CN104906167A - 灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法及用途，属于中药领域。该灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法首先通过溶剂提取法得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物，然后经过大孔吸附树脂法或/和层析柱法分离纯化得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物。该灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物可以用于制备用于治疗糖尿病并发症的药品或保健食品。本发明不仅首次实现了从灰毡毛忍冬原材料中提取出灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物；同时，还提供了灰毡毛忍冬咖啡奎宁酸类提取物的新用途，将灰毡毛忍冬咖啡奎宁酸类提取物应用于制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品。

Description

灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法及用途

技术领域

本发明涉及中药领域，具体而言，涉及灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法及用途。

背景技术

灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.–Mazz）为忍冬科（Caprifoliaceae）忍冬属植物，具有清热解毒、抗菌消炎的功效。广泛分布于四川、福建、江西、湖南、贵州等地区，在西南地区有大面积栽培。2005年版中国药典将其作为新品种收载，与红腺忍冬、华南忍冬一同列入新增的山银花项下。灰毡毛忍冬应用历史悠久，分布广、产量高、资源充足，合理开发利用这一丰富的自然资源具有重要的经济意义。

糖尿病长期高血糖对机体许多组织和器官产生危害，导致多种糖尿病慢性并发症发生，如糖尿病白内障、神经病变、肾脏病变、视网膜病变、动脉粥样硬化等。这些并发症目前已成为威胁糖尿病患者健康和生命的最主要原因。目前，大量研究已证实，糖尿病并发症与糖代谢的多元醇通路激活有关。当血糖升高时，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖的己糖激酶被饱和，刺激醛糖还原酶（AR）的生成，从而使AR活性明显增强，超过正常的4倍，激活山梨醇通路。山梨醇由于自身的极性不易透过细胞膜，在细胞内产生大量山梨醇。AR是聚醇通路中的关键酶，是Aldo-keto还原酶家族成员之一，广泛存在于人类和哺乳动物的晶状体上皮细胞、周围神经Schwann细胞、肾脏Papilla细胞和胰腺Largerhans胰岛中。现代医学研究证明，糖尿病并发症如糖尿病肾病、血管病变、视网膜病变、外周神经病变等都与多元醇通路有关，AR作为多元醇通路的限速酶，就成了延缓和防治糖尿病并发症的关键因素。

大量动物实验和临床研究表明，醛糖还原酶抑制剂可抑制聚醇通路中的AR，阻止逆转多元醇代谢中的葡萄糖转化为山梨醇，可使多元醇水平恢复正常，并能改善神经传导功能、延迟白内障的形成及蛋白尿的出现，从而达到预防和延缓糖尿病并发症的目的。从20世纪70年代开始，醛糖还原酶抑制剂的研究成为糖尿病治疗领域新的热点，在合成、中药、微生物等方面都有许多新型、高效的醛糖还原酶抑制剂涌现，并有不少已进入临床和上市，但这些醛糖还原酶抑制剂大部分由合成得到，均存在一些问题，如Sorbinil因引起严重的过敏反应而被迫终止临床试验，Tolrestate没有表现出足够的疗效而未能通过FDA的批准，所以，继续寻找高效低毒的醛糖还原酶抑制剂仍是科研工作者的任务。

从中草药中得到的醛糖还原酶抑制剂具有来源丰富、价格便宜、不良反应少的特点，因此，从中草药中寻找高效低毒的醛糖还原酶抑制剂具有很大优势，对具有醛糖还原酶抑制作用的中草药的开发具有较大潜力。而目前关于灰毡毛忍冬提取物对醛糖还原酶的抑制作用的研究以及在糖尿病并发症的治疗和保健作用的应用还未见报道。

发明内容

针对于上述问题，本发明目的在于提供灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，以实现从灰毡毛忍冬原材料中提取出灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物；本发明的另一个目的在于提供灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的用途，将灰毡毛忍冬咖啡奎宁酸类提取物应用于制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品。

本发明是这样实现的：

灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，包括以下步骤：

A.用溶剂对灰毡毛忍冬原材料进行至少一次提取，得到含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物的提取液；所述含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物的提取液经过减压浓缩得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物；

B.所述步骤A中得到的所述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物采用大孔树脂吸附法和/或柱层析法进行分离纯化，得到含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的提取液；所述含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的提取液经过减压浓缩得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物。

进一步，所述步骤A中的所述溶剂为水、甲醇、乙醇、正丁醇中的至少一种。

上述步骤A通过溶剂提取法首次从灰毡毛忍冬原材料中提取得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物，溶剂提取法所用的溶剂可以选用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其他低级脂肪醇中的一种，也可以选用水、甲醇、乙醇、正丁醇以及其他低级脂肪醇中的两种或者多种以任意比例配制而成溶剂。

在使用溶剂进行提取时，可以用溶剂对灰毡毛忍冬原材料进行至少1次提取。由于提取次数较少时，灰毡毛忍冬原材料中的活性成分提取不充分，造成灰毡毛忍冬原材料的浪费；随着提取次数增多，溶剂的提取效果会逐渐降低，因此，优选地，用溶剂对灰毡毛忍冬原材料进行3次提取，这样不仅可以使灰毡毛忍冬原材料得到充分的利用，而且有效地节约了溶剂的用量。

上述用溶剂对灰毡毛忍冬原材料进行提取时，可以采用室温浸提法进行提取，即在室温条件下将灰毡毛忍冬原材料浸入溶剂中进行提取。容易理解地，还可以采用其他方法对灰毡毛忍冬原材料进行提取，例如超声提取法，加热提取法和加热回流提取法。

进一步，所述步骤B为：所述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物先后分别采用大孔树脂吸附法和柱层析法进行分离纯化，得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物；所述大孔树脂吸附法采用大孔吸附树脂柱和大孔吸附树脂柱洗脱剂进行分离纯化，所述柱层析法采用硅胶柱和硅胶柱洗脱剂进行分离纯化。

大孔树脂吸附法和柱层析法均属于分离纯化方法，因此可以单独采用大孔树脂吸附法或者柱层析法对上述步骤A中得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物进行分离纯化，从而得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物。

为了使制备的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的纯度更高，充分除去灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物中的杂质和色素，优选地，同时使用大孔树脂吸附法和柱层析法，而使上述步骤A中得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物分别经过大孔吸附树脂柱和硅胶柱的分离纯化作用，从而得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物。由于灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物先后分别经过大孔吸附树脂柱和硅胶柱，使灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物得到富集，并使其中所含的杂质和色素经过两次分离纯化而去除，所以可以进一步提高最终得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的纯度。

进一步，所述大孔吸附树脂柱洗脱剂选用水、甲醇、乙醇、丙酮、以任意体积百分比配制的甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液中的至少一种；所述大孔吸附树脂柱的固定相为D-101大孔树脂、HP-20大孔树脂、DM130大孔树脂中的一种。

优选地，大孔吸附树脂柱过柱时，先后采用水和甲醇作为大孔吸附树脂柱洗脱剂对大孔吸附树脂柱进行洗脱。容易理解的，也可以采用水和乙醇，水和丙酮中的一种作为大孔吸附树脂柱洗脱剂对大孔吸附树脂柱进行洗脱。

进一步，所述硅胶柱为反相硅胶柱；所述硅胶柱洗脱剂选用水、甲醇、乙醇、丙酮、甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液中的至少一种；所述硅胶柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或者辛烷基硅烷键合硅胶。

上述甲醇水溶液采用甲醇和水以任意体积百分比配制而成；上述乙醇水溶液采用乙醇和水以任意体积百分比配制而成；上述丙酮水溶液采用丙酮和水以任意体积百分比配制而成。

由于灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的极性较大，因此硅胶柱采用反相硅胶柱，这样过柱时可以采用较大极性的硅胶柱洗脱剂过柱，不仅达到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的分离纯化效果，而且可以提高硅胶柱的分离纯化速度，以及节约硅胶柱洗脱剂的使用量。

过硅胶柱时，可以采用硅胶柱洗脱剂对硅胶柱进行等度洗脱或者梯度洗脱。

进一步，所述的灰毡毛忍冬原材料为灰毡毛忍冬花蕾干品粉末或者经过粉碎的新鲜的灰毡毛忍冬花蕾。

使用溶剂提取法对灰毡毛忍冬原材料提取时，为了提高溶剂对灰毡毛忍冬原材料的提取效果，使灰毡毛忍冬原材料的有效成分充分溶于溶剂中，上述灰毡毛忍冬原材料为灰毡毛忍冬花蕾干品粉末或者经过粉碎的新鲜的灰毡毛忍冬花蕾，这样当灰毡毛忍冬原材料浸入溶剂中后，可以提高灰毡毛忍冬原材料与溶剂的接触面积，使灰毡毛忍冬原材料与溶剂充分作用，因此可以提高溶剂对灰毡毛忍冬原材料的提取效率。

根据上述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物，包括至少一种以下活性成分：3-咖啡酰基奎宁酸、3-对香豆酰基奎宁酸、反式-5-O-阿魏酰奎宁酸、3-咖啡酰基奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯。

通过现有的分析测试手段对灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物进行检测分析，并通过活性实验分析出灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物中所包含的活性成分。

上述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物在制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品中的用途。

上述糖尿病并发症包括膜损伤愈合缺损、白内障、视网膜症、和肾功能障碍。

上述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物在制备用以治疗糖尿病并发症的药品中的用途，所述用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品包括药用量的所述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物和其他辅料。

上述药品可以制成多种剂型，例如片剂、丸剂、散剂、胶囊和口服液等。

本发明的有益效果：

本发明通过灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，首次实现了从灰毡毛忍冬原材料中提取出灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物；同时，提供了灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的用途，将灰毡毛忍冬咖啡奎宁酸类提取物应用于制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

本实施例提供了一种灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其包括以下步骤：

A.灰毡毛忍冬花蕾干品粉末2.0公斤浸入乙醇溶剂中，在80℃下回流提取3次，合并含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物的提取液，然后减压浓缩后得到202.1克灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提物；

B.将步骤A中得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提物溶于水后上2.0公斤大孔吸附树脂柱，分别以水和乙醇洗脱，收集含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提物溶的乙醇洗脱部位，然后减压浓缩得到120.5克提取物，该提取物溶于水后上1.5公斤反相硅胶柱，并依次用“水—20%乙醇水溶液—30%乙醇水溶液—40%乙醇水溶液—60%乙醇水溶液—80%乙醇水溶液—100%乙醇”进行梯度洗脱，分别收集乙醇浓度为20%（含咖啡酰奎宁酸类一取代物）和30%（含咖啡酰奎宁酸类二取代物）的洗脱液，经加压浓缩和真空干燥后即得灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物，其灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的HPLC含量可达到80%以上。

本实施例的步骤A中所述的乙醇溶剂可以采用其他溶剂代替，以提取灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物，例如采用水、甲醇、丙酮、甲醇水溶液等溶剂。

本实施例的步骤B中分别以水和乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，作为其他洗脱方式，也可以分别采用水和甲醇，或者分别采用水和丙酮分别洗脱大孔吸附树脂柱。同时，还可以单独采用水、甲醇、乙醇或者丙酮对大孔吸附树脂柱进行洗脱。

本实施例的步骤B中通过“水—20%乙醇水溶液—30%乙醇水溶液—40%乙醇水溶液—60%乙醇水溶液—80%乙醇水溶液—乙醇”对硅胶柱进行梯度洗脱。作为其他实现方式，本实施例可以采用甲醇代替乙醇，甲醇水溶液代替乙醇水溶液进行硅胶柱洗脱，也可以采用其他硅胶柱洗脱剂对硅胶柱进行洗脱。容易理解的，在用硅胶柱洗脱剂可以采用等度洗脱或者梯度洗脱进行过柱。

本实施例的大孔树脂吸附柱的固定相可以选用D-101大孔树脂、HP-20大孔树脂或者DM130大孔树脂进行装柱。

本实施例的硅胶柱的固定相可以选用十八烷基硅烷键合硅胶或者辛烷基硅烷键合硅胶进行装柱。

实施例2

本实施例采用现有的检测分析方法对根据实施例1所述的制备方法得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物进行了检测分析，得到该灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物所包含的活性成分有：3-咖啡酰基奎宁酸、3-对香豆酰基奎宁酸、反式-5-O-阿魏酰奎宁酸、3-咖啡酰基奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯。

3-咖啡酰基奎宁酸、3-对香豆酰基奎宁酸、反式-5-O-阿魏酰奎宁酸和3-咖啡酰基奎宁酸甲酯属于咖啡酰奎宁酸类一取代物。

3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯属于咖啡酰奎宁酸类二取代物。

实施例3

本实施例为灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物抑制醛糖还原酶的活性作用实验。

（1）大鼠晶状体醛糖还原酶的制备

将Wistar大鼠处死，取出其晶状体，放入含有0.5mM的氟化苯基甲基磺酰（PMSF）和10mM的2-巯基乙醇的135mM的Na,K-磷酸缓冲液（PH7.0）中，进行匀浆，离心操作后取上清液，得到大鼠晶状体醛糖还原酶，并于4℃保存。

（2）灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物抑制醛糖还原酶的活性作用实验

培养液的制备：取上述大鼠晶状体醛糖还原酶，用180mM的Na,K-磷酸缓冲液（PH7.0）稀释10～40倍，取100μl，并加入135mM的Na,K-磷酸缓冲液（PH7.0）225μl，100mM的Li₂SO₄溶液50μl，0.03mM的NADPH溶液25μl组成培养液，以1mM的DL-甘油醛100μl作为底物（空白对照则加入同体积的水）。

将灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物溶于DMSO中，并稀释成不同的浓度，各取25μl加入上述制备的培养液中，然后在反应液中加入50μl，0.3 mM的NADPH。在30℃水浴中培养30分钟后，加入150μl，0.5 N的HCl溶液以中止反应，再加入0.5ml含有10mM的咪唑的6N NaOH溶液，并在60℃水浴中反应10 min，使NADP⁺转化为荧光物质。最后再以荧光光度仪，在室温，照射波长360 nm，检测波长460 nm条件下测定，估计出灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的半数抑制浓度（IC₅₀）。本实验以现有的槲皮素作为对照组，并按照上述方法分别计算出灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物中所含的咖啡酰奎宁酸类一取代物和咖啡酰奎宁酸类二取代物的半数抑制浓度。试验结果如下表1所示。

表1灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物抑制醛糖还原酶的活性作用实验结果

提取物	IC50（μg/ml）
		咖啡酰奎宁酸类一取代物	11.5
咖啡酰奎宁酸类二取代物	0.4
		灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物	2.9
槲皮素（阳性对照）	0.8

由上表一的试验结果可以得出以下结论：灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物对醛糖还原酶的半数抑制浓度为2.9 μg/ml，其抑制浓度与槲皮素的半数抑制浓度相差不大，对醛糖还原酶具有很好的抑制作用，因此灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物具有良好的药用价值。而且灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物中的咖啡酰奎宁酸类一取代物和咖啡酰奎宁酸类二取代物均对醛糖还原酶具有良好的抑制作用，尤其是咖啡酰奎宁酸类二取代物，其半数抑制浓度低于槲皮素的半数抑制浓度，说明咖啡酰奎宁酸类二取代物对醛糖还原酶的抑制效果还要优于作为阳性对照的槲皮素。

实施4

本实施例对灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物中所含的咖啡酰奎宁酸单体进行了抑制醛糖还原酶的活性作用实验，且实验方法同实施例3，其实验结果如下表2所示。

表2灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物中所含各活性成分的抑制醛糖还原酶的活性作用实验结果。

咖啡酰奎宁酸单体	IC50（μM）
		3-咖啡酰基奎宁酸	1.30
3-对香豆酰基奎宁酸	27.0
		反式-5-O-阿魏酰奎宁酸	11.5
3-咖啡酰基奎宁酸甲酯	9.43
		3,4-二咖啡酰奎宁酸	0.23
3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯	0.42
		3,5-二咖啡酰奎宁酸	0.25
3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯	0.44
		槲皮素（阳性对照）	2.2

由上表2可知上述咖啡酰奎宁酸单体对醛糖还原酶均具有良好的抑制作用。其中3-咖啡酰基奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯对醛糖还原酶的抑制作用要优于槲皮素。

实施例5

本实施例将灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物应用于用于治疗糖尿病并发症的药品中，并配以其他不同的药用辅料制备成不同的剂型。

（1）丸剂：取灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物、淀粉、交联羧甲基纤维素钠分别粉碎过100目筛，混合均匀，用水泛丸，干燥，每丸含灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物0.1～100 mg，检验合格，包装即得。

（2）口服液：取灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物，加水溶解，加矫味剂适量，加活性炭5 g，加热30分钟，滤过，加水至1000 ml，滤过，灌封，灭菌，每ml含灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物0.1～100 mg，检验合格，包装即得。

（3）糖浆：取灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物，加水溶解，加蔗糖500 g及防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，加水至1000 ml，滤过，灌封，灭菌，每ml含灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物0.1～100 mg，检验合格，包装即得。

（4）散剂、片剂、胶囊、颗粒剂、浸膏剂：均按常规工艺制备，每片或每颗胶囊中含灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物0.1～100 mg；散剂或颗粒剂每小袋为1 g含灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物0.1～100 mg，检验合格，包装即得。

容易理解的，上述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物不仅可以用于制备用以治疗糖尿病并发症的药品，而且根据实际使用情况，也可以制备成保健食品。

同时，也可以选用灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸单体中的一种、任意两种或者多种作为药用主料，然后配以其他辅料制备成用以治疗糖尿病并发症的药品或者保健品。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

用溶剂对灰毡毛忍冬原材料进行至少一次提取，得到含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物的提取液；所述含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物的提取液经过减压浓缩得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物；

所述步骤A中得到的所述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物采用大孔树脂吸附法和/或柱层析法进行分离纯化，得到含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的提取液；所述含有灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的提取液经过减压浓缩得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物。

2.根据权利要求1所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤A中的所述溶剂为水、甲醇、乙醇、正丁醇中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤B为：所述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类粗提取物先后分别采用大孔树脂吸附法和柱层析法进行分离纯化，得到灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物；所述大孔树脂吸附法采用大孔吸附树脂柱和大孔吸附树脂柱洗脱剂进行分离纯化，所述柱层析法采用硅胶柱和硅胶柱洗脱剂进行分离纯化。

4.根据权利要去3所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂柱洗脱剂选用水、甲醇、乙醇、丙酮、甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液中的至少一种；所述大孔吸附树脂柱的固定相为D-101大孔树脂、HP-20大孔树脂、DM130大孔树脂中的一种。

5.根据权利要求3所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱为反相硅胶柱；所述硅胶柱洗脱剂选用水、甲醇、乙醇、丙酮、甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液中的至少一种；所述硅胶柱的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或者辛烷基硅烷键合硅胶。

6.根据权利要求1-5任一项所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法，其特征在于，所述的灰毡毛忍冬原材料为灰毡毛忍冬花蕾干品粉末或者经过粉碎的新鲜的灰毡毛忍冬花蕾。

7.一种根据权利要求1-6任一项所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物的制备方法所得到的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物，其特征在于，包括至少一种以下活性成分：3-咖啡酰基奎宁酸、3-对香豆酰基奎宁酸、反式-5-O-阿魏酰奎宁酸、3-咖啡酰基奎宁酸甲酯、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、3,5-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸甲酯。

8.根据权利要求7所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物在制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品中的用途。

9.根据权利要求8所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物在制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品中的用途，其特征在于，所述糖尿病并发症包括角膜损伤愈合缺损、白内障、视网膜症和肾功能障碍。

10.根据权利要求8所述的灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物在制备用以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品中的用途，其特征在于，所述用于以治疗糖尿病并发症的药品或保健食品包括药用量的所述灰毡毛忍冬咖啡酰奎宁酸类提取物和其他辅料。