CN113943351B - 一种荧光标记的帕瑞肽衍生物及其用途 - Google Patents

一种荧光标记的帕瑞肽衍生物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种荧光标记的帕瑞肽衍生物及其用途，属于多肽药物制备技术领域，该帕瑞肽衍生物由香豆素类衍生物与帕瑞肽进行反应制得，生产效率高，该帕瑞肽衍生物的稳定性高，具有良好的荧光显像效果，与辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、苯磺酰硫脲改性壳聚糖混合制得药物组合物，可应用于生长抑素受体高表达疾病的治疗。

Description

一种荧光标记的帕瑞肽衍生物及其用途
技术领域
本发明属于多肽药物制备技术领域，具体涉及一种荧光标记的帕瑞肽衍生物及其用途。
背景技术
帕瑞肽又叫帕西瑞肽，是一种生长激素抑制剂类似物。帕瑞肽通过与生长抑素受体结合，发挥抑制性生物学作用，在治疗肢端肥大症、类癌及库欣病方面取得了显著的效果。
帕瑞肽本身结构稳定性差，见光、遇热易分解，长时间存放过程中容易发生降解产生杂质，导致帕瑞肽不稳定、质量不均匀，且使用过程中帕瑞肽的吸收代谢途径直接影响其使用效果，因此帕瑞肽的显像、可视化显得尤为重要。目前药物的显像标记主要通过放射性核素等途径来实现，但成本高、操作难度大，且会对人体产生危害。荧光标记是一种安全的显现方法，应用于帕瑞肽的吸收代谢研究可降低生产成本和操作难度。
现有技术中，专利CN111320673A公开了一种FITC标记的帕西瑞肽衍生物及其制备方法和应用，是将异硫氰酸荧光素与帕西瑞肽羟脯侧链上的氨基和赖氨酸侧链的氨基进行反应，合成帕西瑞肽衍生物，该衍生物性质稳定，具有良好的荧光显像效果，能够与生长抑素受体结合发挥药理学活性。目前对于荧光标记的帕瑞肽衍生物的研究较少，因此对帕瑞肽的结构进行修饰改性，开发新的具有荧光标记的帕瑞肽衍生物很有必要。
发明内容
本发明的主要目的在于克服现有技术中的不足，提供一种荧光标记的帕瑞肽衍生物。该帕瑞肽衍生物由香豆素类衍生物与帕瑞肽进行反应制得，生产效率高，稳定性高，具有良好的荧光显像效果，与辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、苯磺酰硫脲改性壳聚糖混合制得药物组合物，可应用于生长抑素受体高表达疾病的治疗。
为解决上述技术问题，本发明的解决方案是：
提供一种荧光标记的帕瑞肽衍生物，结构式如下式（I）所示：
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE001
(I)。
本申请提供稳定性较高的帕瑞肽衍生物，其在常温、光照下不易分解，长时间储存后产生的杂质少，弥补了帕瑞肽稳定性差的缺陷，这可能与帕瑞肽衍生物分子结构中引入的恶唑基团有关，能够减少酰胺基团的降解；此外还能增强帕瑞肽的活性，提高对生长抑素受体高表达疾病的治疗效果。
提供上述荧光标记帕瑞肽衍生物的制备方法，包括：
步骤一、对醛基苯甲酸甲酯与盐酸羟胺反应得产物a；
步骤二、产物a与N-氯代丁二酰亚胺、丙炔醇反应得产物b；
步骤三、产物b与三溴化磷反应得产物c；
步骤四、产物c与7-羟基香豆素反应得产物d；
步骤五、产物d在酸性条件下水解，然后与三光气反应得到产物e；
步骤六、产物e与帕瑞肽反应得目标化合物。
香豆素本身并无荧光，但取代后的香豆素衍生物具有很好的荧光性能，本发明利用具有香豆素感光基团的香豆素类衍生物中的酰氯基团与帕瑞肽的氨基反应对帕瑞肽的结构进行修饰改性，其合成效率高，所得帕瑞肽衍生物的稳定性大大提高，在常温、光照下不易分解，长时间储存后产生的杂质少，弥补了帕瑞肽稳定性差的缺陷，这可能与帕瑞肽衍生物分子结构中引入的恶唑基团有关，能够减少酰胺基团的降解；此外还能增强帕瑞肽的活性，提高对生长抑素受体高表达疾病的治疗效果。
具体地，步骤一中，反应条件为室温，溶剂为甲醇水溶液，催化剂为碳酸钾。
具体地，步骤一的具体操作步骤为：
将对醛基苯甲酸甲酯溶于3-5倍重量的甲醇水溶液中，搅拌加入盐酸羟胺，溶解后加入碳酸钾，室温搅拌反应2-3 h，然后用蒸馏水和二氯甲烷萃取数次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、过滤，减压蒸馏除去溶剂，得到产物a；所述对醛基苯甲酸甲酯、盐酸羟胺的摩尔比为1∶1-1.4。
具体地，步骤二中，反应条件为50-60℃，溶剂为二氯甲烷，引发剂是质量比为1∶0.8-1.5的吡啶和三乙胺。
具体地，步骤二的具体操作步骤为：
将产物a溶于3-5倍重量的二氯甲烷中，搅拌加入N-氯代丁二酰亚胺，加热至50-60℃溶解，接着加入丙炔醇，搅拌均匀后加入引发剂，搅拌反应2-6 h，降至室温，经水洗、无水硫酸钠干燥、过滤、减压蒸馏除去溶剂，然后用石油醚进行洗脱，得到产物b；所述产物a、N-氯代丁二酰亚胺、丙炔醇的摩尔比为1∶1.2-1.5∶1-1.4。
具体地，步骤三中，反应条件为0-4℃，溶剂为二氯甲烷。
具体地，步骤三的具体操作步骤为：
将产物b加入到2-5倍重量的二氯甲烷中，0-4℃搅拌溶解，加入三溴化磷，继续在0-4℃搅拌反应3-8 h，反应结束后加入蒸馏水，并用氢氧化钠溶液调节pH至中性，用二氯甲烷萃取数次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、减压蒸馏除去溶剂，然后用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，得到产物c；所述产物b、三溴化磷的摩尔比为1∶1-1.2。
具体地，步骤四中，反应条件为50-60℃，溶剂为丙酮，催化剂为碳酸钾。
具体地，步骤四的具体操作步骤为：
将产物c溶于8-15倍重量的丙酮中，加入7-羟基香豆素、碳酸钾，50-60℃搅拌反应3-5 h，过滤、减压蒸馏除去溶剂，用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，即得产物d；所述产物c、7-羟基香豆素、碳酸钾的摩尔比为1∶1.2-1.5∶2-3。
具体地，步骤五中，反应条件为室温，溶剂为四氢呋喃，引发剂是吡啶。
具体地，步骤五的具体操作步骤为：
将产物d溶于5-10倍重量的四氢呋喃中，利用盐酸溶液调节pH至3-4，通入氮气，加入三光气，0-4℃下加入引发剂，搅拌20-50 min，升至室温，继续搅拌反应不少于12 h，室温冷凝6-8 h，结晶出过量的三光气，经抽滤、减压蒸馏得到产物e；所述产物d、三光气的摩尔比为1∶1-1.2。
具体地，步骤六中，反应条件为0-4℃，溶剂为二氯甲烷，反应液pH为9-10。
具体地，步骤六的具体操作步骤为：
将产物e溶于5-10倍重量的二氯甲烷中，0-4℃下加入帕瑞肽，利用氢氧化钠溶液调节pH至9-10，搅拌反应1-2 h，过滤，用盐酸溶液调节滤液pH至2-3，经过滤、水洗、烘干得目标化合物；所述产物e、帕瑞肽的摩尔比为2.2-3∶1。
提供上述荧光标记的帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗生长抑素受体高表达疾病的药物组合物中的应用。
所述疾病优选为肢端肥大症或库欣病。
本发明还进一步提供了一种药物组合物，包含上述荧光标记的帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐，含量为0.01-0.5 wt%。
所述药学上可接受的盐由荧光标记的帕瑞肽衍生物与无机酸或有机酸形成，所述无机酸为盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸中的任一种，所述有机酸为乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸中的任一种。
所述药物组合物中还包含0.5-2 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖。
具体地，所述苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备方法，包括：
将氯甲酸苯酯溶于丙酮水溶液，0-4℃下加入壳聚糖，搅拌均匀，之后边搅拌边逐滴加入催化剂，升至室温并搅拌反应2-4 h，然后加入苯磺酰胺，0-4℃搅拌加入催化剂，升至室温并搅拌反应2-3 h，用水抽滤，滤液调节pH至5-5.5，抽滤，沉淀用丙酮清洗数次，重结晶即得苯磺酰硫脲改性壳聚糖。
所述氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺的添加质量比为1∶0.4-0.8∶1-1.6。
本发明通过上述方法制备的苯磺酰硫脲改性壳聚糖中含有磺酰硫脲基团，对降低血糖含量具有明显作用，加入到药物组合物中能减少因帕瑞肽衍生物的使用引起的血糖升高副作用，且配合帕瑞肽衍生物能进一步提升药物组合物的稳定性，延长储存期限。
具体地，所述药物组合物中具体包含：
0.01-0.5 wt%的荧光标记帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐；
0.5-2 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖；
0.1-1 wt%的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯；
0.1-5 wt%的辅料；
注射用水余量。
具体地，辅料为赋形剂、稳定剂、润滑剂、pH值调节剂中的任一种或两种及以上。
本发明所述药物组合物可制备成片剂、胶囊、丸剂、栓剂、软胶囊、口服液、注射液等药剂常用剂型，该药物组合物稳定性高，对光稳定，可以在室温下长期放置，长时间储存后产生的杂质少，弥补了帕瑞肽稳定性差的缺陷，且副作用小，具有良好的荧光显像效果，在帕瑞肽的吸收代谢研究中具有良好的应用前景，对生长激素的抑制活性也得到提高。
本发明具有如下有益效果：
本发明提供的帕瑞肽衍生物，具有良好的荧光显像效果，可用于帕瑞肽的吸收代谢研究，对光、温度的稳定性提高，长时间放置后产生的杂质少，并且对生长激素的抑制性能得到提升；加入帕瑞肽衍生物与苯磺酰硫脲改性壳聚糖的药物组合物稳定性高，副作用小，对治疗生长抑素受体高表达疾病的效果得到提升。
附图说明
图1是实施例1中帕瑞肽衍生物的制备流程图；
图2是实施例1中帕瑞肽衍生物的荧光光谱图；
图3是药物组合物对小鼠血清皮质甾酮水平的影响测试结果示意图；
图4是药物组合物对小鼠血糖水平的影响测试结果示意图。
具体实施方式
本发明中，赋形剂为亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、巯基乙酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸中的任一种或者两者以上混合物；pH值调节剂为醋酸、盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、磷酸、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钠中的任一种或两者以上混合物；稳定剂为甘露醇、乳糖、葡萄糖、蔗糖、氯化钠或山梨醇中的任一种或两者以上混合物；润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸钠、棕榈酰硬脂酸甘油酯、滑石、苯甲酸钠、乙酸钠、富马酸钠、硬脂酰富马酸钠中的任一种或两者以上混合物。
本发明药物组合物一般为胃肠外施用。该施用为皮下、腔内或肌内注射，注射在本文用于指例如通过针头、导管或无针头（没有针头）注射器使制剂穿过皮肤的任何方法。优选的胃肠外施用是通过肌内或皮下注射，最优选通过皮下注射。
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例1：一种荧光标记的帕瑞肽衍生物：
本实施例提供了一种荧光标记的帕瑞肽衍生物，其制备工艺流程如附图1所示，具体制备方法包括：
步骤一、将16.3 g对醛基苯甲酸甲酯溶于64 g、25 wt%的甲醇水溶液中，搅拌加入8.5 g盐酸羟胺，溶解后加入42.4 g碳酸钾，室温下搅拌反应2.5 h，然后用蒸馏水和二氯甲烷萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、过滤，减压蒸馏除去溶剂，得到17.8 g产物a；
步骤二、将17.8 g产物a溶于72 g二氯甲烷中，搅拌加入17.2 g N-氯代丁二酰亚胺，加热至55℃溶解，接着加入6.72 g丙炔醇，搅拌均匀后加入1 g吡啶、1 g三乙胺，搅拌反应5 h，降至室温，经水洗、无水硫酸钠干燥、过滤、减压蒸馏除去溶剂，然后用石油醚进行洗脱，得到22.4 g产物b；
步骤三、将22.4 g产物b加入到77.6 g的二氯甲烷中，0℃搅拌溶解，加入29.7 g三溴化磷，继续在0℃搅拌反应6 h，反应结束后加入60 mL蒸馏水，并用20 wt%的氢氧化钠溶液调节pH至中性，用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、减压蒸馏除去溶剂，然后用体积比为4∶1的石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，得到28 g产物c；
步骤四、将28 g产物c溶于300 g丙酮中，加入21.6 g 7-羟基香豆素、34.6 g碳酸钾，55℃搅拌反应4 h，过滤、减压蒸馏除去溶剂，用体积比为6∶1的石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，即得36.3 g产物d；
步骤五、将36.3 g产物d溶于290 g四氢呋喃中，利用10 wt%的盐酸溶液调节pH至3.5，通入氮气，加入66.5 g三光气，0℃加入2 g吡啶，搅拌40 min，升至室温，继续搅拌反应20 h，室温冷凝7 h，结晶出过量的三光气，经抽滤、减压蒸馏得到35.5 g产物e；
步骤六、将35.5 g产物e溶于280 g二氯甲烷中，0℃加入48.6 g帕瑞肽，利用20wt%的氢氧化钠溶液调节pH至10，搅拌反应2 h，过滤，用10 wt%的盐酸溶液调节滤液pH至2.5，经过滤、水洗、烘干得目标化合物，利用ESI-MS分析其分子量为1756.6，与理论值1757.7相近。
对上述方法所得的荧光标记帕瑞肽衍生物进行核磁氢谱、核磁碳谱、荧光光谱测试，荧光光谱测试测试结果如附图2所示。
核磁氢谱测试显示，在δ=6.68附近的峰归属于恶唑基团上氢的化学位移，在δ=3.52和5.36附近的峰归属于香豆素类衍生物中吡喃酮基团上氢的化学位移；核磁碳谱测试显示，在99.25、158.23、166.02附近的峰归属于恶唑基团上的碳的化学位移，在36.12、68.10、168.45附近的峰归属于香豆素类衍生物中吡喃酮基团上碳的化学位移；上述结果表明产物中含有香豆素类衍生物，核磁氢谱和碳谱显示的结果与目标产物的结构式相符。
观察图2的荧光光谱图可知，含1×10-4 mol/L荧光标记帕瑞肽衍生物的四氢呋喃溶液的最大荧光激发波长为369 nm，最大荧光发射波长为480 nm，荧光强度高，可用于帕瑞肽的吸收代谢研究。
实施例2：一种药物组合物：
本实施例提供了一种药物组合物，包含：
0.1 wt%的荧光标记帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐；
1 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖；
0.9 wt%的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯；
3 wt%的辅料；
95 wt%的注射用水。
所述辅料包含质量比为1∶1∶1∶1的亚硫酸氢钠、苹果酸、甘露醇、硬脂酸钙。
所述苯磺酰硫脲改性壳聚糖经由下述方法制备得到：
将2 g氯甲酸苯酯溶于30 g、50 wt%的丙酮水溶液中，0℃加入1 g壳聚糖（脱乙酰度为65%，分子量为25万），搅拌均匀后逐滴加入1.2 g 1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯，升至室温搅拌反应3 h，加入3 g苯磺酰胺，0℃搅拌加入0.2 g 1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯，升至室温搅拌反应2.5 h，20 mL蒸馏水抽滤，滤液调节pH至5，抽滤得到的沉淀用丙酮清洗3次，然后用1.4-二氧六环重结晶，得到苯磺酰硫脲改性壳聚糖。
实施例3：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，包含：
0.05 wt%的荧光标记帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐；
1 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖；
0.95 wt%的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯；
3 wt%的辅料；
95 wt%的注射用水。
所述苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备方法与实施例2相同。
实施例4：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，包含：
0.5 wt%的荧光标记帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐；
1 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖；
0.9 wt%的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯；
3 wt%的辅料；
94.6 wt%的注射用水。
所述苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备方法与实施例2相同。
实施例5：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，利用帕瑞肽代替实施例1所得帕瑞肽衍生物。
实施例6：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，利用壳聚糖代替苯磺酰硫脲改性壳聚糖。
实施例7：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，未添加苯磺酰硫脲改性壳聚糖。
实施例8：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，在苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备过程中，氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺的添加量分别为5 g、1 g、5 g。
实施例9：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，在苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备过程中，氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺的添加量分别为2.5 g、1 g、3 g。
实施例10：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，在苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备过程中，氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺的添加量分别为2 g、1.2 g、3 g。
实施例11：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，与实施例2的不同之处在于，在苯磺酰硫脲改性壳聚糖的制备过程中，氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺的添加量分别为1 g、0.8 g、1.5 g。
实施例12：另一种药物组合物
本实施例提供了另一种药物组合物，包含：
0.1 wt%的荧光标记帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐；
1 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖；
0.9 wt%的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯；
3 wt%的辅料；
95 wt%的注射用水。
所述辅料包含质量比为1∶1∶1∶1的亚硫酸氢钠、苹果酸、甘露醇、硬脂酸钙。
所述荧光标记的帕瑞肽衍生物经由下述方法制备得到：
步骤一、将16.3 g对醛基苯甲酸甲酯溶于64 g、25 wt%的甲醇水溶液中，搅拌加入8.5 g盐酸羟胺，溶解后加入42.4 g碳酸钾，室温搅拌反应2.5 h，然后用蒸馏水和二氯甲烷萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、过滤，减压蒸馏除去溶剂，得到17.8 g产物a；
步骤二、将17.8 g产物a溶于72 g二氯甲烷中，搅拌加入17.2 g N-氯代丁二酰亚胺，加热至55℃溶解，接着加入6.72 g丙炔醇，搅拌均匀后加入1 g吡啶、1 g三乙胺，搅拌反应5 h，降至室温，经水洗、无水硫酸钠干燥、过滤、减压蒸馏除去溶剂，然后用石油醚进行洗脱，得到22.4 g产物b；
步骤三、将22.4 g产物b加入到77.6 g的二氯甲烷中，0℃搅拌溶解，加入29.7 g三溴化磷，继续在0℃搅拌反应6 h，反应结束后加入60 mL蒸馏水，并用20 wt%的氢氧化钠溶液调节pH至中性，用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥、减压蒸馏除去溶剂，然后用体积比为4∶1的石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，得到28 g产物c；
步骤四、将28 g产物c溶于300 g丙酮中，加入21.6 g 7-羟基香豆素、34.6 g碳酸钾，55℃搅拌反应4 h，过滤、减压蒸馏除去溶剂，用体积比为6∶1的石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，即得36.3 g产物d；
步骤五、将36.3 g产物d溶于290 g四氢呋喃中，利用10 wt%的盐酸溶液调节pH至3.5，通入氮气，加入66.5 g三光气，0℃加入2 g吡啶，搅拌40 min，升至室温，继续搅拌反应20 h，室温冷凝7 h，结晶出过量的三光气，经抽滤、减压蒸馏得到35.5 g产物e；
步骤六、将35.5 g产物e溶于280 g二氯甲烷中，0℃加入48.6 g帕瑞肽，利用20wt%的氢氧化钠溶液调节pH至10，搅拌反应2 h，过滤，用10 wt%的盐酸溶液调节滤液pH至2.5，经过滤、水洗、烘干得目标化合物。
所述苯磺酰硫脲改性壳聚糖经由下述方法制备得到：
将2 g氯甲酸苯酯溶于30 g、50 wt %的丙酮水溶液中，0℃加入1 g壳聚糖（脱乙酰度为65%，分子量为25万），搅拌均匀，之后边搅拌边逐滴加入1.2 g 1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯，升至室温并搅拌反应3 h，然后加入3 g苯磺酰胺，0℃搅拌加入0.2 g 1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯，升至室温并搅拌反应2.5 h，用20 mL蒸馏水 抽滤，滤液用盐酸溶液调节pH至5，抽滤得到的沉淀用丙酮清洗3次，然后用1.4-二氧六环重结晶，得到苯磺酰硫脲改性壳聚糖。
实验例1：药物组合物稳定性测试
将实施例2-11所得药物组合物混合，用醋酸溶液调节pH至4.0，分别在40℃恒温箱中放置6个月或4500 LX光照度处理15 d，之后测定帕瑞肽衍生物或帕瑞肽的相对含量（初始相对含量设为100%），检测结果如表1所示。
表1 药物组合物稳定性测试结果
Figure DEST_PATH_IMAGE003
结果分析：如表1所示，在40℃恒温箱中放置6个月后，实施例2-4的药物组合物中帕瑞肽衍生物的相对含量不低于98%，而实施例5的药物组合物最大单杂达到1.62%、总杂质达到3.05%，说明同帕瑞肽相比，帕瑞肽衍生物的稳定性大大提高，弥补了现有帕瑞肽在光照、遇热情况下易分解的缺陷，使其在40℃下放置6个月仍能保持极高的稳定性，可能与帕瑞肽衍生物结构中引入了恶唑基团有关；实施例6、7的最大单杂和总杂质含量均高于实施例2，说明同壳聚糖相比，药物组合物中添加苯磺酰硫脲改性壳聚糖有助于进一步提升药物组合物的稳定性；对比实施例8-11可知，苯磺酰硫脲改性壳聚糖制备过程中，氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺添加比例会影响苯磺酰硫脲改性壳聚糖的性质，从而影响药物组合物的稳定性。
4500 LX光照度处理15 d的结果与前述结果类似，实施例5、6和7的最大单杂和总杂质含量高于实施例2，表明帕瑞肽经香豆素化合物的结构修饰、壳聚糖的改性处理对提高药物组合物的光照稳定性具有明显的增益作用，实施例8、11的最大单杂和总杂质含量均高于实施例2，实施例9和10的最大单杂和总杂质含量与实施例2的差距较小，说明苯磺酰硫脲改性壳聚糖制备过程中各原料的添加量对药物组合物的稳定性具有一定的影响。
实验例2：药物组合物疗效测试
双侧嗅球切除（OBX）模型是研究慢性抑郁症的动物模型，能够产生皮质醇分泌增加的病症，可用于测试药物组合物的治疗效果。取55只6周左右的SCID雄性小鼠，平均分为11组，氯胺酮麻醉，通过附连至水泵的钝头皮下注射针头以手术方式吸出嗅球，而不破坏额叶；小鼠分别注射30 mg/kg实施例2-11所得药物组合物（对照组注射等量的生理盐水），连续注射两周，抽血测定血清皮质甾酮水平。皮质甾酮是啮齿类动物中发现的主要糖皮质激素，也是人皮质醇激素的等效物。检测到的血清皮质甾酮水平如图3所示。
结果分析：注射实施例2-4制备的药物组合物后，小鼠血清皮质甾酮水平与对照组（46.25 μg/mL）相比显著下降，而注射实施例5的药物组合物后小鼠的血清皮质甾酮水平比对照组的低，但差异较小，表明本发明利用香豆素类衍生物对帕瑞肽结构的修饰改性有助于提升帕瑞肽的活性，从而提升了药物组合物的治疗效果；注射实施例6-11的药物组合物后，小鼠血清皮质甾酮水平与实施例2-4差异较小，表明苯磺酰硫脲改性壳聚糖对药物组合物的治疗效果无明显影响。
实验例3：药物组合物降糖水平测试
取55只6周左右的SCID雄性小鼠，平均分为11组，分别注射30 mg/kg实施例2-11制备的药物组合物（对照组注射等量的0.5 wt%羧甲基纤维素钠溶液），连续注射1个月，检测小鼠血糖水平，结果如图4所示。
结果分析：对照组小鼠连续喂养羧甲基纤维素钠溶液1个月后，血糖水平为5.14mmol/L，注射实施例2-5制备的药物组合物的血糖水平与对照组基本相当，而注射实施例6、7制备的药物组合物的血糖水平明显高于对照组，注射实施例8、11制备的药物组合物的血糖水平略高于对照组，注射实施例9、10制备的药物组合物的血糖水平低于对照组，表明壳聚糖改性处理引入磺酰脲基团有助于减少帕瑞肽衍生物引起的血糖水平升高的问题。
实验例4：药物组合物安全性测试：
取50只6周左右的SCID雄性小鼠，平均分为10组，分别注射50 mg/kg实施例2-11制备的药物组合物，注射速度为0.1 mL/s。观察注射后4 h、24 h、48 h和72 h的小鼠状态、毒性表现和死亡数量，统计中毒反应情况。受试72 h的检测结果如下。
结果分析：注射实施例2-11制备的药物组合物后，小鼠活性正常，状态活泼，未发现中毒反应与死亡例，说明本发明提供的药物组合物的安全性高。
综上所述，经本发明所述方法获得的荧光标记帕瑞肽衍生物具有较高的荧光显像效果，稳定性和活性得到提高，将其作为活性成分制备治疗生长抑素受体高表达疾病的药物组合物，所得药物组合物的稳定性好、活性高。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种荧光标记的帕瑞肽衍生物，其特征在于，结构式如下式所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
2.根据权利要求1所述的荧光标记的帕瑞肽衍生物，其特征在于，其制备方法如下：
步骤一、对醛基苯甲酸甲酯与盐酸羟胺反应得产物a；
步骤二、产物a与N-氯代丁二酰亚胺、丙炔醇反应得产物b；
步骤三、产物b与三溴化磷反应得产物c；
步骤四、产物c与7-羟基香豆素反应得产物d；
步骤五、产物d在酸性条件下水解，然后与三光气反应得到产物e；
步骤六、产物e与帕瑞肽反应得目标化合物；
步骤一中，反应条件为室温，溶剂为甲醇水溶液，催化剂为碳酸钾，对醛基苯甲酸甲酯、盐酸羟胺的摩尔比为1∶1-1.4；
步骤二中，反应条件为50-60℃，溶剂为二氯甲烷，引发剂是质量比为1∶0.8-1.5的吡啶和三乙胺，产物a、N-氯代丁二酰亚胺、丙炔醇的摩尔比为1∶1.2-1.5∶1-1.4；
步骤三中，反应条件为0-4℃，溶剂为二氯甲烷，产物b、三溴化磷的摩尔比为1∶1-1.2；
步骤四中，反应条件为50-60℃，溶剂为丙酮，催化剂为碳酸钾，产物c、7-羟基香豆素、碳酸钾的摩尔比为1∶1.2-1.5∶2-3；
步骤五中，反应条件为室温，溶剂为四氢呋喃，引发剂是吡啶，产物d、三光气的摩尔比为1∶1-1.2；
步骤六中，反应条件为0-4℃，溶剂为二氯甲烷，反应液pH为9-10，产物e、帕瑞肽的摩尔比为2.2-3∶1。
3.权利要求1或2所述荧光标记的帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗生长抑素受体高表达疾病的药物组合物中的应用，所述疾病为肢端肥大症或库欣病。
4.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1或2所述荧光标记的帕瑞肽衍生物或其药学上可接受的盐，含量为0.01-0.8 wt%。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，还包含0.5-2 wt%的苯磺酰硫脲改性壳聚糖；
苯磺酰硫脲改性壳聚糖经由下述方法制备得到：
将氯甲酸苯酯溶于丙酮水溶液中，0-4℃下加入壳聚糖，搅拌均匀后，之后边搅拌边逐滴加入催化剂，升至室温并搅拌反应2-4 h，然后加入苯磺酰胺，0-4℃搅拌加入催化剂，升至室温并搅拌反应2-3 h，用水抽滤，滤液调节pH至5-5.5，抽滤，沉淀用丙酮清洗数次，重结晶即得苯磺酰硫脲改性壳聚糖；氯甲酸苯酯、壳聚糖、苯磺酰胺的添加质量比为1∶0.4-0.8∶1-1.6。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，可将其制备成片剂、胶囊、丸剂、栓剂、口服液、注射液。
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