CN113943678B - 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用 - Google Patents

一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113943678B
CN113943678B CN202111308578.XA CN202111308578A CN113943678B CN 113943678 B CN113943678 B CN 113943678B CN 202111308578 A CN202111308578 A CN 202111308578A CN 113943678 B CN113943678 B CN 113943678B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pseudomonas aeruginosa
seedling
microbial
pepper
substrate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111308578.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113943678A (zh
Inventor
赵晓燕
张新建
吴晓青
周方园
张广志
范素素
周红姿
谢雪迎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences)
Qingdao United Agriculture Plant Protection Technology Co ltd
Original Assignee
Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences) filed Critical Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences)
Priority to CN202111308578.XA priority Critical patent/CN113943678B/zh
Publication of CN113943678A publication Critical patent/CN113943678A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113943678B publication Critical patent/CN113943678B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • A01G24/15—Calcined rock, e.g. perlite, vermiculite or clay aggregates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A01G24/22—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material containing plant material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/27—Pseudomonas
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W30/00—Technologies for solid waste management
    • Y02W30/40—Bio-organic fraction processing; Production of fertilisers from the organic fraction of waste or refuse

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用，所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌G5，已于2021年9月8日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.23375，分类命名为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa；所述铜绿假单胞菌可用于制备微生物育苗基质；所述微生物育苗基质可用于种植辣椒。本发明提供的铜绿假单胞菌及以其制备的微生物育苗基质具有防病、促生作用。

Description

一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用。
背景技术
农业面源污染等问题使土壤受到了不同程度的破坏，农业可利用土地也面临着巨大压力，农用优质土壤也越来越紧缺，且设施土壤连作障碍问题日趋严重，因此基质化育苗在设施蔬菜产业上迅速发展。辣椒是一种大众喜爱的茄果类蔬菜，中国辣椒总产量位列全球第一，是我国保护地栽培的主要蔬菜之一，但苗期病害发生，直接影响辣椒的产量，严重的甚至产量下降30％-50％以上。俗话说苗好三成收，做好辣椒育苗和苗期病害防治、为生产提供优质健壮秧苗，是辣椒栽培提早成熟、提高产量、增加效益的前提和保证。因此在生产中常以育苗移栽为主。无公害生产基地更是大都靠育苗。育苗基质需求量日益增大，功能性育苗基质研究就显得尤为重要。
育苗基质是指利用有机、无机材料等成分配制而成的人工土壤，主要以促生长为目的。辣椒的育苗基质大多以泥炭、珍珠岩、蛭石为原料进行配制，虽然可以满足辣椒生长的需要，但泥炭属于不可再生资源，过度使用容易造成资源短缺。随着工厂化育苗产业的迫切需求，寻找一种新的资源替代泥炭迫在眉睫。
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)属于假单胞菌属(Pseudomonas)，假单胞菌属细菌是植物根际微生态和土壤的优势微生物种群之一。目前关于铜绿假单胞菌的研究主要有降解多环芳烃荧蒽、抗肿瘤活性以及作为生防菌株防治植物真菌或细菌类病害等方面。最早报道铜绿假单胞菌生防功能的是1987年比利时的Verstraete团队。该团队首次从大麦根际分离得到一株具有促生长和改善作物根际微生物种群功能的铜绿假单胞菌7NSK2。目前尚未见以铜绿假单胞菌为活性成分制备的微生物育苗基质能在蔬菜根际定植，同时可以防治辣椒灰霉病、辣椒根腐病、辣椒枯萎病、辣椒叶斑病且能促进辣椒苗生长的相关专利。
发明内容
针对目前缺乏能够在蔬菜根际定植、促生并防治辣椒灰霉病、辣椒根腐病、辣椒枯萎病、辣椒叶斑病的铜绿假单胞菌的技术问题，本发明提供一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用，本发明提供的铜绿假单胞菌及以其制备的微生物育苗基质具有防病、促生作用。
第一方面，本发明提供一种铜绿假单胞菌，所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌G5，已于2021年9月8日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.23375，分类命名为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。
第二方面，本发明提供一种上述铜绿假单胞菌在制备微生物育苗基质上的应用。
第三方面，本发明提供一种含有上述铜绿假单胞菌的微生物育苗基质。
进一步的，所述微生物育苗基质中，铜绿假单胞菌G5的活菌数≥2.5×108CFU/基质重量g。
进一步的，所述微生物育苗基质由铜绿假单胞菌G5的发酵液和辅料混合而成，所述发酵液与辅料的质量比为1：(15～30)，所述发酵液中铜绿假单胞菌G5的活菌数≥8×109CFU/mL。
进一步的，所述微生物育苗基质中，有机质含量≥30％，总养分(N+P2O5+K2O)含量2％～5％，游离水≤36％，pH6～7，EC≤2ms/cm。
进一步的，所述发酵液按照如下制备方法制得：
(1)将铜绿假单胞菌G5在LB固体培养基上划线活化，获得纯化的单菌落；
(2)将铜绿假单胞菌G5单菌落接种至LB液体培养基，并在25～32℃下150～200rpm培养8～12h，得到种子液；
(3)将种子液按照5％～10％(v/v)接种至LB液体培养基，并在25～32℃下150～200rpm培养48～72h，得到发酵液。
进一步的，所述辅料包括如下重量份组分：
颗粒状蛭石5～10份，珍珠岩5～10份，无机盐溶液0.5～1份，腐熟物料5～15份。
以铜绿假单胞菌G5的发酵液及上述辅料制成的微生物育苗基质疏松、透气性好，有利于根系发育，促使根系发达；育苗基质氨基酸含量高、有机质丰富能显著促进幼苗生长、提高幼苗存活率，定植后无缓苗期。
进一步的，所述颗粒状蛭石的直径为3～6mm，所述珍珠岩的直径为3～6mm。
进一步的，所述无机盐溶液中含有2～3g/L的(NH4)3PO4和0.5～1g/L的MgSO4·7H2O。
进一步的，所述腐熟物料按照如下制备方法制得：
将大蒜秸秆、小麦秸秆、大姜秸秆、蘑菇渣和平菇渣用机械粉碎机粉碎至0.5～1cm的秸秆菇渣颗粒，然后将秸秆菇渣颗粒和腐叶土投入转速为400～450r/min的混合搅拌机搅拌16～30min，混合均匀后加入水至含水量为50％～60％，通风条件下堆肥发酵20～25天，每2～3天翻堆一次，得到腐熟物料。
进一步的，所述腐熟物料按照如下制备方法制得：
以重量份数计，将2～3份大蒜秸秆、8～10份小麦秸秆、3～5份大姜秸秆、5～8份蘑菇渣和7～10份平菇渣用机械粉碎机粉碎至0.5～1cm的秸秆菇渣颗粒，然后将秸秆菇渣颗粒和33～40份腐叶土投入转速为400～450r/min的混合搅拌机搅拌16～30min，混合均匀后加入水至含水量为50％～60％，通风条件下堆肥发酵20～25天，每2～3天翻堆一次，得到腐熟物料。
第四方面，本发明提供一种上述微生物育苗基质在种植辣椒上的应用。
本发明的有益效果在于：
本发明提供的铜绿假单胞菌G5从设施大棚辣椒根内分离、筛选而来，该菌株及含有该菌株的微生物育苗基质可有效防治辣椒苗期发生的辣椒枯萎病、辣椒根腐病、辣椒叶斑病和辣椒灰霉病。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例10中不同育苗基质处理的辣椒苗。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明具体实施方式所使用的LB固体培养基，每升组分如下：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂15g，水定容至1L，pH自然，121℃高压蒸汽灭菌30min；
本发明具体实施方式所使用的LB液体培养基，每升组分如下：蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g，水定容至1L，pH自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。
本发明具体实施方式所使用的铜绿假单胞菌G5的孢子悬液采用如下制备方法制得：
将铜绿假单胞菌G5的发酵液在5000rpm条件下离心10min，丢弃上清液，使用无菌水重悬铜绿假单胞菌G5细胞，稀释得到铜绿假单胞菌G5浓度为108CFU/mL的孢子悬液。
实施例1
菌株分离采集设施大棚辣椒新鲜根系，用无菌水清洗至无肉眼可见的土壤颗粒附着。将根系转移至新的50mL Falcon离心管，加入30mL灭菌的1×PBS(pH＝7)，在室温下180r/min振荡15min。重复PBS清洗3次。将清洗后的根系取出并置于灭菌的滤纸上吸干根系表面的PBS。将根系切分成约2mm小段并混合，称出重量为1g的根系组织转移至50mL离心管。在无菌环境中加入10mL 10mM的灭菌MgCl2溶液重悬，然后用无菌捣杵研磨直至均质。用无菌水在无菌试管中梯度稀释至102、103、104、105、106、107和108倍，从各梯度中吸取100μL均匀涂布在LB固体培养基上。平板倒置培养于30℃微生物培养箱内1～2天，观察菌落生长情况。根据菌落形态特征，将差异菌落在新LB固体培养基上划线获得单菌落，重复划单菌落操作三次纯化株系。
菌株鉴定菌株G5在LB固体培养基上划线获得单菌落，单菌落近圆形，边缘不整齐，较扁平，淡黄绿色，不光滑，不透明，革兰氏染色反应显阴性，能利用D-葡萄糖、柠檬酸盐、甲基红，可使硝酸盐还原、氧化酶阳性、接触酶阳性、过氧化氢酶阳性，V-P试验为阴性，不能利用淀粉，属于好氧菌等生理生化特性。将菌株G5的16S rDNA测序序列(如SEQ ID No.1所示)，在Genbank中Blast比对结果表明，菌株G5与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的同源性达到100％。根据菌株的形态理化特征结合16S rDNA测序比对分析，将菌株G5鉴定为铜绿假单胞菌。
实施例2
一种含有铜绿假单胞菌G5的微生物育苗基质，按照如下制备方法制得：
1.发酵液制备：
(1)将铜绿假单胞菌G5在LB固体培养基上划线活化，获得纯化的单菌落；
(2)将铜绿假单胞菌G5单菌落接种至LB液体培养基，并在30℃下180rpm培养8h，得到种子液；
(3)将种子液按照5％(v/v)接种至LB液体培养基，并在30℃下180rpm培养72h，得到发酵液，经检测，发酵液中铜绿假单胞菌G5的活菌数为8.33×109CFU/mL；
2.辅料制备：
(4)配制含有2g/L的(NH4)3PO4和1g/L的MgSO4·7H2O的无机盐溶液；
(5)按重量份数计，将2份大蒜秸秆、8份小麦秸秆、3份大姜秸秆、5份蘑菇渣和7份平菇渣用机械粉碎机粉碎至1cm左右的秸秆菇渣颗粒，然后将秸秆菇渣颗粒和33份腐叶土投入转速为400r/min的混合搅拌机搅拌20min混合均匀，加入水至含水量50％，通风条件下堆肥发酵25天，每3天翻堆一次，得到腐熟物料；
(5)将重量比为5：5：1：10的颗粒状蛭石、珍珠岩、无机盐溶液和腐熟物料混合均匀并高压灭菌，室温自然冷却后得到辅料；
3.基质制备：
按照重量比1：16混合铜绿假单胞菌G5的发酵液和辅料，混合均匀后晾干制得微生物育苗基质，经测定，微生物育苗基质中铜绿假单胞菌G5的活菌数为4.90×108CFU/基质重量g。
实施例3
对实施例2制备的微生物育苗基质及市售的鲁青育苗基质产品(山东芯喜乐生物科技有限公司)进行理化性质检测，检测结果见表1。
表1育苗基质产品的理化性质
项目 鲁青育苗基质 实施例2微生物育苗基质
容重(g/cm<sup>3</sup>) 0.31 0.46
总孔隙度(％) 70.00 89.50
持水孔隙(％) 58.33 71.60
通气孔隙 11.67 17.90
pH 7 6-7
对比发现，本发明微生物育苗基质的总孔隙度和持水孔隙显著提高，说明本发明微生物育苗基质的理化性质已经达到了育苗基质产品的要求。
实施例4
测定铜绿假单胞菌G5在实施例2制备的微生物育苗基质中长时间储存后的活性，并以加入同等量的铜绿假单胞菌G5的鲁青育苗基质产品为对照，将两处理育苗基质存放于无菌透气罐中(每处理设6个重复)，置于室温阴凉通风处存放。分别于存放后0天、90天、180天和365天检测铜绿假单胞菌菌株G5的活菌数，检测方法为稀释涂LB平板法，检测结果见表2。
表2育苗基质对铜绿假单胞菌G5活菌数的影响(单位：×108CFU/基质重量g)
样品 0天 90天 180天 365天
实施例2微生物育苗基质 4.90±0.00a 4.65±0.52a 4.28±0.14a 3.23±0.67a
鲁青育苗基质 4.90±0.00a 3.72±0.13b 2.94±0.06b 1.84±0.35b
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
对比发现，利用本发明微生物育苗基质进行长时间存放时，铜绿假单胞菌G5的活菌数保持较高水平，而鲁青育苗基质产品中铜绿假单胞菌G5的活菌数在长时间存放后显著下降。
实施例5
以实施例2制备的微生物育苗基质为实验组，以仅含有实施例2辅料的育苗基质为空白对照，以加入80％多菌灵500倍液的鲁青育苗基质产品为药剂对照组，测定不同育苗基质对辣椒枯萎病的防病效果。
试验条件：辣椒(长丰101线椒)种子用温汤浸种法在28℃、黑暗条件下催芽，三个处理事先装入育苗钵中，每个育苗钵播种一粒露白种子，待辣椒长到4～5片真叶，三个处理各挑选苗齐的6株为重复。然后将铜绿假单胞菌G5孢子悬液喷雾到实验组的辣椒苗上，空白对照组辣椒苗喷雾清水，药剂对照组辣椒苗喷雾80％多菌灵500倍液。后续浇水管理常规，1天后，通过喷雾接种辣椒枯萎病菌，然后将接种后的辣椒植株放于温度28℃、相对湿度90％、白天光照晚上黑暗的人工气候室中培养。14天后观察并记录不同处理辣椒苗的生长与发病情况，并对结果进行统计分析。
辣椒枯萎病病情分级标准：0级，无症状；1级，1～2片真叶变黄或真叶萎焉下垂；2级，3～4片真叶变黄或萎焉下垂；3级，5～6片真叶变黄或真叶萎焉下垂；4级，全株严重萎焉，以致枯死。
病情指数＝∑(各级病株数×各级代表值)/(调查总株数×最高级代表值)×100。
防治效果(％)＝(空白对照病情指数-处理病情指数)/空白对照病情指数×100。
表3育苗基质对辣椒枯萎病的防效
处理 病情指数 防治效果％
实验组 12.75±0.23b 82.61±0.52b
空白对照组 73.33±0.12a —
药剂对照组 10.95±0.34c 85.07±0.52a
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
从表3中可以看出：本发明微生物育苗基质和空白对照组相比，药后14天病情指数显著降低；本发明微生物育苗基质对辣椒枯萎病的防治效果为82.61％，略低于药剂对照组的85.07％，这说明含有铜绿假单胞菌G5的育苗基质能显著减轻辣椒枯萎病的发生，达到防病效果。
实施例6
以实施例2制备的微生物育苗基质为实验组，以仅含有实施例2辅料的育苗基质为空白对照组，以加入80％多菌灵500倍液的鲁青育苗基质产品为药剂对照组，测定不同育苗基质对辣椒根腐病的防病效果。
试验条件：辣椒(长丰101线椒)种子用温汤浸种法在28℃、黑暗条件下催芽，三个处理事先装入育苗钵中，每个育苗钵播种一粒露白种子，待辣椒长到4～5片真叶，三个处理各挑选苗齐的6株为重复。然后将1mL铜绿假单胞菌G5孢子悬液接种到实验组的辣椒苗根围，空白对照组辣椒苗根围接种1mL清水，药剂对照组辣椒苗根围接种1mL80％多菌灵500倍液。后续浇水管理常规，1天后，通过灌根法接种辣椒根腐病菌，然后将接种后的辣椒植株放于温度28℃、相对湿度90％、白天光照晚上黑暗的人工气候室中培养。14天后观察并记录不同处理辣椒苗的生长与发病情况，并对结果进行统计分析。
病株率(％)＝病株数/调查总株数100。
防治效果(％)＝(对照病株率-处理病株率)/对照病株率。
表4育苗基质对辣椒根腐病的防效
处理 病株率％ 防治效果％
实验组 14.20±0.20b 79.07±0.22b
空白对照组 67.85±0.11a —
药剂对照组 12.34±0.19c 81.81±0.53a
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
从表4中可以看出：本发明微生物育苗基质和空白对照组相比，14天的病株率显著降低；本发明微生物育苗基质14天的防效为79.07％，药剂对照组14天的防效为81.81％，两者的防治效果相当，这说明含有铜绿假单胞菌G5的育苗基质能显著抑制辣椒根腐病菌对辣椒植株的侵染，减轻病害发生，达到防病效果。
实施例7
以实施例2制备的微生物育苗基质为实验组，以仅含有实施例2辅料的育苗基质为空白对照组，以加入80％多菌灵500倍液的鲁青育苗基质产品为药剂对照组，测定不同育苗基质对辣椒叶斑病的防病效果。
试验条件：辣椒(长丰101线椒)种子用温汤浸种法在28℃、黑暗条件下催芽，三个处理事先装入育苗钵中，每个育苗钵播种一粒露白种子，待辣椒长到4～5片真叶，三个处理各挑选苗齐的6株为重复。采用喷雾接种法将1×108CFU/mL的辣椒叶斑病菌孢子悬浮液接种于辣椒植株上。24h后，实验组的辣椒苗上喷含有1×108CFU/mL的辣椒叶斑病菌孢子悬浮液，空白对照组辣椒苗喷雾清水，药剂对照组的辣椒苗喷雾80％多菌灵500倍液。后续浇水管理常规，将接种后的辣椒植株放于温度28℃、相对湿度90％、白天光照晚上黑暗的人工气候室中培养。14天后观察并记录不同处理辣椒苗的生长与发病情况，并对结果进行统计分析。
辣椒叶斑病病情分级标准：分级以叶片为单位。0级，无病斑；1级，病斑面积占整个叶面积5％以下；3级，病斑面积占整个叶面积6％～10％；5级，病斑面积占整个叶面积11％～20％；7级，病斑面积占整个叶面积21％～50％；9级，病斑面积占整个叶面积50％以上。
病情指数＝∑(各级病株数×各级代表值)/(调查总株数×最高级代表值)×100。
防治效果(％)＝(空白对照病情指数-处理病情指数)/空白对照病情指数×100。
表5育苗基质对辣椒叶斑病的防效
处理 病情指数 防治效果％
实验组 21.17±0.28b 75.16±0.40b
空白对照组 85.21±0.11a —
药剂对照组 16.76±0.30c 80.33±0.526a
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
从表5中可以看出：本发明微生物育苗基质14天病情指数显著低于空白对照组，本发明微生物育苗基质防效为75.16％，略低于药剂对照组的80.33％。这说明含有铜绿假单胞菌G5的育苗基质能显著抑制辣椒苗期叶斑病的发生。
实施例8
以实施例2制备的微生物育苗基质为实验组，以仅含有实施例2辅料的育苗基质为空白对照组，以加入80％多菌灵500倍液的鲁青育苗基质产品为药剂对照组，测定不同育苗基质对辣椒叶斑病的防病效果。
试验条件：辣椒(长丰101线椒)种子用温汤浸种法在28℃、黑暗条件下催芽，三个处理事先装入育苗钵中，每个育苗钵播种一粒露白种子，待辣椒长到4～5片真叶，三个处理各挑选苗齐的6株为重复。采用喷雾接种法将1×108CFU/mL的辣椒灰霉病菌孢子悬浮液接种于辣椒植株上。24h后，实验组的辣椒苗上喷含有1×108CFU/mL的辣椒灰霉病菌孢子悬浮液，空白对照组辣椒苗喷雾清水，药剂对照组辣椒苗喷雾80％多菌灵500倍液。后续浇水管理常规，将接种后的辣椒植株放于温度28℃、相对湿度90％、白天光照晚上黑暗的人工气候室中培养。14天后观察并记录不同处理辣椒苗的生长与发病情况，并对结果进行统计分析。
辣椒灰霉病分级标准：0级，叶片(果实)无病斑；1级，病斑占整个叶片(果实)面积的5％以下；3级，病斑占整个叶片(果实)面积的6％～10％，并带有小面积霉层；5级，病斑或霉层占整个叶片(果实)面积的11％～25％；7级，病斑或霉层占整个叶片(果实)面积的26％～50％；9级，整片叶片水侵状萎蔫，果实霉层附着面积50％以上。
病情指数＝∑(各级病株数×各级代表值)/(调查总株数×最高级代表值)×100。
防治效果(％)＝(空白对照病情指数-处理病情指数)/空白对照病情指数×100。
表6育苗基质对辣椒灰霉病的防效
处理 病情指数 防治效果％
实验组 6.85±0.17b 73.16±0.29b
空白对照组 25.52±0.25a —
药剂对照组 5.61±0.38c 78.02±0.446a
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
从表6中可以看出：本发明微生物育苗基质能够显著抑制灰霉病的发生，药后14天对辣椒灰霉病的防治效果达73.16％，和药剂对照组的防治效果相当。这说明含有铜绿假单胞菌G5的育苗基质能显著抑制辣椒灰霉病的发生。
实施例9
以实施例2制备的微生物育苗基质为待测样品，以加入同等量的铜绿假单胞菌G5的鲁青育苗基质产品为对照样品，进行铜绿假单胞菌G5在辣椒根围的定植试验。
试验条件：将辣椒种植在两种育苗基质中，分别在第7、14、21、30、40天采集辣椒根系，置于装有30mL 1×PBS缓冲液的离心管中，在摇床中160rpm清洗三次，每次25min，每次换新鲜PBS。无菌滤纸吸干根系表面水分，取出0.2g用无菌水充分研磨，以10倍梯度稀释至108后涂布于LB固体培养基上，30℃培养至长出肉眼可见的单菌落后进行计数。试验设三个重复。按照菌落形态对铜绿假单胞菌进行识别，并使用16S rDNA基因对菌株进行鉴定确定铜绿假单胞菌形态识别的准确性。
表7铜绿假单胞菌G5在辣椒根围的定植试验(单位：104CFU/根重g)
样品 7天 14天 21天 30天 40天
待测样品 4.26±0.12a 2.37±0.35a 3.45±0.17a 3.05±0.34a 2.83±0.20a
对照样品 2.59±0.27b 1.28±0.19b 2.09±0.25b 1.54±0.18b 0.95±0.36b
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
从表7中可以看出：本发明微生物育苗基质，铜绿假单胞菌G5在辣椒根际定植后，在辣椒苗期铜绿假单胞菌G5的活菌数保持较高水平，而对照样品中铜绿假单胞菌G5的定植活菌数下降显著。
实施例10
以实施例2制备的微生物育苗基质为实验组，以仅含有实施例2辅料的育苗基质为空白对照组，以加入80％多菌灵500倍液的鲁青育苗基质产品为药剂对照组，测定不同育苗基质对辣椒的促生效果。
试验条件：辣椒(长丰101线椒)种子用温汤浸种法在28℃、黑暗条件下催芽，三个处理事先装入育苗钵中，每个育苗钵播种一粒露白种子，待辣椒长到4～5片真叶，三个处理各挑选苗齐的6株为重复。后续浇水管理为常规管理。
出苗后21天测量株高、茎粗、地上和地下部分干重，计算壮苗指数＝(茎粗/株高+地下干重/地上干重)×单株干重。
表8育苗基质对辣椒的促生效果
样品 株高/cm 茎粗/cm 壮苗指数
待测样品 18.40±1.05a 0.51±1.69a 0.239±0.021a
对比样品 16.05±2.14b 0.47±2.33b 0.205±0.043b
对照样品 14.80±3.21c 0.45±4.67c 0.154±0.017c
*表中数值后不同字母代表差异显著(one-way ANOVA，P<0.05)。
从表8中可以看出：和空白对照组及药剂对照组相比，利用本发明微生物育苗基质显著提高了辣椒生物量和壮苗指数。
尽管通过参考附图并结合优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省科学院生态研究所（山东省科学院中日友好生物技术研究中心）
<120> 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用
<130> 2021
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1389
<212> DNA
<213> Pseudomonas aeruginosa
<400> 1
gaagggagct tgctcctgga ttcagcggcg gacgggtgag taatgcctag gaatctgcct 60
ggtagtgggg gataacgtcc ggaaacgggc gctaataccg catacgtcct gagggagaaa 120
gtgggggatc ttcggacctc acgctatcag atgagcctag gtcggattag ctagttggtg 180
gggtaaaggc ctaccaaggc gacgatccgt aactggtctg agaggatgat cagtcacact 240
ggaactgaga cacggtccag actcctacgg gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg 300
gcgaaagcct gatccagcca tgccgcgtgt gtgaagaagg tcttcggatt gtaaagcact 360
ttaagttggg aggaagggca gtaagttaat accttgctgt tttgacgtta ccaacagaat 420
aagcaccggc taacttcgtg ccagcagccg cggtaatacg aagggtgcaa gcgttaatcg 480
gaattactgg gcgtaaagcg cgcgtaggtg gttcagcaag ttggatgtga aatccccggg 540
ctcaacctgg gaactgcatc caaaactact gagctagagt acggtagagg gtggtggaat 600
ttcctgtgta gcggtgaaat gcgtagatat aggaaggaac accagtggcg aaggcgacca 660
cctggactga tactgacact gaggtgcgaa agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc 720
tggtagtcca cgccgtaaac gatgtcgact agccgttggg atccttgaga tcttagtggc 780
gcagctaacg cgataagtcg accgcctggg gagtacggcc gcaaggttaa aactcaaatg 840
aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga 900
accttacctg gccttgacat gctgagaact ttccagagat ggattggtgc cttcgggaac 960
tcagacacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc 1020
cgtaacgagc gcaacccttg tccttagtta ccagcacctc gggtgggcac tctaaggaga 1080
ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc 1140
cagggctaca cacgtgctac aatggtcggt acaaagggtt gccaagccgc gaggtggagc 1200
taatcccata aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg 1260
gaatcgctag taatcgtgaa tcagaatgtc acggtgaata cgttcccggg ccttgtacac 1320
accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc tccagaagta gctagtctaa ccgcaagggg 1380
gacggtacc 1389

Claims (8)

1.一种铜绿假单胞菌，其特征在于，所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌G5，已于2021年9月8日保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.23375，分类命名为铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa。
2.一种如权利要求1所述的铜绿假单胞菌在制备微生物育苗基质上的应用。
3.一种含有如权利要求1所述的铜绿假单胞菌的微生物育苗基质。
4.如权利要求3所述的微生物育苗基质，其特征在于，所述微生物育苗基质中，铜绿假单胞菌G5的活菌数≥2.5×108CFU/基质重量g。
5.如权利要求3所述的微生物育苗基质，其特征在于，所述微生物育苗基质由铜绿假单胞菌G5的发酵液和辅料混合而成，所述发酵液与辅料的质量比为1：（15~30），所述发酵液中铜绿假单胞菌G5的活菌数≥8×109CFU/mL。
6.如权利要求5所述的微生物育苗基质，其特征在于，所述辅料包括如下重量份组分：
颗粒状蛭石5~10份，珍珠岩5~10份，无机盐溶液0.5~1份，腐熟物料5~15份。
7.如权利要求6所述的微生物育苗基质，其特征在于，所述腐熟物料按照如下制备方法制得：
将大蒜秸秆、小麦秸秆、大姜秸秆、蘑菇渣用机械粉碎机粉碎至0.5~1cm的秸秆菇渣颗粒，然后将秸秆菇渣颗粒和腐叶土投入转速为400~450r/min的混合搅拌机搅拌16~30min，混合均匀后加入水至含水量为50%~60%，通风条件下堆肥发酵20~25天，每2~3天翻堆一次，得到腐熟物料。
8.一种如权利要求3~7任一所述的微生物育苗基质在种植辣椒上的应用。
CN202111308578.XA 2021-11-05 2021-11-05 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用 Active CN113943678B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111308578.XA CN113943678B (zh) 2021-11-05 2021-11-05 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111308578.XA CN113943678B (zh) 2021-11-05 2021-11-05 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113943678A CN113943678A (zh) 2022-01-18
CN113943678B true CN113943678B (zh) 2023-03-21

Family

ID=79337837

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111308578.XA Active CN113943678B (zh) 2021-11-05 2021-11-05 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113943678B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105087428A (zh) * 2015-07-09 2015-11-25 标优美生态工程股份有限公司 一种铜绿假单胞菌及其应用
CN110616179A (zh) * 2019-11-13 2019-12-27 东莞市农业科学研究中心 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN111575199A (zh) * 2020-04-21 2020-08-25 华南农业大学 一株铜绿假单胞菌jt86及其在防治菌核病中的应用
CN112812994A (zh) * 2021-01-07 2021-05-18 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的铜绿假单胞菌及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105087428A (zh) * 2015-07-09 2015-11-25 标优美生态工程股份有限公司 一种铜绿假单胞菌及其应用
CN110616179A (zh) * 2019-11-13 2019-12-27 东莞市农业科学研究中心 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN111575199A (zh) * 2020-04-21 2020-08-25 华南农业大学 一株铜绿假单胞菌jt86及其在防治菌核病中的应用
CN112812994A (zh) * 2021-01-07 2021-05-18 河南省农业科学院植物保护研究所 一种能够防治丹参根腐病的铜绿假单胞菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113943678A (zh) 2022-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113151062B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌ljbv19及其应用
CN102086444B (zh) 一株类芽孢杆菌菌株及其应用
CN110616171B (zh) 一株耐盐碱太平洋芽孢杆菌及其活菌制剂与应用
CN108192838B (zh) 一种具有降解无机磷和防病双重作用的解淀粉芽孢杆菌
CN111944716B (zh) 一种烟草育苗专用复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN112342173B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN105331567A (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及促植物生长制剂和应用
CN111808783B (zh) 一株阴沟肠杆菌及其活菌制剂生产方法与应用
CN105462881A (zh) 一种用于防治作物黄萎病的多粘类芽孢杆菌及其应用
CN109182219A (zh) 一株促梭罗草生长的莫海威芽孢杆菌及其应用
CN107937310A (zh) 根际促生菌及其应用
CN108531429B (zh) 一种产蛋白酶、抗番茄灰霉病菌的厦门芽孢杆菌及其应用
CN108048360B (zh) 一种具有降解有机磷和防病双重作用的枯草芽孢杆菌
CN116676234A (zh) 耐盐芽孢杆菌jk-25、菌剂及其制备方法和应用
CN107325980A (zh) 一种耐辐射类芽孢杆菌kh9及其在生物抗蒸腾剂中的应用
CN114934000B (zh) 耐盐性解淀粉芽孢杆菌及其筛选与应用
CN116590155A (zh) 一种粉红螺旋聚孢霉菌株、微生物菌剂及制备方法和应用
CN110791459A (zh) 一株用于防控连作百合土传枯萎病的枯草芽孢杆菌及其应用
CN113943678B (zh) 一种铜绿假单胞菌及其制备的微生物育苗基质和应用
CN101786912B (zh) 一种烟草漂浮育苗用高效菌肥及其生产方法
CN113234601B (zh) 一株海洋真菌新种及其在植物抗干旱胁迫中的应用
CN111808758B (zh) 一种作物促生内生真菌及其应用
CN111154668B (zh) 一株裂解亚氯酸假单胞菌及其应用
CN113897316A (zh) 地衣芽孢杆菌BLc06及其制备的功能型瓜果育苗生物基质和应用
CN109628345B (zh) 一种防治多肉植物褐腐病复合菌剂及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230524

Address after: 266101 Room 304, Building 1, No. 63, Haier Road, Laoshan District, Qingdao, Shandong

Patentee after: Qingdao United Agriculture Plant Protection Technology Co.,Ltd.

Patentee after: ECOLOGY INSTITUTE OF SHANDONG ACADEMY OF SCIENCES (THE SINO-JAPANESE FRIENDSHIP BIOTECHNOLOGY RESEARCH CENTER, SHANDONG ACADEMY OF SCIENCES)

Address before: 250100 No. 28789, Jingshi East Road, Caishi Town, Licheng District, Jinan City, Shandong Province

Patentee before: ECOLOGY INSTITUTE OF SHANDONG ACADEMY OF SCIENCES (THE SINO-JAPANESE FRIENDSHIP BIOTECHNOLOGY RESEARCH CENTER, SHANDONG ACADEMY OF SCIENCES)

TR01 Transfer of patent right