵固体饮料及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料及其制备方法。含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其各组分重量份数如下，原料：柠檬酸钙150‑200份；L‑苹果酸镁100‑150份；L‑半胱氨酸40‑60份；L‑牛磺酸15‑25份；加纳籽粉10‑30份；海藻糖10‑50份；五羟色胺酸2‑6份，抗老助剂：GLS1抑制剂0.02‑0.06份；酵母提取物10‑20份，辅料：富硒酵母0.05‑0.1份；维生素C 0.5‑1.5份；食用香精0.01‑0.02份；甜菊糖苷0.01‑0.05份。本申请通过抗老助剂的添加，使得固体饮料除能供给补充基本的营养物质之外，还能起到延缓衰老的保健功效。
Description
技术领域
本申请涉及功能性饮料技术领域，更具体地说，它涉及一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料及其制备方法。
背景技术
随着人民生活水平的日益提高，饮料营养及功能也开始成为人们关注的热点，其中以新兴的固体饮料为例，其外观呈粉末状、颗粒状或块状，因其食用方便、卫生，风味独特、品种多样等特点而备受消费者的青睐，并且富含大量的维生素、矿物质等营养成分，长期饮用有利于维持人体的健康。
相关技术中的固体饮料是以糖、乳和乳制品、蛋或蛋制品、果汁或食用植物提取物等为主要原料，添加适量的辅料或食品添加剂制成的每100克成品水分不高于5克的固体制品，可补充人体的营养所需。但随着人们生活节奏的加快，人们更易因精神紧张、压力大等原因加速衰老，因此迫切需要开发一种即能补充供给人体日常所需，又能延缓衰老的功能性饮料。
发明内容
为解决上述技术问题，本申请提供一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料及其制备方法。
第一方面，本申请提供一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，采用如下的技术方案：
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，包括原料、抗老助剂和辅料，其各组分重量份数如下：
原料：
柠檬酸钙150-200份；
L-苹果酸镁100-150份；
L-半胱氨酸40-60份；
L-牛磺酸15-25份；
加纳籽粉10-30份；
海藻糖10-50份；
五羟色胺酸1-6份；
抗老助剂：
GLS1抑制剂0.02-0.07份；
酵母提取物1-2份；
辅料：
富硒酵母0.05-0.1份；
维生素C 0.5-1.5份；
食用香精0.01-0.02份；
甜菊糖苷0.01-0.05份。
通过采用上述技术方案，上述组分及配比的固体饮料除能为人体补充基本营养物质外，还通过抗老助剂的添加，赋予了固体饮料延缓人体衰老的功效，长期饮用后，其效果更优；
其中GLS1抑制剂则是通过抑制体内GLS1酶，从而达到了延缓衰老的目的，且酵母提取物与GLS1抑制剂具有一定复配效果，其内富含氨基酸、B族维生素、核甘酸、多肽及微量元素等，除能促进抑制反应进行的同时，还有助于新生细胞的生长发育；
分析其原因可能是，由于GLS1酶对衰老细胞死亡率有着至关重要的影响，公知溶酶体膜是清除衰老细胞的关键，当衰老细胞的溶酶体膜受损，并导致溶酶体内H+泄露到细胞质中,胞内pH值发生下降后，会诱导KGA表达,继而增强了谷氨酰胺的分解,而且在分解过程中产生的氨可以中和较低的pH,从而提高了衰老细胞的存活率，因此通过抑制GLS酶，即可将各组织和器官内的衰老细胞有效清除，继而达到了延缓衰老的功效。
优选的，所述酵母提取物的提取方法如下：
A、酵母细胞悬浮液制备：将酵母干粉与缓冲液按重量比1：(80-100)混合，即可制得酵母细胞悬浮液，缓冲液为去离子水；
B、酶解反应：
(1)先将酵母细胞悬浮液加热至70-80℃，自溶0.5-1h，然后再将温度调至50-60℃、pH调至6.0-7.0，然后加入一级提取酶，进行水解反应12-16h，即可制得一级水解液；
所述一级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为0.8-12.0mg一级提取酶/g酵母细胞；
所述一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶组成；
(2)先将(1)中制得的一级水解液降温至40-50℃，再将pH值调节到5.0-6.0，然后加入二级提取酶，进行水解反应6-8h，即可制得二级水解液；
所述二级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为3.6-11.2mg二级提取酶/g酵母细胞；
所述二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶组成；
(3)将(2)中制得的二级水解液加热至80-90℃，灭活30-45min，然后离心分离，分离后经喷雾干燥处理后，即可制得所述酵母提取物。
通过采用上述技术方案，上述提取工艺提取的酵母提取物，其氨基酸、B族维生素、核甘酸、多肽及微量元素的含量较高，对GLS1抑制剂的促进作用最好，且能保障新生细胞的生长发育，因此保障了固体饮料的延缓衰老和养生功效。
优选的，所述(1)中一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：(0.8-1.2)：(0.6-0.8)组成。
通过采用上述技术方案，上述组分及比例的一级提取酶，可在适宜条件下，高效的将酵母细胞中的氨基酸、B族维生素、多肽及微量元素等提取出来，继而保障了其对GLS1抑制剂的促进作用的同时，有利于新生细胞的生长发育，继而赋予了固体饮料延缓衰老和养生的功效。
优选的，所述(2)中二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：(0.6-0.8)：(1-1.2)组成。
通过采用上述技术方案，上述组分及比例的二级提取酶，可在适宜条件下，较为高效的将酵母细胞中的氨基酸、B族维生素、核酸、多肽及微量元素等提取出来，促进了GLS1抑制剂抑制效果的同时，为新生细胞的生长发育提供了必要的营养物质，继而赋予了固体饮料延缓衰老和养生的功效。
优选的，所述抗老助剂中还包括20-30份的植物抗老提取物，所述植物抗老提取物的制备方法如下：
a、混料破碎：先对葡萄、桑葚和乌梅进行清洗，并去核去茎，再按对应重量比进行混合破碎15-30min，制得混合料，过滤除杂后，静置1-2h备用，混合破碎过程在SO2气氛下进行；
b、厌氧发酵：向混合料中加入酵母粉，厌氧发酵，制得发酵醪液；
c、共混提取：先将西兰花茎切粒，再将其与粗提液按重量比1：(2-3)进行混合浸泡，于厌氧环境、28-32℃、pH为4.0-5.0的条件下，保藏15-22d后，离心分离，并弃去水层，即可制得植物抗老提取物；
粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳混合而成
通过采用上述技术方案，经上述工艺制得的发酵醪液除包含乙醇外，还富含从葡萄与桑葚中提取的大量维生素，以及少量的酮类物质、鞣花酸、鞣花单宁和白藜芦醇等，均有助于新生细胞的生长和老化细胞的衰亡；
待发酵醪液与食盐水、醋酸和豆乳混合后，除本身营养物质更为丰富的同时，可充分的将西兰花茎中的萝卜硫素等成分提取出来，继而多种有效成分复配，保障了GLS1抑制剂的抑制效果和新生细胞的生长发育，赋予了固体饮料优良的抗衰老功效。
优选的，所述a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：(0.2-0.4)：(0.4-0.8)混合。
通过采用上述技术方案，由上述组分及配比制得的发酵醪液除包含乙醇外，所富含的维生素、酮类物质、鞣花酸、鞣花单宁和白藜芦醇等有效成分较多，有助于新生细胞的生长和老化细胞的衰亡。
优选的，所述b中厌氧发酵的具体步骤如下：
向混合料中按重量比1：(0.03-0.05)加入酵母粉，以18-20℃厌氧发酵7-12d，待发酵液pH低于3.8后，停止发酵,即可制得发酵醪液。
通过采用上述技术方案，上述步骤及条件下的厌氧发酵，其所得发酵醪液的营养物质含量最高，所得发酵醪液除包含乙醇外，还富含从葡萄与桑葚中提取的大量维生素，以及酮类物质、鞣花酸、鞣花单宁和白藜芦醇等，均有助于新生细胞的生长和老化细胞的衰亡。
优选的，所述c中的粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：(0.1-0.3)：(0.05-0.15)：(0.05-0.08)混合而成。
通过采用上述技术方案，由上述组分及配比组成的粗提液，其内营养物质较多的同时，可高效的将西兰花及其他组分中的有效成分提取出来，继而保障了饮料的抗衰老功效，且富含的多种营养物质均有利于新生细胞生长，满足了新生细胞的营养供给。
第二方面，本申请提供一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料的制备方法，采用如下的技术方案：
S1、先将原料中各组分与去离子水按重量百分比1:(2-3)混合均匀，优选为1:2.5，然后再加入辅料和抗老助剂，升温至60-65℃搅拌均匀后，于50-60MPa的压力、60-65℃的温度下循环均质3-5次，即可制得混合料液；
S2、对S1中制得的混合料液杀菌后，投入喷雾冷冻干燥机中，控制进风温度为120-140℃，进风流量为200-260m3/h，出风温度为80-100℃，优选为控制进风温度为130℃，进风流量为230m3/h，出风温度为90℃，即可制得含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料。
通过采用上述技术方案，由上述制备工艺制得的酵母发酵固体饮料，其内有效成分的保有量最高，且制备工艺简单，易于控制条件，不易因其本身的酶或微生物引起的变质或腐败，利于储藏和运输。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请通过抗老助剂的添加，使得固体饮料除能为人体提供必要的营养物质之外，还可有效延缓衰老，其反应机理如下：通过抑制GLS酶的活力，使得衰老细胞的溶酶体膜受损后，可被有效清除，继而达到了延缓衰老的目的；
2、本申请通过植物抗老提取物的添加，进一步保障了固体饮料延缓衰老和养生的功效，分析其原因可能是，由于其内所含的酮类物质、鞣花酸、鞣花单宁、白藜芦醇和萝卜硫素等，均有助于新生细胞的生长和老化细胞的衰亡；
3、本申请中的制备方法较为简易，各项操作条件易于控制，适用于产业化生产的同时，所制得的固体饮料，易于储藏和运输，不易发生变质，且有效成分的保有量较高。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明。
本申请的各实施例和对比例中所用的原料，除下述特殊说明之外，其他均为市售。
| 原料/设备 | 规格/型号 | 采购厂家 |
| GLS1抑制剂 | CAS号:314045-39-1 | 上海陶术生物科技有限公司 |
| L-半胱氨酸 | CAS号:52-90-4 | 西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司 |
| L-牛磺酸 | CASNo.：70155-54-3 | 上海甄准生物科技有限公司 |
| 五羟色胺酸 | CAS号:56-69-9 | 上海麦克林生化科技有限公司 |
| 富硒酵母 | 货号LF0902 | 深圳乐芙生物科技有限公司 |
| 酵母抽提酶 | 酶活力20万U/g | 青岛隆川生物科技有限公司 |
| 木瓜蛋白酶 | 货号FDG-4003 | 夏盛(北京)生物科技开发有限公司 |
| 中性蛋白酶 | 货号SDG-2430 | 夏盛(北京)生物科技开发有限公司 |
| 谷氨酰胺转氨酶 | 货号FDG-3901 | 夏盛(北京)生物科技开发有限公司 |
| 核酸酶 | 货号FDG-2253 | 夏盛(北京)生物科技开发有限公司 |
| 酸性蛋白酶 | 货号GDG-2004 | 夏盛(北京)生物科技开发有限公司 |
注：上表中GLS1抑制剂为BPTES
制备例
制备例1
一种酵母提取物，其提取方法如下：
A、酵母细胞悬浮液制备：将200kg酵母干粉与缓冲液按重量比1：90混合，即可制得酵母细胞悬浮液，缓冲液为去离子水；
B、酶解反应：
(1)先将酵母细胞悬浮液加热至75℃，自溶0.75h，然后再将温度调至55℃、pH调至6.5，然后加入一级提取酶，进行水解反应14h，即可制得一级水解液；
一级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为6.0mg一级提取酶/g酵母细胞；
一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：0.6：0.4组成；
(2)先将(1)中制得的一级水解液降温至45℃，再将pH值调节到5.5，然后加入二级提取酶，进行水解反应7h，即可制得二级水解液；
二级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为7.4mg二级提取酶/g酵母细胞；
二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：0.4：0.8组成；
(3)将(2)中制得的二级水解液加热至85℃，灭活37.5min，然后离心分离，分离后的液体经喷雾干燥处理后，即可制得酵母提取物。
制备例2
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，其提取方法如下：
A、酵母细胞悬浮液制备：将酵母干粉与缓冲液按重量比1：80混合，即可制得酵母细胞悬浮液，缓冲液为去离子水；
B、酶解反应：
(1)先将酵母细胞悬浮液加热至70℃，自溶0.5h，然后再将温度调至50℃、pH调至6.0，然后加入一级提取酶，进行水解反应12h，即可制得一级水解液；
一级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为0.8mg一级提取酶/g酵母细胞；
(2)先将(1)中制得的一级水解液降温至40℃，再将pH值调节到5.0，然后加入二级提取酶，进行水解反应6h，即可制得二级水解液；
二级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为3.6mg二级提取酶/g酵母细胞；
(3)将(2)中制得的二级水解液加热至80℃，灭活30min，然后离心分离，分离后的液体经喷雾干燥处理后，即可制得酵母提取物。
制备例3
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，其提取方法如下：
A、酵母细胞悬浮液制备：将酵母干粉与缓冲液按重量比1：100混合，即可制得酵母细胞悬浮液，缓冲液为去离子水；
B、酶解反应：
(1)先将酵母细胞悬浮液加热至80℃，自溶1h，然后再将温度调至60℃、pH调至7.0，然后加入一级提取酶，进行水解反应16h，即可制得一级水解液；
一级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为12.0mg一级提取酶/g酵母细胞；
(2)先将(1)中制得的一级水解液降温至50℃，再将pH值调节到6.0，然后加入二级提取酶，进行水解反应8h，即可制得二级水解液；
二级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为11.2mg二级提取酶/g酵母细胞；
(3)将(2)中制得的二级水解液加热至90℃，灭活45min，然后离心分离，分离后的液体经喷雾干燥处理后，即可制得酵母提取物。
制备例4
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(1)中一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：0.8：0.6组成，其他均与制备例1相同。
制备例5
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(1)中一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：1：0.7组成，其他均与制备例1相同。
制备例6
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(1)中一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：1.2：0.8组成，其他均与制备例1相同。
制备例7
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(1)中一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：1.4：1组成，其他均与制备例1相同。
制备例8
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(2)中二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：0.6：1组成，其他均与制备例1相同。
制备例9
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(2)中二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：0.7：1.1组成，其他均与制备例1相同。
制备例10
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(2)中二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：0.8：1.2组成，其他均与制备例1相同。
制备例11
一种酵母提取物，与制备例1的不同之处在于，(2)中二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：1：1.4组成，其他均与制备例1相同。
制备例12
一种植物抗老提取物，其制备方法如下：
a、混料破碎：先对葡萄、桑葚和乌梅进行清洗，并去核去茎，再按对应重量比进行混合破碎15min，制得混合料，过滤除杂后，静置1h备用，混合破碎过程在SO2气氛下进行；
a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：0.1：0.2混合；
b、厌氧发酵：向混合料中按重量比1：0.03加入酵母粉，以18℃厌氧发酵7d，待发酵液pH低于3.8后，停止发酵,即可制得发酵醪液；
c、共混提取：先将西兰花茎切粒，再将其与粗提液按重量比1：2进行混合浸泡，于厌氧环境、28℃、pH为4.0的条件下，保藏15d后，离心分离，并弃去水层，即可制得植物抗老提取物；
粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：0.05：0.01：0.03混合而成，其中食盐水的质量百分比浓度为18％。
制备例13
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，其制备方法如下：
a、混料破碎：先对葡萄、桑葚和乌梅进行清洗，并去核去茎，再按对应重量比进行混合破碎25min，制得混合料，过滤除杂后，静置1.5h备用，混合破碎过程在SO2气氛下进行；b、厌氧发酵：向混合料中按重量比1：0.04加入酵母粉，以19℃厌氧发酵10d，待发酵液pH低于3.8后，停止发酵,即可制得发酵醪液；
c、共混提取：先将西兰花茎切粒，再将其与粗提液按重量比1：(2-3)进行混合浸泡，于厌氧环境、28-32℃、pH为4.0-5.0的条件下，保藏15-22d后，离心分离，并弃去水层，即可制得植物抗老提取物，其他均与制备例12相同。
制备例14
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，其制备方法如下：
a、混料破碎：先对葡萄、桑葚和乌梅进行清洗，并去核去茎，再按对应重量比进行混合破碎30min，制得混合料，过滤除杂后，静置2h备用，混合破碎过程在SO2气氛下进行；
b、厌氧发酵：向混合料中按重量比1：0.05加入酵母粉，以20℃厌氧发酵12d，待发酵液pH低于3.8后，停止发酵,即可制得发酵醪液；
c、共混提取：先将西兰花茎切粒，再将其与粗提液按重量比1：3进行混合浸泡，于厌氧环境、32℃、pH为5.0的条件下，保藏22d后，离心分离，并弃去水层，即可制得植物抗老提取物，其他均与制备例12相同。
制备例15
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：0.2：0.4混合，其他均与制备例12相同。
制备例16
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：0.3：0.6混合，其他均与制备例12相同。
制备例17
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：0.4：0.8混合，其他均与制备例12相同。
制备例18
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：0.5：1混合，其他均与制备例12相同。
制备例19
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，c中粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：0.1：0.05：0.05混合而成，其他均与制备例12相同。
制备例20
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，c中粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：0.2：0.10：0.07混合而成，其他均与制备例12相同。
制备例21
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，c中粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：0.3：0.15：0.08混合而成，其他均与制备例12相同。
制备例22
一种植物抗老提取物，与制备例12的不同之处在于，c中粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：0.5：0.2：0.1混合而成，其他均与制备例12相同。
性能检测试验
取各实施例和对比例中制得的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料进行分组检测，每组试验对象均为10只小鼠，小鼠为6-8周龄的雌性C57/BL6裸小鼠，均重为20g，具体检测步骤如下：
1.先将含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料与温水按1:1冲兑搅拌，制成含有GLS1抑制剂的酵母发酵饮料，再将含有GLS1抑制剂的酵母发酵饮料按0.2mL/只，每日三次进行灌喂，灌喂7d、15d、30d后,分别取0.1g组织样本进行酶活性检测，小鼠其他生存条件均保持一致；
2.将0.1g组织样本放在EP管内，加入1ml试剂1进行冰浴匀浆，然后置于4℃离心机内，8000g离心10min，取上清，置冰上待测；
3.分光光度计预热30min,调节波长420mm,蒸馏水调零；
4.先取25uL的2中所得上清样本，加入100uL的试剂1和400uL的试剂2混匀，并于37℃水浴1h，再加入525uL的试剂3，混匀，8000g,25℃离心10min；然后取650uL上清液，并在EP管中加入下列试剂，150uL的试剂4、100uL的试剂5和100uL的试剂6，混匀后，即可于420nm处读取吸光值A，计算ΔA＝A测定管-A对照管，其中对照管为25uL的蒸馏水，其他均匀测定管相同。
GLS酶活性测试，按样本鲜重计算：
GLS(u mol/min/g鲜重)＝363.1*(ΔA-0.1301)÷T＝363.1*(ΔA-0.1301)
单位定义：每g组织每小时催化谷氨酰胺生产1u mol氨定义为1个酶活力单位；
本性能检测中所用试剂1、试剂2、试剂3、试剂4、试剂5和试剂6，即GLS活性测定试剂盒，采购自北京索莱宝科技有限公司，货号为BC1450。
注：GLS1是研究人员在与衰老细胞生存相关的关键基因筛选过程中确定的最相关的候选基因,GLS1编码的肾型谷氨酰胺转氨酶(KGA)在肺、脑等多种器官中表达，同位素示踪显示GLS1抑制剂BPTES抑制了谷氨酰胺的激活,而且GLS1对于多种衰老细胞的存活十分重要，因此测定GLS的酶活对体内细胞衰老的速率有着重要的参考价值。
实施例
实施例1
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，各组分及其相应的重量如表1所示，并通过如下制备方法制得：
S1、先将原料中各组分与去离子水按重量百分比1:2.5混合均匀后，然后再加入辅料和抗老助剂，升温至60℃搅拌均匀后，于55MPa的压力、65℃的温度下循环均质4次，即可制得混合料液；
S2、对S1中制得的混合料液杀菌后，投入喷雾冷冻干燥机中，控制进风温度为130℃，进风流量为230m3/h，出风温度为90℃，即可制得含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料。
实施例2-6
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，各组分及其相应的重量如表1所示。
表1：实施例1-6中各组分及相应重量(kg)
对比例1
一种酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，其组成中不含抗老助剂，其他条件均与实施例1相同。
对比例2
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，抗老助剂中不含酵母提取物，其他条件均与实施例1相同。
抽取上述实施例1-6和对比例1-2中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例1-6中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为342-462nM；15d后GLS酶活为257-347nM；30d后GLS酶活为175-236nM。
进一步，实施例3和实施例4为较优实施例，其7d后GLS酶活为342-365nM；15d后GLS酶活为257-274nM；30d后GLS酶活为175-186nM，可见GLS1抑制剂在用量为0.04kg时，其抑制效果较优，并随饮用时间加长，延缓衰老效果更好；当GLS1抑制剂的用量增加至0.06kg时，其初期抑制GLS抑制效果较好，参见实施例5和实施例6，但随饮用时间加长，其抑制效果弱于实施例3和实施例4，分析其原因可能是，抑制效果过强，刺激人体产生应激反应，继而产生一定的耐药性，导致后续饮用过程中效果减弱。
特别是，实施例3中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活仅为342nM；15d后GLS酶活仅为257nM；30d后GLS酶活仅为175nM，分析其原因可能是，由于酵母提取物中的氨基酸、B族维生素、核甘酸、多肽及微量元素等对GLS1抑制剂的抑制起到了一定程度的促进作用，因此适当的增加酵母提取物的用量，有利于保障固体饮料的延缓衰老效果。
从上表中还可以看出，对比例1相对于实施例1，由于未加入抗老组分，其基本不具备延缓衰老和抑制GLS酶活的作用，其7d后GLS酶活高达872nM，相比于实施例1提高了88％；15d后GLS酶活高达870nM，相比于实施例1提高了151％；30d后GLS酶活高达870nM，相比于实施例1提高了269％。
从上表中还可以看出，对比例2相对于实施例1，由于未加入酵母提取物进行复配，其对GLS酶的抑制效果均小幅度降低，其7d后GLS酶活为601nM，相比于实施例1提高了30％；15d后GLS酶活为462nM，相比于实施例1提高了33％；30d后GLS酶活为312nM，相比于实施例1提高了32％，可见酵母提取物的加入，有利于对GLS酶的抑制，继而保障了固体饮料延缓衰老的功效。
综上所述，上述组分及配比的抗老助剂在掺入固体饮料内后，有助于延缓人体衰老，且随着饮用时间延长，其效果更优，且GLS1抑制剂与酵母提取物间具有一定复配效果，饮品营养价值更高的同时，进一步保障了饮品的养生抗老功效。
实施例7-8
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，所用酵母提取物的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
表：实施例7-8中酵母提取物使用情况对照表
| 组别 | 酵母提取物 |
| 实施例7 | 由制备例2制得 |
| 实施例8 | 由制备例3制得 |
抽取上述实施例7-8中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例1、实施例7-8中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为439-462nM；15d后GLS酶活为330-347nM；30d后GLS酶活为224-236nM。
特别是，实施例7中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活仅为439nM；15d后GLS酶活仅为330nM；30d后GLS酶活仅为224nM，可见该工艺为最优工艺。
综上所述，经上述提取工艺提取的酵母提取物，其氨基酸、B族维生素、核甘酸、多肽及微量元素的含量较高，对GLS1抑制剂的促进作用最好，且能保障新生细胞的生长发育，因此保障了固体饮料的延缓衰老和养生功效。
实施例9-12
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，所用酵母提取物的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
表：实施例9-12中酵母提取物使用情况对照表
| 组别 | 酵母提取物 |
| 实施例9 | 由制备例4制得 |
| 实施例10 | 由制备例5制得 |
| 实施例11 | 由制备例6制得 |
| 实施例12 | 由制备例7制得 |
抽取上述实施例9-12中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例1、实施例9-12中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为395-462nM；15d后GLS酶活为296-347nM；30d后GLS酶活为201-236nM。
进一步，实施例9-11中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为395-416nM；15d后GLS酶活为296-312nM；30d后GLS酶活为201-212nM，可见一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：(0.8-1.2)：(0.6-0.8)组成时，其酵母提取物的提取效果较优。
特别是，实施例10中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为395nM；15d后GLS酶活为296nM；30d后GLS酶活为201nM，可见一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：1：0.7组成时，其酵母提取物的提取效果最优。
综上所述，上述组分及比例的一级提取酶，可在适宜条件下，高效的将酵母细胞中的氨基酸、B族维生素、多肽及微量元素等提取出来，继而保障了其对GLS1抑制剂的促进作用的同时，有利于新生细胞的生长发育，继而赋予了固体饮料延缓衰老和养生的功效。
实施例13-16
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，所用酵母提取物的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
表：实施例13-16中酵母提取物使用情况对照表
| 组别 | 酵母提取物 |
| 实施例13 | 由制备例8制得 |
| 实施例14 | 由制备例9制得 |
| 实施例15 | 由制备例10制得 |
| 实施例16 | 由制备例11制得 |
抽取上述实施例13-16中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例1、实施例13-16中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为391-462nM；15d后GLS酶活为293-347nM；30d后GLS酶活为199-236nM。
进一步，实施例13-15中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为387-408nM；15d后GLS酶活为291-306nM；30d后GLS酶活为198-208nM，可见二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：(0.6-0.8)：(1-1.2)组成时，其酵母提取物的提取效果较优。
特别是，实施例15中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为387nM；15d后GLS酶活为291nM；30d后GLS酶活为198nM，可见一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：0.7：1.1组成时，其酵母提取物的提取效果最优。
综上所述，上述组分及比例的二级提取酶，可在适宜条件下，较为高效的将酵母细胞中的氨基酸、B族维生素、核酸、多肽及微量元素等提取出来，促进了GLS1抑制剂抑制效果的同时，为新生细胞的生长发育提供了必要的营养物质，继而赋予了固体饮料延缓衰老和养生的功效。
实施例17-21
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例1的不同之处在于，抗老助剂中还包括植物抗老提取物，由制备例12中制备方法制得，各组分及其相应的重量如表2所示。
表2：实施例17-21中各组分及相应重量(kg)
抽取上述实施例17-21中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例17-21中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，相比实施例1，均具有更优的延缓衰老功效，可进一步抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为304-374nM；15d后GLS酶活为229-280nM；30d后GLS酶活为156-190nM。
特别是，实施例19中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活仅为304nM；15d后GLS酶活仅为229nM；30d后GLS酶活仅为156nM，分析其原因可能是，由于植物抗老提取物中富含的萝卜硫素、鞣花酸、鞣花单宁和白藜芦醇等成分，可有效抑制老化蛋白聚集的同时，还可与GLS1抑制剂复配，促进GLS1抑制剂的抑制效果，继而赋予了固体饮料优良的延缓衰老功效。
综上所述，上述组分及配比的抗老助剂在掺入固体饮料内后，有助于延缓人体衰老，且随着饮用时间延长，其效果更优，且GLS1抑制剂与植物抗老提取物间具有一定复配效果，饮品营养价值更高的同时，进一步保障了饮品的养生抗老功效。
实施例22-23
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例17的不同之处在于，所用植物抗老提取物的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
表：实施例22-23中酵母提取物使用情况对照表
| 组别 | 酵母提取物 |
| 实施例22 | 由制备例13制得 |
| 实施例23 | 由制备例14制得 |
抽取上述实施例22-23中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例17、实施例22-23中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为355-374nM；15d后GLS酶活为266-280nM；30d后GLS酶活为181-190nM。
特别是，实施例22中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为355nM；15d后GLS酶活为266nM；30d后GLS酶活为181nM，可见该工艺为最优工艺。
综上所述，上述工艺制得的植物抗老提取物，其能有效成分更多的同时，与GLS1抑制剂的复配效果较好，继而保障了衰老细胞的消除和新生细胞的生长发育。
实施例24-27
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例17的不同之处在于，所用植物抗老提取物的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
表：实施例24-27中酵母提取物使用情况对照表
| 组别 | 酵母提取物 |
| 实施例24 | 由制备例15制得 |
| 实施例25 | 由制备例16制得 |
| 实施例26 | 由制备例17制得 |
| 实施例27 | 由制备例18制得 |
抽取上述实施例24-27中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例17、实施例24-27中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为345-374nM；15d后GLS酶活为258-280nM；30d后GLS酶活为175-190nM。
进一步，实施例24-26中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为345-359nM；15d后GLS酶活为258-269nM；30d后GLS酶活为175-182nM，可见a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：(0.2-0.4)：(0.4-0.8)混合，其植物抗老提取物的复配效果较优。
特别是，实施例25中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为345nM；15d后GLS酶活为258nM；30d后GLS酶活为175nM，可见可见a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：0.3：0.6混合时，其植物抗老提取物的复配效果最优。
综上所述，由上述组分及配比制得的植物抗老提取物，其能有效成分较多，能促进GLS1抑制剂抑制作用的同时，有利于新生细胞的生长，其中制得的发酵醪液除包含乙醇外，所富含的维生素、酮类物质、鞣花酸、鞣花单宁和白藜芦醇等有效成分较多，有助于新生细胞的生长和老化细胞的衰亡。
实施例28-31
一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，与实施例17的不同之处在于，所用植物抗老提取物的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
表：实施例28-31中酵母提取物使用情况对照表
抽取上述实施例28-31中制得样品，对其进行性能检测，分别测得每组在灌喂7d、15d和30d后的GLS酶活，测试结果记入下表：
从上表中可以看出，实施例17、实施例28-31中制得的固体饮料除能为人体供给补充营养物质的同时，均具有较优的延缓衰老功效，可有效的抑制体内GLS酶的酶活，且随着固体饮料饮用周期的加长，其抑制效果更好，7d后GLS酶活为349-374nM；15d后GLS酶活为255-280nM；30d后GLS酶活为171-190nM。
进一步，实施例28-30中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为349-363nM；15d后GLS酶活为255-266nM；30d后GLS酶活为171-178nM，可见c中的粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：(0.1-0.3)：(0.05-0.15)：(0.05-0.08)混合而成，其植物抗老提取物的复配效果较优。
特别是，实施例29中制得的固体饮料，其延缓衰老效果最好，其7d后GLS酶活为349nM；15d后GLS酶活为255nM；30d后GLS酶活为171nM，可见可见c中的粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：0.2：0.10：0.06混合而成时，其植物抗老提取物的复配效果最优。
综上所述，由上述组分及配比制得的植物抗老提取物，其内营养物质较多，有利于新生细胞生长的同时，可高效的将西兰花中的有效成分提取出来，继而保障了饮料的抗衰老功效。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (9)
1.一种含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，包括原料、抗老助剂和辅料，其各组分重量份数如下：
原料：
柠檬酸钙150-200份；
L-苹果酸镁100-150份；
L-半胱氨酸40-60份；
L-牛磺酸15-25份；
加纳籽粉10-30份；
海藻糖10-50份；
五羟色胺酸2-6份；
抗老助剂：
GLS1抑制剂 0.02-0.06份；
酵母提取物10-20份；
辅料：
富硒酵母0.05-0.1份；
维生素C 0.5-1.5份；
食用香精0.01-0.02份；
甜菊糖苷0.01-0.05份。
2.根据权利要求1所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述酵母提取物的提取方法如下：
A、酵母细胞悬浮液制备：将酵母干粉与缓冲液按重量比1：（80-100）混合，即可制得酵母细胞悬浮液，缓冲液为去离子水；
B、酶解反应：
（1）先将酵母细胞悬浮液加热至70-80℃，自溶0.5-1h，然后再将温度调至50-60℃、pH调至6.0-7.0，然后加入一级提取酶，进行水解反应12-16 h，即可制得一级水解液；
所述一级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为0.8-12.0mg一级提取酶/g酵母细胞；
所述一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶组成；
（2）先将（1）中制得的一级水解液降温至40-50℃，再将pH值调节到5.0-6.0，然后加入二级提取酶，进行水解反应6-8 h，即可制得二级水解液；
所述二级提取酶的添加量按酵母细胞的重量计算，为3.6-11.2mg二级提取酶/g酵母细胞；
所述二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶组成；
（3）将（2）中制得的二级水解液加热至80-90℃，灭活30-45min，然后离心分离，分离后的液体经喷雾干燥处理后，即可制得所述酵母提取物。
3.根据权利要求2所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述（1）中一级提取酶由酵母抽提酶、木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按重量比1：（0.8-1.2）：（0.6-0.8）组成。
4.根据权利要求2所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述（2）中二级提取酶由谷氨酰胺转氨酶、核酸酶与酸性蛋白酶按重量比1：（0.6-0.8）：（1-1.2）组成。
5.根据权利要求1所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述抗老助剂中还包括20-30份的植物抗老提取物，所述植物抗老提取物的制备方法如下：
a、混料破碎：先对葡萄、桑葚和乌梅进行清洗，并去核去茎，再按对应重量比进行混合破碎15-30min，制得混合料，过滤除杂后，静置1-2h备用，混合破碎过程在SO2气氛下进行；
b、厌氧发酵：向混合料中加入酵母粉，厌氧发酵，制得发酵醪液；
c、共混提取：先将西兰花茎切粒，再将其与粗提液按重量比1：（2-3）进行混合浸泡，于厌氧环境、28-32℃、pH为4.0-5.0的条件下，保藏15-22d后，离心分离，并弃去水层，即可制得植物抗老提取物；
粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳混合而成。
6.根据权利要求5所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述a中葡萄、桑葚和乌梅按重量比1：（0.2-0.4）：（0.4-0.8）混合。
7.根据权利要求5所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述b中厌氧发酵的具体步骤如下：
向混合料中按重量比1：（0.03-0.05）加入酵母粉，以18-20℃厌氧发酵7-12d，待发酵液pH低于3.8后，停止发酵,即可制得发酵醪液。
8.根据权利要求5所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料，其特征在于，所述c中的粗提液由发酵醪液、食盐水、醋酸和豆乳按重量比1：（0.1-0.3）：（0.05-0.15）：（0.05-0.08）混合而成。
9.权利要求1-8任一所述的含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、先将原料中各组分与去离子水按重量百分比1:（2-3）混合均匀，然后再加入辅料和抗老助剂，升温至60-65℃搅拌均匀后，于50-60MPa的压力、60-65℃的温度下循环均质3-5次，即可制得混合料液；
S2、对S1中制得的混合料液杀菌后，投入喷雾冷冻干燥机中，控制进风温度为120-140℃，进风流量为200-260m3/h，出风温度为80-100℃，即可制得含有GLS1抑制剂的酵母发酵固体饮料。
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| CN112998101A (zh) * | 2021-04-20 | 2021-06-22 | 上海舒泽生物科技研究所 | 一种人体衰老kat7基因的抑制剂固体饮料及其制备方法 |
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