CN113912703A - 一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法及应用 - Google Patents
一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法及应用。通过改进牛跟腱胶原蛋白肽的提取工艺，将牛跟腱用混合酶水解为胶原蛋白肽，用超滤的方法分离得到分子量小于3KD对酪氨酸酶抑制作用最佳的的胶原蛋白肽。通过工艺优化获得的牛跟腱胶原蛋白肽纯度高、分子量小，易于吸收。该制备方式利用酶解和超滤两种方法的优点，提取的胶原蛋白肽活性高对人体伤害小，解决了现有技术中苯二酚(HQ)、熊果苷、曲酸、壬二酸、L‑抗坏血酸、鞣花酸、氨甲环酸等酪氨酸酶抑制剂对人体有潜在毒性的技术问题。
Description
技术领域
本发明主要涉及保健食品的技术领域，具体地说，本发明涉及一种具有美白淡斑活性的牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法及应用的技术领域。
技术背景
色斑是指与周围皮肤颜色不同的斑点，一般常见的有老年斑、雀斑等，它的形成因素非常多，形成过程也十分复杂，与年龄、内分泌、压力、情绪、妊娠、失眠、药物、激素、阳光、风吹、不健康的生活方式等很多因素有关。
人体内黑色素是对皮肤颜色的影响最大.黑色素通常是由人皮肤基底层的黑色素细胞产生。黑色素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下氧化生成多巴、多巴醌，最终形成黑色素。酪氨酸酶是直接导致黑色素细胞形成黑色素的关键。因此直接抑制酪氨酸酶的活性是最突出、最有效的阻断黑色素产生的方式。市面上大多数化妆品都是采用酪氨酸酶抑制剂，如对苯二酚(HQ)、熊果苷、曲酸、壬二酸、L-抗坏血酸、鞣花酸、氨甲环酸等，虽已被用作美白剂，但还是存在一定的缺点。例如，对苯二酚(HQ)除了可以诱变哺乳动物细胞，还有一些不良反应包括接触性皮炎、过敏、暂时性红斑，灼烧，刺痛感，白斑病，栗点指甲，色素不足和褐黄病。熊果苷，一种对苯二酚的前体药物，是一种天然成分，减少或抑制酪氨酸酶活性从而抑制合成黑色素。然而，熊果苷的天然形态在化学上是不稳定的，可释放对苯二酚，分解为含苯代谢物，对骨髓具有潜在的毒性。曲酸的致癌性和贮存过程中的不稳定性，其在化妆品中的应用受到限制；L-抗坏血酸对热敏感，易变质；鞣花酸不溶于水，因此生物可利用性差，而对氨甲环酸而言，其抑制黑素生成途径仍未确定。因此，迫切需要开发具有药物性质的新型酪氨酸酶抑制剂。
胶原蛋白肽是胶原蛋白的水解产物，是多肽混合物。胶原蛋白肽表现出很好的可消化性，而且还具有保护胃黏膜、抗氧化、抗溃疡、抗衰老、抗过敏、降血压、促进软骨再生、促进角膜上皮细胞的修复和生长，促进皮肤胶原代谢、免疫调节等诸多独特的生理活性。而且已有研究表明，胶原蛋白肽的分子量小于3KD时抑制酪氨酸酶的效果最佳。
市售普通的牛跟腱胶原蛋白肽有很重的腥味，苦涩味，造成其应用口感不佳，导致购买力下降。因此探索如何改善现有报道关于牛跟腱脱腥味技术问题，及提高牛跟腱胶原蛋白肽纯度的问题，探索一种适用于美白淡斑的小分子胶原蛋白肽的制备方法。
发明内容
本发明针对现有技术中牛跟腱胶原蛋白肽在应用过程中存在腥味苦味，口感不佳等技术问题，且未见有文献和专利报道牛跟腱胶原蛋白肽可以抑制色斑的形成。本发明旨在于探索如何改善现有报道关于牛跟腱中胶原蛋白肽提取中存在的问题，探索一种能够抑制色斑形成牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法。本发明具体提供一种具有美白淡斑活性的牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，通过筛选酶、优化酶解和超滤工艺参数，最终得到子量小于3KD的牛跟腱胶原蛋白肽，该牛跟腱胶原蛋白肽纯度高、分子量小，易于吸收，对色斑有显著的抑制效果，将其应用于制备牛跟腱胶原蛋白肽口服液，无苦涩味，无腥味，液体质地均匀无沉淀物。饮用2-3个疗程后，色斑明显淡化，肤色均匀白皙，还有保护胃黏膜、抗氧化、抗衰老、促进皮肤胶原代谢、免疫调节等功效。将其应用于制备牛跟腱胶原蛋白肽护肤品，抑制色斑形成的能力强，使用后增白和淡斑效果非常明显，皮肤的光泽水润度也有明显的提升，同时适合任何肤质使用，无过敏，无刺激为拓展牛跟腱胶原蛋白肽的应用提供数据支持。
本发明具体提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
(1)将新鲜的牛跟腱去除软组织和脂肪后用纯化水清洗，用粉碎机粉碎成0.2mm×0.2mm的组织碎块，加入浓度为5mol/L的食盐水中，搅拌后浸泡处理20h，然后放入50℃温水中清洗，再加入浓度为10-15％的NaHCO3溶液浸泡30min，去除血清等成分，用纯化水洗涤后加入浓度为5-10％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂后消毒，此后步骤全部在无菌操作下完成。
(2)向步骤(1)处理好的牛跟腱中加入加入0.5-2L胃蛋白酶，超声波处理，获得三螺旋结构的胶原蛋白。
(3)将步骤(2)的三螺旋结构的胶原蛋白，去除沉淀，进行离心过滤，每5000g离心5min，收集滤液，加入质量体积比为2-4％的复合酶，复合酶于50℃，酶解30-60min，获得胶原蛋白肽。
(4)将步骤(3)中的胶原蛋白肽进行超滤，得到分子量小于3KD的胶原蛋白肽即为对酪氨酸酶有抑制作用的牛跟腱胶原蛋白肽。
本发明提供的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法中，所述步骤(2)中胃蛋白酶的添加量为1.5L。
本发明提供的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法中，所述复合酶为体积比为1:2:1的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶混合制备获得。
本发明提供的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法中，所述复合酶的添加量为3％，酶解时间为50min。
同时本发明提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法获得的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽在护肤品中的应用。
同时本发明提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法获得的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽在口服液中的应用。
通过本发明提供的上述技术方案实施本发明内容，可以达到以下有益效果：
(1)本发明制备的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽，纯度高、分子量小于3KD，易于吸收，对色斑的抑制效果最佳。
(2)用本发明制备的牛跟腱胶原蛋白肽应用于护肤品中能抑制色斑形成，使用后增白和淡斑效果非常明显，皮肤的光泽水润度也有明显的提升，同时适合任何肤质使用，无过敏，无刺激。
(3)用本发明制备的牛跟腱胶原蛋白肽应用于胶原蛋白口服液，口服液味道极佳，无苦涩味，无腥味，液体质地均匀无沉淀物。饮用2-3个疗程后，色斑明显淡化，肤色均匀白皙，还有保护胃黏膜、抗氧化、抗衰老、促进皮肤胶原代谢、免疫调节等功效。
说明书附图
无
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。本发明中选用的所有原辅材料都为本领域熟知选用的。
实施例1：美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法
一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其包括如下步骤：
(1)将新鲜的牛跟腱去除软组织和脂肪后用纯化水清洗，用粉碎机粉碎成0.2mm×0.2mm的组织碎块，加入浓度为5mol/L的食盐水中，搅拌后浸泡处理20h，然后放入50℃温水中清洗，再加入浓度为10-15％的NaHCO3溶液浸泡30min，去除血清等成分，用纯化水洗涤后加入浓度为5-10％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂后消毒，此后步骤全部在无菌操作下完成。
(2)向步骤(1)处理好的牛跟腱中加入加入0.5-2L胃蛋白酶，超声波处理，获得三螺旋结构的胶原蛋白。
(3)将步骤(2)的三螺旋结构的胶原蛋白，去除沉淀，进行离心过滤，每5000g离心5min，收集滤液，加入质量体积比2-4％复合酶，复合酶于50℃，酶解30-60min，获得胶原蛋白肽。
(4)将步骤(3)中的胶原蛋白肽进行超滤，得到分子量小于3KD的胶原蛋白肽即为对酪氨酸酶有抑制作用的牛跟腱胶原蛋白肽。
实施例2：美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法
在实施例1的制备方法的基础上，提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，牛跟腱组织碎块在浓度为10％NaHCO3溶液浸泡30min，清洗后再加入浓度为5％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂，处理好的牛跟腱中加入0.5L胃蛋白酶，超声波处理。离心过滤，收集滤液，加入质量体积比为2％的复合酶，酶解30min，获得美白淡斑活性胶原蛋白肽，其中，复合酶为质量比为1:2:1的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶的混合酶。
实施例3：美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法
在实施例1的制备方法的基础上，提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，牛跟腱组织碎块在浓度为11％NaHCO3溶液浸泡30min，清洗后再加入浓度为6％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂，处理好的牛跟腱中加入1L胃蛋白酶，超声波处理。离心过滤，收集滤液，加入质量体积比为2.5％的复合酶，酶解40min，获得美白淡斑活性胶原蛋白肽，其中，复合酶为质量比为1:2:1的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶的混合酶。
实施例4：美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法
在实施例1的制备方法的基础上，提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，牛跟腱组织碎块在浓度为13％NaHCO3溶液浸泡30min，清洗后再加入浓度为8％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂，处理好的牛跟腱中加入1.5L胃蛋白酶，超声波处理。离心过滤，收集滤液，加入质量体积比为3％的复合酶，酶解50min，获得美白淡斑活性胶原蛋白肽，其中，复合酶为质量比为1:2:1的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶的混合酶。
实施例5：美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法
在实施例1的制备方法的基础上，提供一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，牛跟腱组织碎块在浓度为15％NaHCO3溶液浸泡30min，清洗后再加入浓度为10％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂，处理好的牛跟腱中加入2L胃蛋白酶，超声波处理。离心过滤，收集滤液，加入质量体积比为4％的复合酶，酶解60min，获得美白淡斑活性胶原蛋白肽，其中，复合酶为质量比为1:2:1的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶的混合酶。
实施例6：美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽制备方法的正交试验
本实施例在实施例1-5的基础上，对美白淡斑活性胶原蛋白肽的制备工艺参数进一步优化，以复合酶添加量(A)、酶解时间(B)、胃蛋白酶添加量(C)为试验因素，以胶原蛋白含量为考察指标，综合评分法，选用L9(33)正交试验优化美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽制备的方法，每个因素设置三个水平见表1。
表1：L9(33)正交试验因素水平设计表
表2：牛跟腱胶原蛋白肽制备方法L9(33)正交优化试验结果
由表1、2可知，各改良剂对牛跟腱胶原蛋白肽提取的综合评分影响顺序为A>B>C，即复合酶添加量＞酶解时间＞胃蛋白酶添加量，得到最佳的组合为A2B2C2，即最佳的改良剂配方为实施例4中的3％复合酶、酶解时间为50min、1.5L胃蛋白酶。
实施例7：本发明制备美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽应用于护肤品的功能评价
将本发明提供的制备方法获得的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽用于一款护肤凝霜的制备，将利用传统方法制备牛跟腱胶原蛋白肽用于护肤凝霜作为对照，同时对本发明的实施例2-5条件制备的美白淡斑活性胶原蛋白肽也用于护肤凝霜，其余条件均相同。邀请180名皮肤有色斑、暗黄的女性试用，其中30名女性使用加入本发明制备的牛跟腱胶原蛋白肽的护肤凝霜：30名女性使用工艺相同不添加牛跟腱胶原蛋白肽的护肤凝霜(对照1)：30名女性只用清水洁面(空白组)。每日洁面后早晚使用两次，连续使用30天后皮肤的改善效果见表3。
表3：本发明制备的美白淡斑活性胶原蛋白肽与传统方法制备的牛跟腱胶原蛋白用于护肤凝霜使用效果对比
| 人数 | 肤色改善、色斑减少 | 效果一般 | 是否过敏 | |
| 空白组 | 30 | 0 | 30 | 否 |
| 对照1 | 30 | 3 | 27 | 否 |
| 实施例2 | 30 | 21 | 9 | 否 |
| 实施例3 | 30 | 24 | 6 | 否 |
| 实施例4 | 30 | 28 | 2 | 否 |
| 实施例5 | 30 | 26 | 4 | 否 |
由表3数据可知，加入本发明制备的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽护肤凝霜与普通工艺制备的护肤凝霜使用后效果对比明显，使用本发明制备的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽护肤品中牛跟腱胶原蛋白肽活性高，抑制色斑形成的能力强，使用后增白和淡斑效果非常明显，皮肤的光泽水润度也有明显的提升，同时适合任何肤质使用，无过敏，无刺激，其中实施例4组作用明显。
实施例8：本发明制备的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽在胶原蛋白口服液中应用的对比
邀请80名人员对本发明提供的制备方法制备的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽口服液与传统方法制备牛跟腱胶原蛋白口服液(对照1)及市售胶原蛋白口服液(对照2)进行品评，感官打分，其中，专业和非专业人员各40名，专业人员少年、青年、中年和老年各10名，男女各半；非专业人员少年、青年、中年和老年各10名，男女各半。打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表4。
表4：本发明牛跟腱胶原蛋白口服液与现有胶原蛋白口服液感官打分对比
本发明实施例提供的方法制备的美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽口服液与利用传统方法制备牛跟腱胶原蛋白口服液(对照1)及市售胶原蛋白口服液(对照2)进行功能验证试验，验证本发明具有美白淡斑活性的牛跟腱胶原蛋白口服液对肤质的改善效果，同时对本发明实施例2-5进行验证试验，每组经120名女性试用(试用女性均为40-45岁之间，且面部皮肤粗糙、暗黄、有色斑)，每天睡前服用一只，连续三个月。考察服用效果，特别是对肤质改善的效果，具体结果见表5所示。
表5：本发明牛跟腱胶原蛋白口服液与现有胶原蛋白口服液应用验证对比
由表4、5数据可知，本发明实施例制备的牛跟腱胶原蛋白口服液与市售牛跟腱胶原蛋白口服液(对照1)及普通胶原蛋白口服液(对照2)进行功能验证试验，结果发现，本发明制备的牛跟腱胶原蛋白口服液从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售牛跟腱胶原蛋白口服液及普通胶原蛋白口服液，特别是实施例4组，口感和质地极好，无腥味，无苦涩味，均匀无杂质。同时适合不同年龄段，不同消费层次的消费者食用。在改善肤质效果上也明显优于现有的胶原蛋白口服液，且对皮肤的色斑改善明显，这与牛跟腱胶原蛋白肽的提取方法相关，也进一步证明了本发明制备的牛跟腱胶原蛋白肽对肤质的改善作用最佳，因此用本发明制备的牛跟腱胶原蛋白口服液具有很好的应用前景。
需要说明的是：本发明实施例2-5制备的牛跟腱胶原蛋白口服液同样具有上述试验效果，各实施例之间与上述试验效果差异不大。
上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所延伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (7)
1.一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新鲜的牛跟腱去除软组织和脂肪后用纯化水清洗，用粉碎机粉碎成0.2mm×0.2mm的组织碎块，加入浓度为5mol/L的食盐水中，搅拌后浸泡处理20h，然后放入50℃温水中清洗，再加入浓度为10-15％的NaHCO3溶液浸泡30min，去除血清等成分，用纯化水洗涤后加入浓度为5-10％碳酸钠溶液浸泡1h脱脂后消毒，此后步骤全部在无菌操作下完成；
(2)向步骤(1)处理好的牛跟腱中加入加入0.5-2L胃蛋白酶，超声波处理，获得三螺旋结构的胶原蛋白；
(3)将步骤(2)的三螺旋结构的胶原蛋白，去除沉淀，进行离心过滤，每5000g离心5min，收集滤液，加入质量体积比为2-4％的复合酶，复合酶于50℃，酶解30-60min，获得胶原蛋白肽；
(4)将步骤(3)中的胶原蛋白肽进行超滤，得到分子量小于3KD的胶原蛋白肽即为对酪氨酸酶有抑制作用的牛跟腱胶原蛋白肽。
2.如权利要求1所述的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中胃蛋白酶的添加量为1.5L。
3.如权利要求1所述的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)复合酶的添加量为3％，酶解时间为50min。
4.如权利要求1所述的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述复合酶为体积比为1:2:1的中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶混合获得。
5.如权利要求1所述的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，得到一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽组合物。
6.如权利要求1所述的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，通过该制备方法得到的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽组合物在护肤品中的应用。
7.如权利要求1所述的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，通过该制备方法得到的一种美白淡斑活性牛跟腱胶原蛋白肽组合物在口服液中的应用。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220111 |
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