CN113855764A - 用于提高机体免疫力的中药复方制剂 - Google Patents
用于提高机体免疫力的中药复方制剂 Download PDFInfo
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Abstract
用于提高机体免疫力的中药复方制剂,由黄精、枸杞子、大枣、陈皮、灵芝和甘草组成,其中以重量份计,黄精:12~21份;枸杞子:15~30份;大枣:9~15份;陈皮:6~9份;灵芝:5~15份;以及甘草:3~6份。本发明的中药复方制剂可以作为提高机体免疫力的药食两用复方,尤其适用作绿色保健饮料产品。
Description
技术领域
本发明涉及一种可用于提高机体免疫力的中药复方制剂。
背景技术
科学研究发现,免疫功能的下降多由生活节奏的加快,生活压力的加大、生活习惯的改变等引起的长期性睡眠不足,持续性情绪压抑以及营养不良、过剩、反复性的减肥等引起。同时,现阶段出现的各种环境污染也是威胁人体免疫功能的一大因素。研究表明,空气中的可吸入颗粒物,沙尘污染,室内外环境中的废气等,均可造成人体免疫能力的下降,从而影响人体健康。因此,人体的自发性衰老、过度疲劳、心理因素、环境污染等方面都会造成人体免疫能力的降低,使人体易疲惫、易感冒、容易感染各种疾病甚至罹患肿瘤的风险增加。因此,随着当前我国老龄化人口加剧,全民亚健康状态严峻。
随着现代免疫学的深入发展,人们认识到人体内有一个完善的免疫系统,有各种免疫活性细胞及其产生的多种淋巴因子与抗体,在神经与内分泌激素的调节下,用以维护人体的生理平衡。这一结果与传统中医整体论不谋而合。我国传统中医理论认为,疾病就是正气与邪气二对矛盾斗争的过程。机体正气的强弱,直接关系到疾病的发生、发展与转归。
中医的“气”与人体防御功能有关,如果“气”充沛,脏腑功能健全,抗病能力自然也强。中医的“气”由肺吸入的精气、脾运化水谷的精气与肾的先天精气三部分组成,因而“气”与肺、脾、肾三脏有关。与免疫关系最密切的为“肾”,“肾为先天之本”,肾主藏精、纳气。现代医学研究认为中医的“肾”与内分泌功能有密切关系,肾虚病人存在下丘脑—垂体—肾上腺皮质反应功能低下,细胞免疫与体液免疫功能降低,微循环灌注不足。中医认为“肾主骨”,“骨生髓”,肾与免疫活性细胞生成有关。肾虚病人补肾后免疫功能可以改善。脾为人身气血生化之源,“脾为后天之本”。现代医学研究认为中医的“脾”包括现代解剖学的脾、造血器官、淋巴器官等,与免疫不可分割。脾也代表消化系统,有认为消化系统中肠—肝—脾为一免疫整体,是免疫的物质基础。脾虚者有免疫功能低下,补脾后可恢复。肺主气,肺气充足与否和人体免疫防御作用强弱有关。中医认为“肺主皮毛”,肺气充沛则腠理固密,外邪不易侵入;肺气虚弱则人体防卫功能削弱,外邪易入侵。现代医学研究发现肺气虚病人免疫功能降低,CAMP水平也降低。不少补益肺气的中药方剂具有提高免疫功能作用。
而作为中医理论中提高机体抗邪、抗病能力的一种治疗原则,扶正即是指扶助机体的正气,增强体质,主要适用于虚证,即所谓“虚则补之”。扶正是对虚证选用具有补益、强壮的方药,来调补人体脏腑经络、气血津液等的不足,以调动机体的抗病力,提高机体的免疫功能,增强其稳定性,是通过增强正气的方法,驱邪外出,恢复健康状况,即所谓“正盛邪自祛”。
从中医学角度分析,虚证的发生,与肺、脾、肾三脏关系密切。故,调补脾肾是扶正的主要环节,但扶正并非简单的支持疗法,它是通过机体自稳调节机制,充分调动人体的抗病能力,使机体阴阳得以平衡,达到防病治病之目的。扶正药具有广泛的提高免疫的作用,由此通过增强免疫抗病能力维持内环境的稳定,使正复邪去,五脏安和。扶正是中医药的治疗特色,也是中医药免疫作用的特色。
发明内容
本发明的目的是提供一种可药食两用的可提高机体免疫力的中药复方制剂。
根据本发明的第一方面,提供了一种用于提高机体免疫力的中药复方制剂,由黄精、枸杞子、大枣、陈皮、灵芝和甘草组成,其中以重量份计,黄精:12~21份;枸杞子:15~30份;大枣:9~15份;陈皮:6~9份;灵芝:5~15份;以及甘草:3~6份。
本发明的复方制剂可以采用多种剂型,例如水提原液形式或添加辅料并干燥后制成的颗粒冲剂或胶囊等形式。辅料可以采用可溶性淀粉和糊精混合物等。
根据本发明的另一方面,提供了一种可用于(辅助)提高机体免疫力的保健饮品,包含上述中药复方制剂。
发明人通过多年精心筛选,形成了一种安全有效的用于提高机体免疫力的中药复方,其中黄精性甘味平,归脾、肺、肾经,具有补气养阴,健脾,润肺,益肾之功效,用于脾胃气虚,体倦乏力,胃阴不足,口干食少,肺虚燥咳,精血不足,腰膝酸软;枸杞子性甘味平,归肝、肾经,具有滋补肝肾,益精明目等效用,用于虚劳精亏,腰膝酸痛,眩晕耳鸣,血虚萎黄,目昏不明;大枣性甘味温,归脾、胃、心经,具有补中益气,养血安神之功效,用于脾虚食少,乏力便溏;陈皮性苦味辛、温,归肺、脾经,具有理气健脾,燥湿化痰之功能,用于脘腹胀满,食少吐泻,咳嗽痰多;灵芝性甘味平,归心、肺、肝、肾经,补气安神,止咳平喘,用于心神不宁,失眠心悸,肺虚咳喘,虚劳短气,不思饮食;甘草性甘味平,归心、肺、脾、胃经,有补脾益气,清热解毒,祛痰止咳,调和诸药之功效,用于脾胃虚弱,倦怠乏力,心悸气短,咳嗽痰多,脘腹、缓解药物烈性。该中药复方在体内发挥功效时不仅与免疫系统关系密切的脾、肺、肾有关,还与心、肝有关,能够通过调节人体内部整体机能,达到提升免疫系统功能的效用。
附图说明
图1A-1C为实验周期结束时中药复方不同剂量对小鼠体质量和脏器指数的影响;
图2A和2B为实验周期结束时中药复方不同剂量对小鼠血清溶血素(HC50)含量和腹腔巨噬细胞吞噬鸡血细胞百分率的影响;以及
图3A-3C为实验周期结束时中药复方不同剂量对小鼠血清中免疫细胞因子IL-6,TNF-α和IFN-γ含量的影响。
所有图中统计学显著性分析表示为:*,与正常空白组比较,p<0.05。
具体实施方式
下面结合具体实例和附图对本发明做进一步说明,本领域技术人员应该理解,实例和附图只是为了更好地理解本发明,并不用来做出任何限制。
制备中药复方原液
按重量份称取黄精36g,枸杞子45g,大枣27g,陈皮14g,灵芝24g和甘草9g(均为市购),加入纯净水1550mL,然后常压下加热煮沸,计时0.5h,将提取液室温放凉后,采用8层纱布进行过滤,收集滤液备用,滤渣再加入1550mL饮用水,重复提取1次,即同一批原料先后共提取2次,第二次提取后,弃掉滤渣,合并2次的提取液,减压浓缩后获得1550mL原液。
制备复方颗粒制剂
向上述原液中加入77.5g混合辅料:可溶性淀粉和糊精混合物(二者质量比为4:1),搅拌均匀后喷雾干燥,制得可例如用于冲服的颗粒制剂或固体饮料粉末91g。
复方颗粒制剂营养性能测试
将上述制备的复方颗粒制剂送经第三方营养标签检测(北京营养源研究所),得到营养成分结果如表1所示。
表1
作为保健食品服用时,上述制备的固体饮料粉末的推荐剂量(成人)可以为:每日三次,每次20g。
动物建模免疫对照实验
实验材料
SA缓冲液(上海源叶生物有限公司);2%压积羊血细胞(SRBC)、10%SRBC和1%鸡红细胞(郑州九龙生物制品有限公司);文齐试剂(天津市现代高科技研究院中山研究所);溴甲酚紫(天津市巴斯夫化工有限公司);Giemsa染液、Hanks液和补体(豚鼠血清)(北京耀威振兴科技有限公司);无支原体小牛血清(浙江天航生物科技有限公司)。
受试物的制备
中药复方制剂则采用上述配方制备的复方原液。
香菇多糖溶液的配制:根据香菇多糖胶囊(湖北创力药业有限公司,产品批号:20160502)使用说明书,将每人每天应服用药物的重量,按比例折合成小鼠的灌胃量,称量适量香菇多糖胶囊内容物,蒸馏水溶解,配置为30.83mg·mL-1阳性药液。4℃保存。共计14mL。其为5天使用量,冷藏于4℃冰箱,随用随取。
实验动物与分组
BALB/c小鼠:雄性,18-22g,50只;由中国医学科学院药用植物研究所动物实验中心提供,许可证编号:SYXK(京)2016-0002。在药用植物研究所动物管理中心饲养(SPF级),实验期间自然光照,自由饮食,温度23~26℃,湿度45%~65%,实验前小鼠适应性喂养3-5天,根据体重随机分组。
①正常空白组:0.2mL蒸馏水;[简称:KB]
②阳性药香菇多糖组:每日灌胃香菇多糖片水溶液0.3084g/kg体重;[简称:YX]
③中药复方低剂量组:复方原液7.5g/kg体重;[简称:QH-L]
④中药复方中剂量组:复方原液10.9g/kg体重;[简称:QH-M]
⑤中药复方高剂量组:复方原液15g/kg体重。[简称:QH-H]实验方法
小鼠连续给药30天后,称量小鼠重量,乙醚麻醉,摘眼球取血,然后脱颈处死,分别取腹腔巨噬细胞,取脾脏、胸腺,测定相关指标。
(1)体重
灌胃,每周检测体重1次,末次给药后,禁食12h,测小鼠体重。
(2)脏器指数
小鼠采取脱颈的方法处死,摘取脾脏及胸腺,用生理盐水洗去血液,滤纸吸干多余生理盐水后称重,计算脏器指数。
(3)血清溶血素水平(HC50)测定
选择用血清溶血素水平结果来反应小鼠的体液免疫功能的强弱。实验结果以小鼠血清HC50值表示。血清溶血素实验方法及数据处理如下:
灌胃第26天时,对小鼠进行致敏实验。其操作为:每只小鼠在腹腔注射2%的压积羊血红细胞,剂量为每只小鼠0.2mL。灌胃第30天后,禁食12h,乙醚麻醉小鼠,对其进行摘眼球取血,取血时注意血应贴管壁滑落,以防止出现溶血现象。血在4℃下静置24h后,离心,分离血清,-20℃冷冻备用。实验检测前,取出解冻,每管取血清10μL,用1mL稀释后的SA缓冲液进行稀释,备用。取一96孔培养板划分设置对照孔与样品孔。对照孔为空白对照,每孔中加入100μL已经稀释过的SA缓冲液;样品孔每孔中加入已用SA缓冲液稀释过的血清100μL。装样完毕后,空白孔和样品孔再依次加入10%(v/v)的压积羊血红细胞50μL,补体100μL。覆膜后,将96孔培养板放置于恒温水浴中,37℃,30min,取出,置入离心机中,以每分钟1500转的转速离心10min。精密吸取各培养孔中的上清液50μL,放入另一新的96孔培养板中,其后每孔加入文齐试剂150μL。同时,在新96孔培养板内设置半数溶血孔,半数溶血孔中加入10%(v/v)压积羊血红细胞12.5μL后加入文齐试剂补至200μL。震荡,混匀,覆膜,放置10min后,用全自动酶标仪在540nm处测定光密度值,计算HC50值。
血清中溶血素的含量用半数溶血值(HC50)表示,其计算公式如下。判定标准则是:若受试样品组的HC50值显著高于对照组的HC50值,则可判定该项实验的实验结果为阳性。
(4)小鼠单核巨噬细胞吞噬能力的测定
灌胃第26天时,对小鼠进行致敏,采用以下操作:每只小鼠在腹腔注射0.2mL的2%压积羊血红细胞。灌胃30天后,禁食12h,乙醚麻醉小鼠,脱颈处死。将处死的小鼠保持头低臀高的姿态,腹腔注入4mL的含有小牛血清的Hank's液,轻揉小鼠腹部,以便腹腔巨噬细胞能够充分的被Hank’s液洗出。实验时应注意腹腔注射Hank's液的位置,应有落空感,及按揉小鼠腹部时避免出血。按揉之后,小鼠放平,剪开小鼠的腹部,将胶头吸管插入小鼠腹腔中,吸取约2mL左右的腹腔洗液,将腹腔洗液置于试管内,备用。注意防止小鼠的毛发掉入腹腔洗液中。首先用移液枪吸取试管内腹腔洗液0.5mL,再加入0.5mL的1%鸡血红细胞悬液,混合均匀在一个试管内。再用移液枪吸取0.5mL的混合液,缓慢滴于洁净的载玻片上,涂均。然后将载玻片放在铺有潮湿纱布的托盘内(纱布注意保持湿润),放入37℃的孵箱内,孵育20min。孵育结束后,拿出载玻片迅速用生理盐水将未贴壁细胞冲洗掉。其后用甲醇滴于载玻片上进行固定,约1min左右,之后将载玻片上用Giemsa液进行染色,大约15min。用蒸馏水轻轻冲洗载玻片,自然晾干。显微镜计数,计算吞噬率。吞噬率为每100个巨噬细胞中,吞噬鸡红细胞的巨噬细胞所占的百分率。
本实验以吞噬百分率表示小鼠巨噬细胞的吞噬能力,吞噬百分率需进行数据转换,转换公式为公式中P为吞噬百分率,用小数表示。在进行方差分析时,若受试样品组的吞噬百分率与对照组相比较,其差异均有显著性,则可判定该项实验结果阳性。
(5)白细胞介素-6(IL-6)
按照试剂盒中提供的相关使用说明,将血清等所用样品、试剂等按要求配置。将96孔板划分为标准曲线区、样品区及空白区。按照要求进行加样,在标准曲线区、样品区、空白区中依次加入标准液、样品,及稀释液。盖膜、压紧后、在恒温37℃,湿润的环境下孵化2h。取出,倒掉孔中多余液体,手动甩干,用洗液洗涤4次,每次使用350μL的洗液。其后,尽可能除去孔中洗液。每孔均加入100μL的已稀释好的抗体检测溶液,覆膜,密封,在37℃的潮湿环境下孵化1h后,倒尽孔中液体,洗液洗涤4次(方法同上)。每孔再加入100μL的已稀释过的HRP,在37℃湿润环境下孵化40min,洗液继续洗涤4次,甩干。洗板后,每孔加入100μL的TMB,避光37℃的条件下孵化20min后每孔加入100μL的终止液,37℃避光下孵化20min之后,在450nm与630nm下采用酶标仪读取吸光度(A)。计算血清中白细胞介素-6的含量。
(6)干扰素-γ(INF-γ)
按要求配置相关试剂及样品。按照要求在96孔板依次加入标品、样品。盖好膜后在室温下孵化2.5h。弃去液体,用洗液洗涤4次,每孔每次使用300μL的洗液,其后,除尽孔中洗液,甩干。每孔均加入100μL的配置后的抗体溶液,盖膜,室温下培养1h后,弃去液体并洗涤,洗涤方式同上。然后,每孔加入100μL的HRP,在室温轻摇条件下培养45min,再次进行洗板,方法同前。洗板后,每孔加入100μL的TMB,避光、室温、轻摇条件下孵化30min后每孔加入100μL的终止液后,立即在450nm下采用酶标仪读取吸光度(A)。并计算血清中干扰素-γ的含量。
(7)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)
按照试剂盒中提供的相关使用说明,将血清等所用样品、试剂等按要求配置,稀释。将96孔板划分为标准曲线区、样品区。按照要求进行加样,在标准曲线区、样品区中依次加入标准液、样品溶液后再加入50μL的混合型抗体。盖膜,室温下孵化1h。取出后,弃去液体后,用洗液洗板3次,每次每孔350μL,最后一次洗板后,倒扣培养板,用纸吸取多余液体。每孔加入100μL的显色液,避光常温孵化20min。再加入100μL的终止液,振摇1min后,在450nm下进行检测。读取吸光度(A)。并计算血清中肿瘤坏死因子-α的含量。
实验结果分析
(1)灌胃第30天(d)实验周期结束时,由图1A显示,经统计学分析,所有组别小鼠体重均有所增加且各组间均无显著性差异(p>0.05),说明本中药复方对正常小鼠体重无显著影响;
(2)通过脾脏指数和胸腺指数(图1B和1C)可以发现,各组间脾脏指数均无显著性差异(p>0.05);复方中剂量组与正常空白组小鼠(KB)比较,显著性增加(p<0.05),其他组均无显著性差异(p>0.05)。说明本中药复方样品的中剂量能显著增加小鼠胸腺指数,提升免疫器官胸腺的质量,进行提高机体免疫功能;
(3)在体液免疫中,血清溶血素含量越高,说明样品提升免疫能力越好。由图2A可知,与空白组比较,各样品组均有显著性差异(p<0.05),提高百分比分别为YX-68.82%,QH-L-89.60%,QH-M-63.45%,QH-H-99.1%。说明本中药复方的不同剂量均能够显著增强动物机体的体液免疫活性;
(4)由图2B可知,与正常空白组相比,各给药组吞噬细胞活力均显著性增加(p<0.05),提高百分比分别为71.41%,68.48%,77.85%,84.78%,说明本复方均有提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性的能力;
(5)由图3A-3C可知,与正常空白组比较,只有TNF-α因子各组无显著性差异,在IL-6因子含量方面,阳性药组和中药复方低、中剂量组呈现显著性提高,提高百分比分别为664.23%,321.21%,524.19%;在IFN-γ因子含量方面,中药复方低、中和高剂量组均呈现显著性提高,提高百分比分别为130.50%,57.69%,67.95%,表明本中药复方能显著提升机体血清中的免疫因子水平,从而提高机体免疫功能;
综上所述,本中药复方能同时显著提高其体液免疫功能和单核细胞非特异性免疫功能两个方面,表明其具有良好的增强机体免疫力的功能作用。本发明的中药复方可以作为药食两用复方,尤其适用作绿色保健饮料产品。
Claims (4)
1.一种用于提高机体免疫力的中药复方制剂,由黄精、枸杞子、大枣、陈皮、灵芝和甘草组成,其中以重量份计,黄精:12~21份;枸杞子:15~30份;大枣:9~15份;陈皮:6~9份;灵芝:5~15份;以及甘草:3~6份。
2.根据权利要求1的复方制剂,其中该制剂为水提液形式。
3.根据权利要求1的复方制剂,其中该制剂为颗粒冲剂或胶囊形式。
4.一种用于提高机体免疫力的保健饮品,包含权利要求1的中药复方制剂。
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