CN113831346A - 多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物、制法、药物组合物和应用 - Google Patents
多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物、制法、药物组合物和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一类多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物、制法、药物组合物和应用。该类小分子的化学结构如式I所示，其衍生物涉及所述小分子的药学上可接受的盐。该类小分子及其衍生物在体内外具有高效的肿瘤抑制作用，对细胞和生物体毒性低，不产生基因毒性；通过多靶点作用实现抗肿瘤活性，具有泛HDAC抑制活性，同时还可以有效激活p53通路，抑制拓扑异构酶活性，可用于制备抗肿瘤药物；制备方法简便，易操作。
Description
技术领域
本发明涉及一种多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物、制法、药物组合物和应用，尤其涉及一种具有组蛋白去乙酰化酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、p53通路激动剂中至少一种机制的多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物、制法、药物组合物和应用。
背景技术
组蛋白乙酰化和去乙酰化分别由组蛋白乙酰转移酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)完成，这是调节染色质结构和基因转录的关键表观遗传修饰。根据其与酵母蛋白的同源性和辅因子依赖性，HDAC被分为不同的种类。HDAC I、II类(再分为IIa和IIb亚型)和IV类是锌依赖性酶，而HDACIII类是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性酶。I类同工酶(HDAC1、2、3、8)主要位于细胞核内，IIa类(HDAC4、5、7、9)和IV类(HDAC11)穿梭于细胞核和细胞质之间。相反，IIb类(HDAC6、10)主要存在于细胞质中。I类HDACs，特别是HDAC1、2、3和IIb类HDAC6被认为是癌症治疗的关键靶点。HDACs在多种癌症中均有过表达，抑制HDACs可通过降低癌细胞活力、阻滞迁移和侵袭、抑制血管生成、诱导细胞凋亡与克服DNA修复等多种机制产生抗癌作用。因此，HDAC已成为开发新型抗癌药物的重要靶点。迄今为止，四种HDAC抑制剂(vorinostat、romidepsin、belinostat和panobinostat)已获得FDA批准用于癌症治疗。还有一些HDAC抑制剂正处于临床研究阶段。
不过目前上市的HDAC抑制剂主要用于治疗白血病，它们对实体瘤的治疗效果一般。最近的研究表明HDAC抑制剂可与多种抗肿瘤药物发挥协同作用，如DNA损伤试剂、微管蛋白调节剂等，特别是HDAC抑制剂能够与MDM2抑制剂协同抑制肿瘤细胞增殖。尽管联合用药带来了较好的疗效，但是也造成了副作用的增强、药物与药物之间的作用和不可预见的药代性质等缺陷。
p53是控制细胞生死的细胞级联反应的关键激活因子。它在生理和非生理应激反应中被激活，如氧化应激、病毒应激、致癌应激和基因毒性应激以及缺氧应激。在肿瘤进化过程中，虽然p53基因TP53经常发生突变，但是超过50％的人类肿瘤中含有野生型基因，因此p53通路是治疗癌症的一个重要靶点。有研究认为p53通路的激活可以增强对肿瘤细胞的杀伤，是细胞周期阻滞和凋亡通路的关键激活因子。
发明内容
发明目的：本发明的第一目的是提供一种多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物，第二目的是提供所述多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物的制备方法，第三目的是提供一种包含所述多靶点抗肿瘤小分子和/或其衍生物的药物组合物，第四目的是提供所述多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术方案：作为本发明涉及的第一方面，本发明的多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物具有式I的结构，所述衍生物为所述小分子的药学上可接受的盐：
其中：
M为
或羟基；
R为卤素、氢或C1-C4烷基；
n为1-5的整数。
本发明以邻苯二氮基[1,2-b]喹唑啉酮结构单元作为表面识别区，以2-氨基苯胺或羟肟酸结构单元作为锌离子结合基团，通过烷基碳链作为连接子将二者结合，得到一类以I/II类HDAC为靶点的具有抗肿瘤作用的化合物。
针对R取代基，所述小分子及其衍生物结构中：R优选为Br、Cl、F、CH3或H。
针对M取代基，所述小分子及其衍生物结构中：M优选为羟基；当M优选为羟基时，R更优选为CH3或H，n更优选为4-5的整数。
具体地，所述小分子为以下任一化合物：
针对上述小分子的药学上可接受的盐，其具体为上述小分子与酸形成的盐，所述酸为无机酸(例如：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等)或有机酸(例如：甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、马来酸、琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸或杏仁酸等)。
作为本发明涉及的第二方面，本发明的小分子及其衍生物的制备方法为：
甲酯类化合物6与邻苯二胺类化合物或羟胺类化合物反应得到化合物I；
其中，R、n的定义同上所述；
将相应的酸与以上方法制备的化合物I成盐，即得所述小分子的药学上可接受的盐。
作为本发明涉及的第三方面，本发明的药物组合物包含所述小分子和/或其衍生物以及药学上可接受的载体。
所述小分子及其衍生物可以添加药学上可接受的载体制成常见的药用制剂，如片剂、胶囊、糖浆、悬浮剂或注射剂，制剂可以加入香料、甜味剂、液体/固体填料、稀释剂等常用药用辅料。
作为本发明涉及的第四方面，本发明的小分子及其衍生物可制备为抗肿瘤药物，所述药物是作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、p53通路激动剂中的至少一种来发挥药效的。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下显著优点：
(1)该类小分子及其衍生物和药物组合物具有高效的抗肿瘤作用，体外癌细胞的抑制IC50值最优达到纳摩尔浓度级别，体内抑瘤率最高可达80％以上；
(2)通过多靶点作用实现抗肿瘤活性，其对I/II类HDAC亚型的抑制作用均可达到纳摩尔浓度级别，具有泛HDAC抑制活性，同时还可以有效激活p53通路，抑制拓扑异构酶活性，可用于制备抗肿瘤药物；
(3)安全性高、毒性低，对细胞的抑制具有选择性，对正常细胞抑制作用低，对DNA无明显抑制作用，未对正常组织产生基因毒性，并且对动物体重影响甚小；
(4)制备方法简便、易操作。
附图说明
图1为化合物I22在不同浓度下在HepG2细胞中对p-p53和p53蛋白表达的影响；
图2为化合物I22在不同浓度下对DNA的作用；其中，泳道1：DNA，泳道2：EB(5μM)，泳道3-泳道8：化合物I22(10,50,100,300,500,1000μM)+DNA；
图3为不同浓度的化合物I22在拓扑异构酶I存在下对DNA的作用；其中，泳道1：DNA，泳道2：Topo I+DNA，泳道3：CPT(200μM)+Topo I+DNA，泳道4-9：化合物I22(10,50,100,300,500,1000μM)+Topo I+DNA；
图4为化合物I22对人肝癌细胞HepG2裸鼠异种移植瘤生长体积变化的影响；
图5为化合物I22对人肝癌细胞HepG2裸鼠异种移植瘤裸鼠体重的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
除本发明制备的中间体、目标化合物之外，其余均为市售试剂。按本发明方法制备的化合物经核磁氢谱、碳谱及高分辨质谱确定了化合物的分子结构。
实施例1：中间体的制备
(1)中间体2的制备(以中间体2e为例：R＝H)
将5.1g(37.2mmol)反应物1e(邻氨基苯甲酸)溶解于35mL THF中，0℃条件下边搅拌边加入6.6g(22.3mmol)三光气(BTC)，混合液35℃反应12h，反应结束后过滤，滤饼用Et2O洗涤(20mL×3)，得到褐色固体(中间体2e)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),7.91–7.89(m,1H),7.74–7.71(m,1H),7.25–7.22(m,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H)ppm.
(2)中间体3的制备(以中间体3e为例：R＝H)
将3.8g(23.3mmol)中间体2e和水合肼(85％)依次加入50mL圆底烧瓶中，加入回流3h，用薄层色谱法检测反应过程。反应完成后冷却至0℃过滤，滤饼用EtOH洗涤(20mL×3)，得到白色固体(中间体3e)。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),7.42–7.41(m,1H),7.13–7.10(m,1H),6.69–6.68(m,1H),6.49–6.46(m,1H),6.33(s,2H),4.41(s,2H)ppm.
(3)中间体4的制备(以中间体4e为例：R＝H)
将5.0g(33.1mmol)中间体3e溶于乙二醇(40mL)中，加入5.4g(36.41mmol)邻苯二甲酸酐，加热回流3h，用薄层色谱法检测反应过程。反应完成后冷却至0℃过滤，滤饼用水洗涤(20mL×3)，干燥后和三氯氧磷(25mL)依次加入50mL圆底烧瓶中，加热回流6h，用薄层色谱法检测反应过程。反应完成后减压除去大部分溶剂，然后加入20g冰块融化后过滤，滤饼用硅胶柱层析提纯，洗脱液为CH2Cl2:PE(1:3)混合溶剂。得到浅绿色固体(中间体4e)。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ8.99–8.98(m,1H),8.52(d,J＝7.9Hz,1H),8.16–8.14(m,1H),7.97–7.90(m,2H),7.88–7.85(m,2H),7.56–7.54(m,1H)ppm.
(4)中间体6的制备(以中间体6e3为例：n＝5，R＝H)
将1.0g(3.8mmol)中间体4e与1.5g(7.6mmol)反应物5a(7-氨基庚酸甲酯盐酸盐)依次加入100mL圆底烧瓶中，甲苯(50mL)作溶剂，滴加1.2g(11.4mmol)三乙胺后加热回流6h，用薄层色谱法检测反应过程。反应完成后减压除去溶剂，用硅胶柱层析提纯，洗脱液为CH2Cl2:MeOH(100:1)混合溶剂。得到淡黄色固体(中间体6e3)。
1H NMR(600MHz,CDCl3)δ9.03(d,J＝7.5Hz,1H),8.46–8.45(m,1H),7.86–7.81(m,2H),7.80–7.74(m,3H),7.47–7.45(m,1H),5.41(s,1H),3.62(s,3H),3.62–3.59(m,2H),2.24(t,J＝7.5Hz,2H),1.73–1.68(m,2H),1.59–1.53(m,2H),1.40–1.35(m,2H),1.32–1.28(m,2H)ppm.
实施例2：化合物I7的制备
将中间体6a1(400mg,0.88mmol)加入15mL THF中溶解，滴加氢氧化锂(92.4mg,2.2mmol)水溶液(5mL)，室温搅拌过夜，减压除去溶剂得到乳白色固体，用30mL水将其溶解，用1M盐酸溶液调节pH至5，过滤得到淡黄色固体，干燥后与TBTU(340.4mg,1.06mmol)在DMF(10mL)溶液中室温搅拌5min，加入115.4mg(1.14mmol)三乙胺继续搅拌2min，再加入285.4mg(2.64mmol)邻苯二胺，在35℃下反应2h。浓缩反应液，浓缩液经硅胶柱层析分离，洗脱液为CH2Cl2和MeOH混合溶剂(30:1)，得到深红色固体135.3mg，产率：30％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.58(s,1H),8.82(d,J＝7.6Hz,1H),8.30(d,J＝7.6Hz,1H),8.24(s,1H),7.99–7.85(m,4H),7.73–7.40(m,3H),7.23(d,J＝7.6Hz,1H),7.06(t,J＝7.1Hz,1H),6.97(d,J＝7.4Hz,1H),6.85–6.82(m,1H),3.58(d,J＝4.5Hz,2H),2.56(t,J＝6.7Hz,2H),2.15–2.07(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO–d6):δ172.1,156.7,149.3,145.2,144.1,136.9,133.6,132.8,129.2,128.9,128.8,126.8,126.5,126.1,123.5,122.0,121.6,119.3,118.2,41.4,34.1,24.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C25H21BrN6O2[M+Na]+:539.0802,found:539.0827.
实施例3：化合物I8的制备
用中间体6a2代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率35％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,1H),8.80–8.77(m,1H),8.27(d,J＝7.8Hz,1H),8.24(d,J＝2.3Hz,1H),7.94–7.87(m,3H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.56(t,J＝5.1Hz,1H),7.15(d,J＝7.8Hz,1H),6.89–6.87(m,1H),6.72–6.70(m,1H),6.53–6.50(m,1H),4.82(s,2H),3.51–3.48(m,2H),2.39(t,J＝7.4Hz,2H),1.82–1.77(m,2H),1.73–1.68(m,2H),1.51–1.46(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO–d6):δ171.7,156.7,149.2,145.1,144.1,142.4,136.9,133.5,132.7,129.8,128.9,128.7,126.7,126.2,125.8,124.1,123.4,122.0,121.6,118.1,116.6,116.4,41.7,36.3,28.2,26.9,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd forC27H25BrN6O2[M+H]+:545.1295,found:545.1309.
实施例4：化合物I9的制备
用中间体6a3代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率36％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,1H),8.69(d,J＝7.8Hz,1H),8.22(d,J＝7.9Hz,1H),8.17(d,J＝2.1Hz,1H),7.88(t,J＝7.4Hz,1H),7.84–7.79(m,2H),7.56(d,J＝8.7Hz,1H),7.44(t,J＝4.8Hz,1H),7.17(d,J＝7.7Hz,1H),6.90(t,J＝7.5Hz,1H),6.73(d,J＝7.9Hz,1H),6.54(t,J＝7.5Hz,1H),4.84(s,2H),3.46–3.43(m,2H),2.37(t,J＝7.4Hz,2H),1.77–1.74(m,2H),1.68–1.64(m,2H),1.48–1.41(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO–d6):δ171.7,156.5,149.1,145.0,143.9,142.4,136.7,133.3,132.5,129.7,128.8,128.6,126.6,126.2,125.8,124.1,123.4,121.9,121.5,118.1,116.7,116.4,41.8,36.3,29.1,28.4,27.2,25.8ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C28H27BrN6O2[M+H]+:559.1452,found:559.1486.
实施例5：化合物I10的制备
用中间体6a4代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率38％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,1H),8.81(dd,J＝7.9,1.1Hz,1H),8.29(d,J＝7.8Hz,1H),8.25(d,J＝2.3Hz,1H),7.95–7.92(m,1H),7.91–7.89(m,2H),7.67(d,J＝8.7Hz,1H),7.53(t,J＝5.1Hz,1H),7.15(dd,J＝7.8,1.2Hz,1H),6.89–6.87(m,1H),6.71(dd,J＝7.9,1.2Hz,1H),6.54–6.51(m,1H),4.88(s,2H),3.49–3.46(m,2H),2.33(t,J＝7.4Hz,2H),1.78–1.73(m,2H),1.64–1.60(m,2H),1.43–1.36(m,6H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO–d6):δ171.7,156.7,149.2,145.2,144.1,142.3,136.9,133.6,132.7,129.9,128.9,128.8,126.8,126.2,125.8,124.1,123.5,122.0,121.7,118.2,116.7,116.4,41.8,36.3,29.3,29.2,28.5,27.3,25.8ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C29H29BrN6O2[M+H]+:573.1608,found:573.1646.
实施例6：化合物I11的制备
用中间体6b3代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率35％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,1H),8.72–8.70(m,1H),8.23(d,J＝7.9Hz,1H),8.03(d,J＝2.4Hz,1H),7.89–7.83(m,2H),7.72–8.70(m,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,1H),7.46(t,J＝4.9Hz,1H),7.16(d,J＝7.1Hz,1H),6.90–6.87(m,1H),6.72–6.71(m,1H),6.54–6.51(m,1H),4.83(s,2H),3.47–3.44(m,2H),2.36(t,J＝7.4Hz,2H),1.79–1.74(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.49–1.38(m,4H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO–d6):δ171.7,156.7,149.1,144.8,143.8,142.4,134.1,133.4,132.5,129.9,129.6,128.6,126.6,126.2,125.8,125.7,124.1,123.4,121.9,121.1,116.7,116.4,41.8,36.3,29.1,28.4,27.1,25.8ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C28H27ClN6O2[M+H]+:515.1957,found:515.1987.
实施例7：化合物I12的制备
用中间体6c3代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率32％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.11(s,1H),8.76(dd,J＝7.7,1.4Hz,1H),8.25(d,J＝7.5Hz,1H),7.90–7.85(m,2H),7.81(dd,J＝8.8,3.0Hz,1H),7.77–7.74(m,2H),7.66–7.63(m,2H),7.47(t,J＝5.0Hz,1H),7.16–7.15(m,1H),6.90–6.87(m,1H),6.73–6.71(m,1H),6.54–6.51(m,1H),4.85(s,2H),3.49–3.45(m,2H),2.36(t,J＝7.4Hz,2H),1.79–1.74(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.48–1.40(m,4H)ppm.13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ171.7,160.6,158.9,157.0(d,J＝4.5Hz),149.1,143.2(d,J＝19.5Hz),142.4,133.2,132.6,130.3(d,J＝9.0Hz),128.8,126.5,126.2,125.8,124.1,123.4,123.0(d,J＝24.0Hz),121.8,121.2(d,J＝9.0Hz),116.7,116.4,111.1(d,J＝22.5Hz),41.8,36.3,29.0,28.4,27.1,25.8ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C28H27FN6O2[M+H]+:499.2252,found:499.2237.
实施例8：化合物I13的制备
用中间体6d3代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率40％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,1H),8.81(d,J＝7.9Hz,1H),8.27(d,J＝7.2Hz,1H),7.98(s,1H),7.90–7.86(m,2H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.59(d,J＝8.3Hz,1H),7.40(s,1H),7.17(d,J＝7.7Hz,1H),6.89(t,J＝7.5Hz,1H),6.73(d,J＝7.9Hz,1H),6.53(t,J＝7.5Hz,1H),4.89(s,2H),3.50–3.47(m,2H),2.44(s,3H),2.35(t,J＝7.3Hz,2H),1.80–1.75(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.49–1.40(m,4H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ171.7,157.6,148.9,144.3,142.9,142.4,135.6,133.0,132.5,129.0,127.3,126.5,126.2,126.1,125.8,124.1,123.4,121.8,120.1,116.7,116.4,41.8,36.3,29.0,28.5,27.1,25.8,21.4ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C29H30N6O2[M+H]+:495.2503,found:495.2536.
实施例9：化合物I14的制备
用中间体6e3代替中间体6a1参照实施例1所述方法制备，得到深红色固体，产率41％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.12(s,1H),8.85–8.83(m,1H),8.28(d,J＝7.3Hz,1H),8.24(d,J＝7.9Hz,1H),7.91–7.87(m,2H),7.82–7.79(m,1H),7.76(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(t,J＝7.6Hz,1H),7.45(t,J＝5.0Hz,1H),7.17(d,J＝7.6Hz,1H),6.90(t,J＝7.6Hz,1H),6.73(d,J＝7.8Hz,1H),6.55(t,J＝7.5Hz,1H),5.04(s,2H),3.51–3.47(m,2H),2.36(t,J＝7.4Hz,2H),1.79–1.75(m,2H),1.68–1.63(m,2H),1.48–1.42(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ171.7,157.7,148.9,146.3,143.6,142.4,134.1,133.3,132.6,128.9,127.4,127.0,126.7,126.2,125.9,125.8,124.1,123.4,122.0,120.3,116.7,116.4,41.8,36.3,29.1,28.5,27.1,25.8ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C28H28N6O2[M+H]+:481.2347,found:481.2374.
实施例10：化合物I15的制备
将盐酸羟胺(4.67g,67mmol)溶解在MeOH(24mL)中，在0℃滴加氢氧化钾(5.61g,100mmol)和MeOH(12mL)形成的溶液，然后在0℃下搅拌30min，过滤，滤液为羟胺甲醇溶液。将化合物6a1(300mg,0.66mmol)溶于5mL新制备的羟胺甲醇中，室温搅拌1h，然后用2M盐酸将pH调至7，浓缩后用水洗涤得粗品，粗品经重结晶得到化合物15，乳白色固体，产率50％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),8.70(s,2H),8.22(s,1H),8.17(s,1H),7.90–7.82(m,3H),7.63–7.54(m,2H),3.46(s,2H),2.22–2.12(m,2H),2.04–1.95(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.5,156.6,149.1,145.0,143.9,136.8,133.4,132.6,129.7,128.8,128.6,126.6,123.4,121.9,121.5,118.1,41.5,30.8,24.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C19H16BrN5O3[M+H]+:442.0509,found:442.0535.
实施例11：化合物I16的制备
用中间体6a2代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率52％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.41(s,1H),8.78(d,J＝6.6Hz,1H),8.70(s,1H),8.31(s,1H),8.23(s,1H),7.93(s,1H),7.89(s,2H),7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.61(s,1H),3.45(s,2H),2.02(t,J＝6.7Hz,2H),1.78–1.73(m,2H),1.62–1.56(m,2H),1.42–1.36(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.6,156.7,149.2,145.2,144.1,136.9,133.6,132.7,129.9,128.9,128.7,126.7,123.6,122.0,121.6,118.1,41.7,32.8,28.2,26.9,25.5ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C21H20BrN5O3[M+H]+:470.0822,found:470.0837.
实施例12：化合物I17的制备
用中间体6a3代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率55％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),8.75(d,J＝7.8Hz,1H),8.69(s,1H),8.27(d,J＝7.5Hz,1H),8.20(d,J＝2.2Hz,1H),7.92(t,J＝7.2Hz,1H),7.88–7.84(m,2H),7.62(d,J＝8.7Hz,1H),7.51(s,1H),3.45–3.42(m,2H),1.99(t,J＝7.3Hz,2H),1.75–1.71(m,2H),1.56–1.51(m,2H),1.43–1.38(m,2H),1.35–1.31(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,156.6,149.1,145.1,144.0,136.8,133.5,132.6,129.8,128.9,128.7,126.7,123.5,121.9,121.6,118.1,41.8,32.8,29.0,28.4,27.1,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcdfor C22H22BrN5O3[M+Na]+:506.0798,found:506.0846.
实施例13：化合物I18的制备
用中间体6a4代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率52％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),8.69(dd,J＝7.9,0.9Hz,2H),8.21(d,J＝8.0Hz,1H),8.15(d,J＝2.3Hz,1H),7.89–7.86(m,1H),7.84(d,J＝7.4Hz,1H),7.82–7.80(m,1H),7.56(d,J＝8.7Hz,1H),7.45(t,J＝5.0Hz,1H),3.42–3.39(m,2H),1.96(t,J＝7.4Hz,2H),1.73–1.69(m,2H),1.53–1.48(m,2H),1.41–1.37(m,2H),1.35–1.32(m,2H),1.29–1.26(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,156.6,149.1,145.1,144.0,136.7,133.4,132.6,129.8,128.9,128.6,126.7,123.4,121.9,121.6,118.1,41.9,32.8,29.3,29.2,28.5,27.3,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H24BrN5O3[M+H]+:498.1135,found:498.1133.
实施例14：化合物I19的制备
用中间体6b3代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率58％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),8.94–8.37(m,2H),8.25(d,J＝7.8Hz,1H),8.06(d,J＝2.4Hz,1H),7.93–7.84(m,2H),7.76–7.74(m,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.48(t,J＝5.0Hz,1H),3.46–3.43(m,2H),1.98(t,J＝7.4Hz,2H),1.76–1.71(m,2H),1.57–1.52(m,2H),1.43–1.38(m,2H),1.36–1.31(m,2H)ppm.13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,156.6,149.1,144.8,143.8,134.0,133.3,132.5,129.9,129.6,128.6,126.6,125.7,123.4,121.9,121.1,41.9,32.8,29.0,28.4,27.1,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd forC22H22ClN5O3[M+Na]+:462.1303,found:462.1324.
实施例15：化合物I20的制备
用中间体6c3代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率58％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.70(d,J＝7.8Hz,2H),8.21(d,J＝7.8Hz,1H),7.87–7.81(m,2H),7.76(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.71–7.69(m,1H),7.62–7.59(m,1H),7.42(t,J＝4.8Hz,1H),3.44–3.41(m,2H),1.99(t,J＝7.3Hz,2H),1.75–1.70(m,2H),1.57–1.52(m,2H),1.43–1.38(m,2H),1.36–1.31(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,160.5,158.9,157.0(d,J＝3.0Hz),149.0,143.1(d,J＝19.5Hz),133.2,132.5,130.3(d,J＝7.5Hz),128.7,126.5,123.3,122.9(d,J＝24.0Hz),121.8,121.1(d,J＝9.0Hz),111.0(d,J＝22.5Hz),41.8,32.8,29.0,28.4,27.1,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcdfor C22H22FN5O3[M+H]+:424.1779,found:424.1796.
实施例16：化合物I21的制备
用中间体6d3代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率60％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.82–8.80(m,1H),8.68(s,1H),8.28(d,J＝7.3Hz,1H),7.99(s,1H),7.92–7.87(m,2H),7.65(d,J＝8.3Hz,1H),7.61(d,J＝7.3Hz,1H),7.40–7.43(m,1H),3.48–3.45(m,2H),2.46(s,3H),1.97(t,J＝7.3Hz,2H),1.76–1.71(m,2H),1.56–1.51(m,2H),1.43–1.38(m,2H),1.35–1.31(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.6,157.6,148.9,144.3,142.9,135.6,133.1,132.6,129.1,127.4,126.5,126.1,123.4,121.8,120.1,41.8,32.8,29.0,28.5,27.1,25.6,21.5ppm.HRMS(ESI)m/z calcdfor C23H25N5O3[M+H]+:420.2030,found:420.2060.
实施例17：化合物I22的制备
用中间体6e3代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率60％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.37(s,1H),8.83(d,J＝7.9Hz,1H),8.69(s,1H),8.27(d,J＝7.4Hz,1H),8.22(d,J＝7.9Hz,1H),7.91–7.86(m,2H),7.81(t,J＝7.4Hz,1H),7.74(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(t,J＝7.4Hz,1H),7.44–7.40(m,1H),3.47–3.44(m,2H),1.99(t,J＝7.3Hz,2H),1.75–1.71(m,2H),1.56–1.51(m,2H),1.42–1.38(m,2H),1.35–1.30(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,157.7,148.9,146.3,143.6,134.1,133.3,132.6,128.9,127.4,127.0,126.6,125.9,123.4,121.9,120.3,41.8,32.8,29.0,28.4,27.1,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C22H23N5O3[M+H]+:406.1874,found:406.1898.
实施例18：化合物I23的制备
用中间体6b4代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率59％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.68(d,J＝7.8Hz,2H),8.21(d,J＝7.9Hz,1H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),7.86(t,J＝7.2Hz,1H),7.82(t,J＝7.5Hz,1H),7.69–7.67(m,1H),7.62(d,J＝8.7Hz,1H),7.42(t,J＝4.8Hz,1H),3.43–3.39(m,2H),1.96(t,J＝7.3Hz,2H),1.74–1.69(m,2H),1.54–1.49(m,2H),1.42–1.36(m,2H),1.35–1.31(m,2H),1.30–1.25(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,156.6,149.0,144.8,143.8,134.0,133.3,132.5,129.9,129.6,128.6,126.6,125.7,123.4,121.9,121.1,41.8,32.8,29.2,29.2,28.5,27.3,25.7ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H24ClN5O3[M+H]+:454.1640,found:454.1678.
实施例19：化合物I24的制备
用中间体6c4代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率61％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.72–8.69(m,2H),8.23(d,J＝7.8Hz,1H),7.87(t,J＝7.4Hz,1H),7.84(t,J＝7.4Hz,1H),7.77–7.75(m,1H),7.73–7.71(m,1H),7.64–7.60(m,1H),7.44(t,J＝4.6Hz,1H),3.44–3.41(m,2H),1.95(t,J＝7.3Hz,2H),1.74–1.69(m,2H),1.53–1.48(m,2H),1.41–1.36(m,2H),1.35–1.31(m,2H),1.30–1.24(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ170.9,162.1,160.5,158.4(d,J＝3.0Hz),150.5,144.7(d,J＝26.3Hz),134.4,133.6,131.6(d,J＝8.4Hz),130.4,127.8,124.3,124.0(d,J＝24Hz),123.3,122.7(d,J＝8.7Hz),112.1(d,J＝22.5Hz),43.1,36.7,34.0,31.6,29.8,28.5,26.9ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H24FN5O3[M+H]+:438.1936,found:438.1960.
实施例20：化合物I25的制备
用中间体6d4代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率64％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),8.79–8.65(m,2H),8.26(d,J＝7.5Hz,1H),7.97(s,1H),7.90–7.85(m,2H),7.62–7.61(m,1H),7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.41–7.37(m,1H),3.47–3.44(m,2H),2.44(s,3H),1.95(t,J＝7.3Hz,2H),1.74–1.70(m,2H),1.53–1.48(m,2H),1.41–1.36(m,2H),1.35–1.31(m,2H),1.29–1.24(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,157.6,148.9,144.3,142.9,135.6,133.0,132.5,129.0,127.3,126.5,126.1,123.4,121.8,120.1,41.8,32.8,29.2,29.1,28.6,27.3,25.6,21.5ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C24H27N5O3[M+Na]+:456.2006,found:456.2045.
实施例21：化合物I26的制备
用中间体6e4代替中间体6a1参照实施例9所述方法制备，得到乳白色固体，产率61％。
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.83–8.81(m,1H),8.69(s,1H),8.27(d,J＝7.6Hz,1H),8.22(d,J＝7.8Hz,1H),7.91–7.86(m,2H),7.81–7.78(m,1H),7.74(d,J＝8.1Hz,1H),7.47(t,J＝7.4Hz,1H),7.43(t,J＝4.8Hz,1H),3.47–3.44(m,2H),1.95(t,J＝7.3Hz,2H),1.74–1.69(m,2H),1.53–1.48(m,2H),1.41–1.35(m,2H),1.35–1.30(m,2H),1.29–1.23(m,2H)ppm；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ169.7,157.7,148.9,146.3,143.6,134.1,133.3,132.6,128.9,127.4,127.0,126.7,125.9,123.4,122.0,120.3,41.8,32.8,29.2,28.5,27.3,25.6ppm.HRMS(ESI)m/z calcd for C23H25N5O3[M+H]+:420.2030,found:420.2081.
实施例22：化合物体外细胞毒活性测试
实验方法：采用MTT方法对本发明的代表性化合物进行了细胞毒活性测试。取对数生长期的细胞计数，接种于96孔培养板内，每孔约8000-10000个细胞。培养过夜，待细胞贴壁后进行给药，分别设给药组和对照组。待测的化合物用DMSO溶液配制成贮液，临用前用蒸馏水稀释成一系列浓度，其中DMSO的终浓度不超过4‰(下面实验类同)。每个浓度设3个复孔。加药后培养72h，加20μL浓度为5mg/mL的MTT，37℃孵育4h，弃去上清，加入150μL的DMSO溶解。用酶标仪在490纳米波长下测定每孔的OD值，并计算抑制率，做浓度-抑制率曲线计算IC50值，结果见表1。
测试了代表性化合物对人前列腺癌细胞PC-3、人乳腺癌细胞MCF-7、人结肠癌细胞HCT-116和人肝癌细胞HepG2及人肝细胞LO2和人脐静脉内皮细胞HUVEC的体外抗增殖活性，上市药物伏立诺他(SAHA)为阳性对照。观察化合物在不同浓度下对肿瘤细胞生长的抑制情况，计算抑制率及其IC50值来评价药物的细胞毒活性，结果见表1。此外，还测试了两个代表性化合物I22和I26对三种白血病细胞K562、RS；11和HL60的IC50值，结果见表2。
表1代表性化合物的细胞毒活性
表2化合物I22和I26对三种白血病细胞的抗增殖活性
由表1数据可见，化合物对四种癌细胞PC-3(人前列腺癌)、MCF-7(人乳腺癌)、HCT-116(人结直肠癌)和HepG2(人肝癌)均具有较强的抗肿瘤活性，其中大部分化合物对MCF-7、HCT-116和HepG2三种癌细胞(HDAC高表达，p53正常表达)的抑制活性明显优于PC-3(HDAC高表达，p53缺失)细胞，显示出多靶点的作用效果。化合物I15-I26对癌细胞的抑制作用优于化合物I7-I14。活性最优的化合物对相关癌细胞的IC50值达到纳摩尔级别，是阳性对照药物伏立诺他活性的十几倍。此外，还选取LO2和HUVEC两株正常细胞作为对照，结果表明多数目标化合物对肿瘤细胞的抑制作用高于对正常细胞的毒性，具有选择性。这表明本发明所述的多靶点化合物具有高效低毒的抗肿瘤活性。
由表2数据可见，两个代表性化合物I22和I26对白血病细胞K562、RS4；11和HL60也具有良好的抑制作用，优于阳性药物伏立诺他。
实施例23：化合物对人组蛋白去乙酰化酶的抑制检测
实验方法：通过人组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)酶联免疫分析试剂盒检测了代表性化合物对HDAC1、2、3、8、4和6的抑制作用。待测的化合物用DMSO溶液配制成贮液，临用前用蒸馏水稀释成一系列浓度，其中DMSO的终浓度不超过4‰(下面实验类同)。分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)和待测样品孔。在酶标包被板上标准品(800ng/L)准确加样50μL，空白孔加50μL标准品稀释液，待测样品孔中先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL。将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。用封板膜封板后置于37℃温育30min。然后弃去液体用1倍浓缩洗涤液洗涤3次。样品孔加入酶标试剂50μL，置于37℃温育30min。然后弃去液体再用1倍浓缩洗涤液洗涤3次。每孔先加入显色剂A 50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10min。每孔加终止液50μL，终止反应。用酶标仪在450nm处检测各组吸光度(OD值)。计算抑制率，做浓度-抑制率曲线计算IC50值。
观察化合物在不同浓度下对人组蛋白去乙酰化酶(HDAC1、2、3、8、4和6)抑制情况，上市药物伏立诺他(SAHA)为阳性对照，相关化合物的IC50值见表3。
表3化合物对人组蛋白去乙酰化酶的抑制
*.-代表未测。
由表3数据可知，化合物I15-I26表现为一种广泛的HDAC抑制剂，对I/II类HDAC亚型的抑制作用能够达到纳摩尔级。当表面识别区邻苯二氮基[1,2-b]喹唑啉酮结构单元中的芳环无取代基或有供电子基团时，化合物的活性较高。连接子的碳链长度是6或7时，对HDAC亚型的抑制作用影响不大，其中化合物I21、I22、I25和I26的活性较高，均优于阳性对照药物伏立诺他。由于化合物I能够同时抑制HDACI类亚型(HDAC1、2、3、8)和HDAC6，这可能是其具有较高抗癌活性的原因。
实施例24：化合物对p53信号通路作用的检测
实验方法：采用Western Blot实验对本发明的化合物I22进行了检测。将生长在对数期的细胞计数接种于6孔板内，每孔约105-106个细胞。在37℃含CO25％的孵箱内培养24h。代表性化合物溶解在DMSO中，用培养基稀释至不同浓度后加入给药组，对照组更换培养基。24h后收集并裂解细胞，取上清液备用。用BCA蛋白试剂盒(Thermo，Waltham，MA)对蛋白含量进行测定。
将干净的玻璃板安装在凝胶架上并检漏。先加入10％的分离胶至1/2界面处，用去离子水封胶，分离胶凝固后倒掉去离子水。接着加入15％的积层胶，插入梳子等待积层胶凝固。将玻璃板转移至电泳槽中，倒满电泳缓冲液。缓慢拔除梳子，依次加入受试样品到各个孔内，用60V电压进行电泳。结束后将胶板取出计算条带的剪切区域。将条带放入半干转膜缓冲液中，室温下电压25V转膜50min。转膜完成后，将条带置于脱脂牛奶中，37℃振荡1h，然后用PBST洗涤3次(每次8min)。置于一抗中4℃振荡过夜。弃去一抗，将膜转移至PBST溶液中清洗3次(每次8min)。加入二抗室温孵育1h。弃去二抗，PBST溶液振荡清洗3次(每次8min)，再用PBS洗涤5min。最后将条带取出置于干净的玻璃板上待用。滴加AB发光液(A:B＝1:1)作用约10s左右，去除多余的发光液后盖上薄膜，并将胶片覆于薄膜上，置于预热好的曝光机中曝光。将胶片洗出，观察条带。该操作过程需要避光。实验结果见图1。
通过Western Blot实验检测化合物I22(0.5、1和2μM)对p-p53和p53蛋白表达情况的影响。随着化合物I22浓度的增大，p-p53蛋白表达含量逐渐增加，存在浓度剂量依赖性，而对p53蛋白的表达含量影响不大。图1结果表明，化合物I22能够有效激活p53通路，发挥抗肿瘤活性。
实施例25：化合物对DNA作用的检测
实验方法：采用琼脂糖凝胶电泳法对本发明的化合物I22进行了DNA作用检测。将琼脂糖溶解在TAE(1X)缓冲溶液中，使其浓度为1％。在微波炉内加热到澄清透明，倒入制胶槽内冷却凝固。代表性化合物和EB溶解在DMSO中，用去离子水稀释至不同浓度。分别加入体积为0.5μL的pBR322 DNA(5μg/μL)，加去离子水使最终体积为10μL。混匀后37℃恒温水浴3h。加入2μL(6X)溴酚蓝溶液终止反应。将其转移至琼脂糖胶槽中，电压设置为80V/cm，2h后结束，用EB溶液染色30min。用凝胶成像仪成像拍照。实验结果见图2。
通过琼脂糖凝胶电泳实验，检测化合物I22对pBR322质粒的裂解，可确定DNA超螺旋闭环结构转化为开环结构的比例，实验选用DNA拓扑异构酶I(Topo I)抑制剂喜树碱(CPT)为阳性对照。
采用琼脂糖凝胶电泳的方式研究了化合物I22与DNA的相互作用，化合物I22(10-1000μM)与pBR322质粒DNA预处理后，在DNA构象变化或DNA的迁移率方面与阴性对照组相比几乎没有区别，但是在阳性对照组中，DNA的迁移率显著受到抑制。图2的结果表明，化合物I22对DNA没有明显抑制作用。
实施例26：化合物对拓扑异构酶I抑制作用的检测
实验方法：采用琼脂糖凝胶电泳法对本发明的化合物I22进行了Topo I抑制作用检测。将琼脂糖溶解在TAE(1X)缓冲溶液中，使其浓度为1％。在微波炉内加热到澄清透明，倒入制胶槽内冷却凝固。代表性化合物和喜树碱(CPT)溶解在DMSO中，用去离子水稀释至不同浓度。分别加入0.5μL的pBR322 DNA、1μL的DNA Topoisomerase I Buffer、0.5μL的TopoI(1U/μL)和1μL的BSA。加去离子水使最终体积为10μL。混匀后37℃恒温水浴0.5h。加入2μL(6X)溴酚蓝溶液终止反应。将其转移至琼脂糖胶槽中，电压设置为80V/cm，2h后结束，用EB溶液染色30min。用凝胶成像仪成像拍照。实验结果见图3。
图3显示，化合物I22和CPT一样能够明显抑制Topo I的活性，导致Topo I无法有效解旋超螺旋型DNA，并且这种活性抑制作用随着化合物浓度的增加而增强。结果表明，化合物I22在激活p53的同时，并未引发细胞DNA损伤反应(即不会对正常组织施加基因毒性效应)，对Topo I有抑制作用。
实施例27：化合物体内抗肿瘤活性的测试
实验方法：采用BALB/c裸鼠，评价本发明的化合物I22对HepG2裸鼠异种移植瘤模型的抑制效果。
动物模型构建：取对数生长期的HepG2细胞，制备细胞悬液浓度为5×107cell/mL，在无菌条件下，接种于BALB/c裸鼠右腋下。体重16～18g，雄性，由南京大学动物模式中心提供(许可证号：SCXK(苏)2015-0001)。饲养于SPF级饲养环境中，室内温度控制在23±2℃，自由饮食和摄水。动物总数20只。接种前适应性饲养7天。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100mm3后将动物随机分成4组。
药物及试剂：伏立诺他(SAHA)、化合物I22，用生理盐水溶解，然后用DMSO助溶；如难溶，可加助剂助溶。
组别及给药方案如下：
空白对照组：腹腔注射，每2天1次，连续21天。
阳性对照组：腹腔注射，(SAHA剂量为12mg/kg)，每2天1次，连续21天。
化合物I22低浓度组：腹腔注射，(剂量为12mg/kg)，每2天1次，连续21天。
化合物I22高浓度组：腹腔注射，(剂量为24mg/kg)，每2天1次，连续21天。
肿瘤直径的测量次数为每3天测1次，同时每3天检查一次小鼠体重。4周后，注射水合氯醛处死所有小鼠，剖腹观察，摘除肿瘤，剔除无关组织，用D-Hanks液洗涤2～3次，洗去血液，沥干水分保存，称取重量和测量体积。肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：TV＝1/2×a×b2，其中a、b分别表示长宽。
据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0，其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标：相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：
其中，TRTV：治疗组RTV；CRTV：模型组RTV。
抗肿瘤活性的评价指标：肿瘤生长抑制率(％)，计算公式如下：
实验结果见图4-图5及表4。
表4化合物I22在HepG2移植瘤模型中的体内活性
如图4所示，在建立的HepG2异种移植瘤模型中，阳性对照药物伏立诺他(12mg/kg)最终抑瘤率为49.28％。当化合物I22与伏立诺他等剂量给药剂量时，其抑瘤率达到63.10％，显著优于伏立诺他；当化合物I22的给药剂量进一步提高到24mg/kg时，抑瘤率达到了80.19％。有关化合物I22的相对肿瘤增殖率和肿瘤抑制率数据见表4。与伏立诺他相比，化合物I22在HepG2异种移植瘤模型中具有更高的体内抗肿瘤活性。图5中小鼠体重变化显示化合物I22对受试动物体重几乎没有影响，表明化合物I22的毒性较小，具有高效低毒的特点。
通过对I类与II类人组蛋白去乙酰化酶和DNA拓扑异构酶I的抑制作用及体内外抗肿瘤活性试验表明，本发明所述的多靶点小分子抗肿瘤化合物对所测试的癌细胞具有显著的抑制作用，可用于制备抗肿瘤药物。
Claims (10)
1.一种多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物，其特征在于，所述多靶点抗肿瘤小分子及其衍生物具有式I的结构，所述衍生物为所述小分子的药学上可接受的盐：
其中：M为
或羟基；R为卤素、氢或C1-C4烷基；n为1-5的整数。
2.根据权利要求1所述的小分子及其衍生物，其特征在于，所述小分子及其衍生物结构中：R为Br、Cl、F、CH3或H。
3.根据权利要求1所述的小分子及其衍生物，其特征在于，所述小分子及其衍生物结构中：M为羟基。
4.根据权利要求3所述的小分子及其衍生物，其特征在于，所述小分子及其衍生物结构中：R为CH3或H；n为4-5的整数。
5.根据权利要求1-4任一所述的小分子及其衍生物，其特征在于，所述小分子为以下任一化合物：
6.根据权利要求1所述的小分子及其衍生物，其特征在于，所述药学上可接受的盐为所述小分子与酸形成的盐，所述酸为有机酸或无机酸。
7.一种权利要求1～6任一所述的小分子及其衍生物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：
甲酯类化合物6与邻苯二胺类化合物或羟胺类化合物反应得到化合物I；
其中，R、n的定义如权利要求1-5任一所述；
将相应的酸与以上方法制备所得的化合物I成盐，即得所述小分子的药学上可接受的盐。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含权利要求1～7任一所述小分子和/或其衍生物以及药学上可接受的载体。
9.一种权利要求1～7任一所述的小分子及其衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
10.根据权利要9所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为组蛋白去乙酰化酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、p53通路激动剂中的至少一种。
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