CN113784978A - 高亲合力wt1 t细胞受体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了对来自Wilms肿瘤蛋白1(WT1)的肿瘤相关抗原p37具有高功能亲合力的T细胞受体(TCR)和相关结合蛋白、表达这种高亲和力的WT1特异性TCR的T细胞、其编码核酸以及用于治疗细胞过度表达WT1和/或产生p37抗原的疾病或病症的组合物，例如在癌症中。

Description

高亲合力WT1 T细胞受体及其用途
关于序列表的声明
与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并在此通过引用并入说明书。包含序列表的文本名称是360056_466WO_SEQUENCE_LISTING.txt。该文本文件是243KB，创建于2020年3月8日，正在通过EFS-Web以电子方式提交。
背景技术
使用基因工程T细胞的过继性T细胞免疫疗法在多项试验中显示出前景，其中使用具有足够亲和力的抗原受体靶向肿瘤相关抗原，包括基于抗体的嵌合受体1-3和高亲和力TCR4-8。虽然胸腺中多样性产生的自然过程采用RAG介导的TCR基因重排来产生长度和氨基酸组成不同的高度多样化的CDR3，但在中枢耐受施加的亲和力限制内分离有效的高亲和力TCR，仍然是对已确定候选细胞内自身/肿瘤抗原的多种恶性肿瘤实施过继性T细胞免疫疗法的实质性障碍9,10。此外，TCR过继免疫疗法具有检测由MHC I类呈递在细胞表面的细胞内抗原的能力。
由于WT1蛋白的免疫特性(Cheever et al.,Clin.Cancer Res.15:5323,2009)及其在许多与不良预后相关的侵袭性肿瘤类型中的表达，WT1蛋白是临床开发的一个有吸引力的目标。WT1涉及促进增殖和致癌性的基因表达的调节(Oji et al.,Jpn.J.CancerRes.90:194,1999)，在大多数高危白血病(Menssen et al.,Leukemia 9:1060,1995)、高达80％NSCLC(Oji et al.,Int.J.Cancer 100:297,2002)、100％间皮瘤(Tsuta et al.,App.Immunohistochem.Mol.Morphol.17:126,2009)和≥80％妇科恶性肿瘤(Coosemans andVan Gool,Expert Rev.Clin.Immunol.10:705,2014)中过度表达。已知WT1蛋白的几种肽是肿瘤相关抗原肽，是HLA-A*0201限制性抗原。
显然需要针对各种癌症(例如白血病和肿瘤)的替代性高WT1抗原特异性TCR免疫疗法。当前公开的实施例解决了这些需要并提供了其他相关优点。
附图说明
图1A和1B示出了如何通过基于高通量测序的策略识别WT137特异性TCR。(A)用于识别与高WT137-45肽/MHC四聚体结合相关的TCR克隆型的基于初始测序的策略示意图。(B)示出了分选群体与总群体的百分比的富集关系，并突出了选定的TCR。由黑色圆圈表示的所有TCR均已合成并评估其抗原特异性(共27个)。
图2示出了结合高水平CD8非依赖性(CD8i)四聚体的TCR的功能性评估的结果。在缺乏内源性TCRα/β链的Jurkat细胞内表达TCR构建体。示出了每个TCR的四聚体染色与CD3表达的关系(CD3表达与转基因TCR表面表达直接相关)。
图3A-3C示出了额外的WT137特异性TCR是通过改进的基于高通量测序的策略使用CD8非依赖性(CD8i)四聚体进行识别。(A)用于识别与高CD8非依赖性WT137肽/MHC四聚体结合相关的TCR克隆型的基于改进测序的策略示意图。(B)与(C)的类似分析相比，当使用CD8i四聚体时，显示了原始分选群体与总群体百分比的富集。根据降低的表面CD3水平和CD8i四聚体结合，选择了额外的14个TCR。由阴影(对角线图案)圆圈表示的所有TCR均已合成并评估其抗原特异性。
图4示出了选定的WT137TCR的CD8i四聚体结合。在缺乏内源性TCRα/β链的Jurkat细胞内表达TCR构建体。示出了四聚体染色与每个TCR的CD3表达的关系(CD3表达与转基因TCR表面表达直接相关)。
图5A和5B示出了在转导进原代CD8+PBMC时，在IFNγ测定中选定的TCR的肽EC50的计算。(A)将选定的TCR转导进从供体PMBC分离的CD8+T细胞。在一周后，将细胞分选为四聚体+CD8+细胞并扩增。将扩增的抗原特异性细胞与肽脉冲T2靶细胞一起培养4至6小时，并通过流式细胞术确定IFNγ的产生。(B)通过非线性回归将产生IFNγ的细胞的百分比拟合到剂量-反应曲线以计算每个TCR的肽EC50。
图6示出了表达WT137-特异性TCR的原代CD8+T细胞有效地杀死WT1+HLA-A2+乳腺癌细胞系MDA-MB-468。针对高四聚体结合进行分选纯化，将CD8+初级T细胞用TCR转导，并以8:1的比例(一式三份)与已用
Figure BDA0003335439510000021
Rapid Red染料染色的乳腺癌细胞系MDA-MB-468混合。在72小时内每个TCR转导T细胞群体指定的时间点计算红色物体总面积(与活的靶细胞的总数量相关)。为了评估TCR转导T细胞对持久性抗原的持续反应性，在48小时添加额外的MDA-MV-468细胞。
图7示出了表达TCR10.1的CD4+和CD8+T细胞都可在体外反复攻击后消灭WT1+A2+胰腺癌细胞系PANC-1。将CD4+和CD8+T细胞都转导以表达WT137TCR10.1。将CD4+T细胞进一步转导以表达CD8α和CD8β基因。在8天后，将转导的细胞分选以纯化CD8+四聚体+和CD4+/CD8+四聚体+T细胞。CD4+/CD8+、CD8+或这两个群体(CD4和CD8)的抗原特异性细胞混合物以8:1(一式三份)的比例与先前已转导以表达
Figure BDA0003335439510000022
Red染料的胰腺癌细胞系PANC-1混合。在每个TCR转导T细胞种群指定的时间点计算红色物体总面积(与活的靶细胞的总数量有关)。为了评估TCR转导T细胞对持久性抗原的持续反应性，在48小时添加额外的PANC-1细胞。
图8A-8D示出了与使用本公开的WT1 p37肽特异性TCR转导的T细胞杀死(WT137-45TCR15.1)相比，与来自Schmitt et al.(Nat.Biotechnol.35:1188,2017)的用WT1 p126肽特异性C4 TCR转导的T细胞的肿瘤细胞系杀死的比较。注意与本公开的WT1 p137肽特异性TCR相比，C4 TCR具有对其肽:MHC复合物的较低亲和力。
具体实施方式
本公开提供对来自WT1的由氨基酸37-45组成的抗原肽(也称为WT137-45肽或p37肽抗原；例如VLDFAPPGA、SEQ ID NO：59)具有高功能亲合力的T细胞受体(TCR)，该抗原肽与主要组织相容性复合体(MHC)(例如人类白细胞抗原，HLA)有关。这种p37肽抗原特异性TCR对例如过继性免疫疗法以治疗癌症(例如过度表达WT1的癌症)是有用的。
作为背景，因为肿瘤产生于先前正常的组织，所以基于T细胞免疫疗法的大多数肿瘤靶点是自体抗原。例如，这种肿瘤相关抗原(TAA)可在癌症细胞中以高水平表达，但在其他细胞可不表达或可最低程度地表达。在胸腺中T细胞的发展过程中，与自体抗原结合弱的T细胞可以在胸腺中存活，并可经历进一步发展和突变，而与自体抗原结合强的T细胞通过免疫系统被消除，因为这种细胞会引起不良的自身免疫应答。因此，根据T细胞结合抗原的相对能力，将T细胞分类以准备免疫系统响应外来入侵者(即非自体抗原的识别)，同时防止自身免疫应答(即自体抗原的识别)。这一耐受机制限制可识别具有高亲和力的肿瘤(自体)抗原的自然存在的T细胞，并因此消灭能有效地消除肿瘤细胞的T细胞。因此，难以将具有高亲和力的肿瘤抗原特异性的TCR的T细胞分离，因此大多数这种细胞基本上通过免疫系统被消除。
在本公开中，将基于高通量测序的方法应用到来自大约15个健康供体的免疫细胞以识别对p37：MHC复合物具有高功能亲合力的TCR。这种策略还允许TCR的选择，即使当在T细胞表面的TCR表达水平较低时。排序种群的富集与总种群的百分比的关系用于选择高亲和力和高功能亲合力(即具有最大抗肿瘤作用的那些)的p37特异性TCR和本发明公开中的其组合物。在T细胞中识别这种高功能亲合力的p37特异性TCR：(a)结合独立于CD8的p37肽/MHC四聚体，(b)经历较少的体外肽驱动扩增，和(c)在一些情况下，与T细胞中的不具有这种特性的其他TCR相比，这种TCR在T细胞表面以较低水平表达。总共27个TCR均已合成并评估其对p37抗原特异性(参见图1B)。
在某些实施例中，针对WT1肽的特异性T细胞受体(TCR)包括TCRα链和TCRβ链，其中TCRα链包括含有SEQ ID NO：253-263和34-44中任一项所示的氨基酸序列的Vα结构域和具有SEQ ID NO：47的氨基酸序列的α链恒定域，以及TCRβ链包括含有SEQ ID NO：253-263和23-33中任一项所示的氨基酸序列的Vβ结构域和具有SEQ ID NO：45或46的氨基酸序列的β链恒定域，这种TCR在T细胞表面特异性地结合VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原复合物并促进IFNγ产生，pEC50为8.5或更高。在某些实施例中，选定的TCR特异性地结合VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原(HLA)复合物，KD小于或等于约10-8M，或其中与公开于Schmitt et al.,Nat.Biotechnol.35:1188,2017中的TCR相比，在降低的Koff比率下，从VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原(HLA)复合物中分离出高亲和力TCR。
本文所述的组合物和方法将在某些实施例中具有治疗与WT1表达或过度表达(例如可检测到的WT1表达水平在统计学上显著高于正常或无病细胞中可检测到的WT1表达水平)相关的疾病或病症的治疗效用。这种疾病包括过度增殖性病症或增殖性病症的各种形式，例如血液系统恶性肿瘤或实体癌。本文描述了这些和相关用途的非限制性示例，这些示例包括体外、离体和体内刺激WT1抗原特异性T细胞反应，例如通过使用表达WT1肽(例如VLDFAPPGA、SEQ ID NO：59，也称为WT137-45肽或p37肽)特异性的增强亲和力TCR的重组T细胞。
在更详细地阐述本公开之前，提供本文中所使用的某些术语的定义可能有助于理解。本公开中全文阐述另外的定义。
在本说明书中，任何浓度范围、百分比范围、比例范围或整数范围应理解为包括在所列举的范围内的任何整数的值，以及适当时，其分数(例如整数十分之一和百分之一)，除非另有说明。此外，本文所列举的任何数字范围涉及的任何物理性质，例如聚合物亚基、尺寸或厚度，应理解为包括所列举的范围内的任何整数，除非另有说明。如本文所使用的，术语“大约”是指所指定的范围、数值或结构的±10％，除非另有说明。应当理解的是，本文所使用的术语“一(a)”或”一(an)”是指“一个或多个”所列举的成分。替代方案(例如，“或”)的使用应理解为表示替代方案的一个、两个或其任意组合。如本文所使用的，术语“包括”、“具有”和“包含”作为同义词使用，其中术语及其变体旨在解释为非限制性的。
另外，应当理解的是，从本文所述的结构和取代基的各种组合中得到的单个化合物或化合物的组以与每个化合物或化合物的组单独示出相同的程度公开于本申请中。因此，特定结构或特定取代基的选择在本公开的范围内。
术语“基本上由...组成”不等同于“包含”，而是指权利要求的具体材料或步骤，或没有实质上影响所要求保护的主题名称的基本特征的那些材料或步骤。例如，蛋白质结构域、区域或模块(例如结合域、铰链区、连接模块)或蛋白质(可能具有一个或多个结构域、区域或模块)“基本上由”特定的氨基酸序列组成，当结构域、区域、模块或蛋白质的氨基酸序列包括延伸、缺失、突变或其任意组合(例如在氨基或羧基端或在结构域之间的氨基酸)时，这些氨基酸的组合占结构域、区域、模块或蛋白质的长度的最多20％(例如最多15％、10％、8％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)并且不会实质上影响(例如降低不超过50％，例如不超过40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或1％的活性)结构域、区域、模块或蛋白质的活性(例如结合蛋白质的目标结合亲和力)。
如本文所使用的，在一些方面，“免疫系统细胞”是指源自骨髓中造血干细胞的免疫系统的任何细胞，其产生两个主要的谱系：髓系祖细胞(其产生髓细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、巨核细胞和粒细胞)和淋巴样祖细胞(其产生淋巴细胞，例如T细胞、B细胞和自然杀伤(NK)细胞)。示例性免疫系统细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、调节性T细胞、干细胞记忆T细胞、自然杀伤细胞(例如NK细胞或NK-T细胞)、B细胞和树突状细胞。巨噬细胞和树突状细胞可被称为“抗原呈递细胞”或“APC”，当在APC表面上的与肽复合的主要组织相容性复合物(MHC)受体与在T细胞表面的TCR相互作用时，其是能够激活T细胞的专职细胞。
在某些方面，“主要组织相容性复合物(MHC)”可以是指将肽抗原递送到细胞表面的糖蛋白。MHC I类分子是具有跨膜α链(具有三个α结构域)和非共价连接的β2微球蛋白的异二聚体。MHC II类分子由跨膜糖蛋白α和β构成，这两者都跨膜。每条链具有两个结构域。MHC I类分子将源自细胞质基质的肽递送到细胞表面，在细胞表面通过CD8+T细胞识别肽：MHC复合物。MHC II类分子将源自囊泡系统的肽递送到细胞表面，在细胞表面通过CD4+T细胞识别MHC II类分子。人类MHC被称为人类白细胞抗原(HLA)。
“T细胞”或“T淋巴细胞”是在胸腺成熟的免疫系统细胞并产生T细胞受体(TCR)。T细胞可表现出与初始T细胞(例如不暴露于抗原；与TCM相比，CD62L、CCR7、CD28、CD3、CD127和CD45RA的表达增加，CD45RO的表达减少)、记忆T细胞(TM)(例如经历过抗原的和长寿的)和效应细胞(经历过抗原的，细胞毒性的)相关的表现型或标志物。TM可进一步分为表现出与中央记忆T细胞(TCM，例如，与初始T细胞相比，CD62L、CCR7、CD28、CD127、CD45RO和CD95的表达增加，CD54RA的表达减少)和效应记忆T细胞(TEM，例如与初始T细胞或TCM相比，CD62L、CCR7、CD28、CD45RA的表达减少，CD127的表达增加)有关的表现型或标志物的子集。效应T细胞(TE)可指经历过抗原的CD8+细胞毒性T淋巴细胞，与TCM相比，其减少CD62L、CCR7、CD28的表达并对颗粒酶和穿孔蛋白呈阳性。辅助T细胞(TH)可包括CD4+细胞，其通过释放细胞因子影响其他免疫细胞的活性。CD4+T细胞可激活和抑制适应性免疫应答，并且那两种功能中的哪一种被诱导将取决于其他细胞或信号的存在。可以用已知的技术收集T细胞，并通过已知的技术富集或剔除各种亚群或其组合，例如通过与抗体的结合亲和力、流式细胞仪或免疫磁性选择。其他示例性T细胞包括调节性T细胞，如CD4+CD25+(Foxp3+)调节性T细胞和Treg17细胞，以及Tr1、Th3、CD8+CD28-和Qa-1限制性T细胞。
"T细胞受体"(TCR)在某些方面是指一种免疫球蛋白超家族成员(具有一个可变结合域、一个恒定域、一个跨膜区和一个短的细胞质尾巴；例如，见Janeway et al.,Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,3rd Ed.,Current BiologyPublications,p.4:33,1997)能够特异性地与结合在MHC受体上的抗原肽结合。在某些方面，TCR是指包括本公开的两个TCR可变结构域(Vα和Vβ)的结合蛋白。在某些方面，TCR包括单链TCR(即本公开的包含TCR可变结构域的单链融合蛋白，或本公开的包含TCR可变结构域的CAR(在此讨论)。在某些方面，TCR可以在细胞表面或以可溶性形式存在，一般由具有α和β链(也分别称为TCR和TCRβ)、或具有γ和δ链(也分别称为TCRγ和TCR)的异质二聚体组成。
与免疫球蛋白一样，TCR链(如α链、β链)的细胞外部分包含两个免疫球蛋白结构域，一个可变结构域(如α链可变结构域或Vα，β链可变结构域或Vβ；通常是基于Kabat编号的1至116个氨基酸Kabat et al,"Sequences of Proteins of Immunological Interest,USDept.Health and Human Services,Public Health Service National Institutes ofHealth,1991,5th ed.)在N端，和一个邻近细胞膜的恒定结构域(例如，α-链恒定结构域或Cα，通常是基于Kabat的81至259个氨基酸，β-链恒定结构域或Cβ，通常是基于Kabat的81至295个氨基酸)。与免疫球蛋白一样，可变结构域也包含互补决定区(CDR)，由框架区(FR)分隔(参见，例如，Jores et al.,Proc.Nat'l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia etal.,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc et al.,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在某些实施例中，TCR被发现在T细胞(或T淋巴细胞)的表面，并与CD3复合物结合。本声明中使用的TCR的来源可以来自各种动物物种，如人、小鼠、大鼠、兔子或其他哺乳动物。
术语"可变区"或"可变域"是指免疫球蛋白超家族结合蛋白(如TCR的α链或β链(或γδTCR的γ链和δ链))中参与免疫球蛋白超家族结合蛋白(如TCR)与抗原结合的域。天然TCR的α链和β链(分别为Vα和Vβ)的可变结构通常具有类似的结构，每个结构域包括四个普遍保守的框架区(FR)和三个CDR。Vα结构域由两个独立的DNA片段编码，即可变基因片段和连接基因片段(V-J)；Vβ结构域由三个独立的DNA片段编码，即可变基因片段、多样性基因片段和连接基因片段(V-D-J)。单一的Vα或Vβ结构域可能足以赋予抗原结合的特异性。此外，可以利用结合抗原的TCR的Vα或Vβ结构域来分别筛选互补的Vα或Vβ结构域库，从而分离出结合特定抗原的TCR。
术语"互补决定区"和"CDR"与"超可变区"或"HVR"是同义的，在本领域内是指免疫球蛋白(如TCR)可变区中的氨基酸序列，它们赋予抗原特异性和/或结合亲和力，并在主要氨基酸序列中被框架区相互分开。一般来说，每个TCRα链可变区(αCDR1、αCDR2、αCDR3)有三个CDR，每个TCRβ链可变区(βCDR1、βCDR2、βCDR3)有三个CDR。在TCR中，CDR3被认为是负责识别加工后抗原的主要CDR。一般来说，CDR1和CDR2主要或完全与MHC相互作用。
CDR1和CDR2在TCR可变区编码序列的可变基因段内编码，而CDR3由Vα的可变和连接段的跨区编码，或Vβ的可变、多样性和连接段的跨区编码。因此，如果Vα或Vβ的可变基因段的身份是已知的，它们相应的CDR1和CDR2的序列可以被推导出来；例如，根据本文所述的编号方案。与CDR1和CDR2相比，由于重组过程中核苷酸的增加和损失，CDR3通常明显更多样化。
TCR可变域序列可以与一个编号方案(如Kabat、Chothia、EU、IMGT、EnhancedChothia和Aho)对齐，允许对等价的残基位置进行注释，并使用例如ANARCI软件工具对不同的分子进行比较(2016,Bioinformatics 15:298-300)。一个编号方案为TCR可变域中的框架区和CDR提供了一个标准化的划分。在某些实施例中，本公开的CDR是根据IMGT编号方案(Lefranc et al.,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003；imgt.org/IMGTindex/V-QUEST.php)来识别的。在某些实施例中，本公开的CDR3氨基酸序列包括一个或多个连接氨基酸(junctionamino acid)；例如，如本文讨论的在(RAG)介导的重排过程中可能产生的。
如本文所用，术语"CD8共受体"或"CD8"是指细胞表面糖蛋白CD8，无论是作为α-α同源二聚体还是α-β异源二聚体。CD8共受体协助细胞毒性T细胞(CD8+)的功能，并通过其细胞质酪氨酸磷酸化途径的信号传导发挥作用(Gao and Jakobsen,Immunol.Today 21:630-636,2000；Cole and Gao,Cell.Mol.Immunol.1:81-88,2004)。有五(5)种已知的人类CD8β链异构体(参见UniProtKB标识符P10966)和一种已知的人类CD8α链异构体(参见UniProtKB标识符P01732)。
"CD4"是一种免疫球蛋白共受体糖蛋白，协助TCR与抗原呈递细胞进行交流(参见Campbell&Reece,Biology 909(Benjamin Cummings,Sixth Ed.,2002)；UniProtKB标识符P01730)。CD4存在于免疫细胞如T辅助细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的表面，包括在细胞表面表达的四个免疫球蛋白结构域(D1至D4)。在抗原呈递过程中，CD4与TCR复合物一起被招募到MHCII分子的不同区域结合(CD4结合MHCIIβ2，而TCR复合物结合MHCIIα1/β1)。在不希望被理论束缚的情况下，人们认为，与TCR复合体的接近使CD4相关的激酶分子能够将CD3的细胞质域上存在的免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)磷酸化。这种活动被认为是放大了由激活的TCR产生的信号，以产生或招募各种类型的免疫系统细胞，包括T辅助细胞，以及免疫反应。
如本文所用，"D/N/P区"在某些方面是指预测位于多样性(D)基因段内的核苷酸或由核苷酸编码的氨基酸，它可以包括在导致T细胞受体多样性的V(D)J重组过程中插入(或删除)的非模板(N)核苷酸和回文(P)核苷酸。重组激活基因(RAG)介导的可变(V)、多样性(D)和连接(J)基因片段的重排是一个不准确的过程，导致核苷酸的可变加减(被称为回文或P核苷酸)，随后终端脱氧核苷酸转移酶(TdT)活性进一步增加随机非模板(N)核苷酸。最后，外切核酸酶去除未配对的核苷酸，缺口则由DNA合成和修复酶填补。这样的修整和修复机制导致了结点的多样性，而这种多样性是不同TCR对不同抗原的高效和特异识别的基础。D基因段可以用国际ImMunoGeneTics信息系统(IMGT；在imgt.org)的注释系统来识别。
在某些方面，"CD3"是一个由六条链组成的多蛋白复合物(参见Abbas andLichtman,2003；Janeway et al.,p172 and 178,1999)在哺乳动物中，该复合物包括一条CD3γ链、一条CD3δ链、两条CD3ε链和CD3ζ链的同源二聚体。CD3γ、CD3δ和CD3ε链是免疫球蛋白超家族中高度相关的细胞表面蛋白，含有一个免疫球蛋白结构域。CD3γ、CD3δ和CD3ε链的跨膜区域带负电，这一特性使这些链能够与T细胞受体链的带正电区域结合。CD3γ、CD3δ和CD3ε链的细胞内尾部各含有一个保守的基序，称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM，而每个CD3ζ链有三个。在不希望被理论束缚的情况下，人们相信ITAM对TCR复合物的信号传递能力非常重要。本公开中使用的CD3可以来自各种动物物种，包括人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。
如本文所用，"TCR复合物"在某些方面是指由CD3与TCR联合形成的复合物。例如，TCR复合物可以由CD3γ链、CD3δ链、两条CD3ε链、CD3ζ链的同源二聚体、TCRα链和TCRβ链组成。替代地，TCR复合物可以由CD3γ链、CD3δ链、两条CD3ε链、CD3ζ链的同源二聚体、TCRγ链和TCRδ链组成。
在某些方面，本文所用的"TCR复合物的成分"是指TCR链(即TCRα、TCRβ、TCRγ或TCRδ)、CD3链(即CD3γ、CD3δ、CD3ε或CD3ζ)，或由两个或多个TCR链或CD3链形成的复合物(例如，TCRα和TCRβ的复合物、TCRγ和TCRδ的复合物、CD3ε和CD3δ的复合物、CD3γ和CD3ε的复合物或TCRα、TCRβ、CD3γ、CD3δ和两个CD3ε链的亚TCR复合物)。
本文所用的"抗原"或"Ag"是指能引起免疫反应的免疫原性分子。这种免疫反应可能涉及抗体的产生、特定免疫能力细胞(例如T细胞)的激活，或两者兼而有之。抗原(免疫原性分子)可以是，例如，肽、糖肽、多肽、糖多肽、多核苷酸、多糖、脂质或类似物。很明显，抗原可以被合成，重组生产，或从生物样本中提取。可以包含一个或多个抗原的示例性生物样本包括组织样本、肿瘤样本、细胞、生物液体或其组合。抗原可以由经过改造或基因工程来表达抗原的细胞产生，或者由内源性(例如，没有经过人类干预的改造或基因工程)表达具有免疫原性的突变或多态性的细胞产生。
本文所用的"新抗原"是指含有结构变化、改变或突变的宿主细胞产物，它创造了一个新的抗原或抗原表位，该表位以前没有在受试者的基因组中(即在受试者的健康组织样本中)观察到，也没有被宿主的免疫系统"看到"或识别，其中：(a)被细胞的抗原处理和运输机制处理，并与MHC(例如HLA)分子一起呈现在细胞表面；和(b)引起免疫反应(例如细胞(T细胞)反应)。新抗原可源于例如编码多核苷酸的改变(替换、添加、删除)，从而导致改变或突变的产物，或源于外源核酸分子或蛋白质插入细胞，或源于暴露于环境因素(如化学、放射性)导致的遗传变化。新抗原可以与肿瘤抗原分开产生，也可以从肿瘤抗原产生或与肿瘤抗原相关。"肿瘤新抗原"(或"肿瘤特异性新抗原")是指包含与肿瘤细胞或肿瘤内多个细胞相关的、由肿瘤细胞或肿瘤内多个细胞产生、或产生于肿瘤细胞内或肿瘤内多个细胞内的新抗原决定簇的蛋白质。肿瘤新抗原决定簇是在例如含有由肿瘤细胞(如胰腺癌、肺癌、结直肠癌)的DNA编码的一个或多个体细胞突变或染色体重排编码的抗原性肿瘤蛋白或肽上发现的，还有在来自与病毒相关的肿瘤的病毒开放阅读框架的蛋白或肽上发现。
术语"表位"或"抗原表位"包括任何分子、结构、氨基酸序列或蛋白质决定簇，它们被同源结合分子，如免疫球蛋白、T细胞受体(TCR)、嵌合抗原受体或其他结合分子、结构域或蛋白质识别并特异性结合。表位决定簇一般含有化学活性的分子表面组群，如氨基酸或糖的侧链，并可具有特定的三维结构特征，以及特定的电荷特征。
如本文所用，"特异性结合"或"特异性"在某些方面是指T细胞受体(TCR)或其结合域(如scTCR或其融合蛋白)与靶分子的结合或联合，其表观亲和力或KA(即以1/M为单位的特定结合相互作用的平衡结合常数)等于或大于109M-1(这等于该结合反应的结合速率[kon]与解离速率[koff]的比率)，或功能亲合力或EC50等于或大于10-9M，同时不与样品中的任何其他分子或成分明显结合或联合。TCR可分为"高亲和力"结合蛋白或结合域(或其融合蛋白)或"低亲和力"结合蛋白或结合域(或其融合蛋白)。"高亲和力"TCR或结合域是指那些具有至少109M-1、至少1010M-1、至少1011M-1、至少1012M-1或至少1013M-1的KA的TCR或其结合域。"低亲和力"结合蛋白或结合域是指那些具有最高达107M-1、106M-1、105M-1的KA的结合蛋白或结合域。另外，亲和力可以定义为以M为单位(如10-9M至10-13M或更少)的特定结合作用的平衡解离常数(KD)。
术语"功能亲合力"是指体外T细胞对给定浓度配体的反应的生物计量或激活阈值，其中生物计量可包括细胞因子的产生(如IFNγ的产生、IL-2的产生等)、细胞毒活性和增殖。例如，在体外通过产生细胞因子、具有细胞毒性或增殖而对很低的抗原剂量作出生物(免疫)反应的T细胞被认为具有高功能亲合力，而具有较低功能亲合力的T细胞需要较多的抗原才能引起免疫反应，与高亲合力T细胞相似。可以理解的是，功能亲合力与亲和力和亲合力是不同的。亲和力是指结合蛋白和其抗原/配体之间任何特定的结合强度。一些结合蛋白是多价的，与多种抗原结合--在这种情况下，整体连接的强度就是亲合力。
如本文所用，"功能亲合力"是指T细胞所表达的TCR的激活阈值的定量决定因素。在体内，无论TCR亲合力如何(高或低)，T细胞都会暴露在相似的抗原剂量下，但功能亲合力和免疫反应的有效性之间存在许多关联。一些体外研究表明，不同的T细胞功能(如增殖、细胞因子产生等)可以在不同的阈值下被触发(参见，例如，Betts et al.,J.Immunol.172:6407,2004；Langenkamp et al.,Eur.J.Immunol.32:2046,2002)。影响功能亲合力的因素包括(a)TCR对pMHC-复合物的亲和力，即TCR和pMHC之间相互作用的强度(Cawthon et al.,J.Immunol.167:2577,2001)，(b)TCR和CD4或CD8共受体的表达水平，以及(c)信号传递分子的分布和组成(Viola and Lanzavecchia,Science 273:104,1996)，以及削弱T细胞功能和TCR信号传递的分子表达水平。
在特定的接触时间后，诱发基线和最大反应之间的半最大反应所需的抗原浓度被称为"半最大有效浓度"或"EC50"。EC50值一般以摩尔(摩尔/升)量表示，但它通常被转换成如下的对数值--log10(EC50)--它提供了一个sigmoidal图表(参见，例如，图5A)。例如，如果EC50等于1μM(10-6M)，则log10(EC50)值为-6。另一个使用的值是pEC50，它被定义为EC50的负对数(-log10(EC50))。在上述例子中，相当于1μM的EC50的pEC50值为6。在某些实施例中，本公开的TCR的功能亲合力将是衡量其促进T细胞产生IFNγ的能力，这可以用本文所述的检测方法来测量。"高功能亲合力"TCR或其结合域是指EC50至少为10-9M、至少约10-10M、至少约10- 11M、至少约10-12M或至少约10-13M的那些TCR或其结合域。在一些实施例中，反应包括IFN-γ的产生；例如，表达TCR的免疫细胞(例如T细胞、NK细胞或NK-T细胞)对抗原的反应而产生IFN-γ。
在某些方面，"WT137-45抗原"或"WT137-45肽"或"WT137-45肽抗原"或"p37肽"或"p37抗原"或"p37肽抗原"各指WT1蛋白的天然或合成部分，其长度从约9个氨基酸到约15个氨基酸，包括VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)的氨基酸序列，其可与MHC(例如HLA)分子形成复合物，这样的复合物可与WT1肽：MHC(例如HLA)复合物的特异性TCR结合。由于WT1是一种内部宿主蛋白，WT1抗原肽将在I类MHC的背景下呈现。在特定的实施例中，WT1多肽VLDFAPPGA(SEQ IDNO：59)能够与人类I类HLA等位基因HLA-A*201联系。
在某些方面，短语"WT137-45肽特异性结合蛋白"或"WT137-45肽特异性TCR"或"WT137-45抗原特异性TCR"或"WT137-45肽抗原特异性TCR"或"WT1 p37肽特异性结合蛋白"或"WT1 p37肽特异性TCR"或"WT1 p37抗原特异性TCR"或"WT1 p37肽抗原特异性TCR"，在此可以互换，指的是与MHC或HLA分子(例如，在细胞表面)复合的WT1 p37肽特异性结合的蛋白质或多肽，具有大约或至少大约特定的亲和力或功能亲合力，优选高功能亲合力，如本文所定义。这种结合蛋白或多肽包括本文提供的TCR可变结构域。在某些实施例中，WT1特异性结合蛋白与WT1衍生的肽：HLA复合物(或WT1衍生的肽：MHC复合物)结合的功能亲合力对数[EC50]范围为约-2.5μM至约-3.75μM(相当于-8.5M至约-9.8M)。这些数值的EC50范围从大约3.16×10-9M到大约1.58×10-10M，例如通过以下段落和本文示例1中描述的检测方法来测量。
评估亲和力、表观亲和力、相对亲和力或功能亲合力的测定方法是已知的。如本文所述，通过评估与p37肽相关的各种浓度的四聚体的结合，例如通过使用标记的四聚体的流式细胞仪来测量本公开的TCR的表观亲和力或功能亲合力。在一些例子中，TCR的表观KD或EC50是使用2倍稀释的标记四聚体在一定浓度范围内测量的，然后通过非线性回归确定结合曲线。例如，表观KD被确定为产生一半最大结合的配体浓度，而EC50被确定为产生一半最大的例如细胞因子(例如IFNγ、IL-2)的配体浓度。
"MHC-肽四聚体染色"在某些方面是指用于检测抗原特异性T细胞的检测方法，其特点是MHC分子的四聚体，每个分子包括一个相同的肽，其氨基酸序列与至少一个抗原(例如，WTI)同源(例如，相同或相关)，其中该复合物能够结合对同源抗原特异的T细胞受体。每个MHC分子都可以用一个生物素分子进行标记。生物素化的MHC/肽通过加入链霉亲和素被四聚体化，链霉亲和素可以被荧光标记。该四聚体可通过荧光标记用流式细胞仪检测。在某些实施例中，MHC-肽四聚体试验被用来检测或选择本公开的高亲和力或高功能亲合力的TCR。
细胞因子的水平可以根据本文描述的方法和本领域的实践来确定，包括例如ELISA、ELISPOT、细胞内细胞因子染色和流式细胞仪及其组合(例如，细胞内细胞因子染色和流式细胞仪)。由抗原特异性激发或免疫反应刺激而产生的免疫细胞增殖和克隆扩增可以通过以下确定：分离淋巴细胞，如外周血细胞样本中的循环淋巴细胞或来自淋巴结的细胞，用抗原刺激细胞，并测量细胞因子的产生、细胞增殖和/或细胞活力，如通过加入氚代胸苷或非放射性检测，如MTT检测等。本文所述的免疫原对Th1免疫反应和Th2免疫反应之间平衡的影响可以例如通过确定Th1细胞因子，如IFN-γ、IL-12、IL-2和TNF-β，以及2型细胞因子，如IL-4、IL-5、IL-9、IL-10和IL-13的水平来检查。
在某些方面，术语"WT1 p37特异性结合域"或"WT137-45特异性结合域"或"WT1p37特异性结合片段"或""WT137-45特异性结合片段"是指负责与MHC或HLA分子复合的WT1 p37抗原特异性结合的WT1特异性TCR的域或部分。单独来自TCR的WT1 p37抗原特异性结合域(即没有WT1特异性TCR的任何其他部分)可以是可溶性的，并且可以与WT1 p37肽：MHC复合物结合，KD小于10-9M，小于约10-10M，小于约10-11M，小于约10-12M，或小于约10-13M。在其他实施例中，WT1 p37肽特异性TCR具有高功能亲合力，并特异性地与T细胞表面的VLDFAPPGA(SEQ IDNO：59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，促进IFNγ的产生，pEC50为8.5或更高(例如，达到约9、约9.5、约10、约10.5、约11、约11.5、约12、约12.5或约13)。示例性的WT1 p37肽特异性结合域包括WT1 p37肽特异性scTCR(例如，单链αβTCR蛋白，如Vα-L-Vβ、Vβ-L-Vα、Vα-Cα-L-Vα或Vα-L-Vβ-Cβ，其中Vα和Vβ分别是TCRα和β可变结构域，Cα和Cβ分别是TCRα和β恒定结构域，L是连接子)，它们是本公开的抗WT1 p37肽TCR或可以从本公开的抗WT1 p37肽TCR中得到。
抗原呈递细胞(APC)(如树突状细胞、巨噬细胞、淋巴细胞或其他类型的细胞)处理抗原的原则，以及APC向T细胞呈递抗原的原则，包括免疫相容(例如，至少共享一个与抗原呈递有关的MHC基因的等位基因形式)的APC和T细胞之间的主要组织相容性复合物(MHC)限制的呈递，都已得到证实(参见例如，Murphy,Janeway’s Immunobiology(8th Ed.)2011Garland Science,NY；chapters 6,9and 16)。例如，源自细胞膜的加工抗原肽(如肿瘤抗原、细胞内病原体)的长度一般为约7个氨基酸至约11个氨基酸，并将与I类MHC分子结合，而在囊泡系统中加工的肽(如细菌、病毒)的长度则为约10个氨基酸至约25个氨基酸，并与II类MHC分子结合。
本文所用的"跨膜结构域"是指具有三维结构的任何氨基酸序列，该结构在细胞膜中具有热力学稳定性，其长度一般为约15个氨基酸至约30个氨基酸。疏水性跨膜结构域的结构可以包括α螺旋、β桶、β片、β螺旋或其任何组合。示例性的跨膜结构域是来自CD4、CD8、CD28或CD27的跨膜结构域。
如本文所用，"免疫效应域"是scTCR或CAR融合蛋白的细胞内部分，在接受适当的信号时可以直接或间接促进细胞的免疫反应。在某些实施例中，免疫效应域是蛋白质或蛋白质复合物的一部分，它在结合时接收信号，或者它直接与目标分子结合，引发免疫效应域的信号。当免疫效应域包含一个或多个信号域或基序，如基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)时，可直接促进免疫细胞反应。在其他实施例中，效应域将通过与一个或多个直接促进细胞反应的其他蛋白结合，间接促进细胞反应。示例性的免疫效应域包括来自以下细胞内信号结构域：4-1BB、CD3ε、CD3δ、CD3ζ、CD27、CD28、CD79A、CD79B、CARD11、DAP10、FcRα、FcRβ、FcRγ、Fyn、HVEM、ICOS、Lck、LAG3、LAT、LRP、NOTCH1、Wnt、NKG2D、OX40、ROR2、Ryk、SLAMF1、Slp76、pTα、TCRα、TCRβ、TRIM、Zap70、PTCH2或两个或三个上述结构域的任何组合。
在某些方面，"连接物"是指连接两个蛋白质、多肽、肽、结构域、区域或基序的氨基酸序列。示例性连接物是"可变结构域连接物"，具体指的是连接T细胞受体Vα/β和Cα/β链(如Vα-Cα、Vβ-Cβ、Vα-Vβ)或将每个Vα-Cα、Vβ-Cβ、Vα-Vβ对连接到铰链或跨膜结构域的5至约35个氨基酸序列，它提供间隔功能和灵活性，足以使两个子结合结构域相互作用，从而使得到的单链多肽保持与T细胞受体相同的靶分子的特定结合亲和力或功能亲合力。在某些实施例中，可变域连接物包括约10至约30个氨基酸或约15至约25个氨基酸。在特定的实施例中，可变域连接肽包括GlyxSery的1至10次重复，其中x和y独立地是0至10的整数，只要x和y不都是0(例如，Gly4Ser(SEQ ID NO：171)、Gly3Ser(SEQ ID NO：172)、Gly2Ser或(Gly3Ser)n(Gly4Ser)1(SEQ ID NO：173)、(Gly3Ser)n(Gly2Ser)n、(SEQ ID NO：174)(Gly3Ser)n(Gly4Ser)n(SEQ ID NO：175)，或(Gly4Ser)n(SEQ ID NO：171)，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的整数)，其中连接的可变结构域形成功能结合域(例如，scTCR)。
在某些方面，"连接氨基酸"或"连接氨基酸残基"是指多肽的两个相邻的基序、区域或结构域之间的一个或多个(例如，约2-10个)氨基酸残基，例如结合结构域和相邻的恒定结构域之间或TCR链和相邻的自裂解肽之间。连接氨基酸可能从融合蛋白的构建设计(例如，在构建编码融合蛋白的核酸分子时使用限制性酶位点而产生的氨基酸残基)中产生，或在基因重组或重排事件(例如，RAG介导的重排)过程中产生。
在某些方面，"改变的结构域"或"改变的蛋白质"是指与具有野生型基序、区域、结构域、肽、多肽或蛋白质(例如野生型TCRα链、TCRβ链、TCRα恒定结构域、TCRβ恒定结构域)至少85％(例如86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％)相同的非相同序列的基序、区域、结构域、肽、多肽或蛋白质，优选其中或其中来自TCRα和β可变结构域中的每个的CDR3未被改变。
在目前公开的任何一个实施例中，TCR恒定结构域可以被修饰，以增强所需TCR链的配对。例如，由于修饰而在宿主T细胞中增强异源TCRα链和异源TCRβ链之间的配对，导致由两个异源链组成的TCR优先装配，而不是异源TCR链与内源TCR链的不希望的错配(参见，例如Govers et al.,Trends Mol.Med.16(2):77(2010)，其中的TCR修饰在此通过引用并入)。加强异源TCR链配对的示例性修饰包括在异源TCRα链和β链的每个中引入互补的半胱氨酸残基。在一些实施例中，编码异源TCRα-链的多核苷酸在48号氨基酸位置(对应全长的成熟人类TCRα-链序列)编码半胱氨酸，编码异源TCRβ-链的多核苷酸在57号氨基酸位置(对应全长的成熟人类TCRβ-链序列)编码半胱氨酸。
"嵌合抗原受体"(CAR)是指一种融合蛋白，它被设计为含有两个或多个天然存在的氨基酸序列、结构域或基序，以一种不天然存在或不天然存在于宿主细胞的方式连接在一起，该融合蛋白在细胞表面存在时可作为受体发挥作用。CAR可以包括含有抗原结合结构域的细胞外部分(例如，从免疫球蛋白或免疫球蛋白样分子中获得或衍生的，如从癌症抗原特异性的TCR衍生或获得的TCR结合域、从抗体衍生或获得的scFv、或从NK细胞的杀伤性免疫受体衍生或获得的抗原结合域)，其与跨膜域和一个或多个细胞内信号传导域(可选择包含共刺激域)相连(例如，参见，Sadelain et al.,Cancer Discov.,3(4):388(2013)；还参见Harris and Kranz,Trends Pharmacol.Sci.,37(3):220(2016),Stone et al.,CancerImmunol.Immunother.,63(11):1163(2014)和Walseng et al.,Scientific Reports 7:10713(2017)，其中CAR构建体和其制造方法通过引用并入本文)。本公开的特异性结合WT1抗原的CAR(例如，在肽：HLA复合物的背景下)包括TCR Vα结构域和Vβ结构域。
如本文所用，"核酸"或"核酸分子"或"多核苷酸"在某些方面是指脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、例如通过聚合酶链反应(PCR)或体外翻译产生的片段，以及通过连接、裂解、内切酶作用或外切酶作用中的任何一种产生的片段。在某些实施例中，本公开的核酸是通过PCR产生的。核酸可以由单体组成，这些单体是天然存在的核苷酸(如脱氧核苷酸和核糖核苷酸)、天然存在的核苷酸的类似物(如天然存在的核苷酸的α-对映体形式)，或两者的组合。修饰的核苷酸可以有对糖基部分、嘧啶或嘌呤碱基部分的修饰或替换。核酸单体可以通过磷酸二酯键或这种连接的类似物来连接。磷酸二酯连接的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、phosphoroanilothioate、phosphoranilidate、酰胺代磷酸酯等。核酸分子可以是单链的，也可以是双链的。
在某些方面，术语"分离"是指将材料从其原来的环境(例如，如果是天然存在的，则为自然环境)中移除。例如，存在于活体动物中的天然存在的核酸或多肽不是被分离出来的，但同样的核酸或多肽，从自然系统中的一些或全部共存物质中分离出来，就是被分离出来的。这样的核酸可以是载体的一部分和/或这样的核酸或多肽可以是组合物(如细胞裂解物)的一部分，并且仍然是隔离的，因为这样的载体或组合物不是该核酸或多肽的自然环境的一部分。术语"基因"是指参与产生多肽链的DNA片段；它包括编码区前后的区域“前导和尾随”，以及各个编码片段(外显子)之间的干扰序列(内含子)。
如本文所用，术语"重组"在某些方面是指经过人类干预的基因工程的细胞、微生物、核酸分子或载体--即通过引入外源或异源核酸分子进行改造，或指经过改变使内源核酸分子或基因的表达受到控制、失去调节或是组成型的细胞或微生物。人类产生的基因改变可以包括，例如，引入编码一种或多种蛋白质或酶的核酸分子(可能包括表达控制元素，如启动子)的修饰，或其他核酸分子的添加、缺失、替换，或其他对细胞遗传物质的功能破坏或添加。示例性的修饰包括来自参考或亲本分子的异源或同源多肽的编码区或其功能片段的修饰。
如本文所用，"突变"或"变异的"在某些方面是指核酸分子或多肽分子的序列分别与参考或野生型核酸分子或多肽分子相比发生变化。突变可以导致几种不同类型的序列变化，包括核苷酸或氨基酸的替换、插入或缺失。在某些实施例中，突变是一个或三个密码子或氨基酸的替换，一个至约5个密码子或氨基酸的缺失或其组合。
在某些方面，"保守替代"在本领域中被认为是一种氨基酸对另一种具有类似性质的氨基酸的替代。示例性的保守替代在本领域是众所周知的(参见，例如WO 97/09433atpage 10；Lehninger,Biochemistry,2nd Edition；Worth Publishers,Inc.NY,NY,pp.71-77,1975；Lewin,Genes IV,Oxford University Press,NY and Cell Press,Cambridge,MA,p.8,1990)。
术语"构建体"在某些方面是指含有重组核酸分子的任何多核苷酸。构建体可以存在于载体(如细菌载体、病毒载体)中，也可以整合到基因组中。“载体”是一种能够运输另一种核酸分子的核酸分子。例如，载体可以是质粒、粘粒、病毒、RNA载体或线性或环状DNA或RNA分子，可以包括染色体、非染色体、半合成或合成核酸分子。示例性的载体是那些能够自主复制(游离型载体，episomal vector)或表达与其相连的核酸分子的载体(表达载体)。
示例性的病毒载体包括逆转录病毒、腺病毒、细小病毒(例如腺相关病毒)、冠状病毒、负链RNA病毒，例如流感粘病毒(例如流感病毒)、弹状病毒(例如狂犬病和水疱性口炎病毒)、副黏液病毒(例如麻疹和仙台)、正链RNA病毒，例如细小核糖核酸病毒和α病毒，以及双链DNA病毒，包括腺病毒、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒1型和2型、Epstein-Barr病毒、巨细胞病毒)和痘病毒(例如牛痘、鸟痘和金丝雀痘)。其他病毒包括例如，诺如病毒、披膜病毒、黄病毒、呼肠孤病毒(reovirus)、乳多空病毒、肝去氧核糖核酸病毒(hepadnavirus)和肝炎病毒。逆转录病毒的示例包括禽类白血病-肉瘤、哺乳动物C型、B型病毒、D型病毒、HTLV-BLV组、慢病毒、泡沫病毒属(Coffin,J.M.,Retroviridae:The viruses and theirreplication,In Fundamental Virology,Third Edition,B.N.Fields et al.,Eds.,Lippincott-Raven Publishers,Philadelphia,1996)。
在某些方面，本文所用的"慢病毒载体"是指用于基因递送的基于HIV的慢病毒载体，它可以是整合性的或非整合性的，具有相对较大的包装能力，并能转导一系列不同的细胞类型。慢病毒载体通常是在将三个(包装、包膜和转移)或更多的质粒瞬时转染到生产者细胞后产生。与HIV一样，慢病毒载体通过病毒表面糖蛋白与细胞表面的受体相互作用进入目标细胞。进入后，病毒RNA会发生逆转录，这是由病毒逆转录酶复合物介导的。逆转录的产物是双链线性病毒DNA，它是病毒整合到受感染细胞DNA中的底物。
术语"可操作连接"在某些方面是指两个或更多的核酸分子在一个核酸片段上的关联，从而使其中一个的功能受到另一个的影响。例如，当启动子能够影响编码序列的表达(即编码序列在启动子的转录控制下)时，启动子就与编码序列可操作地连接在一起。"非连接"是指相关的遗传元素之间没有密切联系，一个的功能不影响另一个。
如本文所用，"表达载体"在某些方面是指含有核酸分子的DNA构建体，该核酸分子与适当的控制序列可操作地连接，能够在适当的宿主中实现该核酸分子的表达。这种控制序列包括用于实现转录的启动子，控制这种转录的可选操作序列，编码合适的mRNA核糖体结合位点的序列，以及控制转录和翻译终止的序列。载体可以是质粒、噬菌体颗粒、病毒，或者仅仅是潜在的基因组插入物。一旦转化进入合适的宿主，该载体可以独立于宿主基因组进行复制和运作，或者在某些情况下，可以整合到基因组本身。在本说明书中，"质粒"、"表达质粒"、"病毒"和"载体"通常可以互换使用。
本文所用的术语"表达"在某些方面是指根据核酸分子(如基因)的编码序列产生多肽的过程。该过程可包括转录、转录后控制、转录后修饰、翻译、翻译后控制、翻译后修饰，或其任何组合。
在将核酸分子插入细胞的背景下，术语"引入"在某些方面是指"转染"，或"转化"或"转导"，包括指将核酸分子并入真核细胞或原核细胞，其中核酸分子可被并入细胞的基因组(如染色体、质粒、或线粒体DNA)中，转化为自主复制，或瞬时表达(如转染的mRNA)。
如本文所用，"异源"或"外源"核酸分子、构建体或序列在某些方面指的是对于宿主细胞不是天然的核酸分子或核酸分子的一部分，但可能与宿主细胞的核酸分子或核酸分子的一部分同源。异源或外源核酸分子、构建体或序列的来源可以是来自不同的属或种。在某些实施例中，异源或外源核酸分子通过例如共轭、转化、转染、电穿孔等方式被添加到宿主细胞或宿主基因组中，其中添加的分子可以整合到宿主基因组中或作为染色体外遗传物质存在(例如，作为质粒或其他形式的自我复制载体)，并可以以多个拷贝存在。此外，"异源"是指由引入宿主细胞的外源核酸分子编码的非天然酶、蛋白质或其他活性，即使宿主细胞编码的是同源蛋白质或活性。此外，包含"修饰"或"异源"多核苷酸或结合蛋白的细胞包括该细胞的后代，无论该后代本身是否被转导、转染，或以其他方式操纵或改变。
如本文所述，超过一个的异源或外源核酸分子可以作为单独的核酸分子、作为多个单独控制的基因、作为多顺反子核酸分子、作为编码融合蛋白的单个核酸分子或其任何组合被引入宿主细胞。例如，如本文所公开的，宿主细胞可以被修饰以表达两个或更多的异源或外源核酸分子，编码所需的对WT1抗原肽特异的TCR(例如TCRα和TCRβ)。当两个或多个外源核酸分子被引入宿主细胞时，可以理解为两个或多个外源核酸分子可以作为单个核酸分子(例如在单个载体上)、在分别的载体上、整合到宿主染色体上的单个位点或多个位点，或其任何组合。参考的异源核酸分子或蛋白活性的数量是指编码核酸分子的数量或蛋白活性的数量，而不是指引入宿主细胞的分别的核酸分子的数量。
如本文所用，术语"内源性"或"天然的"在某些方面是指正常存在于宿主细胞中的基因、蛋白质或活性。此外，与亲本基因、蛋白质或活性相比，被突变、过度表达、调动、复制或以其他方式改变的基因、蛋白质或活性仍被认为是该特定宿主细胞的内源性或天然的。例如，来自第一基因的内源性控制序列(如启动子、翻译衰减序列)可用于改变或调节第二天然基因或核酸分子的表达，其中第二天然基因或核酸分子的表达或调节与亲本细胞中的正常表达或调节不同。
在某些方面，术语"同源的"或"同源性"是指在宿主细胞、物种或菌株中发现或衍生自宿主细胞、物种或菌株的分子或活性。例如，异源或外源核酸分子可与天然宿主细胞基因同源，并可选择具有改变的表达水平、不同的序列、改变的活性、或其任何组合。
在某些方面，本文所用的"序列同一性"是指在对准序列并在必要时引入间隔以达到最大的序列同一性百分比之后，一个序列中的氨基酸残基与另一个参考多肽序列中的氨基酸残基相同的百分比，并且不考虑任何保守的替换作为序列同一性的一部分。序列同一性百分比值可以使用NCBI BLAST2.0软件生成，例如Altschul et al.(1997)"GappedBLAST and PSI-BLAST:a new generation of protein database search programs",Nucleic Acids Res.25:3389-3402所定义的，参数设置为默认值。
如本文所用，"造血祖细胞"在某些方面可以是可以从造血干细胞或胎儿组织中获得的细胞，并能够进一步分化为成熟的细胞类型(如免疫系统细胞)。示例性的造血祖细胞包括那些具有CD24Lo Lin-CD81+表型的细胞或在胸腺中发现的细胞(被称为胸腺祖细胞)。
如本文所用，术语"宿主"在某些方面是指用异源或外源核酸分子进行遗传修饰的细胞(如T细胞)或微生物，以产生感兴趣的多肽(如高或增强亲和力的抗WT1 TCR)。在某些实施例中，宿主细胞可以选择已经拥有或被修饰以包括其他遗传修饰，赋予与异源或外源蛋白的生物合成有关或无关的所需特性(例如，包括可检测的标记物；缺失、改变或截断的内源性TCR；增加共刺激因子的表达)。在一些实施例中，对宿主细胞进行遗传修饰，以表达调节宿主细胞中免疫信号的蛋白质或融合蛋白，以例如促进修饰细胞的存活和/或扩增优势(例如，参见WO 2016/141357的免疫调节融合蛋白，其内容通过引用全部并入此处)。在其他实施例中，对宿主细胞进行基因修饰，以引入本文提供的TCR，或在细胞中敲除或最小化免疫抑制信号(如检查点抑制剂)，这些修饰可使用例如CRISPR/Cas系统(参见，例如US2014/0068797,美国专利申请号8,697,359；WO 2015/071474)进行。在某些实施例中，宿主细胞是用编码WT1抗原肽特异性的TCRα链的异源或外源核酸分子转导的人类造血祖细胞。
如本文所用，"过度增殖性疾病"在某些方面是指与正常或无病的细胞相比，过度生长或增殖。示例性的增殖性疾病包括肿瘤、癌症、赘生物组织、癌、肉瘤、恶性细胞、前恶性细胞，以及非赘生物或非恶性的增殖性疾病(例如，腺瘤、纤维瘤、脂肪瘤、平滑肌瘤、血管瘤、纤维化、再狭窄，以及自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病、炎性肠病等)。某些涉及异常或过度生长的疾病，其发生速度比增殖性疾病慢，可称为"增殖性疾病"，包括某些肿瘤、癌症、赘生物组织、癌、肉瘤、恶性细胞、前恶性细胞，以及非赘生物或非恶性疾病。
此外，"癌症"可指任何加速增殖的细胞，包括实体瘤、腹水瘤、血液或淋巴或其他恶性肿瘤；结缔组织恶性肿瘤；转移性疾病；移植器官或干细胞后的最小残余疾病；多药耐药的癌症，原发或继发的恶性肿瘤，与恶性肿瘤有关的血管生成或其他形式的癌症。
对WT1 p37抗原肽的特异性TCR
在某些方面，本发明公开了一种WT1 p37肽特异性T细胞受体(TCR)，包括(a)T细胞受体(TCR)α链可变(Vα)结构域，以及具有SEQ ID NO：1-11、181、187、193、199、205、211、217、223、229、235和241中任何一个所示的CDR3氨基酸序列的TCRβ链可变(Vβ)；(b)具有SEQID NO：12-22、178、184、190、196、202、208、214、220、226、232和238中任何一个所示的CDR3氨基酸序列的TCR Vα结构域，以及TCR Vβ结构域；或(c)具有SEQ ID NO：12-22、178、184、190、196、202、208、214、220、226、232和238中任何一个所示的CDR3氨基酸序列的TCR Vα结构域，以及具有SEQ ID NO：1-11、181、187、193、199、205、211、217、223、229、235和241中任何一个所示CDR3氨基酸序列的TCR Vβ结构域。例如，本公开的任何TCR或其结合域可以特异性地与细胞(例如T细胞)表面的WT1 p37肽：HLA复合物结合，和/或可以促进IFNγ的产生，pEC50为8.5或更高(例如，达约8.6，达约8.65，达约8.7，达约8.72，达约8.75，达约8.8，达约9，达约9.1，达约9.2，达约9.3，达约9.4，达约9.5，达约9.6，达约9.68达约9.7，达约9.75，达约10，达约10.5，达约11，达约11.5，达约12，达约12.5，或达约13)。在某些实施例中，本公开的TCR可以特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，IFNγ产生pEC50为9.0或更高，或IFNγ产生pEC50为9.0或更高。在某些实施例中，本公开的TCR或其结合域(如scTCR或其融合蛋白)可特异性地与WT1p37肽：HLA复合物结合，并促进IFNγ的产生，其pEC50范围为8.5至约9.9，或8.6至约9.8，或8.7至约9.7，或8.75至约9.65等。EC50的范围可以从大约1.1×10-9M到大约3.0×10-10M，或两者之间的任何数值。在进一步的例子中，本公开的任何一个TCR可以特异性地与细胞表面的WT1肽：HLA复合物结合，而不依赖于CD8或在没有CD8的情况下。在进一步的实施例中，TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，其KD小于或等于约10-9M，在某些实施中，HLA包括HLA-A*201。肽抗原VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)是WT1肽抗原，与WT1蛋白的第37-45个氨基酸相对应。
在本文描述的任何一个实施例中，本公开提供了包含α链和β链的T细胞受体(TCR)，其中TCR与T细胞表面的WT1:HLA-A*201复合物结合并促进(a)IFNγ产生pEC50达到8.5或更高(例如，达到约9，约9.5，约10，约10.5，约11，约11.5，约12，约12.5，或约13)；或(b)独立于或在没有CD8的情况下结合细胞表面。
在某些实施例中，Vβ结构域包括或衍生自TRBV7-6*01/TRBJ2-7*01、TRBV20-1*02/TRBJ2-7*01、TRBV15*02/TRBJ1-5*01、TRBV13*01/TRBJ2-5*01、TRAJ50*01/TRBJ2-7*01、TRBV11-3*01/TRBJ1-1*01、TRBV19*01/TRBJ1-6*02、TRBV27*01/TRBJ2-7*01、TRBV13*01/TRBJ2-7*01、TRBV11-1*01/TRBJ1 4*01或TRBV4-3*01/TRBJ1-3*01。在进一步的实施例中，Vα结构域包括或衍生自TRAV21*02/TRAJ58*01、TRAV38-1*01/TRAJ40*01、TRAV29/DV5*01/TRAJ6*01、TRAV29/DV5*01/TRAJ20*01、TRAV41*01/TRAJ50*01、TRAV12-2*01/TRAJ11*01、TRAV1-2*01/TRAJ20*01、TRAV20*02/TRAJ8*01、TRAV26-1*02/TRAJ26*01、TRAV24*01/TRAJ48*01或TRAV20*02/TRAJ37*02。在特定的实施例中，TCR包括(a)Vβ结构域(包括或衍生自TRBV7-6*01/TRBJ2-7*01)和Vα结构域(包括或衍生自TRAV21*02/TRAJ58*01)；(b)Vβ结构域(包括或衍生自TRBV27*01/TRBJ2-7*01)和Vα结构域(包括或衍生自TRAV20*02/TRJ8*01)；或(c)Vβ结构域(包括或衍生自TRBV13*01/TRBJ2-5*01)，Vα结构域(包括或衍生自TRAV29/DV5*01/TRAJ20*01)。
在某些实施例中，本公开的TCR进一步包括:(i)SEQ ID NO：194、176、182、188、200、206、212、218、224、230和236中的任何一个列出的CDR1α氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，该一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换；和/或(ii)SEQ ID NO：195、177、183、189、201、207、213、219、225、231和237中的任何一个列出的CDR2α氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸置换的变体，其中，可选的是，该一个或两个氨基酸置换包含保守的氨基酸置换。
在某些实施例中，本公开的TCR进一步包括:(i)SEQ ID NO.197、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233和239中的任何一个所列出的CDR1β氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，该一个或两个氨基酸替换包括保守的氨基酸替换；和/或(ii)SEQ ID NO：198、180、186、192、204、210、216、222、228、234和240中的任何一个列出的CDR2β氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，该一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换。
在某些实施例中，本公开的TCR包括CDR1α、CDR2α、CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β中规氨基酸序列，其列出于:(i)分别为SEQ ID NO：194、195、196或12、197、198、和199或1；(ii)分别为SEQ ID NO:176、177、178或18、179、180、和181或7；(iii)分别为SEQ ID NO:182、183、184或20、185、186、和187或9；(iv)
SEQ ID NO:188、189、190或21、191、192、和193或10；(v)分别为SEQ ID NO:200、201、202或13、203、204、和205或2；(vi)分别为SEQ ID NO:206、207、208或14、209、210、和211或3；(vii)分别为SEQ ID NO:212、213、214或15、215、216、和分217或4；(viii)分别为SEQ ID NO:218、219、220或17、221、222、和223或6；(ix)分别为SEQ ID NO:224、225、226或19、227、228、和229或8；(x)分别为SEQ ID NO:230、231、232或22、233、234、和235或11；或(xi)分别为SEQ ID NO:236、237、238或16、238、240、和241或5。
本公开的任何多肽，如由多核苷酸序列编码，可以包括"信号肽"(也被称为前导序列、前导肽或转运肽)。信号肽将新合成的多肽靶向细胞内或外的适当位置。信号肽可以在定位或分泌期间或一旦定位或分泌完成后从多肽中去除。有信号肽的多肽在此被称为"前蛋白"，去掉信号肽的多肽在此被称为"成熟"蛋白或多肽。在本文公开的任何一个实施例中，结合蛋白或融合蛋白包括或为成熟蛋白，或为或包括前蛋白。
在某些实施例中，SEQ ID NO：23的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：23的氨基酸残基1-19(即TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：242中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：24的氨基酸残基1-15是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：24的氨基酸残基1-15(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：243中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：25的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：25的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：25的氨基酸残基1-15(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：244中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：26的氨基酸残基1-29是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：26的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：26的氨基酸残基1-29(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：245中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：27的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：27的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：27的氨基酸残基1-19(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：246中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：28的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：28的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：28的氨基酸残基1-19(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：247中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：29的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：29的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：29的氨基酸残基1-19(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：248中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：30的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：30的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：30的氨基酸残基1-19(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：249中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：31的氨基酸残基1-29是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：31的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：31的氨基酸残基1-29(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：250中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：32的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：32的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：32的1-19个氨基酸残基(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：251中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：33的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vβ结构域是成熟的TCR Vβ结构域，包括或由SEQ ID NO：33的氨基酸序列组成，并去除SEQ ID NO：33的1-19个氨基酸残基(即，TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：252中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：34的氨基酸残基1-19是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：34的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：34的1-19个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：253中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：35的氨基酸残基1-20是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：35的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：35的1-20个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：254中规定的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：36的氨基酸残基1-26是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：36的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：36的1-26个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：255中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：37的氨基酸残基1-26是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：37的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：37的1-26个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：256中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：38的氨基酸残基1-22是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：38的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：38的1-22个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：257中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：39的氨基酸残基1-21是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：39的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：39的1-21个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：258中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：40的氨基酸残基1-17是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：40的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：40的1-17个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：259中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：41的氨基酸残基1-21是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：41的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：41的1-21个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：260中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：42的氨基酸残基1-17是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：42的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：42的1-17个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：261中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：43的氨基酸残基1-22是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：43的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：43的1-22个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：262中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，SEQ ID NO：44的氨基酸残基1-21是或包括信号肽。在一些实施例中，TCR Vα结构域是成熟的TCR Vα结构域，包括或由SEQ ID NO：44的氨基酸序列组成，但去除了SEQ ID NO：44的1-21个氨基酸残基(即TCR Vα结构域包括或由SEQ ID NO：263中所列的氨基酸序列组成)。
在某些实施例中，针对WT1肽：HLA复合物的特异性T细胞受体(TCR)具有Vα结构域，该Vα结构域包括或由SEQ ID NO：253-263和34-33中的任何一个所述的氨基酸序列组成，具有Vβ结构域，该Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：242-252和23-33中的任何一个所述的氨基酸序列组成或其任意组合。在特定的实施例中，Vα结构域包括或由SEQ ID NO：34的氨基酸序列组成，Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：23的氨基酸序列组成。在进一步的特定实施例中，(a)Vα结构域包括或由SEQ ID NO：41的氨基酸序列组成，Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：30的氨基酸序列组成；(b)Vα结构域包括或由SEQ ID NO：37的氨基酸序列组成，Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：26的氨基酸序列组成；或(c)Vα结构域包括或由SEQ ID NO：42的氨基酸序列组成，Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：31的氨基酸序列组成。在进一步的特定实施例中，Vα结构域包括或由SEQ ID NO：24的氨基酸序列组成，Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：35的氨基酸序列组成。
在一些实施例中，Vα结构域和Vβ结构域包括或由以下SEQ ID NO中规定的氨基酸序列组成：(i)分别为253和242；(ii)分别为259和248；(iii)分别为261和250；(iv)分别为262和251；(v)分别为257和246；(vi)分别为254和243；(vii)分别为255和244；(viii)分别为256和245；(ix)分别为258和247；(x)分别为260和249；(xi)分别为263和252；(xii)分别为34和23；(xiii)分别为40和29；(xiv)分别为42和31；(xv)分别为43和32；(xvi)分别为35和24；(xvii)分别为36和25；(xviii)分别为37和26；(xix)分别为39和28；(xx)分别为41和30；(xxi)分别为44和33；或(xxii)分别为38和27。
在某些实施例中，如本文所述的针对WT1 p37肽的高功能亲合力重组TCR包括变体多肽物种，其氨基酸序列相对于本文提出的SEQ ID NO：48-58中任何一个或多个的氨基酸序列有一个或多个氨基酸的替换、插入或缺失，条件是CDR3不改变，TCR保留或基本上保留其特定的WT1 p37结合功能。
氨基酸的保守替换是众所周知的，可能自然发生，也可能在重组TCR时被引入。氨基酸的替换、缺失和添加可以用本领域已知的诱变方法(参见，例如Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3d ed.,Cold Spring Harbor LaboratoryPress,NY,2001)引入蛋白质中。可以采用寡核苷酸导向的位点特异性(或片段特异性)诱变程序来提供改变的多核苷酸，该多核苷酸根据所需的替换、删除或插入改变了特定的密码子。另外，随机或饱和诱变技术，如丙氨酸扫描诱变、易错的聚合酶链反应诱变和寡核苷酸导向的诱变，可用于制备免疫原多肽变体(参见，例如，Sambrook et al.，同上)。
本领域技术人员已知的各种标准表明，在肽或多肽的特定位置上被取代的氨基酸是否是保守的(或类似的)。例如，类似的氨基酸或保守的氨基酸替代是指一个氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基所取代。类似的氨基酸可包括在以下类别中：具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)；具有不带电极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、组氨酸)；具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)；具有β支链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)，以及具有芳香族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。被认为更难分类的脯氨酸与具有脂肪族侧链的氨基酸(例如亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和丙氨酸)有共同的特性。在某些情况下，用谷氨酰胺替代谷氨酸或用天冬酰胺替代天冬氨酸可被视为类似的替代，因为谷氨酰胺和天冬酰胺分别是谷氨酸和天冬氨酸的酰胺衍生物。正如本领域所理解的那样，两个多肽之间的"相似性"是通过比较多肽的氨基酸序列及其保守的氨基酸替代物与第二个多肽的序列来确定的(例如，使用GENEWORKS、Align、BLAST算法或本文所述和本领域内实践的其他算法)。
对WT1 p37抗原：MHC复合物具有特异性的野生型TCR的变体或其结合域可包括与本文公开的任何示例性氨基酸序列(例如SEQ ID NO：23-58)具有至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％氨基酸序列同一性的TCR，条件是Vβ结构域的CDR3和Vα结构域的CDR3都不包含改变，而且其他部分的改变与野生型TCR相比，其功能亲合力(或相对亲和力)降低不超过10％、15％或20％。在一些可选的实施例中，变体TCR进一步包括SEQ ID NO：34-44(亲本Vα结构域)中的任何一个或SEQ ID NO：23-33(亲本Vβ结构域)中的任何一个所阐述的Vα结构域CDR1、Vα结构域CDR2、Vβ结构域CDR1、Vβ结构域CDR2或其任何组合的氨基酸序列没有变化。在这些实施例中的每一个，TCR保留其特异性诱导IFNγ产生的能力，pEC50为8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或更高，或者TCR保留其特异性结合肽抗原：HLA复合物(例如。VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59):HLA复合物)的能力，KD小于或等于约10-9M，并且比由SEQ ID NO：48-58中任何一个组成的野生型TCR特异性结合好1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.3倍、3.5倍、最多5倍。
在进一步的实施例中，本公开提供了p37特异性TCR或其结合域，包括(a)与SEQ IDNO：34-35和38-44中任何一个所列氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCRα链可变(Vα)结构域，以及与SEQ ID NO：23-25、27、28、30、32和33中任何一个所列氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCRβ链可变(Vβ)结构域；(b)TCR Vα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列具有至少92％的序列同一性，以及TCR Vβ结构域与SEQ ID NO：23-25、27、28、30、32和33中的任何一个所规定的氨基酸序列具有至少90％例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性；或(c)包括或由SEQ ID NO：34-44的氨基酸序列组成的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：23-25、27、28、30、32和33中任何一个所述的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCR Vβ结构域。
在更进一步的实施例中，本公开提供了p37特异性TCR或其结合结构域，包括(a)与SEQ ID NO：34-35和38-44中任何一个所列氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：29的氨基酸序列具有至少92％(例如，92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)序列同一性的Vβ结构域；(b)TCR Vα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列有至少92％的序列同一性，TCR Vβ结构域与SEQ ID NO：29的氨基酸序列有至少92％的序列同一性；或(c)包括或由SEQ ID NO：34-44的氨基酸序列组成的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：29的氨基酸序列有至少92％序列同一性的TCR Vβ结构域。
在再进一步的实施例中，本公开提供了p37特异性TCR，或其结合结构域，包括(a)与SEQ ID NO：34-35和38-44中任何一个所列氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：31的氨基酸序列具有至少93％序列同一性的Vβ结构域；(b)TCRVα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列具有至少92％的序列同一性，以及TCR Vβ结构域与SEQ ID NO：31的氨基酸序列具有至少93％的序列同一性；或(c)包括或由SEQ ID NO：34-44的氨基酸序列组成的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：31的氨基酸序列有至少93％序列同一性的TCR Vβ结构域。
在更多的实施例中，本公开提供了p37特异性TCR，或其结合结构域，包括(a)与SEQID NO：34-35和38-44中的任何一个所列氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：26的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的Vβ结构域；(b)TCR Vα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列具有至少92％的序列同一性，TCR Vβ结构域与SEQ ID NO：26的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性；或(c)包括或由SEQ ID NO：34-44的氨基酸序列组成的TCR Vα结构域，以及与SEQ ID NO：26的氨基酸序列有至少95％序列同一性的TCR Vβ结构域。
在更多的实施例中，本公开内容提供了p37特异性TCR，或其结合域，包括(a)与SEQID NO：34-35和38-44中任何一个所列氨基酸序列具有至少90％序列同一性的TCR Vα结构域，以及包括或由SEQ ID NO：23-33中任何一个所列氨基酸序列构成的Vβ结构域；(b)TCR Vα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列具有至少92％的序列同一性，并且TCR Vβ结构域包括或由SEQ ID NO：23-33中任何一个列出的氨基酸序列构成；或(c)包括或由SEQ IDNO：34-44的氨基酸序列组成的TCR Vα结构域，以及包括或由SEQ ID NO：23-33中任何一个列出的氨基酸序列组成的TCR Vβ结构域。
在上述任何一个实施例中，TCR有能力与细胞(例如，T细胞)表面WT1 p37肽VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：HLA复合物结合，并特异性地诱导IFNγ的产生，pEC50为8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或更高，和/或TCR能够独立于或在没有CD8的情况下与WT1肽VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：HLA细胞表面复合物特异性结合。在上述任何一个实施例中，Vβ结构域包括CDR1和/或CDR2的氨基酸序列分别与SEQ ID NO：23-33中任何一个中存在的CDR1和/或CDR2相比没有改变。
在某些实施例中，上述WT1 p37肽特异性T细胞受体(TCR)中的任何一个可以是TCR的抗原结合片段。在进一步的实施中，TCR的抗原结合片段包括单链TCR(scTCR)，它可以包含在嵌合抗原受体(CAR)中。在一些实施例中，WT1 p37肽特异性TCR是多链结合蛋白，例如，包括TCRα链，其包括Vα结构域和α链恒定结构域，其中TCRα链恒定结构域与SEQ ID NO：47的氨基酸序列与SEQ ID NO：47的氨基酸序列具有至少约90％的序列同一性(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)；以及TCRβ链，其包括Vβ结构域和β链恒定结构域，其中TCRβ链恒定结构域与SEQ ID NO：45或46的氨基酸序列具有至少90％(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)。在进一步的实施例中，本公开提供了一种WT1 p37肽特异性TCR，包括或由具有SEQ ID NO：47的氨基酸序列的α链恒定结构域组成，和/或包括或由具有SEQ ID NO：45或46的氨基酸序列的β链恒定结构域组成。
在进一步的实施例中，本公开内容提供了WT1 p37肽特异性TCR，包括TCRα链，其包括Vα结构域和α链恒定结构域，其中：(a)Vα结构域与SEQ ID NO：34-35和38-44中任何一个列出的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)，并且α链恒定结构域与SEQ ID NO：47的氨基酸序列具有至少约98％的序列同一性；或(b)Vα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列有至少92％的序列同一性，而α链恒定结构域与SEQ ID NO：47的氨基酸序列有至少98％的序列同一性。
在一些实施例中，TCR包括TCRα链，其包括Vα结构域和α链恒定结构域，其中：(a)Vα结构域包括SEQ ID NO：242-252和34-44中任何一个列出的氨基酸序列，而α链恒定结构域包括SEQ ID NO：47的氨基酸序列；或(b)Vα结构域由SEQ ID NO：242-252和34-44中的任何一个氨基酸序列组成，并且α链恒定结构域与SEQ ID NO：47的氨基酸序列具有至少90％的同一性(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)、包括或由SEQ ID NO：47的氨基酸序列组成。
在一些实施例中，α链恒定结构域是存在的，Vα结构域和α链恒定结构域共同构成了TCRα链。在一些实施例中，β链恒定结构域是存在的，Vβ结构域和β链恒定结构域共同构成TCRβ链。
在一些实施例中，TCR包括scTCR，或提供了scTCR，它来自于本公开的TCR。在一些实施例中，TCR包括CAR，或者提供CAR，该CAR来源于(例如，包括一个或多个可变结构域，其来自)目前公开的TCR。
在更多的实施例中，提供了一种组合物，包括根据上述任何一个实施例的WT1特异性高功能亲合力重组TCR或其结合域和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
例如，用于分离和纯化重组产生的可溶性TCR的方法可包括从合适的宿主细胞/载体系统获得上清液，该系统将重组可溶性TCR分泌到培养基中，然后使用市售的过滤器浓缩培养基。浓缩后，浓缩物可以应用于单一合适的纯化基质或一系列合适的基质，如亲和基质或离子交换树脂。可以采用一个或多个反相HPLC步骤来进一步纯化重组多肽。从自然环境中分离免疫原时，也可采用这些纯化方法。用于大规模生产本文所述的一种或多种分离的/重组的可溶性TCR的方法包括批量细胞培养，对其进行监测和控制以保持适当的培养条件。可溶性TCR的纯化可根据本文所述和本领域已知的方法进行，并符合国内和国外监管机构的法律和准则。
在某些实施例中，编码与MHC复合的WT1 p37肽特异性的高亲和力或高功能亲合力TCR的核酸分子被用于转染/转导宿主细胞(如T细胞)，以用于过继性转移疗法。已经描述了TCR测序的进展(例如，Robins et al.,Blood 114:4099,2009；Robins et al.,Sci.Translat.Med.2:47ra64,2010；Robins et al.,(Sept.10)J.Imm.Meth.Epub aheadof print,2011；Warren et al.,Genome Res.21:790,2011)，并可在实施根据本公开的实施例的过程中采用。同样，已经描述了用所需的核酸转染/转导T细胞的方法(例如，美国专利申请公开号US 2004/0087025)，以及使用具有所需抗原特异性的T细胞的过继性转移程序(例如，Schmitt et al.,Hum.Gen.20:1240,2009；Dossett et al.,Mol.Ther.17:742,2009；Till et al.,Blood 112:2261,2008；Wang et al.,Hum.Gene Ther.18:712,2007；Kuball et al.,Blood 109:2331,2007；US 2011/0243972；US 2011/0189141；Leen etal.,Ann.Rev.Immunol.25:243,2007)，因此，根据本文的教导，包括那些针对与HLA受体复合的WT1肽抗原特异性的高亲和力TCR，可以考虑将这些方法改编为目前公开的实施例。
本文所述的WT1特异性TCR或其结合域(如SEQ ID NO：23-58及其非CDR3变体)，可根据大量公认的检测T细胞活性的方法中的任何一种进行功能表征，包括确定T细胞结合、激活或诱导，也包括确定T细胞的抗原特异性反应。例子包括确定T细胞增殖、T细胞细胞因子释放、抗原特异性T细胞刺激、MHC限制性T细胞刺激、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性(例如，通过检测预装靶细胞的51Cr释放)、T细胞表型标志物表达的变化以及其他T细胞功能的测量。进行这些和类似检测的程序可以在例如Lefkovits(Immunology Methods Manual:The Comprehensive Sourcebook of Techniques,1998)中找到。也可参见CurrentPtotocols in Immunology；Weir,Handbook of Experimental Immunology,BlackwellScientific,Boston,MA(1986)；Mishell and Shigii(eds.)Selected Methods inCellular Immunology,Freeman Publishing,San Francisco,CA(1979)；Green and Reed,Science 281:1309(1998)以及其中引用的参考文献。
编码WT1 p37抗原肽特异性TCR的多核苷酸
编码对WT1 p37肽有特异性的高亲和力或高功能亲合力的重组T细胞受体(TCR)或其结合域(如scTCR或其融合蛋白)异源、分离或重组核酸分子可根据本文所述的各种方法和技术生产和制备(参加示例)。用于重组产生目标WT1 p37肽特异性高亲和力或高功能亲合力的工程化TCR或其结合域的表达载体的构建可以通过使用本领域已知的任何合适的分子生物学工程技术来完成，包括使用限制性内切酶消化、连接、转化、质粒纯化和DNA测序，例如Sambrook et al.(1989and 2001 editions；Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY)和Ausubel et al.(CurrentProtocols in Molecular Biology,2003)中所述。为了获得高效的转录和翻译，每个重组表达构建体中的多核苷酸包括至少一个适当的表达控制序列(也称为调控序列)，如前导序列，特别是与编码免疫原的核苷酸序列可操作地(即操作地)连接的启动子。
某些实施例涉及编码本文考虑的多肽的核酸，例如，WT1 p37肽：MHC复合物特异性高亲和力或高功能亲合力的工程TCR或其结合域。正如本领域的技术人员所认识到的，核酸可以指任何形式的单链或双链DNA、cDNA或RNA，并且可以包括互补的核酸的正链和负链，包括反义DNA、cDNA和RNA。还包括siRNA、microRNA、RNA-DNA杂交体、核酶以及其他各种天然存在的或合成的DNA或RNA形式。
在某些实施例中，本文提供了分离的多核苷酸，该多核苷酸编码工程化的(例如，密码子优化的)WT1 p37肽特异性高功能亲合力TCR或其对结合结构域，其中Vα结构域可由多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQ ID NO：97、98和101-107中的任何一个列出的核苷酸序列至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％、或100％相同。在特定的实施例中，多核苷酸编码的Vα结构域包括或由SEQ ID NO：97-107中任何一个列出的核苷酸序列组成。在进一步的实施例中，本文提供的多核苷酸编码对WT1 p37肽具有特异性的本公开的高功能亲合力的工程化TCR或其结合域，TCR其中Vβ结构域由以下多核苷酸编码：该多核苷酸与SEQ ID NO：75-77、79、82、84和85中的任何一个列出的核苷酸序列至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％相同。在特定的实施例中，Vβ结构域由多核苷酸编码，该多核苷酸包括或由SEQ ID NO：75-85中的任何一个提出的核苷酸序列组成。
在一些实施例中，本文提供的TCR或其结合结构域包括由以下多核苷酸编码的Vα结构域：该多核苷酸与SEQ ID NO：97、98和101-107中的任何一个多核苷酸序列具有至少75％(75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.9％或100％)序列同一性，或由以下多核苷酸编码的Vα结构域与：该多核苷酸与SEQ ID NO：99或100的多核苷酸序列具有至少94％的序列同一性，或由以下多核苷酸编码的Vα结构域：该多核苷酸包括或由SEQ ID NO：97-107中任何一个所列的序列组成；以及由以下多核苷酸编码的Vβ结构域：该多核苷酸与SEQ ID NO：75-77、79、82、84和85中的任何一个所列的多核苷酸序列具有至少75％的序列同一性，或者由以下多核苷酸编码的Vβ结构域：该多核苷酸与SEQ ID NO：78、80、81和83中的任何一个所列的多核苷酸序列具有至少95％的同一性，或由以下多核苷酸编码的Vβ结构域：该多核苷酸包括或由SEQ ID NO：75-85中的任何一个所列出的核苷酸序列组成。
在上述任何一个实施例中，编码Vα结构域、Vβ结构域或两者的多核苷酸可以进一步分别编码α链恒定结构域或β链恒定结构域。在某些实施例中，本公开的TCR包括TCRα链恒定结构域，其中α链恒定结构域由多核苷酸编码，该多核苷酸包括与SEQ ID NO：110至少98％至100％的序列同一性。在特定的实施例中，α-链恒定结构域是由包括或由SEQ ID NO：110的核苷酸序列组成的多核苷酸编码的。在进一步的实施例中，本文提供了由与SEQ IDNO：108或109有至少99.9％至100％序列同一性的多核苷酸编码的β-链恒定结构域。在特定的实施例中，β-链恒定结构域由包括或由SEQ ID NO：108或109的核苷酸序列组成的多核苷酸编码。
在上述任何一个实施例中，编码TCR的多核苷酸包括TCRα链、TCRβ链或两者。在某些实施例中，本公开的TCR由多核苷酸编码，该多核苷酸包括编码自裂解肽的核苷酸序列，该核苷酸序列布置在编码TCRα链的多核苷酸序列和编码TCRβ链的多核苷酸序列之间。示例性的自裂解肽包括SEQ ID NO：60-63中任何一个的氨基酸序列；或由SEQ ID NO：60-63中任何一个的氨基酸序列组成。这样的自裂解肽可以由包含SEQ ID NO：166-170中任何一个的多核苷酸序列的多核苷酸编码；或由SEQ ID NO：166-170中任何一个的多核苷酸序列组成的多核苷酸编码。
在某些实施例中，TCRα链、自裂解肽和TCRβ链由多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQID NO：155-165中的任何一个具有至少95％(例如95％、96％、97％、98％、99％或100％)的同一性。在进一步的实施例中，TCRα链、自裂解肽和TCRβ链由多核苷酸编码，该多核苷酸包括SEQ ID NO：155-165中任何一个的多核苷酸序列；或由SEQ ID NO：155-165中任何一个多核苷酸的序列组成的多核苷酸编码。在更进一步的实施例中，所编码的TCRα链、自裂解肽和TCRβ链包括与SEQ ID NO：48-58的任何一个具有至少95％(例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一性，或者编码的TCRα链、自裂解肽和TCRβ链包括或由SEQ ID NO：48-58的任何一种氨基酸序列组成。
在目前公开的任何一个实施例中，编码结合蛋白的多核苷酸可以进一步包括：(i)编码以下多肽的多核苷酸：该多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，其中，可选地，编码的多肽是或包括CD8共受体α链；(ii)编码以下多肽的多核苷酸：该多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分，其中，可选的是，编码的多肽是或包括CD8共受体β链；或(iii)(i)的多核苷酸和(ii)的多核苷酸。在不受理论约束的情况下，在某些实施例中，与单独表达结合蛋白相比，共同表达或同时表达结合蛋白和CD8共受体蛋白或其具有与HLA分子结合功能的部分，可以提高宿主细胞(例如免疫细胞，如T细胞，可选是CD4+T细胞)的一种或多种所需活性。可以理解的是，结合蛋白编码多核苷酸和CD8共受体多肽编码多核苷酸可以存在于单个核酸分子(例如，在同一个表达载体中)，也可以存在于宿主细胞中的不同核酸分子。
在某些进一步的实施例中，多核苷酸包括：(a)编码包括CD8共受体α链细胞外部分的多肽的多核苷酸；(b)编码包括CD8共受体β链细胞外部分的多肽的多核苷酸；以及(c)编码置于(a)的多核苷酸和(b)的多核苷酸之间的自裂解肽的多核苷酸。在进一步的实施例中，多核苷酸包括编码自裂解肽并被置于以下的多核苷酸：(1)编码结合蛋白(如本公开的TCR)的多核苷酸和编码包括CD8共受体α链的细胞外部分的多肽的多核苷酸之间；和/或(2)编码结合蛋白的多核苷酸和编码包括CD8共受体β链的细胞外部分的多肽的多核苷酸之间。
在更进一步的实施例中，多核苷酸可以包括，可操作地连接在框架内：(i)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnTCR)；(ii)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnTCR)；(iii)(pnTCR)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnCD8β)；(iv)(pnTCR)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnCD8α)；(v)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnTCR)-(pnSCP2)-(pnCD8β)；或(vi)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnTCR)-(pnSCP2)-(pnCD8α)，其中pnCD8α是编码包括CD8共受体α链的细胞外部分的多肽的多核苷酸，其中pnCD8β是编码包括CD8共受体α链的细胞外部分的多肽的多核苷酸，其中pnTCR是编码TCR的多核苷酸，以及其中pnSCP1和pnSCP2各自独立地是编码自裂解肽的多核苷酸，其中多核苷酸和/或编码的自裂解肽可选择相同或不同(例如，P2A、T2A、F2A、E2A)。
在一些实施例中，编码的TCR包括TCRα链和TCRβ链，其中多核苷酸包括以下多核苷酸：其编码自裂解肽，其布置在编码TCRα链的多核苷酸和编码TCRβ链的多核苷酸之间。在某些实施例中，多核苷酸包括，可操作地连接在框架内：(i)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnTCRβ)-(pnSCP3)-(pnTCRα)；
(ii)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnTCRβ)-(pnSCP3)-(pnTCRα)；(iii)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnTCRα)-(pnSCP3)-(pnTCRβ)；(iv)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnTCRα)-(pnSCP3)-(pnTCRβ)；(v)(pnTCRβ)-(pnSCP1)-(pnTCRα)-(pnSCP2)-(pnCD8α)-(pnSCP3)-(pnCD8β)；(vi)(pnTCRβ)-(pnSCP1)-(pnTCRα)-(pnSCP2)-(pnCD8β)-(pnSCP3)-(pnCD8α)；(vii)(pnTCRα)-(pnSCP1)-(pnTCRβ)-(pnSCP2)-(pnCD8α)-(pnSCP3)-(pnCD8β)；或(viii)(pnTCRα)-(pnSCP1)-(pnTCRβ)-(pnSCP2)-(pnCD8β)-(pnSCP3)-(pnCD8α)，其中pnCD8α是编码包括CD8共受体α链的细胞外部分的多肽的多核苷酸，其中pnCD8β是编码包括CD8共受体α链的细胞外部分的多肽的多核苷酸，其中pnTCRα是编码TCRα链的多核苷酸，其中pnTCRβ是编码TCRβ链的多核苷酸，并且其中pnSCP1、pnSCP2和pnSCP3各自独立地是编码自裂解肽的多核苷酸，其中多核苷酸和/或编码的自裂解肽可选择相同或不同。
在进一步的实施例中，结合蛋白作为转基因构建体的一部分被表达，该构建体编码，和/或本公开的宿主细胞可以编码：一个或多个额外的辅助蛋白，如安全开关蛋白；标签，选择标记；CD8共受体β链；CD8共受体α链或两者；或其任何组合。PCT申请PCT/US2017/053112中描述了用于编码和表达结合蛋白和辅助成分(例如，安全开关蛋白、选择标记、CD8共受体β链或CD8共受体α链中的一种或多种)的多核苷酸和转基因构建体，该多核苷酸、转基因构建体和辅助成分，包括其核苷酸和氨基酸序列，在此通过引用并入本文。可以理解的是，本公开的结合蛋白、安全开关蛋白、标签、选择标记、CD8共受体β链或CD8共受体α链的任何或全部可以由单个核酸分子编码，也可以由多个多核苷酸序列编码，这些序列是或存在于分别的核酸分子上。
示例性的安全开关蛋白包括，例如，截断的EGF受体多肽(huEGFRt)，它没有细胞外N端配体结合域和细胞内受体酪氨酸激酶活性，但保留了其原生氨基酸序列，具有I型跨膜细胞表面定位，并具有医药级抗EGFR单克隆抗体西妥昔单抗(Erbitux)tEGF受体(tEGFr；Wang et al.,Blood 118:1255-1263,2011)构象完整的结合表位；caspase多肽(例如，iCasp9；Straathof et al.,Blood 105:4247-4254,2005；Di Stasi et al.,N.Engl.J.Med.365:1673-1683,2011；Zhou and Brenner,Exp.Hematol.pii:S0301-472X(16)30513-6.doi:10.1016/j.exphem.2016.07.011),RQR8(Philip et al.,Blood 124:1277-1287,2014)；来自人类c-myc蛋白(Myc)的10个氨基酸标签(Kieback et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105:623-628,2008)；和标记/安全开关多肽例如RQR(CD20+CD34；Philip et al.,2014)。
对本公开的改性宿主细胞有用的其他辅助成分包括允许细胞被识别、分类、分离、富集或跟踪的标签或选择标记。例如，具有所需特征(如抗原特异性TCR和安全开关蛋白)的标记宿主细胞可以从样品中的无标记细胞中分拣出来，并更有效地激活和扩大，以纳入具有所需纯度的产品中。
如本文所用，术语"选择标记"包括核酸构建体(和编码的基因产物)，它赋予细胞可识别的变化，允许检测和正选择用包含选择标记物的多核苷酸转导的免疫细胞。RQR是选择标记，包括CD20的主要细胞外环和两个最小的CD34结合点。在一些实施例中，RQR编码多核苷酸包括编码16个氨基酸的CD34最小表位的多核苷酸。在一些实施例中，CD34最小表位被整合在CD8共受体柄域(stalk domain)(Q8)的氨基末端位置。在进一步的实施中，CD34最小结合位点序列可以与CD20的靶向表位相结合，形成T细胞的完整标记/自杀基因(RQR8)(Philip et al.,2014，通过引用并入本文)。该构建体允许选择表达该构建体的宿主细胞，例如，使用与磁珠(Miltenyi)结合的CD34特异性抗体，并利用临床上接受的药物抗体利妥昔单抗，允许选择性地删除表达工程T细胞的转基因(Philip et al.,2014)。
进一步的示例性选择标记还包括几个通常不在T细胞上表达的截断的I型跨膜蛋白：截断的低亲和力神经生长因子、截断的CD19和截断的CD34(参见例如，Di Stasi etal.,N.Engl.J.Med.365:1673-1683,2011；Mavilio et al.,Blood 83:1988-1997,1994；Fehse et al.,Mol.Ther.1:448-456,2000；各自在此全部并入本文)CD19和CD34的有用特点是有现成的Miltenyi CliniMACsTM选择系统可用，可以针对这些标记物进行临床级分选。然而，CD19和CD34是相对较大的表面蛋白，可能会对载体包装能力和整合载体的转录效率产生影响。也可以采用含有细胞外、非信号域或各种蛋白质(例如CD19、CD34、LNGFR)的表面标志物。可以采用任何选择标记，并且应该是良好生产规范(Good ManufacturingPractices)可以接受的。在某些实施例中，选择标记与编码感兴趣的基因产物(例如，本公开的结合蛋白，如TCR或CAR)的多核苷酸一起表达。选择标记的进一步例子包括，例如，报告物，如GFP、EGFP、β-gal或氯霉素乙酰转移酶(CAT)。在某些实施例中，选择标记，例如，CD34由细胞表达，CD34可用于选择富集，或分离(例如，通过免疫磁性选择)感兴趣的转导细胞，用于本文所述的方法中。如本文所用，CD34标记物与抗CD34抗体，或例如scFv、TCR或其他与CD34结合的抗原识别部分相区别。
在某些实施例中，选择标记包括RQR多肽、截断的低亲和力神经生长因子(tNGFR)、截断的CD19(tCD19)、截断的CD34(tCD34)，或其任何组合。
关于RQR多肽，在不希望受到理论约束的情况下，表位或目标序列与宿主细胞表面的距离可能对RQR多肽作为选择标记/安全开关的功能很重要(Philip et al.,2010(同上))。在一些实施例中，编码的RQR多肽包含在编码的CD8共受体的β链、α链、或两者、或其一或两者中的片段或变体中。在具体的实施例中，改性的宿主细胞包括编码iCasp9的异源多核苷酸和编码重组CD8共受体蛋白的异源多核苷酸，该蛋白包括含有RQR多肽的β链并进一步包括CD8α链。
在上述任何一个实施例中，本公开的编码例如TCR、或其结合域、或CD8共受体或其细胞外部分的多核苷酸是经过密码子优化的，以便在目标宿主细胞中有效表达。在一些实施例中，宿主细胞包括人类免疫系统细胞，如T细胞、NK细胞或NK-T细胞(Scholten et al.,Clin.Immunol.119:135,2006)。可以使用已知的技术和工具进行密码子优化，例如使用
Figure BDA0003335439510000351
OptimumGeneTM工具或GeneArt(Life Technologies)。密码子优化的序列包括部分密码子优化的序列(即一个或多个密码子，但少于全部密码子，为在宿主细胞中表达而优化)和完全密码子优化的序列。可以理解的是，在多核苷酸编码超过一个的多肽(如TCRα链、TCRβ链、CD8共受体α链、CD8共受体β链和一个或多个自裂解肽)的实施例中，每个多肽可以独立地完全密码子优化、部分密码子优化或不密码子优化。
在某些实施例中，本公开内容提供了宿主细胞，它包括编码本公开内容中任何一种或多种TCR或其结合域的异源多核苷酸，其中经修饰或重组的宿主细胞在其细胞表面表达由异源多核苷酸编码的TCR或其结合域。
各种技术可用于重组(即工程化)DNA、多肽和寡核苷酸合成、免疫测定以及组织培养和转化(如电穿孔、脂质转染)。酶促反应和纯化技术可根据制造商的说明或本领域内通常完成的方法或本文所述进行。这些和相关的技术和程序通常可以根据本领域众所周知的常规方法进行，以及在本说明书中引用和讨论的微生物学、分子生物学、生物化学、分子遗传学、细胞生物学、病毒学和免疫学技术的各种一般和更具体的参考文献中所描述的。参见，例如，Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3d ed.,ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Current Protocols inMolecular Biology(John Wiley and Sons,updated July 2008)；Short Protocols inMolecular Biology:A Compendium of Methods from Current Protocols in MolecularBiology,Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience；Glover,DNA Cloning:APractical Approach,vol.I&II(IRL Press,Oxford Univ.Press USA,1985)；CurrentProtocols in Immunology(Edited by:John E.Coligan,Ada M.Kruisbeek,DavidH.Margulies,Ethan M.Shevach,Warren Strober 2001John Wiley&Sons,NY,NY)；Real-Time PCR:Current Technology and Applications,Edited by Julie Logan,KirstinEdwards and Nick Saunders,2009,Caister Academic Press,Norfolk,UK；Anand,Techniques for the Analysis of Complex Genomes,(Academic Press,New York,1992)；Guthrie and Fink,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology(AcademicPress,New York,1991)；Oligonucleotide Synthesis(N.Gait,Ed.,1984)；Nucleic AcidHybridization(B.Hames&S.Higgins,Eds.,1985)；Transcription and Translation(B.Hames&S.Higgins,Eds.,1984)；Animal Cell Culture(R.Freshney,Ed.,1986)；Perbal,A Practical Guide to Molecular Cloning(1984)；Next-Generation GenomeSequencing(Janitz,2008Wiley-VCH)；PCR Protocols(Methods in Molecular Biology)(Park,Ed.,3rd Edition,2010Humana Press)；Immobilized Cells And Enzymes(IRLPress,1986)；the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；GeneTransfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Miller and M.P.Calos eds.,1987,ColdSpring Harbor Laboratory)；Harlow and Lane,Antibodies,(Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1998)；Immunochemical Methods In CellAnd Molecular Biology(Mayer and Walker,eds.,Academic Press,London,1987)；Handbook Of Experimental Immunology,Volumes I-IV(D.M.Weir andCC Blackwell,eds.,1986)；Roitt,Essential Immunology,6th Edition,(Blackwell ScientificPublications,Oxford,1988)；Embryonic Stem Cells:Methods and Protocols(Methodsin Molecular Biology)(Kurstad Turksen,Ed.,2002)；Embryonic Stem CellProtocols:Volume I:Isolation and Characterization(Methods in MolecularBiology)(Kurstad Turksen,Ed.,2006)；Embryonic Stem Cell Protocols:Volume II:Differentiation Models(Methods in Molecular Biology)(Kurstad Turksen,Ed.,2006)；Human Embryonic Stem Cell Protocols(Methods in Molecular Biology)(Kursad Turksen Ed.,2006)；Mesenchymal Stem Cells:Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology)(Darwin J.Prockop,Donald G.Phinney,and BruceA.Bunnell Eds.,2008)；Hematopoietic Stem Cell Protocols(Methods in MolecularMedicine)(Christopher A.Klug,and Craig T.Jordan Eds.,2001)；Hematopoietic StemCell Protocols(Methods in Molecular Biology)(Kevin D.Bunting Ed.,2008)NeuralStem Cells:Methods and Protocols(Methods in Molecular Biology)(LeslieP.Weiner Ed.,2008)。
在上述任何一个实施例中，本公开的多核苷酸包含在宿主细胞中，或者在某些实施例中，包含在载体中，并且包含多核苷酸的载体可以在宿主细胞中。因此，本文提供了包括本文提供的多核苷酸的载体。在一些实施例中，该多核苷酸与表达控制序列可操作地连接。用于本文公开的某些实施例的合适载体是已知的，可以为特定目的或细胞选择。示例性的载体可以包括一个能够运输另一个与其相连的核酸分子的核酸分子，或者能够在宿主生物体中复制的核酸分子。载体的一些例子包括质粒、病毒载体、粘粒和其他。一些载体可以能够在被引入的宿主细胞中自主复制(如具有细菌复制起源的细菌载体和游离型哺乳动物载体)，而其他载体可以整合到宿主细胞的基因组中，或在引入宿主细胞后促进多核苷酸插入的整合，从而与宿主基因组一起复制(如慢病毒载体))。此外，一些载体能够指导与其操作连接的基因的表达(这些载体可被称为"表达载体")。根据相关的实施例，可以进一步理解，如果将一种或多种药剂(例如编码高亲和力或高功能亲合力的重组TCR或其结合域的多核苷酸，如本文所述，对WT1 p37具有特异性)共同施用给受试者，则每种药剂可以驻留在单独或相同的载体中，并且可以将多个载体(每个包含不同的药剂相同的药剂)引入细胞或细胞群或施用于受试者。
在某些实施例中，编码本公开的对WT1 p37肽:MHC具有特异性的高亲和力或高功能亲合力的重组TCR或其结合域的多核苷酸可与载体的某些表达控制元件操作性地连接。例如，需要对其连接的编码序列进行表达和处理的多核苷酸序列可以被操作性地连接。表达控制序列可包括适当的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA处理信号，如剪接和聚腺苷酸化信号；稳定细胞质mRNA的序列；提高翻译效率的序列(即Kozak共识序列)；提高蛋白质稳定性的序列；以及可能提高蛋白质分泌的序列。如果表达控制序列与感兴趣的基因和表达控制序列相毗连，可以操作性地连接起来，这些表达控制序列反式或远距离地作用于感兴趣的基因。在某些实施例中，编码本公开的TCR或其结合域的多核苷酸包含在表达载体中，该载体是病毒载体，如慢病毒载体或γ-逆转录病毒载体或腺病毒载体。
在特定的实施例中，重组表达载体被递送到适当的细胞，例如，T细胞或抗原呈递细胞，即在其细胞表面显示肽/MHC复合物的细胞(例如，树突状细胞)并缺乏CD8的细胞。在某些实施例中，宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。例如，免疫系统细胞可以是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞或其任何组合，其中，可选的是，如果存在组合，该组合包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。在某些实施例中，其中T细胞是宿主，T细胞可以是幼稚的，中心记忆T细胞，效应记忆T细胞，或其任何组合。因此，重组表达载体还可以包括例如淋巴组织特异性转录调控元件(TRE)，如B淋巴细胞、T淋巴细胞或树突状细胞特异性TRE。淋巴组织特异性TRE是本领域内已知的(参见例如，Thompson et al.,Mol.Cell.Biol.12:1043,1992)；Todd et al.,J.Exp.Med.177:1663,1993)；Penix et al.,J.Exp.Med.178:1483,1993)。
除载体外，某些实施例还涉及到包含目前所公开的异源多核苷酸或载体的宿主细胞。在某些实施例中，宿主细胞在其细胞表面表达由多核苷酸编码的TCR，并且其中多核苷酸对宿主细胞是异源的。本领域的技术人员很容易理解，在本领域有许多合适的宿主细胞可用。宿主细胞可以包括任何单个细胞或细胞培养物，它们可以接受载体或核酸和/或蛋白质的结合，以及任何后代细胞。该术语还包括宿主细胞的后代，无论在基因或表型上是相同还是不同。合适的宿主细胞可能取决于载体，可包括哺乳动物细胞、动物细胞、人类细胞、猴细胞(simian cells)、昆虫细胞、酵母细胞和细菌细胞。这些细胞可以通过使用病毒载体、通过磷酸钙沉淀转化、DEAE-葡聚糖、电穿孔、微注射或其他方法诱导其加入载体或其他材料。参见，例如，Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual 2d ed.(Cold Spring Harbor Laboratory,1989)。
在某些实施例中，宿主细胞表达的TCR的Vα结构域由多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQ ID NO：97、98和101-107中的任何一个多核苷酸具有至少75％(例如75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或100％)的序列同一性，或与SEQ ID NO：99或100具有至少94％的序列同一性。在某些实施例中，Vα结构域是由以下多核苷酸编码的：(a)包括SEQ ID NO：97-107中任何一种多核苷酸的序列；或(b)由SEQ ID NO：97-107中任何一种多核苷酸的序列组成。
在某些实施例中，宿主细胞的Vβ结构域由多核苷酸编码，该多核苷酸包括与SEQID NO：75-77、79、82、84和85中的任何一个多核苷酸的至少75％的序列同一性，或与SEQ IDNO：78、80、81和83中的任何一个多核苷酸的至少95％的序列同一性。在某些实施例中，Vβ结构域是由以下多核苷酸编码的：(a)包括SEQ ID NO：75-85中任何一种多核苷酸的序列；或(b)由SEQ ID NO：75-85中任何一种多核苷酸的序列组成。
在某些实施例中，TCRα链包括由与SEQ ID NO：110至少98％相同的多核苷酸编码的α链恒定结构。在某些实施例中，TCRα链包括由以下多核苷酸编码的α链恒定结构域：(a)包括SEQ ID NO：110的多核苷酸序列；或(b)由SEQ ID NO：110的多核苷酸序列组成。在某些实施例中，TCRβ链包括由多核苷酸编码的β链恒定结构域，该多核苷酸与SEQ ID NO：108或109至少有99.9％的序列同一性。在一些实施例中，TCRβ链包括由以下多核苷酸编码的β链恒定结构域：(a)包括SEQ ID NO：108或109的多核苷酸序列；或(b)由SEQ ID NO：108或109的多核苷酸序列组成。
在一些实施例中，其中该多核苷酸包括编码自裂解肽的核苷酸序列，该核苷酸序列配置在编码TCRα链的多核苷酸序列和编码TCRβ链的多核苷酸序列之间。
在一些实施例中，所编码的自裂解肽：(a)包括SEQ ID NO：60-63中任何一种多肽的氨基酸序列；或(b)由SEQ ID NO：60-63中任何一种多肽的序列组成。
在一些实施例中，编码自裂解肽的多核苷酸：(a)包括SEQ ID NO：166-170中的任何一种多核苷酸的序列；或(b)由SEQ ID NO：166-170中的任何一种多核苷酸的序列组成。
在一些实施例中，TCRα链、自裂解肽和TCRβ链由多核苷酸编码，该多核苷酸与SEQID NO：155-165中的任何一个有至少95％的同一性。
在一些实施例中，TCRα链、自裂解肽和TCRβ链由以下多核苷酸编码：(a)包括SEQID NO：155-165中的任何一种多核苷酸的序列；或(b)由SEQ ID NO：155-165中的任何一种多核苷酸的序列组成。
在一些实施例中，编码的TCRα链、自裂解肽和TCRβ链包括与SEQ ID NO：48-58的任何一种多肽具有至少95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.5％、99.9％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，所编码的TCRα链、自裂解肽和TCRβ链：(a)包括SEQ ID NO：48-58中任何一种多肽的氨基酸序列；或(b)由SEQ ID NO：48-58中任何一种多肽的氨基酸序列组成。
在一些实施例中，宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。在一些实施例中，免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、树突状细胞或其任何组合，其中，可选地，该组合包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。
在一些实施例中，其中宿主免疫系统细胞是T细胞。在一些实施例中，T细胞是幼稚T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞，或其任何组合。
在某些实施例中，与内源性TCR相比，TCR在T细胞上具有更高的表面表达(例如，当内源性TCR没有被人为地抑制或阻止表达时)。
在某些实施例中，该宿主细胞进一步包括：(i)编码多肽的异源多核苷酸，该多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，其中，可选地，编码的多肽是或包括CD8共受体α链；(ii)编码多肽的异源多核苷酸，该多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分，其中，可选地，编码的多肽是或包括CD8共受体β链；或(iii)(i)的多核苷酸和(ii)的多核苷酸，其中，可选地，宿主细胞包括CD4+T细胞。
在一些实施例中，宿主细胞包括：(a)编码包括CD8共受体α链细胞外部分的多肽的异源多核苷酸；(b)编码包括CD8共受体β链细胞外部分的多肽的异源多核苷酸；和(c)编码自裂解肽的多核苷酸，该多核苷酸配置在(a)的多核苷酸和(b)的多核苷酸之间。
在目前公开的任何一个实施例中，当宿主细胞和肿瘤细胞都存在于样品中，宿主细胞(例如免疫细胞，如人类T细胞)能够杀死：(i)乳腺癌细胞系MDA-MB-468的肿瘤细胞；(ii)胰腺癌细胞系PANC-1的肿瘤细胞；(iii)乳腺癌细胞系MDA-MB-231的肿瘤细胞；(iv)表达HLA-A2的骨髓性白血病细胞系K562的肿瘤细胞，其中，可选地，HLA-A2包括HLA-A*201；(v)表达HLA-A2的结肠癌细胞系RKO的肿瘤细胞，其中，可选地，HLA-A2包括HLA-A*201；或(vi)(i)-(v)的任何肿瘤细胞组合。在一些实施例中，
在特定的实施例中，当宿主细胞和肿瘤细胞以32:1(宿主细胞：肿瘤细胞)、16:1、8:1、4:1、2:1或1.5:1的比例存在于样品中时，宿主细胞能够杀死肿瘤细胞。可以确定靶细胞的杀死，例如，
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生物成像平台(Essen Bioscience)。在某些实施例中，该平台使用激活的caspase和标记的(如RapidRed或NucRed)肿瘤细胞信号，其中测量重叠，重叠面积增加等于肿瘤细胞因凋亡而死亡。杀死也可以用4小时试验来确定，其中靶细胞被标记的铬(51Cr)加载，在与表达本公开的结合蛋白的免疫细胞共同培养4小时后，测量上清液中的51Cr。
在上述任何一个实施例中，宿主细胞(例如免疫细胞)可被修饰以减少或消除一个或多个内源基因的表达，这些基因编码参与免疫信号传递或其他相关活动的多肽。示例性的基因敲除包括那些编码PD-1、LAG-3、CTLA4、TIM3、TIGIT、FasL、HLA分子、TCR分子等。在不希望受理论约束的情况下，某些内源性表达的免疫细胞蛋白可能被接受修饰的免疫细胞的同种异体宿主识别为外来的，这可能导致修饰的免疫细胞被清除(例如HLA等位基因)，或可能下调修饰的免疫细胞的免疫活性(例如，PD-1、LAG-3、CTLA4、FasL、TIGIT、TIM3)，或可能干扰本公开的异源表达的结合蛋白的结合活性(例如，修饰的T细胞的内源性TCR结合非Ras抗原，从而干扰修饰的免疫细胞结合表达Ras抗原的细胞)。
因此，减少或消除这种内源性基因或蛋白质的表达或活性，可以提高修饰细胞在自体或同种异体宿主环境中的活性、耐受性或持久性，并可允许细胞的普遍施用(例如，对任何接受者，无论HLA类型)。在某些实施例中，修饰细胞是供体细胞(如同种异体)或自体细胞。在某些实施例中，本公开的宿主细胞包括编码PD-1、LAG-3、CTLA4、TIM3、TIGIT、FasL、HLA成分(例如，编码α1巨球蛋白、α2巨球蛋白、α3巨球蛋白、β1微球蛋白或β2微球蛋白的基因)、或TCR成分(例如，编码TCR可变区或TCR恒定区的基因)的一个或多个基因的染色体基因敲除(参见，例如，Torikai et al.,Nature Sci.Rep.6:21757(2016)；Torikai et al.,Blood 119(24):5697(2012)；和Torikai et al.,Blood 122(8):1341(2013)，其中的基因编辑技术、组合物和过继性细胞疗法在此全部通过引用并入本文)。
如本文所用，术语"染色体基因敲除"是指在宿主细胞中进行遗传改变或引入抑制剂，以防止(例如，减少、延迟、抑制或废除)宿主细胞产生具有功能活性的内源多肽产品。导致染色体基因敲除的改变可以包括，例如，引入无义突变(包括形成过早的终止密码子)、错义突变、基因缺失和断链，以及抑制宿主细胞内源性基因表达的抑制性核酸分子的异源表达。
在某些实施例中，染色体基因敲除或基因敲入是通过对宿主细胞的染色体编辑来实现的。染色体编辑可以使用例如内切核酸酶进行。本文中的"内切酶"是指能够催化裂解多核苷酸链内的磷酸二酯键的酶。在某些实施例中，内切酶能够裂解目标基因，从而使目标基因失活或"敲除"。内切酶可以是自然发生的、重组的、基因修饰或融合的内切酶。由内切酶引起的核酸链断裂通常通过同源重组或非同源末端连接(NHEJ)的不同机制进行修复。在同源重组过程中，供体核酸分子可用于供体基因"敲入"和靶基因"敲出"，也可选地通过供体基因敲入或靶基因敲出事件使靶基因失活。NHEJ是一个容易出错的修复过程，通常会导致DNA序列的裂解部位发生变化，如至少一个核苷酸的替换、缺失或添加。NHEJ可被用来"敲除"目标基因。内切酶的例子包括锌指核酸酶、TALE-核酸酶、CRISPR-Cas核酸酶、大范围核酸酶和megaTAL。
如本文所用，"锌指核酸酶"(ZFN)是指由包括与非特异性DNA裂解结构域(如Fokl内切酶)相融合的锌指DNA结合结构域的融合蛋白。每个锌指基序的约30个氨基酸与DNA的约3个碱基对结合，某些残基的氨基酸可以改变，以改变三联体的序列特异性(参见例如，Desjarlais et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.90:2256-2260,1993；Wolfe et al.,J.Mol.Biol.285:1917-1934,1999)。多个锌指基序可以串联起来，对所需的DNA序列产生结合特异性，例如长度在9到18个碱基对之间的区域。作为背景，ZFN通过催化基因组中位点特异性DNA双链断裂(DSB)的形成来介导基因组编辑，并通过同源定向修复促进包括与DSB位点上与基因组同源的侧翼序列的转基因的定向整合。或者，由ZFN产生的DSB可以通过非同源末端连接(NHEJ)修复导致目标基因被敲除，NHEJ是一种容易出错的细胞内修复途径，导致裂解位点的核苷酸插入或缺失。在某些实施例中，基因敲除包括使用ZFN分子进行的插入、缺失、突变或其组合。
如本文所用，"转录激活因子样效应物核酸酶"(TALEN)是指包括TALE DNA结合结构域和DNA裂解结构域，如FokI内切酶的融合蛋白。"TALE DNA结合结构域"或"TALE"由一个或多个TALE重复结构域/单元组成，每个结构域/单元通常具有高度保守的33-35个氨基酸序列，其中第12和第13个氨基酸有差异。TALE重复结构域参与TALE与目标DNA序列的结合。有差异的氨基酸残基被称为重复可变区(RVD)，与特定的核苷酸识别相关联。这些TALE的DNA识别的天然(典型)代码已经确定，在TALE的第12和13位的HD(组氨酸-天冬氨酸)序列导致TALE与胞嘧啶(C)结合，NG(天冬酰胺-甘氨酸)与T核苷酸结合，NI(天冬酰胺-异亮氨酸)与A结合，NN(天冬酰胺-天门冬酰胺)与G或A核苷酸结合，而NG(天冬酰胺-甘氨酸)与T核苷酸结合。非经典(非典型)RVD也是已知的(例如，见美国专利出版号US 2011/0301073，该非典型RVD在此通过引用并入全文)。TALEN可用于指导T细胞基因组中的特定位点双链断裂(DSB)。非同源末端连接(NHEJ)从双链断裂的两边连接DNA，其中几乎没有序列重叠的退火，从而引入敲除基因表达的错误。另外，如果转基因中存在同源的侧翼序列，同源定向修复可以在DSB的位置引入转基因。在某些实施例中，基因敲除包括插入、缺失、突变或其组合，并使用TALEN分子制成。
如本文所用，"簇状规则间隔短回文重复序列/Cas"(CRISPR/Cas)核酸酶系统是指采用CRISPR RNA(crRNA)引导的Cas核酸酶通过碱基配对互补性识别基因组内的目标位点(称为protospacers)，然后如果短的、保守的protospacer相关基序(PAM)在紧跟互补目标序列3'时裂解DNA的系统。根据Cas核酸酶的序列和结构，CRISPR/Cas系统被分为三种类型(即I型、II型和III型)。I型和III型的crRNA指导的监视复合物需要多个Cas亚单位。II型系统是研究最多的，至少包括三个成分：RNA指导的Cas9核酸酶，crRNA，和反式作用的crRNA(tracrRNA)。tracrRNA包括双链形成区。crRNA和tracrRNA形成双链，能够与Cas9核酸酶相互作用，并通过crRNA上的间隔物与PAM上游的目标DNA上的前间隔序列之间的Watson-Crick碱基配对，将Cas9/crRNA：tracrRNA复合物引导到目标DNA上的特定位点。Cas9核酸酶在由crRNA间隔物定义的区域内裂解双链断裂。通过NHEJ修复导致插入和/或缺失，破坏了目标基因座的表达。另外，可以通过同源定向修复在DSB部位引入具有同源侧翼序列的转基因。crRNA和tracrRNA可以被设计成单一的引导RNA(sgRNA或gRNA)(见，例如，Jinek etal.,Science 337:816-21,2012)。此外，引导RNA与目标位点互补的区域可以被改变或编程以靶向所需的序列(Xie et al.,PLOS One 9:e100448,2014；美国专利申请公开号US2014/0068797，美国专利申请公开号US 2014/0186843；美国专利申请号8,697,359和PCT公开号WO 2015/071474；其中每一项都是通过引用并入)。在某些实施例中，基因敲除包括插入、缺失、突变或其组合，并使用CRISPR/Cas核酸酶系统制作。示例性的gRNA序列和使用其的方法来敲除编码免疫细胞蛋白的内源性基因，包括那些在Ren et al.,Clin.CancerRes.23(9):2255-2266(2017)中描述的，其中的gRNA、CAS9 DNA、载体和基因敲除技术在此通过引用全部并入。
如本文所使用的，"大范围核酸酶"，也被称为"归巢核酸内切酶"，是指一种内切脱氧核酸核酸酶，其特点是识别位点大(双链DNA序列约为12至约40个碱基对)。根据序列和结构基序，大范围核酸酶可分为五个家族：LAGLIDADG、GIY-YIG、HNH、His-Cys box和PD-(D/E)XK。示例性的大范围核酸酶包括I-SceI、I-CeuI、PI-PspI、PI-Sce、I-SceIV、I-CsmI、I-PanI、I-SceII、I-PpoI、I-SceIII、I-CreI、I-TevI、I-TevII和I-TevIII，其识别序列为已知的(参见，例如，美国专利号5,420,032和6,833,252；Belfort et al.,Nucleic AcidsRes.25:3379-3388,1997；Dujon et al.,Gene 82:115-118,1989；Perler et al.,NucleicAcids Res.22:1125-1127,1994；Jasin,Trends Genet.12:224-228,1996；Gimble et al.,J.Mol.Biol.263:163-180,1996；Argast et al.,J.Mol.Biol.280:345-353,1998)。
在某些实施例中，天然存在的大范围核酸酶可用于促进选自PD-1、LAG3、TIM3、CTLA4、TIGIT、FasL、HLA编码基因或TCR组分编码基因的靶点的位点特异性基因组修饰。在其他的实施例中，具有对目标基因新的结合特异性的工程大范围核酸酶被用来进行位点特异性基因组修饰(参见，例如，Porteus et al.,Nat.Biotechnol.23:967-73,2005；Sussmanet al.,J.Mol.Biol.342:31-41,2004；Epinat et al.,Nucleic Acids Res.31:2952-62,2003；Chevalier et al.,Molec.Cell 10:895-905,2002；Ashworth et al.,Nature 441:656-659,2006；Paques et al.,Curr.Gene Ther.7:49-66,2007；美国专利公开号US 2007/0117128；US 2006/0206949；US 2006/0153826；US 2006/0078552；和US 2004/0002092)。在进一步的实施例中，使用归巢核酸内切酶产生染色体基因敲除，该内切酶经过TALEN的模块化DNA结合域的修饰，制成一种称为megaTAL的融合蛋白。MegaTAL不仅可以用来敲除一个或多个目标基因，而且当与编码感兴趣的多肽的外源供体模板结合使用时，还可以引入(敲入)异源或外源多核苷酸。
在某些实施例中，染色体基因敲除包括抑制性核酸分子，该分子被引入到宿主细胞(例如，免疫细胞)中，该分子包括编码特异性结合肿瘤相关抗原的抗原特异性受体的异源多核苷酸，其中该抑制性核酸分子编码靶标特异性抑制剂，其中编码的靶标特异性抑制剂抑制宿主细胞中的内源基因表达(例如PD-1、TIM3、LAG3、CTLA4、TIGIT、FasL、HLA成分或TCR成分或其任何组合)。
染色体基因敲除可以通过使用敲除程序或制剂后的宿主免疫细胞的DNA测序直接确认。染色体基因敲除也可以从敲除后没有基因表达(例如，没有基因编码的mRNA或多肽产物)来推断。
在某些实施例中，染色体基因敲除包括HLA成分基因的敲除，该基因选自α1巨球蛋白基因、α2巨球蛋白基因、α3巨球蛋白基因、β1微球蛋白基因或β2微球蛋白基因。
在某些实施例中，染色体基因敲除包括选自TCRα可变区基因、TCRβ可变区基因、TCR恒定区基因或其组合的TCR组件基因的敲除。
此外，可以理解的是，目前公开的任何基因编辑技术和工具可用于将本公开的TCR编码和/或CD8共受体编码多核苷酸引入宿主细胞基因组。
在另一个方面，这里提供了组合物和单位剂量，其包括本公开的改性宿主细胞和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在某些实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、或至少约95％的修饰CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％修饰的CD8+T细胞的组合物，按约1:1的比例，其中单位剂量含有减少量或基本上不含有幼稚T细胞(即，与具有可比数量的PBMC的患者样本相比，单位剂量中存在的幼稚T细胞数量少于约50％、少于约40％、少于约30％、少于约20％、少于约10％、少于约5％或少于约1％)。
在一些实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约50％修饰的CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约50％修饰的CD8+T细胞的组合物，比例约为1:1，其中宿主细胞组合物或单位剂量包含减少量或基本没有幼稚T细胞。在进一步的实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约60％的修饰的CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约60％的修饰的CD8+T细胞的组合物，比例约为1:1，其中单位剂量包含减少的数量或基本上没有幼稚T细胞。在更进一步的实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约70％工程化CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约70％工程化CD8+T细胞的组合物，比例约为1:1，其中单位剂量包含减少量或基本上没有幼稚T细胞。在一些实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约80％修饰的CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约80％修饰的CD8+T细胞的组合物，比例约为1:1，其中宿主细胞组合物或单位剂量包含减少量或基本没有幼稚T细胞。在一些实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约85％修饰的CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约85％修饰的CD8+T细胞的组合物，比例约为1:1，其中宿主细胞组合物或单位剂量包含减少量或基本没有幼稚T细胞。在一些实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括(i)包含至少约90％修饰的CD4+T细胞的组合物，与(ii)包含至少约90％修饰的CD8+T细胞的组合物，比例约为1:1，其中宿主细胞组合物或单位剂量包含减少量或基本没有幼稚T细胞。
可以理解的是，本公开的宿主细胞组合物或单位剂量可以包括本文所述的任何宿主细胞或宿主细胞的任何组合。在某些实施例中，例如，宿主细胞组合物或单位剂量包括修饰的CD8+T细胞、修饰的CD4+T细胞或两者，其中这些T细胞被修饰为编码Ras肽：HLA-A*02：01复合物的特异性结合蛋白，并进一步包括修饰的CD8+T细胞、修饰的CD4+T细胞或两者，其中这些T细胞被修饰为编码WT1肽：HLA-A*02：01复合物的特异性结合蛋白。此外或替代地，本公开的宿主细胞组合物或单位剂量可以包括本文所述的任何宿主细胞或宿主细胞组合，并可以进一步包括表达对不同抗原(例如，不同的WT1抗原或来自不同蛋白质或靶标的抗原，例如，BCMA、CD3、CEACAM6、c-Met、EGFR、EGFRvIII、ErbB2、ErbB3、ErbB4、EphA2、IGF1R、GD2、O-乙酰基GD2、O-乙酰基GD3、GHRHR、GHR、FLT1、KDR、FLT4、CD44v6、CD151、CA125、CEA、CTLA-4、GITR、BTLA、TGFBR2、TGFBR1、IL6R、gp130、Lewis A、Lewis Y、TNFR1、TNFR2、PD1、PD-L1、PD-L2、HVEM、MAGE-A(例如，包括MAGE-A1、MAGE-A3和MAGE-A4)、间皮素、NY-ESO-1、PSMA、RANK、ROR1、TNFRSF4、CD40、CD137、TWEAK-R、HLA、与HLA结合的肿瘤或病原体相关肽、与HLA结合的hTERT肽、与HLA结合的酪氨酸酶肽、与HLA结合的WT-1肽、LTβR、LIFRβ、LRP5、MUC1、OSMRβ、TCRα、TCRβ、CD19、CD20、CD22、CD25、CD28、CD30、CD33、CD52、CD56、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD86、CD123、CD171、CD276、B7H4、TLR7、TLR9、PTCH1、WT-1、HA1-H、Robo1、α-胎儿蛋白(AFP)、Frizzled、OX40、PRAME和SSX-2等)特异性的结合蛋白的修饰细胞(例如免疫细胞，如T细胞)。例如，单位剂量可以包括表达特异性结合WT1-HLA复合物的结合蛋白的修饰的CD8+T细胞和表达特异性结合HER2抗原的结合蛋白(如CAR)的修饰的CD4+T细胞(和/或改良CD8+T细胞)。还可以理解的是，本文公开的任何宿主细胞都可以在组合疗法中施用。
在本文所述的任何一个实施例中，宿主细胞组合物或单位剂量包括等量或近似等量的工程CD45RA-CD3+CD8+和修饰的CD45RA-CD3+CD4+TM细胞。
用途和治疗方法
在某些方面，本发明公开的内容涉及治疗以Wilms肿瘤蛋白1(WT1)表达或过度表达为特征的过度增殖或增殖性疾病的方法，方法是向需要的人类受试者施用包含高亲和力或高功能亲合力的重组TCR或其结合域，根据上述任何TCR或本文所述的任何结合域对人类WT1具有特异性，或设计为表达其的宿主细胞，如T细胞，或包含本文所述的任何TCR、或其结合域、或宿主细胞的组合物。在一些实施例中，TCR由宿主细胞表达，如造血祖细胞或人类免疫系统细胞。在一些实施例中，免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、树突状细胞，或其任何组合。
受试者中存在过度增值性疾病或增殖性疾病或恶性状况是指受试者中存在发育不良的、癌变的和/或转化的细胞，包括例如新生物、肿瘤、非接触性抑制或致癌性转化的细胞等(例如，实体癌；包括淋巴瘤和白血病在内的血液系统癌症，如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病等)，这些都是本领域内已知的，并且已经确立了诊断和分类的标准(例如，Hanahan and Weinberg,Cell 144:646,2011；Hanahan and Weinberg,Cell 100:57,2000；Cavallo et al.,Canc.Immunol.Immunother.60:319,2011；Kyrigideis et al.,J.Carcinog.9:3,2010)。在某些实施例中，这种癌细胞可以是急性骨髓性白血病、B细胞淋巴细胞白血病、T细胞淋巴细胞白血病或骨髓瘤的细胞，包括能够启动和连续移植这些类型的任何癌症的癌症干细胞(参见，例如，Park et al.,Molec.Therap.17:219,2009)。
在某些实施例中，提供了治疗过度增殖性或增殖性疾病的方法，如血液恶性肿瘤或实体癌(参见，例如，Nakatsuka et al.,Modern Pathology 19:804-714(2006))。示例性的血液恶性肿瘤包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性嗜酸细胞白血病(CEL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或多发性骨髓瘤(MM)。
在进一步的实施例中，提供了治疗过度增殖性或增殖性疾病的方法，如实体癌症,其选自胆汁癌、膀胱癌、骨和软组织癌、脑瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、结直肠腺癌、结直肠癌、韧带样瘤、胚胎癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、胃腺癌、多形性胶质母细胞瘤、妇科肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、肝癌、肺癌、间皮瘤、恶性黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢癌(参见，例如Hylander et al.,Gynecologic Oncology 101:12-17(2006))、胰腺癌、胰腺导管腺癌、原发性星形细胞瘤、原发性甲状腺癌、前列腺癌、肾癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、睾丸生殖细胞瘤、尿道癌、子宫肉瘤或子宫癌。
在一些实施例中，该TCR能够以I类HLA限制的方式促进针对人类WT1的抗原特异性T细胞反应。在一些实施例中，第一类HLA限制性反应是与抗原处理相关转运体(TAP)独立。在一些实施例中，抗原特异性T细胞反应包括CD4+辅助T淋巴细胞(Th)反应和CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应中的至少一个。在一些实施例中，CTL反应是针对WT1过度表达的细胞。
本文还提供了任何一种TCR、多核苷酸、组合物、载体和宿主细胞(包括任何组合)，用于治疗与Wilms肿瘤蛋白1(WT1)表达或过度表达相关的增殖性或过度增殖性疾病的方法。
本文还提供了任何一种TCR、多核苷酸、组合物、载体和宿主细胞(包括任何组合)，用于制造治疗与Wilms肿瘤蛋白1(WT1)表达或过量表达相关的增殖性或过度增殖性疾病的药物的方法中。
正如医学领域的技术人员所理解的那样，术语"治疗(treat)"和"治疗(treatment)"是指对受试者(即病人、宿主，可以是人类或非人类动物)的疾病、紊乱或状况的医疗管理(参见，例如，Stedman’s Medical Dictionary)。一般来说，适当的剂量和治疗方案提供一种或多种对人WT1(如SEQ ID NO：23-58，以及本文提供的变体)具有特异性的高功能亲合力重组TCR或其结合域、或表达其的宿主细胞，以及可选的辅助疗法(如细胞因子，如IL-2、IL-15、IL-21或其任何组合)，其量足以提供治疗或预防的益处。治疗性治疗或预防性或防止性方法所产生的治疗或预防益处包括，例如，改善的临床结果，其中目标是防止或延缓或以其他方式减少(例如，相对于未治疗的对照而言，以统计学上显著的方式减少)不期望的生理变化或紊乱，或防止、延缓或以其他方式减少这种疾病或紊乱的扩展或严重程度。治疗受试者的有益或期望的临床结果包括减少、减轻或缓解由待治疗的疾病或紊乱引起的或与之相关的症状；减少症状的发生；改善生活质量；延长无病状态(即，减少受试者出现疾病诊断所依据的症状的可能性或倾向性)；减少疾病的范围；稳定(即不恶化)疾病状态；延迟或减缓疾病进展；改善或缓解疾病状态；以及缓解(无论是部分还是全部)，无论是可检测还是不可检测；或总体生存。
"治疗"也可以指与受试者不接受治疗时的预期生存率相比，延长生存期。需要本文所述方法和组合物的受试者包括那些已经患有疾病或紊乱的人，以及易患或有可能患该疾病或紊乱的受试者。需要预防性治疗的受试者包括要预防疾病、状况或失调的受试者(即减少疾病或失调发生或复发的可能性)。本文所述的组合物(和包含组合物的制剂)和方法所提供的临床益处可通过设计和执行体外试验、临床前研究和临床研究来评估，如实施例中所述，这些组合物对受试者是旨在有益的。
在另一个方面，本发明公开的内容涉及治疗过度增殖性疾病或增殖性疾病或以Wilms肿瘤蛋白1(WT1)过度表达或表达为特征的病症的方法，方法是向有需要的人类受试者施用组合物，该组合物包括编码高亲和力或高功能亲合力的重组TCR或其结合结构域的分离多核苷酸，根据上述任何编码的TCR或其结合结构域对人的WT1具有特异性，或包含其的宿主细胞(例如T细胞)，或包含本文所述的任何TCR或其结合结构域或宿主细胞的组合物。在某些实施例中，编码对人WT1 p37肽:MHC有特异性的TCR或其结合域的多核苷酸是针对感兴趣的宿主细胞进行密码子优化。在进一步的实施例中，上述任何多核苷酸与表达控制序列可操作地连接，并可选地包含在表达载体，如病毒载体中。示例性的病毒载体包括慢病毒载体和γ-逆转录病毒载体。在相关的实施例中，该载体能够将多核苷酸递送给宿主细胞，如造血祖细胞或免疫系统细胞(例如，人类造血祖细胞或人类免疫系统细胞)。示例性的免疫系统细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞或其任何组合(例如，人类)。在某些实施例中，免疫系统细胞是T细胞，如幼稚T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞或其任何组合，所有这些细胞都是可选地是人类的。
在另一个方面，本发明公开的内容涉及治疗过度性增殖性疾病或增殖性疾病或以Wilms肿瘤蛋白1(WT1)过表达为特征的病状的方法，方法是向需要的人类受试者施用有效量的包含根据上述任何实施例的或本文描述的异源多核苷酸或表达载体的宿主细胞，其中工程或重组的宿主细胞在其细胞表面表达由异源多核苷酸编码的TCR，该TCR对人WT1 p37:MHC有特异性。在某些实施例中，本公开的内容涉及治疗过度增殖性疾病或增殖性疾病或以Wilms肿瘤蛋白1(WT1)p37肽的产生或WT1 p37肽：MHC复合物的存在为特征的病状的方法，方法是向有需要的人类受试者施用有效量的包括根据上述任何实施例或本文所述的异源多核苷酸或表达载体的宿主细胞，其中该工程或重组宿主细胞在其细胞表面表达异源多核苷酸编码的TCR，该TCR对人WT1 p37:MHC具有特异性。
还提供了一种用于治疗以具有过度增殖性或增殖性疾病的受试者的细胞中WT1过表达为特征的疾病的采用过继性免疫疗法方法，包括向受试者施用有效量的本公开的宿主细胞或组合物。
在一些实施例中，宿主细胞在体外被修饰。在一些实施例中，宿主细胞是同种异体细胞、同源细胞或受试者的自体细胞。在一些实施例中，宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。在一些实施例中，免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞或其任何组合。
在一些实施例中，T细胞是幼稚T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞或其任何组合。
在一些实施例中，过度增殖或增殖性疾病是一种血液学恶性肿瘤或实体癌。
在一些实施例中，血液学恶性肿瘤选自急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性嗜酸细胞白血病(CEL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或多发性骨髓瘤(MM)。
在一些实施例中，实体癌症选自乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胆道癌、膀胱癌、骨和软组织癌、脑瘤、宫颈癌、结肠癌、大肠腺癌、结直肠癌、韧带样瘤、胚胎癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、胃腺癌、多形性胶质细胞瘤、妇科肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、肝癌、间皮瘤、恶性黑色素瘤、骨肉瘤、胰腺癌、胰腺导管腺癌、原发性星形细胞肿瘤、原发性甲状腺癌、前列腺癌、肾癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、睾丸生殖细胞瘤、尿道癌、子宫肉瘤或子宫癌。
在一些实施例中，宿主细胞是以肠外给药。
在一些实施例中，该方法包括向受试者施用多个剂量的宿主细胞。在一些实施例中，多个剂量的给药时间间隔为约两周至约四周。
本文所述的表达对人WT1 p37肽具有特异性的重组TCR(如高亲和力或高功能亲合力)或其结合域的细胞，可在药学或生理学上可接受或合适的赋形剂或载体中给予受试者。药学上可接受的赋形剂是生物兼容的载剂，例如生理盐水，在此有更详细的描述，它适合施用于人类或其他非人类哺乳动物受试者。
治疗上的有效剂量是指用于治疗的人类或非人类动物中过继性转移的宿主细胞(表达高亲和力或高功能亲合力的重组TCR，或其结合域，对人WT1 p37肽：MHC有特异性)的数量，能够产生临床上的理想结果(即，有足够的量来诱导或增强针对过度表达WT1或产生WT1 p37肽的细胞的特异性T细胞免疫反应(例如，细胞毒性T细胞反应)，具有统计学意义)。众所周知，任何一个病人的剂量都取决于许多因素，包括病人的大小、体重、体表面积、年龄、要施用的特定疗法、性别、给药时间和途径、一般健康状况以及同时施用的其他药物。剂量会有所不同，但给予本文所述包含重组表达载体的宿主细胞的优选剂量是约104细胞/m2、约5×104细胞/m2、约105细胞/m2、约5×105细胞/m2、约106细胞/m2、约5×106细胞/m2、约107细胞/m2、约5×107细胞/m2、约5×108细胞/m2、约109细胞/m2、约5×109细胞/m2、约1010细胞/m2、约5×1010细胞/m2、或约1011细胞/m2。在一些实施例中，剂量包括约107个细胞/m2，约5×107个细胞/m2，约108个细胞/m2，约5×108个细胞/m2，约109个细胞/m2，约5×109个细胞/m2，约1010个细胞/m2，约5×1010个细胞/m2，或约1011个细胞/m2。
药学组合物可以按照医疗领域技术人员确定的与要治疗(或预防)的疾病或病症相适应的方式给药。适当的剂量和合适的给药时间和频率将由诸如病人的健康状况、病人的体型(即体重、质量或身体面积)、病人疾病的类型和严重程度、活性成分的特定形式以及给药方法等因素决定。一般来说，适当的剂量和治疗方案提供的组合物的量足以提供治疗和/或预防的好处(如本文所述，包括改善临床结果，如更频繁的完全或部分缓解，或更长的无病和/或总生存期，或症状严重程度的减轻)。对于预防性使用，剂量应足以预防、推迟发病或减轻与疾病或紊乱相关的疾病的严重程度。根据本文所述方法施用的免疫原性组合物的预防作用可以通过进行临床前(包括体外和体内动物研究)和临床研究，并通过适当的统计学、生物学和临床方法和技术分析从中获得的数据来确定，所有这些都可以由本领域技术人员轻易地实施。
与WT1过量表达(或在一些实施例中，表达)相关的病症包括存在WT1细胞或分子事件活动不足、活动过度或活动不当的任何障碍或病症，通常是由于受折磨的细胞(如白血病细胞)中WT1表达水平相对于正常细胞异常高(具有统计学意义)而导致。具有这种疾病或状况的受试者将受益于用本文描述的实施例的组合物或方法进行治疗。因此，与WT1过表达有关的一些病状可能包括急性以及慢性失调和疾病，如那些使受试者容易患特定疾病的病理情况。
与WT1过表达相关的病状的一些例子包括过度增殖性疾病，在某些方面是指受试者中激活和/或增殖的细胞(也可能是转录过度活跃)的状态，包括肿瘤、新生物、癌症、恶性肿瘤等。除了激活或增殖的细胞外，增殖性疾病还可能包括细胞死亡过程的异常或失调，无论是通过坏死还是凋亡。这种细胞死亡过程的异常可能与各种病状有关，包括癌症(包括原发性、继发性恶性肿瘤以及转移)或其他情况。
根据某些实施例，几乎任何类型的以WT1过表达为特征的癌症都可以通过使用本文公开的组合物和方法进行治疗，包括血液学癌症(例如，白血病，包括急性骨髓性白血病(AML)、T或B细胞淋巴瘤、骨髓瘤和其他)。此外，"癌症"可指任何加速增殖的细胞，包括实体瘤、腹水瘤、血液或淋巴或其他恶性肿瘤；结缔组织恶性肿瘤；转移性疾病；器官或干细胞移植后的微小残留病；多药耐药的癌症，原发性或继发性恶性肿瘤，与恶性肿瘤有关的血管生成或其他形式的癌症。在本文公开的实施例中，还考虑了具体的实施例，其中只包括上述疾病类型中的一种，或者可以排除特定的病状，无论它们是否以WT1过表达为特征。
本文考虑的某些治疗或预防方法包括施用宿主细胞(可以是自体的、同种异体的或同源的)，其中包括本文所述的所需核酸分子，该核酸分子被稳定地整合到细胞的染色体上。例如，可使用自体、同种异体或同源免疫系统细胞(如T细胞、抗原呈递细胞、自然杀伤细胞)在体外生成这种细胞组合物，以便将所需的、以WT1为靶点的T细胞组合物作为过继性免疫疗法给受试者。
如本文所使用的，在某些方面，组合物或疗法的施用是指向受试者递送该组合物或疗法，而不考虑递送的途径或方式。可以连续或间歇性地给药，并以肠胃外给药。给药可用于治疗已被证实患有公认的病症、疾病或疾病状态的受试者，或用于治疗易受这种病症、疾病或疾病状态影响或处于这种风险中的受试者。与辅助疗法联合给药可包括以任何顺序和任何给药时间表同时和/或顺序给药的多种药剂(如WT1特异性修饰的(即重组或工程)宿主细胞与一种或多种细胞因子；免疫抑制疗法，如钙调磷酸酶抑制剂、皮质类固醇、微管抑制剂、低剂量的霉酚酸前药或其任何组合)。例如，本公开的疗法可以与免疫抑制成分的特定抑制剂或调节剂相结合，例如免疫检查点分子的抑制剂或调节剂(例如，抗PD-1、抗PD-L1或抗CTLA-4抗体；参见，例如，Pardol,Nature Rev.Cancer 12:252,2012；Chen andMellman,Immunity 39:1,2013)。
在一些实施例中，宿主细胞以约107个细胞/m2至约1011个细胞/m2的剂量施用于受试者。在一些实施例中，该方法进一步包括施用细胞因子。在一些实施例中，该细胞因子是IL-2、IL-15、IL-21或其任何组合。在一些实施例中，该细胞因子是IL-2，并与宿主细胞同时或相继给药。在一些实施例中，依次施用细胞因子，条件是受试者在施用细胞因子之前至少被施用了三次或四次宿主细胞。
在一些实施例中，该细胞因子是IL-2，并在皮下给药。
在一些实施例中，受试者进一步接受免疫抑制治疗。
在一些实施例中，免疫抑制疗法选自钙调磷酸酶抑制剂、皮质类固醇、微管抑制剂、低剂量的霉酚酸前药或其任何组合。
在一些实施例中，受试者已经接受了非清髓性或清髓性造血细胞移植。
在一些实施例中，受试者在非清髓造血细胞移植后至少三个月被给予宿主细胞。
在一些实施例中，受试者在清骨髓造血细胞移植后至少两个月被给予宿主细胞。进行HCT的技术和方案在本领域是已知的，可以包括移植任何合适的供体细胞，如来自脐带血、骨髓或外周血的细胞，造血干细胞，激活干细胞或来自羊水的细胞。因此，在某些实施例中，本公开的修饰的免疫细胞可以在修改的HCT治疗中与造血干细胞一起或在造血干细胞之后不久施用。在一些实施例中，HCT包括供体造血细胞，其包括编码HLA成分的基因的染色体敲除、编码TCR成分的基因的染色体敲除或两者。
在进一步的实施例中，受试者在接受该组合物或HCT之前曾接受过淋巴细胞清除化疗。在某些实施例中，淋巴细胞清除化疗包括由环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合组成的调节方案。
在某些实施例中，向受试者施用多个剂量的本文所述的重组宿主细胞，其施用的间隔时间可为约2至约4周。在进一步的实施例中，依次施用细胞因子，条件是受试者在施用细胞因子前至少被施用了三次或四次重组宿主细胞。在某些实施例中，细胞因子在皮下给药(例如IL-2、IL-15、IL-21)。
在更进一步的实施例中，被治疗的受试者进一步接受免疫抑制治疗，如PD-1的特异性抗体(例如，pidilizumab、nivolumab或pembrolizumab)、PD-L1的特异性抗体(例如，MDX-1105、BMS-936559、MEDI4736、MPDL3280A或MSB0010718C)、针对CTLA4的特异性抗体(例如，tremelimumab或ipilimumab)、钙调磷酸酶抑制剂、皮质激素、微管抑制剂、低剂量的霉酚酸前药，或其任何组合。在更进一步的实施例中，接受治疗的受试者已经接受了非清髓性或清髓性造血细胞移植，其中治疗可以在非清髓性造血细胞移植后至少两个月到至少三个月进行。
在某些方面，治疗或药物组合物的有效量是指在所需的剂量和时间段内，足以达到本文所述的所需临床效果或有益治疗的量。有效量可在一次或多次给药中递送。如果对已经知道或确认患有疾病或疾病状态的受试者给药，术语"治疗量"可用于提及治疗，而"预防有效量"可用于描述对易患或有患疾病或疾病状态(例如，复发)风险的受试者给药的有效量作为预防过程。
细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫反应的水平可以通过本文所述的和本领域常规的众多免疫学方法中的任何一种来确定。CTL免疫反应的水平可以在给予本文所述的任何一种由例如T细胞表达的WT1特异性TCR之前和之后确定。确定CTL活性的细胞毒性试验可以使用本领域常规的几种技术和方法中的任何一种进行(参见，例如，Henkart et al.,"Cytotoxic T-Lymphocytes"in Fundamental Immunology,Paul(ed.)(2003LippincottWilliams&Wilkins,Philadelphia,PA),pages 1127-50，以及其中引用的文献)。
抗原特异性T细胞反应通常是通过比较观察到的T细胞反应来确定的，根据本文所述的任何T细胞功能参数(如增殖、细胞因子释放、CTL活性、改变的细胞表面标志物表型等)可以在以下T细胞之间的比较得到：在适当情况下暴露于同源抗原的T细胞(即，当由免疫相容的抗原提呈细胞提呈时，用于激发或激活T细胞的抗原)和来自同一来源群体的暴露于结构不同或不相关的对照抗原的T细胞。对同源抗原的反应大于对对照抗原的反应且具有统计学差异，标志着抗原的特异性。
可以从受试者那里获得生物样本，以确定对本文所述的WT1衍生的抗原肽的免疫反应的存在和水平。本文所用的"生物样本"可以是血液样本(可从中制备血清或血浆)、活检标本、体液(如肺灌洗液、腹水、粘膜清洗液、滑液)、骨髓、淋巴结、组织移植、器官培养，或来自受试者或生物源的任何其他组织或细胞制备。在接受任何免疫原性组合物之前，也可以从受试者那里获得生物样本，该生物样本可作为建立基线(即免疫前)数据的对照。
本文所述的药物组合物可在单位剂量或多剂量容器中呈现，例如密封安瓿或小瓶。这种容器可以冷冻，以保持配方的稳定性。在某些实施例中，单位剂量包括本文所述的重组宿主细胞，其剂量为约107个细胞/m2至约1011个细胞/m2。开发合适的剂量和治疗方案，在各种治疗方案中使用本文所述的特定组合物，包括例如肠外或静脉给药或配方。
如果受试者组合物为肠外给药，该组合物还可包括无菌水溶液或油质溶液或悬浮液。合适的无毒的肠外可接受的稀释剂或溶剂包括水、林格氏溶液、等渗盐溶液、1,3-丁二醇、乙醇、丙二醇或与水混合的聚乙二醇。水溶液或悬浮液可进一步包括一种或多种缓冲剂，如醋酸钠、柠檬酸钠、硼酸钠或酒石酸钠。当然，用于制备任何剂量单位制剂的任何材料都应该是药学上的纯品，并且在所使用的数量上基本上没有毒性。此外，活性化合物可被纳入缓释制剂和配方中。本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上不连续的单位；每个单位可包含预定数量的重组细胞或活性化合物，其计算为与适当的药物载体一起产生所需的治疗效果。
一般来说，适当的剂量和治疗方案提供的活性分子或细胞的数量足以提供治疗或预防的好处。这种反应可以通过在接受治疗的受试者中建立与未接受治疗的受试者相比的更好的临床结果(例如，更频繁的缓解，完全或部分缓解，或更长的无病生存期)来监测。对肿瘤蛋白的预存免疫反应的增加通常与临床结果的改善相关。这种免疫反应一般可使用标准的增殖、细胞毒性或细胞因子检测来评估，这些检测是本领域的常规检测，可使用治疗前后从受试者那里获得的样本进行。
根据本公开的方法可进一步包括在组合疗法中施用一种或多种额外的药剂来治疗疾病或紊乱。例如，在某些实施例中，组合疗法包括将本公开的组合物与(同时、同步或相继)免疫检查点抑制剂一起施用。在一些实施例中，组合疗法包括将本公开的组合物(例如，TCR、多核苷酸、载体或宿主细胞或其组合)与刺激性免疫检查点剂的激动剂一起施用。在进一步的实施例中，组合疗法包括将本公开的组合物与辅助疗法，例如化疗剂、放射疗法、手术、抗体或其任何组合一起施用。
如本文所用，术语"免疫抑制剂(immune suppression agent)"或"免疫抑制剂(immunosuppression agent)"是指一种或多种细胞、蛋白质、分子、化合物或复合物，提供抑制性信号以协助控制或抑制免疫反应。例如，免疫抑制剂包括那些部分或完全阻止免疫刺激；减少、防止或延迟免疫激活；或增加、激活或上调免疫抑制的分子。靶点(例如，使用免疫检查点抑制剂)的示例性免疫抑制剂包括PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、CTLA4、B7-H3、B7-H4、CD244/2B4、HVEM、BTLA、CD160、TIM3、GAL9、KIR、PVR1G(CD112R)、PVRL2、腺苷、A2aR、免疫抑制细胞因子(例如，IL-10、IL-4、IL-1RA、IL-35)、IDO、精氨酸酶、VISTA、TIGIT、LAIR1、CEACAM-1、CEACAM-3、CEACAM-5、Treg细胞或其任意组合。
进行HCT的技术和方案在本领域是已知的，可以包括移植任何合适的供体细胞，如来自脐带血、骨髓或外周血的细胞，造血干细胞，激活干细胞或来自羊水的细胞。因此，在某些实施例中，本公开的修饰的免疫细胞可以在修改的HCT治疗中与造血干细胞一起或在造血干细胞之后不久施用。在一些实施例中，HCT包括供体造血细胞，其包括编码HLA成分的基因的染色体敲除、编码TCR成分的基因的染色体敲除或两者。
在进一步的实施例中，受试者在接受该组合物或HCT之前曾接受过淋巴细胞清除化疗。在某些实施例中，淋巴细胞清除化疗包括由环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合组成的调节方案。
根据本公开的方法可进一步包括在组合疗法中施用一种或多种额外的药剂来治疗疾病或紊乱。例如，在某些实施例中，组合疗法包括将本公开的组合物与(同时、同步或相继)免疫检查点抑制剂一起施用。在一些实施例中，组合疗法包括将本公开的组合物与刺激性免疫检查点剂的激动剂一起施用。在进一步的实施例中，组合疗法包括将本公开的组合物与辅助疗法，如化疗剂、放射疗法、手术、抗体或其任何组合一起施用。
如本文所用，术语"免疫抑制剂(immune suppression agent)"或"免疫抑制剂(immunosuppression agent)"是指一种或多种细胞、蛋白质、分子、化合物或复合物，提供抑制性信号以协助控制或抑制免疫反应。例如，免疫抑制剂包括那些部分或完全阻止免疫刺激；减少、防止或延迟免疫激活；或增加、激活或上调免疫抑制的分子。靶点(例如，使用免疫检查点抑制剂)的示例性免疫抑制剂包括PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG3、CTLA4、B7-H3、B7-H4、CD244/2B4、HVEM、BTLA、CD160、TIM3、GAL9、KIR、PVR1G(CD112R)、PVRL2、腺苷、A2aR、免疫抑制细胞因子(例如。IL-10、IL-4、IL-1RA、IL-35)、IDO、精氨酸酶、VISTA、TIGIT、LAIR1、CEACAM-1、CEACAM-3、CEACAM-5、Treg细胞或其任意组合。
免疫抑制剂抑制剂(也称为免疫检查点抑制剂)可以是化合物、抗体、抗体片段或融合多肽(如Fc融合，如CTLA4-Fc或LAG3-Fc)、反义分子、核酶或RNAi分子或低分子量有机分子。在本文公开的任何一个实施例中，方法可包括本公开的组合物与以下任何一种免疫抑制成分的一种或多种抑制剂，单独或以任何组合。
在某些实施例中，本发明的组合物与PD-1抑制剂，例如PD-1特异性抗体或其结合片段，如pidilizumab、nivolumab、pembrolizumab、MEDI0680(以前的AMP-514)、AMP-224、BMS-936558或其任何组合一起使用。在进一步的实施例中，本公开的组合物与PD-L1特异性抗体或其结合片段，如BMS-936559、durvalumab(MEDI4736)、atezolizumab(RG7446)、avelumab(MSB0010718C)、MPDL3280A或其任何组合一起使用。还考虑到了cemiplimab；IBI-308；nivolumab+relatlimab；BCD-100；camrelizumab；JS-001；spartalizumab；tislelizumab；AGEN-2034；BGBA-333+tislelizumab；CBT-501；dostarlimab；durvalumab+MEDI-0680；JNJ-3283；pazopanib hydrochloride+pembrolizumab；pidilizumab；REGN-1979+cemiplimab；ABBV-181；ADUS-100+spartalizumab；AK-104；AK-105；AMP-224；BAT-1306；BI-754091；CC-90006；cemiplimab+REGN-3767；CS-1003；GLS-010；LZM-009；MEDI-5752；MGD-013；PF-06801591；Sym-021；tislelizumab+pamiparib；XmAb-20717；AK-112；ALPN-202；AM-0001；用于拮抗阿尔茨海默病的PD-1的抗体；BH-2922；BH-2941；BH-2950；BH-2954；拮抗CTLA-4和PD-1的生物制剂，用于实体瘤；靶向PD-1和LAG-3的肿瘤学双特异性单克隆抗体；BLSM-101；CB-201；CB-213；CBT-103；CBT-107；细胞免疫疗法+PD-1抑制剂；CX-188；HAB-21；HEISCOIII-003；IKT-202；JTX-4014；MCLA-134；MD-402；mDX-400；MGD-019；拮抗PDCD1的单克隆抗体，用于肿瘤学；拮抗PD-1的单克隆抗体，用于肿瘤学；抑制PD-1的肿瘤细胞病毒，用于肿瘤学；OT-2；PD-1拮抗剂+ropeginterferonα-2b；PEGMP-7；PRS-332；RXI-762；STIA-1110；TSR-075；靶向HER2和PD-1的疫苗，用于肿瘤学；靶向PD-1的疫苗，用于肿瘤学和自身免疫性疾病；XmAb-23104；抑制PD-1的反义寡核苷酸，用于肿瘤学；AT-16201；抑制PD-1的双特异性单克隆抗体，用于肿瘤学；IMM-1802；拮抗PD-1和CTLA-4的单克隆抗体，用于实体瘤和血液病肿瘤；Nivolumab生物仿制药；激动CD278和CD28和拮抗PD-1的重组蛋白，用于肿瘤学；激动PD-1的重组蛋白，用于自身免疫性疾病和炎症性疾病；SNA-01；SSI-361；YBL-006；AK-103；JY-034；AUR-012；BGB-108；抑制PD-1、Gal-9和TIM-3，用于实体瘤；ENUM-244C8；ENUM-388D4；MEDI-0680；拮抗PD-1的单克隆抗体，用于转移性黑色素瘤和转移性肺癌；抑制PD-1的单克隆抗体，用于肿瘤学；靶向CTLA-4和PD-1的单克隆抗体，用于肿瘤学；拮抗PD-1的单克隆抗体，用于NSCLC；抑制PD-1和TIM-3的单克隆抗体，用于肿瘤学；抑制PD-1的单克隆抗体，用于肿瘤学；抑制PD-1和VEGF-A的重组蛋白，用于血液恶性肿瘤和实体瘤；拮抗PD-1的小分子，用于肿瘤学；Sym-016；inebilizumab+MEDI-0680；靶向PDL-1和IDO的疫苗，用于转移性黑色素瘤；抗PD-1单克隆抗体和细胞免疫疗法，用于胶质母细胞瘤；拮抗PD-1的抗体，用于肿瘤学；抑制PD-1/PD-L1的单克隆抗体，用于血液恶性肿瘤和细菌感染；抑制PD-1的单克隆抗体，用于HIV；或抑制PD-1的小分子，用于实体瘤。
在某些实施例中，本公开的组合物与LAG3抑制剂，如LAG525、IMP321、IMP701、9H12、BMS-986016或其任何组合一起使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与CTLA4的抑制剂联合使用。在特定的实施例中，本公开的组合物与CTLA4特异性抗体或其结合片段，例如ipilimumab、tremelimumab、CTLA4-Ig融合蛋白(如abatacept、belatacept)或其任意组合一起使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与B7-H3特异性抗体或其结合片段，例如enoblituzumab(MGA271)、376.96或两者结合使用。B7-H4抗体结合片段可以是scFv或其融合蛋白，例如，Dangaj et al.,Cancer Res.73:4820,2013，以及美国专利号9,574,000和PCT专利公开号WO/201640724A1和WO 2013/025779A1中描述的那些。
在某些实施例中，本公开的组合物与CD244的抑制剂联合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与BLTA、HVEM、CD160或其任何组合的抑制剂结合使用。抗CD-160抗体描述于例如PCT公开号WO 2010/084158。
在某些实施例中，本公开的细胞的组合物与TIM3的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与Gal9的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与腺苷信号的抑制剂，例如诱饵腺苷受体结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与A2aR的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与KIR的抑制剂，例如lirilumab(BMS-986015)结合使用。在某些实施例中，本公开的组合物与抑制性细胞因子(通常是TGFβ以外的细胞因子)或Treg发育或活性的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与IDO抑制剂联合使用，如左旋-1-甲基色氨酸、epacadostat(INCB024360；Liu et al.,Blood 115:3520-30,2010)、ebselen(Terentis etal.,Biochem.49:591-600,2010)、indoximod、NLG919(Mautino et al.,AmericanAssociation for Cancer Research 104th Annual Meeting 2013；Apr 6-10,2013)、1-甲基色氨酸(1-MT)-tira-pazamine或其任意组合。
在某些实施例中，本公开的组合物与精氨酸酶抑制剂结合使用，如N(ω)-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、N-ω-羟基-正-1-精氨酸(nor-NOHA)、L-NOHA、2(S)-氨基-6-硼己酸(ABH)、S-(2-硼乙基)-L-半胱氨酸(BEC)或其任意组合。
在某些实施例中，本公开的组合物与VISTA的抑制剂，例如CA-170(Curis,Lexington,Mass.)结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与TIGIT的抑制剂(例如COM902(Compugen,Toronto,Ontario Canada))、CD155的抑制剂(例如COM701(Compugen))、或两者结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与PVRIG、PVRL2或两者的抑制剂结合使用。抗PVRIG抗体描述于例如PCT公开号WO 2016/134333。抗PVRL2抗体在例如PCT公开号WO 2017/021526中描述。
在某些实施例中，本公开的组合物与LAIR1抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与CEACAM-1、CEACAM-3、CEACAM-5或其任何组合的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与增加刺激性免疫检查点分子的活性(即，是激动剂)的药剂结合使用。例如，本公开的组合物可与CD137(4-1BB)激动剂(例如，urelumab)、CD134(OX-40)激动剂(例如，MEDI6469、MEDI6383或MEDI0562)、来那度胺、泊马度胺、CD27激动剂(例如，CDX-1127)、CD28激动剂(例如，TGN1412、CD80或CD86)、CD40激动剂(例如，CP-870,893、rhuCD40L或SGN-40)、CD122激动剂(例如，IL-2)、GITR激动剂(例如，PCT专利出版号WO 2016/054638中描述的人源化单克隆抗体)、ICOS(CD278)的激动剂(例如，GSK3359609、mAb 88.2、JTX-2011、Icos 145-1、Icos 314-8或其任意组合)联合使用。在本文公开的任何一个实施例中，方法可包括将本公开的组合物与刺激性免疫检查点分子的一种或多种激动剂，包括上述任何一种，单独或以任何组合方式施用。
在某些实施例中，组合疗法包括本公开的组合物和二级疗法，包括以下一种或多种：对非炎症实体瘤表达的癌症抗原具有特异性的抗体或其抗原结合片段、放射治疗、手术、化疗剂、细胞因子、RNAi或其任何组合。
在某些实施例中，组合治疗方法包括施用本公开的组合物并进一步施用放射治疗或手术。放射治疗在本领域是众所周知的，包括X射线疗法，例如γ射线和放射性药物疗法。适合治疗受试者特定癌症的手术和外科技术是本领域普通技术人员所熟知的。
在某些实施例中，联合治疗方法包括施用本公开的组合物和进一步施用化疗剂。化疗剂包括但不限于染色质功能抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、微管抑制药物、DNA损伤剂、抗代谢剂(如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和糖修饰类似物)、DNA合成抑制剂、DNA交互剂(如插层剂)和DNA修复抑制剂。说明性的化学治疗剂包括但不限于以下几类：抗代谢物/抗癌剂，如嘧啶类似物(5-氟尿嘧啶、氟尿苷、卡培他滨、吉西他滨和阿糖胞苷)和嘌呤类似物、叶酸拮抗剂和相关抑制剂(巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和2-氯去氧腺苷(克拉霉素))；抗增殖/抗凋亡剂，包括天然产物，例如长春花生物碱(长春花碱、长春新碱和长春瑞滨)，微管破坏剂，例如紫杉烷(紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇)、长春新碱(vincristin)、长春花碱(vinblastin)、诺考达唑、埃博霉素和诺维本、表鬼臼毒素(依托泊苷、替尼泊苷)、DNA损伤剂(放线菌素、安吖啶、蒽环类、博来霉素、白消安(busulfan)、喜树碱、卡铂、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环磷酰胺(Cytoxan)、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星(epirubicin)、六甲基三聚氰胺奥沙利铂、异磷酰胺、美法仑、氮芥、丝裂霉素、米托蒽醌、亚硝基脲、普卡霉素、甲苄肼、紫杉醇(taxol)、泰索帝(taxotere)、替莫唑胺、替尼泊苷、三亚乙基硫磷酰胺和依托泊苷(VP 16))；抗生素，如放线菌素D(dactinomycin)(放线菌素D(actinomycin D))、柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、伊达比星(idarubicin)、蒽环类药物、米托蒽醌、博莱霉素、普卡霉素(光神霉素)和丝裂霉素；酶(L-天门冬酰胺酶，其系统地代谢L-天门冬酰胺并剥夺没有能力合成自身天门冬酰胺的细胞)；抗血小板制剂；抗增殖/抗有丝分裂烷化剂，如氮芥(二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、环磷酰胺及类似物、美法仑、苯丁酸氮芥)、乙烯亚胺和甲基三聚氰胺(六甲基三聚氰胺和噻替派)、烷基磺酸盐-白消安、亚硝脲类(卡莫司汀(BCNU)及类似物、链脲佐菌素)、三嗪-达卡巴嗪(DTIC)；抗增殖/抗有丝分裂的抗代谢药物，如叶酸类似物(甲氨蝶呤)；铂类配合物(顺铂、卡铂)、甲苄肼、羟基脲、米托坦、氨基苯乙哌啶酮；激素、激素类似物(雌激素、他莫昔芬(tamoxifen)、戈舍瑞林(goserelin)、比卡鲁胺(bicalutamide)、尼鲁米特(nilutamide))和芳香酶抑制剂(来曲唑(letrozole)、阿那曲唑(anastrozole))；抗凝剂(肝素、合成肝素盐和其他凝血酶抑制剂)；纤维蛋白溶解剂(如组织纤维蛋白溶酶原激活剂、链激酶和尿激酶)、阿司匹林、双嘧达莫、噻氯匹定、氯吡格雷、阿昔单抗(abciximab)；抗迁移剂；抗分泌剂(布雷菲德菌素(breveldin))；免疫抑制剂(环孢素、他克莫司(FK-506)、西罗莫司(雷帕霉素)、硫唑嘌呤、霉酚酸酯)；抗血管生成化合物(TNP470、染料木黄酮)和生长因子抑制剂(血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂、成纤维细胞生长因子(FGF)抑制剂)；血管紧张素受体阻断剂；一氧化氮供体；反义寡核苷酸；抗体(曲妥珠单抗、利妥昔单抗)；嵌合抗原受体；细胞周期抑制剂和分化诱导剂(维甲酸)；mTOR抑制剂、拓扑异构酶抑制剂(多柔比星(阿霉素)、安吖啶、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、替尼泊苷、表柔比星、依托泊甙、伊达比星、伊立替康(CPT-11)和米托蒽醌、托泊替康(topotecan)、伊立替康)、皮质类固醇(可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松(prednisone)和泼尼松龙)；生长因子信号转导激酶抑制剂；线粒体功能障碍诱导剂、毒素、例如霍乱毒素、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、百日咳博德特氏菌腺苷酸环化酶毒素或白喉毒素，以及半胱天冬酶激活剂；和染色质破坏剂。
细胞因子可被用来操纵宿主针对抗癌活性的免疫反应。参见，例如，Floros&Tarhini,Semin.Oncol.42(4):539-548,2015。对促进免疫抗癌或抗肿瘤反应有用的细胞因子包括，例如IFN-α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-24和GM-CSF，单独或与本公开的组合物的任何组合。
本文还提供了调节过继性免疫疗法的方法，其中这些方法包括向先前接受了本公开的包含编码安全开关蛋白的异源多核苷酸的修饰的宿主细胞的受试者施用安全开关蛋白的同源化合物，其量有效地在该受试者体内消减先前施用的修饰的宿主细胞。
在某些实施例中，安全开关蛋白包括tEGFR，而同源化合物是西妥昔单抗，或安全开关蛋白包括iCasp9，而同源化合物是AP1903(例如二聚体AP1903)，或安全开关蛋白包括RQR多肽，而同源化合物是利妥昔单抗，或安全开关蛋白包括myc结合域，而同源化合物是特异性针对myc结合域的抗体。
在更进一步的方面，提供了用于制造本公开的组合物或单位剂量的方法。在某些实施例中，这些方法包括将(i)等分量的用本公开的载体转导的宿主细胞的与(ii)药学上可接受的载体相结合。在某些实施例中，本公开的载体用于转染/转导宿主细胞(例如T细胞)，以用于过继性转移疗法(例如，靶向癌症抗原)。
在一些实施例中，该方法进一步包括，在分装之前，培养转导的宿主细胞，并选择转导的细胞作为结合(即表达)该载体。在进一步的实施例中，该方法包括在培养和选择之后以及在分装之前，扩增转导的宿主细胞。在本方法的任何一个实施例中，制造的组合物或单位剂量可被冷冻以备日后使用。任何适当的宿主细胞都可用于根据本方法制造组合物或单位剂量，例如包括造血干细胞、T细胞、原代T细胞、T细胞系、NK细胞或NK-T细胞。在具体的实施例中，该方法包括宿主细胞，其是CD8+T细胞、CD4+T细胞或两者。
在某些实施例中，本公开的组合物与LAG3抑制剂，如LAG525、IMP321、IMP701、9H12、BMS-986016或其任何组合一起使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与CTLA4的抑制剂联合使用。在特定的实施例中，本公开的组合物与CTLA4特异性抗体或其结合片段，例如ipilimumab、tremelimumab、CTLA4-Ig融合蛋白(如abatacept、belatacept)或其任意组合一起使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与B7-H3特异性抗体或其结合片段，例如enoblituzumab(MGA271)、376.96或两者结合使用。B7-H4抗体结合片段可以是scFv或其融合蛋白，例如，Dangaj et al.,Cancer Res.73:4820,2013，以及美国专利号9,574,000和PCT专利公开号WO/201640724A1和WO 2013/025779A1中描述的那些。
在某些实施例中，本公开的组合物与CD244的抑制剂联合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与BLTA、HVEM、CD160或其任何组合的抑制剂结合使用。抗CD-160抗体描述于例如PCT公开号WO 2010/084158。
在某些实施例中，本公开的细胞的组合物与TIM3的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与Gal9的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与腺苷信号的抑制剂，例如诱饵腺苷受体结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与A2aR的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与KIR的抑制剂，例如lirilumab(BMS-986015)结合使用。在某些实施例中，本公开的组合物与抑制性细胞因子(通常是TGFβ以外的细胞因子)或Treg发育或活性的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与IDO抑制剂联合使用，如左旋-1-甲基色氨酸、epacadostat(INCB024360；Liu et al.,Blood 115:3520-30,2010)、ebselen(Terentis etal.,Biochem.49:591-600,2010)、indoximod、NLG919(Mautino et al.,AmericanAssociation for Cancer Research 104th Annual Meeting 2013；Apr 6-10,2013)、1-甲基色氨酸(1-MT)-tira-pazamine或其任意组合。
在某些实施例中，本公开的组合物与精氨酸酶抑制剂结合使用，如N(ω)-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、N-ω-羟基-正-1-精氨酸(nor-NOHA)、L-NOHA、2(S)-氨基-6-硼己酸(ABH)、S-(2-硼乙基)-L-半胱氨酸(BEC)或其任意组合。
在某些实施例中，本公开的组合物与VISTA的抑制剂，如CA-170(Curis,Lexington,Mass.)结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与TIGIT的抑制剂(例如COM902(Compugen,Toronto,Ontario Canada))、CD155的抑制剂(例如COM701(Compugen))或两者结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与PVRIG、PVRL2或两者的抑制剂结合使用。抗PVRIG抗体描述于例如PCT公开号WO 2016/134333。抗PVRL2抗体在例如PCT公开号WO 2017/021526中描述。
在某些实施例中，本公开的组合物与LAIR1抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与CEACAM-1、CEACAM-3、CEACAM-5或其任何组合的抑制剂结合使用。
在某些实施例中，本公开的组合物与增加刺激性免疫检查点分子的活性(即，是激动剂)的药剂结合使用。例如，本公开的组合物可与CD137(4-1BB)激动剂(例如，urelumab)、CD134(OX-40)激动剂(例如，MEDI6469、MEDI6383或MEDI0562)、来那度胺、泊马度胺、CD27激动剂(例如，CDX-1127)、CD28激动剂(例如，TGN1412、CD80或CD86)、CD40激动剂(例如，CP-870,893、rhuCD40L或SGN-40)、CD122激动剂(例如，IL-2)、GITR激动剂(例如，PCT专利出版号WO 2016/054638中描述的人源化单克隆抗体)、ICOS(CD278)的激动剂(例如，GSK3359609、mAb 88.2、JTX-2011、Icos 145-1、Icos 314-8或其任意组合)联合使用。在本文公开的任何一个实施例中，方法可包括将本公开的组合物与刺激性免疫检查点分子的一种或多种激动剂，包括上述任何一种，单独或以任何组合方式施用。
在某些实施例中，组合疗法包括本公开的组合物和二级疗法，包括以下一种或多种：对非炎症实体瘤表达的癌症抗原具有特异性的抗体或其抗原结合片段、放射治疗、手术、化疗剂、细胞因子、RNAi或其任何组合。
在某些实施例中，组合治疗方法包括施用本公开的组合物并进一步施用放射治疗或手术。放射治疗在本领域是众所周知的，包括X射线疗法，例如γ射线和放射性药物疗法。适合治疗受试者特定癌症的手术和外科技术是本领域普通技术人员所熟知的。
在某些实施例中，联合治疗方法包括施用本公开的组合物和进一步施用化疗剂。化疗剂包括但不限于染色质功能抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、微管抑制药物、DNA损伤剂、抗代谢剂(如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和糖修饰类似物)、DNA合成抑制剂、DNA交互剂(如插层剂)和DNA修复抑制剂。说明性的化学治疗剂包括但不限于以下几类：抗代谢物/抗癌剂，如嘧啶类似物(5-氟尿嘧啶、氟尿苷、卡培他滨、吉西他滨和阿糖胞苷)和嘌呤类似物、叶酸拮抗剂和相关抑制剂(巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁和2-氯去氧腺苷(克拉霉素))；抗增殖/抗凋亡剂，包括天然产物，例如长春花生物碱(长春花碱、长春新碱和长春瑞滨)，微管破坏剂，例如紫杉烷(紫杉醇(paclitaxel)、多烯紫杉醇)、长春新碱(vincristin)、长春花碱(vinblastin)、诺考达唑、埃博霉素和诺维本、表鬼臼毒素(依托泊苷、替尼泊苷)、DNA损伤剂(放线菌素、安吖啶、蒽环类、博来霉素、白消安(busulfan)、喜树碱、卡铂、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环磷酰胺(Cytoxan)、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、表柔比星(epirubicin)、六甲基三聚氰胺奥沙利铂、异磷酰胺、美法仑、氮芥、丝裂霉素、米托蒽醌、亚硝基脲、普卡霉素、甲苄肼、紫杉醇(taxol)、泰索帝、替莫唑胺、替尼泊苷、三亚乙基硫磷酰胺和依托泊苷(VP 16))；抗生素，如放线菌素D(dactinomycin)(放线菌素D(actinomycin D))、柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、伊达比星、蒽环类药物、米托蒽醌、博莱霉素、普卡霉素(光神霉素)和丝裂霉素；酶(L-天门冬酰胺酶，其系统地代谢L-天门冬酰胺并剥夺没有能力合成自身天门冬酰胺的细胞)；抗血小板制剂；抗增殖/抗有丝分裂烷化剂，如氮芥(二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、环磷酰胺及类似物、美法仑、苯丁酸氮芥)、乙烯亚胺和甲基三聚氰胺(六甲基三聚氰胺和噻替派)、烷基磺酸盐-白消安、亚硝脲类(卡莫司汀(BCNU)及类似物、链脲佐菌素)、三嗪-达卡巴嗪(DTIC)；抗增殖/抗有丝分裂的抗代谢药物，如叶酸类似物(甲氨蝶呤)；铂类配合物(顺铂、卡铂)、甲苄肼、羟基脲、米托坦、氨基苯乙哌啶酮；激素、激素类似物(雌激素、他莫昔芬、戈舍瑞林、比卡鲁胺、尼鲁米特)和芳香酶抑制剂(来曲唑、阿那曲唑)；抗凝剂(肝素、合成肝素盐和其他凝血酶抑制剂)；纤维蛋白溶解剂(如组织纤维蛋白溶酶原激活剂、链激酶和尿激酶)、阿司匹林、双嘧达莫、噻氯匹定、氯吡格雷、阿昔单抗；抗迁移剂；抗分泌剂(布雷菲德菌素(breveldin))；免疫抑制剂(环孢素、他克莫司(FK-506)、西罗莫司(雷帕霉素)、硫唑嘌呤、霉酚酸酯)；抗血管生成化合物(TNP470、染料木黄酮)和生长因子抑制剂(血管内皮生长因子(VEGF)抑制剂、成纤维细胞生长因子(FGF)抑制剂)；血管紧张素受体阻断剂；一氧化氮供体；反义寡核苷酸；抗体(曲妥珠单抗、利妥昔单抗)；嵌合抗原受体；细胞周期抑制剂和分化诱导剂(维甲酸)；mTOR抑制剂、拓扑异构酶抑制剂(多柔比星(阿霉素)、安吖啶、喜树碱、柔红霉素、放线菌素D、替尼泊苷、表柔比星、依托泊甙、伊达比星、伊立替康(CPT-11)和米托蒽醌、托泊替康、伊立替康)、皮质类固醇(可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松和泼尼松龙)；生长因子信号转导激酶抑制剂；线粒体功能障碍诱导剂、毒素、例如霍乱毒素、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、百日咳博德特氏菌腺苷酸环化酶毒素或白喉毒素，以及半胱天冬酶激活剂；和染色质破坏剂。
细胞因子可被用来操纵宿主针对抗癌活性的免疫反应。参见，例如，Floros&Tarhini,Semin.Oncol.42(4):539-548,2015。对促进免疫抗癌或抗肿瘤反应有用的细胞因子包括，例如IFN-α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-24和GM-CSF，单独或与本公开的组合物的任何组合。
本文还提供了调节过继性免疫疗法的方法，其中这些方法包括向先前接受了本公开的包含编码安全开关蛋白的异源多核苷酸的修饰的宿主细胞的受试者施用安全开关蛋白的同源化合物，其量有效地在该受试者体内消减先前施用的修饰的宿主细胞。
在某些实施例中，安全开关蛋白包括tEGFR，而同源化合物是西妥昔单抗，或安全开关蛋白包括iCasp9，而同源化合物是AP1903(例如二聚体AP1903)，或安全开关蛋白包括RQR多肽，而同源化合物是利妥昔单抗，或安全开关蛋白包括myc结合域，而同源化合物是特异性针对myc结合域的抗体。
在更进一步的方面，提供了用于制造本公开的组合物或单位剂量的方法。在某些实施例中，这些方法包括将(i)等分量的用本公开的载体转导的宿主细胞与(ii)药学上可接受的载体相结合。在某些实施例中，本公开的载体用于转染/转导宿主细胞(例如T细胞)，以用于过继性转移疗法(例如，靶向癌症抗原)。
在一些实施例中，该方法进一步包括，在分装之前，培养转导的宿主细胞，并选择转导的细胞作为结合(即表达)该载体。在进一步的实施例中，该方法包括在培养和选择之后以及在分装之前，扩增转导的宿主细胞。在本方法的任何一个实施例中，制造的组合物或单位剂量可被冷冻以备日后使用。任何适当的宿主细胞都可用于根据本方法制造组合物或单位剂量，例如包括造血干细胞、T细胞、原代T细胞、T细胞系、NK细胞或NK-T细胞。在具体的实施例中，该方法包括宿主细胞，其是CD8+T细胞、CD4+T细胞或两者。
示例
示例1
方法
细胞系
T2是一个TAP缺陷的T细胞白血病/B-LCL杂合细胞系，只表达HLA A*02:0111，293T/17是一个高度可转染的细胞系，购自ATCC。Jurkat76细胞是亲代Jurkat细胞系的TCRα/TCRβ缺陷衍生物，并不自然表达CD812。Jurkat76细胞先前被转导以表达CD8αβJurkat-CD8)。细胞系维持在RPMI 1640培养基中，其中加入了HEPES(Invitrogen,GIBCO)，辅以10％热灭活的FBS(Hyclone,GE Healthcare Life Sciences)，100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素。
人类T细胞培养：
白细胞去除样本是在西雅图癌症护理联盟根据《赫尔辛基宣言》获得书面知情同意后，经机构审查委员会批准，按照868.01方案从健康捐赠者那里收集的。从HLA类型的供体中分离出PBMC，按照以前的描述13,14，每个供体产生10个HLA-A*02:01限制性T细胞系，其对多肽WT137-45、VLDFAPPGA有特异性(共10个供体)。简而言之，使用EasySepTM人类CD8+T细胞分离试剂盒(StemCell Technologies)纯化CD8+T细胞，通过粘附在塑料上，用1000U/mlIL-4和800U/ml GMCSF培养2天，在收获前的最后一天加入成熟细胞因子混合物，从自体PBMC产生DC。将DC与1g/ml的肽加载90分钟，然后清洗以去除多余的肽，并在4000Rad下进行照射。约5×106个CD8+T细胞与肽脉冲DC加30ng/ml IL-21以2.5:1的比例共同培养。T细胞在RPMI1640培养基中维持，该培养基含有HEPES(Invitrogen，GIBCO)，补充有5％热灭活的集合人血清(Bloodworks Northwest)，100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素和55μM2-β-巯基乙醇。培养物每2-3天换一次培养基，更换一般培养基并加入12.5U/ml IL-2、2250U/ml IL-7和IL-15。每隔10天将T细胞与经过辐照、肽脉冲的自体PBMC以1:2的比例进行培养，从而重新刺激。
基于流式细胞仪的细胞分选
在抗原特异性扩增结束时，将所有供体的T细胞系在冰上合并。将汇集的样本分开，在3种条件下用肽/HLA-A2四聚体进行染色：(1)根据经验确定的野生型四聚体浓度，以使阳性和阴性群体得到最大的分离，如"四聚体的结合和亲和力测量部分所述；(2)最佳四聚体剂量的100倍稀释；以及3)通过在α3结构域的D227K和T228A位置突变HLA-A2分子而制成的单独的修饰的四聚体)，其与CD8相互作用15。这种四聚体已被证明能选择性地结合高亲和力的CD8非依赖性TCR16,17。对于每个四聚体染色的样本，具有最高水平的四聚体结合的细胞(最高约2％的标记细胞)被流式细胞仪分选。用Adaptive Biotechnologies公司的免疫测序法对分选后的群体进行分析，以量化每个克隆型的相对丰度。另外的包含整个四聚体阳性群体的样本也是从最佳四聚体染色样本中分选出来的，TCRαβ配对信息由AdaptiveBiotechnologies pairSeq Assay18确定。
数据分析
富集计算
每个克隆型的富集得分计算如下：(分选的四聚体+群体中的频率)/(未分选的集合样本中的频率)。在集合样本中没有检测到的克隆型在集合样本中被分配了对应于1个细胞的频率，用于富集度的计算。
TCR测序和α/β配对：
TCR项目分析通过Adaptive Biotechnologies公司的免疫测序法进行。使用10xgenomics的Chromium Single Cell Immune Profiling进行单细胞V(D)J分析(TCRα/β配对)。
TCR转导
在BioXpTM 3200(SGI-DNA)上合成了TCRβ-p2a-TCR方向的密码子优化的TCR构建体，并通过Gibson Assembly克隆到pRRLSIN.cPPT.MSCV.WPRE慢病毒表达质粒(由NCI的Richard Morgan博士赠送)。然后用第三代慢病毒包装系统将该表达载体包装在293T细胞中。48小时后收获慢病毒上清液，并过滤以去除细胞碎片。将大约5×105个Jurkat76细胞与2毫升慢病毒上清液加5ug/ml聚凝胺结合。细胞以1000g的在30℃下离心90分钟，以促进转导。对于原代CD8+T细胞的TCR转导，使用EasySepTM人类CD8+T细胞分离试剂盒(StemCellTechnologies)富集HLA-A2+PBMC用于CD8+T细胞，并用DynabeadsTM人类T-Expander CD3/CD28(Gibco)激活4小时。将大约2×106个CD8+T细胞与2毫升慢病毒上清液加5μg/ml鱼精蛋白和50U/ml IL-2相结合。使用肽/HLA-A*02:01四聚体通过流式细胞荧光分选转基因TCR+细胞，以获得纯正的抗原特异性细胞群用于下游检测。
TCR结合数据
正确TCR配对的评估
用每个TCR构建体转导Jurkat76细胞，并分析相对于CD3表面表达的四聚体结合，这反映了这些缺乏内源性TCR的细胞的转基因TCR表面表达总量。
四聚体的结合和亲和力测量
最佳的四聚体剂量是通过对阳性T细胞群进行四聚体滴定并选择浓度来确定的，该浓度能最好地分离阳性和阴性细胞群而不增加阴性细胞群的背景染色。
TCR功能数据
IFN-γ的产生
原代CD8+T细胞用每种TCR表达构建体进行慢病毒转导，并进行分选以产生均匀的四聚体阳性细胞群，然后以1:1的比例与用递减剂量的肽(1-10-5M)脉冲的T2靶细胞混合。在有说明的地方，自体PBMC也被用作APC。在有高尔基抑制剂(BD GolgiPlug和GolgiStop)的情况下培养4小时后，用抗CD8对细胞进行表面染色，然后固定(BD Cytofix/Cytoperm)，在BD Perm/Wash缓冲液中用抗IFN-γ进行细胞内标记。用流式细胞仪分析细胞，以确定每个样品的IFN-γ+细胞的百分比。这些数据通过Graphpad Prism的非线性回归拟合为剂量反应曲线(四个参数-变量斜率，曲线的底部和顶部分别约束为0和100)。
图1(A)和1(B)显示了如何通过基于高通量测序的策略鉴定WT137-45肽特异性TCR。与总的四聚体阳性人群相比，在高四聚体结合分选中富集的TCR克隆型被确定为可能对肽/HLA-A2配体具有高亲和力或高功能亲合力。(A)用于识别与高WT137-45肽/MHC四聚体结合相关的TCR克隆型的基于初始测序的策略示意图。(B)示出了分选群体与总群体的百分比的富集关系，并突出了选定的TCR。由黑色圆圈表示的所有TCR均已合成并评估其抗原特异性(共27个)。
图2显示了四聚体结合研究的结果，评估了所选TCR的特异性和相对四聚体结合亲和力。在缺乏内源性TCRα/β链的Jurkat细胞内表达TCR结构。示出了四聚体染色与每个TCR的CD3表达的关系(CD3表达与转基因TCR表面表达直接相关)。
示例2
高功能亲合力TCR的识别
由于一些高亲和力的TCR已被证明能与独立于CD8的四聚体结合，因此进行了第二个实验，以识别当使用独立于CD8(CD8i)的四聚体时，在高四聚体结合分选群体中特异性富集的其他TCR。图3A-3C显示了如何通过改良的基于高通量测序的策略，使用CD8独立(CD8i)四聚体来鉴定额外的WT137-45肽特异性TCR。图3A是基于改良的测序策略示意图，用于鉴定与高度独立于CD8的WT137肽/MHC四聚体结合有关的TCR克隆型。图3B和3C显示了原始分选群体相对于总群体的的富集度与使用CD8i四聚体时的类似分析的对比。根据表面CD3水平和CD8i四聚体结合情况，另外选择了14个TCR。图3B和3C中所有命名的TCR克隆型都被合成并评估了抗原特异性。图3C中阴影(对角线图案)圆圈表示的所有TCR代表使用CD8i四聚体鉴定的额外TCR。
示例3
四聚体染色与CD3表达的关系
图4显示了额外的CD8i四聚体选择的WT137-45肽特异性TCR的CD8i四聚体结合情况。TCR构建体在缺乏内源性TCR链(以及缺乏CD8表达)的Jurkat细胞中被表达。图4显示了每个TCR的四聚体染色与CD3表达的关系(CD3表达与转基因TCR表面表达直接相关)。选择与四聚体结合最强、导致四聚体染色相对于抗CD3染色水平高的TCR进行进一步分析。
示例4
IFNγ检测以测量功能亲合力(EC50)
TCR在极限浓度的抗原下发出T细胞激活信号的能力是通过肽EC50来衡量的，EC50是指靶细胞需要被脉冲的肽的量，以引起50％的本申请TCR转导的T细胞的反应(例如IFNγ的产生)。这个值与表达特定TCR的T细胞杀死表达抗原的靶细胞的能力直接相关。为了确定所选TCR的肽EC50，将每个TCR转导到从供体PMBC分离出来的CD8+T细胞中(图5A)。在一周后，将细胞分选为四聚体+CD8+细胞并扩增。将扩增的抗原特异性细胞与肽脉冲的T2靶细胞培养4-6小时，用流式细胞仪测定IFNγ的产生(图5A)。通过非线性回归将产生IFNγ的细胞百分比拟合为剂量反应曲线，以计算每个TCR的肽EC50(图5B)。
示例5
表达WT137-45肽特异性TCR的原代CD8+T细胞体外杀伤HLA-A2+WT1+MDA-MB-468细胞
为了直接评估TCR转导的CD8+T细胞介导的对HLA-A2上自然表达和呈现WT1p37抗原的肿瘤细胞的裂解，用每种选定的TCR中的一种转导供体来源的CD8+T细胞，并对高四聚体结合进行分选纯化。然后将TCR转导的T细胞与乳腺癌细胞系MDA-MB-468按8:1的比例混合(一式三份)，后者已用
Figure BDA0003335439510000671
Rapid Red染料染色。在72小时内每个TCR转导T细胞群体指定的时间点计算红色物体总面积(与活的靶细胞的总数量相关)。最有力的肿瘤反应性T细胞在体内转移到病人后，将长期保持对肿瘤抗原的反应性。因此，为了评估TCR转导的T细胞对持久性抗原的持续反应性，在48小时内加入额外的MDA-MB-468细胞。参见图6。
示例6
表达WT137-45肽特异性TCR的原代CD4+和CD8+T细胞对HLA-A2+WT1+PANC-1细胞的体外杀伤
CD4+和CD8+T细胞都能在体内发挥清除肿瘤的作用。因此，也能在CD4+T细胞中发出抗原特异性反应信号的MHC I类限制的TCR比只能激活CD8+T细胞的TCR要好。MHC I类限制的TCR在CD4+T细胞中发挥作用的能力似乎部分取决于TCR对肽类MHC的亲和力。在许多情况下，用编码CD8α和CD8β的基因转导CD4+T细胞有助于有效地引起抗原特异性反应。因此，为了评估CD4(用CD8α/CD8β转导)与表达TCR10.1的CD8 T细胞靶向HLA-A2+WT1+肿瘤细胞的能力，CD4+和CD8+T细胞都被转导为表达WT137-45 TCR10.1。将CD4+T细胞进一步转导以表达CD8α和CD8β基因。8天后，对转导的细胞进行分选，以纯化CD8+四聚体+和CD4+/CD8+四聚体+T细胞。将CD4+、CD8+或这两个群体(CD4和CD8)的混合体的抗原特异性细胞与胰腺癌细胞系PANC-1按8:1(一式三份)混合，后者先前已被转导以表达
Figure BDA0003335439510000681
红色染料。在每个TCR转导T细胞群体指定的时间点计算红色物体总面积(与活的靶细胞的总数量有关)。为了评估TCR转导T细胞对长期抗原的持续反应性，在48小时添加额外的PANC-1细胞。图7显示，表达WT137-45 TCR10.1的CD4+和CD8+T细胞在体外重复挑战后都能消除WT1+A2+胰腺癌细胞系PANC-1。
WT1 p126表位并不总是被表达WT1和HLA-A2的细胞有效处理/呈现(Jaigirdar etal.,J.Immunother.39:105,2017)。特别是几个表达WT1和HLA-A2的实体瘤衍生细胞系，无论是否用IFNγ预培养来上调免疫蛋白酶体的表达，都不能有效地被WT1-p126特异性TCR靶向。在某些方面，本公开内容部分涉及到这样的发现：与WT1-p126表位相比，WT1-p37表位被各种肿瘤类型更广泛地处理和呈现。图8A-8D显示了WT1-p126肽特异性TCR与WT1 p37肽特异性TCR相比，对各种WT1+A2+肿瘤细胞系的裂解。这些数据突出了这样一个事实，即WT1 p-37肽特异性TCR似乎普遍更可靠地能够靶向广泛的WT1+A2+肿瘤。
本文所述的各种实施例可以结合起来，以提供进一步的实施例。本说明书中提到的和/或应用数据表中列出的所有专利、专利申请出版物、专利申请和非专利出版物，包括但不限于2019年3月11日提交的美国专利申请第62/816,746号，通过引用全部并入本文。一般来说，以下权利要求中使用的术语不应解释为仅限于此处披露的具体实施例，而应解释为包括所有可能的实施例，以及此类权利要求有权获得的全部等价物范围。
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序列表
<110> 弗雷德哈钦森癌症研究中心
T·M·施米特
A·G·沙皮伊
P·D·格林伯格
<120> 高亲合力WT1 T细胞受体及其用途
<130> 360056.466WO
<140> PCT
<141> 2020-03-10
<150> US 62/816,746
<151> 2019-03-11
<160> 263
<170> Windows 版本 4.0的FastSEQ
<210> 1
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 1
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1 5 10
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 2
Cys Ser Ala Thr Pro Glu Ala Ser Ser Pro Tyr Glu Gln Tyr Phe
1 5 10 15
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 3
Cys Ala Thr Ser Asn Leu Gln Gly Arg Gln Pro Gln His Phe
1 5 10
<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 4
Cys Ala Ser Ser Leu Arg Leu Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 5
Cys Ala Ser Ser Leu Gly Gln Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe
1 5 10
<210> 6
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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(IMGT 连接)
<400> 6
Cys Ala Ser Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Ala Phe Phe
1 5 10
<210> 7
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 7
Cys Ala Ser Ser Arg Asp Arg Glu Gln Glu Ser Pro Leu His Phe
1 5 10 15
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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(IMGT 连接)
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 9
Cys Ala Ser Ser Tyr Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Glu Gln Tyr Phe
1 5 10 15
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 10
Cys Ala Ser Ser Gln Arg Asp Ser Pro Asn Glu Lys Leu Phe Phe
1 5 10 15
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - β CDR3
(IMGT 连接)
<400> 11
Cys Ala Ser Ser Gln Asp Pro Tyr Lys Leu Ser Gly Asn Thr Ile Tyr
1 5 10 15
Phe
<210> 12
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 12
Cys Ala Val Lys Glu Thr Ser Gly Ser Arg Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 13
Cys Ala Phe Ile Tyr Pro Ser Tyr Thr Ser Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile
1 5 10 15
Phe
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 14
Cys Ala Ala Ser Gly Thr Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe
1 5 10
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 15
Cys Ala Ala Ser Gly Ile Gly Asp Tyr Lys Leu Ser Phe
1 5 10
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 16
Cys Ala Val Arg Thr Ser Tyr Asp Lys Val Ile Phe
1 5 10
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 17
Cys Ala Val Asn Leu Leu Gly Ala Thr Gly Tyr Ser Thr Leu Thr Phe
1 5 10 15
<210> 18
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 18
Cys Ala Val Arg Gly Ile Asn Asp Tyr Lys Leu Ser Phe
1 5 10
<210> 19
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 19
Cys Ala Val Ile Thr Gly Phe Gln Lys Leu Val Phe
1 5 10
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 20
Cys Ile Ala Gly Val Gly Arg Gly Gln Asn Phe Val Phe
1 5 10
<210> 21
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - α CDR3
(IMGT 连接)
<400> 21
Cys Ala Phe His Pro Asn Phe Gly Asn Glu Lys Leu Thr Phe
1 5 10
<210> 22
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - αa CDR3
(IMGT 连接)
<400> 22
Cys Ala Val Gln Pro Arg Gly Asp Gly Ser Ser Asn Thr Gly Lys Leu
1 5 10 15
Ile Phe
<210> 23
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - Vβ
<400> 23
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe Leu Gly Thr
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Val Ser Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Asn Tyr Glu Ala Gln Gln Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Asn Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Ile Ser Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Gln Arg Thr Glu Gln Arg Asp Ser Ala Met Tyr Arg Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Thr Gly Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Thr Glu
130
<210> 24
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - Vβ
<400> 24
Met Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Ala Gly Ser Gly Leu Gly
1 5 10 15
Ala Val Val Ser Gln His Pro Ser Trp Val Ile Cys Lys Ser Gly Thr
20 25 30
Ser Val Lys Ile Glu Cys Arg Ser Leu Asp Phe Gln Ala Thr Thr Met
35 40 45
Phe Trp Tyr Arg Gln Phe Pro Lys Gln Ser Leu Met Leu Met Ala Thr
50 55 60
Ser Asn Glu Gly Ser Lys Ala Thr Tyr Glu Gln Gly Val Glu Lys Asp
65 70 75 80
Lys Phe Leu Ile Asn His Ala Ser Leu Thr Leu Ser Thr Leu Thr Val
85 90 95
Thr Ser Ala His Pro Glu Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Cys Ser Ala Thr
100 105 110
Pro Glu Ala Ser Ser Pro Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Thr Glu
130
<210> 25
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - Vβ
<400> 25
Met Gly Pro Gly Leu Leu His Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Thr
1 5 10 15
Gly His Gly Asp Ala Met Val Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr
20 25 30
Gln Phe Gly Lys Pro Val Thr Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His
35 40 45
Asn Val Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu
50 55 60
Leu Phe His Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro
65 70 75 80
Asp Asn Phe Gln Ser Arg Arg Pro Asn Thr Ser Phe Cys Phe Leu Asp
85 90 95
Ile Arg Ser Pro Gly Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr
100 105 110
Ser Asn Leu Gln Gly Arg Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Ser Ile Leu Glu
130
<210> 26
<211> 143
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - Vβ
<400> 26
Met Leu Ser Pro Asp Leu Pro Asp Ser Ala Trp Asn Thr Arg Leu Leu
1 5 10 15
Cys His Val Met Leu Cys Leu Leu Gly Ala Val Ser Val Ala Ala Gly
20 25 30
Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys Glu Lys Arg Glu Thr Ala
35 40 45
Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val Tyr Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ile Ser Phe Tyr Glu
65 70 75 80
Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Gln
85 90 95
Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser Leu Glu Leu
100 105 110
Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Leu Arg Leu Gly Arg
115 120 125
Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Leu Val Leu Glu
130 135 140
<210> 27
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - Vβ
<400> 27
Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe Leu Gly Thr
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Ala
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Val Ser Leu Phe Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Ser Asp Arg Phe Phe Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Val Ser Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Gln Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Gly Gln Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Thr Glu
130
<210> 28
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - Vβ
<400> 28
Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp Val Ala Phe Cys Leu Leu Val Glu
1 5 10 15
Glu Leu Ile Glu Ala Gly Val Val Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile
20 25 30
Glu Lys Lys Gln Pro Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Asn Thr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Asn Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu
50 55 60
Leu Ile Arg Tyr Glu Asn Glu Glu Ala Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Gln Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Val Glu
130
<210> 29
<211> 134
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - Vβ
<400> 29
Met Ser Asn Gln Val Leu Cys Cys Val Val Leu Cys Phe Leu Gly Ala
1 5 10 15
Asn Thr Val Asp Gly Gly Ile Thr Gln Ser Pro Lys Tyr Leu Phe Arg
20 25 30
Lys Glu Gly Gln Asn Val Thr Leu Ser Cys Glu Gln Asn Leu Asn His
35 40 45
Asp Ala Met Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Gln Gly Leu Arg Leu
50 55 60
Ile Tyr Tyr Ser Gln Ile Val Asn Asp Phe Gln Lys Gly Asp Ile Ala
65 70 75 80
Glu Gly Tyr Ser Val Ser Arg Glu Lys Lys Glu Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Val Thr Ser Ala Gln Lys Asn Pro Thr Ala Phe Tyr Leu Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Arg Asp Arg Glu Gln Glu Ser Pro Leu His Phe Gly Asn Gly Thr
115 120 125
Arg Leu Thr Val Thr Glu
130
<210> 30
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - Vβ
<400> 30
Met Gly Pro Gln Leu Leu Gly Tyr Val Val Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Gly Pro Leu Glu Ala Gln Val Thr Gln Asn Pro Arg Tyr Leu Ile Thr
20 25 30
Val Thr Gly Lys Lys Leu Thr Val Thr Cys Ser Gln Asn Met Asn His
35 40 45
Glu Tyr Met Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Gln
50 55 60
Ile Tyr Tyr Ser Met Asn Val Glu Val Thr Asp Lys Gly Asp Val Pro
65 70 75 80
Glu Gly Tyr Lys Val Ser Arg Lys Glu Lys Arg Asn Phe Pro Leu Ile
85 90 95
Leu Glu Ser Pro Ser Pro Asn Gln Thr Ser Leu Tyr Phe Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Phe Ser Gly Gly Thr Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Thr Glu
130
<210> 31
<211> 144
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - Vβ
<400> 31
Met Leu Ser Pro Asp Leu Pro Asp Ser Ala Trp Asn Thr Arg Leu Leu
1 5 10 15
Cys His Val Met Leu Cys Leu Leu Gly Ala Val Ser Val Ala Ala Gly
20 25 30
Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys Glu Lys Arg Glu Thr Ala
35 40 45
Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val Tyr Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ile Ser Phe Tyr Glu
65 70 75 80
Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Gln
85 90 95
Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser Leu Glu Leu
100 105 110
Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Tyr Arg Gly Gly Ser
115 120 125
Thr Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Thr Glu
130 135 140
<210> 32
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - Vβ
<400> 32
Met Ser Thr Arg Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Thr
20 25 30
Glu Lys Ser Gln Ala Val Ala Phe Trp Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Ala Thr Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu
50 55 60
Leu Val Gln Phe Gln Asp Glu Ser Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Gln Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Gln Arg Asp Ser Pro Asn Glu Lys Leu Phe Phe Gly Ser Gly
115 120 125
Thr Gln Leu Ser Val Leu Glu
130 135
<210> 33
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - Vβ
<400> 33
Met Gly Cys Arg Leu Leu Cys Cys Ala Val Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Val Pro Met Glu Thr Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg His Leu Val Met
20 25 30
Gly Met Thr Asn Lys Lys Ser Leu Lys Cys Glu Gln His Leu Gly His
35 40 45
Asn Ala Met Tyr Trp Tyr Lys Gln Ser Ala Lys Lys Pro Leu Glu Leu
50 55 60
Met Phe Val Tyr Ser Leu Glu Glu Arg Val Glu Asn Asn Ser Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser His Leu Phe Leu His
85 90 95
Leu His Thr Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Gln Asp Pro Tyr Lys Leu Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Phe Gly Glu
115 120 125
Gly Ser Trp Leu Thr Val Val Glu
130 135
<210> 34
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 Vα
<400> 34
Met Glu Thr Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp
1 5 10 15
Val Ser Ser Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val
20 25 30
Pro Glu Gly Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala
35 40 45
Ile Tyr Asn Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr
50 55 60
Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg
65 70 75 80
Leu Asn Ala Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile
85 90 95
Ala Ala Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Lys
100 105 110
Glu Thr Ser Gly Ser Arg Leu Thr Phe Gly Glu Gly Thr Gln Leu Thr
115 120 125
Val Asn Pro
130
<210> 35
<211> 139
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 Vα
<400> 35
Met Thr Arg Val Ser Leu Leu Trp Ala Val Val Val Ser Thr Cys Leu
1 5 10 15
Glu Ser Gly Met Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser
20 25 30
Val Gln Glu Ala Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser
35 40 45
Glu Asn Asn Tyr Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln
50 55 60
Met Ile Leu Val Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr
65 70 75 80
Glu Asn Arg Phe Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Asp Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
100 105 110
Ala Phe Ile Tyr Pro Ser Tyr Thr Ser Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile Phe
115 120 125
Gly Thr Gly Thr Arg Leu Lys Val Leu Ala Asn
130 135
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<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 Vα
<400> 36
Met Ala Met Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Ile Leu Trp Leu Gln Pro
1 5 10 15
Asp Trp Val Asn Ser Gln Gln Lys Asn Asp Asp Gln Gln Val Lys Gln
20 25 30
Asn Ser Pro Ser Leu Ser Val Gln Glu Gly Arg Ile Ser Ile Leu Asn
35 40 45
Cys Asp Tyr Thr Asn Ser Met Phe Asp Tyr Phe Leu Trp Tyr Lys Lys
50 55 60
Tyr Pro Ala Glu Gly Pro Thr Phe Leu Ile Ser Ile Ser Ser Ile Lys
65 70 75 80
Asp Lys Asn Glu Asp Gly Arg Phe Thr Val Phe Leu Asn Lys Ser Ala
85 90 95
Lys His Leu Ser Leu His Ile Val Pro Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala
100 105 110
Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser Gly Thr Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr
115 120 125
Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His Pro Tyr
130 135 140
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<211> 139
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 Vα
<400> 37
Met Ala Met Leu Leu Gly Ala Ser Val Leu Ile Leu Trp Leu Gln Pro
1 5 10 15
Asp Trp Val Asn Ser Gln Gln Lys Asn Asp Asp Gln Gln Val Lys Gln
20 25 30
Asn Ser Pro Ser Leu Ser Val Gln Glu Gly Arg Ile Ser Ile Leu Asn
35 40 45
Cys Asp Tyr Thr Asn Ser Met Phe Asp Tyr Phe Leu Trp Tyr Lys Lys
50 55 60
Tyr Pro Ala Glu Gly Pro Thr Phe Leu Ile Ser Ile Ser Ser Ile Lys
65 70 75 80
Asp Lys Asn Glu Asp Gly Arg Phe Thr Val Phe Leu Asn Lys Ser Ala
85 90 95
Lys His Leu Ser Leu His Ile Val Pro Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala
100 105 110
Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser Gly Ile Gly Asp Tyr Lys Leu Ser Phe
115 120 125
Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg Ala Asn
130 135
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<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 Vα
<400> 38
Met Val Lys Ile Arg Gln Phe Leu Leu Ala Ile Leu Trp Leu Gln Leu
1 5 10 15
Ser Cys Val Ser Ala Ala Lys Asn Glu Val Glu Gln Ser Pro Gln Asn
20 25 30
Leu Thr Ala Gln Glu Gly Glu Phe Ile Thr Ile Asn Cys Ser Tyr Ser
35 40 45
Val Gly Ile Ser Ala Leu His Trp Leu Gln Gln His Pro Gly Gly Gly
50 55 60
Ile Val Ser Leu Phe Met Leu Ser Ser Gly Lys Lys Lys His Gly Arg
65 70 75 80
Leu Ile Ala Thr Ile Asn Ile Gln Glu Lys His Ser Ser Leu His Ile
85 90 95
Thr Ala Ser His Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Ile Cys Ala Val Arg
100 105 110
Thr Ser Tyr Asp Lys Val Ile Phe Gly Pro Gly Thr Ser Leu Ser Val
115 120 125
Ile Pro Asn
130
<210> 39
<211> 135
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 Vα
<400> 39
Met Lys Ser Leu Arg Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser
1 5 10 15
Trp Val Trp Ser Gln Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu
20 25 30
Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp
35 40 45
Arg Gly Ser Gln Ser Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser
50 55 60
Pro Glu Leu Ile Met Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly
65 70 75 80
Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu
85 90 95
Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val
100 105 110
Asn Leu Leu Gly Ala Thr Gly Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Lys Gly
115 120 125
Thr Met Leu Leu Val Ser Pro
130 135
<210> 40
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 Vα
<400> 40
Met Trp Gly Val Phe Leu Leu Tyr Val Ser Met Lys Met Gly Gly Thr
1 5 10 15
Thr Gly Gln Asn Ile Asp Gln Pro Thr Glu Met Thr Ala Thr Glu Gly
20 25 30
Ala Ile Val Gln Ile Asn Cys Thr Tyr Gln Thr Ser Gly Phe Asn Gly
35 40 45
Leu Phe Trp Tyr Gln Gln His Ala Gly Glu Ala Pro Thr Phe Leu Ser
50 55 60
Tyr Asn Val Leu Asp Gly Leu Glu Glu Lys Gly Arg Phe Ser Ser Phe
65 70 75 80
Leu Ser Arg Ser Lys Gly Tyr Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Glu Leu Gln
85 90 95
Met Lys Asp Ser Ala Ser Tyr Leu Cys Ala Val Arg Gly Ile Asn Asp
100 105 110
Tyr Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg Ala Asn
115 120 125
<210> 41
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 Vα
<400> 41
Met Glu Lys Met Leu Glu Cys Ala Phe Ile Val Leu Trp Leu Gln Leu
1 5 10 15
Gly Trp Leu Ser Gly Glu Asp Gln Val Thr Gln Ser Pro Glu Ala Leu
20 25 30
Arg Leu Gln Glu Gly Glu Ser Ser Ser Leu Asn Cys Ser Tyr Thr Val
35 40 45
Ser Gly Leu Arg Gly Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Pro Glu Phe Leu Phe Thr Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu Lys Glu Lys
65 70 75 80
Glu Arg Leu Lys Ala Thr Leu Thr Lys Lys Glu Ser Phe Leu His Ile
85 90 95
Thr Ala Pro Lys Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ile
100 105 110
Thr Gly Phe Gln Lys Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Leu Val
115 120 125
Ser Pro Asn
130
<210> 42
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 Vα
<400> 42
Met Arg Leu Val Ala Arg Val Thr Val Phe Leu Thr Phe Gly Thr Ile
1 5 10 15
Ile Asp Ala Lys Thr Thr Gln Pro Thr Ser Met Asp Cys Ala Glu Gly
20 25 30
Arg Ala Ala Asn Leu Pro Cys Asn His Ser Thr Ile Ser Gly Asn Glu
35 40 45
Tyr Val Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile His Ser Gln Gly Pro Gln Tyr Ile
50 55 60
Ile His Gly Leu Lys Asn Asn Glu Thr Asn Glu Met Ala Ser Leu Ile
65 70 75 80
Ile Thr Glu Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ile Leu Pro His Ala Thr
85 90 95
Leu Arg Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ile Ala Gly Val Gly Arg Gly
100 105 110
Gln Asn Phe Val Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Ser Val Leu Pro Tyr
115 120 125
<210> 43
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 Vα
<400> 43
Met Glu Lys Asn Pro Leu Ala Ala Pro Leu Leu Ile Leu Trp Phe His
1 5 10 15
Leu Asp Cys Val Ser Ser Ile Leu Asn Val Glu Gln Ser Pro Gln Ser
20 25 30
Leu His Val Gln Glu Gly Asp Ser Thr Asn Phe Thr Cys Ser Phe Pro
35 40 45
Ser Ser Asn Phe Tyr Ala Leu His Trp Tyr Arg Trp Glu Thr Ala Lys
50 55 60
Ser Pro Glu Ala Leu Phe Val Met Thr Leu Asn Gly Asp Glu Lys Lys
65 70 75 80
Lys Gly Arg Ile Ser Ala Thr Leu Asn Thr Lys Glu Gly Tyr Ser Tyr
85 90 95
Leu Tyr Ile Lys Gly Ser Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys
100 105 110
Ala Phe His Pro Asn Phe Gly Asn Glu Lys Leu Thr Phe Gly Thr Gly
115 120 125
Thr Arg Leu Thr Ile Ile Pro Asn
130 135
<210> 44
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 Vα
<400> 44
Met Glu Lys Met Leu Glu Cys Ala Phe Ile Val Leu Trp Leu Gln Leu
1 5 10 15
Gly Trp Leu Ser Gly Glu Asp Gln Val Thr Gln Ser Pro Glu Ala Leu
20 25 30
Arg Leu Gln Glu Gly Glu Ser Ser Ser Leu Asn Cys Ser Tyr Thr Val
35 40 45
Ser Gly Leu Arg Gly Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Pro Glu Phe Leu Phe Thr Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu Lys Glu Lys
65 70 75 80
Glu Arg Leu Lys Ala Thr Leu Thr Lys Lys Glu Ser Phe Leu His Ile
85 90 95
Thr Ala Pro Lys Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Gln
100 105 110
Pro Arg Gly Asp Gly Ser Ser Asn Thr Gly Lys Leu Ile Phe Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Thr Leu Gln Val Lys Pro
130 135
<210> 45
<211> 176
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 Cβ
<400> 45
Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser
1 5 10 15
Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala
20 25 30
Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly
35 40 45
Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu
50 55 60
Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
65 70 75 80
Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
85 90 95
Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg
100 105 110
Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
115 120 125
Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
130 135 140
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
145 150 155 160
Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Phe
165 170 175
<210> 46
<211> 178
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 Cβ
<400> 46
Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser
1 5 10 15
Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala
20 25 30
Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly
35 40 45
Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu
50 55 60
Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
65 70 75 80
Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
85 90 95
Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg
100 105 110
Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
115 120 125
Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
130 135 140
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
145 150 155 160
Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Ser
165 170 175
Arg Gly
<210> 47
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 Cα
<400> 47
Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser
1 5 10 15
Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn
20 25 30
Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Cys Val
35 40 45
Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp
50 55 60
Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile
65 70 75 80
Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val
85 90 95
Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln
100 105 110
Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
115 120 125
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
130 135 140
<210> 48
<211> 605
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT1 37-45 TCR10.1
TCRβ-P2A-TCRα
<400> 48
Met Gly Thr Ser Leu Leu Cys Trp Val Val Leu Gly Phe Leu Gly Thr
1 5 10 15
Asp His Thr Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Thr
20 25 30
Lys Arg Gly Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Val Ser Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe
50 55 60
Leu Thr Tyr Phe Asn Tyr Glu Ala Gln Gln Asp Lys Ser Gly Leu Pro
65 70 75 80
Asn Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Ile Ser Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Gln Arg Thr Glu Gln Arg Asp Ser Ala Met Tyr Arg Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Leu Thr Gly Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Thr Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Thr
325 330 335
Leu Leu Gly Leu Leu Ile Leu Trp Leu Gln Leu Gln Trp Val Ser Ser
340 345 350
Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val Pro Glu Gly
355 360 365
Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala Ile Tyr Asn
370 375 380
Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu
385 390 395 400
Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg Leu Asn Ala
405 410 415
Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile Ala Ala Ser
420 425 430
Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Lys Glu Thr Ser
435 440 445
Gly Ser Arg Leu Thr Phe Gly Glu Gly Thr Gln Leu Thr Val Asn Pro
450 455 460
Asp Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys
465 470 475 480
Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr
485 490 495
Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Cys
500 505 510
Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala
515 520 525
Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser
530 535 540
Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp
545 550 555 560
Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe
565 570 575
Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala
580 585 590
Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600 605
<210> 49
<211> 612
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2
TCRβ-P2A-α
<400> 49
Met Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Ala Gly Ser Gly Leu Gly
1 5 10 15
Ala Val Val Ser Gln His Pro Ser Trp Val Ile Cys Lys Ser Gly Thr
20 25 30
Ser Val Lys Ile Glu Cys Arg Ser Leu Asp Phe Gln Ala Thr Thr Met
35 40 45
Phe Trp Tyr Arg Gln Phe Pro Lys Gln Ser Leu Met Leu Met Ala Thr
50 55 60
Ser Asn Glu Gly Ser Lys Ala Thr Tyr Glu Gln Gly Val Glu Lys Asp
65 70 75 80
Lys Phe Leu Ile Asn His Ala Ser Leu Thr Leu Ser Thr Leu Thr Val
85 90 95
Thr Ser Ala His Pro Glu Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Cys Ser Ala Thr
100 105 110
Pro Glu Ala Ser Ser Pro Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Thr Val Thr Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Thr Arg
325 330 335
Val Ser Leu Leu Trp Ala Val Val Val Ser Thr Cys Leu Glu Ser Gly
340 345 350
Met Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser Val Gln Glu
355 360 365
Ala Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln Met Ile Leu
385 390 395 400
Val Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr Glu Asn Arg
405 410 415
Phe Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser Leu Lys Ile
420 425 430
Ser Asp Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala Phe Ile
435 440 445
Tyr Pro Ser Tyr Thr Ser Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile Phe Gly Thr Gly
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Thr Arg Leu Lys Val Leu Ala Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val
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485 490 495
Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp
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515 520 525
Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys
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580 585 590
Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg
595 600 605
Leu Trp Ser Ser
610
<210> 50
<211> 611
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1
TCRβ-P2A-α
<400> 50
Met Gly Pro Gly Leu Leu His Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Thr
1 5 10 15
Gly His Gly Asp Ala Met Val Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr
20 25 30
Gln Phe Gly Lys Pro Val Thr Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His
35 40 45
Asn Val Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu
50 55 60
Leu Phe His Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro
65 70 75 80
Asp Asn Phe Gln Ser Arg Arg Pro Asn Thr Ser Phe Cys Phe Leu Asp
85 90 95
Ile Arg Ser Pro Gly Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr
100 105 110
Ser Asn Leu Gln Gly Arg Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg
115 120 125
Leu Ser Ile Leu Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu Val Ala
130 135 140
Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr
145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Phe Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys
305 310 315 320
Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Met Leu Leu
325 330 335
Gly Ala Ser Val Leu Ile Leu Trp Leu Gln Pro Asp Trp Val Asn Ser
340 345 350
Gln Gln Lys Asn Asp Asp Gln Gln Val Lys Gln Asn Ser Pro Ser Leu
355 360 365
Ser Val Gln Glu Gly Arg Ile Ser Ile Leu Asn Cys Asp Tyr Thr Asn
370 375 380
Ser Met Phe Asp Tyr Phe Leu Trp Tyr Lys Lys Tyr Pro Ala Glu Gly
385 390 395 400
Pro Thr Phe Leu Ile Ser Ile Ser Ser Ile Lys Asp Lys Asn Glu Asp
405 410 415
Gly Arg Phe Thr Val Phe Leu Asn Lys Ser Ala Lys His Leu Ser Leu
420 425 430
His Ile Val Pro Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala
435 440 445
Ala Ser Gly Thr Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr
450 455 460
Ser Leu Ile Val His Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr
465 470 475 480
Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr
485 490 495
Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val
500 505 510
Tyr Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys
515 520 525
Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala
530 535 540
Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser
545 550 555 560
Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr
565 570 575
Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile
580 585 590
Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu
595 600 605
Trp Ser Ser
610
<210> 51
<211> 622
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1
TCRβ-P2A-TCRα
<400> 51
Met Leu Ser Pro Asp Leu Pro Asp Ser Ala Trp Asn Thr Arg Leu Leu
1 5 10 15
Cys His Val Met Leu Cys Leu Leu Gly Ala Val Ser Val Ala Ala Gly
20 25 30
Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys Glu Lys Arg Glu Thr Ala
35 40 45
Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val Tyr Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ile Ser Phe Tyr Glu
65 70 75 80
Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe Ser Ala Gln
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Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser Leu Glu Leu
100 105 110
Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Leu Arg Leu Gly Arg
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr
165 170 175
Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys
180 185 190
Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln
195 200 205
Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val
210 215 220
Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val
225 230 235 240
Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala
245 250 255
Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp
260 265 270
Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr
275 280 285
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Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Ser Arg
305 310 315 320
Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp
325 330 335
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Ala Met Leu Leu Gly Ala Ser Val
340 345 350
Leu Ile Leu Trp Leu Gln Pro Asp Trp Val Asn Ser Gln Gln Lys Asn
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370 375 380
Gly Arg Ile Ser Ile Leu Asn Cys Asp Tyr Thr Asn Ser Met Phe Asp
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Ile Ser Ile Ser Ser Ile Lys Asp Lys Asn Glu Asp Gly Arg Phe Thr
420 425 430
Val Phe Leu Asn Lys Ser Ala Lys His Leu Ser Leu His Ile Val Pro
435 440 445
Ser Gln Pro Gly Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser Gly Ile
450 455 460
Gly Asp Tyr Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg
465 470 475 480
Ala Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser
485 490 495
Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys
565 570 575
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580 585 590
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Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
610 615 620
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<211> 604
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT1-37E TCR#62 - WT137-45
TCR13.2 TCRβ-P2A-TCRα
<400> 52
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35 40 45
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Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser
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260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val Lys
325 330 335
Ile Arg Gln Phe Leu Leu Ala Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser Cys Val
340 345 350
Ser Ala Ala Lys Asn Glu Val Glu Gln Ser Pro Gln Asn Leu Thr Ala
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405 410 415
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420 425 430
His Pro Arg Asp Ser Ala Val Tyr Ile Cys Ala Val Arg Thr Ser Tyr
435 440 445
Asp Lys Val Ile Phe Gly Pro Gly Thr Ser Leu Ser Val Ile Pro Asn
450 455 460
Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser
465 470 475 480
Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn
485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile
530 535 540
Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val
545 550 555 560
Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln
565 570 575
Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
580 585 590
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
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<210> 53
<211> 607
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1
TCRβ-P2A-TCRα
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Leu Ile Arg Tyr Glu Asn Glu Glu Ala Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
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Lys Ile Gln Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala
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145 150 155 160
Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser
165 170 175
Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro
180 185 190
Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu
195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val
290 295 300
Lys Arg Lys Asp Phe Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys
305 310 315 320
Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Lys Ser Leu Arg
325 330 335
Val Leu Leu Val Ile Leu Trp Leu Gln Leu Ser Trp Val Trp Ser Gln
340 345 350
Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly
355 360 365
Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Gly Ser Gln Ser
370 375 380
Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met
385 390 395 400
Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln
405 410 415
Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln
420 425 430
Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Asn Leu Leu Gly Ala
435 440 445
Thr Gly Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Met Leu Leu Val
450 455 460
Ser Pro Asp Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp
465 470 475 480
Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser
485 490 495
Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp
500 505 510
Lys Cys Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala
515 520 525
Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn
530 535 540
Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser
545 550 555 560
Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu
565 570 575
Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys
580 585 590
Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600 605
<210> 54
<211> 600
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1
TCRβ-P2A-TCRα
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115 120 125
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Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala
145 150 155 160
Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu
165 170 175
Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp
180 185 190
Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys
195 200 205
Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg
210 215 220
Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp
225 230 235 240
Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala
245 250 255
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260 265 270
Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys
275 280 285
Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met
290 295 300
Val Lys Arg Lys Asp Phe Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu
305 310 315 320
Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Trp Gly Val
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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Asp Gly Leu Glu Glu Lys Gly Arg Phe Ser Ser Phe Leu Ser Arg Ser
405 410 415
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420 425 430
Ala Ser Tyr Leu Cys Ala Val Arg Gly Ile Asn Asp Tyr Lys Leu Ser
435 440 445
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450 455 460
Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser
465 470 475 480
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485 490 495
Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Arg
500 505 510
Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser
515 520 525
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580 585 590
Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600
<210> 55
<211> 604
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1
TCRβ-P2A-TCRα
<400> 55
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195 200 205
Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn
210 215 220
His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu
225 230 235 240
Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu
245 250 255
Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln
260 265 270
Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala
275 280 285
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290 295 300
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Lys
325 330 335
Met Leu Glu Cys Ala Phe Ile Val Leu Trp Leu Gln Leu Gly Trp Leu
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Ser Gly Glu Asp Gln Val Thr Gln Ser Pro Glu Ala Leu Arg Leu Gln
355 360 365
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370 375 380
Arg Gly Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Pro Glu Phe
385 390 395 400
Leu Phe Thr Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu Lys Glu Lys Glu Arg Leu
405 410 415
Lys Ala Thr Leu Thr Lys Lys Glu Ser Phe Leu His Ile Thr Ala Pro
420 425 430
Lys Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ile Thr Gly Phe
435 440 445
Gln Lys Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Leu Val Ser Pro Asn
450 455 460
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485 490 495
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500 505 510
Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp
515 520 525
Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile
530 535 540
Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val
545 550 555 560
Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln
565 570 575
Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly
580 585 590
Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser
595 600
<210> 56
<211> 612
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2
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<400> 56
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Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser Leu Glu Leu
100 105 110
Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Tyr Arg Gly Gly Ser
115 120 125
Thr Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Thr Glu
130 135 140
Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser
145 150 155 160
Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala
165 170 175
Thr Gly Phe Tyr Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly
180 185 190
Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu
195 200 205
Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg
210 215 220
Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln
225 230 235 240
Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg
245 250 255
Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala
260 265 270
Asp Cys Gly Phe Thr Ser Glu Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala
275 280 285
Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val
290 295 300
Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Ser
305 310 315 320
Arg Gly Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly
325 330 335
Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Arg Leu Val Ala Arg Val Thr
340 345 350
Val Phe Leu Thr Phe Gly Thr Ile Ile Asp Ala Lys Thr Thr Gln Pro
355 360 365
Thr Ser Met Asp Cys Ala Glu Gly Arg Ala Ala Asn Leu Pro Cys Asn
370 375 380
His Ser Thr Ile Ser Gly Asn Glu Tyr Val Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile
385 390 395 400
His Ser Gln Gly Pro Gln Tyr Ile Ile His Gly Leu Lys Asn Asn Glu
405 410 415
Thr Asn Glu Met Ala Ser Leu Ile Ile Thr Glu Asp Arg Lys Ser Ser
420 425 430
Thr Leu Ile Leu Pro His Ala Thr Leu Arg Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
435 440 445
Cys Ile Ala Gly Val Gly Arg Gly Gln Asn Phe Val Phe Gly Pro Gly
450 455 460
Thr Arg Leu Ser Val Leu Pro Tyr Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val
465 470 475 480
Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe
485 490 495
Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp
500 505 510
Val Tyr Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe
515 520 525
Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys
530 535 540
Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro
545 550 555 560
Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu
565 570 575
Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg
580 585 590
Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg
595 600 605
Leu Trp Ser Ser
610
<210> 57
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1
TCRβ-P2A-TCRα
<400> 57
Met Ser Thr Arg Leu Leu Cys Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Glu Leu Ser Glu Ala Glu Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Thr
20 25 30
Glu Lys Ser Gln Ala Val Ala Phe Trp Cys Asp Pro Ile Ser Gly His
35 40 45
Ala Thr Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu
50 55 60
Leu Val Gln Phe Gln Asp Glu Ser Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu
85 90 95
Lys Ile Gln Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala
100 105 110
Ser Ser Gln Arg Asp Ser Pro Asn Glu Lys Leu Phe Phe Gly Ser Gly
115 120 125
Thr Gln Leu Ser Val Leu Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro Glu
130 135 140
Val Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys
145 150 155 160
Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu
165 170 175
Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys Thr
180 185 190
Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr
195 200 205
Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro
210 215 220
Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn
225 230 235 240
Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser
245 250 255
Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr
260 265 270
Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly
275 280 285
Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala
290 295 300
Met Val Lys Arg Lys Asp Phe Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu
305 310 315 320
Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu Lys
325 330 335
Asn Pro Leu Ala Ala Pro Leu Leu Ile Leu Trp Phe His Leu Asp Cys
340 345 350
Val Ser Ser Ile Leu Asn Val Glu Gln Ser Pro Gln Ser Leu His Val
355 360 365
Gln Glu Gly Asp Ser Thr Asn Phe Thr Cys Ser Phe Pro Ser Ser Asn
370 375 380
Phe Tyr Ala Leu His Trp Tyr Arg Trp Glu Thr Ala Lys Ser Pro Glu
385 390 395 400
Ala Leu Phe Val Met Thr Leu Asn Gly Asp Glu Lys Lys Lys Gly Arg
405 410 415
Ile Ser Ala Thr Leu Asn Thr Lys Glu Gly Tyr Ser Tyr Leu Tyr Ile
420 425 430
Lys Gly Ser Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Phe His
435 440 445
Pro Asn Phe Gly Asn Glu Lys Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu
450 455 460
Thr Ile Ile Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu
465 470 475 480
Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe
485 490 495
Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile
500 505 510
Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn
515 520 525
Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala
530 535 540
Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu
545 550 555 560
Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr
565 570 575
Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu
580 585 590
Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser
595 600 605
Ser
<210> 58
<211> 611
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1
TCRβ-P2A-TCRα
<400> 58
Met Gly Cys Arg Leu Leu Cys Cys Ala Val Leu Cys Leu Leu Gly Ala
1 5 10 15
Val Pro Met Glu Thr Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg His Leu Val Met
20 25 30
Gly Met Thr Asn Lys Lys Ser Leu Lys Cys Glu Gln His Leu Gly His
35 40 45
Asn Ala Met Tyr Trp Tyr Lys Gln Ser Ala Lys Lys Pro Leu Glu Leu
50 55 60
Met Phe Val Tyr Ser Leu Glu Glu Arg Val Glu Asn Asn Ser Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser His Leu Phe Leu His
85 90 95
Leu His Thr Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser
100 105 110
Ser Gln Asp Pro Tyr Lys Leu Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Phe Gly Glu
115 120 125
Gly Ser Trp Leu Thr Val Val Glu Asp Leu Asn Lys Val Phe Pro Pro
130 135 140
Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln
145 150 155 160
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val
165 170 175
Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Cys
180 185 190
Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg
195 200 205
Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn
210 215 220
Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu
225 230 235 240
Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val
245 250 255
Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser
260 265 270
Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu
275 280 285
Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met
290 295 300
Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Phe Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
305 310 315 320
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Glu
325 330 335
Lys Met Leu Glu Cys Ala Phe Ile Val Leu Trp Leu Gln Leu Gly Trp
340 345 350
Leu Ser Gly Glu Asp Gln Val Thr Gln Ser Pro Glu Ala Leu Arg Leu
355 360 365
Gln Glu Gly Glu Ser Ser Ser Leu Asn Cys Ser Tyr Thr Val Ser Gly
370 375 380
Leu Arg Gly Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Pro Glu
385 390 395 400
Phe Leu Phe Thr Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu Lys Glu Lys Glu Arg
405 410 415
Leu Lys Ala Thr Leu Thr Lys Lys Glu Ser Phe Leu His Ile Thr Ala
420 425 430
Pro Lys Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Gln Pro Arg
435 440 445
Gly Asp Gly Ser Ser Asn Thr Gly Lys Leu Ile Phe Gly Gln Gly Thr
450 455 460
Thr Leu Gln Val Lys Pro Asp Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr
465 470 475 480
Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr
485 490 495
Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val
500 505 510
Tyr Ile Thr Asp Lys Cys Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys
515 520 525
Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala
530 535 540
Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser
545 550 555 560
Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr
565 570 575
Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile
580 585 590
Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu
595 600 605
Trp Ser Ser
610
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT1 (37-45)肽抗原
<400> 59
Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala
1 5
<210> 60
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列猪捷申病毒-1 2A (P2A)
肽
<400> 60
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 61
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列猪捷申病毒 2A (T2A)
肽
<400> 61
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 62
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列马鼻炎A病毒 (ERAV)
2A (E2A)肽
<400> 62
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 63
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列口蹄疫病毒2A
(F2A)肽
<400> 63
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 64
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1野生型
Vβ
<400> 64
atgggcacca gtctcctatg ctgggtggtc ctgggtttcc tagggacaga tcacacaggt 60
gctggagtct cccagtctcc caggtacaaa gtcacaaaga ggggacagga tgtagctctc 120
aggtgtgatc caatttcggg tcatgtatcc ctttattggt accgacaggc cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttcaattat gaagcccaac aagacaaatc agggctgccc 240
aatgatcggt tctctgcaga gaggcctgag ggatccatct ccactctgac gatccagcgc 300
acagagcagc gggactcggc catgtatcgc tgtgccagca gcctgacagg gtcctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga 440
<210> 65
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2野生型
Vβ
<400> 65
atgctgctgc ttctgctgct tctggggcca gcaggctccg ggcttggtgc tgtcgtctct 60
caacatccga gctgggttat ctgtaagagt ggaacctctg tgaagatcga gtgccgttcc 120
ctggactttc aggccacaac tatgttttgg tatcgtcagt tcccgaaaca gagtctcatg 180
ctgatggcaa cttccaatga gggctccaag gccacatacg agcaaggcgt cgagaaggac 240
aagtttctca tcaaccatgc aagcctgacc ttgtccactc tgacagtgac cagtgcccat 300
cctgaagaca gcagcttcta catctgcagt gcaaccccgg aggctagtag cccctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga 440
<210> 66
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1野生型
Vβ
<400> 66
atgggtcctg ggcttctcca ctggatggcc ctttgtctcc ttggaacagg tcatggggat 60
gccatggtca tccagaaccc aagataccag gttacccagt ttggaaagcc agtgaccctg 120
agttgttctc agactttgaa ccataacgtc atgtactggt accagcagaa gtcaagtcag 180
gccccaaagc tgctgttcca ctactatgac aaagatttta acaatgaagc agacacccct 240
gataacttcc aatccaggag gccgaacact tctttctgct ttcttgacat ccgctcacca 300
ggcctggggg acgcagccat gtacctgtgt gccaccagca accttcaggg gcgacagccc 360
cagcattttg gtgatgggac tcgactctcc atcctagagg acctgaacaa ggtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga 440
<210> 67
<211> 470
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1野生型
Vβ
<400> 67
atgcttagtc ctgacctgcc tgactctgcc tggaacacca ggctcctctg ccatgtcatg 60
ctttgtctcc tgggagcagt ttcagtggct gctggagtca tccagtcccc aagacatctg 120
atcaaagaaa agagggaaac agccactctg aaatgctatc ctatccctag acacgacact 180
gtctactggt accagcaggg tccaggtcag gacccccagt tcctcatttc gttttatgaa 240
aagatgcaga gcgataaagg aagcatccct gatcgattct cagctcaaca gttcagtgac 300
tatcattctg aactgaacat gagctccttg gagctggggg actcagccct gtacttctgt 360
gccagcagcc tccggttggg gcgagagacc cagtacttcg ggccaggcac gcggctcctg 420
gtgctcgagg acctgaaaaa cgtgttccca cccgaggtcg ctgtgtttga 470
<210> 68
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2野生型
Vβ
<400> 68
atgggcacca ggctcctctg ctgggtggtc ctgggtttcc tagggacaga tcacacaggt 60
gctggagtct cccagtcccc taggtacaaa gtcgcaaaga gaggacagga tgtagctctc 120
aggtgtgatc caatttcggg tcatgtatcc cttttttggt accaacaggc cctggggcag 180
gggccagagt ttctgactta tttccagaat gaagctcaac tagacaaatc ggggctgccc 240
agtgatcgct tctttgcaga aaggcctgag ggatccgtct ccactctgaa gatccagcgc 300
acacagcagg aggactccgc cgtgtatctc tgtgccagca gcctgggaca ggcctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga 440
<210> 69
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1野生型
Vβ
<400> 69
atgggtacca ggctcctctg ctgggtggcc ttctgtctcc tggtggaaga actcatagaa 60
gctggagtgg ttcagtctcc cagatataag attatagaga aaaaacagcc tgtggctttt 120
tggtgcaatc ctatttctgg ccacaatacc ctttactggt acctgcagaa cttgggacag 180
ggcccggagc ttctgattcg atatgagaat gaggaagcag tagacgattc acagttgcct 240
aaggatcgat tttctgcaga gaggctcaaa ggagtagact ccactctcaa gatccagcct 300
gcagagcttg gggactcggc cgtgtatctc tgtgccagca gcctaaccag gggggctgaa 360
gctttctttg gacaaggcac cagactcaca gttgtagagg acctgaacaa ggtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga 440
<210> 70
<211> 443
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1野生型
Vβ
<400> 70
atgagcaacc aggtgctctg ctgtgtggtc ctttgtttcc tgggagcaaa caccgtggat 60
ggtggaatca ctcagtcccc aaagtacctg ttcagaaagg aaggacagaa tgtgaccctg 120
agttgtgaac agaatttgaa ccacgatgcc atgtactggt accgacagga cccagggcaa 180
gggctgagat tgatctacta ctcacagata gtaaatgact ttcagaaagg agatatagct 240
gaagggtaca gcgtctctcg ggagaagaag gaatcctttc ctctcactgt gacatcggcc 300
caaaagaacc cgacagcttt ctatctctgt gccagtagta gagacaggga gcaagaatca 360
cccctccact ttgggaacgg gaccaggctc actgtgacag aggacctgaa caaggtgttc 420
ccacccgagg tcgctgtgtt tga 443
<210> 71
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1野生型
Vβ
<400> 71
atgggccccc agctccttgg ctatgtggtc ctttgccttc taggagcagg ccccctggaa 60
gcccaagtga cccagaaccc aagatacctc atcacagtga ctggaaagaa gttaacagtg 120
acttgttctc agaatatgaa ccatgagtat atgtcctggt atcgacaaga cccagggctg 180
ggcttaaggc agatctacta ttcaatgaat gttgaggtga ctgataaggg agatgttcct 240
gaagggtaca aagtctctcg aaaagagaag aggaatttcc ccctgatcct ggagtcgccc 300
agccccaacc agacctctct gtacttctgt gccagcagtt ttagcggggg aacctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga 440
<210> 72
<211> 473
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2野生型
Vβ
<400> 72
atgcttagtc ctgacctgcc tgactctgcc tggaacacca ggctcctctg ccatgtcatg 60
ctttgtctcc tgggagcagt ttcagtggct gctggagtca tccagtcccc aagacatctg 120
atcaaagaaa agagggaaac agccactctg aaatgctatc ctatccctag acacgacact 180
gtctactggt accagcaggg tccaggtcag gacccccagt tcctcatttc gttttatgaa 240
aagatgcaga gcgataaagg aagcatccct gatcgattct cagctcaaca gttcagtgac 300
tatcattctg aactgaacat gagctccttg gagctggggg actcagccct gtacttctgt 360
gccagcagct acagaggggg ctctacgtac gagcagtact tcgggccggg caccaggctc 420
acggtcacag aggacctgaa aaacgtgttc ccacccgagg tcgctgtgtt tga 473
<210> 73
<211> 446
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1野生型
Vβ
<400> 73
atgagcacca ggcttctctg ctggatggcc ctctgtctcc tgggggcaga actctcagaa 60
gctgaagttg cccagtcccc cagatataag attacagaga aaagccaggc tgtggctttt 120
tggtgtgatc ctatttctgg ccatgctacc ctttactggt accggcagat cctgggacag 180
ggcccggagc ttctggttca atttcaggat gagagtgtag tagatgattc acagttgcct 240
aaggatcgat tttctgcaga gaggctcaaa ggagtagact ccactctcaa gatccagcct 300
gcagagcttg gggactcggc catgtatctc tgtgccagca gccaacggga cagcccaaat 360
gaaaaactgt tttttggcag tggaacccag ctctctgtct tggaggacct gaacaaggtg 420
ttcccacccg aggtcgctgt gtttga 446
<210> 74
<211> 449
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1野生型
Vβ
<400> 74
atgggctgca ggctgctctg ctgtgcggtt ctctgtctcc tgggagcggt ccccatggaa 60
acgggagtta cgcagacacc aagacacctg gtcatgggaa tgacaaataa gaagtctttg 120
aaatgtgaac aacatctggg tcataacgct atgtattggt acaagcaaag tgctaagaag 180
ccactggagc tcatgtttgt ctacagtctt gaagaacggg ttgaaaacaa cagtgtgcca 240
agtcgcttct cacctgaatg ccccaacagc tctcacttat tccttcacct acacaccctg 300
cagccagaag actcggccct gtatctctgc gccagcagcc aagatccgta caagctctct 360
ggaaacacca tatattttgg agagggaagt tggctcactg ttgtagagga cctgaacaag 420
gtgttcccac ccgaggtcgc tgtgtttga 449
<210> 75
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - Vβ密码子优化
<400> 75
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca tctcttctct 60
gttgggtggt tctgggcttt ctgggcacag atcatacagg agctggagtt agccagtctc 120
ctaggtataa ggtgaccaag aggggacagg atgtggctct gagatgtgac cctattagcg 180
gacatgtgag cctgtactgg tacagacaag ctctgggaca aggacccgag tttctgacct 240
acttcaacta tgaggcccag caggacaaat ctggactgcc caacgacaga ttcagcgccg 300
aaagaccaga aggctctatt agcacactga ccatccagag aacagagcag agggattctg 360
ccatgtacag atgcgccagc agcttaacag gctcttacga gcagtacttt ggacctggca 420
caagactgac agtgacagag 440
<210> 76
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - Vβ密码子优化
<400> 76
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgctt cttctcctcc 60
ttctcggacc tgctggatct ggattaggag ctgttgtgtc tcagcaccct tcttgggtga 120
tctgtaaaag cggcacaagc gtgaagatcg agtgcagaag cctggacttt caggccacaa 180
ccatgttctg gtataggcag ttccccaagc agtctctgat gctgatggcc acctctaatg 240
agggctctaa ggccacatat gaacagggag tggagaagga caagttcctg atcaaccacg 300
cctctctgac cctgtctacc ctgacagtta catctgccca ccctgaggat agcagctttt 360
acatctgtag cgccacacct gaagcctcta gcccatatga gcagtacttt ggccctggca 420
ccagattaac agtgacagag 440
<210> 77
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - Vβ密码子优化
<400> 77
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggacct ggactgcttc 60
attggatggc tctgtgtttg ctgggaacag gacatggaga tgctatggtg atccagaacc 120
ccaggtatca ggtgacccag tttggcaaac cagtgacact gagctgttct cagaccctga 180
accacaacgt gatgtactgg taccagcaga agtcttctca ggcccctaag ctgctgttcc 240
actactacga caaggacttc aacaacgagg ccgatacccc tgacaatttc cagagcagga 300
ggcccaatac cagcttctgt ttcctggaca ttagaagccc tggactggga gatgctgcca 360
tgtacctgtg tgccaccagc aatttacagg gaagacaacc tcagcacttt ggcgatggca 420
caaggctgtc tatcctggag 440
<210> 78
<211> 470
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - Vβ密码子优化
<400> 78
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgagc cctgatctcc 60
ctgattctgc ctggaatacc agactgctgt gtcatgtgat gctgtgtctg cttggagccg 120
tttctgtggc tgctggcgtg attcaatctc ctagacacct gatcaaggag aagagagaaa 180
cagccaccct gaagtgctac cccatcccca gacacgatac agtgtactgg tatcagcaag 240
gacctggaca agatccccag ttcctgatca gcttctacga gaagatgcag agcgacaaag 300
gcagcatccc agacagattt agcgcccagc agtttagcga ctatcactct gagctgaaca 360
tgagcagcct ggaactgggc gattctgctc tgtacttctg tgcctcttct ctgagactgg 420
gaagagaaac ccagtacttt ggacccggca caagactgct ggttcttgag 470
<210> 79
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - Vβ密码子优化
<400> 79
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca agacttctct 60
gctgggtggt gcttggattt ctgggcacag atcatacagg agctggagtt agccagtctc 120
ctaggtacaa agtggccaag agaggacagg atgtggctct gagatgtgac cctattagcg 180
gacatgtgag cctgttttgg taccagcaag ctctgggaca aggacccgag tttctgacct 240
acttccagaa tgaagcccag ctggataaat ctggactgcc tagcgaccgg ttcttcgccg 300
aaagacctga aggatctgtt agcaccctga agattcagag aacacagcag gaggactctg 360
ccgtgtacct gtgtgcctct tctttaggac aggcctatga gcagtatttt ggacctggca 420
ccagactgac cgtgacagag 440
<210> 80
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - Vβ密码子优化
<400> 80
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca agacttctct 60
gctgggtggc cttttgtctg ctggtggaag agctgattga agctggagtt gtgcagtctc 120
ctaggtacaa gatcatcgag aagaagcagc ccgtggcctt ctggtgtaat cccatttctg 180
gccacaacac cctgtactgg tatctgcaga atctgggaca gggccctgaa ctgctgatca 240
gatacgagaa cgaagaagcc gtggacgatt ctcaactgcc taaggaccgc ttttctgccg 300
agaggctgaa aggagtggat tctaccctga agatccaacc tgctgaactg ggcgattctg 360
ctgtgtacct gtgcgcttct agcctgacaa gaggagctga agcctttttt ggacagggca 420
caagactgac agtggtggag 440
<210> 81
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - Vβ密码子优化
<400> 81
000
<210> 82
<211> 440
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - Vβ密码子优化
<400> 82
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggacct cagcttcttg 60
gatacgttgt gctgtgtctg cttggagctg gacctcttga agctcaggtt acccagaacc 120
ccagatacct gattaccgtg acaggcaaaa agctgaccgt gacatgtagc cagaacatga 180
accacgagta catgagctgg taccggcagg atcctggatt aggcctgaga cagatctact 240
acagcatgaa cgtggaggtg accgataaag gcgacgtgcc tgagggatac aaggtgagca 300
gaaaggagaa gaggaatttc cccctgatcc tggaaagccc aagccccaat cagacaagcc 360
tgtacttttg tgccagcagc ttttctggcg gcacatatga gcagtacttc ggccctggca 420
caagactgac agttacagag 440
<210> 83
<211> 473
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - Vβ密码子优化
<400> 83
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgagc cctgatctcc 60
ctgattctgc ctggaatacc agactgctgt gtcatgtgat gctgtgtctg cttggagccg 120
tttctgtggc tgctggcgtg attcaatctc ctagacacct gatcaaggag aagagagaaa 180
cagccaccct gaagtgctac cccatcccca gacacgatac agtgtactgg tatcagcaag 240
gacctggaca agatccccag ttcctgatca gcttctacga gaagatgcag agcgacaaag 300
gcagcatccc agacagattt agcgcccagc agtttagcga ctatcactct gagctgaaca 360
tgagcagcct ggaactgggc gattctgctc tgtacttctg tgccagcagc tatagaggag 420
gcagcacata tgagcagtac tttggccctg gcacaagact gacagtgaca gag 473
<210> 84
<211> 446
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - Vβ密码子优化
<400> 84
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgagcacc agactccttt 60
gctggatggc tttgtgtctg cttggagctg agctgtctga agctgaagtt gcccagtctc 120
ccagatacaa gatcaccgag aaatctcagg ctgtggcctt ctggtgtgac cctatttctg 180
gacacgccac cctgtactgg tataggcaaa ttctgggaca aggccctgaa ctgctggtgc 240
aatttcagga tgagagcgtg gtggacgatt ctcaactgcc taaggacagg ttttctgccg 300
agcggctgaa aggagttgat agcaccctga agatccaacc tgctgaactg ggcgattctg 360
ctatgtacct gtgcgcctct tctcagagag atagccctaa cgagaagctg ttctttggct 420
ctggaaccca gctgtctgtg ctggag 446
<210> 85
<211> 449
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - Vβ密码子优化
<400> 85
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggctgt agactgttgt 60
gttgtgctgt gctgtgtctg ttgggagctg tgcctatgga aacaggcgtt acccagacac 120
ctagacatct ggttatgggc atgaccaaca agaagagcct gaagtgcgag cagcatctgg 180
gccataacgc catgtactgg tataagcaga gcgccaagaa accactggaa ctgatgttcg 240
tgtacagcct ggaggagagg gtggagaata atagcgtgcc cagcagattt agccctgagt 300
gcccaaattc ttctcacctg ttcctgcacc tgcacacatt acagcccgag gattctgccc 360
tgtacctgtg tgcttcttct caagaccctt acaagctgag cggcaatacc atctacttcg 420
gcgaaggctc ttggctgaca gtggttgaa 449
<210> 86
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1野生型
Vα
<400> 86
atggagaccc tcttgggcct gcttatcctt tggctgcagc tgcaatgggt gagcagcaaa 60
caggaggtga cacagattcc tgcagctctg agtgtcccag aaggagaaaa cttggttctc 120
aactgcagtt tcactgatag cgctatttac aacctccagt ggtttaggca ggaccctggg 180
aaaggtctca catctctgtt gcttattcag tcaagtcaga gagagcaaac aagtggaaga 240
cttaatgcct cgctggataa atcatcagga cgtagtactt tatacattgc agcttctcag 300
cctggtgact cagccaccta cctctgtgct gtgaaagaaa ccagtggctc taggttgacc 360
tttggggaag gaacacagct cacagtgaat cctgat 396
<210> 87
<211> 417
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2野生型
Vα
<400> 87
atgacacgag ttagcttgct gtgggcagtc gtggtctcca cctgtcttga atccggcatg 60
gcccagacag tcactcagtc tcaaccagag atgtctgtgc aggaggcaga gactgtgacc 120
ctgagttgca catatgacac cagtgagaat aattattatt tgttctggta caagcagcct 180
cccagcaggc agatgattct cgttattcgc caagaagctt ataagcaaca gaatgcaacg 240
gagaatcgtt tctctgtgaa cttccagaaa gcagccaaat ccttcagtct caagatctca 300
gactcacagc tgggggacac tgcgatgtat ttctgtgctt tcatctaccc atcctacacc 360
tcaggaacct acaaatacat ctttggaaca ggcaccaggc tgaaggtttt agcaaat 417
<210> 88
<211> 420
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1野生型
Vα
<400> 88
atggccatgc tcctgggggc atcagtgctg attctgtggc ttcagccaga ctgggtaaac 60
agtcaacaga agaatgatga ccagcaagtt aagcaaaatt caccatccct gagcgtccag 120
gaaggaagaa tttctattct gaactgtgac tatactaaca gcatgtttga ttatttccta 180
tggtacaaaa aataccctgc tgaaggtcct acattcctga tatctataag ttccattaag 240
gataaaaatg aagatggaag attcactgtc ttcttaaaca aaagtgccaa gcacctctct 300
ctgcacattg tgccctccca gcctggagac tctgcagtgt acttctgtgc agcaagcgga 360
acaggaggaa gctacatacc tacatttgga agaggaacca gccttattgt tcatccgtat 420
<210> 89
<211> 417
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1野生型
Vα
<400> 89
atggccatgc tcctgggggc atcagtgctg attctgtggc ttcagccaga ctgggtaaac 60
agtcaacaga agaatgatga ccagcaagtt aagcaaaatt caccatccct gagcgtccag 120
gaaggaagaa tttctattct gaactgtgac tatactaaca gcatgtttga ttatttccta 180
tggtacaaaa aataccctgc tgaaggtcct acattcctga tatctataag ttccattaag 240
gataaaaatg aagatggaag attcactgtc ttcttaaaca aaagtgccaa gcacctctct 300
ctgcacattg tgccctccca gcctggagac tctgcagtgt acttctgtgc agcaagcggt 360
ataggcgact acaagctcag ctttggagcc ggaaccacag taactgtaag agcaaat 417
<210> 90
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2野生型
Vα
<400> 90
atggtgaaga tccggcaatt tttgttggct attttgtggc ttcagctaag ctgtgtaagt 60
gccgccaaaa atgaagtgga gcagagtcct cagaacctga ctgcccagga aggagaattt 120
atcacaatca actgcagtta ctcggtagga ataagtgcct tacactggct gcaacagcat 180
ccaggaggag gcattgtttc cttgtttatg ctgagctcag ggaagaagaa gcatggaaga 240
ttaattgcca caataaacat acaggaaaag cacagctccc tgcacatcac agcctcccat 300
cccagagact ctgccgtcta catctgtgct gtcaggacct cctacgacaa ggtgatattt 360
gggccaggga caagcttatc agtcattcca aat 393
<210> 91
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1野生型
Vα
<400> 91
atgaaatcct tgagagtttt actagtgatc ctgtggcttc agttgagctg ggtttggagc 60
caacagaagg aggtggagca gaattctgga cccctcagtg ttccagaggg agccattgcc 120
tctctcaact gcacttacag tgaccgaggt tcccagtcct tcttctggta cagacaatat 180
tctgggaaaa gccctgagtt gataatgttc atatactcca atggtgacaa agaagatgga 240
aggtttacag cacagctcaa taaagccagc cagtatgttt ctctgctcat cagagactcc 300
cagcccagtg attcagccac ctacctctgt gccgtgaacc tcctaggggc tacaggatac 360
agcaccctca cctttgggaa ggggactatg cttctagtct ctccagat 408
<210> 92
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1野生型
Vα
<400> 92
atgtggggag ttttccttct ttatgtttcc atgaagatgg gaggcactac aggacaaaac 60
attgaccagc ccactgagat gacagctacg gaaggtgcca ttgtccagat caactgcacg 120
taccagacat ctgggttcaa cgggctgttc tggtaccagc aacatgctgg cgaagcaccc 180
acatttctgt cttacaatgt tctggatggt ttggaggaga aaggtcgttt ttcttcattc 240
cttagtcggt ctaaagggta cagttacctc cttttgaagg agctccagat gaaagactct 300
gcctcttacc tctgtgctgt gaggggcatt aacgactaca agctcagctt tggagccgga 360
accacagtaa ctgtaagagc aaat 384
<210> 93
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1野生型
Vα
<400> 93
atggagaaaa tgttggagtg tgcattcata gtcttgtggc ttcagcttgg ctggttgagt 60
ggagaagacc aggtgacgca gagtcccgag gccctgagac tccaggaggg agagagtagc 120
agtctcaact gcagttacac agtcagcggt ttaagagggc tgttctggta taggcaagat 180
cctgggaaag gccctgaatt cctcttcacc ctgtattcag ctggggaaga aaaggagaaa 240
gaaaggctaa aagccacatt aacaaagaag gaaagctttc tgcacatcac agcccctaaa 300
cctgaagact cagccactta tctctgtgct gtgatcacag gctttcagaa acttgtattt 360
ggaactggca cccgacttct ggtcagtcca aat 393
<210> 94
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2野生型
Vα
<400> 94
atgaggctgg tggcaagagt aactgtgttt ctgacctttg gaactataat tgatgctaag 60
accacccagc ccacctccat ggattgcgct gaaggaagag ctgcaaacct gccttgtaat 120
cactctacca tcagtggaaa tgagtatgtg tattggtatc gacagattca ctcccagggg 180
ccacagtata tcattcatgg tctaaaaaac aatgaaacca atgaaatggc ctctctgatc 240
atcacagaag acagaaagtc cagcaccttg atcctgcccc acgctacgct gagagacact 300
gctgtgtact attgcatcgc cggtgtcggg cggggtcaga attttgtctt tggtcccgga 360
accagattgt ccgtgctgcc ctat 384
<210> 95
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1野生型
Vα
<400> 95
atggagaaga atcctttggc agccccatta ctaatcctct ggtttcatct tgactgcgtg 60
agcagcatac tgaacgtgga acaaagtcct cagtcactgc atgttcagga gggagacagc 120
accaatttca cctgcagctt cccttccagc aatttttatg ccttacactg gtacagatgg 180
gaaactgcaa aaagccccga ggccttgttt gtaatgactt taaatgggga tgaaaagaag 240
aaaggacgaa taagtgccac tcttaatacc aaggagggtt acagctattt gtacatcaaa 300
ggatcccagc ctgaagactc agccacatac ctctgtgcct ttcatcctaa ctttggaaat 360
gagaaattaa cctttgggac tggaacaaga ctcaccatca tacccaat 408
<210> 96
<211> 411
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1野生型
Vα
<400> 96
atggagaaaa tgttggagtg tgcattcata gtcttgtggc ttcagcttgg ctggttgagt 60
ggagaagacc aggtgacgca gagtcccgag gccctgagac tccaggaggg agagagtagc 120
agtctcaact gcagttacac agtcagcggt ttaagagggc tgttctggta taggcaagat 180
cctgggaaag gccctgaatt cctcttcacc ctgtattcag ctggggaaga aaaggagaaa 240
gaaaggctaa aagccacatt aacaaagaag gaaagctttc tgcacatcac agcccctaaa 300
cctgaagact cagccactta tctctgtgct gtgcagccgc ggggggatgg gtctagcaac 360
acaggcaaac taatctttgg gcaagggaca actttacaag taaaaccaga t 411
<210> 97
<211> 396
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - Vα密码子优化
<400> 97
atggagacac tgctgggact actgattctg tggctgcaac tgcaatgggt gagcagcaaa 60
caggaggtta cccagattcc tgctgctctg tctgttcctg aaggcgagaa tctggtgctg 120
aactgcagct tcacagatag cgccatctac aacctgcagt ggttcagaca ggatcctgga 180
aaaggcctga caagcctgct gctgattcag agctctcaga gagagcagac atctggaaga 240
ctgaatgcta gcctggacaa gtctagcggc agaagcaccc tgtatattgc cgcctctcaa 300
cctggagatt ctgccacata cctgtgtgct gtgaaggaga catctggctc tagactgacc 360
tttggcgagg gaacacaact gaccgtgaat cctgac 396
<210> 98
<211> 417
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - Vα密码子优化
<400> 98
atgaccagag ttagcctgtt atgggctgtg gtggtgagca catgtctgga atctggaatg 60
gcccagacag tgacacagtc tcagcctgaa atgtctgtgc aggaagccga aaccgttaca 120
ctgagctgca cctacgatac aagcgagaac aactactacc tgttctggta caagcagccc 180
ccctctaggc agatgatcct ggtgatcaga caggaggcct ataaacagca gaatgccaca 240
gagaaccggt tcagcgtgaa cttccagaaa gccgccaaga gcttcagcct gaagatctct 300
gattctcagc tgggcgatac agccatgtac ttttgcgcct tcatctaccc cagctacaca 360
agcggcacat acaagtacat cttcggcacc ggcacaagac tgaaggttct ggccaac 417
<210> 99
<211> 420
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - Vα密码子优化
<400> 99
atggccatgt tactaggagc gagcgtgctg attctgtggt tacagcctga ttgggtgaac 60
tctcagcaga agaacgatga tcagcaggtg aagcagaaca gcccctctct gtctgtgcag 120
gaaggcagaa tcagcatcct gaattgcgat tacaccaaca gcatgttcga ctacttcctg 180
tggtacaaga agtaccccgc cgagggccct acctttctga tcagcatctc tagcatcaag 240
gacaagaacg aagatggcag attcaccgtg ttcctgaaca agagcgccaa gcacctgagc 300
ctgcacattg tgccttctca acctggagat tctgccgtgt acttttgtgc tgcctctgga 360
acaggcggaa gctatatccc cacatttgga agaggaacaa gcctgatcgt gcacccttac 420
<210> 100
<211> 417
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - Vα密码子优化
<400> 100
atggccatgt tactaggagc gagcgtgctg attctgtggt tacagcctga ttgggtgaac 60
tctcagcaga agaacgatga tcagcaggtg aagcagaaca gcccctctct gtctgtgcag 120
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tggtacaaga agtaccccgc cgagggccct acctttctga tcagcatctc tagcatcaag 240
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attggcgact acaaactgag ctttggagcc ggcacaacag tgaccgttag agccaat 417
<210> 101
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - Vα密码子优化
<400> 101
atggtgaaga tccggcagtt cctcctggct attctgtggc tgcaactgtc ttgtgtgtct 60
gctgccaaga atgaagtgga gcagtctccc cagaacctta cagcccagga aggcgagttt 120
atcaccatca actgcagcta ttctgtgggc attagcgccc tgcattggct gcagcaacac 180
cctggaggag gaattgtgtc tctgtttatg ctgtcttctg gcaagaagaa gcacggccgg 240
ctgattgcca ccatcaacat ccaggagaag cactcttctc tgcacattac agcctctcat 300
cccagggatt ctgccgtgta catctgtgcc gtgagaacca gctacgataa ggtgattttc 360
ggaccaggca cctctctgag cgtgatcccc aat 393
<210> 102
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - Vα密码子优化
<400> 102
atgaagagcc tgagagtcct gctggtgatt ttgtggctgc agctgtcttg ggtttggtct 60
cagcagaaag aagtggagca gaatagcggc cctctgtctg ttcctgaagg cgctattgct 120
agcctgaatt gcacatacag cgatagagga tctcagagct tcttctggta ccggcagtac 180
agcggcaaga gcccagaact gatcatgttc atctacagca atggcgacaa ggaggatggc 240
aggtttacag cccagctgaa caaggccagc cagtatgttt ctctgctgat cagagatagc 300
cagcctagcg attctgccac ctacctgtgt gccgtgaact tacttggagc tacaggatac 360
tctacactga ccttcggcaa aggcaccatg ctgctggtga gccctgat 408
<210> 103
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - Vα密码子优化
<400> 103
atgtggggcg ttttccttct gtatgtgagc atgaagatgg gcggcacaac aggccagaac 60
atcgatcagc ctaccgagat gacagccaca gaaggagcta ttgttcagat caactgcacc 120
taccagacaa gcggcttcaa cggcctgttc tggtaccagc agcatgctgg agaagctcct 180
acatttctga gctacaatgt gctggatggc ctggaggaga aaggcaggtt tagcagcttc 240
ctgagcaggt ctaagggcta ttcttatctg ctgctgaagg agctgcagat gaaggattcc 300
gccagctacc tgtgtgccgt taggggcatc aatgattaca agctgagctt tggagccgga 360
acaacagtga ccgtgagagc caac 384
<210> 104
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - Vα密码子优化
<400> 104
atggagaaga tgctggagtg tgcgttcatc gttctgtggc tgcaacttgg atggctgtct 60
ggagaggatc aggttacaca gtctcctgaa gccctgagac tgcaagaagg agaaagctct 120
agcctgaact gcagctacac agtgtctgga ctgagaggcc tgttctggta cagacaggat 180
cctggaaaag gcccagagtt cctgtttacc ctgtattctg ccggcgagga gaaggagaaa 240
gagagactga aagctaccct gaccaagaag gagagcttcc tgcacattac cgcccccaaa 300
cctgaggatt ctgccacata tctgtgtgcc gtgattaccg gctttcagaa gctggtgttt 360
ggcacaggca ccagactgct ggtttctccc aat 393
<210> 105
<211> 384
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - Vα密码子优化
<400> 105
atgagactgg tggcacgcgt aactgtgttt ctgacctttg gcaccatcat cgatgccaag 60
acaacccagc ctacaagcat ggactgtgcc gagggaagag ctgctaatct gccatgtaat 120
cacagcacaa tcagcggcaa cgagtacgtg tactggtacc ggcagatcca ctctcaagga 180
cctcagtaca tcattcatgg cctgaagaac aacgagacca acgagatggc cagcctgatc 240
atcaccgagg acaggaagtc ttctaccctg attctgcctc atgctacact gagagatacc 300
gccgtgtact actgcattgc cggagtggga agaggccaga atttcgtgtt tggacctgga 360
acaagactga gcgttctgcc ctat 384
<210> 106
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - Vα密码子优化
<400> 106
atggagaaga accccttggc agcacctctg cttattctgt ggttccacct ggattgtgtg 60
agcagcatcc tgaatgtgga gcagtctcct cagagcctgc atgtgcaaga aggcgatagc 120
accaatttca cctgcagctt tccaagcagc aacttctacg ccctgcactg gtacagatgg 180
gaaaccgcca aatctcctga agccctgttt gtgatgaccc tgaatggcga cgagaagaag 240
aagggcagaa ttagcgccac cctgaatacc aaggagggct acagctacct gtacatcaag 300
ggctctcaac ctgaggattc tgccacctac ctttgcgcct ttcaccccaa tttcggcaac 360
gagaaactga cctttggaac cggaacaagg ctgaccatca tccccaac 408
<210> 107
<211> 411
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - Vα密码子优化
<400> 107
atggagaaga tgctggagtg tgcgttcatc gttctgtggc tgcaacttgg atggctgtct 60
ggagaggatc aggttacaca gtctcctgaa gccctgagac tgcaagaagg agaaagctct 120
agcctgaact gcagctacac agtgtctgga ctgagaggcc tgttctggta cagacaggat 180
cctggaaaag gcccagagtt cctgtttacc ctgtattctg ccggcgagga gaaggagaaa 240
gagagactga aagctaccct gaccaagaag gagagcttcc tgcacattac cgcccccaaa 300
cctgaggatt ctgccacata tctgtgtgct gttcagccta gaggagatgg ctctagcaat 360
accggcaagc tgatctttgg ccagggaaca acactgcagg tgaagcctga t 411
<210> 108
<211> 528
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - Cβ密码子优化
<400> 108
gatctgaaca aggtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg agccttctga ggccgagatc 60
tcccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg gctttttccc cgaccacgtg 120
gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcactccg gcgtgtgcac cgatccccag 180
cctctgaaag aacagcccgc cctgaacgac agccggtact gcctgagcag cagactgaga 240
gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca gatgccaggt gcagttctac 300
ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gacagagcca agcccgtgac acagatcgtg 360
tctgccgaag cctggggcag agccgattgc ggctttacct ccgtgtccta tcagcagggc 420
gtgctgagcg ccacaatcct gtacgagatc ctgctgggca aggccaccct gtacgccgtg 480
ctggtgtctg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga aggacttc 528
<210> 109
<211> 534
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - Cβ密码子优化
<400> 109
gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg agcctagcga ggccgagatc 60
agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg gcttttaccc cgaccacgtg 120
gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg gcgtctgcac cgacccccag 180
cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact gtctgagcag cagactgaga 240
gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca gatgccaggt gcagttctac 300
ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca agcccgtgac ccagatcgtg 360
tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca gcgagagcta ccagcagggc 420
gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca aggccaccct gtacgccgtg 480
ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga aggacagccg gggc 534
<210> 110
<211> 423
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - Cα密码子优化
<400> 110
atccagaatc ccgatcctgc tgtgtaccag ctgcgggaca gcaagagcag cgacaagagc 60
gtgtgcctgt tcaccgactt cgacagccag accaacgtgt cccagagcaa ggacagcgac 120
gtgtacatca ccgataagtg cgtgctggac atgcggagca tggacttcaa gagcaacagc 180
gccgtggcct ggtccaacaa gagcgacttc gcctgcgcca acgccttcaa caacagcatt 240
atccccgagg acacattctt cccaagcccc gagagcagct gcgacgtgaa gctggtggaa 300
aagagcttcg agacagacac caacctgaac ttccagaacc tcagcgtgat cggcttccgg 360
atcctgctgc tgaaggtggc cggcttcaac ctgctgatga ccctgcggct gtggtccagc 420
tga 423
<210> 111
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 野生型β链 (TCRBV7-6 01 / TCRBJ2-7 01)
<400> 111
atgggcacca gtctcctatg ctgggtggtc ctgggtttcc tagggacaga tcacacaggt 60
gctggagtct cccagtctcc caggtacaaa gtcacaaaga ggggacagga tgtagctctc 120
aggtgtgatc caatttcggg tcatgtatcc ctttattggt accgacaggc cctggggcag 180
ggcccagagt ttctgactta cttcaattat gaagcccaac aagacaaatc agggctgccc 240
aatgatcggt tctctgcaga gaggcctgag ggatccatct ccactctgac gatccagcgc 300
acagagcagc gggactcggc catgtatcgc tgtgccagca gcctgacagg gtcctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acctgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga ggctag 936
<210> 112
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 野生型β链 (TCRBV20-1 02 / TCRBJ2-7 01)
<400> 112
atgctgctgc ttctgctgct tctggggcca gcaggctccg ggcttggtgc tgtcgtctct 60
caacatccga gctgggttat ctgtaagagt ggaacctctg tgaagatcga gtgccgttcc 120
ctggactttc aggccacaac tatgttttgg tatcgtcagt tcccgaaaca gagtctcatg 180
ctgatggcaa cttccaatga gggctccaag gccacatacg agcaaggcgt cgagaaggac 240
aagtttctca tcaaccatgc aagcctgacc ttgtccactc tgacagtgac cagtgcccat 300
cctgaagaca gcagcttcta catctgcagt gcaaccccgg aggctagtag cccctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acctgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga ggctag 936
<210> 113
<211> 930
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 野生型β链 (TCRBV15 02 / TCRBJ1-5 01)
<400> 113
atgggtcctg ggcttctcca ctggatggcc ctttgtctcc ttggaacagg tcatggggat 60
gccatggtca tccagaaccc aagataccag gttacccagt ttggaaagcc agtgaccctg 120
agttgttctc agactttgaa ccataacgtc atgtactggt accagcagaa gtcaagtcag 180
gccccaaagc tgctgttcca ctactatgac aaagatttta acaatgaagc agacacccct 240
gataacttcc aatccaggag gccgaacact tctttctgct ttcttgacat ccgctcacca 300
ggcctggggg acgcagccat gtacctgtgt gccaccagca accttcaggg gcgacagccc 360
cagcattttg gtgatgggac tcgactctcc atcctagagg acctgaacaa ggtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttcttcccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcacg gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acccgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gctttacctc ggtgtcctac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatcc tgctagggaa ggccaccctg tatgctgtgc tggtcagcgc ccttgtgttg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggatttctga 930
<210> 114
<211> 966
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 野生型β链 (TCRBV13 01 / TCRBJ2-5 01)
<400> 114
atgcttagtc ctgacctgcc tgactctgcc tggaacacca ggctcctctg ccatgtcatg 60
ctttgtctcc tgggagcagt ttcagtggct gctggagtca tccagtcccc aagacatctg 120
atcaaagaaa agagggaaac agccactctg aaatgctatc ctatccctag acacgacact 180
gtctactggt accagcaggg tccaggtcag gacccccagt tcctcatttc gttttatgaa 240
aagatgcaga gcgataaagg aagcatccct gatcgattct cagctcaaca gttcagtgac 300
tatcattctg aactgaacat gagctccttg gagctggggg actcagccct gtacttctgt 360
gccagcagcc tccggttggg gcgagagacc cagtacttcg ggccaggcac gcggctcctg 420
gtgctcgagg acctgaaaaa cgtgttccca cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa 480
gcagagatct cccacaccca aaaggccaca ctggtgtgcc tggccacagg cttctacccc 540
gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca 600
gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc 660
cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc 720
cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag tggacccagg atagggccaa acctgtcacc 780
cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac 840
cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg 900
tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga 960
ggctag 966
<210> 115
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 野生型β链 (TRAJ50 01 / TRBJ2-7 01)
<400> 115
atgggcacca ggctcctctg ctgggtggtc ctgggtttcc tagggacaga tcacacaggt 60
gctggagtct cccagtcccc taggtacaaa gtcgcaaaga gaggacagga tgtagctctc 120
aggtgtgatc caatttcggg tcatgtatcc cttttttggt accaacaggc cctggggcag 180
gggccagagt ttctgactta tttccagaat gaagctcaac tagacaaatc ggggctgccc 240
agtgatcgct tctttgcaga aaggcctgag ggatccgtct ccactctgaa gatccagcgc 300
acacagcagg aggactccgc cgtgtatctc tgtgccagca gcctgggaca ggcctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acctgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga ggctag 936
<210> 116
<211> 930
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 野生型β链 (TCRBV11-3 01 / TCRBJ1 1 01)
<400> 116
atgggtacca ggctcctctg ctgggtggcc ttctgtctcc tggtggaaga actcatagaa 60
gctggagtgg ttcagtctcc cagatataag attatagaga aaaaacagcc tgtggctttt 120
tggtgcaatc ctatttctgg ccacaatacc ctttactggt acctgcagaa cttgggacag 180
ggcccggagc ttctgattcg atatgagaat gaggaagcag tagacgattc acagttgcct 240
aaggatcgat tttctgcaga gaggctcaaa ggagtagact ccactctcaa gatccagcct 300
gcagagcttg gggactcggc cgtgtatctc tgtgccagca gcctaaccag gggggctgaa 360
gctttctttg gacaaggcac cagactcaca gttgtagagg acctgaacaa ggtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttcttcccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcacg gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acccgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gctttacctc ggtgtcctac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatcc tgctagggaa ggccaccctg tatgctgtgc tggtcagcgc ccttgtgttg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggatttctga 930
<210> 117
<211> 933
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 野生型β链 (TRBV19 01 / TRBJ1-6 02)
<400> 117
atgagcaacc aggtgctctg ctgtgtggtc ctttgtttcc tgggagcaaa caccgtggat 60
ggtggaatca ctcagtcccc aaagtacctg ttcagaaagg aaggacagaa tgtgaccctg 120
agttgtgaac agaatttgaa ccacgatgcc atgtactggt accgacagga cccagggcaa 180
gggctgagat tgatctacta ctcacagata gtaaatgact ttcagaaagg agatatagct 240
gaagggtaca gcgtctctcg ggagaagaag gaatcctttc ctctcactgt gacatcggcc 300
caaaagaacc cgacagcttt ctatctctgt gccagtagta gagacaggga gcaagaatca 360
cccctccact ttgggaacgg gaccaggctc actgtgacag aggacctgaa caaggtgttc 420
ccacccgagg tcgctgtgtt tgagccatca gaagcagaga tctcccacac ccaaaaggcc 480
acactggtgt gcctggccac aggcttcttc cccgaccacg tggagctgag ctggtgggtg 540
aatgggaagg aggtgcacag tggggtcagc acggacccgc agcccctcaa ggagcagccc 600
gccctcaatg actccagata ctgcctgagc agccgcctga gggtctcggc caccttctgg 660
cagaaccccc gcaaccactt ccgctgtcaa gtccagttct acgggctctc ggagaatgac 720
gagtggaccc aggatagggc caaacccgtc acccagatcg tcagcgccga ggcctggggt 780
agagcagact gtggctttac ctcggtgtcc taccagcaag gggtcctgtc tgccaccatc 840
ctctatgaga tcctgctagg gaaggccacc ctgtatgctg tgctggtcag cgcccttgtg 900
ttgatggcca tggtcaagag aaaggatttc tga 933
<210> 118
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 野生型β链 (TCRBV27 01 / TCRBJ2-7 01)
<400> 118
atgggccccc agctccttgg ctatgtggtc ctttgccttc taggagcagg ccccctggaa 60
gcccaagtga cccagaaccc aagatacctc atcacagtga ctggaaagaa gttaacagtg 120
acttgttctc agaatatgaa ccatgagtat atgtcctggt atcgacaaga cccagggctg 180
ggcttaaggc agatctacta ttcaatgaat gttgaggtga ctgataaggg agatgttcct 240
gaagggtaca aagtctctcg aaaagagaag aggaatttcc ccctgatcct ggagtcgccc 300
agccccaacc agacctctct gtacttctgt gccagcagtt ttagcggggg aacctacgag 360
cagtacttcg ggccgggcac caggctcacg gtcacagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtgtgcc tggccacagg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acctgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga ggctag 936
<210> 119
<211> 969
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 野生型β链 (TRBV13 01 / TRBJ2-7 01)
<400> 119
atgcttagtc ctgacctgcc tgactctgcc tggaacacca ggctcctctg ccatgtcatg 60
ctttgtctcc tgggagcagt ttcagtggct gctggagtca tccagtcccc aagacatctg 120
atcaaagaaa agagggaaac agccactctg aaatgctatc ctatccctag acacgacact 180
gtctactggt accagcaggg tccaggtcag gacccccagt tcctcatttc gttttatgaa 240
aagatgcaga gcgataaagg aagcatccct gatcgattct cagctcaaca gttcagtgac 300
tatcattctg aactgaacat gagctccttg gagctggggg actcagccct gtacttctgt 360
gccagcagct acagaggggg ctctacgtac gagcagtact tcgggccggg caccaggctc 420
acggtcacag aggacctgaa aaacgtgttc ccacccgagg tcgctgtgtt tgagccatca 480
gaagcagaga tctcccacac ccaaaaggcc acactggtgt gcctggccac aggcttctac 540
cccgaccacg tggagctgag ctggtgggtg aatgggaagg aggtgcacag tggggtcagc 600
acagacccgc agcccctcaa ggagcagccc gccctcaatg actccagata ctgcctgagc 660
agccgcctga gggtctcggc caccttctgg cagaaccccc gcaaccactt ccgctgtcaa 720
gtccagttct acgggctctc ggagaatgac gagtggaccc aggatagggc caaacctgtc 780
acccagatcg tcagcgccga ggcctggggt agagcagact gtggcttcac ctccgagtct 840
taccagcaag gggtcctgtc tgccaccatc ctctatgaga tcttgctagg gaaggccacc 900
ttgtatgccg tgctggtcag tgccctcgtg ctgatggcca tggtcaagag aaaggattcc 960
agaggctag 969
<210> 120
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 野生型β链 (TCRBV11-1 01 / TCRBJ1 4 01)
<400> 120
atgagcacca ggcttctctg ctggatggcc ctctgtctcc tgggggcaga actctcagaa 60
gctgaagttg cccagtcccc cagatataag attacagaga aaagccaggc tgtggctttt 120
tggtgtgatc ctatttctgg ccatgctacc ctttactggt accggcagat cctgggacag 180
ggcccggagc ttctggttca atttcaggat gagagtgtag tagatgattc acagttgcct 240
aaggatcgat tttctgcaga gaggctcaaa ggagtagact ccactctcaa gatccagcct 300
gcagagcttg gggactcggc catgtatctc tgtgccagca gccaacggga cagcccaaat 360
gaaaaactgt tttttggcag tggaacccag ctctctgtct tggaggacct gaacaaggtg 420
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 480
gccacactgg tgtgcctggc cacaggcttc ttccccgacc acgtggagct gagctggtgg 540
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacggacc cgcagcccct caaggagcag 600
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtctc ggccaccttc 660
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 720
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 780
ggtagagcag actgtggctt tacctcggtg tcctaccagc aaggggtcct gtctgccacc 840
atcctctatg agatcctgct agggaaggcc accctgtatg ctgtgctggt cagcgccctt 900
gtgttgatgg ccatggtcaa gagaaaggat ttctga 936
<210> 121
<211> 939
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 野生型β链 (TCRBV4-3 01 / TCRBJ1-3 01)
<400> 121
atgggctgca ggctgctctg ctgtgcggtt ctctgtctcc tgggagcggt ccccatggaa 60
acgggagtta cgcagacacc aagacacctg gtcatgggaa tgacaaataa gaagtctttg 120
aaatgtgaac aacatctggg tcataacgct atgtattggt acaagcaaag tgctaagaag 180
ccactggagc tcatgtttgt ctacagtctt gaagaacggg ttgaaaacaa cagtgtgcca 240
agtcgcttct cacctgaatg ccccaacagc tctcacttat tccttcacct acacaccctg 300
cagccagaag actcggccct gtatctctgc gccagcagcc aagatccgta caagctctct 360
ggaaacacca tatattttgg agagggaagt tggctcactg ttgtagagga cctgaacaag 420
gtgttcccac ccgaggtcgc tgtgtttgag ccatcagaag cagagatctc ccacacccaa 480
aaggccacac tggtgtgcct ggccacaggc ttcttccccg accacgtgga gctgagctgg 540
tgggtgaatg ggaaggaggt gcacagtggg gtcagcacgg acccgcagcc cctcaaggag 600
cagcccgccc tcaatgactc cagatactgc ctgagcagcc gcctgagggt ctcggccacc 660
ttctggcaga acccccgcaa ccacttccgc tgtcaagtcc agttctacgg gctctcggag 720
aatgacgagt ggacccagga tagggccaaa cccgtcaccc agatcgtcag cgccgaggcc 780
tggggtagag cagactgtgg ctttacctcg gtgtcctacc agcaaggggt cctgtctgcc 840
accatcctct atgagatcct gctagggaag gccaccctgt atgctgtgct ggtcagcgcc 900
cttgtgttga tggccatggt caagagaaag gatttctga 939
<210> 122
<211> 974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - 密码子优化的β链
<400> 122
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca tctcttctct 60
gttgggtggt tctgggcttt ctgggcacag atcatacagg agctggagtt agccagtctc 120
ctaggtataa ggtgaccaag aggggacagg atgtggctct gagatgtgac cctattagcg 180
gacatgtgag cctgtactgg tacagacaag ctctgggaca aggacccgag tttctgacct 240
acttcaacta tgaggcccag caggacaaat ctggactgcc caacgacaga ttcagcgccg 300
aaagaccaga aggctctatt agcacactga ccatccagag aacagagcag agggattctg 360
ccatgtacag atgcgccagc agcttaacag gctcttacga gcagtacttt ggacctggca 420
caagactgac agtgacagag gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg 600
gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca 840
gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggc 974
<210> 123
<211> 974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - 密码子优化的β链
<400> 123
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgctt cttctcctcc 60
ttctcggacc tgctggatct ggattaggag ctgttgtgtc tcagcaccct tcttgggtga 120
tctgtaaaag cggcacaagc gtgaagatcg agtgcagaag cctggacttt caggccacaa 180
ccatgttctg gtataggcag ttccccaagc agtctctgat gctgatggcc acctctaatg 240
agggctctaa ggccacatat gaacagggag tggagaagga caagttcctg atcaaccacg 300
cctctctgac cctgtctacc ctgacagtta catctgccca ccctgaggat agcagctttt 360
acatctgtag cgccacacct gaagcctcta gcccatatga gcagtacttt ggccctggca 420
ccagattaac agtgacagag gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg 600
gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca 840
gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggc 974
<210> 124
<211> 968
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - 密码子优化的β链
<400> 124
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggacct ggactgcttc 60
attggatggc tctgtgtttg ctgggaacag gacatggaga tgctatggtg atccagaacc 120
ccaggtatca ggtgacccag tttggcaaac cagtgacact gagctgttct cagaccctga 180
accacaacgt gatgtactgg taccagcaga agtcttctca ggcccctaag ctgctgttcc 240
actactacga caaggacttc aacaacgagg ccgatacccc tgacaatttc cagagcagga 300
ggcccaatac cagcttctgt ttcctggaca ttagaagccc tggactggga gatgctgcca 360
tgtacctgtg tgccaccagc aatttacagg gaagacaacc tcagcacttt ggcgatggca 420
caaggctgtc tatcctggag gatctgaaca aggtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agccttctga ggccgagatc tcccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gctttttccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcactccg 600
gcgtgtgcac cgatccccag cctctgaaag aacagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gcctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gacagagcca 780
agcccgtgac acagatcgtg tctgccgaag cctggggcag agccgattgc ggctttacct 840
ccgtgtccta tcagcagggc gtgctgagcg ccacaatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtctg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacttc 968
<210> 125
<211> 1004
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - 密码子优化的β链
<400> 125
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgagc cctgatctcc 60
ctgattctgc ctggaatacc agactgctgt gtcatgtgat gctgtgtctg cttggagccg 120
tttctgtggc tgctggcgtg attcaatctc ctagacacct gatcaaggag aagagagaaa 180
cagccaccct gaagtgctac cccatcccca gacacgatac agtgtactgg tatcagcaag 240
gacctggaca agatccccag ttcctgatca gcttctacga gaagatgcag agcgacaaag 300
gcagcatccc agacagattt agcgcccagc agtttagcga ctatcactct gagctgaaca 360
tgagcagcct ggaactgggc gattctgctc tgtacttctg tgcctcttct ctgagactgg 420
gaagagaaac ccagtacttt ggacccggca caagactgct ggttcttgag gacctgaaga 480
acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg agcctagcga ggccgagatc agccacaccc 540
agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt 600
ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag 660
agcagcccgc cctgaacgac agccggtact gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca 720
ccttctggca gaacccccgg aaccacttca gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg 780
agaacgacga gtggacccag gaccgggcca agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg 840
cctggggcag agccgattgc ggcttcacca gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg 900
ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg 960
ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga aggacagccg gggc 1004
<210> 126
<211> 974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - 密码子优化的β链
<400> 126
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca agacttctct 60
gctgggtggt gcttggattt ctgggcacag atcatacagg agctggagtt agccagtctc 120
ctaggtacaa agtggccaag agaggacagg atgtggctct gagatgtgac cctattagcg 180
gacatgtgag cctgttttgg taccagcaag ctctgggaca aggacccgag tttctgacct 240
acttccagaa tgaagcccag ctggataaat ctggactgcc tagcgaccgg ttcttcgccg 300
aaagacctga aggatctgtt agcaccctga agattcagag aacacagcag gaggactctg 360
ccgtgtacct gtgtgcctct tctttaggac aggcctatga gcagtatttt ggacctggca 420
ccagactgac cgtgacagag gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg 600
gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca 840
gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggc 974
<210> 127
<211> 968
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - 密码子优化的β链
<400> 127
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca agacttctct 60
gctgggtggc cttttgtctg ctggtggaag agctgattga agctggagtt gtgcagtctc 120
ctaggtacaa gatcatcgag aagaagcagc ccgtggcctt ctggtgtaat cccatttctg 180
gccacaacac cctgtactgg tatctgcaga atctgggaca gggccctgaa ctgctgatca 240
gatacgagaa cgaagaagcc gtggacgatt ctcaactgcc taaggaccgc ttttctgccg 300
agaggctgaa aggagtggat tctaccctga agatccaacc tgctgaactg ggcgattctg 360
ctgtgtacct gtgcgcttct agcctgacaa gaggagctga agcctttttt ggacagggca 420
caagactgac agtggtggag gatctgaaca aggtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agccttctga ggccgagatc tcccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gctttttccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcactccg 600
gcgtgtgcac cgatccccag cctctgaaag aacagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gcctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gacagagcca 780
agcccgtgac acagatcgtg tctgccgaag cctggggcag agccgattgc ggctttacct 840
ccgtgtccta tcagcagggc gtgctgagcg ccacaatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtctg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacttc 968
<210> 128
<211> 971
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - 密码子优化的β链
<400> 128
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgagcaac caggtcttgt 60
gctgtgtggt gctgtgcttt cttggcgcca atacagtgga tggcggcatt acacaaagcc 120
ccaagtacct gttcaggaaa gagggccaga atgtgacact gagctgtgag cagaacctga 180
atcacgacgc catgtactgg tacagacagg atccaggaca aggactgagg ctgatctact 240
actcccagat cgtgaacgac ttccagaagg gcgatattgc cgagggctat agcgtgagca 300
gagagaagaa agagagcttc ccactgacag tgacatctgc ccagaagaac cctaccgcct 360
tctacctgtg tgcctcttct agagatagag agcaggagtc tcctctgcac ttcggaaatg 420
gcaccagact gacagtgacc gaggatctga acaaggtgtt ccccccagag gtggccgtgt 480
tcgagccttc tgaggccgag atctcccaca cccagaaagc caccctcgtg tgcctggcca 540
ccggcttttt ccccgaccac gtggaactgt cttggtgggt caacggcaaa gaggtgcact 600
ccggcgtgtg caccgatccc cagcctctga aagaacagcc cgccctgaac gacagccggt 660
actgcctgag cagcagactg agagtgtccg ccaccttctg gcagaacccc cggaaccact 720
tcagatgcca ggtgcagttc tacggcctga gcgagaacga cgagtggacc caggacagag 780
ccaagcccgt gacacagatc gtgtctgccg aagcctgggg cagagccgat tgcggcttta 840
cctccgtgtc ctatcagcag ggcgtgctga gcgccacaat cctgtacgag atcctgctgg 900
gcaaggccac cctgtacgcc gtgctggtgt ctgccctggt gctgatggcc atggtcaagc 960
ggaaggactt c 971
<210> 129
<211> 974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - 密码子优化的β链
<400> 129
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggacct cagcttcttg 60
gatacgttgt gctgtgtctg cttggagctg gacctcttga agctcaggtt acccagaacc 120
ccagatacct gattaccgtg acaggcaaaa agctgaccgt gacatgtagc cagaacatga 180
accacgagta catgagctgg taccggcagg atcctggatt aggcctgaga cagatctact 240
acagcatgaa cgtggaggtg accgataaag gcgacgtgcc tgagggatac aaggtgagca 300
gaaaggagaa gaggaatttc cccctgatcc tggaaagccc aagccccaat cagacaagcc 360
tgtacttttg tgccagcagc ttttctggcg gcacatatga gcagtacttc ggccctggca 420
caagactgac agttacagag gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg 600
gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca 840
gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggc 974
<210> 130
<211> 1007
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - 密码子优化的β链
<400> 130
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgagc cctgatctcc 60
ctgattctgc ctggaatacc agactgctgt gtcatgtgat gctgtgtctg cttggagccg 120
tttctgtggc tgctggcgtg attcaatctc ctagacacct gatcaaggag aagagagaaa 180
cagccaccct gaagtgctac cccatcccca gacacgatac agtgtactgg tatcagcaag 240
gacctggaca agatccccag ttcctgatca gcttctacga gaagatgcag agcgacaaag 300
gcagcatccc agacagattt agcgcccagc agtttagcga ctatcactct gagctgaaca 360
tgagcagcct ggaactgggc gattctgctc tgtacttctg tgccagcagc tatagaggag 420
gcagcacata tgagcagtac tttggccctg gcacaagact gacagtgaca gaggacctga 480
agaacgtgtt ccccccagag gtggccgtgt tcgagcctag cgaggccgag atcagccaca 540
cccagaaagc caccctcgtg tgcctggcca ccggctttta ccccgaccac gtggaactgt 600
cttggtgggt caacggcaaa gaggtgcaca gcggcgtctg caccgacccc cagcccctga 660
aagagcagcc cgccctgaac gacagccggt actgtctgag cagcagactg agagtgtccg 720
ccaccttctg gcagaacccc cggaaccact tcagatgcca ggtgcagttc tacggcctga 780
gcgagaacga cgagtggacc caggaccggg ccaagcccgt gacccagatc gtgtctgctg 840
aggcctgggg cagagccgat tgcggcttca ccagcgagag ctaccagcag ggcgtgctga 900
gcgccaccat cctgtacgag atcctgctgg gcaaggccac cctgtacgcc gtgctggtgt 960
ccgccctggt gctgatggcc atggtcaagc ggaaggacag ccggggc 1007
<210> 131
<211> 974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - 密码子优化的β链
<400> 131
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgagcacc agactccttt 60
gctggatggc tttgtgtctg cttggagctg agctgtctga agctgaagtt gcccagtctc 120
ccagatacaa gatcaccgag aaatctcagg ctgtggcctt ctggtgtgac cctatttctg 180
gacacgccac cctgtactgg tataggcaaa ttctgggaca aggccctgaa ctgctggtgc 240
aatttcagga tgagagcgtg gtggacgatt ctcaactgcc taaggacagg ttttctgccg 300
agcggctgaa aggagttgat agcaccctga agatccaacc tgctgaactg ggcgattctg 360
ctatgtacct gtgcgcctct tctcagagag atagccctaa cgagaagctg ttctttggct 420
ctggaaccca gctgtctgtg ctggaggatc tgaacaaggt gttcccccca gaggtggccg 480
tgttcgagcc ttctgaggcc gagatctccc acacccagaa agccaccctc gtgtgcctgg 540
ccaccggctt tttccccgac cacgtggaac tgtcttggtg ggtcaacggc aaagaggtgc 600
actccggcgt gtgcaccgat ccccagcctc tgaaagaaca gcccgccctg aacgacagcc 660
ggtactgcct gagcagcaga ctgagagtgt ccgccacctt ctggcagaac ccccggaacc 720
acttcagatg ccaggtgcag ttctacggcc tgagcgagaa cgacgagtgg acccaggaca 780
gagccaagcc cgtgacacag atcgtgtctg ccgaagcctg gggcagagcc gattgcggct 840
ttacctccgt gtcctatcag cagggcgtgc tgagcgccac aatcctgtac gagatcctgc 900
tgggcaaggc caccctgtac gccgtgctgg tgtctgccct ggtgctgatg gccatggtca 960
agcggaagga cttc 974
<210> 132
<211> 977
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - 密码子优化的β链
<400> 132
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggctgt agactgttgt 60
gttgtgctgt gctgtgtctg ttgggagctg tgcctatgga aacaggcgtt acccagacac 120
ctagacatct ggttatgggc atgaccaaca agaagagcct gaagtgcgag cagcatctgg 180
gccataacgc catgtactgg tataagcaga gcgccaagaa accactggaa ctgatgttcg 240
tgtacagcct ggaggagagg gtggagaata atagcgtgcc cagcagattt agccctgagt 300
gcccaaattc ttctcacctg ttcctgcacc tgcacacatt acagcccgag gattctgccc 360
tgtacctgtg tgcttcttct caagaccctt acaagctgag cggcaatacc atctacttcg 420
gcgaaggctc ttggctgaca gtggttgaag atctgaacaa ggtgttcccc ccagaggtgg 480
ccgtgttcga gccttctgag gccgagatct cccacaccca gaaagccacc ctcgtgtgcc 540
tggccaccgg ctttttcccc gaccacgtgg aactgtcttg gtgggtcaac ggcaaagagg 600
tgcactccgg cgtgtgcacc gatccccagc ctctgaaaga acagcccgcc ctgaacgaca 660
gccggtactg cctgagcagc agactgagag tgtccgccac cttctggcag aacccccgga 720
accacttcag atgccaggtg cagttctacg gcctgagcga gaacgacgag tggacccagg 780
acagagccaa gcccgtgaca cagatcgtgt ctgccgaagc ctggggcaga gccgattgcg 840
gctttacctc cgtgtcctat cagcagggcg tgctgagcgc cacaatcctg tacgagatcc 900
tgctgggcaa ggccaccctg tacgccgtgc tggtgtctgc cctggtgctg atggccatgg 960
tcaagcggaa ggacttc 977
<210> 133
<211> 819
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1野生型α链 (TRAV21 02 / TRAJ58 01)
<400> 133
atggagaccc tcttgggcct gcttatcctt tggctgcagc tgcaatgggt gagcagcaaa 60
caggaggtga cacagattcc tgcagctctg agtgtcccag aaggagaaaa cttggttctc 120
aactgcagtt tcactgatag cgctatttac aacctccagt ggtttaggca ggaccctggg 180
aaaggtctca catctctgtt gcttattcag tcaagtcaga gagagcaaac aagtggaaga 240
cttaatgcct cgctggataa atcatcagga cgtagtactt tatacattgc agcttctcag 300
cctggtgact cagccaccta cctctgtgct gtgaaagaaa ccagtggctc taggttgacc 360
tttggggaag gaacacagct cacagtgaat cctgatatcc agaaccctga ccctgccgtg 420
taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac cgattttgat 480
tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgatgtgt atatcacaga caaaactgtg 540
ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc aacagtgctg tggcctggag caacaaatct 600
gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac agcattattc cagaagacac cttcttcccc 660
agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac agatacgaac 720
ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg ttccgaatcc tcctcctgaa agtggccggg 780
tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg tccagctga 819
<210> 134
<211> 840
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2野生型α链 (TRAV38-1 01 / TRAJ40 01)
<400> 134
atgacacgag ttagcttgct gtgggcagtc gtggtctcca cctgtcttga atccggcatg 60
gcccagacag tcactcagtc tcaaccagag atgtctgtgc aggaggcaga gactgtgacc 120
ctgagttgca catatgacac cagtgagaat aattattatt tgttctggta caagcagcct 180
cccagcaggc agatgattct cgttattcgc caagaagctt ataagcaaca gaatgcaacg 240
gagaatcgtt tctctgtgaa cttccagaaa gcagccaaat ccttcagtct caagatctca 300
gactcacagc tgggggacac tgcgatgtat ttctgtgctt tcatctaccc atcctacacc 360
tcaggaacct acaaatacat ctttggaaca ggcaccaggc tgaaggtttt agcaaatatc 420
cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga caagtctgtc 480
tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg 540
tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag caacagtgct 600
gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt 660
ccagaagaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa 720
agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc 780
ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga 840
<210> 135
<211> 843
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1野生型α链 (TRAV29/DV5 01 / TRAJ6 01)
<400> 135
atggccatgc tcctgggggc atcagtgctg attctgtggc ttcagccaga ctgggtaaac 60
agtcaacaga agaatgatga ccagcaagtt aagcaaaatt caccatccct gagcgtccag 120
gaaggaagaa tttctattct gaactgtgac tatactaaca gcatgtttga ttatttccta 180
tggtacaaaa aataccctgc tgaaggtcct acattcctga tatctataag ttccattaag 240
gataaaaatg aagatggaag attcactgtc ttcttaaaca aaagtgccaa gcacctctct 300
ctgcacattg tgccctccca gcctggagac tctgcagtgt acttctgtgc agcaagcgga 360
acaggaggaa gctacatacc tacatttgga agaggaacca gccttattgt tcatccgtat 420
atccagaacc ctgaccctgc cgtgtaccag ctgagagact ctaaatccag tgacaagtct 480
gtctgcctat tcaccgattt tgattctcaa acaaatgtgt cacaaagtaa ggattctgat 540
gtgtatatca cagacaaaac tgtgctagac atgaggtcta tggacttcaa gagcaacagt 600
gctgtggcct ggagcaacaa atctgacttt gcatgtgcaa acgccttcaa caacagcatt 660
attccagaag acaccttctt ccccagccca gaaagttcct gtgatgtcaa gctggtcgag 720
aaaagctttg aaacagatac gaacctaaac tttcaaaacc tgtcagtgat tgggttccga 780
atcctcctcc tgaaagtggc cgggtttaat ctgctcatga cgctgcggct gtggtccagc 840
tga 843
<210> 136
<211> 840
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1野生型α链 (TRAV29/DV5 01 / TRAJ20 01)
<400> 136
atggccatgc tcctgggggc atcagtgctg attctgtggc ttcagccaga ctgggtaaac 60
agtcaacaga agaatgatga ccagcaagtt aagcaaaatt caccatccct gagcgtccag 120
gaaggaagaa tttctattct gaactgtgac tatactaaca gcatgtttga ttatttccta 180
tggtacaaaa aataccctgc tgaaggtcct acattcctga tatctataag ttccattaag 240
gataaaaatg aagatggaag attcactgtc ttcttaaaca aaagtgccaa gcacctctct 300
ctgcacattg tgccctccca gcctggagac tctgcagtgt acttctgtgc agcaagcggt 360
ataggcgact acaagctcag ctttggagcc ggaaccacag taactgtaag agcaaatatc 420
cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga caagtctgtc 480
tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg 540
tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag caacagtgct 600
gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt 660
ccagaagaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa 720
agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc 780
ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga 840
<210> 137
<211> 816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 野生型α链 (TRAV41 01 / TRAJ50 01)
<400> 137
atggtgaaga tccggcaatt tttgttggct attttgtggc ttcagctaag ctgtgtaagt 60
gccgccaaaa atgaagtgga gcagagtcct cagaacctga ctgcccagga aggagaattt 120
atcacaatca actgcagtta ctcggtagga ataagtgcct tacactggct gcaacagcat 180
ccaggaggag gcattgtttc cttgtttatg ctgagctcag ggaagaagaa gcatggaaga 240
ttaattgcca caataaacat acaggaaaag cacagctccc tgcacatcac agcctcccat 300
cccagagact ctgccgtcta catctgtgct gtcaggacct cctacgacaa ggtgatattt 360
gggccaggga caagcttatc agtcattcca aatatccaga accctgaccc tgccgtgtac 420
cagctgagag actctaaatc cagtgacaag tctgtctgcc tattcaccga ttttgattct 480
caaacaaatg tgtcacaaag taaggattct gatgtgtata tcacagacaa aactgtgcta 540
gacatgaggt ctatggactt caagagcaac agtgctgtgg cctggagcaa caaatctgac 600
tttgcatgtg caaacgcctt caacaacagc attattccag aagacacctt cttccccagc 660
ccagaaagtt cctgtgatgt caagctggtc gagaaaagct ttgaaacaga tacgaaccta 720
aactttcaaa acctgtcagt gattgggttc cgaatcctcc tcctgaaagt ggccgggttt 780
aatctgctca tgacgctgcg gctgtggtcc agctga 816
<210> 138
<211> 831
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 野生型α链 (TRAV12-2 01 / TRAJ11 01)
<400> 138
atgaaatcct tgagagtttt actagtgatc ctgtggcttc agttgagctg ggtttggagc 60
caacagaagg aggtggagca gaattctgga cccctcagtg ttccagaggg agccattgcc 120
tctctcaact gcacttacag tgaccgaggt tcccagtcct tcttctggta cagacaatat 180
tctgggaaaa gccctgagtt gataatgttc atatactcca atggtgacaa agaagatgga 240
aggtttacag cacagctcaa taaagccagc cagtatgttt ctctgctcat cagagactcc 300
cagcccagtg attcagccac ctacctctgt gccgtgaacc tcctaggggc tacaggatac 360
agcaccctca cctttgggaa ggggactatg cttctagtct ctccagatat ccagaaccct 420
gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt ctgcctattc 480
accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt gtatatcaca 540
gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc tgtggcctgg 600
agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat tccagaagac 660
accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa aagctttgaa 720
acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat cctcctcctg 780
aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg a 831
<210> 139
<211> 807
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 野生型α链 (TRAV1-2 01 / TRAJ20 01)
<400> 139
atgtggggag ttttccttct ttatgtttcc atgaagatgg gaggcactac aggacaaaac 60
attgaccagc ccactgagat gacagctacg gaaggtgcca ttgtccagat caactgcacg 120
taccagacat ctgggttcaa cgggctgttc tggtaccagc aacatgctgg cgaagcaccc 180
acatttctgt cttacaatgt tctggatggt ttggaggaga aaggtcgttt ttcttcattc 240
cttagtcggt ctaaagggta cagttacctc cttttgaagg agctccagat gaaagactct 300
gcctcttacc tctgtgctgt gaggggcatt aacgactaca agctcagctt tggagccgga 360
accacagtaa ctgtaagagc aaatatccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga 420
gactctaaat ccagtgacaa gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat 480
gtgtcacaaa gtaaggattc tgatgtgtat atcacagaca aaactgtgct agacatgagg 540
tctatggact tcaagagcaa cagtgctgtg gcctggagca acaaatctga ctttgcatgt 600
gcaaacgcct tcaacaacag cattattcca gaagacacct tcttccccag cccagaaagt 660
tcctgtgatg tcaagctggt cgagaaaagc tttgaaacag atacgaacct aaactttcaa 720
aacctgtcag tgattgggtt ccgaatcctc ctcctgaaag tggccgggtt taatctgctc 780
atgacgctgc ggctgtggtc cagctga 807
<210> 140
<211> 816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 野生型α链 (TRAV20 02 / TRAJ8 01)
<400> 140
atggagaaaa tgttggagtg tgcattcata gtcttgtggc ttcagcttgg ctggttgagt 60
ggagaagacc aggtgacgca gagtcccgag gccctgagac tccaggaggg agagagtagc 120
agtctcaact gcagttacac agtcagcggt ttaagagggc tgttctggta taggcaagat 180
cctgggaaag gccctgaatt cctcttcacc ctgtattcag ctggggaaga aaaggagaaa 240
gaaaggctaa aagccacatt aacaaagaag gaaagctttc tgcacatcac agcccctaaa 300
cctgaagact cagccactta tctctgtgct gtgatcacag gctttcagaa acttgtattt 360
ggaactggca cccgacttct ggtcagtcca aatatccaga accctgaccc tgccgtgtac 420
cagctgagag actctaaatc cagtgacaag tctgtctgcc tattcaccga ttttgattct 480
caaacaaatg tgtcacaaag taaggattct gatgtgtata tcacagacaa aactgtgcta 540
gacatgaggt ctatggactt caagagcaac agtgctgtgg cctggagcaa caaatctgac 600
tttgcatgtg caaacgcctt caacaacagc attattccag aagacacctt cttccccagc 660
ccagaaagtt cctgtgatgt caagctggtc gagaaaagct ttgaaacaga tacgaaccta 720
aactttcaaa acctgtcagt gattgggttc cgaatcctcc tcctgaaagt ggccgggttt 780
aatctgctca tgacgctgcg gctgtggtcc agctga 816
<210> 141
<211> 807
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 野生型α链 (TRAV26-1 02 / TRAJ26 01)
<400> 141
atgaggctgg tggcaagagt aactgtgttt ctgacctttg gaactataat tgatgctaag 60
accacccagc ccacctccat ggattgcgct gaaggaagag ctgcaaacct gccttgtaat 120
cactctacca tcagtggaaa tgagtatgtg tattggtatc gacagattca ctcccagggg 180
ccacagtata tcattcatgg tctaaaaaac aatgaaacca atgaaatggc ctctctgatc 240
atcacagaag acagaaagtc cagcaccttg atcctgcccc acgctacgct gagagacact 300
gctgtgtact attgcatcgc cggtgtcggg cggggtcaga attttgtctt tggtcccgga 360
accagattgt ccgtgctgcc ctatatccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga 420
gactctaaat ccagtgacaa gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat 480
gtgtcacaaa gtaaggattc tgatgtgtat atcacagaca aaactgtgct agacatgagg 540
tctatggact tcaagagcaa cagtgctgtg gcctggagca acaaatctga ctttgcatgt 600
gcaaacgcct tcaacaacag cattattcca gaagacacct tcttccccag cccagaaagt 660
tcctgtgatg tcaagctggt cgagaaaagc tttgaaacag atacgaacct aaactttcaa 720
aacctgtcag tgattgggtt ccgaatcctc ctcctgaaag tggccgggtt taatctgctc 780
atgacgctgc ggctgtggtc cagctga 807
<210> 142
<211> 831
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 野生型α链 (TRAV24 01 / TRAJ48 01)
<400> 142
atggagaaga atcctttggc agccccatta ctaatcctct ggtttcatct tgactgcgtg 60
agcagcatac tgaacgtgga acaaagtcct cagtcactgc atgttcagga gggagacagc 120
accaatttca cctgcagctt cccttccagc aatttttatg ccttacactg gtacagatgg 180
gaaactgcaa aaagccccga ggccttgttt gtaatgactt taaatgggga tgaaaagaag 240
aaaggacgaa taagtgccac tcttaatacc aaggagggtt acagctattt gtacatcaaa 300
ggatcccagc ctgaagactc agccacatac ctctgtgcct ttcatcctaa ctttggaaat 360
gagaaattaa cctttgggac tggaacaaga ctcaccatca tacccaatat ccagaaccct 420
gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt ctgcctattc 480
accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt gtatatcaca 540
gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc tgtggcctgg 600
agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat tccagaagac 660
accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa aagctttgaa 720
acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat cctcctcctg 780
aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg a 831
<210> 143
<211> 834
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 野生型α链 (TRAV20 02 / TRAJ37 02)
<400> 143
atggagaaaa tgttggagtg tgcattcata gtcttgtggc ttcagcttgg ctggttgagt 60
ggagaagacc aggtgacgca gagtcccgag gccctgagac tccaggaggg agagagtagc 120
agtctcaact gcagttacac agtcagcggt ttaagagggc tgttctggta taggcaagat 180
cctgggaaag gccctgaatt cctcttcacc ctgtattcag ctggggaaga aaaggagaaa 240
gaaaggctaa aagccacatt aacaaagaag gaaagctttc tgcacatcac agcccctaaa 300
cctgaagact cagccactta tctctgtgct gtgcagccgc ggggggatgg gtctagcaac 360
acaggcaaac taatctttgg gcaagggaca actttacaag taaaaccaga tatccagaac 420
cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc tgtctgccta 480
ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga tgtgtatatc 540
acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag tgctgtggcc 600
tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat tattccagaa 660
gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga gaaaagcttt 720
gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg aatcctcctc 780
ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag ctga 834
<210> 144
<211> 819
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - 密码子优化的α链
<400> 144
atggagacac tgctgggact actgattctg tggctgcaac tgcaatgggt gagcagcaaa 60
caggaggtta cccagattcc tgctgctctg tctgttcctg aaggcgagaa tctggtgctg 120
aactgcagct tcacagatag cgccatctac aacctgcagt ggttcagaca ggatcctgga 180
aaaggcctga caagcctgct gctgattcag agctctcaga gagagcagac atctggaaga 240
ctgaatgcta gcctggacaa gtctagcggc agaagcaccc tgtatattgc cgcctctcaa 300
cctggagatt ctgccacata cctgtgtgct gtgaaggaga catctggctc tagactgacc 360
tttggcgagg gaacacaact gaccgtgaat cctgacatcc agaatcccga tcctgctgtg 420
taccagctgc gggacagcaa gagcagcgac aagagcgtgt gcctgttcac cgacttcgac 480
agccagacca acgtgtccca gagcaaggac agcgacgtgt acatcaccga taagtgcgtg 540
ctggacatgc ggagcatgga cttcaagagc aacagcgccg tggcctggtc caacaagagc 600
gacttcgcct gcgccaacgc cttcaacaac agcattatcc ccgaggacac attcttccca 660
agccccgaga gcagctgcga cgtgaagctg gtggaaaaga gcttcgagac agacaccaac 720
ctgaacttcc agaacctcag cgtgatcggc ttccggatcc tgctgctgaa ggtggccggc 780
ttcaacctgc tgatgaccct gcggctgtgg tccagctga 819
<210> 145
<211> 840
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - 密码子优化的α链
<400> 145
atgaccagag ttagcctgtt atgggctgtg gtggtgagca catgtctgga atctggaatg 60
gcccagacag tgacacagtc tcagcctgaa atgtctgtgc aggaagccga aaccgttaca 120
ctgagctgca cctacgatac aagcgagaac aactactacc tgttctggta caagcagccc 180
ccctctaggc agatgatcct ggtgatcaga caggaggcct ataaacagca gaatgccaca 240
gagaaccggt tcagcgtgaa cttccagaaa gccgccaaga gcttcagcct gaagatctct 300
gattctcagc tgggcgatac agccatgtac ttttgcgcct tcatctaccc cagctacaca 360
agcggcacat acaagtacat cttcggcacc ggcacaagac tgaaggttct ggccaacatc 420
cagaatcccg atcctgctgt gtaccagctg cgggacagca agagcagcga caagagcgtg 480
tgcctgttca ccgacttcga cagccagacc aacgtgtccc agagcaagga cagcgacgtg 540
tacatcaccg ataagtgcgt gctggacatg cggagcatgg acttcaagag caacagcgcc 600
gtggcctggt ccaacaagag cgacttcgcc tgcgccaacg ccttcaacaa cagcattatc 660
cccgaggaca cattcttccc aagccccgag agcagctgcg acgtgaagct ggtggaaaag 720
agcttcgaga cagacaccaa cctgaacttc cagaacctca gcgtgatcgg cttccggatc 780
ctgctgctga aggtggccgg cttcaacctg ctgatgaccc tgcggctgtg gtccagctga 840
<210> 146
<211> 843
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - 密码子优化的α链
<400> 146
atggccatgt tactaggagc gagcgtgctg attctgtggt tacagcctga ttgggtgaac 60
tctcagcaga agaacgatga tcagcaggtg aagcagaaca gcccctctct gtctgtgcag 120
gaaggcagaa tcagcatcct gaattgcgat tacaccaaca gcatgttcga ctacttcctg 180
tggtacaaga agtaccccgc cgagggccct acctttctga tcagcatctc tagcatcaag 240
gacaagaacg aagatggcag attcaccgtg ttcctgaaca agagcgccaa gcacctgagc 300
ctgcacattg tgccttctca acctggagat tctgccgtgt acttttgtgc tgcctctgga 360
acaggcggaa gctatatccc cacatttgga agaggaacaa gcctgatcgt gcacccttac 420
atccagaatc ccgatcctgc tgtgtaccag ctgcgggaca gcaagagcag cgacaagagc 480
gtgtgcctgt tcaccgactt cgacagccag accaacgtgt cccagagcaa ggacagcgac 540
gtgtacatca ccgataagtg cgtgctggac atgcggagca tggacttcaa gagcaacagc 600
gccgtggcct ggtccaacaa gagcgacttc gcctgcgcca acgccttcaa caacagcatt 660
atccccgagg acacattctt cccaagcccc gagagcagct gcgacgtgaa gctggtggaa 720
aagagcttcg agacagacac caacctgaac ttccagaacc tcagcgtgat cggcttccgg 780
atcctgctgc tgaaggtggc cggcttcaac ctgctgatga ccctgcggct gtggtccagc 840
tga 843
<210> 147
<211> 840
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - 密码子优化的α链
<400> 147
atggccatgt tactaggagc gagcgtgctg attctgtggt tacagcctga ttgggtgaac 60
tctcagcaga agaacgatga tcagcaggtg aagcagaaca gcccctctct gtctgtgcag 120
gaaggcagaa tcagcatcct gaattgcgat tacaccaaca gcatgttcga ctacttcctg 180
tggtacaaga agtaccccgc cgagggccct acctttctga tcagcatctc tagcatcaag 240
gacaagaacg aagatggcag attcaccgtg ttcctgaaca agagcgccaa gcacctgagc 300
ctgcacattg tgccttctca acctggagat tctgccgtgt acttttgtgc tgcctctggc 360
attggcgact acaaactgag ctttggagcc ggcacaacag tgaccgttag agccaatatc 420
cagaatcccg atcctgctgt gtaccagctg cgggacagca agagcagcga caagagcgtg 480
tgcctgttca ccgacttcga cagccagacc aacgtgtccc agagcaagga cagcgacgtg 540
tacatcaccg ataagtgcgt gctggacatg cggagcatgg acttcaagag caacagcgcc 600
gtggcctggt ccaacaagag cgacttcgcc tgcgccaacg ccttcaacaa cagcattatc 660
cccgaggaca cattcttccc aagccccgag agcagctgcg acgtgaagct ggtggaaaag 720
agcttcgaga cagacaccaa cctgaacttc cagaacctca gcgtgatcgg cttccggatc 780
ctgctgctga aggtggccgg cttcaacctg ctgatgaccc tgcggctgtg gtccagctga 840
<210> 148
<211> 816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 -密码子优化的α链
<400> 148
atggtgaaga tccggcagtt cctcctggct attctgtggc tgcaactgtc ttgtgtgtct 60
gctgccaaga atgaagtgga gcagtctccc cagaacctta cagcccagga aggcgagttt 120
atcaccatca actgcagcta ttctgtgggc attagcgccc tgcattggct gcagcaacac 180
cctggaggag gaattgtgtc tctgtttatg ctgtcttctg gcaagaagaa gcacggccgg 240
ctgattgcca ccatcaacat ccaggagaag cactcttctc tgcacattac agcctctcat 300
cccagggatt ctgccgtgta catctgtgcc gtgagaacca gctacgataa ggtgattttc 360
ggaccaggca cctctctgag cgtgatcccc aatatccaga atcccgatcc tgctgtgtac 420
cagctgcggg acagcaagag cagcgacaag agcgtgtgcc tgttcaccga cttcgacagc 480
cagaccaacg tgtcccagag caaggacagc gacgtgtaca tcaccgataa gtgcgtgctg 540
gacatgcgga gcatggactt caagagcaac agcgccgtgg cctggtccaa caagagcgac 600
ttcgcctgcg ccaacgcctt caacaacagc attatccccg aggacacatt cttcccaagc 660
cccgagagca gctgcgacgt gaagctggtg gaaaagagct tcgagacaga caccaacctg 720
aacttccaga acctcagcgt gatcggcttc cggatcctgc tgctgaaggt ggccggcttc 780
aacctgctga tgaccctgcg gctgtggtcc agctga 816
<210> 149
<211> 831
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 -密码子优化的α链
<400> 149
atgaagagcc tgagagtcct gctggtgatt ttgtggctgc agctgtcttg ggtttggtct 60
cagcagaaag aagtggagca gaatagcggc cctctgtctg ttcctgaagg cgctattgct 120
agcctgaatt gcacatacag cgatagagga tctcagagct tcttctggta ccggcagtac 180
agcggcaaga gcccagaact gatcatgttc atctacagca atggcgacaa ggaggatggc 240
aggtttacag cccagctgaa caaggccagc cagtatgttt ctctgctgat cagagatagc 300
cagcctagcg attctgccac ctacctgtgt gccgtgaact tacttggagc tacaggatac 360
tctacactga ccttcggcaa aggcaccatg ctgctggtga gccctgatat ccagaatccc 420
gatcctgctg tgtaccagct gcgggacagc aagagcagcg acaagagcgt gtgcctgttc 480
accgacttcg acagccagac caacgtgtcc cagagcaagg acagcgacgt gtacatcacc 540
gataagtgcg tgctggacat gcggagcatg gacttcaaga gcaacagcgc cgtggcctgg 600
tccaacaaga gcgacttcgc ctgcgccaac gccttcaaca acagcattat ccccgaggac 660
acattcttcc caagccccga gagcagctgc gacgtgaagc tggtggaaaa gagcttcgag 720
acagacacca acctgaactt ccagaacctc agcgtgatcg gcttccggat cctgctgctg 780
aaggtggccg gcttcaacct gctgatgacc ctgcggctgt ggtccagctg a 831
<210> 150
<211> 807
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - 密码子优化的α链
<400> 150
atgtggggcg ttttccttct gtatgtgagc atgaagatgg gcggcacaac aggccagaac 60
atcgatcagc ctaccgagat gacagccaca gaaggagcta ttgttcagat caactgcacc 120
taccagacaa gcggcttcaa cggcctgttc tggtaccagc agcatgctgg agaagctcct 180
acatttctga gctacaatgt gctggatggc ctggaggaga aaggcaggtt tagcagcttc 240
ctgagcaggt ctaagggcta ttcttatctg ctgctgaagg agctgcagat gaaggattcc 300
gccagctacc tgtgtgccgt taggggcatc aatgattaca agctgagctt tggagccgga 360
acaacagtga ccgtgagagc caacatccag aatcccgatc ctgctgtgta ccagctgcgg 420
gacagcaaga gcagcgacaa gagcgtgtgc ctgttcaccg acttcgacag ccagaccaac 480
gtgtcccaga gcaaggacag cgacgtgtac atcaccgata agtgcgtgct ggacatgcgg 540
agcatggact tcaagagcaa cagcgccgtg gcctggtcca acaagagcga cttcgcctgc 600
gccaacgcct tcaacaacag cattatcccc gaggacacat tcttcccaag ccccgagagc 660
agctgcgacg tgaagctggt ggaaaagagc ttcgagacag acaccaacct gaacttccag 720
aacctcagcg tgatcggctt ccggatcctg ctgctgaagg tggccggctt caacctgctg 780
atgaccctgc ggctgtggtc cagctga 807
<210> 151
<211> 816
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - 密码子优化的α链
<400> 151
atggagaaga tgctggagtg tgcgttcatc gttctgtggc tgcaacttgg atggctgtct 60
ggagaggatc aggttacaca gtctcctgaa gccctgagac tgcaagaagg agaaagctct 120
agcctgaact gcagctacac agtgtctgga ctgagaggcc tgttctggta cagacaggat 180
cctggaaaag gcccagagtt cctgtttacc ctgtattctg ccggcgagga gaaggagaaa 240
gagagactga aagctaccct gaccaagaag gagagcttcc tgcacattac cgcccccaaa 300
cctgaggatt ctgccacata tctgtgtgcc gtgattaccg gctttcagaa gctggtgttt 360
ggcacaggca ccagactgct ggtttctccc aatatccaga atcccgatcc tgctgtgtac 420
cagctgcggg acagcaagag cagcgacaag agcgtgtgcc tgttcaccga cttcgacagc 480
cagaccaacg tgtcccagag caaggacagc gacgtgtaca tcaccgataa gtgcgtgctg 540
gacatgcgga gcatggactt caagagcaac agcgccgtgg cctggtccaa caagagcgac 600
ttcgcctgcg ccaacgcctt caacaacagc attatccccg aggacacatt cttcccaagc 660
cccgagagca gctgcgacgt gaagctggtg gaaaagagct tcgagacaga caccaacctg 720
aacttccaga acctcagcgt gatcggcttc cggatcctgc tgctgaaggt ggccggcttc 780
aacctgctga tgaccctgcg gctgtggtcc agctga 816
<210> 152
<211> 807
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - 密码子优化的α链
<400> 152
atgagactgg tggcacgcgt aactgtgttt ctgacctttg gcaccatcat cgatgccaag 60
acaacccagc ctacaagcat ggactgtgcc gagggaagag ctgctaatct gccatgtaat 120
cacagcacaa tcagcggcaa cgagtacgtg tactggtacc ggcagatcca ctctcaagga 180
cctcagtaca tcattcatgg cctgaagaac aacgagacca acgagatggc cagcctgatc 240
atcaccgagg acaggaagtc ttctaccctg attctgcctc atgctacact gagagatacc 300
gccgtgtact actgcattgc cggagtggga agaggccaga atttcgtgtt tggacctgga 360
acaagactga gcgttctgcc ctatatccag aatcccgatc ctgctgtgta ccagctgcgg 420
gacagcaaga gcagcgacaa gagcgtgtgc ctgttcaccg acttcgacag ccagaccaac 480
gtgtcccaga gcaaggacag cgacgtgtac atcaccgata agtgcgtgct ggacatgcgg 540
agcatggact tcaagagcaa cagcgccgtg gcctggtcca acaagagcga cttcgcctgc 600
gccaacgcct tcaacaacag cattatcccc gaggacacat tcttcccaag ccccgagagc 660
agctgcgacg tgaagctggt ggaaaagagc ttcgagacag acaccaacct gaacttccag 720
aacctcagcg tgatcggctt ccggatcctg ctgctgaagg tggccggctt caacctgctg 780
atgaccctgc ggctgtggtc cagctga 807
<210> 153
<211> 831
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - 密码子优化的α链
<400> 153
atggagaaga accccttggc agcacctctg cttattctgt ggttccacct ggattgtgtg 60
agcagcatcc tgaatgtgga gcagtctcct cagagcctgc atgtgcaaga aggcgatagc 120
accaatttca cctgcagctt tccaagcagc aacttctacg ccctgcactg gtacagatgg 180
gaaaccgcca aatctcctga agccctgttt gtgatgaccc tgaatggcga cgagaagaag 240
aagggcagaa ttagcgccac cctgaatacc aaggagggct acagctacct gtacatcaag 300
ggctctcaac ctgaggattc tgccacctac ctttgcgcct ttcaccccaa tttcggcaac 360
gagaaactga cctttggaac cggaacaagg ctgaccatca tccccaacat ccagaatccc 420
gatcctgctg tgtaccagct gcgggacagc aagagcagcg acaagagcgt gtgcctgttc 480
accgacttcg acagccagac caacgtgtcc cagagcaagg acagcgacgt gtacatcacc 540
gataagtgcg tgctggacat gcggagcatg gacttcaaga gcaacagcgc cgtggcctgg 600
tccaacaaga gcgacttcgc ctgcgccaac gccttcaaca acagcattat ccccgaggac 660
acattcttcc caagccccga gagcagctgc gacgtgaagc tggtggaaaa gagcttcgag 720
acagacacca acctgaactt ccagaacctc agcgtgatcg gcttccggat cctgctgctg 780
aaggtggccg gcttcaacct gctgatgacc ctgcggctgt ggtccagctg a 831
<210> 154
<211> 834
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1-密码子优化的α链
<400> 154
atggagaaga tgctggagtg tgcgttcatc gttctgtggc tgcaacttgg atggctgtct 60
ggagaggatc aggttacaca gtctcctgaa gccctgagac tgcaagaagg agaaagctct 120
agcctgaact gcagctacac agtgtctgga ctgagaggcc tgttctggta cagacaggat 180
cctggaaaag gcccagagtt cctgtttacc ctgtattctg ccggcgagga gaaggagaaa 240
gagagactga aagctaccct gaccaagaag gagagcttcc tgcacattac cgcccccaaa 300
cctgaggatt ctgccacata tctgtgtgct gttcagccta gaggagatgg ctctagcaat 360
accggcaagc tgatctttgg ccagggaaca acactgcagg tgaagcctga tatccagaat 420
cccgatcctg ctgtgtacca gctgcgggac agcaagagca gcgacaagag cgtgtgcctg 480
ttcaccgact tcgacagcca gaccaacgtg tcccagagca aggacagcga cgtgtacatc 540
accgataagt gcgtgctgga catgcggagc atggacttca agagcaacag cgccgtggcc 600
tggtccaaca agagcgactt cgcctgcgcc aacgccttca acaacagcat tatccccgag 660
gacacattct tcccaagccc cgagagcagc tgcgacgtga agctggtgga aaagagcttc 720
gagacagaca ccaacctgaa cttccagaac ctcagcgtga tcggcttccg gatcctgctg 780
ctgaaggtgg ccggcttcaa cctgctgatg accctgcggc tgtggtccag ctga 834
<210> 155
<211> 1859
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 155
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca tctcttctct 60
gttgggtggt tctgggcttt ctgggcacag atcatacagg agctggagtt agccagtctc 120
ctaggtataa ggtgaccaag aggggacagg atgtggctct gagatgtgac cctattagcg 180
gacatgtgag cctgtactgg tacagacaag ctctgggaca aggacccgag tttctgacct 240
acttcaacta tgaggcccag caggacaaat ctggactgcc caacgacaga ttcagcgccg 300
aaagaccaga aggctctatt agcacactga ccatccagag aacagagcag agggattctg 360
ccatgtacag atgcgccagc agcttaacag gctcttacga gcagtacttt ggacctggca 420
caagactgac agtgacagag gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg 600
gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca 840
gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggcggttcc ggagccacga acttctctct gttaaagcaa gcaggagacg 1020
tggaagaaaa ccccggtccc atggagacac tgctgggact actgattctg tggctgcaac 1080
tgcaatgggt gagcagcaaa caggaggtta cccagattcc tgctgctctg tctgttcctg 1140
aaggcgagaa tctggtgctg aactgcagct tcacagatag cgccatctac aacctgcagt 1200
ggttcagaca ggatcctgga aaaggcctga caagcctgct gctgattcag agctctcaga 1260
gagagcagac atctggaaga ctgaatgcta gcctggacaa gtctagcggc agaagcaccc 1320
tgtatattgc cgcctctcaa cctggagatt ctgccacata cctgtgtgct gtgaaggaga 1380
catctggctc tagactgacc tttggcgagg gaacacaact gaccgtgaat cctgacatcc 1440
agaatcctga tcctgccgtg taccagctgc gggacagcaa gagcagcgac aagagcgtgt 1500
gcctgttcac cgacttcgac agccagacca acgtgtccca gagcaaggac agcgacgtgt 1560
acatcaccga taagtgcgtg ctggacatgc ggagcatgga cttcaagagc aacagcgccg 1620
tggcctggtc caacaagagc gacttcgcct gcgccaacgc cttcaacaac agcattatcc 1680
ccgaggacac attcttccca agccccgaga gcagctgcga cgtgaagctg gtggaaaaga 1740
gcttcgagac agacaccaac ctgaacttcc agaacctcag cgtgatcggc ttccggatcc 1800
tgctgctgaa ggtggccggc ttcaacctgc tgatgaccct gcggctgtgg tccagctga 1859
<210> 156
<211> 1880
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 156
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgctt cttctcctcc 60
ttctcggacc tgctggatct ggattaggag ctgttgtgtc tcagcaccct tcttgggtga 120
tctgtaaaag cggcacaagc gtgaagatcg agtgcagaag cctggacttt caggccacaa 180
ccatgttctg gtataggcag ttccccaagc agtctctgat gctgatggcc acctctaatg 240
agggctctaa ggccacatat gaacagggag tggagaagga caagttcctg atcaaccacg 300
cctctctgac cctgtctacc ctgacagtta catctgccca ccctgaggat agcagctttt 360
acatctgtag cgccacacct gaagcctcta gcccatatga gcagtacttt ggccctggca 420
ccagattaac agtgacagag gacctgaaga acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gcttttaccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcacagcg 600
gcgtctgcac cgacccccag cccctgaaag agcagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gtctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
agcccgtgac ccagatcgtg tctgctgagg cctggggcag agccgattgc ggcttcacca 840
gcgagagcta ccagcagggc gtgctgagcg ccaccatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggcggttcc ggagccacga acttctctct gttaaagcaa gcaggagacg 1020
tggaagaaaa ccccggtccc atgaccagag ttagcctgtt atgggctgtg gtggtgagca 1080
catgtctgga atctggaatg gcccagacag tgacacagtc tcagcctgaa atgtctgtgc 1140
aggaagccga aaccgttaca ctgagctgca cctacgatac aagcgagaac aactactacc 1200
tgttctggta caagcagccc ccctctaggc agatgatcct ggtgatcaga caggaggcct 1260
ataaacagca gaatgccaca gagaaccggt tcagcgtgaa cttccagaaa gccgccaaga 1320
gcttcagcct gaagatctct gattctcagc tgggcgatac agccatgtac ttttgcgcct 1380
tcatctaccc cagctacaca agcggcacat acaagtacat cttcggcacc ggcacaagac 1440
tgaaggttct ggccaacatc cagaatcctg accctgctgt gtaccagctg cgggacagca 1500
agagcagcga caagagcgtg tgcctgttca ccgacttcga cagccagacc aacgtgtccc 1560
agagcaagga cagcgacgtg tacatcaccg ataagtgcgt gctggacatg cggagcatgg 1620
acttcaagag caacagcgcc gtggcctggt ccaacaagag cgacttcgcc tgcgccaacg 1680
ccttcaacaa cagcattatc cccgaggaca cattcttccc aagccccgag agcagctgcg 1740
acgtgaagct ggtggaaaag agcttcgaga cagacaccaa cctgaacttc cagaacctca 1800
gcgtgatcgg cttccggatc ctgctgctga aggtggccgg cttcaacctg ctgatgaccc 1860
tgcggctgtg gtccagctga 1880
<210> 157
<211> 1877
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 157
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggacct ggactgcttc 60
attggatggc tctgtgtttg ctgggaacag gacatggaga tgctatggtg atccagaacc 120
ccaggtatca ggtgacccag tttggcaaac cagtgacact gagctgttct cagaccctga 180
accacaacgt gatgtactgg taccagcaga agtcttctca ggcccctaag ctgctgttcc 240
actactacga caaggacttc aacaacgagg ccgatacccc tgacaatttc cagagcagga 300
ggcccaatac cagcttctgt ttcctggaca ttagaagccc tggactggga gatgctgcca 360
tgtacctgtg tgccaccagc aatttacagg gaagacaacc tcagcacttt ggcgatggca 420
caaggctgtc tatcctggag gatctgaaca aggtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg 480
agccttctga ggccgagatc tcccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
gctttttccc cgaccacgtg gaactgtctt ggtgggtcaa cggcaaagag gtgcactccg 600
gcgtgtgcac cgatccccag cctctgaaag aacagcccgc cctgaacgac agccggtact 660
gcctgagcag cagactgaga gtgtccgcca ccttctggca gaacccccgg aaccacttca 720
gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gacagagcca 780
agcccgtgac acagatcgtg tctgccgaag cctggggcag agccgattgc ggctttacct 840
ccgtgtccta tcagcagggc gtgctgagcg ccacaatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtctg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacttcgg ttccggagcc acgaacttct ctctgttaaa gcaagcagga gacgtggaag 1020
aaaaccccgg tcccatggcc atgttactag gagcgagcgt gctgattctg tggttacagc 1080
ctgattgggt gaactctcag cagaagaacg atgatcagca ggtgaagcag aacagcccct 1140
ctctgtctgt gcaggaaggc agaatcagca tcctgaattg cgattacacc aacagcatgt 1200
tcgactactt cctgtggtac aagaagtacc ccgccgaggg ccctaccttt ctgatcagca 1260
tctctagcat caaggacaag aacgaagatg gcagattcac cgtgttcctg aacaagagcg 1320
ccaagcacct gagcctgcac attgtgcctt ctcaacctgg agattctgcc gtgtactttt 1380
gtgctgcctc tggaacaggc ggaagctata tccccacatt tggaagagga acaagcctga 1440
tcgtgcaccc ttacatccag aatcccgacc ctgctgtgta ccagctgcgg gacagcaaga 1500
gcagcgacaa gagcgtgtgc ctgttcaccg acttcgacag ccagaccaac gtgtcccaga 1560
gcaaggacag cgacgtgtac atcaccgata agtgcgtgct ggacatgcgg agcatggact 1620
tcaagagcaa cagcgccgtg gcctggtcca acaagagcga cttcgcctgc gccaacgcct 1680
tcaacaacag cattatcccc gaggacacat tcttcccaag ccccgagagc agctgcgacg 1740
tgaagctggt ggaaaagagc ttcgagacag acaccaacct gaacttccag aacctcagcg 1800
tgatcggctt ccggatcctg ctgctgaagg tggccggctt caacctgctg atgaccctgc 1860
ggctgtggtc cagctga 1877
<210> 158
<211> 1910
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 158
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgagc cctgatctcc 60
ctgattctgc ctggaatacc agactgctgt gtcatgtgat gctgtgtctg cttggagccg 120
tttctgtggc tgctggcgtg attcaatctc ctagacacct gatcaaggag aagagagaaa 180
cagccaccct gaagtgctac cccatcccca gacacgatac agtgtactgg tatcagcaag 240
gacctggaca agatccccag ttcctgatca gcttctacga gaagatgcag agcgacaaag 300
gcagcatccc agacagattt agcgcccagc agtttagcga ctatcactct gagctgaaca 360
tgagcagcct ggaactgggc gattctgctc tgtacttctg tgcctcttct ctgagactgg 420
gaagagaaac ccagtacttt ggacccggca caagactgct ggttcttgag gacctgaaga 480
acgtgttccc cccagaggtg gccgtgttcg agcctagcga ggccgagatc agccacaccc 540
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<210> 159
<211> 1856
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 159
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca agacttctct 60
gctgggtggt gcttggattt ctgggcacag atcatacagg agctggagtt agccagtctc 120
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<210> 160
<211> 1865
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 160
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggcaca agacttctct 60
gctgggtggc cttttgtctg ctggtggaag agctgattga agctggagtt gtgcagtctc 120
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ccgtgtccta tcagcagggc gtgctgagcg ccacaatcct gtacgagatc ctgctgggca 900
aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtctg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
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gctga 1865
<210> 161
<211> 1844
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 161
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgagcaac caggtcttgt 60
gctgtgtggt gctgtgcttt cttggcgcca atacagtgga tggcggcatt acacaaagcc 120
ccaagtacct gttcaggaaa gagggccaga atgtgacact gagctgtgag cagaacctga 180
atcacgacgc catgtactgg tacagacagg atccaggaca aggactgagg ctgatctact 240
actcccagat cgtgaacgac ttccagaagg gcgatattgc cgagggctat agcgtgagca 300
gagagaagaa agagagcttc ccactgacag tgacatctgc ccagaagaac cctaccgcct 360
tctacctgtg tgcctcttct agagatagag agcaggagtc tcctctgcac ttcggaaatg 420
gcaccagact gacagtgacc gaggatctga acaaggtgtt ccccccagag gtggccgtgt 480
tcgagccttc tgaggccgag atctcccaca cccagaaagc caccctcgtg tgcctggcca 540
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tcagatgcca ggtgcagttc tacggcctga gcgagaacga cgagtggacc caggacagag 780
ccaagcccgt gacacagatc gtgtctgccg aagcctgggg cagagccgat tgcggcttta 840
cctccgtgtc ctatcagcag ggcgtgctga gcgccacaat cctgtacgag atcctgctgg 900
gcaaggccac cctgtacgcc gtgctggtgt ctgccctggt gctgatggcc atggtcaagc 960
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ccggcttcaa cctgctgatg accctgcggc tgtggtccag ctga 1844
<210> 162
<211> 1856
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 162
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggacct cagcttcttg 60
gatacgttgt gctgtgtctg cttggagctg gacctcttga agctcaggtt acccagaacc 120
ccagatacct gattaccgtg acaggcaaaa agctgaccgt gacatgtagc cagaacatga 180
accacgagta catgagctgg taccggcagg atcctggatt aggcctgaga cagatctact 240
acagcatgaa cgtggaggtg accgataaag gcgacgtgcc tgagggatac aaggtgagca 300
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agcctagcga ggccgagatc agccacaccc agaaagccac cctcgtgtgc ctggccaccg 540
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gatgccaggt gcagttctac ggcctgagcg agaacgacga gtggacccag gaccgggcca 780
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aggccaccct gtacgccgtg ctggtgtccg ccctggtgct gatggccatg gtcaagcgga 960
aggacagccg gggcggttcc ggagccacga acttctctct gttaaagcaa gcaggagacg 1020
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gctttcagaa gctggtgttt ggcacaggca ccagactgct ggtttctccc aatatccaga 1440
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<210> 163
<211> 1880
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2
密码子优化的 TCRβ-P2A-TCRα
<400> 163
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgctgagc cctgatctcc 60
ctgattctgc ctggaatacc agactgctgt gtcatgtgat gctgtgtctg cttggagccg 120
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gcagcatccc agacagattt agcgcccagc agtttagcga ctatcactct gagctgaaca 360
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agaacgtgtt ccccccagag gtggccgtgt tcgagcctag cgaggccgag atcagccaca 540
cccagaaagc caccctcgtg tgcctggcca ccggctttta ccccgaccac gtggaactgt 600
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ccaccttctg gcagaacccc cggaaccact tcagatgcca ggtgcagttc tacggcctga 780
gcgagaacga cgagtggacc caggaccggg ccaagcccgt gacccagatc gtgtctgctg 840
aggcctgggg cagagccgat tgcggcttca ccagcgagag ctaccagcag ggcgtgctga 900
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<210> 164
<211> 1871
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1
密码子优化的 TCRβ-P2A-TCRα
<400> 164
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgagcacc agactccttt 60
gctggatggc tttgtgtctg cttggagctg agctgtctga agctgaagtt gcccagtctc 120
ccagatacaa gatcaccgag aaatctcagg ctgtggcctt ctggtgtgac cctatttctg 180
gacacgccac cctgtactgg tataggcaaa ttctgggaca aggccctgaa ctgctggtgc 240
aatttcagga tgagagcgtg gtggacgatt ctcaactgcc taaggacagg ttttctgccg 300
agcggctgaa aggagttgat agcaccctga agatccaacc tgctgaactg ggcgattctg 360
ctatgtacct gtgcgcctct tctcagagag atagccctaa cgagaagctg ttctttggct 420
ctggaaccca gctgtctgtg ctggaggatc tgaacaaggt gttcccccca gaggtggccg 480
tgttcgagcc ttctgaggcc gagatctccc acacccagaa agccaccctc gtgtgcctgg 540
ccaccggctt tttccccgac cacgtggaac tgtcttggtg ggtcaacggc aaagaggtgc 600
actccggcgt gtgcaccgat ccccagcctc tgaaagaaca gcccgccctg aacgacagcc 660
ggtactgcct gagcagcaga ctgagagtgt ccgccacctt ctggcagaac ccccggaacc 720
acttcagatg ccaggtgcag ttctacggcc tgagcgagaa cgacgagtgg acccaggaca 780
gagccaagcc cgtgacacag atcgtgtctg ccgaagcctg gggcagagcc gattgcggct 840
ttacctccgt gtcctatcag cagggcgtgc tgagcgccac aatcctgtac gagatcctgc 900
tgggcaaggc caccctgtac gccgtgctgg tgtctgccct ggtgctgatg gccatggtca 960
agcggaagga cttcggttcc ggagccacga acttctctct gttaaagcaa gcaggagacg 1020
tggaagaaaa ccccggtccc atggagaaga accccttggc agcacctctg cttattctgt 1080
ggttccacct ggattgtgtg agcagcatcc tgaatgtgga gcagtctcct cagagcctgc 1140
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acaagagcgt gtgcctgttc accgacttcg acagccagac caacgtgtcc cagagcaagg 1560
acagcgacgt gtacatcacc gataagtgcg tgctggacat gcggagcatg gacttcaaga 1620
gcaacagcgc cgtggcctgg tccaacaaga gcgacttcgc ctgcgccaac gccttcaaca 1680
acagcattat ccccgaggac acattcttcc caagccccga gagcagctgc gacgtgaagc 1740
tggtggaaaa gagcttcgag acagacacca acctgaactt ccagaacctc agcgtgatcg 1800
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ggtccagctg a 1871
<210> 165
<211> 1877
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1
密码子优化的TCRβ-P2A-TCRα
<400> 165
ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggcgcgccac catgggctgt agactgttgt 60
gttgtgctgt gctgtgtctg ttgggagctg tgcctatgga aacaggcgtt acccagacac 120
ctagacatct ggttatgggc atgaccaaca agaagagcct gaagtgcgag cagcatctgg 180
gccataacgc catgtactgg tataagcaga gcgccaagaa accactggaa ctgatgttcg 240
tgtacagcct ggaggagagg gtggagaata atagcgtgcc cagcagattt agccctgagt 300
gcccaaattc ttctcacctg ttcctgcacc tgcacacatt acagcccgag gattctgccc 360
tgtacctgtg tgcttcttct caagaccctt acaagctgag cggcaatacc atctacttcg 420
gcgaaggctc ttggctgaca gtggttgaag atctgaacaa ggtgttcccc ccagaggtgg 480
ccgtgttcga gccttctgag gccgagatct cccacaccca gaaagccacc ctcgtgtgcc 540
tggccaccgg ctttttcccc gaccacgtgg aactgtcttg gtgggtcaac ggcaaagagg 600
tgcactccgg cgtgtgcacc gatccccagc ctctgaaaga acagcccgcc ctgaacgaca 660
gccggtactg cctgagcagc agactgagag tgtccgccac cttctggcag aacccccgga 720
accacttcag atgccaggtg cagttctacg gcctgagcga gaacgacgag tggacccagg 780
acagagccaa gcccgtgaca cagatcgtgt ctgccgaagc ctggggcaga gccgattgcg 840
gctttacctc cgtgtcctat cagcagggcg tgctgagcgc cacaatcctg tacgagatcc 900
tgctgggcaa ggccaccctg tacgccgtgc tggtgtctgc cctggtgctg atggccatgg 960
tcaagcggaa ggacttcggt tccggagcca cgaacttctc tctgttaaag caagcaggag 1020
acgtggaaga aaaccccggt cccatggaga agatgctgga gtgtgcgttc atcgttctgt 1080
ggctgcaact tggatggctg tctggagagg atcaggttac acagtctcct gaagccctga 1140
gactgcaaga aggagaaagc tctagcctga actgcagcta cacagtgtct ggactgagag 1200
gcctgttctg gtacagacag gatcctggaa aaggcccaga gttcctgttt accctgtatt 1260
ctgccggcga ggagaaggag aaagagagac tgaaagctac cctgaccaag aaggagagct 1320
tcctgcacat taccgccccc aaacctgagg attctgccac atatctgtgt gctgttcagc 1380
ctagaggaga tggctctagc aataccggca agctgatctt tggccaggga acaacactgc 1440
aggtgaagcc tgatatccag aaccccgatc ctgctgtgta ccagctgcgg gacagcaaga 1500
gcagcgacaa gagcgtgtgc ctgttcaccg acttcgacag ccagaccaac gtgtcccaga 1560
gcaaggacag cgacgtgtac atcaccgata agtgcgtgct ggacatgcgg agcatggact 1620
tcaagagcaa cagcgccgtg gcctggtcca acaagagcga cttcgcctgc gccaacgcct 1680
tcaacaacag cattatcccc gaggacacat tcttcccaag ccccgagagc agctgcgacg 1740
tgaagctggt ggaaaagagc ttcgagacag acaccaacct gaacttccag aacctcagcg 1800
tgatcggctt ccggatcctg ctgctgaagg tggccggctt caacctgctg atgaccctgc 1860
ggctgtggtc cagctga 1877
<210> 166
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列猪捷申病毒-1 2A (P2A)
<400> 166
ggaagcggag ctactaactt cagcctgctg aagcaggctg gagacgtgga ggagaaccct 60
ggacct 66
<210> 167
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列猪捷申病毒-1 2A (P2A)
肽 - 密码子优化
<400> 167
ggttccggag ccacgaactt ctctctgtta aagcaagcag gagacgtgga agaaaacccc 60
ggtccc 66
<210> 168
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列Thoseaasigna病毒2A (T2A)
<400> 168
ggaagcggag agggcagagg aagtctgcta acatgcggtg acgtcgagga gaatcctgga 60
cct 63
<210> 169
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列马鼻炎A病毒 (ERAV)
2A (E2A)
<400> 169
ggaagcggac agtgtactaa ttatgctctc ttgaaattgg ctggagatgt tgagagcaac 60
cctggacct 69
<210> 170
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列口蹄疫病毒2A
(F2A)
<400> 170
ggaagcggag tgaaacagac tttgaatttt gaccttctca agttggcggg agacgtggag 60
tccaaccctg gacct 75
<210> 171
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Gly-Ser连接子
<400> 171
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 172
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Gly-Ser连接子
<400> 172
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 173
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Gly-Ser连接子
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(40)
<223> 任何一个或所有的氨基酸5-40可以存在或不存在。
<400> 173
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40 45
<210> 174
<211> 70
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Gly-Ser连接子
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(40)
<223> 任何一个或所有的氨基酸5-40可以存在或不存在。
<220>
<221> 变体
<222> (44)...(70)
<223> 任何一个或所有的氨基酸44-70可以存在或不存在。
<400> 174
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
35 40 45
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
65 70
<210> 175
<211> 90
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Gly-Ser 连接
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(40)
<223> 任何一个或所有的氨基酸5-40可以存在或不存在。
<220>
<221> 变体
<222> (46)...(90)
<223> 任何一个或所有的氨基酸46-90可以存在或不存在。
<400> 175
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
85 90
<210> 176
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - α CDR1
<400> 176
Thr Ser Gly Phe Asn Gly
1 5
<210> 177
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - α CDR2
<400> 177
Asn Val Leu Asp Gly Leu
1 5
<210> 178
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - α CDR3
<400> 178
Ala Val Arg Gly Ile Asn Asp Tyr Lys Leu Ser
1 5 10
<210> 179
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - β CDR1
<400> 179
Leu Asn His Asp Ala
1 5
<210> 180
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - β CDR2
<400> 180
Ser Gln Ile Val Asn Asp
1 5
<210> 181
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - β CDR3
<400> 181
Ala Ser Ser Arg Asp Arg Glu Gln Glu Ser Pro Leu His
1 5 10
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - α CDR1
<400> 182
Thr Ile Ser Gly Asn Glu Tyr
1 5
<210> 183
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - α CDR2
<400> 183
Gly Leu Lys Asn Asn
1 5
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - α CDR3
<400> 184
Ile Ala Gly Val Gly Arg Gly Gln Asn Phe Val
1 5 10
<210> 185
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - β CDR1
<400> 185
Pro Arg His Asp Thr
1 5
<210> 186
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - β CDR2
<400> 186
Phe Tyr Glu Lys Met Gln
1 5
<210> 187
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - β CDR3
<400> 187
Ala Ser Ser Tyr Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Glu Gln Tyr
1 5 10
<210> 188
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - α CDR1
<400> 188
Ser Ser Asn Phe Tyr Ala
1 5
<210> 189
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - α CDR2
<400> 189
Met Thr Leu Asn Gly Asp Glu
1 5
<210> 190
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - α CDR3
<400> 190
Ala Phe His Pro Asn Phe Gly Asn Glu Lys Leu Thr
1 5 10
<210> 191
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - β CDR1
<400> 191
Ser Gly His Ala Thr
1 5
<210> 192
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - β CDR2
<400> 192
Phe Gln Asp Glu Ser Val
1 5
<210> 193
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - β CDR3
<400> 193
Ala Ser Ser Gln Arg Asp Ser Pro Asn Glu Lys Leu Phe
1 5 10
<210> 194
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - α CDR1
<400> 194
Asp Ser Ala Ile Tyr Asn
1 5
<210> 195
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - α CDR2
<400> 195
Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu
1 5
<210> 196
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - α CDR3
<400> 196
Ala Val Lys Glu Thr Ser Gly Ser Arg Leu Thr
1 5 10
<210> 197
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - β CDR1
<400> 197
Ser Gly His Val Ser
1 5
<210> 198
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - β CDR2
<400> 198
Phe Asn Tyr Glu Ala Gln
1 5
<210> 199
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - β CDR3
<400> 199
Ala Ser Ser Leu Thr Gly Ser Tyr Glu Gln Tyr
1 5 10
<210> 200
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - α CDR1
<400> 200
Thr Ser Glu Asn Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 201
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - α CDR2
<400> 201
Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn
1 5
<210> 202
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - α CDR3
<400> 202
Ala Phe Ile Tyr Pro Ser Tyr Thr Ser Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile
1 5 10 15
<210> 203
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - β CDR1
<400> 203
Asp Phe Gln Ala Thr Thr
1 5
<210> 204
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - β CDR2
<400> 204
Ser Asn Glu Gly Ser Lys Ala
1 5
<210> 205
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - β CDR3
<400> 205
Ser Ala Thr Pro Glu Ala Ser Ser Pro Tyr Glu Gln Tyr
1 5 10
<210> 206
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - α CDR1
<400> 206
Asn Ser Met Phe Asp Tyr
1 5
<210> 207
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - α CDR2
<400> 207
Ile Ser Ser Ile Lys Asp Lys
1 5
<210> 208
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - α CDR3
<400> 208
Ala Ala Ser Gly Thr Gly Gly Ser Tyr Ile Pro Thr
1 5 10
<210> 209
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - β CDR1
<400> 209
Leu Asn His Asn Val
1 5
<210> 210
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - β CDR2
<400> 210
Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe
1 5
<210> 211
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - β CDR3
<400> 211
Ala Thr Ser Asn Leu Gln Gly Arg Gln Pro Gln His
1 5 10
<210> 212
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - α CDR1
<400> 212
Asn Ser Met Phe Asp Tyr
1 5
<210> 213
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - α CDR2
<400> 213
Ile Ser Ser Ile Lys Asp Lys
1 5
<210> 214
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - α CDR3
<400> 214
Ala Ala Ser Gly Ile Gly Asp Tyr Lys Leu Ser
1 5 10
<210> 215
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - β CDR1
<400> 215
Pro Arg His Asp Thr
1 5
<210> 216
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - β CDR2
<400> 216
Phe Tyr Glu Lys Met Gln
1 5
<210> 217
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - β CDR3
<400> 217
Ala Ser Ser Leu Arg Leu Gly Arg Glu Thr Gln Tyr
1 5 10
<210> 218
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - α CDR1
<400> 218
Asp Arg Gly Ser Gln Ser
1 5
<210> 219
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - α CDR2
<400> 219
Ile Tyr Ser Asn Gly Asp
1 5
<210> 220
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - α CDR3
<400> 220
Ala Val Asn Leu Leu Gly Ala Thr Gly Tyr Ser Thr Leu Thr
1 5 10
<210> 221
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - β CDR1
<400> 221
Ser Gly His Asn Thr
1 5
<210> 222
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - β CDR2
<400> 222
Tyr Glu Asn Glu Glu Ala
1 5
<210> 223
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - β CDR3
<400> 223
Ala Ser Ser Leu Thr Arg Gly Ala Glu Ala Phe
1 5 10
<210> 224
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - α CDR1
<400> 224
Val Ser Gly Leu Arg Gly
1 5
<210> 225
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - α CDR2
<400> 225
Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu
1 5
<210> 226
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - α CDR3
<400> 226
Ala Val Ile Thr Gly Phe Gln Lys Leu Val
1 5 10
<210> 227
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - β CDR1
<400> 227
Met Asn His Glu Tyr
1 5
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 -β CDR2
<400> 228
Ser Met Asn Val Glu Val
1 5
<210> 229
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - β CDR3
<400> 229
Ala Ser Ser Phe Ser Gly Gly Thr Tyr Glu Gln Tyr
1 5 10
<210> 230
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - α CDR1
<400> 230
Val Ser Gly Leu Arg Gly
1 5
<210> 231
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - α CDR2
<400> 231
Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu
1 5
<210> 232
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - α CDR3
<400> 232
Ala Val Gln Pro Arg Gly Asp Gly Ser Ser Asn Thr Gly Lys Leu Ile
1 5 10 15
<210> 233
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - β CDR1
<400> 233
Leu Gly His Asn Ala
1 5
<210> 234
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - β CDR2
<400> 234
Tyr Ser Leu Glu Glu Arg
1 5
<210> 235
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - β CDR3
<400> 235
Ala Ser Ser Gln Asp Pro Tyr Lys Leu Ser Gly Asn Thr Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - α CDR1
<400> 236
Val Gly Ile Ser Ala
1 5
<210> 237
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - α CDR2
<400> 237
Leu Ser Ser Gly Lys
1 5
<210> 238
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - α CDR3
<400> 238
Ala Val Arg Thr Ser Tyr Asp Lys Val Ile
1 5 10
<210> 239
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - β CDR1
<400> 239
Ser Gly His Val Ser
1 5
<210> 240
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - β CDR2
<400> 240
Phe Gln Asn Glu Ala Gln
1 5
<210> 241
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - β CDR3
<400> 241
Ala Ser Ser Leu Gly Gln Ala Tyr Glu Gln Tyr
1 5 10
<210> 242
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 - Vβ
(成熟)
<400> 242
Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Thr Lys Arg Gly
1 5 10 15
Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Val Ser Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe Leu Thr Tyr
35 40 45
Phe Asn Tyr Glu Ala Gln Gln Asp Lys Ser Gly Leu Pro Asn Asp Arg
50 55 60
Phe Ser Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Ile Ser Thr Leu Thr Ile Gln
65 70 75 80
Arg Thr Glu Gln Arg Asp Ser Ala Met Tyr Arg Cys Ala Ser Ser Leu
85 90 95
Thr Gly Ser Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val
100 105 110
Thr Glu
<210> 243
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 - Vβ
(成熟)
<400> 243
Gly Ala Val Val Ser Gln His Pro Ser Trp Val Ile Cys Lys Ser Gly
1 5 10 15
Thr Ser Val Lys Ile Glu Cys Arg Ser Leu Asp Phe Gln Ala Thr Thr
20 25 30
Met Phe Trp Tyr Arg Gln Phe Pro Lys Gln Ser Leu Met Leu Met Ala
35 40 45
Thr Ser Asn Glu Gly Ser Lys Ala Thr Tyr Glu Gln Gly Val Glu Lys
50 55 60
Asp Lys Phe Leu Ile Asn His Ala Ser Leu Thr Leu Ser Thr Leu Thr
65 70 75 80
Val Thr Ser Ala His Pro Glu Asp Ser Ser Phe Tyr Ile Cys Ser Ala
85 90 95
Thr Pro Glu Ala Ser Ser Pro Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Arg Leu Thr Val Thr Glu
115
<210> 244
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 - Vβ
(成熟)
<400> 244
Asp Ala Met Val Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr Gln Phe Gly
1 5 10 15
Lys Pro Val Thr Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His Asn Val Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu Leu Phe His
35 40 45
Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro Asp Asn Phe
50 55 60
Gln Ser Arg Arg Pro Asn Thr Ser Phe Cys Phe Leu Asp Ile Arg Ser
65 70 75 80
Pro Gly Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr Ser Asn Leu
85 90 95
Gln Gly Arg Gln Pro Gln His Phe Gly Asp Gly Thr Arg Leu Ser Ile
100 105 110
Leu Glu
<210> 245
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 - Vβ
(成熟)
<400> 245
Ala Ala Gly Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys Glu Lys Arg
1 5 10 15
Glu Thr Ala Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ile Ser
35 40 45
Phe Tyr Glu Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Ala Gln Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser
65 70 75 80
Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Leu Arg
85 90 95
Leu Gly Arg Glu Thr Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Leu Val
100 105 110
Leu Glu
<210> 246
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 - Vβ
(成熟)
<400> 246
Gly Ala Gly Val Ser Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Val Ala Lys Arg Gly
1 5 10 15
Gln Asp Val Ala Leu Arg Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Val Ser Leu
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Ala Leu Gly Gln Gly Pro Glu Phe Leu Thr Tyr
35 40 45
Phe Gln Asn Glu Ala Gln Leu Asp Lys Ser Gly Leu Pro Ser Asp Arg
50 55 60
Phe Phe Ala Glu Arg Pro Glu Gly Ser Val Ser Thr Leu Lys Ile Gln
65 70 75 80
Arg Thr Gln Gln Glu Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu
85 90 95
Gly Gln Ala Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val
100 105 110
Thr Glu
<210> 247
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 - Vβ
(成熟)
<400> 247
Glu Ala Gly Val Val Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile Glu Lys Lys
1 5 10 15
Gln Pro Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His Asn Thr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Leu Gln Asn Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu Leu Ile Arg
35 40 45
Tyr Glu Asn Glu Glu Ala Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro Lys Asp Arg
50 55 60
Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu Lys Ile Gln
65 70 75 80
Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Leu
85 90 95
Thr Arg Gly Ala Glu Ala Phe Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Thr Val
100 105 110
Val Glu
<210> 248
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 - Vβ
(成熟)
<400> 248
Asp Gly Gly Ile Thr Gln Ser Pro Lys Tyr Leu Phe Arg Lys Glu Gly
1 5 10 15
Gln Asn Val Thr Leu Ser Cys Glu Gln Asn Leu Asn His Asp Ala Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Gln Gly Leu Arg Leu Ile Tyr Tyr
35 40 45
Ser Gln Ile Val Asn Asp Phe Gln Lys Gly Asp Ile Ala Glu Gly Tyr
50 55 60
Ser Val Ser Arg Glu Lys Lys Glu Ser Phe Pro Leu Thr Val Thr Ser
65 70 75 80
Ala Gln Lys Asn Pro Thr Ala Phe Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Arg Asp
85 90 95
Arg Glu Gln Glu Ser Pro Leu His Phe Gly Asn Gly Thr Arg Leu Thr
100 105 110
Val Thr Glu
115
<210> 249
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 - Vβ
(成熟)
<400> 249
Glu Ala Gln Val Thr Gln Asn Pro Arg Tyr Leu Ile Thr Val Thr Gly
1 5 10 15
Lys Lys Leu Thr Val Thr Cys Ser Gln Asn Met Asn His Glu Tyr Met
20 25 30
Ser Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Leu Gly Leu Arg Gln Ile Tyr Tyr
35 40 45
Ser Met Asn Val Glu Val Thr Asp Lys Gly Asp Val Pro Glu Gly Tyr
50 55 60
Lys Val Ser Arg Lys Glu Lys Arg Asn Phe Pro Leu Ile Leu Glu Ser
65 70 75 80
Pro Ser Pro Asn Gln Thr Ser Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Phe Ser
85 90 95
Gly Gly Thr Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val
100 105 110
Thr Glu
<210> 250
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 - Vβ
(成熟)
<400> 250
Ala Ala Gly Val Ile Gln Ser Pro Arg His Leu Ile Lys Glu Lys Arg
1 5 10 15
Glu Thr Ala Thr Leu Lys Cys Tyr Pro Ile Pro Arg His Asp Thr Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Gly Pro Gly Gln Asp Pro Gln Phe Leu Ile Ser
35 40 45
Phe Tyr Glu Lys Met Gln Ser Asp Lys Gly Ser Ile Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Ala Gln Gln Phe Ser Asp Tyr His Ser Glu Leu Asn Met Ser Ser
65 70 75 80
Leu Glu Leu Gly Asp Ser Ala Leu Tyr Phe Cys Ala Ser Ser Tyr Arg
85 90 95
Gly Gly Ser Thr Tyr Glu Gln Tyr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr
100 105 110
Val Thr Glu
115
<210> 251
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 - Vβ
(成熟)
<400> 251
Glu Ala Glu Val Ala Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Thr Glu Lys Ser
1 5 10 15
Gln Ala Val Ala Phe Trp Cys Asp Pro Ile Ser Gly His Ala Thr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu Leu Val Gln
35 40 45
Phe Gln Asp Glu Ser Val Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro Lys Asp Arg
50 55 60
Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu Lys Ile Gln
65 70 75 80
Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Met Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Gln
85 90 95
Arg Asp Ser Pro Asn Glu Lys Leu Phe Phe Gly Ser Gly Thr Gln Leu
100 105 110
Ser Val Leu Glu
115
<210> 252
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 - Vβ
(成熟)
<400> 252
Glu Thr Gly Val Thr Gln Thr Pro Arg His Leu Val Met Gly Met Thr
1 5 10 15
Asn Lys Lys Ser Leu Lys Cys Glu Gln His Leu Gly His Asn Ala Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Lys Gln Ser Ala Lys Lys Pro Leu Glu Leu Met Phe Val
35 40 45
Tyr Ser Leu Glu Glu Arg Val Glu Asn Asn Ser Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Pro Glu Cys Pro Asn Ser Ser His Leu Phe Leu His Leu His Thr
65 70 75 80
Leu Gln Pro Glu Asp Ser Ala Leu Tyr Leu Cys Ala Ser Ser Gln Asp
85 90 95
Pro Tyr Lys Leu Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Phe Gly Glu Gly Ser Trp
100 105 110
Leu Thr Val Val Glu
115
<210> 253
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR10.1 Vα
(成熟)
<400> 253
Lys Gln Glu Val Thr Gln Ile Pro Ala Ala Leu Ser Val Pro Glu Gly
1 5 10 15
Glu Asn Leu Val Leu Asn Cys Ser Phe Thr Asp Ser Ala Ile Tyr Asn
20 25 30
Leu Gln Trp Phe Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Leu Thr Ser Leu Leu
35 40 45
Leu Ile Gln Ser Ser Gln Arg Glu Gln Thr Ser Gly Arg Leu Asn Ala
50 55 60
Ser Leu Asp Lys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Leu Tyr Ile Ala Ala Ser
65 70 75 80
Gln Pro Gly Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Lys Glu Thr Ser
85 90 95
Gly Ser Arg Leu Thr Phe Gly Glu Gly Thr Gln Leu Thr Val Asn Pro
100 105 110
<210> 254
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR11.2 Vα
(成熟)
<400> 254
Ala Gln Thr Val Thr Gln Ser Gln Pro Glu Met Ser Val Gln Glu Ala
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Leu Ser Cys Thr Tyr Asp Thr Ser Glu Asn Asn Tyr
20 25 30
Tyr Leu Phe Trp Tyr Lys Gln Pro Pro Ser Arg Gln Met Ile Leu Val
35 40 45
Ile Arg Gln Glu Ala Tyr Lys Gln Gln Asn Ala Thr Glu Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Val Asn Phe Gln Lys Ala Ala Lys Ser Phe Ser Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Asp Ser Gln Leu Gly Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Ala Phe Ile Tyr
85 90 95
Pro Ser Tyr Thr Ser Gly Thr Tyr Lys Tyr Ile Phe Gly Thr Gly Thr
100 105 110
Arg Leu Lys Val Leu Ala Asn
115
<210> 255
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR12.1 Vα
(成熟)
<400> 255
Asp Gln Gln Val Lys Gln Asn Ser Pro Ser Leu Ser Val Gln Glu Gly
1 5 10 15
Arg Ile Ser Ile Leu Asn Cys Asp Tyr Thr Asn Ser Met Phe Asp Tyr
20 25 30
Phe Leu Trp Tyr Lys Lys Tyr Pro Ala Glu Gly Pro Thr Phe Leu Ile
35 40 45
Ser Ile Ser Ser Ile Lys Asp Lys Asn Glu Asp Gly Arg Phe Thr Val
50 55 60
Phe Leu Asn Lys Ser Ala Lys His Leu Ser Leu His Ile Val Pro Ser
65 70 75 80
Gln Pro Gly Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser Gly Thr Gly
85 90 95
Gly Ser Tyr Ile Pro Thr Phe Gly Arg Gly Thr Ser Leu Ile Val His
100 105 110
Pro Tyr
<210> 256
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.1 Vα
(成熟)
<400> 256
Asp Gln Gln Val Lys Gln Asn Ser Pro Ser Leu Ser Val Gln Glu Gly
1 5 10 15
Arg Ile Ser Ile Leu Asn Cys Asp Tyr Thr Asn Ser Met Phe Asp Tyr
20 25 30
Phe Leu Trp Tyr Lys Lys Tyr Pro Ala Glu Gly Pro Thr Phe Leu Ile
35 40 45
Ser Ile Ser Ser Ile Lys Asp Lys Asn Glu Asp Gly Arg Phe Thr Val
50 55 60
Phe Leu Asn Lys Ser Ala Lys His Leu Ser Leu His Ile Val Pro Ser
65 70 75 80
Gln Pro Gly Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Ala Ser Gly Ile Gly
85 90 95
Asp Tyr Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg Ala
100 105 110
Asn
<210> 257
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR13.2 Vα
(成熟)
<400> 257
Lys Asn Glu Val Glu Gln Ser Pro Gln Asn Leu Thr Ala Gln Glu Gly
1 5 10 15
Glu Phe Ile Thr Ile Asn Cys Ser Tyr Ser Val Gly Ile Ser Ala Leu
20 25 30
His Trp Leu Gln Gln His Pro Gly Gly Gly Ile Val Ser Leu Phe Met
35 40 45
Leu Ser Ser Gly Lys Lys Lys His Gly Arg Leu Ile Ala Thr Ile Asn
50 55 60
Ile Gln Glu Lys His Ser Ser Leu His Ile Thr Ala Ser His Pro Arg
65 70 75 80
Asp Ser Ala Val Tyr Ile Cys Ala Val Arg Thr Ser Tyr Asp Lys Val
85 90 95
Ile Phe Gly Pro Gly Thr Ser Leu Ser Val Ile Pro Asn
100 105
<210> 258
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR14.1 Vα
(成熟)
<400> 258
Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly
1 5 10 15
Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Gly Ser Gln Ser
20 25 30
Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met
35 40 45
Phe Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln
50 55 60
Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln
65 70 75 80
Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Asn Leu Leu Gly Ala
85 90 95
Thr Gly Tyr Ser Thr Leu Thr Phe Gly Lys Gly Thr Met Leu Leu Val
100 105 110
Ser Pro
<210> 259
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR15.1 Vα
(成熟)
<400> 259
Gly Gln Asn Ile Asp Gln Pro Thr Glu Met Thr Ala Thr Glu Gly Ala
1 5 10 15
Ile Val Gln Ile Asn Cys Thr Tyr Gln Thr Ser Gly Phe Asn Gly Leu
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln His Ala Gly Glu Ala Pro Thr Phe Leu Ser Tyr
35 40 45
Asn Val Leu Asp Gly Leu Glu Glu Lys Gly Arg Phe Ser Ser Phe Leu
50 55 60
Ser Arg Ser Lys Gly Tyr Ser Tyr Leu Leu Leu Lys Glu Leu Gln Met
65 70 75 80
Lys Asp Ser Ala Ser Tyr Leu Cys Ala Val Arg Gly Ile Asn Asp Tyr
85 90 95
Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg Ala Asn
100 105 110
<210> 260
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.1 Vα
(成熟)
<400> 260
Glu Asp Gln Val Thr Gln Ser Pro Glu Ala Leu Arg Leu Gln Glu Gly
1 5 10 15
Glu Ser Ser Ser Leu Asn Cys Ser Tyr Thr Val Ser Gly Leu Arg Gly
20 25 30
Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Pro Glu Phe Leu Phe
35 40 45
Thr Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu Lys Glu Lys Glu Arg Leu Lys Ala
50 55 60
Thr Leu Thr Lys Lys Glu Ser Phe Leu His Ile Thr Ala Pro Lys Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ile Thr Gly Phe Gln Lys
85 90 95
Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Leu Val Ser Pro Asn
100 105 110
<210> 261
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR16.2 Vα
(成熟)
<400> 261
Asp Ala Lys Thr Thr Gln Pro Thr Ser Met Asp Cys Ala Glu Gly Arg
1 5 10 15
Ala Ala Asn Leu Pro Cys Asn His Ser Thr Ile Ser Gly Asn Glu Tyr
20 25 30
Val Tyr Trp Tyr Arg Gln Ile His Ser Gln Gly Pro Gln Tyr Ile Ile
35 40 45
His Gly Leu Lys Asn Asn Glu Thr Asn Glu Met Ala Ser Leu Ile Ile
50 55 60
Thr Glu Asp Arg Lys Ser Ser Thr Leu Ile Leu Pro His Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ile Ala Gly Val Gly Arg Gly Gln
85 90 95
Asn Phe Val Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Ser Val Leu Pro Tyr
100 105 110
<210> 262
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR18.1 Vα
(成熟)
<400> 262
Ile Leu Asn Val Glu Gln Ser Pro Gln Ser Leu His Val Gln Glu Gly
1 5 10 15
Asp Ser Thr Asn Phe Thr Cys Ser Phe Pro Ser Ser Asn Phe Tyr Ala
20 25 30
Leu His Trp Tyr Arg Trp Glu Thr Ala Lys Ser Pro Glu Ala Leu Phe
35 40 45
Val Met Thr Leu Asn Gly Asp Glu Lys Lys Lys Gly Arg Ile Ser Ala
50 55 60
Thr Leu Asn Thr Lys Glu Gly Tyr Ser Tyr Leu Tyr Ile Lys Gly Ser
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Phe His Pro Asn Phe
85 90 95
Gly Asn Glu Lys Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu Thr Ile Ile
100 105 110
Pro Asn
<210> 263
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列WT137-45 TCR19.1 Vα
(成熟)
<400> 263
Glu Asp Gln Val Thr Gln Ser Pro Glu Ala Leu Arg Leu Gln Glu Gly
1 5 10 15
Glu Ser Ser Ser Leu Asn Cys Ser Tyr Thr Val Ser Gly Leu Arg Gly
20 25 30
Leu Phe Trp Tyr Arg Gln Asp Pro Gly Lys Gly Pro Glu Phe Leu Phe
35 40 45
Thr Leu Tyr Ser Ala Gly Glu Glu Lys Glu Lys Glu Arg Leu Lys Ala
50 55 60
Thr Leu Thr Lys Lys Glu Ser Phe Leu His Ile Thr Ala Pro Lys Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Gln Pro Arg Gly Asp Gly
85 90 95
Ser Ser Asn Thr Gly Lys Leu Ile Phe Gly Gln Gly Thr Thr Leu Gln
100 105 110
Val Lys Pro
115

Claims (110)

1.T细胞受体(TCR)，包括：
(a)TCRα链可变(Vα)结构域，以及具有SEQ ID NO：199、1-11、181、187、193、205、211、217、223、229、235和241中任何一个所列CDR3氨基酸序列的TCRβ链可变(Vβ)结构域；
(b)具有SEQ ID NO：196、12-22、178、184、190、202、208、214、220、226、232和238中任何一个所列CDR3氨基酸序列的TCR Vα结构域和TCR Vβ结构域；或
(c)具有SEQ ID NO：199、1-11、181、187、193、205、211、217、223、229、235和241中任何一个所列出的CDR3氨基酸序列的TCR Vα结构域，以及包括SEQ ID NO：196、12-22、178、184、190、202、208、214、220、226、232和238中任何一个所列出的CDR3氨基酸序列的TCR Vβ结构域；
其中，TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，IFNγ产生pEC50为8.5或更高。
2.根据权利要求1所述的TCR，其中所述TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59):人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，IFNγ产生pEC50为9.0或更高。
3.根据权利要求1或2所述的TCR，其中所述TCR特异性地与VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，其IFNγ产生pEC50为9.5或更高。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的TCR，其中所述TCR进一步特异性地与细胞表面的VLDFAPPGA(SEQ ID NO：59)：人类白细胞抗原(HLA)复合物结合，所述复合物独立于CD8或在没有CD8时。
5.权利要求1-4中任一项所述的TCR，其中所述HLA包括HLA-A*201。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的TCR，其中Vα结构域包括氨基酸序列，所述序列至少具有：
(a)与SEQ ID NO：34-35和38-44中的任何一个列出的氨基酸序列有约90％的序列同一性；或
(b)与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列有92％的序列同一性。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的TCR，其中Vα结构域包括CDR1和/或CDR2的氨基酸序列与分别存在于SEQ ID NO：34-44中任一项的CDR1和/或CDR2相比没有变化。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的TCR，进一步包括：
(i)SEQ ID NO：194、176、182、188、200、206、212、218、224、230和236中的任何一个列出的CDR1α氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换；和/或
(ii)SEQ ID NO：195、177、183、189、201、207、213、219、225、231和237中的任何一个列出的CDR2α氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的TCR，其中Vβ结构域包括氨基酸序列，所述氨基酸序列至少具有：
(a)与SEQ ID NO：23-25、27、28、30、32和33中的任何一个所列出的氨基酸序列有90％的序列同一性；
(b)与SEQ ID NO：29的氨基酸序列有92％的序列同一性；
(c)与SEQ ID NO：31的氨基酸序列有93％的序列同一性；或
(d)与SEQ ID NO：26的氨基酸序列有95％的序列同一性。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的TCR，其中Vβ结构域包括CDR1和/或CDR2的氨基酸序列与分别存在于SEQ ID NO：23-33中任一项的CDR1和/或CDR2相比没有变化。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的TCR，进一步包括：
(i)SEQ ID NO：197、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233和239中的任何一个列出的CDR1β氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换；和/或
(ii)SEQ ID NO：198、180、186、192、204、210、216、222、228、234和240中的任何一个所列出的CDR2β氨基酸序列，或其包含一个或两个氨基酸替换的变体，其中，可选的是，所述一个或两个氨基酸替换包含保守的氨基酸替换。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的TCR，包括以下列出的CDR1α、CDR2α、CDR3α、CDR1β、CDR2β和CDR3β氨基酸序列：
(i)分别为SEQ ID NO：194、195、196或12、197、198、和199或1；
(ii)分别为SEQ ID NO：176、177、178或18、179、180、和181或7；
(iii)分别为SEQ ID NO：182、183、184或20、185、186、和187或9；
(iv)分别为SEQ ID NO：188、189、190或21、191、192、和193或10；
(v)分别为SEQ ID NO：200、201、202或13、203、204、和205或2；
(vi)分别为SEQ ID NO：206、207、208或14、209、210、和211或3；
(vii)分别为SEQ ID NO：212、213、214或15、215、216、和217或4；
(viii)分别为SEQ ID NO：218、219、220或17、221、222、和223或6；
(ix)分别为SEQ ID NO：224、225、226或19、227、228、和229或8；
(x)分别为SEQ ID NO：230、231、232或22、233、234、和235或11；或
(xi)分别为SEQ ID NO：236、237、238或16、238、240、和241或5。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的TCR，其中Vα结构域包括SEQ ID NO：253-263和34-44中任一项所述的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的TCR，其中Vα结构域由SEQ ID NO：253-263和34-44中任一项列出的氨基酸序列组成。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的TCR，其中Vβ结构域包括SEQ ID NO：242-252和23-33中任一项所列出的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的TCR，其中Vβ结构域由SEQ ID NO：242-252和23-33中任一项列出的氨基酸序列组成。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括与SEQ ID NO：47的氨基酸序列具有至少约90％序列同一性的TCRα链恒定结构域。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括与SEQ ID NO：45或46的氨基酸序列具有至少约90％序列同一性的TCRβ链恒定结构域。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括含有Vα结构域和α链恒定结构域的TCRα链，其中：
(a)Vα结构域与SEQ ID NO：34-35和38-44中的任何一个列出的氨基酸序列具有至少约90％的序列同一性，并且α链恒定结构域与SEQ ID NO：47的氨基酸序列具有至少约98％的序列同一性；或
(b)Vα结构域与SEQ ID NO：36或37的氨基酸序列具有92％的序列同一性，并且α链恒定结构域与SEQ ID NO：47的氨基酸序列具有至少约98％的序列同一性。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括含有Vα结构域和α链恒定结构域的TCRα链，其中：
(a)Vα结构域包括SEQ ID NO：242-252和34-44中任何一个列出的氨基酸序列，而α链恒定结构域包括SEQ ID NO：47的氨基酸序列；或
(b)Vα结构域由SEQ ID NO：242-252和34-44中的任何一个列出的氨基酸序列组成，而α链恒定结构域由SEQ ID NO：47的氨基酸序列组成。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括含有Vβ结构域和β链恒定结构域的TCRβ链，其中：
(a)Vβ结构域与SEQ ID NO：23-25、27、28、30、32和33中的任何一个列出的氨基酸序列具有至少约90％的序列同一性，并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO：45的氨基酸序列或与SEQID NO：46的氨基酸序列具有至少约95％的序列同一性；
(b)Vβ结构域与SEQ ID NO：29的氨基酸序列有92％的序列同一性，并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO：45的氨基酸序列或与SEQ ID NO：46的氨基酸序列有至少约95％的序列同一性；
(c)Vβ结构域与SEQ ID NO：31的氨基酸序列有93％的序列同一性，并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO：45的氨基酸序列或与SEQ ID NO：46的氨基酸序列有至少约95％的序列同一性；或
(c)Vβ结构域与SEQ ID NO：26的氨基酸序列有95％的序列同一性，并且β链恒定结构域包括SEQ ID NO：45的氨基酸序列或与SEQ ID NO：46的氨基酸序列有至少约95％的序列同一性。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括含有Vβ结构域和β链恒定结构域的TCRβ链，其中：
(a)Vβ结构域包括SEQ ID NO：253-263和23-33中任何一个列出的氨基酸序列，而β链恒定结构域包括SEQ ID NO：45或46的氨基酸序列；
(b)Vβ结构域由SEQ ID NO：253-263和23-33中任何一个列出的氨基酸序列组成，β链恒定结构域由SEQ ID NO：45或46的氨基酸序列组成；
(c)Vβ结构域包括SEQ ID NO：25、28、29、32和33中任何一个列出的氨基酸序列，而β链恒定结构域包括SEQ ID NO：45的氨基酸序列；
(d)Vβ结构域由SEQ ID NO：25、28、29、32和33中任何一个列出的氨基酸序列组成，而β链恒定结构域由SEQ ID NO：45的氨基酸序列组成；
(e)Vβ结构域包括SEQ ID NO：23、24、26、27、30和31中任何一个列出的氨基酸序列，而β链恒定结构域包括SEQ ID NO：46的氨基酸序列；或
(f)Vβ结构域由SEQ ID NO：23、24、26、27、30和31中任何一个列出的氨基酸序列组成，β链恒定结构域由SEQ ID NO：46的氨基酸序列组成。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的TCR，其中Vα结构域和Vβ结构域包括或由以下SEQ ID NO中列出的氨基酸序列组成：
(i)分别为253和242；
(ii)分别为259和248；
(iii)分别为261和250；
(iv)分别为262和251；
(v)分别为257和246；
(vi)分别为254和243；
(vii)分别为255和244；
(viii)分别为256和245；
(ix)分别为258和247；
(x)分别为260和249；
(xi)分别为263和252；
(xii)分别为34和23；
(xiii)分别为40和29；
(xiv)分别为42和31；
(xv)分别为43和32；
(xvi)分别为35和24；
(xvii)分别为36和25；
(xviii)分别为37和26；
(xix)分别为39和28；
(xx)分别为41和30；
(xxi)分别为44和33；或
(xxii)分别为38和27。
24.根据权利要求23所述的TCR，进一步包括α链恒定结构域和/或β链恒定结构域，其中α链恒定结构域包括与SEQ ID NO：47中所列氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，并且其中β链恒定结构域包括与SEQ ID NO：45或46中所列氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
25.根据权利要求24所述的TCR，其中存在α链恒定结构域，Vα结构域和α链恒定结构域共同构成TCRα链。
26.根据权利要求24或25所述的TCR，其中存在β链恒定结构域，Vα结构域和β链恒定结构域共同构成TCRβ链。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括scTCR。
28.根据权利要求1-26中任一项所述的TCR，其中所述TCR包括CAR。
29.编码根据权利要求1-28中任一项所述的TCR的分离的多核苷酸。
30.根据权利要求29所述的多核苷酸，其中编码TCR的多核苷酸对感兴趣的宿主细胞进行了密码子优化。
31.根据权利要求29或30所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码的氨基酸序列与包括或由其组成的SEQ ID NO：48-58中任何一个所列出的氨基酸序列具有至少95％的同一性。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的多核苷酸，包括SEQ ID NO.64-165中任一项所述的多核苷酸序列。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的多核苷酸，进一步包括：
(i)编码多肽的多核苷酸，所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，其中，可选地，编码的多肽是或包括CD8共受体α链；
(ii)编码多肽的多核苷酸，所述多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分，其中，可选的是，编码的多肽是或包括CD8共受体β链；或
(iii)(i)的多核苷酸和(ii)的多核苷酸。
34.根据权利要求33所述的多核苷酸，包括：
(a)编码包括CD8共受体α链细胞外部分的多肽的多核苷酸；
(b)编码多肽的多核苷酸，所述多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分；以及
(c)编码自裂解肽的多核苷酸，置于(a)的多核苷酸和(b)的多核苷酸之间。
35.根据权利要求33或34所述的多核苷酸，进一步包括编码自裂解肽并被放置在以下的多核苷酸：
(1)编码结合蛋白的多核苷酸和编码包含CD8共受体α链细胞外部分的多肽的多核苷酸之间；和/或
(2)编码结合蛋白的多核苷酸和编码包括CD8共受体β链细胞外部分的多肽的多核苷酸之间。
36.根据权利要求33-35中任一项所述的多核苷酸，包括可操作地连接在框内的以下：
(i)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnTCR)；
(ii)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnTCR)；
(iii)(pnTCR)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnCD8β)；
(iv)(pnTCR)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnCD8α)；
(v)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnTCR)-(pnSCP2)-(pnCD8β)；或
(vi)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnTCR)-(pnSCP2)-(pnCD8α)，
其中pnCD8α是编码以下多肽的多核苷酸：所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，
其中pnCD8β是编码以下多肽的多核苷酸：所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，
其中，pnTCR是编码TCR的多核苷酸，
并且其中pnSCP1和pnSCP2各自独立地是编码自裂解肽的多核苷酸，其中多核苷酸和/或编码的自裂解肽可选择相同或不同。
37.根据权利要求33-36中任一项所述的多核苷酸，其中编码的TCR包括TCRα链和TCRβ链，其中所述多核苷酸包括编码自裂解肽的多核苷酸，所述多核苷酸放置在编码TCRα链的多核苷酸与编码TCRβ链的多核苷酸之间。
38.根据权利要求37所述的多核苷酸，包括可操作地连接在框架内的以下：
(i)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnTCRβ)-(pnSCP3)-(pnTCRα)；
(ii)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnTCRβ)-(pnSCP3)-(pnTCRα)；
(iii)(pnCD8α)-(pnSCP1)-(pnCD8β)-(pnSCP2)-(pnTCRα)-(pnSCP3)-(pnTCRβ)；
(iv)(pnCD8β)-(pnSCP1)-(pnCD8α)-(pnSCP2)-(pnTCRα)-(pnSCP3)-(pnTCRβ)；
(v)(pnTCRβ)-(pnSCP1)-(pnTCRα)-(pnSCP2)-(pnCD8α)-(pnSCP3)-(pnCD8β)；
(vi)(pnTCRβ)-(pnSCP1)-(pnTCRα)-(pnSCP2)-(pnCD8β)-(pnSCP3)-(pnCD8α)；
(vii)(pnTCRα)-(pnSCP1)-(pnTCRβ)-(pnSCP2)-(pnCD8α)-(pnSCP3)-(pnCD8β)；或
(viii)(pnTCRα)-(pnSCP1)-(pnTCRβ)-(pnSCP2)-(pnCD8β)-(pnSCP3)-(pnCD8α)，
其中pnCD8α是编码以下多肽的多核苷酸：所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，
其中pnCD8β是编码以下多肽的多核苷酸：所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，
其中，pnTCRα是编码TCRα链的多核苷酸，
其中，pnTCRβ是编码TCRβ链的多核苷酸，
并且其中pnSCP1、pnSCP2和pnSCP3各自独立地是编码自裂解肽的多核苷酸，其中多核苷酸和/或编码的自裂解肽可选择相同或不同。
39.表达载体，包括与表达控制序列可操作地连接的权利要求29-38中任一项所述的多核苷酸。
40.根据权利要求39所述的表达载体，其中所述载体能够将多核苷酸递送给宿主细胞。
41.根据权利要求39所述的表达载体，其中宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。
42.根据权利要求41所述的表达载体，其中免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞或其任意组合。
43.根据权利要求42所述的表达载体，其中所述T细胞是幼稚T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞或其任意组合。
44.根据权利要求39-43中任一项所述的表达载体，其中所述载体是病毒载体。
45.根据权利要求44所述的表达载体，其中病毒载体是腺病毒载体、慢病毒载体或γ-逆转录病毒载体。
46.宿主细胞，包括根据权利要求29-38中任一项所述的多核苷酸或根据权利要求29-45中任一项所述的表达载体，其中宿主细胞在其细胞表面表达由多核苷酸编码的TCR，并且其中多核苷酸与宿主细胞是异源的。
47.根据权利要求46所述的宿主细胞，其中Vα结构域由多核苷酸编码，所述多核苷酸包括与SEQ ID NO：97、98和101-107中的任何一个多核苷酸的至少75％序列同一性，或与SEQID NO：99或100的至少94％序列同一性。
48.根据权利要求46或47所述的宿主细胞，其中Vα结构域是由以下多核苷酸编码的：
(a)包括SEQ ID NO：97-107中任何一个多核苷酸的序列；或
(b)由SEQ ID NO：97-107中的任何一个多核苷酸的序列组成。
49.根据权利要求46-48中任一项的宿主细胞，其中Vβ结构域由多核苷酸编码，所述多核苷酸包括与SEQ ID NO：75-77、79、82、84和85中任一项的至少75％的序列同一性，或与SEQID NO：78、80、81和83中任一项多核苷酸的至少95％的序列同一性。
50.根据权利要求46-49中任一项所述的宿主细胞，其中Vβ结构域由以下多核苷酸编码：
(a)包括SEQ ID NO：75-85中的任何一个多核苷酸的序列；或
(b)由SEQ ID NO：75-85中的任何一个多核苷酸的序列组成。
51.根据权利要求46-50中任一项所述的宿主细胞，其中TCRα链包括由与SEQ ID NO：110至少98％相同的多核苷酸编码的α链恒定结构域。
52.根据权利要求46-51中任一项所述的宿主细胞，其中TCRα链包括由以下多核苷酸编码的α链恒定结构域：
(a)包括SEQ ID NO：110的多核苷酸序列；或
(b)由SEQ ID NO：110的多核苷酸序列组成。
53.根据权利要求46-52中任一项所述的宿主细胞，其中TCR的β链包括β链恒定结构域是由与SEQ ID NO：108或109至少有99.9％序列同一性的多核苷酸编码的。
54.根据权利要求46-53中任一项所述的宿主细胞，其中TCRβ链包括由以下多核苷酸编码的β链恒定结构域：
(a)包括SEQ ID NO：108或109的多核苷酸序列；或
(b)由SEQ ID NO：108或109的多核苷酸序列组成。
55.根据权利要求46-54中任一项所述的宿主细胞，其中所述多核苷酸包括编码自裂解肽的核苷酸序列，其放置在编码TCRα链的多核苷酸序列和编码TCRβ链的多核苷酸序列之间。
56.根据权利要求55所述的宿主细胞，其中编码的自裂解肽：
(a)包括SEQ ID NO：60-63中任何一种多肽的氨基酸序列；或
(b)由SEQ ID NO：60-63的任何一种多肽的序列组成。
57.根据权利要求55或56所述的宿主细胞，其中编码自裂解肽的多核苷酸：
(a)包括SEQ ID NO：166-170中的任何一个多核苷酸的序列；或
(b)由SEQ ID NO：166-170中的任何一个多核苷酸的序列组成。
58.根据权利要求46-57中任一项所述的宿主细胞，其中TCRα链、自裂解肽和TCRβ链由与SEQ ID NO：155-165中任一项至少95％相同的多核苷酸编码。
59.根据权利要求46-58中任一项所述的宿主细胞，其中TCRα链、自裂解肽和TCRβ链由以下多核苷酸编码：
(a)包括SEQ ID NO：155-165中的任何一个多核苷酸的序列；或
(b)由SEQ ID NO：155-165中的任何一个多核苷酸的序列组成。
60.根据权利要求58或59所述的宿主细胞，其中编码的TCRα链、自裂解肽和TCRβ链包括与SEQ ID NO：48-58的任何一种多肽具有至少95％同一性的氨基酸序列。
61.根据权利要求58-60中任一项所述的宿主细胞，其中编码的TCRα链、自裂解肽和TCRβ链：
(a)包括SEQ ID NO：48-58中任何一种多肽的氨基酸序列；或
(b)由SEQ ID NO：48-58的任何一种多肽的氨基酸序列组成。
62.根据权利要求46-61中任一项所述的宿主细胞，其中宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。
63.根据权利要求62所述的宿主细胞，其中所述免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、树突状细胞或其任何组合，其中，可选地，如果存在所述组合，包括CD4+T细胞和CD8+T细胞。
64.根据权利要求62所述的宿主细胞，其中所述免疫系统细胞是T细胞。
65.根据权利要求64所述的宿主细胞，其中所述T细胞是幼稚T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞或其任意组合。
66.根据权利要求46-65中任一项所述的宿主细胞，其中所述TCR与内源性TCR相比，在T细胞上具有更高的表面表达。
67.根据权利要求46-66中任一项所述的宿主细胞，进一步包括：
(i)编码以下多肽的异源多核苷酸：所述多肽包括CD8共受体α链的细胞外部分，其中，可选地，编码的多肽是或包括CD8共受体α链；
(ii)编码以下多肽的异源多核苷酸：所述多肽包括CD8共受体β链的细胞外部分，其中，可选的是，编码的多肽是或包括CD8共受体β链；或
(iii)(i)的多核苷酸和(ii)的多核苷酸，
其中，可选的是，所述宿主细胞包括CD4+T细胞。
68.根据权利要求67所述的宿主细胞，包括：
(a)编码包括CD8共受体α链细胞外部分的多肽的异源多核苷酸；
(b)编码包括CD8共受体β链细胞外部分的多肽的异源多核苷酸；和
(c)编码自裂解肽的多核苷酸，放置于(a)的多核苷酸和(b)的多核苷酸之间。
69.根据权利要求46-68中任一项所述的宿主细胞，其中当样本中同时存在宿主细胞和肿瘤细胞时，所述宿主细胞能够杀死：
(i)乳腺癌细胞系MDA-MB-468的肿瘤细胞；
(ii)胰腺癌细胞系PANC-1的肿瘤细胞；
(iii)乳腺癌细胞系MDA-MB-231的肿瘤细胞；
(iv)表达HLA-A2的骨髓性白血病细胞系K562的肿瘤细胞，其中，可选的是，所述HLA-A2包括HLA-A*201；
(v)表达HLA-A2的结肠癌细胞系RKO的肿瘤细胞，其中，可选的是，所述HLA-A2包括HLA-A*201；或
(vi)(i)-(v)的肿瘤细胞的任意组合。
70.根据权利要求69所述的宿主细胞，其中当宿主细胞和肿瘤细胞以32:1、16:1、8:1、4:1、2:1或1.5:1的宿主细胞：肿瘤细胞比例存在于样品中时，所述宿主细胞能够杀死肿瘤细胞。
71.组合物，包括权利要求46-70中任一项所述的宿主细胞和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
72.根据权利要求71所述的组合物，包括宿主CD4+T细胞和宿主CD8+T细胞。
73.一种治疗过度增殖性或增殖性疾病的方法，包括向有需要的人类受试者施用包含根据权利要求1-28中任一项所述的人类Wilms肿瘤蛋白1(WT1)特异性TCR的组合物。
74.根据权利要求73所述的方法，其中TCR表达在宿主细胞的表面，其中，可选的是，宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞，其中，进一步可选的是，免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、树突状细胞或其任意组合。
75.根据权利要求74所述的方法，其中所述宿主细胞包括权利要求46-70中任一项所述的宿主细胞。
76.根据权利要求73所述的方法，其中所述过度增殖性或增殖性疾病是血液学恶性肿瘤或实体癌。
77.根据权利要求76所述的方法，其中血液学恶性肿瘤选自急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性嗜酸细胞白血病(CEL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或多发性骨髓瘤(MM)。
78.根据权利要求77所述的方法，其中实体癌症选自乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胆汁癌、膀胱癌、骨和软组织癌、脑瘤、宫颈癌、结肠癌、大肠腺癌、结直肠癌、韧带样瘤、胚胎癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、胃腺癌、多形性胶质细胞瘤、妇科肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、肝癌、间皮瘤、恶性黑色素瘤、骨肉瘤、胰腺癌、胰腺导管腺癌、原发性星形细胞瘤、原发性甲状腺癌、前列腺癌、肾癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、睾丸生殖细胞瘤、尿道癌、子宫肉瘤或子宫癌。
79.根据权利要求73-78中任一项所述的方法，其中所述TCR能够以I类HLA限制的方式促进针对人WT1的抗原特异性T细胞反应。
80.根据权利要求79所述的方法，其中I类HLA限制性反应是与抗原处理相关转运体(TAP)无关的。
81.根据权利要求79或80所述的方法，其中抗原特异性T细胞反应包括CD4+辅助T淋巴细胞(Th)反应和CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应中的至少一个。
82.根据权利要求81所述的方法，其中CTL反应是针对WT1过度表达细胞的。
83.一种用于治疗以具有过度增殖性或增殖性疾病的受试者的细胞中WT1过表达为特征的疾病的过继性免疫疗法方法，包括向受试者施用有效量的根据权利要求46-70中任一项所述的宿主细胞，或权利要求71或72所述的组合物。
84.根据权利要求83所述的方法，其中宿主细胞在体外被修饰。
85.根据权利要求83或84所述的方法，其中宿主细胞是同种异体细胞、同源细胞或受试者的自体细胞。
86.根据权利要求83-85中任一项所述的方法，其中宿主细胞是造血祖细胞或人类免疫系统细胞。
87.根据权利要求86所述的方法，其中免疫系统细胞是CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-双阴性T细胞、γδT细胞、自然杀伤细胞、自然杀伤T细胞、树突状细胞或其任意组合。
88.根据权利要求87所述的方法，其中所述T细胞是幼稚T细胞、中央记忆T细胞、效应记忆T细胞或其任意组合。
89.根据权利要求83-88中任一项所述的方法，其中所述过度增殖性或增殖性疾病是血液学恶性肿瘤或实体癌。
90.根据权利要求89所述的方法，其中血液学恶性肿瘤选自急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性嗜酸细胞白血病(CEL)、骨髓增生异常综合症(MDS)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)或多发性骨髓瘤(MM)。
91.根据权利要求89所述的方法，其中实体癌选自乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胆汁癌、膀胱癌、骨和软组织癌、脑瘤、宫颈癌、结肠癌、大肠腺癌、结直肠癌、韧带样瘤、胚胎癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、胃腺癌、多形性胶质细胞瘤、妇科肿瘤、头颈部鳞状细胞癌、肝癌、间皮瘤、恶性黑色素瘤、骨肉瘤、胰腺癌、胰腺导管腺癌、原发性星形细胞瘤、原发性甲状腺癌、前列腺癌、肾癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、睾丸生殖细胞瘤、尿道癌、子宫肉瘤或子宫癌。
92.根据权利要求83-91中任一项所述的方法，其中宿主细胞是以胃肠外施用。
93.根据权利要求83-92中任一项所述的方法，其中所述方法包括向受试者施用多个剂量的宿主细胞。
94.根据权利要求93所述的方法，其中多个剂量的施用时间间隔为约2至约4周。
95.根据权利要求83-94中任一项所述的方法，其中宿主细胞以约107个细胞/m2至约1011个细胞/m2的剂量施用于受试者。
96.根据权利要求83-95中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括施用细胞因子。
97.根据权利要求96所述的方法，其中所述细胞因子是IL-2、IL-15、IL-21或其任意组合。
98.根据权利要求97所述的方法，其中所述细胞因子是IL-2，并与宿主细胞同时或相继施用。
99.根据权利要求98所述的方法，其中细胞因子是相继施用的，条件是受试者在细胞因子施用前至少被施用了三次或四次宿主细胞。
100.根据权利要求97-99中任一项所述的方法，其中所述的细胞因子是IL-2，并在皮下施用。
101.根据权利要求83-100中任一项所述的方法，其中受试者进一步接受免疫抑制治疗。
102.根据权利要求101所述的方法，其中免疫抑制疗法选自钙调磷酸酶抑制剂、皮质类固醇、微管抑制剂、低剂量的霉酚酸前药或其任意组合。
103.根据权利要求83-102中任一项所述的方法，其中受试者已经接受了非清髓性或清髓性造血细胞移植。
104.根据权利要求103所述的方法，其中受试者在非清髓造血细胞移植后至少三个月被施用宿主细胞。
105.根据权利要求103所述的方法，其中受试者在清髓造血细胞移植后至少两个月被施用宿主细胞。
106.根据权利要求73-105中任一项所述的方法，其中受试者已经或正在接受免疫检查点抑制剂和/或刺激性免疫检查点制剂的激动剂。
107.一种包含根据权利要求46-70中任一项所述的宿主细胞或权利要求72所述的组合物的单位剂量形式。
108.根据权利要求107所述的单位剂量形式，其中宿主细胞的剂量为约107个细胞/m2至约1011个细胞/m2。
109.根据权利要求1-28中任一项所述的TCR、权利要求29-38中任一项所述的多核苷酸、权利要求39-45中任一项所述的载体、权利要求46-70中任一项所述的宿主细胞、或权利要求71或72的组合物、或其任何组合，用于治疗与Wilms肿瘤蛋白1(WT1)表达或过度表达相关的增殖性或过度增殖性疾病的方法中。
110.权利要求1-28中任一项所述的TCR、权利要求29-38中任一项所述的多核苷酸、权利要求39-45中任一项所述的载体、权利要求46-70中任一项所述的宿主细胞、或权利要求71或72所述的组合物、或其任何组合，用于制造治疗与Wilms肿瘤蛋白1(WT1)表达或过度表达相关的增殖性或过度增殖性疾病的药物的方法中。
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