CN113940909A - 一种调节昼夜节律的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种调节昼夜节律的组合物及其应用，属于化妆品领域。本发明调节昼夜节律的组合物包含组分：辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物。本发明调节昼夜节律的组合物在发挥防御、保湿、修复三合一功效间相辅相成，在白天可以有效防御光对皮肤的损伤，在夜间可以对皮肤进行保湿修复，形成一个循环的过程，对皮肤进行节律调节，从而使皮肤恢复稳定健康的状态。本发明调节昼夜节律组合物适用于化妆品领域，乳液、霜膏、水剂、膜类中的应用。

Description

一种调节昼夜节律的组合物及其应用

技术领域

本发明属于化妆品领域，涉及一种调节昼夜节律的组合物及其应用。

背景技术

2017年诺贝尔生理学奖，授予了美国生物学家杰弗理·霍尔、迈克尔·罗斯巴什和迈克尔·杨,表彰他们发现并验证了生物机体中普遍存在的生物钟(circadian rhythm，也叫生物节律)，控制昼夜节律基因周期表达。这种对昼夜节律基因周期性激活的目的是主动适应由日常环境变化带来的代谢和蛋白质合成功能改变。细胞中的生物钟基因会根据时间调控皮肤状态：在日间，皮肤细胞进入自我保护型模式-抵抗自由基、抵抗UV等；夜晚进入自我修复型模式，修复累积损伤。雅诗兰黛公司也曾做过研究，研究表明白天和晚上的皮肤机能各不相同。白天的皮肤屏障功能更强，皮脂产生增多，表皮弱酸性增加，皮肤增殖能力减弱；晚间的皮肤DNA修复能力增强，细胞增殖能力增强，表皮温度更高，血流量增加，皮肤渗透能力增强，皮肤失水量增加，皮肤屏障功能减弱，因此也就有了“早C晚A”的护肤法则。

然而，随着生活节奏加快，城市人群每天的活动时间加长，手机、电脑等电子污染、紫外线照射、熬夜、加班、倒班工作日夜颠倒的作息与常规的白昼黑夜偏离程度加大，使得生物钟絮乱，这些不规律的生物节律变化使得昼夜节律基因的周期性激活被改变；与此同时，皮肤的节律性也失去与外环境同步，导致肌肤出现脱水、皱纹、松弛、失去弹性、黑眼圈严重、皮肤泛红、肤色暗淡等状态。因此，保证皮肤的正常规律，是皮肤健康的基础，同时一个健康的皮肤给人带来美的自信与满足感。

因此，如何同步皮肤内在生理节律，使其自我防御、更新和损伤修复能力提高，是解决肌肤问题的重要手段之一。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺点与不足，本发明的目的在于提供一种调节昼夜节律的组合物及其应用。本发明组合物能同步皮肤内在生理节律，在白天起到防御作用和夜间起到保湿修复作用，循环对皮肤进行节律调节，使皮肤恢复稳定健康的状态。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种调节昼夜节律的组合物，所述组合物包括以下组分：辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物。申请人从防御、保湿、修复三个方面构建配方，经过大量的试验发现将辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物一起组合时，所得组合物达到了防御自由基、紫外线、以及蓝光的效果，同时还具有保湿修复的作用。组合物中组分的具体作用如下：

辅酶Q10又名“泛醌10”，Q10在体内主要有两个作用，一是在细胞线粒体内转化为能量，补充肌肤胶原蛋白；二是有明显的抗氧化、延衰的作用。Q10渗透进入皮肤生长层可以减弱光子的氧化反应，在生育醇的协助下可以启动特异性的磷酸化酪氨酸激酶，防止DNA的氧化损伤，抑制紫外光照射下人皮肤成纤维母细胞胶原蛋白酶的表达，保护皮肤免于损伤。

稻提取物，是从稻中提取的蛋白质，通过蛋白质分解酶的加水分解处理后，调配得到的蛋白质分解精华。富含氨基酸等物质，尤其是谷氨酰胺、谷氨酸和脯氨酸；氨基酸是蛋白质的构成成分，可以完整穿透上皮细胞膜，直接作用于真皮层；氨基酸可以与皮肤内层的金属离子发生化学反应，防止金属离子的堆积，与胶原蛋白交联，恢复皮肤屏障功能，保持角质层水分。

合欢树皮提取物，重新平衡褪黑激素，促进皮肤夜间修复功能。

沙棘提取物，含有多种维生素、微量元素、亚油素、沙棘黄酮、超氧化物等活性物质和人体所需的各种氨基酸。沙棘中富含的维生素E、胡萝卜素、类胡萝卜素、β-谷甾醇、不饱和脂肪酸等，可促进机体新陈代谢，有利于损伤组织的恢复，增强炎症中心的抗炎作用，同时含有的沙棘黄酮也具有优异的紫外线防护功能。

本发明调节昼夜节律的组合物在发挥防御、保湿、修复三合一功效间相辅相成，在白天可以有效防御光对皮肤的损伤，在夜间可以对皮肤进行保湿修复，形成一个循环的过程，对皮肤进行节律调节，从而使皮肤恢复稳定健康的状态。本发明的实验结果也表明，四种活性成分发挥了显著的协同增效作用。

作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述组合物包括以下重量份的组分：辅酶Q10 0.1-3份、稻提取物0.05-3份、合欢树皮提取物0.1-4份、沙棘提取物0.5-5份。申请人发现上述比例所形成组合物的保湿效果要比在此比例范围之外所形成组合物的在清除自由基，防护紫外线和高能蓝光损伤和保湿三方面效果更佳显著。

作为本发明所述组合物的更优选的实施方式，所述组合物包括以下重量份的组分：辅酶Q10 1-3份、稻提取物1-3份、合欢树皮提取物1-4份、沙棘提取物1-5份。

作为本发明所述组合物的优选实施方式，所述辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物和沙棘提取物的重量比为：辅酶Q10：稻提取物：合欢树皮提取物：沙棘提取物＝3:2:2:1。在该重量比下的组合物表现出最优的羟基自由基和DPPH自由基清除率，使用后能有效防止紫外线和高能蓝光对细胞的损伤，皮肤的保湿效果良好。与缺少某一组分的对照组相比表现出明显的协同增效作用。

作为本发明所述组合物的更加优选实施方式，所述组合物包括以下重量份的组分：辅酶Q10 3份、稻提取物2份、合欢树皮提取物2份、沙棘提取物1份。

本发明还提供了一种包含上述调节昼夜节律的组合物在化妆品中的应用。

作为本发明化妆品中应用的更加优选实施方式，所述调节昼夜节律组合物的在所述化妆品中的重量百分比为0.8-8％。

本发明还提供了一种包含上述调节昼夜节律的组合物的化妆品。

作为本发明所述化妆品的优选实施方式，所述化妆品为乳液、霜膏、水剂、膜类中的任意一种。

作为本发明所述化妆品的优选实施方式，所述化妆品为精华液、肌底液、柔肤水、安瓶、化妆水、美容液、面膜中的任意一种。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明调节昼夜节律的组合物达到了防御自由基、紫外线、以及蓝光的效果，同时还具有保湿修复的作用。

(2)本发明调节昼夜节律的组合物组分之间具有四种活性成分发挥了显著的协同增效作用。

(3)本发明调节昼夜节律的组合物能用于各种适用的调节昼夜节律的中。能在白天起到防御作用和夜间起到保湿修复作用，循环对皮肤进行节律调节，使皮肤恢复稳定健康的状态。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1-10

实施例1-10均为本发明调节昼夜节律的组合物的一种实施例。实施例1-10的调节昼夜节律的组合物均由辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物组合而成，各组分配比关系如表1所示。

表1实施例1-10组合物的组成

实施例11

本实施例为一种含有本发明所述的调节昼夜节律的组合物的精华液，以精华液的重量百分含量计，包括以下质量百分比的组分：按实施例6制备得到的调节昼夜节律的组合物0.8％，1,3-丙二醇4％，甘油1.5％，乙基己基甘油1％，1,2-己二醇0.5％，丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物0.08％，透明质酸0.05％，余量去离子水(补足至100％)。

实施例12

本实施例中除所用的调节昼夜节律的组合物的添加量与实施例11不同之外，其他都相同。本实施例中实施例6制备得到的组合物添加量为2％。

实施例13

本实施例中除所用的调节昼夜节律的组合物的添加量与实施例11不同之外，其他都相同；本实施例中实施例6制备得到的组合物添加量为5％。

实施例14

本实施例中除所用的调节昼夜节律的组合物的添加量与实施例11不同之外，其他都相同；本实施例中实施例6制备得到的组合物添加量为8％。

对比例1-8

对比例1-8均为本发明调节昼夜节律的组合物缺少辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物某一种或某几种组分的组合物，各组分配比关系如表2所示。

表2对比例1-8组合物的组成

对比例9

本对比例除不含调节昼夜节律的组合物外，其余成分与实施例11相同。

为说明本发明调节昼夜节律的组合物的有益效果，进行了如下试验：

1.安全性测试

申请人对实施例1-10及对比例1-8的组合物分别进行了安全性测试，具体为将受试物放入斑试器内，用量约为0.020-0.025g，将加有受试物的斑试器用无刺激胶带贴覆于受试者的背部或前臂屈侧，用手掌轻压使之均匀地贴覆在皮肤上，持续24h。去除受试斑试器后30min，待压痕消失后观察皮肤反应。如结果为阴性，于斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。

评价标准：0级：阴性反应；1级：可疑反应，仅有微弱红斑；2级：弱阳性反应，红斑、浸润、水肿、可有丘疹；3级：强阳性反应，红斑、浸润、水肿、可有丘疹、反应可超出受试区；4级：极强阳性反应，明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹、反应超出受试区。

测试结果：所有受试者的皮肤反应均为阴性。

2.防御自由基的测试

申请人对实施例1-10及对比例1-8的组合物分别进行了防御自由基的测试，具体为通过测定组合物对羟自由基和DPPH自由基的清除能力来评价本发明组合物的抗氧化性能。

(1)测试样品：实施例1-10，对比例1-8的组合物，用超纯水混合稀释成质量分数为2％的测试溶液。

(2)测试方法：

羟自由基清除实验：取0.5mL浓度为0.75mmol/L邻二氮菲的无水乙醇溶液于带塞试管中，分别加入浓度为0.2mol/L的pH 7.4磷酸盐缓冲液2mL和1mL测试样品，充分混匀后加入0.5mL浓度为0.75mmol/L的FeSO₄·7H₂O溶液，再次混匀后加入0.5mL 0.01％(v/v)的H₂O₂，于37℃恒温水浴60min后，在536nm下分别测量各组混合溶液的吸光度值，记为As，以蒸馏水代替样品溶液作为空白组，测吸光度值，记为Ab，以蒸馏水替代H₂O₂作为损伤组，测其吸光度值An，测试样品羟自由基清除率按以下公式计算：羟自由基清除率(％)＝[(As-An)/(Ab-An)]×100％，取三次测量的平均值。测试结果如表3所示。

DPPH自由基清除实验：取3mL浓度为0.2mmol/L的DPPH-无水乙醇溶液于比色皿中，再加入1mL测试样品，混匀，室温避光30min，在517nm波长处测吸光度，吸光值记为A1，加入3mL无水乙醇溶液和1mL测试样品溶液的吸光度值记为A2，加3mLDPPH-无水乙醇溶液和1mL无水乙醇溶液的吸光值记为A3。按下式计算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％，取三次测量的平均值。测试结果如表3所示。

表3实施例1-10及对比例1-8组合物的自由基清除率

样品/测试项目	羟自由基清除率	DPPH自由基清除率
			实施例1	65.34％	67.31％
实施例2	77.58％	78.24％
			实施例3	72.34％	73.65％
实施例4	72.61％	74.68％
			实施例5	80.72％	81.73％
实施例6	86.67％	88.46％
			实施例7	83.51％	85.29％
实施例8	84.37％	85.87％
			实施例9	87.49％	88.91％
实施例10	90.61％	92.47％
			对比例1	50.35％	56.31％
对比例2	53.24％	54.67％
			对比例3	51.39％	55.48％
对比例4	52.61％	57.72％
			对比例5	22.57％	35.31％
对比例6	28.14％	30.27％
			对比例7	28.61％	28.13％
对比例8	30.15％	30.51％

从表3的实验结果可以看出，本发明实施例组合物对羟自由基和DPPH自由基有较强的清除能力可达65％以上，其中实施例5-10对两者的清除能力高达80％，而对比例组合物对自由基的清除能力只有50％左右，说明本发明所述辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物相辅相成，具有协同增效作用，针对肌肤“昼夜节律”的外源性因素-自由基，可以有效清除自由基，保护皮肤免受氧化损伤，使肌肤处于正常的“时间节律”状态，从而达到抗氧化、抗衰老的功效。

3.组合物对紫外线和高能蓝光损伤细胞的防护作用测试

申请人对实施例1-10及对比例1-8的组合物分别进行紫外线和高能蓝光损伤细胞的防护作用的测试。人永生化角质形成细胞HaCaT细胞在形态学和生物学特性上与人原代角质形成的细胞极为相似，培养条件相对简单，易增殖，可大规模培养，常用来进行体外试验。具体方法为：

(1)细胞的培养：用DMEM培养基(含10％胎牛血清FBS、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml)于37℃，含5％CO₂的培养箱中培养人永生角质细胞(HaCaT细胞)，定期更换培养液，当细胞贴壁近90％时，用0.25％胰酶消化液进行消化，用显微镜观察到约80％的细胞开始悬浮时加入细胞培养液终止消化，于1000rpm条件离心5min收集细胞，再用培养液重悬细胞，使细胞密度约为1x10⁴cells/mL。将浓度为1x10⁴ cells/mL的细胞悬液以200μL/孔的细胞悬液接种于96孔板内，置于37℃、5％CO₂的孵箱中继续孵育。待细胞孵化48h后，吸出旧培养液，每孔加入200uL各实施例1-10以及对比例1-8中组合物的培养液(空白对照组不含该组合物，用铝箔覆盖，细胞存活率为100％)，置于37℃、5％CO₂的孵箱中继续孵育6h后，吸出旧培养液，盖上石英板，分别用紫外线、高能蓝光照射20min，加入新鲜培养液，再次孵育24h后用MTT法测细胞的存活率。

(2)采用MTT法进行细胞存活率检测：每孔加入20uL 5mg/mL MTT溶液，于37℃、5％CO₂的孵箱中继续孵育4h后，吸弃上清液，每孔加150uL二甲基亚砜DMSO，震荡10min。用酶标仪测定570nm下的吸光度值，计算细胞存活率。细胞存活率(％)＝(OD样品组-OD背景)/OD空白对照组x100％

实施例1-10和对比例1-8的组合物对细胞损伤的防护效果如表4所示。

表4实施例1-10及对比例1-8组合物对细胞损伤的防护效果

由表4可知，本发明的调节节律的护肤组合物中各组分之间通过协同作用，能防护皮肤细胞，其中实施例2-10细胞存活率都在85％以上，说明该调节节律的护肤组合物能够提升皮肤对紫外线和高能蓝光的耐受性、减轻光损伤带来皮肤老化，从而在白天的对皮肤起到防御作用。

4.保湿修复效果测试

申请人参照QB/T 4256—2011《化妆品保湿功效评价指南》测试本发明实施例1-10和对比例1-8制备的组合物后的皮肤水分含量MMV值。皮肤水分含量MMV值越大，水分含量越大，反之，水分含量越小。具体测试方法为：

(1)测试人群：随机选取受试者54名，以曲臂内侧作为测试区域，测试前根据循环标记原则对测试区域进行标记，根据标记序号采集初始值，记为0h时数值，然后按照使用方法进行样品使用，采集样品使用后相应时间点的数据，最后进行数据处理，得出结论。

(2)测试区域：试验中左右手臂内侧标记2×2cm²试验区域，测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用探头Corneometer CM825进行受试区域和对照区域的皮肤水分含量测量，区域内5次测得的数据取平均值。先测量各测试区域的空白值，然后按(2.0±0.1)mg/cm²的用量均匀涂抹在测试区域，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。

(3)测试环境：温度22±2℃；相对湿度50±5％RH。

(4)回访时间：使用前先对测试皮肤区域进行测试，记为0h数据，涂抹样品至吸收后第1h、第2h、第4h进行复测。以未涂抹样品区域作为空白进行测试。实验结果如下表5所示。

表5实施例1-10及对比例1-8组合物皮肤水分含量MMV值结果

申请人参照QB/T 4256—2011《化妆品保湿功效评价指南》测试本发明实施例1-10和对比例1-8制备的组合物后的经皮水分流失量TEWL值，具体测试方法为：

(1)测试仪器：德国CK公司多功能皮肤测试仪，探头型号Tewameter TM300

(2)测试原理：FICK菲克扩散定律：dm/dt＝D.A.dp/dx。通过两组温度、湿度传感器测定近表皮(约1cm内)由角质层水分散失在不同亮点形成的水蒸气压梯度，直接测出经皮散发的水分量。TEWL值是皮肤屏障好坏的一个重要标志，皮肤的TEWL值越低，说明皮肤的屏障功能越好，反之越差。

(3)测试环境：测试环境温度为22±1℃，湿度为50±5％。

(4)测试前准备：受试部位前2 3天不能使用任何产品(化妆品或外用药品)。实验前，受试者需要同意清洁双手前臂内测，自然风干。清洁后受试者双手前臂内测，做好测量区域标记。正式测试前应在符合标准房间内静坐至少30min，不能喝水，前臂暴露，呈测试状态放置，保持放松。

(5)测试过程：实验中左右手臂内侧标记2×2cm²试验区域，测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上。使用探头Tewameter TM300进行受试区域和对照区域的皮肤水分散失量测量，区域内5次测得的数据取平均值。先测量各测试区域的空白值，然后按(2.0±0.1)mg/cm²的用量均匀涂抹在测试区域，之后分别测量1小时，2小时，4小时受试区域和空白对照区域的皮肤水分散失量，同一个志愿者的测试由同一个测量人员完成。TEWL值变化率＝(产品使用后TEWL值-使用前TEWL值)÷使用前TEWL值×100％。TEWL值测试结果如下表6所示。

表6实施例1-10及对比例1-8经皮水分散失量TEWL值变化率

分组	0h	1h	2h	4h
					空白	0	-0.52％	-0.34％	-0.31％
实施例1	0	-13.64％	-12.16％	-11.98％
					实施例2	0	-17.37％	-16.94％	-16.31％
实施例3	0	-15.53％	-15.18％	-15.02％
					实施例4	0	-15.49％	-15.01％	-14.97％
实施例5	0	-17.68％	-17.15％	-17.03％
					实施例6	0	-17.86％	-17.51％	-17.21％
实施例7	0	-17.59％	-17.06％	-16.99％
					实施例8	0	-17.67％	-17.12％	-17.01％
实施例9	0	-17.88％	-17.58％	-17.26％
					实施例10	0	-18.03％	-17.69％	-17.37％
对比例1	0	-10.34％	-10.11％	-9.82％
					对比例2	0	-9.94％	-9.81％	-9.51％
对比例3	0	-10.16％	-9.97％	-9.67％
					对比例4	0	-9.54％	-9.37％	-9.16％
对比例5	0	-6.64％	-5.83％	-5.61％
					对比例6	0	-6.31％	-5.71％	-5.43％
对比例7	0	-6.24％	-5.67％	-5.26％
					对比例8	0	-6.27％	-5.69％	-5.37％

从表6的经皮水分散失量TEWL值变化率来看，实施例1-10与对比例1-8使用1h后相比，对比例有一定的降低皮肤水分散失量的效果，但对比例由于缺少一种或几种物质，导致降低水分散失量的效果不如实施例的效果，实施例的皮肤水分散失量与对比例相比，可以有效降低皮肤水分散失量，减少量最大可以达到18％，说明本发明提供的调节节律的护肤组合物之间协同作用，可以显著降低皮肤的水分散失量，共同对皮肤屏障的修复起效果，四种物质缺一不可。

5.精华液试用结果

精华液试用评价：实施例11-14及对比例9制得的调节昼夜节律的组合物的精华液进行应用测试。受试人群：为50名年龄在30-35岁之间的女性志愿者。受试者皮肤健康状况：受试者皮肤健康，无皮肤病过敏史，符合受试者志愿入选标准。测试方法：受试者洁面后，分别将实施例11-14精华液、对比例9的精华液让志愿者随机使用，涂抹在脸颊，观察和感受使用效果，记录给出好评的人数，产品试用10天，测试评估如表7所示。

DPPH自由基清除实验：取3mL浓度为0.2mmol/L的DPPH-无水乙醇溶液于比色皿中，再加入1mL测试样品，混匀，室温避光30min，在517nm波长处测吸光度，吸光值记为A1，加入3mL无水乙醇溶液和1mL测试样品溶液的吸光度值记为A2，加3mLDPPH-无水乙醇溶液和1mL无水乙醇溶液的吸光值记为A3。按下式计算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A3]×100％，取三次测量的平均值。

表7实施例11-14及对比例9精华液试用结果

从产品试用结果可以看出，含有调节昼夜节律的组合物的精华液11-14与对比例9的基料相比，可以有效的起到保湿修复、防护的效果。在调节昼夜节律的组合物的添加量为0.8％时，其自由基清除率也可以达到80％左右，实施例11-14的产品效果明显优于对比例9。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种调节昼夜节律的组合物，其特征在于：所述组合物包括以下组分：辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物、沙棘提取物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物包括以下重量份的组分：辅酶Q10 0.1-3份、稻提取物0.05-3份、合欢树皮提取物0.1-4份、沙棘提取物0.5-5份。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物包括以下重量份的组分：辅酶Q10 1-3份、稻提取物1-3份、合欢树皮提取物1-4份、沙棘提取物1-5份。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述辅酶Q10、稻提取物、合欢树皮提取物和沙棘提取物的重量比为：辅酶Q10：稻提取物：合欢树皮提取物：沙棘提取物＝3:2:2:1。

5.如权利要求1～4中任一项所述的调节昼夜节律的组合物在制备化妆品中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述调节昼夜节律组合物在所述化妆品中的重量百分比为0.8-8％。

7.一种包含权利要求1～6中任一项所述组合物的化妆品。

8.根据权利要求7所述的化妆品，其特征在于：所述化妆品为乳液、霜膏、水剂、膜类中的任意一种。

9.根据权利要求8所述的化妆品，其特征在于：所述化妆品为精华液、肌底液、柔肤水、安瓶、化妆水、美容液、面膜中的任意一种。