CN113899710A - 一种测定伤寒联合疫苗中糖的含量的方法 - Google Patents

一种测定伤寒联合疫苗中糖的含量的方法 Download PDF

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CN113899710A CN202111130967.8A CN202111130967A CN113899710A CN 113899710 A CN113899710 A CN 113899710A CN 202111130967 A CN202111130967 A CN 202111130967A CN 113899710 A CN113899710 A CN 113899710A
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杨小琦
张蕾
乐蛟
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Abstract

本申请公开了一种测定伤寒联合疫苗中多糖的含量的方法。所述方法可以包括以下步骤：确定预设量伤寒联合疫苗中的干扰多糖的干扰含量；基于所述干扰糖的干扰含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第一O‑乙酰基含量；利用O‑乙酰基测定法确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第二O‑乙酰基含量；基于所述第一O‑乙酰基含量以及所述第二O‑乙酰基含量确定目标O‑乙酰基含量；基于所述目标O‑乙酰基含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的目标多糖的目标含量。

Description

一种测定伤寒联合疫苗中糖的含量的方法
技术领域
本申请涉及生物技术领域，特别涉及一种测定伤寒联合疫苗中糖的含量的方法。
背景技术
生物制品(例如，病毒疫苗)在制备完成后，需要根据规定进行成品检定。检定结果符合要求后这些生物制品才可以投放市场。对于伤寒联合疫苗而言，有一项检定是多糖含量的检定。目前对于伤寒联合疫苗中的多糖含量的测定一般是采用火箭电泳法。该方法比较灵敏，但准确度较低，重复性较差。并且，火箭电泳法并不能测定伤寒联合疫苗中的游离多糖的含量。
发明内容
本申请的目的在于提供一种测定伤寒联合疫苗中糖的含量的方法，以准确的测定伤寒联合疫苗中各种存在形式的糖。
本申请一方面提供了一种测定伤寒联合疫苗中糖的含量的方法。所述方法包括：确定预设量伤寒联合疫苗中的干扰多糖的干扰含量；；基于所述干扰糖的干扰含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第一O-乙酰基含量；利用O-乙酰基测定法确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第二O-乙酰基含量；基于所述第一O-乙酰基含量以及所述第二O-乙酰基含量确定目标O-乙酰基含量；基于所述目标O-乙酰基含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的目标多糖的目标含量。
在一些实施例中，所述目标多糖包括Vi多糖，所述确定所述Vi多糖的目标含量包括：获取第一预设比例；基于所述第一预设比例以及所述目标O-乙酰基含量，确定所述Vi多糖的目标含量。
在一些实施例中，所述目标O-乙酰基含量为所述第一O-乙酰基含量与所述第二O-乙酰基含量之间的差值。
在一些实施例中，所述干扰多糖包括O-SP多糖，所述干扰多糖的干扰含量包括O-SP多糖含量；所述确定预设量伤寒联合疫苗中的干扰糖的干扰含量包括：透析所述预设量伤寒联合疫苗，获取透析液；利用蒽酮法确定所述透析液中的O-SP多糖含量。
在一些实施例中，所述基于所述干扰多糖的干扰含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第一O-乙酰基含量包括：获取第二预设比例；基于所述第二预设比例以及所述O-SP多糖含量，确定所述第一O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述利用O-乙酰基测定法确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第二O-乙酰基含量包括：利用O-乙酰基测定法确定所述透析液中的第二O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述目标多糖包括Vi游离多糖，所述确定所述Vi游离多糖的含量包括：获取所述预设量伤寒联合疫苗中的第三O-乙酰基含量；至少基于所述第三O-乙酰基含量以及所述目标O-乙酰基含量，确定所述Vi游离多糖的含量。
在一些实施例中，所述干扰多糖包括O-SP游离多糖，所述干扰多糖的干扰含量包括O-SP游离多糖含量；所述获取第三O-乙酰基含量包括：透析所述预设量伤寒联合疫苗，获取透析液；取一部分透析液进行苯酚制样，获取上清液；利用蒽酮法确定所述上清液中的O-SP游离多糖含量；基于所述O-SP游离多糖含量确定第四O-乙酰基含量；利用O-乙酰基测定法确定所述上清液中的第五O-乙酰基含量；基于所述第四O-乙酰基含量以及所述第五O-乙酰基含量确定所述第三O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述第三O-乙酰基含量为所述第四O-乙酰基含量与所述第五O-乙酰基含量之间的差值。
在一些实施例中，所述确定所述Vi游离多糖的含量包括：获取多糖回收率；至少基于所述多糖回收率、所述第三O-乙酰基含量以及所述目标O-乙酰基含量，确定所述Vi多糖的目标含量。
附图说明
本申请将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，在这些实施例中，相同的编号表示相同的结构，其中：
图1是根据本申请一些实施例所示的测定伤寒联合疫苗中糖的含量的示例性流程图；
图2是根据本申请一些实施例所示的测定伤寒联合疫苗中O-乙酰基含量的示例性流程图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本说明书实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本说明书的一些示例或实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图将本说明书应用于其它类似情景。除非从语言环境中显而易见或另做说明，图中相同标号代表相同结构或操作。
如本申请和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。用于本申请的数值范围是为了简明扼要表述包括在该范围的每一个数值。
图1是根据本申请一些实施例所示的测定伤寒联合疫苗中糖的含量的示例性流程图。如图1所示，用于测定伤寒联合疫苗中糖的含量的流程100可以包括以下步骤。
步骤S110，确定预设量伤寒联合疫苗中的干扰多糖的干扰含量。
在一些实施例中，所示预设量可以是以体积表示的预先确定的量。例如，所示预设量可以是1mL、5mL、10mL、15mL、20mL等。本申请中不做具体限定。可以知道的是，伤寒联合疫苗中可以包含有多种糖。例如，伤寒甲型副伤寒联合疫苗中可以包括Vi荚膜多糖(本申请中也可以被称为Vi多糖)以及O-特异多糖(本申请中也可以被称为O-SP多糖)。当测定某一种糖的含量过程中，若另外一种或多种糖的存在会对测定结果产生干扰，则该一种或多种糖可以被称为干扰糖。作为示例，使用本申请所披露的方法在测定伤寒甲型副伤寒联合疫苗中Vi多糖的含量时，由于Vi多糖与O-SP多糖都含有O-乙酰基，单纯测定O-乙酰基含量的话将无法准确得到Vi多糖的含量，O-SP多糖将会对测定结果产生干扰。因此O-SP多糖可以被称为干扰多糖。
在一些实施例中，所述伤寒联合疫苗可以包括伤寒甲型副伤寒联合疫苗。所述干扰多糖可以包括O-SP多糖。所述干扰多糖的干扰含量可以包括O-SP多糖含量。为了测定所述干扰含量，所述预设量的伤寒联合疫苗可以被透析以获取透析液。经过透析后，杂质比如单糖、二糖等将被去除。在获取到所述透析液之后，可以利用蒽酮法测定所述透析液中的O-SP多糖含量，作为所述干扰含量。关于蒽酮法的实施过程可以参考本申请实施例部分。
步骤S120，基于所述干扰多糖的干扰含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第一O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述第一O-乙酰基含量可以是所述干扰多糖中所包含的O-乙酰基的含量。所述干扰多糖的干扰含量与所包含的O-乙酰基含量之间具有一个比例关系，可以通过数学换算基于所述干扰含量确定所述第一O-乙酰基含量。该比例关系在本申请中可以被称为第二预设比例。所述第二预设比例可以是一个经验值，也可以是根据实际操作情况所确定一个预设值。在一些实施例中，所述第二预设比例可以为1000：0.6。基于所述第二预设比例以及所述干扰多糖的干扰含量(例如，所述O-SP多糖含量)，可以确定所述第一O-乙酰基含量。作为示例，所述第一O-乙酰基含量可以基于以下公式(1)确定：
Figure BDA0003280469850000051
其中，O1表示第一O-乙酰基含量，Ad表示干扰多糖的干扰含量(例如，所述O-SP多糖含量)，Pr2表示第二预设比例。
步骤S130，利用O-乙酰基测定法确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第二O-乙酰基含量。
可以知道的是，O-乙酰基可以在碱性环境与羟胺形成氧肟酸。该氧肟酸可以在酸性溶液中与三价铁离子形成有色复合物。所形成的有色复合物在540nm处有吸光度的最大吸收。在一定范围内，其颜色的深浅与O-乙酰基含量成正比。因此，本申请中使用的O-乙酰基测定法可以是获取一个回归方程，其可表示O-乙酰基含量与吸光度之间的关系。将所述预设量伤寒联合疫苗测定得到的吸光度带入到回归方程，则可以得到所述第二O-乙酰基含量。在一些实施例中，所述第二O-乙酰基含量可以是所述预设量伤寒联合疫苗的透析液中的O-乙酰基含量。关于O-乙酰基测定法的实施过程可以参考本申请实施例部分。
步骤S140，基于所述第一O-乙酰基含量以及所述第二O-乙酰基含量确定目标O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述目标O-乙酰基含量可以与所述预设量伤寒联合疫苗中的目标多糖的目标含量相关。所述目标多糖可以是所述预设量伤寒联合疫苗中所需测定含量的多糖。参考之前的示例，伤寒甲型副伤寒联合疫苗中包含Vi多糖以及O-SP多糖。则当需要测定Vi多糖的含量时，Vi多糖可以被称为目标多糖，而O-SP多糖可以被称为干扰多糖。在一些实施例中，所述伤寒联合疫苗可以包括伤寒甲型副伤寒联合疫苗。所述目标多糖可以包括Vi多糖。所述目标多糖的目标含量可以包括Vi多糖含量。所述干扰多糖可以包括O-SP多糖。所述干扰多糖的干扰含量可以包括O-SP多糖含量。
由于目标多糖与干扰多糖包含有同一种基团(O-乙酰基)，则步骤S130中对所述预设量伤寒联合疫苗测定的第二O-乙酰基含量包括了目标多糖与干扰多糖的所有O-乙酰基的总含量。因此，可以通过所述第一O-乙酰基含量以及所述第二O-乙酰基含量之间的运算，确定所述目标O-乙酰基含量。在一些实施例中，所述目标O-乙酰基含量为所述第一O-乙酰基含量与所述第二O-乙酰基含量之间的差值。如以下公式(2)所示：
OT＝O2-O1 (2)
其中，OT表示目标O-乙酰基含量，O1表示第一O-乙酰基含量，O2表示第二O-乙酰基含量。
步骤S150，基于所述目标O-乙酰基含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的目标糖的目标含量。
在一些实施例中，所述目标糖的目标含量可以通过所述目标O-乙酰基含量进行换算后确定。所述目标O-乙酰基含量与所述目标含量之间存在一个比例关系。该比例关系在本申请中可以被称为第一预设比例。所述第一预设比例可以是一个经验值，也可以是根据实际操作情况所确定一个预设值。在一些实施例中，所述第二预设比例可以为1000：2.5。
基于所述第一预设比例以及所述目标O-乙酰基含量，可以确定所述目标多糖的目标含量。作为示例，所述目标多糖的目标含量可以基于以下公式(3)确定：
At＝OT×Pr1 (3)
其中，OT表示目标O-乙酰基含量，At表示目标多糖的目标含量(例如，所述Vi多糖含量)，Pr1表示第一预设比例。
在一些实施例中，所述伤寒联合疫苗可以包括伤寒甲型副伤寒联合疫苗。所述目标多糖可以包括Vi游离多糖，所述干扰多糖可以包括O-SP游离多糖。所述目标多糖的目标含量可以包括Vi游离多糖的目标含量。所述干扰多糖的干扰含量可以包括O-SP游离多糖的干扰含量。为了确定Vi游离多糖的目标含量，所述预设量伤寒联合疫苗中的第三O-乙酰基含量可以被确定。所述第三O-乙酰基含量可以是所述Vi游离多糖所具有的O-乙酰基的含量，其可以至少与所述目标O-乙酰基含量作为基础，确定所述Vi游离多糖的目标含量。关于确定所述第三O-乙酰基含量的描述可以参考本申请其他部分，例如，图2。
在一些实施例中，为确定所述Vi游离多糖的目标含量，多糖回收率可以被确定。所述多糖回收率可以用于指示通过苯酚制样过程多糖的损失率。或者说，经过苯酚制样过程后可以从溶液中回收的多糖的量。在一些实施例中，可以利用Vi多糖原液中的O-乙酰基含量以及经过苯酚制样后得到的上清液中的O-乙酰基含量确定所述多糖回收率。仅作为示例，多糖回收率可以基于以下公式(4)确定：
rp＝(Os/Or)×(V2/V1)×100％ (4)
其中，rp表示多糖回收率，Or表示Vi多糖原液中的O-乙酰基含量，Os表示Vi多糖原液经过苯酚制样后得到的上清液中的O-乙酰基含量，V1表示经过苯酚制样后得到的上清液透析前的体积，V2表示经过苯酚制样后得到的上清液透析后的体积。由于苯酚制样后部分苯酚会残留于上清液中，因此，可以对Vi多糖原液经过苯酚制样后得到的上清液再进行一次透析以去除这些残留的苯酚。则透析前后的体积可以用于计算的补偿。
关于多糖回收率的确定可以参考本申请实施例部分。
在一些实施例中，所述第三预设比例、所述第三O-乙酰基含量以及所述目标O-乙酰基含量可以用于确定所述Vi游离多糖的目标含量。作为示例，所述Vi游离多糖的目标含量可以如以下公式(5)确定：
Tf＝(O3/OT)×(V4/V3)/rp (5)
其中，Tf表示目标多糖的目标含量(例如，所述Vi游离多糖的目标含量),O3表示第三O-乙酰基含量，OT表示目标O-乙酰基含量，rp表示多糖回收率。基于上述同样的理由，上述有效量伤寒联合疫苗的部分经苯酚制样得到的上清液也需要再进行透析去杂质。
应当注意的是，上述有关图1中的各个步骤的描述仅仅是为了示例和说明，而不限定本说明书的适用范围。对于本领域技术人员来说，在本说明书的指导下可以对图1中的各个步骤进行各种修正和改变。然而，这些修正和改变仍在本说明书的范围之内。
图2是根据本申请一些实施例所示的测定O-乙酰基含量的示例性流程图。如图2所示，用于测定第三O-乙酰基含量的流程200可以包括以下步骤。
S210，透析所述预设量伤寒联合疫苗，获取透析液。
在一些实施例中，透析可以去除所述预设量的伤寒联合疫苗中的杂质，比如单糖、二糖等。在一些实施例中，所述透析液可以用于流程100。例如，确定干扰糖的干扰含量、确定目标O-乙酰基含量以及目标糖的目标含量。可以参考流程100中的描述。
S220，取一部分透析液进行苯酚制样，获取上清液。
在一些实施例中，所述一部分透析液可以是一个预设量，例如，1mL、1.5mL、2mL、2.5mL、3mL、3.5mL、4mL、4.5mL、5mL等。所述一部分透析液也可以是全部透析液。本申请中不做具体限定。
在一些实施例中，经过苯酚制样后，透析液中的多糖(包含目标多糖和干扰多糖)与苯酚进行反应后将析出(例如，酚羟基与醛基或羰基反应生成沉淀物)。而游离多糖将不与苯酚反应，继续溶解在溶液中。随后，经过离心所述上清液可以被获取。
S230，利用蒽酮法确定所述上清液中的O-SP游离多糖含量。
关于O-乙酰基测定法的实施过程可以参考本申请实施例部分。
S240，基于所述O-SP游离多糖含量确定第四O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述第四O-乙酰基含量可以是与所述O-SP游离多糖含量具有一个比例关系。通过之前的描述，所述有效量的伤寒联合疫苗中的多糖都含有O-乙酰基。通过确定不同的O-乙酰基含量可以确定不同的多糖的含量。基于此，所述第四O-乙酰基含量可以是所述O-SP游离多糖所包含的O-乙酰基的含量。可以基于所述O-SP游离多糖含量确定第四O-乙酰基含量。作为示例，所述第四O-乙酰基含量可以基于以下公式(6)确定：
Figure BDA0003280469850000091
其中，O4表示第四O-乙酰基含量，As表示O-SP游离多糖含量，Pr′表示第四O-乙酰基含量与O-SP游离多糖含量之间的比例关系。在一些实施例中，该比例关系可以使用所述第二预设比例。
S250，利用O-乙酰基测定法确定所述上清液中的第五O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述第五O-乙酰基含量可以是所述上清液中的多糖(例如，游离多糖)所包含的O-乙酰基的总量。例如，所述第五O-乙酰基含量可以包含目标多糖(例如，Vi游离多糖)以及干扰多糖(例如，O-SP游离多糖)所含量的O-乙酰基的含量。相同或类似的，利用O-乙酰基测定法确定所述第五O-乙酰基含量的实施过程可以参考本申请实施例部分。
S250，基于所述第四O-乙酰基含量以及所述第五O-乙酰基含量确定所述第三O-乙酰基含量。
在一些实施例中，所述第三O-乙酰基含量可以目标多糖(例如，Vi游离多糖)所包含的O-乙酰基的含量。基于前述的说明，所述第四O-乙酰基含量可以干扰多糖(例如，O-SP游离多糖)所包含的O-乙酰基的含量，所述第五O-乙酰基含量可以是上清液中的多糖(例如，游离多糖)所包含的O-乙酰基的总量。因此，可以通过所述第四O-乙酰基含量以及所述第五O-乙酰基含量之间的运算，确定所述第三O-乙酰基含量。在一些实施例中，所述三O-乙酰基含量为所述第一O-乙酰基含量与所述第二O-乙酰基含量之间的差值。如以下公式(7)所示：
O3＝O5-O4 (7)
其中，O3表示第三O-乙酰基含量，O4表示第四O-乙酰基含量，O5表示第五O-乙酰基含量。
应当注意的是，上述有关图2中的各个步骤的描述仅仅是为了示例和说明，而不限定本说明书的适用范围。对于本领域技术人员来说，在本说明书的指导下可以对图2中的各个步骤进行各种修正和改变。然而，这些修正和改变仍在本说明书的范围之内。
实施例
以下通过实施例进一步对本申请进行阐述。但本申请并不受这些实施例的限制。实施例中所使用材料，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1-有效量伤寒联合疫苗的透析液与上清液制备
取70支伤寒联合疫苗，用纯化水或者配对稀释液0.3ml进行溶解，扎袋透析，换水6次，透析48小时后取出透析液，记录透析液体积。取9ml透析液加1ml饱和醋酸钠溶液再加10ml 70％冷酚溶液进行苯酚制样，甲型副伤寒O-SP多糖原液、伤寒Vi多糖原液也同步进行苯酚制样，充分震荡20min，离心取上清，将上清液记录体积后再次扎袋透析，换水6次，透析48小时候取出透析的上清液，记录透析后体积。
实施例2-O-SP多糖含量的测定
将已知浓度的O-SP多糖将糖含量精确稀释至50μg/ml多糖标准液为对照品。分别取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.3ml、0.4ml、0.5ml分别置于试管中，补水至0.5ml。加新鲜配制的蒽酮试剂2.5ml，混匀，95～100℃水浴15分钟，冰水浴5～10分钟，波长625nm处测吸光度值，以标准管中对照品溶液的含量(μg/ml)对应其吸光度值作直线回归。
吸取供试品溶液(透析液)0.5ml置于试管中，同法操作，将供试品吸光度代入直线回归方程，计算出供试品溶液的O-SP多糖含量(μg/ml)。
实施例3-O-乙酰基含量的测定
配制0.5mmol/L氯化乙酰胆碱溶液为对照品。分别吸取对照品溶液0、0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置于试管中，补水至1.0mL。加新鲜配制的碱性羟胺液(2mol/L盐酸羟胺溶液与3.5mol/L氢氧化钠溶液等体积混合)2.0mL混匀，于室温放置4min，加4mol/L盐酸1.0mL，混匀，加0.37mol/L三氯化铁-盐酸溶液[称取三氯化铁(FeCl3·6H2O)10.0g，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至100mL)]1.0mL，混匀，另精密吸取上述相应的系列对照品溶液，自“补加水至1.0mL”起，除加盐酸与加碱性羟胺的次序颠倒外，同法操作，用作对应的空白对照。在波长540nm处测定吸光度值。以标准管中对照品溶液的含量(mmol)对应其吸光度值作直线回归。
吸取供试品溶液(有效量伤寒联合疫苗的透析液)1.0mL置试管中，同法操作；另吸取供试品溶液1mL置10mL试管中，与对照品溶液空白对照同法操作，用作供试品的空白对照。将供试品吸光度代入直线回归方程，计算出供试品溶液的O-乙酰基含量(mmol/L)。
实施例4-多糖回收率的确定
1.O-SP多糖回收率：将O-SP多糖及O-SP多糖上清液浓度稀释至标准曲线的浓度范围内，按照O-SP多糖含量的测定蒽酮法与供试品同步测定吸光度，将多糖及多糖上清吸光度代入直线回归方程，计算出多糖及多糖上清的O-SP多糖含量(μg/ml)，将计算的含量分别乘以对应的稀释倍数为最终浓度，多糖回收率计算：[多糖原液上清多糖含量×(取样量体积+饱和醋酸钠体积)÷(多糖原液多糖含量×取样量体积)]×酚提后上清透析后体积V2(ml)÷酚提后上清透析前体积V1(ml)×100％，多糖回收率应80.0～100.0％为试验有效。
2.伤寒Vi多糖回收率：将伤寒Vi多糖及Vi多糖上清浓度稀释至标准曲线浓度范围内，按照O-乙酰基含量的测定与供试品同步测定吸光度，将多糖及多糖上清吸光度代入直线回归方程，计算出多糖及多糖上清的O-乙酰基含量(mmol/L)，将计算的含量分别乘以对应的稀释倍数为最终浓度，多糖回收率计算：多糖回收率计算：[多糖原液上清O-乙酰基含量×(取样量体积+饱和醋酸钠体积)÷(多糖原液O-乙酰基含量×取样量体积)]×酚提后上清透析后体积V2(ml)÷酚提后上清透析前体积V1(ml)×100％，多糖回收率应80.0～100.0％为试验有效。
上文已对基本概念做了描述，显然，对于本领域技术人员来说，上述详细披露仅仅作为示例，而并不构成对本申请的限定。虽然此处并没有明确说明，本领域技术人员可能会对本申请进行各种修改、改进和修正。该类修改、改进和修正在本申请中被建议，所以该类修改、改进、修正仍属于本申请示范实施例的精神和范围。
同时，本申请使用了特定词语来描述本申请的实施例。如“一个实施例”、“一实施例”、和/或“一些实施例”意指与本申请至少一个实施例相关的某一特征、结构或特点。因此，应强调并注意的是，本说明书中在不同位置两次或多次提及的“一个实施例”、“一实施例”或“一个替代性实施例”并不一定是指同一实施例。此外，本申请的一个或多个实施例中的某些特征、结构或特点可以进行适当的组合。
同理，应当注意的是，为了简化本申请披露的表述，从而帮助对一个或多个发明实施例的理解，前文对本申请实施例的描述中，有时会将多种特征归并至一个实施例、附图或对其的描述中。但是，这种披露方法并不意味着本申请对象所需要的特征比权利要求中提及的特征多。实际上，实施例的特征要少于上述披露的单个实施例的全部特征。
一些实施例中使用了描述成分、属性数量的数字，应当理解的是，此类用于实施例描述的数字，在一些示例中使用了修饰词“大约”、“近似”或“大体上”来修饰。除非另外说明，“大约”、“近似”或“大体上”表明所述数字允许有±20％的变化。相应地，在一些实施例中，说明书和权利要求中使用的数值参数均为近似值，该近似值根据个别实施例所需特点可以发生改变。在一些实施例中，数值参数应考虑规定的有效数位并采用一般位数保留的方法。尽管本申请一些实施例中用于确认其范围广度的数值域和参数为近似值，在具体实施例中，此类数值的设定在可行范围内尽可能精确。
针对本申请引用的每个专利、专利申请、专利申请公开物和其他材料，如文章、书籍、说明书、出版物、文档等，特此将其全部内容并入本申请作为参考。与本申请内容不一致或产生冲突的申请历史文件除外，对本申请权利要求最广范围有限制的文件(当前或之后附加于本申请中的)也除外。需要说明的是，如果本申请附属材料中的描述、定义、和/或术语的使用与本申请所述内容有不一致或冲突的地方，以本申请的描述、定义和/或术语的使用为准。
最后，应当理解的是，本申请中所述实施例仅用以说明本申请实施例的原则。其他的变形也可能属于本申请的范围。因此，作为示例而非限制，本申请实施例的替代配置可视为与本申请的教导一致。相应地，本申请的实施例不仅限于本申请明确介绍和描述的实施例。

Claims (10)

1.一种测定伤寒联合疫苗中多糖的含量的方法，其特征在于，所述方法包括：
确定预设量伤寒联合疫苗中的干扰多糖的干扰含量；
基于所述干扰糖的干扰含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第一O-乙酰基含量；
利用O-乙酰基测定法确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第二O-乙酰基含量；
基于所述第一O-乙酰基含量以及所述第二O-乙酰基含量确定目标O-乙酰基含量；
基于所述目标O-乙酰基含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的目标多糖的目标含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标多糖包括Vi多糖，确定所述Vi多糖的目标含量，包括：
获取第一预设比例；
基于所述第一预设比例以及所述目标O-乙酰基含量，确定所述Vi多糖的目标含量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述目标O-乙酰基含量为所述第一O-乙酰基含量与所述第二O-乙酰基含量之间的差值。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干扰多糖包括O-SP多糖，所述干扰多糖的干扰含量包括O-SP多糖含量；所述确定预设量伤寒联合疫苗中的干扰糖的干扰含量，包括：
透析所述预设量伤寒联合疫苗，获取透析液；
利用蒽酮法确定所述透析液中的O-SP多糖含量。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述基于所述干扰多糖的干扰含量确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第一O-乙酰基含量，包括：
获取第二预设比例；
基于所述第二预设比例以及所述O-SP多糖含量，确定所述第一O-乙酰基含量。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述利用O-乙酰基测定法确定所述预设量伤寒联合疫苗中的第二O-乙酰基含量，包括：
利用O-乙酰基测定法确定所述透析液中的第二O-乙酰基含量。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标多糖包括Vi游离多糖，确定所述Vi游离多糖的含量，包括：
获取所述预设量伤寒联合疫苗中的第三O-乙酰基含量；
至少基于所述第三O-乙酰基含量以及所述目标O-乙酰基含量，确定所述Vi游离多糖的含量。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述干扰多糖包括O-SP游离多糖，所述干扰多糖的干扰含量包括O-SP游离多糖含量；所述获取第三O-乙酰基含量，包括：
透析所述预设量伤寒联合疫苗，获取透析液；
取一部分透析液进行苯酚制样，获取上清液；
利用蒽酮法确定所述上清液中的O-SP游离多糖含量；
基于所述O-SP游离多糖含量确定第四O-乙酰基含量；
利用O-乙酰基测定法确定所述上清液中的第五O-乙酰基含量；
基于所述第四O-乙酰基含量以及所述第五O-乙酰基含量确定所述第三O-乙酰基含量。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第三O-乙酰基含量为所述第四O-乙酰基含量与所述第五O-乙酰基含量之间的差值。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述确定所述Vi游离多糖的含量，包括：
获取多糖回收率；
至少基于所述多糖回收率、所述第三O-乙酰基含量以及所述目标O-乙酰基含量，确定所述Vi多糖的目标含量。
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