CN113853964A - 一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，三次震荡处理澳洲坚果种子，能有效提高澳洲坚果幼苗的生长能力和适应能力，栽培得到的澳洲坚果嫁接用砧木适应能力强，使得嫁接上去的化学诱变接穗条上的嫩芽的成活率更高；通过嫩芽嫁接技术有效解决了诱变后的嫩芽无法正常生长发育的问题，提高其成活率；采用紫外线、红外线交替辐照，可以极大提升诱变效果；在诱变膏剂中加入了适量的聚乙二醇，起到加强诱变效果的作用，芽尖部位不易发生畸变且诱变效果好；将涂抹有诱变膏剂的接穗条中低温保存，多次改变环境温度，刺激接穗条诱变，诱变效果更好；诱变膏剂还加入了正丁醇，有助于亚硝基乙基脲的释放，起到加强诱变效果的作用。
Description
技术领域
本发明涉及农业种植技术领域，具体涉及一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法。
背景技术
澳洲坚果别名:昆士兰栗、澳洲胡桃、夏威夷果、昆士兰果，是一种原产于澳洲的树生坚果。澳洲坚果属常绿乔木，双子叶植物。树冠高大，叶3～4片轮生，披针形、革质，光滑，边缘有刺状锯齿。总状花序腋生，花米黄色，果圆球形，果皮革质，内果皮坚硬，种仁米黄色至浅棕色。适合生长在温和、湿润、风力小的地区。在世界上众多的干果之中，澳洲坚果的经济价值最高，素来享有“干果之王”的誉称。澳洲坚果果仁营养丰富(呈奶白色)，其外果皮青绿色，内果皮坚硬，呈褐色，单果重15-16克，含油量70%左右，蛋白质9%，含有包括人体必需的8种氨基酸在内的17种氨基酸，还富含矿物质和维生素。夏威夷果(澳洲坚果)果仁香酥滑嫩可口，有独特的奶油香味，是世界上品质最佳的食用用果，有“干果皇后”，“世界坚果之王”之美称，风味和口感都远比腰果好。澳洲坚果除了制作干果外，还可制作糕点、巧克力、食用油、化妆品等。此外澳洲坚果还具有很高的营养价值和药用价值。
目前澳洲坚果的组织快繁技术不成熟，诱变后的组织或器官难以独立培育成苗。通过嫩芽嫁接技术有效解决了诱变后的嫩芽难以正常生长发育的问题，提高其成活率，便于后期有益变异和目标性状的筛选。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种成活率高、重现性好的嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡20～30min,沥干水分，在频率为60～80次/秒的条件下震荡处理20～25min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡30～45min，沥干水分，再在频率为40～50次/秒的条件下震荡处理12～14min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为20～40g/kg的生石灰、浓度为12～15g/kg的氯化钠和浓度为30～40g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子10～15min，沥干水分，再在频率为100～120次/分钟的条件下震荡处理5～8min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为31～34℃的浸泡液中恒温浸泡2.5～3.5h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为30～50g/kg的生石灰和浓度为15～25g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为5000～9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.06～1.12W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为8000～10000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.15～3.25W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度15～18℃，相对湿度55～60%，保存时间30～35min；低温阶段：恒温箱温度10～13℃，相对湿度65～70%，保存时间3～4h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4～8份、植物油15～20份、动物油30～40份、亚硝基乙基脲0.5～0.7份、聚乙二醇3～5份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
进一步地，所述步骤S2中将种子放入杀菌液中杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为10～15g/kg的多杀菌素和浓度为30～35g/kg的甲基托布津。
进一步地，所述步骤S3中，具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25～30min,沥干水分，在频率为65～80次/秒的条件下震荡处理22～25min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35～45min，沥干水分，再在频率为45～50次/秒的条件下震荡处理13～14min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25～40g/kg的生石灰、浓度为13～15g/kg的氯化钠和浓度为35～40g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12～15min，沥干水分，再在频率为110～120次/分钟的条件下震荡处理6～8min，得到三次震荡处理的种子。
进一步地，所述步骤S4中将三次震荡处理的种子，放入温度为32～34℃的浸泡液中恒温浸泡2.8～3.5h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35～50g/kg的生石灰和浓度为18～25g/kg的海藻酸钠。
进一步地，所述步骤S5中将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗。
进一步地，所述步骤S6中将幼苗移栽到种植田，苗高长至36～40㎝，茎粗0.7～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木。
进一步地，所述步骤S8中，具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000～9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08～1.12W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000～10000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65～3.25W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条。
进一步地，所述步骤S9中用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16～18℃，相对湿度58～60%，保存时间32～35min；低温阶段：恒温箱温度12～13℃，相对湿度68～70%，保存时间3.5～4h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5～8份、植物油16～20份、动物油35～40份、亚硝基乙基脲0.6～0.7份、聚乙二醇4～5份。
进一步地，所述步骤S9中所述诱变膏剂还包括2～5重量份的正丁醇。
进一步地，所述步骤S10中嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的3～5天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的10～15天取下嫁接部位包裹的透明薄膜。
本发明的有益效果是：本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，澳洲坚果种子先经过一次震荡处理，有助于破坏澳洲坚果种子果壳表皮组织，从而有助于澳洲坚果种子果壳表皮在二次震荡过程中吸附前处理液；澳洲坚果种子经过二次震荡处理，澳洲坚果种子果壳表皮组织吸附了足量的吸附前处理液，能够增强种子萌发力，缩短种子萌发时间；澳洲坚果种子经过三次震荡处理，有助于破坏澳洲坚果种子果壳表皮组织，进一步增强种子萌发力，缩短种子萌发时间；浸泡澳洲坚果种子时，浸泡液以沼液为溶剂，能让澳洲坚果种子果壳表皮组织吸附更多营养成分，浸泡液中还加入一定量的生石灰和海藻酸钠，对澳洲坚果种子再次杀菌的同时，还不影响澳洲坚果种子正常出苗；三次震荡处理澳洲坚果种子，能有效提高澳洲坚果幼苗的生长能力和适应能力，栽培得到的澳洲坚果嫁接用砧木适应能力强，使得嫁接上去的化学诱变接穗条上的嫩芽的成活率更高。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，由于澳洲坚果的组织快繁技术不成熟，诱变后的组织或器官难以独立培育成苗，本申请先诱变带2-4芽节的接穗条，之后用化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木上，通过嫩芽嫁接技术有效解决了诱变后的嫩芽的正常生长发育，提高其成活率，便于后期有益变异和目标性状的筛选。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，接穗条的诱变单采用紫外线辐照或是红外线辐照时，诱变效果不佳，采用紫外线、红外线交替辐照，可以极大提升诱变效果；诱变膏剂中的主要成分为亚硝基乙基脲，亚硝基乙基脲的作用机制是烷化作用，作用重点是核酸，导致DNA断裂、缺失或修补，实现诱变；诱变膏剂的使用方法为涂抹在物理诱变接穗条的芽尖部位，诱变膏剂中含过量的亚硝基乙基脲时，芽尖部位易发生畸变，亚硝基乙基脲含量较低时，诱变效果较差，为此在诱变膏剂中加入了适量的聚乙二醇，起到加强诱变效果的作用，可降低亚硝基乙基脲的使用量，芽尖部位不易发生畸变且诱变效果好；将涂抹有诱变膏剂的接穗条中低温保存，多次改变环境温度，刺激接穗条诱变，诱变效果更好。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，诱变膏剂还加入了正丁醇，有助于亚硝基乙基脲的释放，起到加强诱变效果的作用，芽尖部位不易发生畸变且诱变效果好；嫁接完成之后的3～5天需要进行遮光处理，以提高嫁接苗的成活率，且需要防水保温，在嫩芽与砧木未完全融合时，不能揭开防水保温的薄膜，为此先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再包裹黑色薄膜，满足了遮光需求及防水保温需求，嫁接苗的成活率高。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，嫩芽嫁接步骤为：（1）从化学诱变接穗条上选择饱满的新鲜芽，从嫩芽往上2厘米处横切一刀，深度达到木质部，沿着嫩芽下方约1厘米处向上斜切，连木质部分渐渐加深削切，切到嫩芽上部横切口处停刀，取下芽体；（2）在澳洲坚果嫁接用砧木上找一个粗壮的芽苞，并且切开一个方形孔，切透皮层，但不伤到木质部，接着将皮和芽一同取下来；（3）将步骤（1）取下的嫩芽放到砧木上切口上，嫩芽头朝上，等到嫩芽稳固拼接到砧木上，再用胶带包扎，只需要将芽苞露在外面，嫩芽其他部分都包起来。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，诱变膏剂中的植物油可以是花生油、菜籽油、蓖麻油、芝麻油中的任意一种；动物油选自猪油、牛油、羊油中的任意一种。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，步骤S2中的种子杀菌处理步骤所用杀菌液可选用市面上直接购买得到的杀菌液，能够实现杀菌的效果即可；所用的诸如氯化钠、海藻酸钠、亚硝基乙基脲、聚乙二醇、正丁醇等试剂的纯度均为化学纯。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，诱变膏剂的制备方法为，将组成诱变膏剂的各组分放入温度为40～45℃的环境中高速搅拌，混匀，冷却至室温即可制得诱变膏剂。
实施例1
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为10g/kg的多杀菌素和浓度为30g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡20min, 沥干水分，在频率为60次/秒的条件下震荡处理20min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡30min，沥干水分，再在频率为40次/秒的条件下震荡处理12min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为20g/kg的生石灰、浓度为12g/kg的氯化钠和浓度为30g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子10min，沥干水分，再在频率为100次/分钟的条件下震荡处理5min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为31℃的浸泡液中恒温浸泡2.5h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为30g/kg的生石灰和浓度为15g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为5000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.06W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为8000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.15W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度15℃，相对湿度55%，保存时间30min；低温阶段：恒温箱温度10℃，相对湿度65%，保存时间3h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4份、植物油15份、动物油30份、亚硝基乙基脲0.5份、聚乙二醇3份、正丁醇2份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的3天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的10天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
实施例2
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为15g/kg的多杀菌素和浓度为35g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡30min,沥干水分，在频率为80次/秒的条件下震荡处理25min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡45min，沥干水分，再在频率为50次/秒的条件下震荡处理14min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为40g/kg的生石灰、浓度为15g/kg的氯化钠和浓度为40g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子15min，沥干水分，再在频率为120次/分钟的条件下震荡处理8min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为34℃的浸泡液中恒温浸泡3.5h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为50g/kg的生石灰和浓度为25g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为1.12W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为10000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为3.25W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度18℃，相对湿度60%，保存时间35min；低温阶段：恒温箱温度13℃，相对湿度70%，保存时间4h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶8份、植物油20份、动物油40份、亚硝基乙基脲0.7份、聚乙二醇5份、正丁醇5份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的5天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的15天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
实施例3
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min,沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份、正丁醇3份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
实施例4
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min,沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
实施例5
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min,沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份、正丁醇3份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，嫁接完成之后的第13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
对比例1
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，浸泡：将杀菌的种子放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S4，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S5，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S6，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S7，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S71，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S72，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S73，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S74，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S8，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份、正丁醇3份；
步骤S9，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S8处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S5中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
对比例2
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min, 沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份、正丁醇3份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
对比例3
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min, 沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份、正丁醇3份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
对比例4
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min,沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16℃，相对湿度58%，保存时间32min；低温阶段：恒温箱温度12℃，相对湿度68%，保存时间3.5h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
对比例5
一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为12g/kg的多杀菌素和浓度为32g/kg的甲基托布津；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25min,沥干水分，在频率为65次/秒的条件下震荡处理22min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35min，沥干水分，再在频率为45次/秒的条件下震荡处理13min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25g/kg的生石灰、浓度为13g/kg的氯化钠和浓度为35g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12min，沥干水分，再在频率为110次/分钟的条件下震荡处理6min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为32℃的浸泡液中恒温浸泡2.8h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35g/kg的生石灰和浓度为18g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5份、植物油16份、动物油35份、亚硝基乙基脲0.6份、聚乙二醇4份、正丁醇3份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的4天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的13天取下嫁接部位包裹的透明薄膜；通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
对上述实施例1-5及对比例1-5进行结果分析：
1）统计嫩芽嫁接成活率；2）对幼苗成株后的相关形态进行观察，观察特殊性状，特殊性状具体为枝型、叶形、果皮颜色、果形、富硒能力等，统计特殊性状的数据，计算畸变率；
下表1-表2给出实施例1-5及对比例1-5中的分析结果的统计表；
表1
表2
需要指出的是，上述分析结果中富硒能力变异具体是指培育出的澳洲坚果树结出的果实的硒含量显著上升；由上述分析结果可知，本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，三次震荡处理澳洲坚果种子，能有效提高澳洲坚果幼苗的生长能力和适应能力，栽培得到的澳洲坚果嫁接用砧木适应能力强，使得嫁接上去的化学诱变接穗条上的嫩芽的成活率更高；先诱变带2-4芽节的接穗条，之后用化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木上，通过嫩芽嫁接技术有效解决了诱变后的嫩芽的正常生长发育，提高其成活率，便于后期有益变异和目标性状的筛选；采用紫外线、红外线交替辐照，可以极大提升诱变效果；在诱变膏剂中加入了适量的聚乙二醇，起到加强诱变效果的作用，可降低亚硝基乙基脲的使用量，芽尖部位不易发生畸变且诱变效果好；将涂抹有诱变膏剂的接穗条中低温保存，多次改变环境温度，刺激接穗条诱变，诱变效果更好；诱变膏剂还加入了正丁醇，有助于亚硝基乙基脲的释放，起到加强诱变效果的作用，芽尖部位不易发生畸变且诱变效果好；先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再包裹黑色薄膜，满足了遮光需求及防水保温需求，嫁接苗的成活率高。
本发明一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，培育出的富硒能力变异植株能提高结出果实的硒含量35%以上，产量高、抗病能力强，整体性能优良。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤S1，选种：采摘成熟的澳洲坚果种子，人工脱皮，选择果壳表面光滑、无病虫害、果壳无破损的带壳澳洲坚果作为种子；
步骤S2，杀菌处理：将种子杀菌处理，得到杀菌的种子；
步骤S3，震荡处理：
具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡20～30min,沥干水分，在频率为60～80次/秒的条件下震荡处理20～25min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡30～45min，沥干水分，再在频率为40～50次/秒的条件下震荡处理12～14min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为20～40g/kg的生石灰、浓度为12～15g/kg的氯化钠和浓度为30～40g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子10～15min，沥干水分，再在频率为100～120次/分钟的条件下震荡处理5～8min，得到三次震荡处理的种子；
步骤S4，浸泡：将三次震荡处理的种子，放入温度为31～34℃的浸泡液中恒温浸泡2.5～3.5h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为30～50g/kg的生石灰和浓度为15～25g/kg的海藻酸钠；
步骤S5，播种：将待播种子播种到苗床上，育苗繁殖，得到幼苗；
步骤S6，移栽：将幼苗移栽到种植田，苗高长至35～40㎝，茎粗0.6～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木；
步骤S7，取接穗条：从澳洲坚果母本上采集接穗，得到带2-4芽节的接穗条；
步骤S8，物理诱变处理：
具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为5000～9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.06～1.12W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为8000～10000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.15～3.25W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条；
步骤S9，化学诱变处理：用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度15～18℃，相对湿度55～60%，保存时间30～35min；低温阶段：恒温箱温度10～13℃，相对湿度65～70%，保存时间3～4h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4～8份、植物油15～20份、动物油30～40份、亚硝基乙基脲0.5～0.7份、聚乙二醇3～5份；
步骤S10，嫩芽嫁接：采用嫩芽嫁接技术，将步骤S9处理得到的化学诱变接穗条上的嫩芽嫁接至步骤S6中的澳洲坚果嫁接用砧木，通过幼苗成株后的相关形态参数的测定，获得优良目标性状的澳洲坚果新品种。
2.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S2中将种子放入杀菌液中杀菌处理，得到杀菌的种子；杀菌液以水为溶剂，含有浓度为10～15g/kg的多杀菌素和浓度为30～35g/kg的甲基托布津。
3.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S3中，具体包括以下步骤：
步骤S31，将杀菌的种子放入去离子水中浸泡25～30min,沥干水分，在频率为65～80次/秒的条件下震荡处理22～25min，得到一次震荡处理的种子；
步骤S32，将一次震荡处理的种子放入前处理液中浸泡35～45min，沥干水分，再在频率为45～50次/秒的条件下震荡处理13～14min，得到二次震荡处理的种子；所述前处理液以水为溶剂，含有浓度为25～40g/kg的生石灰、浓度为13～15g/kg的氯化钠和浓度为35～40g/kg的草木灰；
步骤S33，将二次震荡处理的种子静放30min以上，用流动的水冲洗二次震荡处理的种子12～15min，沥干水分，再在频率为110～120次/分钟的条件下震荡处理6～8min，得到三次震荡处理的种子。
4.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S4中将三次震荡处理的种子，放入温度为32～34℃的浸泡液中恒温浸泡2.8～3.5h，沥干水分，得到待播种子；所述浸泡液以沼液为溶剂，含有浓度为35～50g/kg的生石灰和浓度为18～25g/kg的海藻酸钠。
5.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S5中将待播种子播种到苗床上，在温度为20～25℃、相对湿度为60～70%条件下育苗繁殖，得到幼苗。
6.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S6中将幼苗移栽到种植田，苗高长至36～40㎝，茎粗0.7～0.9㎝时，得到澳洲坚果嫁接用砧木。
7.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S8中，具体包括以下步骤：
步骤S81，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为6000～9000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到一次处理的接穗条；
步骤S82，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为0.08～1.12W/cm2的条件下辐照接穗条，得到二次处理的接穗条；
步骤S83，在紫外线的波长为260～380μm、紫外线辐射的功率密度为9000～10000μW/cm2的条件下辐照接穗条，得到三次处理的接穗条；
步骤S84，在红外线的波长为15～25μm、红外线辐射的功率密度为2.65～3.25W/cm2的条件下辐照接穗条，得到物理诱变接穗条。
8.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S9中用诱变膏剂涂抹物理诱变接穗条的芽尖部位，并将物理诱变接穗条放置于恒温箱内进行中低温保存，中温阶段：恒温箱温度16～18℃，相对湿度58～60%，保存时间32～35min；低温阶段：恒温箱温度12～13℃，相对湿度68～70%，保存时间3.5～4h，得到化学诱变接穗条；所述诱变膏剂按重量份计，包括：黄原胶4.5～8份、植物油16～20份、动物油35～40份、亚硝基乙基脲0.6～0.7份、聚乙二醇4～5份。
9.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S9中所述诱变膏剂还包括2～5重量份的正丁醇。
10.根据权利要求1所述的一种嫁接和诱变相结合的澳洲坚果育种方法，其特征在于，所述步骤S10中嫁接完成之后，先在嫁接部位包裹一层透光率在90%以上的透明薄膜，再在透明薄膜外包裹一层透光率为15～20%的黑色薄膜；嫁接完成之后的3～5天取下嫁接部位包裹的黑色薄膜，嫁接完成之后的10～15天取下嫁接部位包裹的透明薄膜。
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