CN113816857B - 咖啡酰奎宁酸酯类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了五种新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物及其制备方法与应用，其中制备得的五种化合物为：4‑O‑咖啡酰奎宁酸异丁酯、3‑O‑香豆酰‑4‑O‑咖啡酰奎宁酸甲酯、3‑O‑咖啡酰‑4‑O‑阿魏酰奎宁酸甲酯、4,5‑O‑二咖啡酰奎宁酸异丁酯、3,4‑O‑二咖啡酰奎宁酸异丁酯。本发明提供的五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物作为一种天然化合物，对正常细胞毒性较低，副作用较小；在其细胞毒性浓度以下，还表现出显著的抗炎作用且还具有有效剂量适中，疗效显著，毒副作用小等优点，因此，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及的是药物化学技术领域，尤其涉及五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物，并涉及上述五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，还涉及包含该五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物的药物制剂，以及该五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物在制备抗炎功能性食品及药物中的应用。
背景技术
金银花(Flos Lonicerae Japonicae)，又名双花、忍冬花等，是忍冬科忍冬属植物忍冬(Lonicerajaponica Thunb.)的干燥花蕾或带初开的花，夏初花开放前采收，干燥。味甘，性寒，归肺、心、胃经，具有清热解毒、疏散风热之功效，用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症，药用历史悠久，有“中药中的抗生素”之称。金银花在全国大部分省份(西藏、青海、宁夏、黑龙江、新疆、内蒙古和海南除外)均有自然分布，生于山坡灌丛或疏林中、乱石堆、山足路旁及村庄篱笆边，以土层较厚的沙质土壤最佳，海拔最高达1km，也常栽培。其中以河南封丘和山东平邑为主要的道地产地和栽培地，通过长期的自然选择和人工栽培驯化，形成了很多地方品种。
金银花入药最早出现在晋代葛洪的《肘后备急方》中，以“忍冬”为名，其后陶弘景的《名医别录》中也有记载，“忍冬，味甘温，无毒，列为上品，主治寒热身肿”。而“金银花”这一名词则首载于宋代的《苏沈内翰良方》，“……四月开花，极芬，香闻数步，除开白色，数日则变黄，每黄白相间，故名金银花”。需注意的是，在宋代及以前多以忍冬的藤、叶入药，而到了明代，对花的应用越来越多，并逐渐发展至茎、叶和花并用。李时珍的《本草纲目》记载，“忍冬茎叶及花功用皆同。昔人称其治风、除胀、解痢为要药……，后世称其消肿，散毒、治疮为要药”。而明代以后，随着人们对温病学的认知，对金银花功效的掌握更加全面，更强调用花，清朝张璐的《本经逢源》中写道，“金银花主下痢脓血，为内外臃肿之要药。解毒祛脓，泻中有补，痈疽溃后之圣药”。《得配本草》也写道“藤、叶皆可用，花尤佳”。后来，忍冬的茎叶逐渐分化为另一种独立的药材--忍冬藤。
此外，金银花除药用外，也被广泛应用于食品、化妆品及保健品等行业。如日常生活中人们经常饮用的金银花茶；用于化妆品的金银花香皂、金银花沐浴露等。金银花所含化学成分复杂，功能多样，是其发挥多种生物活性的重要物质基础。据调研，金银花含有的丰富的咖啡酰奎宁酸类成分可能是其生物活性的有效成分。
发明内容
针对现有技术上存在的不足，本发明目的是在于提供五种新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物及其制备方法与应用，制备得的五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物作为一种天然化合物，对正常细胞毒性较低，副作用较小；在其细胞毒性浓度以下，还表现出显著的抗炎作用且还具有有效剂量适中，疗效显著，毒副作用小等优点。
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物，结构式如下(1)-(5)：
新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，包括以下步骤：
S1：在室温下，用乙醇对金银花进行多次冷浸、渗漉提取，合并提取液，接着，减压回收溶剂，并浓缩得乙醇浸膏；
S2：将所述乙醇浸膏混悬于水，然后分别用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，以分别制得环己烷浸膏LH，乙酸乙酯浸膏LE，正丁醇浸膏LB；
S3：将所述正丁醇浸膏LB用少量甲醇溶解，用柱层析硅胶进行拌样后，装柱，上样，接着进行梯度洗脱；采用TLC分析，合并相同流分后获得40个组分LB1～LB40；
S4：取组分LB5，用二氯甲烷和甲醇溶解，并进行凝胶柱柱层析，接着使用洗脱剂进行等度洗脱，随后采用薄层TLC分析，合并相同流分后获得20个组分LB5-1～LB5-20；
S5：取组分LB5-13，用二氯甲烷和甲醇溶解，再次进行凝胶柱柱层析，接着使用洗脱剂进行等度洗脱，随后采用薄层TLC分析，合并相同流分后获得15个组分LB5-13-1～LB5-13-15；
S6：取组分LB5-13-10，用甲醇溶解过滤，经过Rp-18高效液相色谱粗分离，在保留时间为38.0-40.0min左右得到化合物1；
S7：取组分LB5-13-14，用甲醇溶解过滤，经过Rp-18高效液相色谱粗分离，分别保留时间为27.0-29.0min左右、31.0-33.0min左右、42.0-45.0min左右以及95.0-98.0min左右得到化合物2-5。
作为优选，所述的步骤S1中的乙醇浓度为75％。
作为优选，所述的步骤S3中的柱层析硅胶为200～300目的柱层析硅胶。
作为优选，所述的步骤S3中的梯度洗脱包括：依次用二氯甲烷、体积比为100：0的二氯甲烷-甲醇、体积比为100：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为50：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为25：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为5：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为1：1的二氯甲烷-甲醇、甲醇实施洗脱。
作为优选，所述的步骤S4中的凝胶柱层析的凝胶为Sephadex LH-20，所述洗脱剂为体积比7：3的二氯甲烷-甲醇。
作为优选，所述的步骤S5中的凝胶柱层析的凝胶为Sephadex LH-20，所述洗脱剂为体积比1：1的二氯甲烷-甲醇。
作为优选，所述的步骤S6中的高效液相色谱分离的条件包括：RP-18制备液相色谱柱规格：Cosmosil 5C18-MS-II，5μm，20×250mm；检测波长：254nm；流动相：体积比为50：50的甲醇-水，流速为8mL/min。
作为优选，所述的步骤S7中的高效液相色谱分离的条件包括：RP-18制备液相色谱柱规格：Cosmosil 5C18-MS-II，5μm，20×250mm；检测波长：254nm；流动相：体积比为54：46的甲醇-水，流速为8mL/min。
所述的新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物在制备抗炎功能性食品及药物中的应用。
一种药物制剂，其包含治疗有效量的第一方面所述五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物的任意一种或几种以及其在药学上可接受的载体。值得说明的是，所述药学上可接受的载体例如选自稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、润滑剂、崩解剂、吸收促进剂以及表面活性剂中的一种或几种。
所述的药物制剂的剂型选自以下任一种：片剂，胶囊剂，丸剂，颗粒剂，混悬剂，口服液，涂剂，巴布剂，喷雾剂，粉针剂和水针剂。又如，当上述药物制剂采用注射剂时，所述注射剂可以是皮下注射剂、腹腔注射剂、肌肉注射剂以及静脉注射剂中的任一种。
本发明具有以下有益效果：本发明的五种新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物作为一种天然化合物，对正常细胞毒性较低，副作用较小；在其细胞毒性浓度以下，还表现出显著的抗炎作用且还具有有效剂量适中，疗效显著，毒副作用小等优点，因此，具有广阔的应用前景。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式来详细说明本发明；
图1为图1-8为本发明中的化合物1的1H NMR、13C NMR、2D-NMR、MS、HPLC图；
图9-16为本发明中的化合物2的1H NMR、13C NMR、2D-NMR、MS、HPLC图；
图17-24为本发明中的化合物3的1H NMR、13C NMR、2D-NMR、MS、HPLC图；
图24-32为本发明中的化合物4的1H NMR、13C NMR、2D-NMR、MS、HPLC图；
图33-40为本发明中的化合物4的1H NMR、13C NMR、2D-NMR、MS、HPLC图；
图41示出了本发明中五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物对RAW 264.7细胞的细胞毒性的结果图；
图42示出了本发明中五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放的抑制率的柱状统计图(化合物1、3-4的有效剂量是25μg/ml，化合物2和5的有效剂量是12.5μg/ml)。
具体实施方式
本发明提供了五种咖啡酰奎宁酸酯类化合物，扩大了目前金银花中已发现的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的类型。该类化合物通过一系列实验发现该类化合物具有较好的抗炎增强免疫力作用，今后可成为市场上新的抗炎的功能性食品和药品。
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
参照图1-40，本具体实施方式采用以下技术方案：新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物，具有如下结构通式：
其中，R表示为不同类型的取代基。
值得注意的是，上述五种新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物包括结构式如下(1)-(5)的化合物：
根据结构式(1)可知，该咖啡酰奎宁酸酯类化合物1的名称为4-O-咖啡酰奎宁酸异丁酯。
根据结构式(2)可知，该咖啡酰奎宁酸酯类化合物2的名称为3-O-香豆酰-4-O-咖啡酰奎宁酸甲酯。
根据结构式(3)可知，该咖啡酰奎宁酸酯类化合物3的名称为3-O-咖啡酰-4-O-阿魏酰奎宁酸甲酯。
根据结构式(4)可知，该咖啡酰奎宁酸酯类化合物4的名称为4,5-O-二咖啡酰奎宁酸异丁酯。
根据结构式(1)可知，该咖啡酰奎宁酸酯类化合物5的名称为3,4-O-二咖啡酰奎宁酸异丁酯。
新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物的分离纯化方法，包括如下步骤：
步骤一，用75％乙醇对6.5kg金银花进行多次冷浸、渗漉提取，合并提取液，接着，减压回收溶剂，并浓缩得乙醇浸膏1500g；将所述乙醇浸膏混悬于水，然后分别用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，以分别制得130.3g环己烷浸膏LC，93.7g乙酸乙酯浸膏LE，199.8g正丁醇浸膏LB。
步骤二，取上述180.0g正丁醇浸膏LB，用少量甲醇溶解，用柱层析硅胶(200-300目)进行拌样后，用二氯甲烷溶解该硅胶装柱，并用二氯甲烷平衡柱子至硅胶面不再下降，干法上样，再依次用用二氯甲烷、体积比为100：0的二氯甲烷-甲醇、体积比为100：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为50：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为25：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为5：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为1：1的二氯甲烷-甲醇、甲醇实施梯度洗脱；采用TLC分析，合并相同流分后获得40个组分LB1～LB40。
步骤三，取组分LB5(3.0g)，用少量二氯甲烷-甲醇溶解，并进行Sephadex LH-20凝胶(15×460mm)柱层析，其中使用的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇，体积比为7：3，实施等度洗脱；控制流速在200ml/h，每接100ml作为一个流分浓缩。采用薄层TLC分析，合并相同流分后获得20个组分LB5-1～LB5-20。
步骤四，取组分LB5-13，用少量二氯甲烷-甲醇溶解，并进行Sephadex LH-20凝胶(15×400mm)柱层析，其中使用的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇，体积比为1：1，实施等度洗脱；采用薄层TLC分析，合并相同流分后获得15个组分LB5-13-1～LB5-13-15。
步骤五，取组分LB5-13-10，用甲醇溶解过滤，经过Rp-18高效液相色谱粗分离(Cosmosil 5C18-MS-II，5μm，20×250mm，流速：8mL/min，波长：254nm)，流动相为甲醇：水(50：50,v/v)，在保留时间为38.6min左右得到化合物1(110mg)。
步骤六，取组分LB5-13-14，用甲醇溶解过滤，经过Rp-18高效液相色谱粗分离(Cosmosil 5C18-MS-II，5μm，20×250mm，流速：8mL/min，波长：254nm)，流动相为甲醇：水(54：46,v/v)，分别在保留时间为27.9min左右、32.0min左右、43.3min左右和96.6min左右得到化合物2(1.11mg)、3(2.56mg)、4(3.53mg)和5(26.6mg)。
此外，本发明所述的天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物还可由其它提取工艺或化学合成方法制得。
实施例1：五种新型咖啡酰奎宁酸酯类化合物的结构进行鉴定，具体的操作和结果如下：
化合物1的结构鉴定
浅黄色不定性粉末，HR-ESI MS(negative)给出准分子离子峰[M-H]-m/z409.1505，提示其分子量为410；结合1H和13C NMR(表1)确定其分子式为C20H26O9。
参见图1～7，在1H NMR上，两个亚甲基信号δH 1.76(1H,m),1.95(1H,m),2.13(2H,m)、三个连氧次甲基信号δH 5.04(1H,d,J＝3.7Hz),3.90(1H,d,J＝3.7Hz),3.58(1H,s)提示该化合物为4-取代的奎宁酸酯类衍生物，13C NMR上的δC 73.2(C-1),35.2(C-2),69.5(C-3),71.1(C-4),67.0(C-5),37.3(C-6),以及173.2(C-7)位移信号也证实了上述判断。此外，1H NMR上，ABX系统的δH 7.02(1H,s),6.96(1H,d,J＝8.0Hz),6.77(1H,d,J＝8.0Hz)与反式双键信号7.38(1H,d,J＝15.9Hz),6.10(1H,d,J＝15.9Hz)说明4位取代基为反式咖啡酰基。此外，还有一个连氧亚甲基信号δH3.78(1H,dd,J＝10.5,7.0Hz),3.69(1H,dd,J＝10.5,7.0Hz)、一个次甲基信号δH 1.76(1H,m)、两个甲基信号δH0.83(1H,d,J＝6.7Hz),0.80(1H,d,J＝6.7Hz)，综合13C NMR及HMBC相关，δH 3.69/3.78(H-8),0.83(H-10)和0.80(H-11)均与δC 27.2(C-9)相关，推测这是一个连氧的叔丁基。最重要的是，HMBC相关显示H-8(δH 3.69/3.78)与173.2(C-7)相关，说明这个连氧的叔丁基取代在奎宁酸的7位。综合以上信息，确定化合物1为4-O-咖啡酰奎宁酸异丁酯。
化合物2的结构鉴定
浅黄色不定性粉末，HR-ESI MS(negative)给出准分子离子峰[M-H]-m/z513.0624，提示其分子量为514；结合1H和13C NMR(表2)确定其分子式为C26H26O11。
参见图8～15，在1H NMR上，δH4.15(1H,m),4.98(1H,dd,J＝7.0,3.0Hz),5.25(1H,s)与δH1.89(1H,m),2.00(1H,m),2.23(2H,m)以及δH 3.59(3H,s)提示该化合物为3,4-二取代的奎宁酸甲酯衍生物，13C NMR上的δC73.1(C-1),37.7(C-2),67.8(C-3),72.1(C-4),65.3(C-5),36.1(C-6),173.4(C-7),52.0(7-OCH3)位移信号也证实了上述判断。此外，1H NMR上，ABX系统的δH 7.02(1H,s),6.97(1H,d,J＝8.0Hz),6.75(1H,d,J＝8.0Hz)与反式双键信号δH7.41(1H,d,J＝15.9Hz)and 6.12(1H,d,J＝15.9Hz)说明其中一个取代基为反式咖啡酰基。另一个对称的A2B2系统δH7.54(2H,d,J＝8.0Hz),6.78(2H,d,J＝8.0Hz),与反式双键信号δH7.58(1H,d,J＝15.9Hz)and 6.39(1H,d,J＝15.9Hz)说明其中一个取代基为反式香豆酰基。该化合物酯基一个取代基后的衍生物，通过HPLC比对分析为4-O-反式咖啡酰基奎宁酸甲酯，这证明反式咖啡酰基取代在4位，而反式香豆酰基在3位，因此确定化合物2为3-O-香豆酰-4-O-咖啡酰奎宁酸甲酯。
化合物3的结构鉴定
浅黄色不定性粉末，HR-ESI MS(negative)给出准分子离子峰[M-H]-m/z543.0639，提示其分子量为544；结合1H和13C NMR(表2)确定其分子式为C27H28O12。
参见图16～23，在1H NMR上，δH4.15(1H,m),4.93(1H,dd,J＝7.0,3.0Hz),5.30(1H,s)与δH1.90(1H,m),2.01(1H,m),2.21(2H,m)以及δH 3.58(3H,s)提示该化合物也是3,4-二取代的奎宁酸甲酯衍生物，13C NMR上的δC73.3(C-1),37.6(C-2),67.6(C-3),72.6(C-4),65.6(C-5),36.4(C-6),173.3(C-7),52.1(7-OCH3)位移信号也证实了上述判断。此外，1HNMR上，两套ABX系统[δH7.26(1H,s),7.06(1H,d,J＝8.0Hz),6.77(1H,d,J＝8.0Hz),7.02(1H,s),6.98(1H,d,J＝8.0Hz),6.74(1H,d,J＝8.0Hz)]和两对反式双键信号[7.48(2H,d,J＝15.9Hz),6.35(1H,d,J＝15.9Hz),6.24(1H,d,J＝15.9Hz)]，以及一个取代在苯环上的甲氧基信号δH3.78(3H,s)，说明这两个取代基分别是反式咖啡酰基和反式阿魏酰基。该化合物酯基一个取代基后的衍生物，通过HPLC比对分析为4-O-反式阿魏酰基奎宁酸甲酯，这证明反式阿魏酰基取代在4位，而反式咖啡酰基在3位，因此确定化合物3为3-O-咖啡酰-4-O-阿魏酰奎宁酸甲酯
化合物4的结构鉴定
浅黄色不定性粉末，HR-ESI MS(negative)给出准分子离子峰[M-H]-m/z571.0806，提示其分子量为572；结合1H和13C NMR(表1)确定其分子式为C29H32O12。
参见图24～31，在1H NMR上，δH 3.85(1H,m)、5.07(1H,s)、5.19(1H,m)与δHδH 1.99(2H,s)、2.22(2H,s)以及δH 3.60(3H,m)提示该化合物为4,5-二取代的奎宁酸酯类衍生物，13C NMR上的72.5(C-1),34.8(C-2),66.5(C-3),70.9(C-4),69.9(C-5),34.4(C-6),173.2(C-7)位移信号也证实了上述判断。结合1H NMR上的两套ABX系统[δH7.02(1H,s),7.00(1H,d,J＝8.0Hz),6.77(1H,d,J＝8.0Hz),7.02(1H,s),6.97(1H,d,J＝8.0Hz),6.76(1H,d,J＝8.0Hz)]和两对反式双键信号[7.49(1H,d,J＝15.9Hz),6.25(1H,d,J＝15.9Hz),7.41(1H,d,J＝15.9Hz),6.11(1H,d,J＝15.9Hz)]，说明这两个取代基均为反式咖啡酰基。此外，一个连氧亚甲基信号δH3.80(1H,dd,J＝10.5,7.0Hz),3.70(1H,dd,J＝10.5,7.0Hz)、一个次甲基信号δH 1.84(1H,m)、两个甲基信号δH0.83(1H,d,J＝6.7Hz),0.81(1H,d,J＝6.7Hz)，说明这也是一个连氧的叔丁基，与化合物1类似。HMBC相关显示H-8(δH3.70/3.80)与173.2(C-7)相关，说明这个连氧的叔丁基也是取代在奎宁酸的7位。综合以上信息，确定化合物4为4,5-O-二咖啡酰奎宁酸异丁酯。
化合物5的结构鉴定
浅黄色不定性粉末，HR-ESI MS(negative)给出准分子离子峰[M-H]-m/z571.0808，提示其分子量为572；结合1H和13C NMR(表1)确定其分子式为C29H32O12。
参见图33～39，化合物5的NMR图谱与化合物4的NMR图谱十分相似，不过根据1HNMR上的信号δH5.29(1H,s),4.98(1H,dd,J＝6.0,2.0Hz),4.16(1H,m),2.25(2H,m),2.01(1H,m)和1.91(1H,m)以及13C NMR信号δC 73.3(C-1),37.7(C-2),67.8(C-3),72.2(C-4),65.4(C-5),36.2(C-6),172.9(C-7)，说明化合物5是3,4-二取代的奎宁酸酯类衍生物。此外，1HNMR上还有两个反式咖啡酰基及一个连氧的叔丁基的信号。综合以上信息，确定化合物5为3,4-O-二咖啡酰奎宁酸异丁酯。
表1化合物1、4和5在DMSO-d6中的1H NMR(400MHz)和13C NMR(100MHz)数据
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表2化合物2和3在DMSO-d6中的1H NMR(400MHz)和13C NMR(100MHz)数据
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实施例2：本实施例对五种新型天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物进行体外细胞毒性试验，其中采用的细胞株为RAW 264.7细胞，具体的试验方法和结果如下：
MTT法：将RAW264.7细胞细胞接种于96孔细胞培养板，每孔200μL(含有10×104个肿瘤细胞)，在37℃、5％CO2培养箱中，并且在含10％FBS的DMEM培养基中，培养24h，加入不同浓度(0、6.25、12.5、25μg/ml)的本发明提供的五种天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物中的任一种，继续培养48h；实验结束前4h加20μL的MTT(5mg/mL)，继续在37℃、5％CO2条件下孵育4h，吸取培养液后加入二甲基亚砜150μL，振摇至结晶完全溶解，然后于酶标仪检测其吸光度，检测波长570nm，参考波长630nm，计算本发明化合物对RAW 264.7细胞的生存率，实验结果如图41所示。
由图41可知，五种天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物在本实验实施的浓度下均无明显的细胞毒性。实施例3中的抗炎实验药物浓度皆参考该实验结果。
实施例3：本实施例采用五种新型天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物进行了体外抗炎实验，其中采用的细胞株为RAW 264.7细胞，具体的实验方法和结果如下：
将RAW 264.7细胞接种于24孔细胞培养板，每孔500μL，在37℃、5％CO2培养箱中，并且在含10％FBS的DMEM培养基中，培养24h，加入100ng/ml的脂多糖(LPS)和本发明提供的五种天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物中的任一种，继续在37℃、5％CO2条件下培养。24h后收集培养基上清，根据NO测定试剂盒说明进行操作，测定NO的释放抑制率。
实验结果表明，如图42所示，五种天然咖啡酰奎宁酸酯类化合物均能显著抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7中NO的释放(p＜0.05)，其中又属化合物5的活性最强，这证明金银花咖啡酰奎宁酸酯类化合物具有显著的体外抗炎活性。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (7)
1.一种咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(S1)：在室温下，用乙醇对金银花进行多次冷浸、渗漉提取，合并提取液，接着，减压回收溶剂，并浓缩得乙醇浸膏；
(S2)：将所述乙醇浸膏混悬于水，然后分别用环己烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，以分别制得环己烷浸膏LH，乙酸乙酯浸膏LE，正丁醇浸膏LB；
(S3)：将所述正丁醇浸膏LB用少量甲醇溶解，用柱层析硅胶进行拌样后，装柱，上样，接着进行梯度洗脱；采用TLC分析，合并相同流分后获得40个组分LB1～LB40；
(S4)：取组分LB5，用二氯甲烷和甲醇溶解，并进行凝胶柱柱层析，接着使用洗脱剂进行等度洗脱，随后采用薄层TLC分析，合并相同流分后获得20个组分LB5-1～LB5-20；
(S5)：取组分LB5-13，用二氯甲烷和甲醇溶解，再次进行凝胶柱柱层析，接着使用洗脱剂进行等度洗脱，随后采用薄层TLC分析，合并相同流分后获得15个组分LB5-13-1～LB5-13-15；
(S6)：取组分LB5-13-10，用甲醇溶解过滤，经过Rp-18高效液相色谱粗分离，在保留时间为38.0-40.0min得到化合物1；
(S7)：取组分LB5-13-14，用甲醇溶解过滤，经过Rp-18高效液相色谱粗分离，分别在保留时间为27.0-29.0min、31.0-33.0min、42.0-45.0min以及95.0-98.0min得到化合物2-5；其中，化合物1-5的结构式如下(1)-(5)：
2.根据权利要求1所述的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(S1)中的乙醇浓度为75％。
3.根据权利要求1所述的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(S3)中的柱层析硅胶为200～300目的柱层析硅胶。
4.根据权利要求1所述的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(S3)中的梯度洗脱为：依次用体积比为100：0的二氯甲烷-甲醇、体积比为100：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为50：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为25：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为10：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为5：1的二氯甲烷-甲醇、体积比为1：1的二氯甲烷-甲醇、甲醇实施洗脱。
5.根据权利要求1所述的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(S4)中的凝胶柱层析的凝胶为Sephadex LH-20，所述洗脱剂为体积比7：3的二氯甲烷-甲醇。
6.根据权利要求1所述的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(S5)中的凝胶柱层析的凝胶为Sephadex LH-20，所述洗脱剂为体积比1：1的二氯甲烷-甲醇。
7.根据权利要求1所述的咖啡酰奎宁酸酯类化合物的制备方法，其特征在于，所述的步骤(S6)和步骤(S7)中的高效液相色谱分离的条件为：RP-18制备液相色谱柱规格：Cosmosil5C18-MS-II，5μm，20×250mm；检测波长：254nm；流动相：体积比为50：50的甲醇-水，流速为8mL/min。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101691330A (zh) * | 2009-09-28 | 2010-04-07 | 中南大学 | 洋蓟中高纯度抗病毒活性组分的分离纯化方法 |
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| CN104906167A (zh) * | 2015-07-06 | 2015-09-16 | 四川农业大学 | 灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法及用途 |
| CN108752208A (zh) * | 2018-07-17 | 2018-11-06 | 深圳市人民医院 | 咖啡酰奎宁酸类化合物的提取方法及其产物和应用 |
| CN110294673A (zh) * | 2019-07-25 | 2019-10-01 | 山东省分析测试中心 | 咖啡酰奎宁酸丁酯类同分异构体及其制备方法和应用 |
-
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101691330A (zh) * | 2009-09-28 | 2010-04-07 | 中南大学 | 洋蓟中高纯度抗病毒活性组分的分离纯化方法 |
| CN102266318A (zh) * | 2011-05-23 | 2011-12-07 | 中国人民解放军第二军医大学 | 咖啡酰奎宁酸及其衍生物在制备抗补体药物中的应用 |
| CN104906167A (zh) * | 2015-07-06 | 2015-09-16 | 四川农业大学 | 灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法及用途 |
| CN108752208A (zh) * | 2018-07-17 | 2018-11-06 | 深圳市人民医院 | 咖啡酰奎宁酸类化合物的提取方法及其产物和应用 |
| CN110294673A (zh) * | 2019-07-25 | 2019-10-01 | 山东省分析测试中心 | 咖啡酰奎宁酸丁酯类同分异构体及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Bioactive dicaffeoylquinic acid derivatives from the root extract of Calea urticifolia;Ivan Felipe Mijangos-Ramos等;《Revista Brasileira de Farmacognosia》;第28卷;339-343 * |
| Inhibitors of platelet lipoxygenase from Ponkan fruit;Yoichi Nogata等;《Phytochemistry》;第56卷(第7期);729-732 * |
| 忍冬根的化学成分及其抗炎作用;于金倩等;《药学学报》;第51卷(第7期);1110-1116 * |
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