CN113891889A - 作为衣壳组装调节剂的二氮杂卓酮衍生物 - Google Patents

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Abstract

披露了用于治疗受HBV CAM的影响的疾病、综合征、病症和障碍的化合物、组合物和方法。此类化合物由如以下式(I)表示，其中R1、R2、R3、X和R4在本文中定义。

Description

作为衣壳组装调节剂的二氮杂卓酮衍生物
技术领域
本披露涉及新颖的二氮杂卓酮化合物、包含这些化合物的药物组合物、用于制备这些化合物的化学方法、及其在治疗与动物(特别是人)中HBV感染相关的疾病中的用途。
背景技术
慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是重大的全球健康问题，影响超过5％的世界人口(全球超过3.5亿人，美国有125万人)。
尽管有预防性HBV疫苗可供使用，但慢性HBV感染的负担仍然是重大的未得到满足的全球医学问题，原因是发展中国家大多数地区的治疗选择并不理想，而且新感染率持续不变。目前的治疗不能治愈，并仅限于两类药剂(干扰素α和核苷类似物/病毒聚合酶抑制剂)；抗药性、疗效低和耐受性问题限制了其影响。HBV的治愈率低至少部分归因于用单一抗病毒剂难以完全遏制病毒产生的事实。然而，持续遏制HBV DNA减缓了肝脏疾病的进展并有助于预防肝细胞癌。目前HBV感染患者的治疗目标是将血清HBV DNA降至低水平或不可检测水平，并最终减少或预防肝硬化和肝细胞癌的发展。
HBV衣壳蛋白在病毒的生命周期中起着重要的作用。HBV衣壳/核心蛋白形成亚稳病毒颗粒或蛋白质壳，其在细胞间传代期间保护病毒基因组，并还在病毒复制过程中发挥核心作用，包括基因组衣壳化、基因组复制和病毒体形态发生和外出。衣壳结构还对环境提示作出反应，以便在病毒进入后允许不包被。一致地，已经发现衣壳组装和拆卸的适当时机、适当的衣壳稳定性和核心蛋白的功能对于病毒感染性是至关重要的。
HBV衣壳蛋白的关键功能对病毒衣壳蛋白序列施加了严格的进化约束，导致观察到低序列可变性和高保守性。一致地，HBV衣壳中破坏其组装的突变是致命的，并且扰动衣壳稳定性的突变会严重减弱病毒的复制。对多功能HBV核心/衣壳蛋白的高功能约束与高序列保守性一致，因为许多突变对功能有害。实际上，核心/衣壳蛋白序列在HBV基因型中的一致性>90％，并且仅显示少量的多态性残基。因此，可能很难选择对HBV核心/衣壳蛋白结合化合物的抗性选择，而不会对病毒复制适应性产生重大影响。
报道描述了结合病毒衣壳和抑制HIV、鼻病毒和HBV复制的化合物，为病毒衣壳蛋白作为抗病毒药物靶点的概念提供了强有力的药理学证据。
本领域需要可增加对病毒产生的遏制并可治疗、改善和/或预防HBV感染的治疗剂。将此类治疗剂作为单一疗法或与其他HBV治疗或辅助治疗组合施用至HBV感染患者将导致显著降低的病毒载量、改善的预后、减少的疾病进展和增强的血清转化率。
鉴于HBV的临床重要性，鉴定可增加遏制病毒产生的化合物以及可治疗、改善和/或预防HBV感染的化合物代表了开发新的治疗剂的有吸引力的途径。本文提供了此类化合物。
发明内容
本披露涉及本文所附独立权利要求和从属权利要求分别限定的一般和优选的实施例，将其通过引用并入本文。特别地，本披露涉及具有式(I)的化合物：
Figure BDA0003377518150000031
以及具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐、立体异构体、同位素变体、N-氧化物或溶剂化物；
其中
R1是C6-10芳基或5或6元杂芳基，其中R1任选地被选自以下的取代基取代：甲基或氟；
R2独立地选自由以下组成的组：氢和C1-6烷基；
R3选自由以下组成的组：Cl、CN和C1-4卤代烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、羟基、氟和甲基；并且
X是CF或N。
或其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐形式。
另外的实施例包括具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐、具有式(I)的化合物的药学上可接受的前药、具有式(I)的化合物的药学活性代谢物、以及具有式(I)的化合物的对映异构体和非对映异构体，以及其药学上可接受的盐。
在实施例中，具有式(I)的化合物是选自以下具体实施方式中所述或者例证说明的那些种类的化合物。
本披露还涉及包含一种或多种具有式(I)的化合物、具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐、具有式(I)的化合物的药学上可接受的前药以及具有式(I)的药学活性代谢物的药物组合物。药物组合物可以进一步包含一种或多种药学上可接受的赋形剂或一种或多种其他的药剂或疗法。
本披露还涉及具有式(I)的化合物的使用方法或用途。在实施例中，具有式(I)的化合物用于治疗或改善乙型肝炎病毒(HBV)感染、增加对HBV产生的遏制、干扰HBV衣壳组装或其他HBV病毒复制步骤或HBV产物。所述方法包括向需要这样的方法的受试者施用有效量的至少一种具有式(I)的化合物、具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐、具有式(I)的化合物的药学上可接受的前药以及具有式(I)的化合物的药学活性代谢物。治疗方法的另外的实施例在具体实施方式中进行了阐述。
本披露的目的是克服或改善常规方法和/或现有技术的缺点中的至少一种或者提供其有用的可替代方法。根据以下具体实施方式和通过所披露的主题的实践，本披露的另外实施例、特征和优点将是显而易见的。
具体实施方式
根据这样的披露的以下具体实施方式和通过其实践，本披露的主题的另外的实施例、特征和优点将是显而易见的。为了简短起见，在本说明书中引用的出版物(包括专利)通过引用并入本文。
本文提供了具有式(I)的化合物及其药学上可接受的盐、药学上可接受的前药以及所披露化合物的药学活性代谢物。
在一方面，本文提供了具有式(I)的化合物、及其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素变体、N-氧化物或溶剂化物，
Figure BDA0003377518150000041
其中
R1是C6-10芳基或5或6元杂芳基，其中R1任选地被选自甲基或氟的取代基取代；
R2独立地选自由以下组成的组：氢和C1-6烷基；
R3选自由以下组成的组：Cl、CN和C1-4卤代烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、羟基、氟和甲基；并且
X是CF或N。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R1独立地选自以下项的化合物：1H-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、1H-四唑-5-基、1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-5-基、或苯基。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R2选自氢或甲基的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R3是Cl、CN、或C1-4卤代烷基的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中X是CF的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中X是N的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是这样的化合物，其中
Figure BDA0003377518150000051
是3-氰基-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、或4-氟-3-三氟甲基苯基。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R4是氢、羟基、或氟的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R4是氢的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R4是羟基的化合物。
在实施例中，具有式(I)的化合物是其中R4是氟的化合物。
本披露的另一个实施例是如下所示的化合物：
表1.
Figure BDA0003377518150000061
Figure BDA0003377518150000071
Figure BDA0003377518150000081
Figure BDA0003377518150000091
Figure BDA0003377518150000101
Figure BDA0003377518150000111
及其药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物。
药物组合物
本文还披露了药物组合物，其包含
(A)至少一种具有式(I)的化合物：
Figure BDA0003377518150000112
其中
R1是C6-10芳基或5或6元杂芳基，其中R1任选地被选自甲基或氟的取代基取代；
R2独立地选自由以下组成的组：氢和C1-6烷基；
R3选自由以下组成的组：Cl、CN和C1-4卤代烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、羟基、氟和甲基；并且
X是CF或N；
以及具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐、立体异构体、同位素变体、N-氧化物或溶剂化物；以及
(B)至少一种药学上可接受的赋形剂。
本披露的一个实施例是药物组合物，所述药物组合物包含至少一种药学上可接受的赋形剂和至少一种表1中所列的化合物，以及这样的化合物的任何药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物，或这样的化合物的任何药学上可接受的前药，或这样的化合物的任何药学活性代谢物。
在实施例中，药物组合物包含至少一种另外的活性剂或治疗剂。另外的活性治疗剂可以包括例如抗HBV剂(如HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、免疫调节剂(如TLR-激动剂)、或影响HBV生命周期和/或HBV感染的后果的任何其他药剂)。本披露的活性剂单独或者与一种或多种另外的活性剂组合用于配制本披露的药物组合物。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指可用于本披露的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物向患者或受试者施用。本领域存在多种施用化合物的技术，这些技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部和局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或载体，如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或囊封材料，这些材料涉及将可用于本披露的化合物在患者体内载运或输送或载运或输送到患者体内，使得它可以发挥预期功能。典型地，此类构建体从身体的一个器官或部分载运或输送到身体的另一个器官或部分。每种载体在与配制品的其他成分(包括可用于本披露的化合物)相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及药物配制品中使用的其他无毒相容物质。
如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与可用于本披露的化合物的活性相容并对于患者来说在生理上是可接受的任何和所有的涂层剂、抗细菌剂和抗真菌剂以及吸收延迟剂等。补充活性化合物也可以掺入组合物中。“药学上可接受的载体”可以进一步包括可用于本披露的化合物的药学上可接受的盐。可以包括在用于实践本披露的药物组合物中的其他另外成分在本领域是已知的，并例如描述于Remington's PharmaceuticalSciences[雷明顿药物科学](Genaro编辑,Mack Publishing Co.[马克出版公司],1985,伊斯顿,宾夕法尼亚州)，将其通过引用并入本文。
“药学上可接受的赋形剂”是指无毒的、生物学耐受的以及生物学上适于施用至受试者的物质(如惰性物质)，将其添加到药理学组合物中，或者用作媒介物、载体或者稀释剂以促进药剂的施用并且与之相容。赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
含有一个或者多个活性剂剂量单位的药物组合物的递送形式可以使用适合的药物赋形剂和本领域技术人员已知或者可以获得的混合技术制备。在本发明方法中，组合物可以通过适合的递送途径施用，例如口服、肠胃外、直肠、局部或者经眼途径或者通过吸入施用。
所述制剂可以为片剂、胶囊、小袋、糖锭、粉剂、粒剂、锭剂、重构粉剂、液体制剂或者栓剂的形式。优选地，组合物配制用于静脉内输注、局部施用或者口服施用。
对于口服施用，可以将本披露化合物提供为片剂或者胶囊的形式，或者为溶液、乳液或者混悬液的形式。为制备口服组合物，可对化合物进行配制，以产生例如从约0.05至约100mg/kg/天、或从约0.05至约35mg/kg/天、或从约0.1至约10mg/kg/天的剂量。例如，通过每天一次、两次、三次或四次给药可实现每天约5mg至5g的每日总剂量。
口服片剂可以包括与药学上可接受的赋形剂混合的根据本披露的化合物，所述药学上可接受的赋形剂如惰性稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨醇等。液体口服赋形剂的例子包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟基乙酸淀粉钠、微晶纤维素和藻酸是合适的崩解剂。粘合剂可以包括淀粉和明胶。润滑剂(如果存在的话)可以是硬脂酸镁、硬脂酸或者滑石。如果需要，片剂可用如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的材料进行包衣，以延缓在胃肠道中的吸收，或可用肠溶包衣进行包衣。
用于口服施用的胶囊包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊。为了制备硬明胶胶囊，可以将本披露的化合物与固体、半固体或者液体稀释剂混合。可通过将本披露的化合物与水、油(如花生油或橄榄油)、液体石蜡、短链脂肪酸单甘油酯和短链脂肪酸双甘油酯的混合物、聚乙二醇400、或丙二醇混合来制备软胶囊。
口服施用的液体可以呈悬浮液、溶液、乳液或糖浆的形式，或可以被冻干或在使用前以用水或其他合适的媒介物重构的干燥产品的形式呈现。这样的液体组合物可以任选含有：药学上可接受的赋形剂，如悬浮剂(例如，山梨醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝明胶等)；非水性媒介物，例如油(例如，杏仁油或者分馏椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或者对羟基苯甲酸丙酯，或者山梨酸)；湿润剂，如卵磷脂；以及调味剂和着色剂(如果需要)。
本披露的活性剂还可以通过非口服途径施用。例如，可将组合物配制成栓剂用于直肠施用。对于肠胃外施用，包括静脉内、肌内、腹膜内或者皮下途径，可以将本披露的化合物提供在缓沖至适当pH和等渗性的无菌水性溶液或者悬浮液中或者提供在肠胃外可接受的油中。适合的水性媒介物包括林格氏溶液和等渗氯化钠。此类形式将以单位剂量形式(如安瓿或一次性注射装置)、以多剂量形式(如从中可取出合适的剂量的小瓶)、或以可用于制备可注射配制品的固体形式或预浓缩物存在。与药用载体经从几分钟至几天范围内的时间段混合的示例性输注剂量可以在从约1至1000μg/kg/分钟范围内的化合物。
对于局部施用，化合物可以在约0.1％至约10％(药物比载体)的浓度与药用载体混合。本披露化合物的另一种施用模式可利用贴片配制品来影响透皮递送。
可替代地，在本披露的方法中，本披露的化合物可以经鼻或口服途径(例如以还含有适合载体的喷雾配制品形式)吸入施用。
使用方法
所披露的化合物可用于治疗和预防受试者(如人受试者)中的HBV感染。
在非限制性方面，这些化合物可以(i)调节或破坏HBV组装和HBV复制或感染颗粒产生所必需的其他HBV核心蛋白功能，(ii)抑制感染性病毒颗粒的产生或感染，或(iii)与HBV衣壳相互作用，以影响作为衣壳组装调节剂的感染性或复制能力降低的缺陷病毒颗粒。特别地，并且在不受任何特定作用机制束缚的情况下，据信所披露的化合物通过破坏、加速、减少、延迟和/或抑制正常病毒衣壳的组装和/或不成熟或成熟颗粒的拆卸从而诱导异常的衣壳形态导致抗病毒作用(如破坏病毒体的组装和/或拆卸、病毒体成熟、病毒的外出和/或靶细胞的感染)而在HBV治疗中是有用的。所披露的化合物可以作为衣壳组装的干扰剂与成熟或不成熟病毒衣壳相互作用以扰动衣壳的稳定性，从而影响其组装和/或拆卸。所披露的化合物可以扰动病毒衣壳的稳定性、功能和/或正常形态所需的蛋白质折叠和/或盐桥，从而破坏和/或加速衣壳的组装和/或拆卸。所披露的化合物可结合衣壳并改变细胞多蛋白和前体的代谢，导致蛋白质单体和/或低聚物和/或异常颗粒的异常积聚，这引起经感染的细胞的细胞毒性和死亡。所披露的化合物可以引起最佳稳定性衣壳形成的失败，影响病毒的有效脱壳和/或拆卸(例如，在感染期间)。当衣壳蛋白未成熟时，所披露的化合物可以破坏和/或加速衣壳组装和/或拆卸。当衣壳蛋白成熟时，所披露的化合物可以破坏和/或加速衣壳组装和/或拆卸。所披露的化合物可以在病毒感染期间破坏和/或加速衣壳组装和/或拆卸，这可进一步减弱HBV病毒感染性和/或降低病毒载量。所披露的化合物对衣壳组装和/或拆卸的破坏、加速、抑制、延迟和/或减少可以将病毒从宿主生物体中根除。通过所披露的化合物从受试者中根除HBV有利地消除慢性长期治疗的需要和/或减少长期治疗的持续时间。
本披露的另一个实施例是治疗患有HBV感染的受试者的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的受试者施用有效量的至少一种具有式(I)的化合物。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的与HBV感染相关的病毒载量的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染复发的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了抑制或减少有需要的个体的含HBV DNA颗粒或含HBVRNA颗粒的形成或存在的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染不良生理影响的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了诱导有需要的个体的HBV感染肝损伤缓解的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了预防性地治疗有需要的个体的HBV感染的方法，其中所述个体患有潜伏性HBV感染，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在实施例中，所披露的化合物适用于单一疗法。在实施例中，所披露的化合物有效的抵抗天然的或自然的HBV菌株。在实施例中，所披露的化合物有效地针对对目前已知药物有抗性的HBV菌株。
在另一个实施例中，本文提供的化合物可以用于调节(例如抑制或破坏)HBVcccDNA的活性、稳定性、功能和病毒复制特性的方法中。
在又另一个实施例中，本披露的化合物可以用于削弱或预防HBV cccDNA的形成的方法中。
在另一个实施例中，本文提供的化合物可以用于调节(例如抑制或破坏)HBVcccDNA活性的方法中。
在又另一个实施例中，本披露的化合物可以用于削弱HBV cccDNA的形成的方法中。
在另一个实施例中，所披露的化合物可以用于调节、抑制或破坏HBV RNA颗粒从感染细胞内产生或释放的方法中。
在另一实施例中，对HBV RNA颗粒的总负担(或浓度)进行了调节。在优选实施例中，削弱了HBV RNA的总负担。
在另一个实施例中，与施用选自下组的化合物相比，本文提供的方法以更大的程度或以更快的速度减少所述个体的病毒载量，该组由以下组成：HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同的衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物、及其任何组合。
在另一个实施例中，与施用选自下组的化合物相比，本文提供的方法使得病毒突变和/或病毒抗性的发生率更低，该组由以下组成：HBV聚合酶抑制剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、不同的衣壳组装调节剂、不同或未知机制的抗病毒化合物、及其组合。
在另一个实施例中，本文提供的方法进一步包括向所述个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。
在一个方面，本文提供了治疗有需要的个体中HBV感染的方法，该方法包括通过以下方式减少HBV病毒载量：向该个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，单独地或与逆转录酶抑制剂组合；并且向所述个体进一步施用治疗有效量的HBV疫苗。
本披露的另一个实施例是治疗患有HBV感染的受试者的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的受试者施用有效量的至少一种具有式(I)的化合物。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的与HBV感染相关的病毒载量的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染复发的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了抑制或减少有需要的个体的含HBV DNA颗粒或含HBVRNA颗粒的形成或存在的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染不良生理影响的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了诱导有需要的个体的HBV感染肝损伤缓解的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了减少有需要的个体的HBV感染的长期抗病毒疗法的生理影响的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了预防性地治疗有需要的个体的HBV感染的方法，其中所述个体患有潜伏性HBV感染，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在实施例中，本文提供的方法进一步包括监测受试者的HBV病毒载量，其中将所述方法进行一段时间，使得HBV病毒不可检测。
组合
本文提供了一种或多种所披露的化合物与至少一种另外的治疗剂的组合。在实施例中，本文提供的方法可以进一步包括向所述个体施用至少一种另外的治疗剂。在实施例中，所披露的化合物适用于在组合疗法中使用。本披露的化合物可以与可用于治疗HBV感染的一种或多种另外的化合物组合使用。这些另外的化合物可以包含本披露的化合物或已知用于治疗、预防或减少HBV感染的症状或影响的化合物。
在示例性实施例中，另外的活性成分是已知的或被发现在治疗涉及HBV感染的病症或障碍中有效的那些成分，如另一种HBV衣壳组装调节剂或针对与涉及HBV感染的特定病症或障碍、或HBV感染本身相关的另一靶标的活性化合物。所述组合可以用于增强疗效(例如，通过将化合物包括在组合中增强根据本披露的活性剂的效力或者有效性)、减少一种或者多种副作用或者减少根据本披露的活性剂的所需剂量。在另一实施例中，与在预防性地治疗有需要的个体的HBV感染中获得相似结果所需的至少一种另外的治疗剂的单独施用相比，本文提供的方法允许以更低的剂量或频率施用至少一种另外的治疗剂。
此类化合物包括但不限于HBV复方药物、HBV疫苗、HBV DNA聚合酶抑制剂、免疫调节剂、toll样受体(TLR)调节剂、干扰素α受体配体、透明质酸酶抑制剂、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制剂、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(ipi4)抑制剂、亲环蛋白抑制剂、HBV病毒进入抑制剂、反义寡核苷酸靶向病毒mRNA、短干扰RNA(siRNA)和ddRNAi内切核酸酶调节剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂、HBV E抗原抑制剂、共价闭合环状DNA(cccDNA)抑制剂、类法尼醇X受体激动剂、HBV抗体、CCR2趋化因子拮抗剂、胸腺肽激动剂、细胞因子、核蛋白调节剂、维甲酸诱导基因1刺激因子、NOD2刺激因子、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂、吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)途径抑制剂、PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂、重组胸腺肽α-1、布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、KDM抑制剂、HBV复制抑制剂、精氨酸酶抑制剂以及影响HBV生命周期和/或影响HBV感染的后果的任何其他药剂或其组合。
在实施例中，本披露的化合物可以与以下项组合使用：HBV聚合酶抑制剂、免疫调节剂、干扰素如聚乙二醇化干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、亲环蛋白/TNF抑制剂、免疫调节剂如TLR-激动剂、HBV疫苗以及影响HBV生命周期和/或影响HBV感染的后果的任何其他药剂或其组合。
特别地，本披露的化合物可以与一种或多种选自由以下组成的组的药剂(或其盐)组合使用：
HBV逆转录酶抑制剂、及DNA和RNA聚合酶抑制剂，包括但不限于：拉米夫定(3TC、Zeffix、Heptovir、Epivir和Epivir-HBV)、恩替卡韦(Baraclude、Entavir)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)(Hepsara、Preveon、双-POM PMEA)、替诺福韦富马酸酯(tenofovirdisoproxil fumarate)(Viread、TDF或PMPA)；
干扰素，包括但不限于干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)、和干扰素γ(IFN-γ)；
病毒进入抑制剂；
病毒成熟抑制剂；
文献描述的衣壳组装调节剂，如但不限于BAY 41-4109；
逆转录酶抑制剂；
免疫调节剂，如TLR激动剂；以及
不同或未知机制的药剂，如但不限于AT-61((E)-N-(1-氯-3-氧代-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-氧代-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲酰胺)和类似的类似物。
在实施例中，另外的治疗剂是干扰素。术语“干扰素”或“IFN”是指抑制病毒复制和细胞增殖并调节免疫应答的高度同源物种特异性蛋白的家族中的任何成员。人干扰素分为三类：I型，其包括干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)和干扰素-ω(IFN-ω)；II型，其包括干扰素-γ(IFN-γ)；和III型，其包括干扰素-λ(IFN-λ)。如本文所用的术语“干扰素”包括已经开发并且可商购的干扰素的重组形式。如本文所用的术语“干扰素”也包括干扰素的亚型，如化学修饰或突变的干扰素。化学修饰的干扰素包括聚乙二醇化干扰素和糖基化干扰素。干扰素的实例还包括但不限于干扰素-α-2a、干扰素-α-2b、干扰素-α-n1、干扰素-β-1a、干扰素-β-1b、干扰素-λ-1、干扰素-λ-2和干扰素-λ-3。聚乙二醇化干扰素的实例包括聚乙二醇化干扰素-α-2a和聚乙二醇化干扰素α-2b。
因此，在一个实施例中，具有式I(包括IA和IB)的化合物可以与选自由以下组成的组的干扰素组合施用：干扰素α(IFN-α)、干扰素β(IFN-β)、干扰素λ(IFN-λ)和干扰素γ(IFN-γ)。在一个具体实施例中，干扰素是干扰素-α-2a、干扰素-α-2b或干扰素-α-n1。在另一个具体实施例中，干扰素-α-2a或干扰素-α-2b是聚乙二醇化的。在一个优选实施例中，干扰素-α-2a是聚乙二醇化干扰素-α-2a(PEGASYS)。
在另一个实施例中，另外的治疗剂选自免疫调节剂或免疫刺激剂疗法，其包括属于干扰素类别的生物药剂。
此外，另外的治疗剂可以是破坏HBV复制或持久性所需的其他一种或多种必需病毒蛋白或宿主蛋白的功能的药剂。
在另一个实施例中，另外的治疗剂是阻断病毒进入或成熟或靶向HBV聚合酶的抗病毒剂，如核苷或核苷酸或非核苷(核苷酸)聚合酶抑制剂。在组合疗法的另一实施例中，逆转录酶抑制剂和/或DNA和/或RNA聚合酶抑制剂是齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平(Atevirapine)、病毒唑、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林。
在一个实施例中，另外的治疗剂是免疫调节剂，其诱导天然的有限的免疫应答，导致诱导针对不相关病毒的免疫应答。换句话说，免疫调节剂可以影响抗原呈递细胞的成熟、T细胞的增殖和细胞因子释放(例如，IL-12、IL-18、IFN-α、IFN-β和IFN-γ及TNF-α等)。
在另一实施例中，另外的治疗剂是TLR调节剂或TLR激动剂，如TLR-7激动剂或TLR-9激动剂。在组合疗法的另外的实施例中，TLR-7激动剂选自由以下组成的组：SM360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-吗啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。
在本文提供的任何方法中，所述方法可进一步包括向所述个体施用至少一种HBV疫苗、核苷HBV抑制剂、干扰素或其任何组合。在一个实施例中，HBV疫苗是RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B或SHANVAC B中的至少一种。
在另一个方面，本文提供了治疗有需要的个体的HBV感染的方法，所述方法包括通过以下方式减少HBV病毒载量：向所述个体施用治疗有效量的本披露的化合物，单独地或与逆转录酶抑制剂组合；并且向所述个体进一步施用治疗有效量的HBV疫苗。逆转录酶抑制剂可以是齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平、病毒唑、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉夫定或依曲韦林中的一种。
对于本文描述的任何组合疗法，可以使用合适的方法计算协同效应，例如，Sigmoid-Emax方程(Holford和Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.[临床药物动力学]6:429-453)、Loewe可加性方程(Loewe和Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.[实验病理学与药理学档案]114:313-326)和median-effect方程(Chou和Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.[酶调控研究进展]22:27-55)。上文提到的每个方程都可以应用于实验数据，以生成相应的图表以帮助评估药物组合的效果。与上述方程相关的对应图表分别是浓度-效应曲线、等效线图曲线和联合指数曲线。
定义
下文列出了用于描述本披露的各个术语的定义。除非另外限定于具体的情况，无论单独的还是作为一个更大的基团的一部分，这些定义适用于整个说明书和权利要求书中使用的所述术语。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语通常具有与可应用领域普通技术人员通常所理解的相同的含义。通常，本文使用的命名法和细胞培养、分子遗传学、有机化学和肽化学中的实验室程序是本领域众所周知且常用的那些。
如本文所用，冠词“一个/种(a和an)”是指一个/种或多于一个/种(即，至少一个/种)所述冠词的语法宾语。举例来说，“一个元素”意指一个元素或多于一个元素。此外，术语“包括(including)”以及其他形式如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。
如本说明书和权利要求书中所用，术语“包含(comprising)”可以包括实施例“由……组成”和“基本上由……组成”。如本文所用，术语“包含(comprise(s))”、“包括(include(s))”、“具有(having和has)”、“可以(can)”、“含有(contain(s))”及其变体意指要求命名的成分/步骤的存在并且允许其他成分/步骤的存在的开放性的过渡短语、术语、或词语。然而，此类描述应被理解为，也将组合物或方法描述为“由以下组成”和“基本上由以下组成”：列举的化合物，这允许仅存在命名的化合物、伴随任何药学上可接受的载体、以及排除其他化合物。本文披露的所有范围都包括列举的端点，并且独立地可组合(例如，“从50mg至300mg”的范围包括端点50mg和300mg，以及所有中间值)。本文披露的范围的端点和任何值都不限于精确范围或值；它们不是足够精确的，从而包括接近这些范围和/或值的值。
如本文所用，可以将近似的语言应用于修饰可以变化而不导致其相关基本功能的改变的任何定量表示。因此，在一些情况下，由一个或多个术语如“基本上”修饰的值不能限制为指定的精确值。在至少一些实例中，近似的语言可以对应于用于测量该值的仪器的精确度。
术语“烷基”是指在链中具有1至12个碳原子的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基(Me，其还可以由符号“/”在结构上表示)、乙基(Et)、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基、和根据本领域的普通技术人员和本文提供的观点被认为等同于任何上述实例中的任一项的基团。如本文所用的术语C1-4烷基是指在链中具有1至4个碳原子的直链或者支链烷基基团。如本文所用的术语C1-6烷基是指在链中具有1至6个碳原子的直链或者支链烷基基团。
术语“芳基”是指6至10个碳原子的不饱和芳香族单环或双环。芳基环的实例包括苯基和萘基。
术语“杂芳基”是指具有5至10个环成员并含有碳原子和从1至4个独立地选自N、O和S的杂原子的芳香族单环或双环芳香族环系统。术语杂芳基中包括具有5或6个成员的芳香族环，其中该环由碳原子组成并且具有至少一个杂原子成员。合适的杂原子包括氮、氧和硫。在5元环的情况下，杂芳基环优选包含氮、氧或硫中的一个，以及另外最多3个氮。在6元环的情况下，杂芳基环优选包含从1至3个氮原子。对于6元环具有3个氮的情况，至多2个氮原子是相邻的。杂芳基的实例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。除非另有说明，否则杂芳基在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处连接至其侧基。本领域技术人员将认识到，以上列举或者阐述的杂芳基基团种类并非详尽的，还可以在这些定义的术语范围内选择另外种类。
术语“卤素”或“卤基”是指氟、氯、溴和碘原子。
术语“氰基”是指基团-CN。
术语“全卤代烷基”或“卤代烷基”是指在链中具有1至6个碳原子的直链或支链烷基基团，任选地用卤素取代氢。如本文所用的术语“C1-4卤代烷基”是指在链中具有1到4个碳原子的直链或支链烷基基团，任选地用卤素取代氢。如本文所用的术语“C1-6卤代烷基”是指在链中具有1到6个碳原子的直链或支链烷基基团，任选地用卤素取代氢。“全卤代烷基”、“卤代烷基”基团的实例包括三氟甲基(CF3)、二氟甲基(CF2H)、单氟甲基(CH2F)、五氟乙基(CF2CF3)、四氟乙基(CHFCF3)、单氟乙基(CH2CH2F)、三氟乙基(CH2CF3)、四氟三氟甲基乙基(-CF(CF3)2)、和根据本领域的普通技术人员和本文提供的观点被认为等同于任何上述实例中的任一项的基团。
术语“取代的”意指指定基团或部分中带有一个或者多个取代基。术语“未取代的”意指指定基团中不带有取代基。术语“任选地取代的”意指指定基团未被取代或者被一个或者多个取代基取代。在术语“取代的”用于描述结构系统时，意指取代发生在系统上任何化合价允许的位置上。在未明确注明指定部分或基团被任何指定取代基任选地取代或取代的情况下，应当理解这样的部分或基团意指未被取代的。
术语“对(para)”、“间(meta)”和“邻(ortho)”具有本领域所理解的含义。因此，例如，完全取代的苯基基团在与苯环附接点相邻的两个“邻”(o)位、两个“间”(m)位和横跨附接点的一个“对”(p)位处具有取代基。为了进一步阐明取代基在苯环上的位置，将两个不同的邻位指定为邻和邻'，并将两个不同的间位指定为间和间'，如下阐述。
Figure BDA0003377518150000261
当提及吡啶基基团上的取代基时，术语“对”、“间”和“邻”是指取代基相对于吡啶环的附接点的位置。例如，下面的结构被描述为3-吡啶基，其中X1取代基位于邻位，X2取代基位于间位，并且X3取代基位于对位：
Figure BDA0003377518150000262
为了提供更简洁的描述，本文给定的一些定量表达未用术语“约”限定。应当理解，无论是否明确地使用术语“约”，本文给出的每个量意指实际给出的值，并且还意指基于本领域普通技术人员合理推断的此类给定值的近似值，包括由于针对这样的给定值的实验和/或测量条件导致的等价值和近似值。任何时候当产率以百分比给出时，这样的产率是指相对于根据特定的化学计量条件可以获得相同实体的最大量给出产率的实体质量。以百分比给出的浓度，除非另外指明，是指质量比。
术语“缓冲的(buffered)”溶液或“缓冲(buffer)”溶液在本文中根据其标准含义可互换地使用。缓冲溶液用于控制介质的pH，并且其选择、用途和功能是本领域普通技术人员已知的。参见，例如，描述了(尤其是)缓冲溶液以及缓冲液成分的浓度与缓冲液的pH如何关联的G.D.Considine编辑,Van Nostrand’s Encyclopedia of Chemistry[范诺斯特兰化学百科全书],第261页,第5版(2005)。例如，通过将MgSO4和NaHCO3以10:1w/w的比率添加到溶液中，以将溶液的pH保持在约7.5，来获得缓冲溶液。
本文所给出的任何式旨在表示具有所述结构式描绘的结构及其某些变化或某些形式的化合物。特别地，本文所给出的任何式的化合物可具有不对称中心，并且因此以不同的对映异构体形式存在。通式化合物的所有旋光异构体及其混合物都认为在所述式的范围之内。因此，本文所给出的任何式旨在表示外消旋物、一种或多种对映异构体形式、一种或多种非对映异构体形式、一种或多种阻转异构体形式，及其混合物。此外，某些结构可以以几何异构体(即顺式和反式异构体)、互变异构体或阻转异构体存在。
也应该理解，具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序或者其原子在空间中的排列不同的化合物称为“异构体”。
彼此不成镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，并且彼此是不能重叠的镜像的立体异构体称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心，例如，所述不对称中心键合到四个不同的基团时，并且可能有一对对映异构体。对映异构体可以由其不对称中心的绝对构型来表征，并由Cahn和Prelog的R-和S-顺序规则来描述，或由分子旋转偏振光平面的方式来描述，并指定为右旋或左旋(即，分别被指定为(+)-或(-)-异构体)。手性化合物可以作为单独的对映异构体或作为其混合物存在。含有相同比例的对映异构体的混合物被称为“外消旋混合物”。
“互变异构体”是指是特定化合物结构的可互换形式并且在氢原子和电子位移方面不同的化合物。因此，两种结构可以通过π电子和原子(通常是H)的运动处于平衡。例如，烯醇和酮是互变异构体，因为它们通过用酸或碱的处理而快速地相互转化。另一互变异构的实例是苯基硝基甲烷的酸-和硝基-形式，所述实例同样地通过用酸或碱处理形成。
互变异构形式可以与获得目标化合物的最优化学反应性和生物活性相关。
本披露的化合物可以具有一个或多个不对称中心；因此，此类化合物可以作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或作为其混合物产生。
除非另有说明，说明书和权利要求书中特定化合物的描述或命名旨在包括单独的对映异构体及其外消旋混合物或其他混合物。立体化学的测定方法和立体异构体的分离方法在本领域中是众所周知的。
某些实例含有描绘为绝对对映异构体的化学结构，但旨在指示未知构型的对映异构体纯的物质。在这些情况下，在名称中用(R*)或(S*)指示对应立体中心的绝对立体化学是未知的。因此，指定为(R*)的化合物是指绝对构型为(R)或(S)的对映异构体纯的化合物。在绝对立体化学已被证实的情况下，使用(R)和(S)命名结构。
符号
Figure BDA0003377518150000281
和
Figure BDA0003377518150000282
用于意指本文所示化学结构中相同的空间排列。类似地，符号
Figure BDA0003377518150000283
和
Figure BDA0003377518150000284
用于意指本文所示化学结构中相同的空间排列。
另外，本文中给出的任何式也旨在提及此类化合物的水合物、溶剂化物和多晶型物及其混合物，即使此类形式未明确列出。某些具有式(I)的化合物或具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐，可以作为溶剂化物获得。溶剂化物包括由本披露化合物与一种或多种溶剂在溶液中或以固体或晶体形式相互作用或络合而形成的溶剂化物。在一些实施例中，所述溶剂是水并且溶剂化物是水合物。此外，某些具有式(I)的化合物的结晶形式或具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐可以作为共晶体获得。在本披露的某些实施例中，具有式(I)的化合物以结晶形式获得。在其他实施例中，具有式(I)的化合物的结晶形式本质上为立方体的。在其他实施例中，具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐以结晶形式获得。在仍其他实施例中，具有式(I)的化合物以几种多晶型中的一种、作为结晶形式的混合物、作为多晶型、或作为无定型形式获得。在其他实施例中，具有式(I)的化合物在溶液中在一种或多种结晶形式和/或多晶型之间转化。
在本文中涉及的化合物代表涉及以下任一种：(a)这样的化合物的实际列举形式，和(b)这样的化合物在介质中的任何形式，在命名时即已考虑所述化合物处于所述介质中。例如，本文中对如R-COOH的化合物的提及涵盖对例如以下任一项的提及：R-COOH(s)、R-COOH(sol)和R-COO- (sol)。在此实例中，R-COOH(s)是指固体化合物，因为其可例如存在于片剂或一些其它固体药物组合物或制剂中；R-COOH(sol)指化合物在溶剂中的非解离形式；而R-COO- (sol)是指化合物在溶剂中的解离形式，如化合物在水性环境中的解离形式，无论这样的解离形式是衍生自R-COOH、衍生自其盐、或衍生自在所考虑的介质中解离后产生的R-COO-的任何其他实体。在另一实例中，如“将实体暴露于具有式R-COOH的化合物”的表达是指将所述实体暴露于在进行这样的暴露的介质中存在的化合物R-COOH的一种或多种形式。在又另一个实例中，如“使实体与具有式R-COOH化合物反应”的表达是指，使(a)处于发生这样的反应的介质中存在的一种或多种化学相关形式的这样的实体与(b)处于发生这样的反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式的化合物R-COOH反应。在这方面，如果这样的实体例如处于水性环境中，应当理解，化合物R-COOH处于这样的相同介质中，并且因此使所述实体暴露于如R-COOH(aq)和/或R-COO- (aq)种类的介质中，其中下标“(aq)”根据其在化学和生物化学中的常规含义代表“水性”。在这些命名实例中选择了羧酸官能团；然而，这一选择并不旨在作为限制，而其仅是说明。应当理解，可以根据其它官能团提供类似的实例，包括但不限于羟基、碱性氮成员(如在胺中的那些)、和在含有化合物的介质中根据已知的方式相互作用或者转化的任何其它基团。此类相互作用和转化包括但不限于离解、缔合、互变异构、溶剂分解(包括水解)、溶剂化(包括水合)、质子化和去质子化。就此方面在本文中未进一步提供实例，这是因为这些在给定介质中的相互作用和转化对于任何本领域普通技术人员是已知的。
在另一实例中，通过参考已知形成两性离子的化合物，在本文中涵盖两性离子化合物，即使没有以其两性离子形式进行明确命名。如一种或多种两性离子及其同义词一种或多种两性离子化合物的术语是IUPAC认可的标准名称，这种名称是众所周知的，并且是定义的科学名称的标准集的一部分。就此方面，两性离子这个名称被生物学关联化学实体数据库(Chemical Entities of Biological Interest(ChEBI))的分子实体词典指定为名称标识CHEBI：27369。如通常所熟知，两性离子或者两性离子化合物是具有相反符号的形式单位电荷的中性化合物。有时，这些化合物参考术语“内盐”。其他来源将这些化合物称为“偶极离子”，虽然后面的术语被另一些其他来源认为是误称。作为具体的实例，氨基乙酸(即氨基甘氨酸)式为H2NCH2COOH，并且在一些介质中(在这个情况下是在中性介质中)以两性离子+H3NCH2COO-的形式存在。两性离子、两性离子化合物、内盐和偶极离子以这些术语的已知和充分确定含义落入本披露的范围内，在任何情形中本领域普通技术人员都应当如此理解。因为不必命名本领域普通技术人员会认识到的每一个实施例，因此本文中没有明确给出与本披露化合物相关的两性离子化合物的结构。但是其是本披露实施例的一部分。在此方面，本文中没有提供进一步的实例，因为在给定介质中导致给定化合物的各种形式的相互作用和转化是本领域任何普通技术人员已知的。
在本文中给出的任何式还旨在表示所述化合物的未标记形式以及同位素标记形式。除了一个或多个原子被具有选择的原子质量或原子数的原子替换外，同位素标记的化合物具有本文所给出的式描述的结构。可以掺入本披露的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯以及碘的同位素，如分别是2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、36Cl、125I。此类同位素标记的化合物可以用于代谢研究(优选14C)、反应动力学研究(具有，例如氘(即D或2H)；或氚(即T或3H))、包括药物或者底物组织分布测定的检测或者成像工艺(如正电子发射断层成象(PET)或者单-光子发射计算断层成象(SPECT))、或者患者的放射性治疗中。特别地，18F或11C标记的化合物可以特别优选地用于PET或SPECT的研究。此外，用较重的同位素如氘(即，2H)进行取代可以赋予由更好的代谢稳定性引起的某些治疗优势(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求)。本披露的同位素标记化合物及其前药通常可以通过进行以下方案或者实例中披露的程序、以及以下所述通过容易获得的同位素标记试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
当涉及本文给出的任何式时，从指定变量的可能种类列表中进行的特定的部分的选择并不旨在将在其它地方出现的所述变量的种类限定为相同选择。换言之，当变量出现不止一次时，除非另有说明，从指定列表中进行的种类选择独立于式中其它地方的相同变量的种类选择。
根据上述对赋值和命名进行的解释性说明，应当理解，在本文中对设定的明确涉及(其中在化学性质上有意义和除非另有说明)，暗示了独立地涉及这样的设定的实施例，和涉及所明确涉及的设定的子集的每种可能实施例。
通过关于取代基术语的第一实例，如果取代基S1 实例是S1和S2中的一个，并且取代基S2 实例是S3和S4中的一个，则这些分配是指根据以下选择给出的本披露的实施例：S1 实例是S1并且S2 实例是S3；S1 实例是S1并且S2 实例是S4；S1 实例是S2并且S2 实例是S3；S1 实例是S2并且S2 实例是S4；以及此类选择中每一个的等效物。为了简洁起见，本文相应地使用较短的术语“S1 实例是S1和S2中的一个，并且S2 实例是S3和S4中的一个”，但并非以限制的方式。在通用术语中所述的以上关于取代基术语的笫一实例旨在阐述各种在本文中所述的取代基赋值。本文中给出的用于取代基的上述规范在适用时延伸至如R1、R2、R3、R4、PG以及X以及本文中使用的任何其他通用取代基符号的成员。
此外，当将多于一种赋值给予任何成员或者取代基时，本披露的实施例包含可以由所列举的独立采用的赋值及其等价赋值构成的各种组合。通过关于取代基术语的第二实例，如果本文描述取代基S实例是S1、S2和S3中的一个，则此列表是指本披露的实施例，其中S实例是S1；S实例是S2；S实例是S3；S实例是S1和S2中的一个；S实例是S1和S3中的一个；S实例是S2和S3中的一个；S实例是S1、S2和S3中的一个；并且S实例是这些选择中每一个的任何等效物。为了简洁起见，本文相应地使用较短的术语“S实例是S1、S2和S3中的一个”，但并非以限制的方式。在通用术语中所述的以上关于取代基术语的笫二实例旨在阐述各种在本文中所述的取代基赋值。本文中给出的用于取代基的上述规范在适用时延伸至如R1、R2、R3、R4、PG以及X以及本文中使用的任何其他通用取代基符号的成员。
命名“Ci-j”，其中j>i，当本文中将其应用于一类取代基时，意指本披露实施例，其中从i至j(包括i和j)的每一种数目的碳原子成员的独立地实现。举例来说，术语C1-4独立地是指具有一个碳原子成员(C1)的实施例、具有两个碳原子成员(C2)的实施例、具有三个碳原子成员(C3)的实施例和具有四个碳原子成员(C4)的实施例。
术语Cn-m烷基是指在链中具有总数N个碳原子成员的直链或者支链脂肪链，其满足n≤N≤m，同时m>n。当允许存在多于一种此类附接可能性时，任何在本文中提及的二取代基意指涵盖各种附接可能性。例如，提及二取代基-A-B-(其中A≠B)在本文中是指A附接到第一取代成员上以及B附接到第二取代成员上的这样的二取代基，并且其也指A附接到第二取代成员上以及B附接到第一取代成员上的这样的二取代基。
本披露还包括具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐，优选上述那些和本文示例的特定化合物的盐，以及使用此类盐的治疗方法。
术语“药学上可接受的”意指由联邦或州政府的监管机构或美国以外的国家的相应机构批准的或可批准的，或者美国药典中或其他公认药典中列出的用于在动物(更特别地，在人中)中使用。
“药学上可接受的盐”旨在意指无毒的、生物学耐受的或者以生物学适于施用至受试者的其它形式的由式(I)表示的化合物的游离酸或者碱的盐。其应该具有亲本化合物的希望的药理学活性。通常参见，G.S.Paulekuhn等人,“Trends in Active PharmaceuticalIngredient Salt Selection based on Analysis of the Orange Book Database”[基于橙皮书数据库分析的活性药物成分盐筛选趋势],J.Med.Chem.[药物化学杂志],2007,50:6665-72,S.M.Berge等人,“Pharmaceutical Salts”[药物盐],J Pharm Sci.[药物科学杂志],1977,66:1-19,和Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,andUse,[药用盐手册：性质，选择和使用]Stahl和Wermuth编辑,Wiley-VCH和VHCA,苏黎世,2002。药学上可接受的盐的实例是那些不具有过度毒性、刺激或者变态反应的药理学有效且适于与患者组织接触的盐。具有式(I)的化合物可以具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或者两种的官能团，并且因此与多种无机或者有机碱、和无机和有机酸反应，以形成药学上可接受的盐。
本披露还涉及具有式(I)的化合物的药学上可接受的前药、以及采用此类药学上可接受的前药的治疗方法。术语“前药”意指指定化合物的前体，其在施用至受试者之后，经由化学或者生理过程(如溶剂分解或者酶促裂解)或者在生理条件下在体内产生所述化合物(例如，接近生理学pH值下的前药被转化为具有式(I)的化合物)。“药学上可接受的前药”是无毒的、生物学耐受的或者处于在生物学上适于施用至受试者的其它形式的前药。选择和制备适合的前药衍生物的示例性程序描述于例如“Design of Prodrugs[前药的设计]”H.Bundgaard编辑,爱思唯尔(Elesevier),1985中。
本披露还涉及具有式(I)的化合物的药学活性代谢物，其还可以用于本披露的方法中。“药学上的活性代谢物”意指具有式(I)的化合物或其盐的体内代谢的药理学活性产物。化合物的前药和活性代谢物可以使用本领域已知或者可获得的常规技术进行确定。参见，例如，Bertolini等人,J Med Chem.[药物化学杂志]1997,40,2011-2016；Shan等人,JPharm Sci.[药物科学杂志]1997,86(7),765-767；Bagshawe,Drug Dev Res.[药物开发研究]1995,34,220-230；Bodor,Adv Drug Res.[药物研究进展]1984,13,224-331；Bundgaard,Design of Prodrugs[前药的设计](Elsevier Press[爱思唯尔出版社],1985)；以及Larsen,Design and Application of Prodrugs,Drug Design andDevelopment[前药的设计和应用，药物设计和开发](Krogsgaard-Larsen等人编辑,Harwood Academic Publishers[哈伍德学术出版社],1991)。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指本文提供的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物向患者或受试者施用。本领域存在多种施用化合物的技术，这些技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部和局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或载体，如液体或固体填充剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或囊封材料，这些材料涉及将本文提供的化合物在患者体内载运或输送或载运或输送到患者体内，使得它可以发挥其预期功能。典型地，此类构建体从身体的一个器官或部分载运或输送到身体的另一个器官或部分。每种载体在与配制品的其他成分(包括本文提供的化合物)相容且对患者无害的意义上必须是“可接受的”。可充当药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉状黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；海藻酸；无热原水；等渗盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及药物配制品中使用的其他无毒相容物质。如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本文提供的化合物的活性相容并对于患者来说在生理上是可接受的任何和所有的涂层剂、抗细菌剂和抗真菌剂以及吸收延迟剂等。补充活性化合物也可以掺入组合物中。“药学上可接受的载体”可以进一步包括本文提供的化合物的药学上可接受的盐。可以包括在本文提供的药物组合物中的其他另外成分在本领域是已知的，并例如描述于Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学](Genaro编辑,MackPublishing Co.[马克出版公司],1985,伊斯顿,宾夕法尼亚州)，将其通过引用并入本文。
如本文所用，术语“稳定剂”是指能够化学上抑制或预防具有式I的化合物的降解的聚合物。将稳定剂添加至化合物的配制品中用来改善化合物的化学和物理稳定性。
如本文所用，术语“片剂”表示可通过将药物或其药学上可接受的盐与合适的赋形剂(例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂和/或表面活性剂)通过常规压片工艺压制来生产的可口服施用的单剂量固体剂型。可使用常规造粒方法例如湿法或干法造粒与任选粉碎颗粒、随后压制和任选包衣生产片剂。片剂也可以通过喷雾干燥来生产。
如本文所用，术语“胶囊”是指固体剂型，其中药物封装在硬或软的可溶容器或“壳”中。容器或壳可由明胶、淀粉和/或其他合适的物质形成。
如本文所用，术语“有效量”、“药学有效量”和“治疗有效量”是指无毒但足够提供期望的生物学结果的药剂量。该结果可以是疾病征象、症状或原因的减少或减轻，或任何其他期望的生物学系统变化。本领域普通技术人员使用常规实验可以确定任何个体情况下的适当治疗量。
如本文所用，“组合”、“治疗组合”、“药物组合”、或“组合产物”是指组合施用的非固定的组合或成套试剂盒，其中在时间间隔内，可以同时或分开地独立施用两种或更多种治疗剂，尤其是其中这些时间间隔允许组合伙伴物显示协作的，例如协同的效应。
术语“调节剂”包括抑制剂和激活剂两者，其中“抑制剂”是指降低、预防、灭活、脱敏或下调HBV组装以及其他HBV核心蛋白功能的化合物，这些功能是HBV复制或感染颗粒生成所必需的。
如本文所用，术语“衣壳组装调节剂”是指破坏或加速或抑制或阻碍或延迟或减少或修饰正常衣壳组装(例如，在成熟期间)或正常衣壳拆卸(例如，在感染期间)或扰动衣壳稳定性从而诱导异常的衣壳形态和功能的化合物。在一个实施例中，衣壳组装调节剂加速衣壳组装或拆卸，从而诱导异常的衣壳形态。在另一个实施例中，衣壳组装调节剂与主要的衣壳组装蛋白(CA)相互作用(例如在活性位点与其结合，在变构位点与其结合，修改和/或阻碍折叠等)，从而破坏衣壳组装或拆卸。在又另一个实施例中，衣壳组装调节剂引起CA的结构或功能(例如，CA组装、拆卸、与底物结合、折叠成合适构象等的能力)的扰动，这减弱了病毒感染性和/或对病毒是致命的。
如本文所用，术语“治疗(treatment或treating)”被定义为向患者应用或施用治疗剂，即本披露的化合物(单独地或与另一种药剂组合)，或向来自患者的分离的组织或细胞系应用或施用治疗剂(例如，用于诊断或离体应用)，所述患者患有HBV感染、有HBV感染的症状或具有患上HBV感染的可能性，目的是治愈、痊愈、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进或影响HBV感染、HBV感染的症状或患上HBV感染的可能性。基于从药物基因组学领域获得的知识，此类治疗可以特别定制或修改。
如本文所用，术语“预防(prevent或prevention)”意指没有障碍或疾病发展(如果没有发生障碍或疾病)、或没有进一步的障碍或疾病发展(如果已经患上了所述障碍或疾病)。还考虑到了预防与障碍或疾病相关的一些或全部症状的能力。
如本文所用，术语“患者”、“个体”或“受试者”是指人或非人哺乳动物。非人哺乳动物包括例如家畜以及宠物，如绵羊、牛、猪、犬科动物、猫科动物和鼠科哺乳动物。优选地，所述患者、受试者或个体是人。
在根椐本披露的治疗方法中，根据本披露的有效量的药剂被施用至患有或诊断为具有这样的疾病、障碍或者病症的受试者。“有效量”意指在需要这样的治疗的患者中对于指定的疾病、障碍或者病症通常足以引起希望的治疗或者预防益处的量或者剂量。本披露化合物的有效量或者剂量可以通过常规方法确定，如建模、剂量升级研究或者临床试验，并且考虑常规因素，例如施用或者药物递送的模式或者途径，化合物的药代动力学，疾病、障碍或者病症的严重程度和过程，受试者的先前或者正在进行的治疗，受试者的健康状况和对药物的响应，和治疗医师的判断。剂量实例在从约0.001至约200mg化合物/kg受试者体重/天的范围内，优选约0.05至100mg/kg/天，或者约1至35mg/kg/天，以单个的或者分开的剂量单位(例如，BID、TID、QID)施用。对于70-kg的人，适合剂量的示例性范围从约0.05至约7g/天、或者约0.2至约2.5g/天。
化合物的剂量的实例是从约1mg至约2,500mg。在一些实施例中，在本文所述的组合物中使用的本披露的化合物的剂量小于约10,000mg、或小于约8,000mg、或小于约6,000mg、或小于约5,000mg、或小于约3,000mg、或小于约2,000mg、或小于约1,000mg、或小于约500mg、或小于约200mg、或小于约50mg。类似地，在一些实施例中，如本文所述的第二化合物(即，用于HBV治疗的另一种药物)的剂量小于约1,000mg、或小于约800mg、或小于约600mg、或小于约500mg、或小于约400mg、或小于约300mg、或小于约200mg、或小于约100mg、或小于约50mg、或小于约40mg、或小于约30mg、或小于约25mg、或小于约20mg、或小于约15mg、或小于约10mg、或小于约5mg、或小于约2mg、或小于约1mg、或小于约0.5mg及其任何和所有全部或部分增量。
一旦患者的疾病、障碍或者病症出现改善，可调整剂量，用于预防性或维持性治疗。例如，随着症状变化，施用的剂量或频率或两者可以减少至维持希望的治疗或预防作用的水平。当然，如果症状已经被减轻到适当的水平，治疗可以停止。然而，在有任何症状复发时，患者可能需要长期的间歇治疗。
可以根据披露的方法进行治疗的HBV感染包括HBV基因型A、B、C、和/或D感染。然而，在实施例中，披露的方法可以治疗任何HBV基因型(“泛基因型(pan-genotypic)治疗”)。可以使用本领域已知的方法进行HBV基因分型，例如
Figure BDA0003377518150000381
HBV基因分型(Innogenetics N.V.公司，根特，比利时)。
实例
现在将参考以下用于其一般制备的说明性合成方案和随后的具体实例来描述可用于本披露方法的示例性化合物。技术人员将认识到，为了获得本文中的各种化合物，可以适当地选择起始材料，使得最终希望的取代基将在有或没有合适的保护下通过反应方案而被携带以产生希望的产物。可替代地，可能有必要或希望使用适合的基团代替最终希望的取代基，所述适合的基团可通过反应方案被携带并适当地被希望的取代基代替。除非另有说明，否则变量如上文参考式(I)所定义。反应可以在溶剂的熔点和回流温度之间进行，优选在0℃和溶剂的回流温度之间进行。可以采用常规加热或微波加热来加热反应。反应也可以在高于溶剂的正常回流温度的密封压力容器中进行。
本文使用的缩写和首字母缩略词包括以下表2中所示：
表2：
Figure BDA0003377518150000391
Figure BDA0003377518150000401
Figure BDA0003377518150000411
合成
现在将参考以下用于其一般制备的说明性合成方案和随后的具体实例来描述可用于本披露方法的示例性化合物。
方案1
Figure BDA0003377518150000412
根据方案1，将可商购或可合成的具有式(V)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)与可商购或可合成的2-(甲基氨基甲基)丙-2-烯酸乙酯在酰胺键偶联条件下偶联，以提供具有式(VI)的化合物。例如，使具有式(V)的酸化合物与2-(甲基氨基甲基)丙-2-烯酸乙酯，在脱水剂(如羟基苯并三唑(HOBt)/1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)、1,1'-羰基二咪唑(CDI)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(PyBOP)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]-吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAT)、丙基膦酸酐(T3P))、合适选择的碱(如N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)等)的存在下，在溶剂(如甲苯，乙腈(ACN)、乙酸乙酯(EtOAc)、二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、二氯甲烷(DCM)、或其混合物)中反应，以提供具有式的(VI)的化合物。
使用碱(如1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(DBU))，在溶剂(如ACN)中在约40℃-60℃的温度下持续1-3h的时间段，使具有式(VI)化合物(其中R2是H或C1-6烷基)环化。使用碱(如氢氧化钠、氢氧化钾等)，在极性溶剂(如水、甲醇(MeOH)、或其混合物)中进行随后的皂化，提供具有式(VII)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)。
方案2
Figure BDA0003377518150000421
根据方案2，使用3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯，在合适的溶剂(如DMF等)中，在碱(如K2CO3等)的存在下，在范围从25℃至75℃的温度下持续10-24h的时间段，将可商购或可合成的具有式(IX)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)烷基化，以提供具有式(IX)的化合物。使具有式(IX)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)与甲胺，在溶剂(如乙醇(EtOH))中在约80℃的温度下反应16h的时间段，以提供具有式(X)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)。
方案3
Figure BDA0003377518150000422
根据方案3，使用本领域技术人员已知的氧化条件(例如OsO4和NaIO4)，在合适的溶剂(如THF等)中，在范围从0℃至15℃的温度下，使具有式(X)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)氧化10-20h的时间段，提供具有式(XI)的化合物。使具有式(XI)的化合物与格氏试剂(如溴化苯基镁)在合适的溶剂(如THF等)中反应，以提供具有式(XII)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基，R1是OH，并且R4是苯基)。
使用氟化剂(如二乙基氨基三氟化硫(DAST)、(二乙基氨基)二氟锍四氟硼酸盐
Figure BDA0003377518150000431
双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫
Figure BDA0003377518150000432
等)，在合适的溶剂(如DCM等)中，在范围从-78℃至50℃的温度下持续2-16h的时间段，使具有式(XII)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基，R1是OH，并且R4是苯基)氟化，以提供具有式(XII)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基，R1是F，并且R4是苯基)。
方案4
Figure BDA0003377518150000441
根据方案4，使用本领域技术人员已知的或如前所述的酰胺键形成条件将具有式(VII)的化合物转化为其相应的酰胺。例如，具有式(VII)的化合物与氯化铵、PyBOP、活化剂(如HOBt)，在碱(如DIPEA等)的存在下，在合适的溶剂中反应，提供具有式(XIII)的化合物。以类似方式，使具有式(VII)的化合物与N-甲氧基甲胺，在T3P的存在下，并且在叔胺基碱(如三乙胺等)的存在下，在非质子有机溶剂(如THF等中)反应，以提供具有式(XVI)的化合物(其中R2是H或C1-6烷基)。
用二甲基甲酰胺(DMF)-二甲基乙酰胺(DMA)处理具有式(XIII)的化合物，以提供具有式(XV)的二甲基氨基亚甲基氨基甲酰基取代的化合物。在有机碱(如三乙胺(TEA))的存在下，在极性非质子溶剂(如二氯甲烷)中，用三氟乙酸酐(TFAA)处理具有式(XIII)的化合物，以得到具有式(XVI)的腈。
在极性非质子溶剂(如THF)中通过有机金属卤化物(如溴化甲基镁)的作用，将具有式(XVI)的化合物转化为具有式(XVII)的酮。随后在约70℃的温度下用DMF-DMA处理具有式(XVII)的化合物，以得到具有式(XVIII)的化合物。
方案5
Figure BDA0003377518150000451
具有式(XIX)的三唑基取代的化合物通过具有式(XV)的化合物与水合肼在醇溶剂中的反应制备。
可替代地，在碱(如三乙胺)的存在下，在乙酸的存在下，使具有式(XV)的化合物与盐酸羟胺反应，以得到具有式(XX)的噁二唑基取代的化合物。
方案6
Figure BDA0003377518150000461
使具有式(XVI)的化合物与叠氮化钠，在ACN的存在下在极性非质子溶剂(如DMF)中反应，以得到具有式(XXI)的化合物(其中R4是四唑基)。
方案7
Figure BDA0003377518150000462
使具有式(XVIII)的化合物在水合肼的存在下环化，以得到具有式(XXII)的化合物。使用烷基化剂(如C1-6烷基卤化物)等、碱(如NaH等)，在合适的溶剂如THF、DMF等)中，使具有式(XXII)的化合物烷基化，以提供具有式(XXIIa和XXIIb)的化合物。
可替代地，具有式(XVIII)的化合物与盐酸羟胺，在碱(如三乙胺)的存在下在乙酸的存在下，以得到具有式(XXIII)的化合物。
方案8
Figure BDA0003377518150000471
根据方案8，分离成具有式(XXIV)的立体异构体(其包括具有式(XII)、(XIX)、(XX)、(XXI)、(XXII)、(XXIIa)、(XXIIb)和(XXIII)的化合物)通过超临界流体色谱法实现。具有式(XXIV)的化合物(其包括具有式(XII)、(XIX)、(XX)、(XXI)、(XXII)、(XXIIa)、(XXIIb)和(XXIII)的化合物)(其中R1、R2和R4如权利要求1中所定义)上的BOC保护基团的清除是根据本领域技术人员已知的程序并使用已经建立的方法(如在T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in Organic Synthesis[有机合成中的保护基团]”,第3版,John Wiley & Sons[约翰威利父子出版公司],1999中所述的那些)实现的。例如，在酸性条件(如TFA/CH2Cl2、HCl/二噁烷等)下，以提供具有式(XXV)的化合物。
随后与可商购或可合成的具有式(XXVI)的化合物(其中R1、R2和R4如权利要求1中所定义)、合适的碱(如TEA等)，在合适的溶剂(如DCM等)中反应，提供具有式(I)的化合物。
可使用本领域普通技术人员已知的方法将具有式(I)的化合物转化为其相应盐。例如，在如Et2O、CH2Cl2、THF、MeOH、氯仿或异丙醇的溶剂中用三氟乙酸、HCl或柠檬酸处理具有式(I)的胺以提供相应的盐形式。可替代地，通过反相HPLC纯化条件，因此获得三氟乙酸或甲酸盐。从极性溶剂(包括极性溶剂的混合物和极性溶剂的水性混合物)或从非极性溶剂(包括非极性溶剂的混合物)中通过重结晶以结晶形式获得具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐的结晶形式。
当根据本披露的化合物具有至少一个手性中心时，它们可相应地作为对映异构体存在。当化合物具有两个或更多个手性中心时，它们可以另外以非对映异构体存在。应当理解，所有此类异构体及其混合物都涵盖在本披露的范围内。
表示为“立体异构体混合物”(意指两种或更多种立体异构体的混合物，并且包括对映异构体、非对映异构体及其组合)的上述方案中示出的式的化合物通过SFC拆分进行分离。
根据上述方案制备的化合物可通过特定形式的合成或通过拆分以单一形式(如单一对映异构体)获得。根据上述方案制备的化合物可以作为各种形式的混合物可替代地获得，如外消旋(1:1)或非外消旋(非1:1)混合物。当获得对映异构体的外消旋和非外消旋混合物时，可使用本领域普通技术人员已知的常规分离方法分离单一对映异构体，如手性色谱、重结晶、非对映异构体的盐形成、衍生为非对映异构体的加合物、生物转化、或酶转化。当获得区域异构体或者非对映异构体的混合物时，适用情况下，可以使用常规方法(如色谱法或者结晶法)对单个的异构体进行分离。
通用程序
提供以下具体实例以进一步说明本披露和多种优选实施例。
在获得以下实例中所述的化合物和相应的分析数据中，除非另有说明，否则遵循以下实验和分析方案。
除非另行说明，否则将反应混合物在室温(rt)下在氮气气氛下进行磁力搅拌。当溶液被“干燥”时，它们通常经干燥剂(如Na2SO4或MgSO4)进行干燥。当混合物、溶液和提取物被“浓缩”时，它们典型地在旋转蒸发器中在减压下进行浓缩。
用预填充柱在硅胶(SiO2)上进行正相硅胶色谱法(FCC)。
制备型反相高效液相色谱法(RP HPLC)在以下任一方法下进行：
方法A.Gilson GX-281半制备型HPLC，采用菲罗门公司(Phenomenex)的SynergiC18(10μm，150x25mm)或Boston Green ODS C18(5μm，150x30mm)，并在流动相为在水中的经10min 5％-99％ACN(含0.225％FA)，并且然后在100％ACN中保持2min，流速为25mL/min。
或
方法B.Gilson GX-281半制备型HPLC，采用菲罗门公司的Synergi C18(10μm，150x25mm)或Boston Green ODS C18(5μm，150x30mm)，并在流动相为在水中的经10min5％-99％ACN(0.1％TFA)，并且然后在100％ACN中保持2min，流速为25mL/min。
或
方法C.Gilson GX-281半制备型HPLC，采用菲罗门公司的Synergi C18(10μm，150x25mm)或Boston Green ODS C18(5μm，150x30mm)，并在流动相为在水中的经10min5％-99％ACN(0.05％HCl)，然后在100％ACN中保持2min，流速为25mL/min。
或
方法D.Gilson GX-281半制备型HPLC，采用菲罗门公司的Gemini C18(10μm，150x25mm)，AD(10μm，250mmx30mm)，或Waters XBridge C18柱(5μm，150x30mm)，流动相为在水中的经10min 0％-99％ACN(0.05％氢氧化铵v/v)，并且然后100％ACN中保持2min，流速为25mL/min。
或
方法E.Gilson GX-281半制备型HPLC，采用菲罗门公司的Gemini C18(10μm，150x25mm)或Waters XBridge C18柱(5μm，150x30mm)，流动相为在水中的经10min5％-99％ACN(10mM NH4HCO3)，并且然后在100％ACN中保持2min，流速为25mL/min。
制备型超临界流体高效液相色谱(SFC)是在Thar 80 Prep-SFC系统或Waters 80QPrep-SFC系统上进行的。将ABPR设置为100巴，以使CO2保持在SF条件下，并且流速可根据化合物特征验证，流速范围为50g/min至70g/min。柱温为环境温度
除非另外指明，质谱(MS)在SHIMADZU LCMS-2020 MSD或Agilent 1200\G6110AMSD上通过在正模式下的电喷雾电离(ESI)获得。计算质量对应于精确质量。
在Bruker model AVIII 400光谱仪上获得核磁共振(NMR)光谱。多重性的定义如下：s＝单峰、d＝双峰、t＝三重峰、q＝四重峰、m＝多重峰、br＝宽峰。应当理解，对于包含可交换质子的化合物，所述质子可以在NMR谱上可见或者在NMR谱上不可见，这取决于用于运行NMR谱的溶剂的选择和化合物在溶液中的浓度。
使用ChemDraw Ultra 12.0,ChemDraw Ultra 14.0(美国麻州哈佛大学剑桥软件公司(CambridgeSoft Corp.))或ACD/Name Version 10.01(先进化学发展股份有限公司(Advanced Chemistry))生成化学名称。
指定为R*或S*的化合物是未确定绝对构型的对映异构体纯的化合物。
中间体1.10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并 [1,5-a][1,4]二氮杂卓-2,8(7H)-二甲酸2-叔丁基8-乙酯。
Figure BDA0003377518150000501
步骤A.2-[[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]甲基]丙-2-烯酸乙酯。在0℃下在N2下向N-甲基氨基甲酸叔丁酯(200.00mg，1.52mmol，1.00当量)在THF(5.00mL)中的混合物中添加NaH(91.20mg，2.28mmol，60％纯度，1.50当量)持续0.5hr，然后在0℃下向混合物中逐滴添加2-(溴甲基)丙-2-烯酸乙酯(352.10mg，1.82mmol，1.20当量)，并且将混合物在N2气氛下在15℃下搅拌2hr。将混合物倒入冰水(10mL)中，并搅拌5min。将水相用乙酸乙酯(5mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤、用无水Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1至5/1)纯化以得到呈无色油状物的标题化合物(112.00mg，460.34μmol，30.29％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.28(s,1H),5.55(s,1H),4.23(q,J＝7.1Hz,2H),4.07(br s,2H),2.88(br s,3H),1.45(br s,9H),1.31(brs,3H)。
步骤B.2-(甲基氨基甲基)丙-2-烯酸乙酯。向2-[[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]甲基]丙-2-烯酸乙酯(112.00mg，460.34μmol，1.00当量)在二噁烷(1.00mL)中的混合物中添加HCl/二噁烷(4M，5.00mL，43.45当量)，并且然后将混合物在15℃下搅拌0.5小时。将混合物在真空中浓缩以得到呈白色固体的标题化合物(82.50mg，459.25μmol，99.76％产率，HCl)，将其直接用于下一步骤。
步骤C.3-[2-乙氧基羰基烯丙基(甲基)氨基甲酰基]-2,4,6,7-四氢吡唑并[4,3- c]吡啶-5-甲酸叔丁酯。将5-叔丁氧基羰基-2,4,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(80.00mg，299.31μmol，1.00当量)、2-(甲基氨基甲基)丙-2-烯酸乙酯(59.14mg，329.24μmol，1.10当量，HCl)、T3P(285.70mg，897.93μmol，267.01μL，3.00当量)和TEA(151.44mg，1.50mmol，207.45μL，5.00当量)在THF(3.00mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，并且然后将混合物在N2气氛下在15℃下搅拌16小时。将混合物倒入水(10mL)中，并搅拌5min。将水相用乙酸乙酯(5mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤、用无水Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩。将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(46.00mg，105.49μmol，35.24％产率，90％纯度)。LCMS：393[M+1]。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.35(s,1H),5.67(br s,1H),4.63(s,4H),4.18-4.30(m,2H),3.71(br s,2H),2.91-3.47(m,3H),2.74(br t,J＝5.4Hz,2H),1.48(s,9H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H)。
步骤D.10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并 [1,5-a][1,4]二氮杂卓-2,8(7H)-二甲酸2-叔丁基8-乙酯。将3-[2-乙氧基羰基烯丙基(甲基)氨基甲酰基]-2,4,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(36.00mg，91.73μmol，1.00当量)、DBU(6.98mg，45.87μmol，6.91μL，0.50当量)在MeCN(1.00mL)中的混合物脱气并用N2吹扫3次，并且然后将混合物在N2气氛下在50℃下搅拌2小时。将混合物倒入水(5mL)中，并搅拌5min。将水相用乙酸乙酯(3mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(5mL)洗涤、用无水Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩。将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(20.00mg，50.96μmol，55.56％产率)。LCMS：393[M+1]。
中间体2：10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H- 吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000521
步骤A.2-(叔丁氧基羰基)-10-甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八氢-1H-吡啶 并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸。向10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2,8(7H)-二甲酸2-叔丁基8-乙酯(中间体1，3.00g，7.64mmol)在MeOH(30.00mL)中的溶液中添加NaOH(458.40mg，11.46mmol)在水(6.00mL)中的溶液。将反应混合物在30℃下搅拌16h。通过添加稀盐酸(2N，3mL)将反应混合物调节至约pH 6。将混合物用水(20mL)稀释，然后用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并且在减压下浓缩滤液以给出呈白色固体的标题化合物(2.50g，粗品)，将其不经进一步纯化用于下一步骤。MS(ESI)：针对C17H24N4O5的计算质量是364.1；m/z实测值是365.1[M+H]+。
步骤B.8-氨基甲酰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4', 3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向2-(叔丁氧基羰基)-10-甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸(200.00mg，548.85μmol)和NH4Cl(146.79mg，2.74mmol，95.94μL)在DMF(5.00mL)中的混合物中添加PyBOP(314.18mg，603.73μmol)、HOBt(81.58mg，603.73μmol)和DIPEA(212.80mg，1.65mmol，287.57μL)。将反应混合物在15℃下搅拌2h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用稀HCl(1N，30mL×2)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过硅胶上的柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝50/1至10/1)纯化以给出呈白色固体的标题化合物(173.00mg，476.05μmol，86.74％产率)。MS(ESI)：针对C17H25N5O4的计算质量是363.1；m/z实测值是364.1[M+H]+。
步骤C.8-(((二甲基氨基)亚甲基)氨基甲酰基)-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10, 11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将8-氨基甲酰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(170.00mg，467.79μmol)溶解在DMF-DMA(1.80g，15.10mmol，2.00mL)中。将反应混合物在70℃下搅拌16h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(50mL×2)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液以给出标题化合物(170.00mg，粗品)，将其不经进一步纯化用于下一步骤。
步骤D.10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡 啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向8-(((二甲基氨基)亚甲基)氨基甲酰基)-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(60mg粗品)在EtOH(5.00mL)中的混合物中添加NH2NH2·H2O(14.65mg，286.74μmol，14.22μL，98％纯度)，然后将反应混合物80℃下搅拌30分钟。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(50mL×2)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝10/1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(30.00mg，77.43μmol，54.01％产率)。MS(ESI)：针对C18H25N7O的计算质量是387.2；m/z实测值是388.2[M+H]+。
中间体3：10-甲基-8-(1,2,4-噁二唑-5-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H- 吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000541
向8-(((二甲基氨基)亚甲基)氨基甲酰基)-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(80mg粗品，由中间体2的步骤C制备)在AcOH(2.00mL)中的混合物中添加NH2OH·HCl(106.27mg，1.53mmol)和TEA(232.13mg，2.29mmol，317.99μL)。将反应混合物在50℃下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(50mL×2)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(Rf＝0.65，DCM/MeOH＝10/1)纯化以给出呈黄色油状物的标题化合物(20.00mg，51.49μmol，26.94％产率)。MS(ESI)：针对C18H24N6O4计算的质量是388.2；m/z实测值是411.2[M+Na]+。
中间体4:10-甲基-11-氧代-8-(1H-四唑-5-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000551
步骤A.8-氰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4] 吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在N2下在0℃下向8-氨基甲酰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体2，步骤B；500.00mg，1.38mmol)和TEA(696.11mg，6.88mmol，953.58μL)在DCM(3.00mL)中的混合物中添加TFAA(577.94mg，2.75mmol，382.74μL)。将反应混合物在15℃下搅拌3h。将有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过柱色谱法(SiO2，二氯甲烷/甲醇＝60/1至30/1)纯化以给出呈白色固体的标题化合物(320.00mg，926.46μmol，67.13％产率)。MS(ESI)：针对C17H23N5O3的计算质量是345.2；m/z实测值是368.2[M+Na]+。
步骤B.10-甲基-11-氧代-8-(1H-四唑-5-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在N2下向8-氰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]-二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(80.00mg，231.62μmol)在DMF(2.00mL)中的混合物中添加NaN3(22.59mg，347.43μmol)和ACN(12.70mg，23.16μmol，11.55μL)。将反应混合物在110℃下搅拌16h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用稀HCl(1N，30mL×2)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过RP HPLC(条件A)纯化以给出呈白色固体的10-甲基-11-氧代-8-(1H-四唑-5-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(43.00mg，110.70μmol，47.80％产率)。MS(ESI)：针对C17H24N8O3的计算质量是388.2；m/z实测值是389.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.82-4.91(m,1H),4.73-4.81(m,1H),4.62(br s,2H),4.19(br s,1H),3.78-3.94(m,2H),3.65(br s,2H),3.20(br s,3H),2.71-2.85(m,2H),1.49(s,9H)。
中间体5：10-甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000561
步骤A.8-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢- 1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在N2下向2-(叔丁氧基羰基)-10-甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并-[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸(中间体2，来自步骤A的产物；7.00g，19.21mmol)和N-甲氧基甲胺盐酸盐(7.49g，76.84mmol)在THF(100.00mL)中的混合物中一次性添加T3P(24.45g，38.42mmol，22.85mL，50％纯度)和TEA(29.16g，288.14mmol)。将混合物在30℃下搅拌12h。将混合物倒入水(150mL)中并搅拌15min，并将水相用乙酸乙酯(200mL×2)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL×1)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将残余物通过硅胶上的柱色谱法(DCM/MeOH＝30/1)纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物(7.50g，18.41mmol，95.82％产率)。MS(ESI)：针对C19H29N5O5的计算质量是407.2；m/z实测值是408.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.69-4.43(m,4H),3.79-3.73(m,1H),7.56-7.64(m,1H),3.65-3.59(m,4H),3.25(s,3H),3.20(s,3H),2.79-2.70(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤B.8-乙酰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3, 4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在-30℃下在N2下向8-[甲氧基(甲基)氨基甲酰基]-10-甲基-11-氧代-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(300.00mg，736.27μmol)在THF(5.00mL)中的溶液中逐滴添加MeMgBr(3M，736.27μL)。将混合物加热至0℃并搅拌1h。将混合物缓慢倒入HCl(1N aq,80mL)中并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液以得到呈棕色油状物的标题化合物(170.00mg，粗品)。MS(ESI)：针对C18H26N4O4的计算质量是362.2；m/z实测值是363.2[M+H]+。
步骤C.8-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢- 1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将8-乙酰基-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(60.00mg，165.55μmol)溶解在DMF-DMA(1.35g，11.33mmol，1.50mL)中并将混合物在70℃下搅拌16h。将混合物用EtOAc(20mL×2)和水(20mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液以得到呈黄色油状物的标题化合物(80.00mg，粗品)。MS(ESI)：针对C21H31N5O4的计算质量是417.2；m/z实测值是418.2[M+H]+。
步骤D.10-甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向8-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-10-甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]-吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(90.00mg，215.57μmol)在EtOH(500.00μL)中的溶液中添加NH2NH2·H2O(22.02mg，431.14μmol，21.38μL，98％纯度)。将混合物在80℃下搅拌2h。将混合物用水(10mL)稀释，并用EtOAc(20mL×2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液以得到呈黄色油状物的标题化合物(70.00mg，粗品)。MS(ESI)：针对C19H26N6O3的计算质量是386.2；m/z实测值是387.1[M+H]+。
中间体6：10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢- 1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000581
在0℃下向10-甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体5，90.00mg，232.89μmol)在THF(2.00mL)中的溶液中添加NaH(27.95mg，698.67μmol，60％纯度)。将混合物在0℃下搅拌30min。然后添加CH3I(99.17mg，698.67μmol，43.50μL)。将混合物在20℃下搅拌2h。通过添加饱和NH4Cl(20mL)将混合物淬灭，并且然后用EA(30mL×2)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(EA/MeOH＝10/1)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(40.00mg，99.88μmol，42.89％产率，Rf＝0.37(EtOAc/MeOH＝10/1))，MS(ESI)：针对C20H28N6O3的计算质量是400.2；m/z实测值是401.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25(d,J＝2.2Hz,1H),6.07(d,J＝2.0Hz,1H),5.23(s,1H),4.58-4.50(m,3H),4.48-4.41(m,1H),3.80(s,3H),3.75-3.44(m,5H),3.06(s,3H),2.69(br,2H),1.41(s,9H)。区域异构体10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(8.00mg，17.48μmol，7.51％产率，87.5％纯度，Rf＝0.30(EtOAc/MeOH＝10/1))呈无色油状物。
中间体7：10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢- 1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003377518150000591
通过制备型TLC将标题化合物从中间体5(8.00mg，17.48μmol，7.51％产率，87.5％纯度，Rf＝0.30(EtOAc/MeOH＝10/1))中分离。MS(ESI)：针对C20H28N6O3的计算质量是400.2；m/z实测值是401.2[M+H]+。
中间体8：(3R,8S*)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000592
步骤A.2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)丙烯酸乙酯。在-30℃下在N2下向NaH(4.57g，114.36mmol，60％纯度)在THF(80.00mL)中的混合物中在搅拌下逐滴添加N-甲基氨基甲酸叔丁酯(10.00g，76.24mmol)，随后在0.5h后添加2-(溴甲基)丙-2-烯酸乙酯(19.13g，99.11mmol)。将所得混合物在搅拌下升温至20℃持续16h。将混合物倒入冰水(200mL)中，并搅拌5min。将水相用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1至10/1)纯化以得到呈亮黄色液体的标题化合物和2-(羟甲基)丙-2-烯酸乙酯(21g)的混合物。
步骤B.乙基2-((甲基氨基)甲基)丙烯酸酯盐酸盐。向乙基2-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)丙烯酸乙酯和2-(羟甲基)丙-2-烯酸乙酯(11.5g，步骤A)的混合物中添加HCl/二噁烷(4M，30.00mL)，在20℃下搅拌2h。将混合物浓缩，并将残余物溶解在水(100mL)中。通过添加HCl(1N)将所得混合物调节至pH 3，并且将混合物用DCM(100mL×3)洗涤。将所得水相浓缩以给出呈无色液体的标题化合物(5.50g，30.62mmol，64.77％产率，HCl盐)。
步骤C.(R)-3-((2-(乙氧基羰基)烯丙基)(甲基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢- 2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯。在N2下向2-((甲基氨基)甲基)丙烯酸乙基酯盐酸盐(5.50g，30.62mmol)和(R)-5-(叔丁氧基羰基)-6-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(5.20g，18.48mmol)在THF(80.00mL)中的溶液中添加TEA(22.44g，221.76mmol，30.74mL)和T3P(58.82g，92.42mmol，54.97mL，50％纯度)。将混合物在N2气氛下在30℃下搅拌32h。在30℃下向混合物中添加额外的T3P(23.52g，36.96mmol，21.98mL，50％纯度)和TEA(14.96g，147.84mmol，20.49mL)，搅拌另外的16h。将混合物用80mL的水稀释，并用EtOAc(50mL×4)萃取。将有机相依次用HCl(1N，50mL×2)、饱和NaHCO3和盐水(50mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过硅胶上的快速柱色谱法(0-50％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(5.52g，13.58mmol，73.49％产率)。MS(ESI)：针对C20H30N4O5的计算质量是406.2；m/z实测值是407.2[M+H]+。
步骤D.(3R)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3, 4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2,8(7H)-二甲酸2-叔丁基8-乙酯。向DBU(1.03g，6.79mmol，1.02mL)在MeCN(600.00mL)中的溶液中逐滴添加(R)-3-((2-(乙氧基羰基)烯丙基)(甲基)氨基甲酰基)-6-甲基-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(5.52g，13.58mmol)在MeCN(150.00mL)中溶液，在50℃下搅拌16h。将混合物在减压下浓缩，并将所得残余物溶解在100mL的EtOAc中。然后将所得混合物用HCl(1N，100mL)和盐水(100mL×1)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物经由硅胶上的快速柱色谱法(50％-100％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化以获得呈无色油状物的标题化合物(5.20g，12.79mmol，94.21％产率)。
步骤E.(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-3,10-二甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八 氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸。向(3R)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2,8(7H)-二甲酸2-叔丁基8-乙酯(450.00mg，1.11mmol)在THF(10.00mL)和水(1.00mL)中的溶液中添加NaOH(88.57mg，2.21mmol)，然后将混合物加热至50℃持续16h。将混合物用20mL的水稀释，并通过添加HCl(1N)将混合物pH由12调节至5。将所得混合物用EtOAc(20mL×5)萃取。然后将合并的有机相用盐水(30mL×1)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液以获得呈白色固体的标题化合物(390.00mg，1.03mmol，92.85％产率)。
步骤F.(3R)-8-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10, 11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在20℃下向(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-3,10-二甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸(390.00mg，1.03mmol)和N-甲氧基甲胺(130.61mg，1.34mmol，HCl)在DMF(10.00mL)中的溶液中添加PyBOP(589.60mg，1.13mmol)、HOBt(153.09mg，1.13mmol)和DIEA(798.70mg，6.18mmol，1.08mL)。将混合物在20℃下搅拌3h。将混合物用50mL的水稀释，并用EtOAc(30mL×4)萃取。将有机相用HCl(1N，30mL)、饱和NaHCO3和盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/5)纯化以给出呈无色油状物的标题化合物(290.00mg，688.04μmol，66.80％产率)。
步骤G.(3R)-8-乙酰基-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在-78℃下在搅拌下向(3R)-8-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(290.00mg，688.04μmol)在THF(6.00mL)中的溶液中逐滴添加MeMgBr(3M，1.15mL)，然后将混合物在0℃下搅拌2h。将混合物在0℃下倒入HCl(1N，10mL)中，然后用EtOAc(20mL×3)萃取，并且将合并的有机相依次用饱和NaHCO3(20mL)和盐水(20mL)洗涤，然后经无水Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液以得到呈白色固体的标题化合物(260.00mg，粗品)，将其不经纯化用于下一步骤。MS(ESI)：针对C19H28N4O4的计算质量是376.2；m/z实测值是377.3[M+H]+。
步骤H.(3R)-8-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10, 11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将(3R)-8-乙酰基-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(260.00mg，粗品)溶解在N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(DMF-DMA)(8.00mL)中，并将所得混合物在搅拌下加热至70℃持续16h。将混合物在搅拌下加热至80℃持续16h，然后在减压下浓缩。将残余物溶解在20mL的EtOAc中。将所得有机相用水(10mL)和盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液以获得呈黄色油状物的标题化合物(300.00mg，粗品)，将其不经纯化用于下一步骤。MS(ESI)：针对C22H33N5O4的计算质量是431.2；m/z实测值是432.2[M+H]+。
步骤I.(3R)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢- 1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向(3R)-8-(3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(300.00mg，粗品)在EtOH(6.00mL)中的溶液中添加NH2NH2·H2O(69.60mg，1.39mmol，67.57μL)，然后将混合物在搅拌下加热至80℃持续2h。将混合物在减压下浓缩，并且将所得残余物通过制备型TLC(EtOAc/MeOH＝20/1)纯化以获得呈无色油状物的标题化合物(200.00mg，494.42μmol，71.12％产率，99％纯度)。
步骤J.(3R,8S*)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六 氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将(3R)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(200.00mg，499.41μmol)通过SFC(柱：AD(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％NH3·H2O IPA]；B％：25％-25％，1.6min；50min)分离以获得呈白色固体的标题化合物(90.00mg，224.74μmol，在SFC上的峰1(AD-3S_3_5_40_3ML柱：Chiralpak AD-3100×4.6mm I.D.，3um流动相：在CO2中的甲醇(0.05％DEA)，从5％至40％，流速：3mL/min，波长：220nm)，保留时间：2.178min)和呈白色固体的(3R,8R*)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(80.00mg，199.77μmol，在SFC上的峰2，保留时间：2.328min)。
中间体9：(3R,8R*)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000641
从(3R)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(来自中间体9、步骤I的产物)通过SFC分离标题化合物，以与中间体7、步骤J类似的方式：(80.00mg，199.77μmol，在SFC上的峰2(AD-3S_3_5_40_3ML柱：Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D.，3um流动相：在CO2中的甲醇(0.05％DEA)，从5％至40％；流速：3mL/min，波长：220nm)，保留时间：2.328min)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
中间体10：(3R,8S*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000642
步骤A.(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-3,10-二甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八 氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸。向(3R)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2,8(7H)-二甲酸2-叔丁基8-乙酯(中间体8、步骤D；2.50g，6.15mmol)在THF(25.00mL)和水(5.00mL)中的溶液中添加NaOH(369.00mg，9.23mmol)。将混合物在40℃下搅拌16h，然后用水(30mL)稀释并通过添加HCl(1N)调节至pH 5。将所得混合物用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，将合并的有机相用盐水(40mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液以得到呈白色固体的标题化合物(2.00g，5.29mmol，85.94％产率)。MS(ESI)：针对C18H26N4O5的计算质量是378.2；m/z实测值是379.2[M+H]+。
步骤B.(3R)-8-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10, 11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向(3R)-2-(叔丁氧基羰基)-3,10-二甲基-11-氧代-2,3,4,7,8,9,10,11-八氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-8-甲酸(2.00g，5.28mmol)和N-甲氧基甲胺(669.51mg，6.86mmol，HCl)在DMF(30.00mL)中的溶液中添加PyBOP(3.02g，5.81mmol)、HOBt(784.78mg，5.81mmol)和DIEA(4.09g，31.68mmol，5.52mL)。然后将混合物在20℃下搅拌3h。将混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(100mL×2)萃取。将合并的有机层依次用水(100mL×2)、1N HCl(50mL)和饱和NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。然后将有机部分经Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过硅胶上的柱色谱法(石油醚/EtOAc＝50％-100％)纯化以获得呈白色固体的标题化合物(2.06g，4.89mmol，92.56％产率)。MS(ESI)：针对C20H31N5O5计算的质量是421.2；m/z实测值是422.3[M+H]+。
步骤C.(3R)-8-乙酰基-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。在-30℃下在N2下向(3R)-8-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(2.06g，4.89mmol)在THF(30mL)中的溶液中逐滴添加MeMgBr(3M，4.89mL)。将混合物在搅拌下升温至0℃持续1h。将混合物缓慢倒入1N HCl(100mL)中并用乙酸乙酯(80mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液以得到呈白色固体的标题化合物(1.67g，粗品)。MS(ESI)：针对C19H28N4O4的计算质量是376.2；m/z实测值是377.1[M+H]+。
步骤D.(3R)-8-((E)-3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8, 9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将(3R)-8-乙酰基-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(400mg，1.06mmol)溶解在DMFDMA(1.79g，15.06mmol，2mL)中。将混合物在75℃下搅拌24h。将混合物用乙酸乙酯(40mL×2)萃取并用水(20mL)洗涤。将合并的有机层用水(30mL×2)洗涤。将有机部分经无水Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液以得到呈棕色固体的标题化合物(400mg，926.94μmol，87.24％产率)。
步骤E.(3R)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H- 吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向(3R)-8-((E)-3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(200mg，463.47μmol)在吡啶(5mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(193.24mg，2.78mmol)。将混合物在115℃下搅拌16h，然后用水(30mL)稀释并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层用1N HCl(20mL×2)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(EtOAc＝1)纯化以得到呈棕色油状物的(3R)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(87mg，166.87μmol，36.00％产率，77％纯度)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
步骤F.(3R,8S*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六 氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将(3R)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(92mg)通过HPLC(柱：菲罗门公司的SynergiC18 150*30mm*4um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：33％-63％，10.5min)纯化以得到标题化合物(60mg)，将其通过SFC(柱：AD(250mm*30mm，10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2OMEOH]；B％：25％-25％，3.3min；70min)纯化以得到呈白色固体的(3R,8S*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(在SFC上的峰1(AD-3S_3_5_40_3ML柱：Chiralpak AD-3100×4.6mm I.D.，3um流动相：在CO2中的甲醇(0.05％DEA)，从5％至40％，流速：3mL/min，波长：220nm)，保留时间＝1.662min，17mg，42.35μmol，18.48％产率)和呈白色固体的非对映异构体(3R,8R*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(峰2，保留时间＝1.858min，17mg，42.35μmol，18.48％产率)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
中间体11：(3R,8R*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000671
以与中间体10、步骤F类似的方式从(3R)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(来自中间体4、步骤E的产物)通过SFC分离标题化合物。(17mg，42.35μmol，在SFC上的峰2(AD-3S_3_5_40_3ML柱：Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D.，3um流动相：在CO2中的甲醇(0.05％DEA)，从5％至40％，流速：3mL/min，波长：220nm)，保留时间＝1.858min)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
中间体12：(3R,8S*)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000681
步骤A.(3R)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H- 吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
向(3R)-8-((E)-3-(二甲基氨基)丙烯酰基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体10，步骤D；200mg，463.47μmol)在HOAc(3mL)和水(6mL)中的溶液中添加NH2OH·HCl(193.24mg，2.78mmol)。将混合物在10℃下搅拌16h，并且然后在70℃下继续加热再持续48h。此时，将混合物在减压下浓缩，并将所得残余物用THF(3mL)稀释并用Na2CO3水溶液调节pH至9-10。添加Boc2O(303.46mg，1.39mmol，319.43μL)，并且将混合物在10℃下搅拌16h。将混合物用水(50mL)稀释，并用EtOAc(30mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(EtOAc/MeOH＝10/1)纯化以得到呈无色油状物的标题化合物(3R)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯和(3R)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯的混合物(140mg，327.48μmol，70.66％产率，93.8％纯度)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
步骤B.(3R,8S*)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六 氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
将(3R)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯和(3R)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯的混合物(140mg)经由SFC(柱：AD(250mm*30mm，5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O IPA]；2.6min；120min)分离以得到呈无色油状物的(3R,8S*)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(在SFC上的峰1(AD-3S_5_5_40_3ML柱：Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D.，3um流动相：在CO2中的乙醇(0.05％DEA)，从5％至40％，流速：3mL/min，波长：220nm)，保留时间：1.753min，36mg，89.67μmol，27.41％产率)和混合物(峰2和峰3，保留时间：1.866和1.907min，50mg，包括中间体7)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
中间体13：(3R,8R*)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000701
将来自中间体12、步骤B的产物的混合物(峰2和峰3，保留时间：1.866和1.907min，50mg)通过SFC(柱：OJ(250mm*30mm，5μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O IPA]；B％：20％-20％，2.2min；30min)进一步纯化以得到标题化合物(在SFC上的峰1(OJ-3S_4_5_40_3ML柱：Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D.，3um流动相：在CO2中的异丙醇(0.05％DEA)，从5％至40％，流速：3mL/min，波长：220nm)，保留时间＝1.233min，11mg，27.40μmol，8.38％产率)。MS(ESI)：针对C20H27N5O4的计算质量是401.2；m/z实测值是402.3[M+H]+。
中间体14.10-甲基-8-亚甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3': 3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000702
方法A
步骤A.5-亚甲基-1,3,2-二氧硫杂环己烷2-氧化物。在0℃下在N2下向2-亚甲基丙烷-1,3-二醇(5.00g，56.75mmol，4.63mL，1.00当量)在CCl4(50.00mL)中的溶液中添加SOCl2(10.13g，85.13mmol，6.18mL，1.50当量)在CCl4(10.00mL)中的溶液，并且将混合物在0℃下搅拌45分钟。将混合物在减压下浓缩以得到呈黄色油状物的5-亚甲基-1,3,2-二氧硫杂环己烷2-氧化物(6.90g，51.43mmol，90.63％产率)，将其直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.36-5.39(m,2H),5.16(s,2H),4.22-4.28(m,2H)。
步骤B.2-((甲基氨基)甲基)丙-2-烯-1-醇。将5-亚甲基-1,3,2-二氧硫杂环己烷2-氧化物(1.00g，7.45mmol，1.00当量)和甲胺(2M，11.18mL，3.00当量)在THF(2.00mL)中的溶液加热至70℃持续16h。将混合物过滤并在真空中浓缩滤液以得到呈黄色油状物的标题化合物(750.00mg，7.41mmol，99.46％产率)，将其直接用于下一步骤。
步骤C.(2-(羟甲基)烯丙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯。向2-(甲基氨基甲基)丙-2-烯-1-醇(750.00mg，7.41mmol，1.00当量)在二噁烷(5.00mL)/H2O(5.00mL)中的溶液中添加Boc2O(1.94g，8.89mmol，2.04mL，1.20当量)和NaHCO3(622.40mg，7.41mmol，1.00当量)。将混合物在30℃下搅拌16h。将混合物用EA(50mL)稀释并用盐水(50mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥、过滤并浓缩以给出黄色油状物，将其通过硅胶柱纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物(710.00mg，3.53mmol，47.61％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ5.10(s,1H),4.97(s,1H),3.91-4.10(m,4H),2.81(s,3H),1.50(s,9H)。
步骤D.2-((甲基氨基)甲基)丙-2-烯-1-醇盐酸盐。向N-[2-(羟甲基)烯丙基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(710.00mg，3.53mmol，1.00当量)在二噁烷(3.00mL)中的溶液中添加HCl/二噁烷(4M，5.00mL，5.67当量)，并将混合物在15℃下搅拌1h。将混合物在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题化合物(480.00mg，3.49mmol，98.81％产率，HCl)，将其直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ5.46(s,1H),5.32(s,1H),4.20(s,2H),3.71(s,2H),2.73(s,3H)。
步骤E.3-((2-(羟甲基)烯丙基)(甲基)氨基甲酰基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3- c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯。将5-叔丁氧基羰基-1,4,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-3-甲酸(550.00mg，2.06mmol，1.00当量)、DIPEA(798.70mg，6.18mmol，1.08mL，3.00当量)、HATU(939.93mg，2.47mmol，1.20当量)和2-(甲基氨基甲基)丙-2-烯-1-醇(425.21mg，3.09mmol，1.50当量，HCl)在DMF(6.00mL)中的混合物加热至80℃持续16h。将混合物用EtOAc(80mL)稀释，并用盐水(80mL*3)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩以给出黄色油状物。将黄色油状物通过硅胶柱纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(390.00mg，1.11mmol，54.03％产率)。LCMS：351[M+1]。
步骤F.10-甲基-8-亚甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3, 4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。向3-[2-(羟甲基)烯丙基-甲基-氨基甲酰基]-2,4,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(200.00mg，570.76μmol，1.00当量)和三苯基磷烷(194.62mg，741.99μmol，1.30当量)在THF(3.00mL)中的溶液中添加DIAD(150.04mg，741.99μmol，144.27mL，1.30当量)并将混合物在30℃下搅拌4h。将混合物用EtOAc(50mL)稀释，并且用HCl(1M，50mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩以给出油状物。将油状物通过硅胶柱纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物作为不纯的产物(320.00mg，粗品，含有Ph3PO)。LCMS：355[M+23]。
方法B
步骤A.2-(2-(氯甲基)烯丙基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲 酸5-叔丁基3-乙酯。向3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯(7.62g，60.95mmol，7.05mL,3.00当量)在DMF(100.00mL)中的溶液中添加2,4,6,7-四氢吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5-二甲酸5-叔丁基3-乙酯(6.00g，20.32mmol，1.00当量)和K2CO3(3.65g，26.41mmol，1.30当量)。将混合物在25℃下搅拌6h并且然后加热至75℃持续16h。将混合物用EtOAc(80mL)稀释，用HCl(1M，80mL)和盐水(80mL*2)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩以给出黄色油状物。将油状物通过硅胶柱纯化以得到呈无色油状物的标题化合物(2.90g，7.55mmol，37.18％产率)。
步骤B.10-甲基-8-亚甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3, 4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。将2-(2-(氯甲基)烯丙基)-6,7-二氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3,5(4H)-二甲酸5-叔丁基3-乙酯(1.00g，2.61mmol，1.00当量)和甲胺(7.5M，40.00mL，33％纯度，114.94当量)在EtOH(30.00mL)中的溶液在密封管中加热至80℃持续16h。将混合物在真空中浓缩以给出黄色油状物。将黄色油状物通过硅胶柱纯化以得到呈黄色油状物的标题化合物(560.00mg，1.68mmol，64.37％产率)。LCMS：333[M+1]。
中间体15：8-羟基-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并 [4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000731
步骤A.10-甲基-8,11-二氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑 并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
在0℃下向10-甲基-8-亚甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体14，1.4g，4.21mmol)在THF(50mL)中的溶液中添加OsO4(107.08mg，421.18μmol，21.85μL)和NaIO4(2.70g，12.64mmol，700.16μL)在H2O(25mL)中的溶液，将混合物在15℃下搅拌16h。将反应混合物在0℃下用饱和NaHCO3水溶液(30mL)淬灭，然后用水(50mL)稀释并用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩滤液。将残余物通过柱色谱法(SiO2)纯化以得到呈黄色固体的标题化合物(0.9g，2.69mmol，63.91％产率)。MS(ESI)：针对C16H22N4O4的计算质量是334.4；m/z实测值是279[M+H-56]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.01(s,2H),4.66(s,2H),4.04(s,2H),3.73(t,J＝5.1Hz,2H),3.20(s,3H),2.76(s,2H),1.49(s,9H)。
步骤B.8-羟基-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4', 3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
在-30℃下向苯基溴化镁(3M，2.09mL)在THF(2mL)中的溶液中添加10-甲基-8,11-二氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(0.7g，2.09mmol)在THF(10mL)中的溶液，将混合物在N2气氛下在15℃下搅拌2h。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(5mL)淬灭并用EtOAc(3mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤并经Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物通过制备型TLC(SiO2)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(0.320g，721.49μmol，34.46％产率，93％纯度)。MS(ESI)：针对C22H28N4O4的计算质量是412.5；m/z实测值是413.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60(d,J＝7.5Hz,2H),7.47-7.31(m,3H),4.90(d,J＝14.4Hz,1H),4.63(s,2H),4.46(d,J＝14.4Hz,1H),3.82(d,J＝5.5,13.4Hz,1H),3.65-3.36(m,3H),3.19(s,3H),2.79-2.65(m,2H),1.49(s,9H)。
中间体16：8-氟-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4', 3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯。
Figure BDA0003377518150000741
在0℃下在N2气氛下向8-羟基-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体15，0.08g，180.37μmol)在DCM(1mL)中的溶液中添加DAST(0.0625g，387.74μmol，51.23μL)在DCM(1mL)中的溶液。将混合物在15℃下搅拌2h。将反应混合物在0℃下用H2O(3mL)淬灭，然后用EtOAc(5mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(5mL)洗涤，经Na2SO4干燥、过滤，并在减压下浓缩滤液。将残余物经由制备型TLC(SiO2)纯化以得到呈白色固体的标题化合物(0.065g，156.83μmol，86.95％产率)。MS(ESI)：针对C22H27N4O3F的计算质量是414.5.4.1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.51-7.33(m,5H),4.90(m,1H),4.73-4.52(m,3H),3.98-3.83(m,1H),3.77-3.48(m,3H),3.23(s,3H),2.80(s,2H),1.54-1.39(m,9H)。
实例1：N-(3-氰基-4-氟苯基)-10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-3,4, 8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000751
步骤A.10-甲基-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-3,4,7,8,9,10-六氢-1H-吡啶并[4', 3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-11(2H)-酮。
向10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2，40.00mg，103.24μmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中添加TFA(770.00mg，6.75mmol，500.00μL)。将反应混合物在15℃下搅拌30min。将混合物在减压下浓缩以得到呈黄色油状物的标题化合物(40.00mg，粗品，TFA盐)，将其不经纯化而直接用于下一步骤。
步骤B.N-(3-氰基-4-氟苯基)-10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-3,4, 8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
向10-甲基-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-2,3,4,7,8,9-六氢-1H-吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-11-酮(40.00mg，99.67μmol，TFA)在DCM(2.00mL)中的混合物中添加TEA(40.34mg，398.66μmol，55.26μL)，随后添加N-(3-氰基-4-氟苯基)氨基甲酸苯酯(25.54mg，99.67μmol)。将反应混合物在15℃下搅拌16h。将反应混合物在减压下浓缩，并且将所得残余物通过RP HPLC(条件A)纯化两次以得到呈白色固体的标题化合物(28.00mg，61.68μmol，61.88％产率，99％纯度)。MS(ESI)：针对C21H20FN9O2的计算质量是449.2；m/z实测值是450[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),7.78(dd,J＝2.8,5.40Hz,1H),7.56-7.64(m,1H),7.13(t,J＝8.7Hz,1H),6.88(s,1H),4.75-4.85(m,2H),4.65-4.74(m,2H),3.90-4.02(m,2H),3.76-3.87(m,3H),3.15(s,3H),2.87(t,J＝5.7Hz,2H)。
实例2：N-(3-氰基-4-氟苯基)-10-甲基-8-(1,2,4-噁二唑-5-基)-11-氧代-3,4, 8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000761
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用10-甲基-8-(1,2,4-噁二唑-5-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体3)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：C21H19FN8O3计算的质量是450.2；m/z实测值是451.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.02(s,1H),8.43(s,1H),7.93(dd,J＝2.8,5.77Hz,1H),7.79(ddd,J＝2.8,4.9,9.3Hz,1H),7.42(t,J＝9.2Hz,1H),4.57(d,J＝3.1Hz,2H),4.38-4.45(m,1H),4.28-4.35(m,1H),3.63-3.80(m,3H),3.58(br dd,J＝5.4,14.8Hz,2H),3.02(s,3H),2.91-3.01(m,2H)。
实例3：N-(3-氰基-4-氟苯基)-10-甲基-11-氧代-8-(1H-四唑-5-基)-3,4,8,9, 10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000771
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用10-甲基-11-氧代-8-(1H-四唑-5-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体4)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C20H19FN10O2计算的质量是450.2；m/z实测值是451.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.05(s,1H),7.93(dd,J＝2.8,5.8Hz,1H),7.79(ddd,J＝2.8,4.9,9.3Hz,1H),7.42(t,J＝9.2Hz,1H),4.74(dd,J＝7.3,14.3Hz,1H),4.61(s,2H),4.53(dd,J＝6.7,14.2Hz,1H),4.09-4.18(m,1H),3.62-3.83(m,4H),3.01(s,3H),2.67-2.73(m,2H)。
实例4：N-(3-氯-4-氟苯基)-10-甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10, 11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000781
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用10-甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体5)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)，并使用(3-氯-4-氟苯基)氨基甲酸苯酯代替步骤B中的(3-氰基-4-氟苯基)氨基甲酸苯酯。MS(ESI)：针对C21H21N7O2ClF的计算质量是457.1；m/z实测值是458.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.62(dd,J＝2.6,6.5Hz,1H),7.56(d,J＝2.2Hz,1H),7.28-7.22(m,1H),7.10-7.03(m,2H),6.28(d,J＝2.3Hz,1H),4.89-4.80(m,1H),4.75-4.64(m,3H),4.10-3.99(m,1H),3.96-3.87(m,1H),3.79-3.769(m,2H),3.57(m,1H),3.09(s,3H),3.08-3.07(m,1H),2.88(br t,J＝5.4Hz,2H)。
实例5：N-(3-氰基-4-氟苯基)-10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-11-氧代-3, 4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺
Figure BDA0003377518150000791
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体6)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C23H23N8O2F的计算质量是462.4；m/z实测值是463.1[M+H]+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(dd,J＝2.8,5.4Hz,1H),7.60(ddd,J＝2.8,4.6,9.1Hz,1H),7.35(d,J＝2.2Hz,1H),7.14(t,J＝8.7Hz,1H),6.87(s,1H),6.17(d,J＝2.3Hz,1H),5.32(s,1H),4.78-4.55(m,4H),3.99-3.91(m,1H),3.90(s,3H),3.88-3.79(m,2H),3.75-3.68(m,1H),3.65-3.57(m,1H),3.17(s,3H),2.88(t,J＝5.7Hz,2H)。
实例6：N-(3-氰基-4-氟苯基)-10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-11-氧代-3, 4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000801
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用10-甲基-8-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体7)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C23H23N8O2F计算的质量是462.2；m/z实测值是463.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝7.79(dd,J＝2.8,5.4Hz,1H),7.61(ddd,J＝2.9,4.6,9.1Hz,1H),7.49(d,J＝2.0Hz,1H),7.15(t,J＝8.7Hz,1H),6.80(s,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),4.73(s,2H),4.67(m,1H),4.51(m,1H),3.94-3.79(m,6H),3.67(m,1H),3.44(m,1H),3.16(s,3H),2.94-2.84(m,2H)。
实例7：(3R,8S*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3- 基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)- 甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000811
步骤A.(3R,8S*)-3,10-二甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,7,8,9,10-六氢-1H-吡啶 并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-11(2H)-酮。
在15℃下向(3R,8S*)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体7，90.00mg，224.74μmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中添加TFA(462.00mg，4.05mmol，300.00μL)，搅拌1h。将混合物在减压下浓缩以得到呈黄色油状物的标题化合物(100.00mg，粗品，TFA)，将其直接用于下一步骤。
步骤B.(3R,8S*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3- 基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)- 甲酰胺。
在15℃下向(3R,8S*)-3,10-二甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-2,3,4,7,8,9-六氢-1H-吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-11-酮(50.00mg，120.66μmol TFA)和N-(3-氰基-4-氟苯基)氨基甲酸苯酯(30.92mg，120.66μmol)在DCM(3.00mL)中的溶液中添加TEA(73.26mg，723.96μmol，100.36μL)，搅拌16h。将混合物在减压下浓缩，并将所得残余物通过RP HPLC(方法A)纯化，以获得呈白色固体的标题化合物(24.00mg，51.89μmol，43.01％产率)。MS(ESI)：针对C23H23FN8O2的计算质量是462.2；m/z实测值是463.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(dd,J＝2.8,5.4Hz,1H),7.63-7.55(m,2H),7.14(t,J＝8.7Hz,1H),6.77(s,1H),6.27(d,J＝2.4Hz,1H),5.20-5.09(m,1H),4.84(d,J＝15.3Hz,1H),4.75-4.60(m,2H),4.51(d,J＝15.2Hz,1H),3.88(m,1H),3.79-3.71(m,1H),3.67-3.59(m,1H),3.15(s,3H),3.04(dd,J＝6.0,15.9Hz,1H),2.71(d,J＝15.9Hz,1H),1.20(d,J＝6.90Hz,3H)。
实例8：(3R,8S*)-N-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡 唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2 (7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000821
标题化合物以类似于实例7中步骤B的方式制备，使用(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸苯酯代替(3-氰基-4-氟苯基)-氨基甲酸苯酯。MS(ESI)：针对C23H23FN8O2的计算质量是505.2；m/z实测值是506.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(dd,J＝2.7,6.1Hz,1H),7.63-7.56(m,2H),7.13(t,J＝9.5Hz,1H),6.68(s,1H),6.27(d,J＝2.4Hz,1H),5.22-5.11(m,1H),4.84(d,J＝15.4Hz,1H),4.75-4.59(m,2H),4.52(d,J＝15.3Hz,1H),3.93-3.83(m,1H),3.79-3.71(m,1H),3.67-3.58(m,1H),3.15(s,3H),3.09-3.01(m,1H),2.71(d,J＝16.1Hz,1H),1.20(d,J＝6.9Hz,3H)。
实例9:。(3R,8R*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3- 基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)- 甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000831
标题化合物以类似于实例7的方式制备，使用(3R,8S)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体9)代替(3R,8R)-3,10-二甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,7,8,9,10-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-11(2H)-酮(中间体8)。MS(ESI)：针对C23H23FN8O2的计算质量是462.19；m/z实测值是463.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(dd,J＝2.76,5.52Hz,1H),7.54-7.64(m,2H),7.13(t,J＝8.7Hz,1H),6.80(s,1H),6.27(d,J＝2.38Hz,1H),5.15(m,1H),4.86(d,J＝15.2Hz,1H),4.61-4.75(m,2H),4.49(d,J＝15.4Hz,1H),3.90(m,1H),3.59-3.76(m,2H),3.16(s,3H),3.05(dd,J＝5.7,15.9Hz,1H),2.69(d,J＝15.9Hz,1H),1.20(d,J＝6.9Hz,3H)。
实例10：(3R,8R*)-N-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H- 吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓- 2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000841
标题化合物以类似于实例7的方式制备，使用(3R,8R*)-3,10-二甲基-11-氧代-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体9a)代替步骤A中的(3R,8S*)-3,10-二甲基-8-(1H-吡唑-3-基)-3,4,7,8,9,10-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-11(2H)-酮(中间体8)，并使用(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸苯酯代替步骤B中的(3-氰基-4-氟苯基)氨基甲酸苯酯。MS(ESI)：针对C23H23F4N7O2的计算质量是505.2；m/z实测值是506.1[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(dd,J＝2.64,6.02Hz,1H),7.63-7.56(m,2H),7.13(t,J＝9.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.27(d,J＝2.3Hz,1H),5.16(m,1H),4.86(d,J＝15.18Hz,1H),4.73-4.61(m,2H),4.50(d,J＝15.3Hz,1H),3.90(m,J＝6.4Hz,1H),3.75-3.60(m,2H),3.17(s,3H),3.09-3.01(m,1H),2.69(d,J＝15.9Hz,1H),1.20(d,J＝6.9Hz,3H)。
实例11：(3R,8S*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧 代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲 酰胺
Figure BDA0003377518150000851
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用(3R,8S*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体10)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C23H22FN7O3的计算质量是463.2；m/z实测值是464.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.48(d,J＝1.5Hz,1H),7.83-7.77(m,1H),7.61-7.53(m,1H),7.20-7.11(m,1H),6.58(s,1H),6.36(d,J＝1.6Hz,1H),5.24-5.06(m,1H),4.82(d,J＝15.0Hz,1H),4.78-4.71(m,1H),4.60-4.47(m,2H),3.99-3.89(m,1H),3.77(d,J＝5.4Hz,1H),3.70(d,J＝5.9Hz,1H),3.19(s,3H),3.08-2.99(m,1H),2.71(d,J＝16.0Hz,1H),1.24-1.14(m,3H)。
实例12：(3R,8R*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧 代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲 酰胺。
Figure BDA0003377518150000861
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用(3R,8R*)-8-(异噁唑-3-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体11)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C23H22FN7O3的计算质量是463.2；m/z实测值是464.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,J＝1.5Hz,1H),7.81(dd,J＝2.8,5.44Hz,1H),7.58(ddd,J＝2.8,4.5,9.1Hz,1H),7.16(t,J＝8.7Hz,1H),6.64(s,1H),6.38(d,J＝1.6Hz,1H),5.16(m,J＝6.11Hz,1H),4.85(d,J＝15.6Hz,1H),4.75(dd,J＝7.0,14.37Hz,1H),4.59(dd,J＝5.6,14.43Hz,1H),4.51(d,J＝15.4Hz,1H),3.99(m,J＝6.4Hz,1H),3.80-3.65(m,2H),3.22(s,3H),3.07(dd,J＝5.9,15.8Hz,1H),2.71(d,J＝16.0Hz,1H),1.22(d,J＝6.8Hz,3H)。
实例13：(3R,8S*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧 代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲 酰胺。
Figure BDA0003377518150000871
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用(3R,8S*)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体12)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C23H22FN7O3的计算质量是463.2；m/z实测值是464.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(d,J＝1.7Hz,1H),7.80(dd,J＝2.7,5.32Hz,1H),7.61-7.55(m,1H),7.16(t,J＝8.7Hz,1H),6.59(s,1H),6.29(d,J＝1.2Hz,1H),5.19-5.10(m,1H),4.83(d,J＝15.4Hz,1H),4.76(dd,J＝7.3,14.1Hz,1H),4.65-4.56(m,1H),4.51(d,J＝15.2Hz,1H),4.01(m,J＝5.5Hz,1H),3.86(dd,J＝5.3,14.98Hz,1H),3.64(dd,J＝5.6,14.98Hz,1H),3.17(s,3H),3.05(dd,J＝5.7,15.96Hz,1H),2.72(d,J＝16.5Hz,1H),1.22(d,J＝7.0Hz,3H)。
实例14：(3R,8R*)-N-(3-氰基-4-氟苯基)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧 代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲 酰胺。
Figure BDA0003377518150000881
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用(3R,8R*)-8-(异噁唑-5-基)-3,10-二甲基-11-氧代-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体13)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C23H22FN7O3的计算质量是463.2；m/z实测值是464.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.28(d,J＝1.6Hz,1H),7.80(dd,J＝2.7,5.3Hz,1H),7.58(m,1H),7.16(t,J＝8.7Hz,1H),6.63(s,1H),6.29(d,J＝1.22Hz,1H),5.15(m,J＝6.97Hz,1H),4.85(d,J＝15.3Hz,1H),4.79-4.70(m,1H),4.66-4.58(m,1H),4.49(d,J＝15.3Hz,1H),4.07-3.98(m,1H),3.83(dd,J＝5.7,15.1Hz,1H),3.68-3.58(m,1H),3.19(s,3H),3.06(dd,J＝5.8,16.0Hz,1H),2.70(d,J＝15.4Hz,1H),1.22(d,J＝7.0Hz,3H)。
实例15：N-(3-氰基-4-氟苯基)-11-羟基-13-甲基-14-氧代-11-苯基-4,8,9,13- 四氮三环[7.5.0.02,7]十四-1,7-二烯-4-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000891
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用8-羟基-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体15)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C25H23N6O3F的计算质量是474.2；m/z实测值是475.2[M+H]+。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78-7.76(m,1H),7.65-7.53(m,3H),7.48-7.35(m,3H),7.14(t,J＝8.7Hz,1H),6.68(s,1H),4.96(d,J＝14.3Hz,1H),4.81-4.62(m,2H),4.49(d,J＝14.4Hz,1H),3.97-3.81(m,2H),3.63-3.39(m,2H),3.24(s,3H),2.90(t,J＝5.7Hz,2H),2.49(s,1H)。
实例16：N-(3-氰基-4-氟苯基)-8-氟-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11- 六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酰胺。
Figure BDA0003377518150000892
标题化合物以类似于实例1的方式制备，使用8-氟-10-甲基-11-氧代-8-苯基-3,4,8,9,10,11-六氢-1H-吡啶并[4',3':3,4]吡唑并-[1,5-a][1,4]二氮杂卓-2(7H)-甲酸叔丁酯(中间体16)代替步骤A中的10-甲基-11-氧代-8-(1H-1,2,4-三唑-3-基)-1,3,4,7,8,9-六氢吡啶并[2,3]吡唑并[2,4-b][1,4]二氮杂卓-2-甲酸叔丁酯(中间体2)。MS(ESI)：针对C25H22F2N6O2的计算质量是476.5；m/z实测值是477.2[M+H]+。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.78(d,J＝2.8,5.5Hz,1H),7.60(m,1H),7.50-7.34(m,5H),7.14(t,J＝8.7Hz,1H),6.81(s,1H),4.97(d,J＝6.8,14.7Hz,1H),4.85-4.60(m,3H),3.95-3.84(m,2H),3.78-3.53(m,2H),3.26(s,3H),2.92(t,J＝5.8Hz,2H)。
生物学数据
HBV复制抑制测定
在感染或转染了HBV的细胞或具有稳定整合的HBV的细胞(例如HepG2.2.15细胞)中确定了所披露的化合物对HBV复制的抑制作用(Sells等人1987)。在此实例中，HepG2.2.15细胞被维持在含有10％胎牛血清(FBS)、遗传霉素、L-谷氨酰胺、青霉素和链霉素的细胞培养基中。将HepG2.2.15细胞以40,000个细胞/孔的密度接种于96孔板中，并在棋盘格(checker box)格式中用最终DMSO浓度为0.5％的系列稀释的化合物单独处理或通过添加药物组合进行处理。将细胞与化合物孵育三天，然后去除培养基，并将含有化合物的新鲜培养基加入细胞中，并再孵育三天。第6天，去除上清液，并在37℃用DNase处理60分钟，然后在75℃酶失活15分钟。通过在含有2.5μg蛋白酶K的裂解缓冲液(Affymetrix QS0010)中在50℃孵育40分钟将衣壳化的HBV DNA从病毒体中释放出来并共价连接至HBV聚合酶。根据制造商((美国昂飞公司)Affymetrix)推荐，通过添加0.2M NaOH使HBV-DNA变性，并使用分支DNA(BDNA)QuantiGene测定试剂盒进行检测。还使用基于衣壳化HBV DNA(用快速提取溶液(Epicentre生物技术公司)提取)的扩增和使用可以与HBV DNA杂交的HBV特异性PCR探针和用于定量的荧光标记探针的HBV DNA的扩增进行qPCR定量HBV DNA的水平。此外，根据制造商的方案(普洛麦格公司(Promega))，使用CellTitre-Glo试剂确定单独或与测试化合物组合孵育的HepG2.2.15细胞的细胞活力。从所有其他样品中减去仅含有培养基的孔的平均背景信号，并使用方程E1将0.5％DMSO处理的HepG2.2.15细胞的信号归一化，计算每种化合物浓度下的抑制百分比。
E1：％抑制＝(DMSOave-Xi)/DMSOave x 100％
其中，DMSOave是从用DMSO对照(0％抑制对照)处理的孔计算的平均信号，Xi是从单独的孔测量的信号。利用Graphpad Prism软件(圣地亚哥，加利福尼亚州)和方程E2，通过非线性拟合确定EC50值，即达到50％抑制效果的有效浓度。
E2：Y＝Ymin+(Ymax-Ymin)/(1+10(LogEC50-X)x希尔斜率)
其中Y表示抑制百分比值，并且X表示化合物浓度的对数。
如上所述，在HBV复制测定(BDNA测定)中对选择的披露的化合物进行测定，并且这些活性化合物的代表性组示于表3中。表3显示了一组选择的化合物通过BDNA测定获得的EC50值。
表3.
Figure BDA0003377518150000911
Figure BDA0003377518150000921
Figure BDA0003377518150000931
Figure BDA0003377518150000941
Figure BDA0003377518150000951
所披露的主题不被本文所述的具体实施例和实例限于一定的范围。实际上，从前述说明和附图，除了所述的那些以外的本披露的不同修改对于本领域的技术人员而言将是显而易见的。此类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。
本文引用的所有参考文献(例如，公开物或专利或专利申请)通过引用以其全文并入本文，并且出于所有目的其程度正如将每个单独的参考文献(例如公开物或专利或专利申请)具体地且单独地指明出于所有目的通过引用以其全文并入。其他实施例在以下权利要求内。

Claims (21)

1.一种具有式(I)的化合物
Figure FDA0003377518140000011
其中
R1是C6-10芳基或5或6元杂芳基，其中R1任选地被选自甲基或氟的取代基取代；
R2独立地选自由以下组成的组：氢和C1-6烷基；
R3选自由以下组成的组：Cl、CN和C1-4卤代烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、羟基、氟和甲基；并且
X是CF或N；
或其对映异构体、非对映异构体或药学上可接受的盐形式。
2.如权利要求1所述的化合物，其中，R1独立地选自：1H-1,2,4-三唑-3-基、1,2,4-噁二唑-5-基、1H-四唑-5-基、1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-3-基、1-甲基-1H-吡唑-5-基、异噁唑-3-基、异噁唑-5-基、或苯基。
3.如权利要求1所述的化合物，其中，R2是甲基。
4.如权利要求1所述的化合物，其中，R3是Cl、CN或C1-4卤代烷基。
5.如权利要求1所述的化合物，其中，R2是氢。
6.如权利要求1所述的化合物，其中，X是CF。
7.如权利要求1所述的化合物，其中，X是N。
8.如权利要求7所述的化合物，其中，
Figure FDA0003377518140000021
是3-氰基-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、或4-氟-3-三氟甲基苯基。
9.如权利要求1所述的化合物，其中，R4是氢、羟基或氟。
10.如权利要求1所述的化合物，其中，R4是羟基。
11.如权利要求1所述的化合物，其中，R4是氟。
12.一种化合物，其选自由以下组成的组：
Figure FDA0003377518140000022
Figure FDA0003377518140000031
及其药学上可接受的盐、N-氧化物或溶剂化物。
13.一种药物组合物，其包含：
(A)选自以下的至少一种化合物：具有式(I)的化合物，其中：
Figure FDA0003377518140000032
其中
R1是C6-10芳基或5或6元杂芳基，其中R1任选地被选自甲基或氟的取代基取代；
R2独立地选自由以下组成的组：氢和C1-6烷基；
R3选自由以下组成的组：Cl、CN和C1-4卤代烷基；
R4选自由以下组成的组：氢、羟基、氟和甲基；并且
X是CF或N；
以及具有式(I)的化合物的药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体、同位素变体或N-氧化物；以及
(B)至少一种药学上可接受的赋形剂。
14.一种药物组合物，其包含至少一种如权利要求12所述的化合物以及至少一种药学上可接受的赋形剂。
15.一种治疗有需要的个体的HBV感染的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的化合物。
16.一种抑制或减少有需要的个体的含HBV DNA颗粒或含HBV RNA颗粒的形成或存在的方法，该方法包括向该个体施用治疗有效量的如权利要求1所述的化合物。
17.如权利要求15或16所述的方法，其进一步包括向该个体施用至少一种另外的治疗剂。
18.如权利要求17所述的方法，其中，该另外的治疗剂选自由以下组成的组：HBV聚合酶抑制剂、免疫调节剂、干扰素、病毒进入抑制剂、病毒成熟抑制剂、衣壳组装调节剂、逆转录酶抑制剂、亲环蛋白/TNF抑制剂、TLR-激动剂和HBV疫苗。
19.如权利要求18所述的方法，其中，该逆转录酶抑制剂选自由以下组成的组：齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、ddA、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨、恩替卡韦、阿立他滨、阿替韦拉平、病毒唑、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦、替诺福韦、阿德福韦、PMPA、西多福韦、依法韦仑、奈韦拉平、地拉夫定和埃曲韦林。
20.如权利要求18所述的方法，其中，该TLR-激动剂选自由以下组成的组：SM360320(9-苄基-8-羟基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)和AZD 8848([3-({[3-(6-氨基-2-丁氧基-8-氧代-7,8-二氢-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-吗啉基)丙基]氨基}甲基)苯基]乙酸甲酯)。
21.如权利要求18所述的方法，其中，该治疗剂是选自由以下组成的组的HBV疫苗：RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B和SHANVAC B。
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