JP2022525099A - 高アビディティｗｔ１ｔ細胞受容体とその使用 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）に由来する腫瘍関連抗原ｐ３７に対して高い機能的アビディティを有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び関連する結合タンパク質と、このような高親和性ＷＴ１特異的ＴＣＲを発現するＴ細胞と、前記ＴＣＲをコードする核酸と、がんのように細胞がＷＴ１を過剰発現及び／又はｐ３７抗原を産生する疾患又は障害の治療用組成物を提供する。

Description

［背景技術］
遺伝子組換えＴ細胞による養子Ｔ細胞免疫療法は、腫瘍関連抗原を標的とするために抗体ベースのキメラ受容体１－３や高親和性ＴＣＲ４－８等の親和性の十分な抗原受容体を使用した複数の試験で有望であることが分かっている。胸腺において多様性を生み出す自然過程は、長さとアミノ酸組成の異なる高度に多様なＣＤＲ３を生成するためにＲＡＧによるＴＣＲ遺伝子再構成を利用しているが、中枢性免疫寛容により課せられる親和性限界内で有効な高親和性ＴＣＲを単離することは、候補の細胞内自己／腫瘍抗原が同定されている多様な悪性腫瘍に養子Ｔ細胞免疫療法を実施する際に依然として難題である９，１０。また、ＴＣＲ養子免疫療法は、ＭＨＣクラスＩにより細胞表面上に提示される細胞内抗原を検出することができる。
ＷＴ１タンパク質はその免疫特徴（Ｃｈｅｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：５３２３，２００９）と、予後不良に至っている多くのアグレッシブな腫瘍タイプで発現されることから、臨床開発の魅力的な標的である。ＷＴ１は増殖と発がんを促進する遺伝子発現の調節に関与しており（Ｏｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．９０：１９４，１９９９）、大半の高リスク白血病（Ｍｅｎｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ９：１０６０，１９９５）、ＮＳＣＬＣの８０％まで（Ｏｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １００：２９７，２００２）、中皮腫の１００％（Ｔｓｕｔａ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｍｏｒｐｈｏｌ．１７：１２６，２００９）、及び婦人科悪性腫瘍の≧８０％（Ｃｏｏｓｅｍａｎｓ ａｎｄ Ｖａｎ Ｇｏｏｌ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：７０５，２０１４）で過剰発現される。ＷＴ１タンパク質のいくつかのペプチドは、ＨＬＡ－Ａ＊０２０１拘束性抗原である腫瘍関連抗原ペプチドであることが分かっている。
Ｃｈｅｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：５３２３，２００９ Ｏｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．９０：１９４，１９９９ Ｍｅｎｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ９：１０６０，１９９５ Ｏｊｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １００：２９７，２００２ Ｔｓｕｔａ ｅｔ ａｌ．，Ａｐｐ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｍｏｒｐｈｏｌ．１７：１２６，２００９ Ｃｏｏｓｅｍａｎｓ ａｎｄ Ｖａｎ Ｇｏｏｌ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：７０５，２０１４
白血病や腫瘍等の種々のがんに対するＴＣＲ免疫療法として、従来の方法に代わる高度にＷＴ１抗原特異的な方法が明らかに必要である。
本願に開示する実施形態は、これらの必要に対処すると共に、他の関連する利点を提供する。
図１Ａ及び１Ｂは、高スループットシーケンシングストラテジーにより、ＷＴ１３７特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。（Ａ）ＷＴ１３７－４５ペプチド／ＭＨＣ四量体との結合性の高いＴＣＲクロノタイプを同定するための初期シーケンシングストラテジーの模式図。 図１Ａ及び１Ｂは、高スループットシーケンシングストラテジーにより、ＷＴ１３７特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。（Ｂ）全集団の百分率に対する選別集団の濃縮倍率を示し、選択したＴＣＲをハイライト表示する。黒丸により示す全ＴＣＲを合成し、抗原特異性について評価した（合計２７）。 高レベルのＣＤ８非依存的（ＣＤ８ｉ）四量体と結合するＴＣＲの機能的評価の結果を示す。内在性ＴＣＲα／β鎖を欠損するＪｕｒｋａｔ細胞でＴＣＲコンストラクトを発現させた。各ＴＣＲのＣＤ３発現に対する四量体染色を示す（ＣＤ３発現はトランスジェニックＴＣＲ表面発現に直接相関する）。 図３Ａ～３Ｃは、ＣＤ８非依存的（ＣＤ８ｉ）四量体を使用した改変型高スループットシーケンシングストラテジーにより、他のＷＴ１３７特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。（Ａ）ＣＤ８非依存的ＷＴ１３７ペプチド／ＭＨＣ四量体との結合性の高いＴＣＲクロノタイプを同定するための改変型シーケンシングストラテジーの模式図。 図３Ａ～３Ｃは、ＣＤ８非依存的（ＣＤ８ｉ）四量体を使用した改変型高スループットシーケンシングストラテジーにより、他のＷＴ１３７特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。（Ｂ）全集団の百分率に対する初期選別集団の濃縮倍率と、（Ｃ）ＣＤ８ｉ四量体を使用した場合の同様の解析を比較して示す。表面ＣＤ３レベルの低下とＣＤ８ｉ四量体との結合性に基づいて更に１４のＴＣＲを選択した。影（斜線パターン）丸により示す全ＴＣＲを合成し、抗原特異性について評価した。 図３Ａ～３Ｃは、ＣＤ８非依存的（ＣＤ８ｉ）四量体を使用した改変型高スループットシーケンシングストラテジーにより、他のＷＴ１３７特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。（Ｂ）全集団の百分率に対する初期選別集団の濃縮倍率と、（Ｃ）ＣＤ８ｉ四量体を使用した場合の同様の解析を比較して示す。表面ＣＤ３レベルの低下とＣＤ８ｉ四量体との結合性に基づいて更に１４のＴＣＲを選択した。影（斜線パターン）丸により示す全ＴＣＲを合成し、抗原特異性について評価した。 選択したＷＴ１３７ＴＣＲのＣＤ８ｉ四量体結合を示す。内在性ＴＣＲα／β鎖を欠損するＪｕｒｋａｔ細胞でＴＣＲコンストラクトを発現させた。各ＴＣＲのＣＤ３発現に対する四量体染色を示す（ＣＤ３発現はトランスジェニックＴＣＲ表面発現に直接相関する）。 図５Ａ及び５Ｂは、選択したＴＣＲを初代ＣＤ８＋ＰＢＭＣに形質導入した場合のＩＦＮγアッセイにおけるペプチドＥＣ５０の計算結果を示す。（Ａ）ドナーＰＭＢＣから単離したＣＤ８＋Ｔ細胞に選択したＴＣＲを形質導入した。１週間後に、細胞から四量体＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を選別し、拡大した。拡大した抗原特異的細胞をペプチドパルスしたＴ２標的細胞と４～６時間共培養し、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ産生を測定した。 図５Ａ及び５Ｂは、選択したＴＣＲを初代ＣＤ８＋ＰＢＭＣに形質導入した場合のＩＦＮγアッセイにおけるペプチドＥＣ５０の計算結果を示す。（Ｂ）ＩＦＮγ産生細胞の百分率を非直線回帰により用量反応曲線にフィットさせ、各ＴＣＲのペプチドＥＣ５０を計算した。 ＷＴ１３７特異的ＴＣＲを発現する初代ＣＤ８＋Ｔ細胞がＷＴ１＋ＨＬＡ－Ａ２＋乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８を効率的に殺傷することを示す。ＣＤ８＋初代Ｔ細胞にＴＣＲを形質導入し、四量体との結合性の高さで選別することにより精製し、ＣｙｔｏＬｉｇｈｔ（Ｒ）Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄ色素で事前に染色しておいた乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８に対して８：１の比で混合した（３本ずつ）。ＴＣＲを形質導入した各Ｔ細胞集団について指定時点で（生きた標的細胞の総数に相関する）赤色オブジェクト総面積を７２時間にわたって計算した。ＴＣＲを形質導入したＴ細胞の持続性抗原に対する継続的応答性を評価するために、４８時間後にＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞を追加した。 ＴＣＲ１０．１を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞はいずれも反復インビトロチャレンジ後にＷＴ１＋Ａ２＋膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ－１を排除できることを示す。ＷＴ１３７ＴＣＲ１０．１を発現するようにＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方に形質導入した。ＣＤ４＋Ｔ細胞には更にＣＤ８α遺伝子とＣＤ８β遺伝子を発現するように形質導入した。８日後に、形質導入した細胞を選別し、ＣＤ８＋四量体＋Ｔ細胞とＣＤ４＋／ＣＤ８＋四量体＋Ｔ細胞を精製した。ＮｕｃＬｉｇｈｔ（Ｒ）Ｒｅｄ色素を発現するように事前に形質導入しておいた膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ－１に対して８：１の比となるように、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋、ＣＤ８＋又はこれらの２集団（ＣＤ４とＣＤ８）の混合物である抗原特異的細胞を混合した（３本ずつ）。ＴＣＲを形質導入した各Ｔ細胞集団について指定時点で（生きた標的細胞の総数に相関する）赤色オブジェクト総面積を計算した。ＴＣＲを形質導入したＴ細胞の持続性抗原に対する継続的応答性を評価するために、４８時間後にＰＡＮＣ－１細胞を追加した。 図８Ａ～８Ｄは、Ｓｃｈｍｉｔｔら（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３５：１１８８，２０１７）のＷＴ１ｐ１２６ペプチド特異的Ｃ４ＴＣＲを形質導入したＴ細胞による腫瘍細胞株殺傷と、本開示のＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲ（ＷＴ１３７－４５ＴＣＲ１５．１）を形質導入したＴ細胞による殺傷との比較を示す。Ｃ４ＴＣＲは、本開示のＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲと比較してペプチド：ＭＨＣ複合体に対する親和性が低いことに注目されたい。
［詳細な説明］
本開示は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）（例えばヒト白血球抗原、ＨＬＡ）に関連するアミノ酸３７～４５から構成されるＷＴ１由来抗原ペプチド（別称ＷＴ１３７－４５ペプチド又はｐ３７ペプチド抗原；例えばＶＬＤＦＡＰＰＧＡ、配列番号５９）に対して高い機能的アビディティを有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。このようなｐ３７ペプチド抗原特異的ＴＣＲは例えば、ＷＴ１を過剰発現するがん等のがんを治療するために養子免疫療法に有用である。
背景として、腫瘍は正常であった組織から発生するので、Ｔ細胞免疫療法の大半の腫瘍標的は自己抗原である。例えば、このような腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）はがん細胞では高レベルで発現されるが、他の細胞では発現されないか、又は最小限にしか発現されないと思われる。胸腺におけるＴ細胞発生中に、自己抗原と弱く結合するＴ細胞は胸腺内で生存することができ、更に発生・成熟することができるが、自己抗原と強く結合するＴ細胞は望ましくない自己免疫応答を生じるので免疫系により排除される。つまり、Ｔ細胞は、抗原と結合して外来侵入物に対して反応するように免疫系に準備させる（即ち、非自己抗原の認識）と同時に、自己免疫反応を防ぐ（即ち、自己抗原の認識）それらの相対能力により選別される。この寛容メカニズムにより、高い親和性で腫瘍（自己）抗原を認識できる天然Ｔ細胞は制限されるため、腫瘍細胞を有効に排除するＴ細胞は排除されてしまう。その結果、腫瘍抗原に特異的な高親和性ＴＣＲを有するＴ細胞は基本的に大半が免疫系により排除されるので、このような細胞を単離するのは困難である。
本開示では、約１５人の健康なドナーに由来する免疫細胞に高スループットシーケンシングアプローチを適用し、ｐ３７：ＭＨＣ複合体に対して高い機能的アビディティを有するＴＣＲを同定した。このストラテジーは、Ｔ細胞表面のＴＣＲ発現レベルが低い場合でも、ＴＣＲの選択が可能である。親和性と機能的アビディティが高く、ｐ３７に特異的な本開示のＴＣＲ（即ち、抗腫瘍効果が最大のもの）とその組成物を選択するために、全集団の百分率に対する選別集団の濃縮を使用した。機能的アビディティが高く、ｐ３７に特異的なこのようなＴＣＲが同定されたＴ細胞は、（ａ）ＣＤ８に非依存的にｐ３７ペプチド／ＭＨＣ四量体と結合したもの、（ｂ）ペプチドによるインビトロ拡大の程度が低いもの、（ｃ）場合によっては、このような特徴をもたないＴ細胞における他のＴＣＲの発現と比較してこのようなＴＣＲをＴ細胞表面上に比較的低レベルで発現したものであった。合計２７のＴＣＲを合成し、ｐ３７抗原特異性について評価した（図１Ｂ参照）。
所定の実施形態において、ＷＴ１ペプチドに特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）はＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖を含み、前記ＴＣＲα鎖は、配列番号２５３～２６３及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＶαドメインと、配列番号４７のアミノ酸配列を有するα鎖定常ドメインを含み、前記ＴＣＲβ鎖は、配列番号２５３～２６３及び２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むＶβドメインと、配列番号４５又は４６のアミノ酸配列を有するβ鎖定常ドメインを含み、このようなＴＣＲは、Ｔ細胞表面でＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合し、ｐＥＣ５０が８．５以上となるようにＩＦＮγ産生を促進する。所定の実施形態において、選択されたＴＣＲは、約１０－８Ｍ以下のＫＤでＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合し、又は前記高親和性ＴＣＲは、Ｓｃｈｍｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３５：１１８８，２０１７に開示されているＴＣＲと比較して低いｋｏｆｆ速度でＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ＨＬＡ複合体から解離する。
本願に記載する組成物と方法は、所定の実施形態において、ＷＴ１発現又は過剰発現（例えば、正常又は非疾患細胞中で検出可能なＷＴ１発現レベルよりも統計的に有意に高いレベルでの検出可能なＷＴ１発現）に関連する疾患及び病態の治療に治療有用性を有するであろう。このような疾患としては、造血器悪性腫瘍や固形がん等の種々の過剰増殖性障害又は増殖性障害が挙げられる。本願にはこれらの用途及び関連する用途の非限定的な例を記載するが、ＷＴ１ペプチド（例えばＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）、別称ＷＴ１３７－４５ペプチド又はｐ３７ペプチド）に特異的な高親和性ＴＣＲを発現する組換えＴ細胞の使用などによるＷＴ１抗原特異的Ｔ細胞応答のインビトロ、エクスビボ及びインビボ刺激が挙げられる。
本開示をより詳細に記載する前に、本願で使用する所定の用語の定義を提供することが本開示の理解に役立つと思われる。その他の定義も本開示の随所に記載する。
本願の記載において、全ての濃度範囲、百分率範囲、比の範囲又は整数範囲は、特に指定しない限り、明記する範囲内の全ての整数値を含み、適宜、（整数の１０分の１や１００分の１等の）その分数を含むものと理解されたい。また、ポリマーサブユニット、サイズ又は厚さ等のあらゆる物理的特徴に関して本願に明記する全ての数値範囲は、特に指定しない限り、明記する範囲内の全ての整数を含むものと理解されたい。本願で使用する「約」なる用語は、特に指定しない限り、指定した範囲、数値又は構造の±１０％を意味する。当然のことながら、本願で使用する不定冠詞は列挙する要素の「１以上」を意味する。選択肢（例えば「又は」）の使用はその選択肢の一方、両方又は任意のその組み合わせを意味するものと理解されたい。本願で使用する「包含する」、「有する」及び「含む」なる用語は同義に使用され、これらの用語とその変形は非限定的であると解釈されたい。
更に、当然のことながら、本願に記載する構造及び置換基の種々の組み合わせから得られる個々の化合物又は化合物群は、各化合物又は化合物群について個々に記載している場合と同程度まで本願により開示される。従って、特定の構造又は特定の置換基の選択は本開示の範囲内に含まれる。
「から本質的に構成される」なる用語は「含む」と同義ではなく、請求項に具体的に記載された材料若しくは工程、又は請求される保護対象の基本的特徴に実質的に影響を与えない範囲で同等の材料若しくは工程を意味する。例えば、ドメイン、領域、モジュール又はタンパク質のアミノ酸配列が（例えばアミノ末端若しくはカルボキシ末端又はドメイン間のアミノ酸の）延長、欠失、突然変異又はその組み合わせを含み、前記延長等が合計でドメイン、領域、モジュール又はタンパク質の長さの最大２０％（例えば最大１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％又は１％）までに相当し、前記ドメイン、領域、モジュール又はタンパク質の活性（例えば結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を与えない（即ち、活性の低下が５０％以内、例えば４０％以内、３０％以内、２５％以内、２０％以内、１５％以内、１０％以内、５％以内又は１％以内である）ときに、タンパク質ドメイン、領域若しくはモジュール（例えば結合ドメイン、ヒンジ領域、リンカーモジュール）又は（１以上のドメイン、領域若しくはモジュールを有していてもよい）タンパク質は特定のアミノ酸配列「から本質的に構成される」。
一部の態様において本願で使用する「免疫系細胞」とは、（単球、マクロファージ、樹状細胞、巨核球及び顆粒球等の骨髄系細胞へと分化する）骨髄系前駆細胞と、（Ｔ細胞、Ｂ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞等のリンパ系細胞へと分化する）リンパ系前駆細胞の主要な２系列に分化する骨髄中の造血幹細胞に由来する免疫系のあらゆる細胞を意味する。代表的な免疫系細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、制御性Ｔ細胞、幹細胞メモリーＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（例えばＮＫ細胞又はＮＫ－Ｔ細胞）、Ｂ細胞及び樹状細胞が挙げられる。マクロファージと樹状細胞を「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」と言う場合もあり、ペプチドと複合体化したＡＰＣの表面の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）受容体がＴ細胞の表面のＴＣＲと相互作用するときにＴ細胞を活性化することができる特殊細胞である。
一部の態様における「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」とは、ペプチド抗原を細胞表面に送達する糖タンパク質を意味することができる。ＭＨＣクラスＩ分子は、（３個のαドメインを有する）膜貫通α鎖と、非共有的に会合したβ２ミクログロブリンを有するヘテロダイマーである。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、どちらも膜を貫通するα及びβの２種類の膜貫通型糖タンパク質から構成される。各鎖は２個のドメインを有する。ＭＨＣクラスＩ分子はサイトゾルに由来するペプチドを細胞表面に送達し、ペプチド：ＭＨＣ複合体はＣＤ８＋Ｔ細胞により認識される。ＭＨＣクラスＩＩ分子は小胞系に由来するペプチドを細胞表面に送達し、ＣＤ４＋Ｔ細胞により認識される。ヒトＭＨＣをヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と言う。
「Ｔ細胞」又は「Ｔリンパ球」は、胸腺内で成熟してＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を産生する免疫系細胞である。Ｔ細胞は、ナイーブＴ細胞（例えば抗原に曝露されたことがなく、ＴＣＭと比較してＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ１２７及びＣＤ４５ＲＡの発現が高く、ＣＤ４５ＲＯの発現が低い）、メモリーＴ細胞（ＴＭ）（例えば抗原に遭遇したことがあり、寿命が長い）、及びエフェクター細胞（抗原に遭遇したことがあり、細胞傷害性である）に関連する表現型又はマーカーを示すことができる。ＴＭは、更にセントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ、例えばナイーブＴ細胞と比較してＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ１２７、ＣＤ４５ＲＯ及びＣＤ９５の発現が高く、ＣＤ５４ＲＡの発現が低い）とエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ、例えばナイーブＴ細胞又はＴＣＭと比較してＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡの発現が低く、ＣＤ１２７の発現が高い）に関連する表現型又はマーカーを示すサブセットに分けることができる。エフェクターＴ細胞（ＴＥ）とは、抗原に遭遇したことがあるＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球であり、ＴＣＭと比較してＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８の発現が低く、グランザイムとパーフォリンに陽性であるＴリンパ球を意味することができる。ヘルパーＴ細胞（ＴＨ）としては、サイトカインを放出することにより他の免疫細胞の活性に影響を与えるＣＤ４＋細胞を挙げることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞は適応免疫応答を活性化することと、抑制することができ、そのどちらの機能が誘導されるかは、他の細胞及びシグナルの存在に依存する。Ｔ細胞は公知技術を使用して採取することができ、抗体との親和性結合、フローサイトメトリー又は免疫磁気選択法等の公知技術により、種々のサブ集団又はその組み合わせを濃縮又は除去することができる。他の代表的なＴ細胞としては、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋（Ｆｏｘｐ３＋）制御性Ｔ細胞やＴｒｅｇ１７細胞に加え、Ｔｒ１、Ｔｈ３、ＣＤ８＋ＣＤ２８－、及びＱａ－１拘束性Ｔ細胞等の制御性Ｔ細胞が挙げられる。
一部の態様における「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）」とは、ＭＨＣ受容体と結合した抗原ペプチドと特異的に結合することが可能な免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーを意味する（可変結合ドメインと、定常ドメインと、膜貫通領域と、短い細胞質テールを有する；例えばＪａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐ．４：３３，１９９７参照）。一部の態様において、ＴＣＲとは、本開示の２個のＴＣＲ可変ドメイン（Ｖα及びＶβ）を含む結合タンパク質を意味する。一部の態様において、ＴＣＲは１本鎖ＴＣＲ（即ち、本開示のＴＣＲ可変ドメインを含む１本鎖融合タンパク質）、又は（本願に記載する）本開示のＴＣＲ可変ドメインを含むＣＡＲを含む。一部の態様において、ＴＣＲは細胞の表面に存在していてもよいし、可溶形態でもよく、一般にα鎖とβ鎖（それぞれＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖とも言う）又はγ鎖とδ鎖（それぞれＴＣＲγ及びＴＣＲδとも言う）を有するヘテロダイマーから構成される。
免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖（例えばα鎖、β鎖）の細胞外部分は、２個の免疫グロブリンドメインと、Ｎ末端の可変ドメイン（例えば、α鎖可変ドメイン又はＶα、β鎖可変ドメイン又はＶβ；一般的にＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１，第５版に記載のＫａｂａｔナンバリングによるアミノ酸１～１１６）と、細胞膜に隣接する１個の定常ドメイン（例えば、一般的にＫａｂａｔによるアミノ酸８１～２５９に相当するα鎖定常ドメイン又はＣα、一般的にＫａｂａｔによるアミノ酸８１～２９５に相当するβ鎖定常ドメイン又はＣβ）を含む。更に免疫グロブリンと同様に、可変ドメインはフレームワーク領域（ＦＲ）に挟まれた相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（例えば、Ｊｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：９１３８，１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．７：３７４５，１９８８参照；更にＬｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５，２００３も参照）。所定の実施形態において、ＴＣＲはＴ細胞（又はＴリンパ球）の表面に存在し、ＣＤ３複合体と会合する。本開示で使用するＴＣＲの起源はヒト、マウス、ラット、ウサギ又は他の哺乳動物等の種々の生物種に由来することができる。
「可変領域」又は「可変ドメイン」なる用語は、免疫グロブリンスーパーファミリー結合タンパク質（例えばＴＣＲ）と抗原の結合に関与する免疫グロブリンスーパーファミリー結合タンパク質のドメイン（例えばＴＣＲα鎖又はβ鎖（又はγδＴＣＲではγ鎖とδ鎖））を意味する。天然ＴＣＲのα鎖及びβ鎖の可変ドメイン（それぞれＶα及びＶβ）は一般に類似する構造であり、各ドメインは４個のほぼ保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３個のＣＤＲを含む。Ｖαドメインは可変部遺伝子セグメントと結合部遺伝子セグメント（Ｖ－Ｊ）の２個の別個のＤＮＡセグメントによりコードされ、Ｖβドメインは、可変部遺伝子セグメントと多様部遺伝子セグメントと結合部遺伝子セグメント（Ｖ－Ｄ－Ｊ）の３個の別個のＤＮＡセグメントによりコードされる。抗原結合特異性を付与するには１個のＶα又はＶβドメインで十分であると思われる。更に、それぞれ相補的Ｖα又はＶβドメインのライブラリーをスクリーニングするために、特定の抗原と結合するＴＣＲに由来するＶα又はＶβドメインを使用して前記抗原と結合するＴＣＲを単離することができる。
「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」なる用語は「超可変領域」又は「ＨＶＲ」と同義であり、免疫グロブリン（例えばＴＣＲ）可変領域内のアミノ酸配列であり、抗原特異性及び／又は結合親和性を付与し、一次アミノ酸配列においてフレームワーク領域により相互に分離されたアミノ酸配列を意味することが当技術分野で知られている。一般に、各ＴＣＲα鎖可変領域に３個のＣＤＲ（αＣＤＲ１、αＣＤＲ２、αＣＤＲ３）が存在し、各ＴＣＲβ鎖可変領域に３個のＣＤＲ（βＣＤＲ１、βＣＤＲ２、βＣＤＲ３）が存在する。ＴＣＲでは、ＣＤＲ３がプロセシング後の抗原の認識に関与する主要なＣＤＲであると考えられている。一般に、ＣＤＲ１とＣＤＲ２は主に又は排他的にＭＨＣと相互作用する。
ＣＤＲ１とＣＤＲ２はＴＣＲ可変領域をコードする配列の可変部遺伝子セグメント内でコードされ、ＣＤＲ３はＶαでは可変部セグメントと結合部セグメントにまたがる領域によりコードされ、Ｖβでは可変部セグメントと多様部セグメントと結合部セグメントにまたがる領域によりコードされる。従って、Ｖα又はＶβの可変部遺伝子セグメントの種類が分かっているならば、例えば本願に記載するようなナンバリングスキームに従ってそれらの対応するＣＤＲ１及びＣＤＲ２の配列を推定することができる。ＣＤＲ１及びＣＤＲ２と比較すると、ＣＤＲ３は組換えプロセス中のヌクレオチドの付加と欠失により、一般的に著しく多様性が高い。
ＴＣＲ可変ドメイン配列をナンバリングスキーム（例えばＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＥＵ、ＩＭＧＴ、Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｃｈｏｔｈｉａ及びＡｈｏ）に整列させ、等価な残基の位置にアノテーションを付け、例えばＡＮＡＲＣＩソフトウェアツール（２０１６，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １５：２９８－３００）を使用して種々の分子を比較することができる。ナンバリングスキームは、ＴＣＲ可変ドメインにおけるフレームワーク領域とＣＤＲの標準化配置を提供する。所定の実施形態において、本開示のＣＤＲはＩＭＧＴナンバリングスキーム（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５，２００３；ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／ＩＭＧＴｉｎｄｅｘ／Ｖ－ＱＵＥＳＴ．ｐｈｐ）に従って識別される。所定の実施形態において、本開示のＣＤＲ３アミノ酸配列は、例えば本願中に記載するＲＡＧによる再構成中に生じ得るような１個以上の結合部アミノ酸を含む。
本願で使用する「ＣＤ８共受容体」又は「ＣＤ８」なる用語は、α－αホモダイマー又はα－βヘテロダイマーとしての細胞表面糖タンパク質ＣＤ８を意味する。ＣＤ８共受容体は細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋）の機能を補助し、その細胞内チロシンリン酸化経路を介するシグナル伝達により機能する（Ｇａｏ ａｎｄ Ｊａｋｏｂｓｅｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：６３０－６３６，２０００；Ｃｏｌｅ ａｎｄ Ｇａｏ，Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：８１－８８，２００４）。５種類の公知ヒトＣＤ８β鎖アイソフォーム（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別名Ｐ１０９６６参照）と、１種類の公知ヒトＣＤ８α鎖アイソフォーム（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別名Ｐ０１７３２参照）が存在する。
「ＣＤ４」とは、ＴＣＲが抗原提示細胞とコミュニケーションをとるのを補助する免疫グロブリン共受容体糖タンパク質である（Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＆ Ｒｅｅｃｅ，Ｂｉｏｌｏｇｙ ９０９（Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，Ｓｉｘｔｈ Ｅｄ．，２００２）；ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ識別名Ｐ０１７３０参照）。ＣＤ４はＴヘルパー細胞、単球、マクロファージ及び樹状細胞等の免疫細胞の表面に存在し、細胞表面で発現される４個の免疫グロブリンドメイン（Ｄ１～Ｄ４）を含む。抗原提示中に、ＣＤ４はＴＣＲ複合体と共に動員され、ＭＨＣＩＩ分子の種々の領域と結合する（ＣＤ４はＭＨＣＩＩβ２と結合し、ＴＣＲ複合体はＭＨＣＩＩα１／β１と結合する）。理論に拘束する意図はないが、ＴＣＲ複合体と近接することにより、ＣＤ４関連キナーゼ分子はＣＤ３の細胞内ドメインに存在する免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をリン酸化することができると考えられる。この活性は、Ｔヘルパー細胞を含む種々の免疫系細胞を産生又は動員して免疫応答を生じるために、活性化されたＴＣＲにより発生されるシグナルを増幅すると考えられる。
一部の態様において本願で使用する「Ｄ／Ｎ／Ｐ領域」とは、多様部（Ｄ）遺伝子セグメント内に位置すると推定されるヌクレオチド又は前記ヌクレオチドによりコードされるアミノ酸を意味し、Ｔ細胞受容体の多様性に繋がるＶ（Ｄ）Ｊ組換え過程で挿入（又は欠失）される非鋳型依存的（Ｎ）ヌクレオチドとパリンドローム（Ｐ）ヌクレオチドを含むことができる。可変部（Ｖ）遺伝子セグメント、多様部（Ｄ）遺伝子セグメント及び結合部（Ｊ）遺伝子セグメントの組換え活性化遺伝子（ＲＡＧ）による再構成は、（パリンドローム又はＰヌクレオチドと称する）ヌクレオチドの変動的付加又は除去をもたらす不正確なプロセスであり、その後、末端デオキシヌクレオチド転移酵素（ＴｄＴ）活性により、更にランダムな非鋳型依存的（Ｎ）ヌクレオチドが付加される。最後に、対合していないヌクレオチドはエキソヌクレアーゼにより除去され、ギャップはＤＮＡ合成・修復酵素により埋められる。このようなトリミング・修復機構は結合部多様性に繋がり、異なるＴＣＲが異なる抗原を効率的で特異的に認識し易くなる。Ｄ遺伝子セグメントは、ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（ＩＭＧＴ；ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）から提供されるアノテーションシステムを使用して同定することができる。
一部の態様において、「ＣＤ３」とは６本のタンパク質鎖からなる多タンパク質複合体である（Ａｂｂａｓ ａｎｄ Ｌｉｃｈｔｍａｎ，２００３；Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，ｐ１７２及び１７８，１９９９参照）。哺乳動物において、前記複合体はＣＤ３γCD3γ鎖と、ＣＤ３δCD3δ鎖と、２本のＣＤ３ε鎖と、ＣＤ３ζ鎖のホモダイマーを含む。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖は、１個の免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーのうちで近縁性の高い細胞表面タンパク質である。CD3γＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は負に帯電しており、この特徴により、これらの鎖はＴ細胞受容体鎖の正に帯電した領域と会合することができる。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖及びＣＤ３ε鎖の細胞内テールは、各々免疫受容体チロシン活性化モチーフ又はＩＴＡＭと呼ばれる１個の保存されたモチーフを含み、各ＣＤ３ζ鎖は３個のモチーフを有する。理論に拘束する意図はないが、ＩＴＡＭはＴＣＲ複合体のシグナル伝達能に重要であると考えられる。本開示で使用されるＣＤ３は、ヒト、マウス、ラット又は他の哺乳動物を含む種々の動物種に由来することができる。
一部の態様において本願で使用する「ＴＣＲ複合体」とは、ＣＤ３とＴＣＲの会合により形成される複合体を意味する。例えば、ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３γCD3γ鎖と、ＣＤ３δ鎖と、２本のＣＤ３ε鎖と、ＣＤ３ζ鎖のホモダイマーと、ＴＣＲα鎖と、ＴＣＲβ鎖から構成することができる。あるいは、ＴＣＲ複合体は、ＣＤ３γCD3γ鎖と、ＣＤ３δ鎖と、２本のＣＤ３ε鎖と、ＣＤ３ζ鎖のホモダイマーと、ＴＣＲγ鎖と、ＴＣＲδ鎖から構成することがきる。
一部の態様において、本願で使用する「ＴＣＲ複合体のコンポーネント」とは、ＴＣＲ鎖（即ち、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＣＲγ又はＴＣＲδ）、ＣＤ３鎖（即ち、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε又はＣＤ３ζ）、又は２本以上のＴＣＲ鎖若しくはＣＤ３鎖から形成される複合体（例えばＴＣＲαとＴＣＲβの複合体、ＴＣＲγとＴＣＲδの複合体、ＣＤ３εとＣＤ３δの複合体、ＣＤ３γとＣＤ３εの複合体、又はＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ及び２本のＣＤ３ε鎖のサブＴＣＲ複合体）を意味する。
本願で使用する「抗原」又は「Ａｇ」とは、免疫応答を引き起こす免疫原性分子を意味する。この免疫応答は抗体産生、特定の免疫適格細胞（例えばＴ細胞）の活性化又はその両方を含むことができる。抗原（免疫原性分子）としては、例えばペプチド、糖ペプチド、ポリペプチド、糖ポリペプチド、ポリヌクレオチド、多糖、脂質等が挙げられる。当然のことながら、抗原は合成物でもよいし、組換え生産物でもよいし、生体試料に由来するものでもよい。１つ以上の抗原を含有する代表的な生体試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、体液又はその組み合わせが挙げられる。抗原を発現するように改変若しくは遺伝子操作された細胞又は免疫原性の突然変異若しくは多形を内因的に（例えば、人為的介入による改変又は遺伝子操作を介さずに）発現する細胞により、抗原を産生させることができる。
本願で使用する「ネオ抗原」とは、対象のゲノム内に（即ち、対象に由来する健康な組織の試料中に）従来認められなかった新規抗原若しくは抗原エピトープを生じるか、又は宿主の免疫系により「遭遇」若しくは認識された新規抗原若しくは抗原エピトープを生じる構造変化、変異又は突然変異を含む宿主細胞産物であり、（ａ）細胞の抗原プロセシング・輸送メカニズムによりプロセシングされ、ＭＨＣ（例えばＨＬＡ）分子と会合した状態で細胞表面に提示され；（ｂ）免疫応答（例えば細胞（Ｔ細胞）応答）を引き起こすものを意味する。ネオ抗原は、例えば変異産物又は突然変異産物をもたらす変異（置換、付加、欠失）を有するコーディングポリヌクレオチドに由来する場合や、外来核酸分子又はタンパク質の細胞挿入に由来する場合や、遺伝子変化をもたらす環境因子（例えば化学物質、放射線）への曝露に由来する場合がある。ネオ抗原は腫瘍抗原と別に生じる場合もあるし、腫瘍抗原から生じる場合や、腫瘍抗原と会合している場合もある。「腫瘍ネオ抗原」（又は「腫瘍特異的ネオ抗原」）とは、腫瘍細胞又は腫瘍内の複数の細胞に関連、由来又はその内部に生成するネオ抗原決定基を含むタンパク質を意味する。腫瘍ネオ抗原決定基は、例えば腫瘍細胞（例えば膵臓がん、肺がん、大腸がん）のＤＮＡによりコードされる１か所以上の体細胞突然変異又は染色体再構成を含む抗原性腫瘍タンパク質又はペプチドや、ウイルス関連腫瘍に関連するウイルスオープンリーディングフレームに由来するタンパク質又はペプチドに存在する。
「エピトープ」又は「抗原エピトープ」なる用語は、免疫グロブリン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、キメラ抗原受容体又は他の結合分子、ドメイン若しくはタンパク質等のコグネイトな結合分子に認識され、特異的に結合する任意の分子、構造、アミノ酸配列又はタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は一般にアミノ酸又は糖側鎖等の化学的に活性な表面分子群を含み、特定の三次元構造特徴と、特定の電荷特徴を有することができる。
一部の態様において本願で使用する「特異的に結合する」又は「～に特異的」とは、見かけの親和性若しくはＫＡ（即ち、１／Ｍの単位で表した特定の結合相互作用の平衡会合定数であり、この会合反応の会合速度定数［ｋｏｎ］と解離速度定数［ｋｏｆｆ］の比に等しい）が１０９Ｍ－１以上となり、又は機能的アビディティ若しくはＥＣ５０が１０－９Ｍ以上となるように、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）又はその結合ドメイン（例えば、ｓｃＴＣＲ又はその融合タンパク質）が標的分子と会合又は結合し、試料中の他の分子又は成分とは有意に会合又は結合しないことを意味する。ＴＣＲは、「高親和性」結合タンパク質若しくは結合ドメイン（又はその融合タンパク質）又は「低親和性」結合タンパク質若しくは結合ドメイン（又はその融合タンパク質）として分類することができる。「高親和性」ＴＣＲ又は結合ドメインとは、ＫＡが少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１又は少なくとも１０１３Ｍ－１であるＴＣＲ又はその結合ドメインを意味する。「低親和性」結合タンパク質又は結合ドメインとは、ＫＡが１０７Ｍ－１まで、１０６Ｍ－１まで、１０５Ｍ－１までである結合タンパク質又は結合ドメインを意味する。あるいは、親和性は、Ｍの単位で表した特定の結合相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）として定義することができる（例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ以下）。
「機能的アビディティ」なる用語は、所定濃度のリガンドに対するインビトロＴ細胞応答の生物学的尺度又は活性化閾値を意味し、前記生物学的尺度としては、サイトカイン産生（例えばＩＦＮγ産生、ＩＬ－２産生等）、細胞傷害活性及び増殖が挙げられる。例えば、非常に低い抗原用量に対してサイトカイン産生、細胞傷害性又は増殖によりインビトロで生物学的（免疫学的）に応答するＴ細胞は機能的アビディティが高いとみなされ、機能的アビディティの低いＴ細胞は、高アビディティＴ細胞と同等の免疫応答が誘発されるまでにより多量の抗原を必要とする。当然のことながら、機能的アビディティは親和性及びアビディティとは異なる。親和性とは、結合タンパク質とその抗原／リガンドの間で生じる結合の強さを意味する。結合タンパク質には多価のものもあり、複数の抗原と結合するが、この場合に、全体的な結合の強さがアビディティである。
本願で使用する「機能的アビディティ」とは、Ｔ細胞により発現されるＴＣＲの活性化閾値の量的因子を意味する。インビボにおいて、Ｔ細胞はＴＣＲアビディティ（の高低）に関係なく同等の抗原用量に曝露されるが、機能的アビディティと免疫応答の有効性の間には多数の相関がある。一部のエクスビボ試験は、種々の閾値で異なるＴ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生等）を誘発できることを示している（例えば、Ｂｅｔｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：６４０７，２００４；Ｌａｎｇｅｎｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：２０４６，２００２参照）。機能的アビディティに影響を与える因子としては、（ａ）ｐＭＨＣ複合体に対するＴＣＲの親和性、即ちＴＣＲとｐＭＨＣの相互作用の強さ（Ｃａｗｔｈｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５７７，２００１）、（ｂ）ＴＣＲとＣＤ４又はＣＤ８共受容体の発現レベル、及び（ｃ）シグナル伝達分子の分布と組成（Ｖｉｏｌａ ａｎｄ Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７３：１０４，１９９６）が挙げられ、更に、Ｔ細胞機能とＴＣＲシグナル伝達を低下させる分子の発現レベルも挙げられる。
特定の曝露時間後にベースラインと最大応答の間の５０％応答を誘導するために必要な抗原濃度を「５０％効果濃度」又は「ＥＣ５０」と言う。ＥＣ５０値は一般にモーラー（モル／リットル）量として表されるが、シグモイドグラフを描く対数値ｌｏｇ１０（ＥＣ５０）に変換されることが多い（例えば図５Ａ参照）。例えば、ＥＣ５０＝１μＭ（１０－６Ｍ）であるならば、ｌｏｇ１０（ＥＣ５０）値は－６である。別の数値として、ＥＣ５０の負の対数（－ｌｏｇ１０（ＥＣ５０））として定義されるｐＥＣ５０も使用される。上記例において、ＥＣ５０＝１μＭであるならば、ｐＥＣ５０値は６である。所定の実施形態において、本開示のＴＣＲの機能的アビディティは、Ｔ細胞がＩＦＮγ産生を促進する能力の尺度となり、本願に記載するアッセイを使用して測定することができる。「機能的アビディティの高い」ＴＣＲ又はその結合ドメインとは、ＥＣ５０が少なくとも１０－９Ｍ、少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、少なくとも約１０－１２Ｍ、又は少なくとも約１０－１３ＭであるＴＣＲ又はその結合ドメインを意味する。一部の実施形態において、前記応答はＩＦＮγ産生を含み、例えば抗原に応答してＴＣＲを発現する（Ｔ細胞、ＮＫ細胞又はＮＫ－Ｔ細胞等の）免疫細胞によるＩＦＮ－γの産生である。
一部の態様において、「ＷＴ１３７－４５抗原」又は「ＷＴ１３７－４５ペプチド」又は「ＷＴ１３７－４５ペプチド抗原」又は「ｐ３７ペプチド」又は「ｐ３７抗原」又は「ｐ３７ペプチド抗原」とは、約９アミノ酸～約１５アミノ酸長であり、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含むＷＴ１タンパク質の天然又は合成により生産された部分であり、ＭＨＣ（例えばＨＬＡ）分子と複合体を形成することができるものを各々意味し、このような複合体は、ＷＴ１ペプチド：ＭＨＣ（例えばＨＬＡ）複合体に特異的なＴＣＲと結合することができる。ＷＴ１は体内宿主タンパク質であるので、ＷＴ１抗原ペプチドはクラスＩ ＭＨＣにより提示される。特定の実施形態において、ＷＴ１ペプチドＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）は、ヒトクラスＩＨＬＡ対立遺伝子ＨＬＡ－Ａ＊２０１と会合することができる。
一部の態様において、「ＷＴ１３７－４５ペプチド特異的結合タンパク質」又は「ＷＴ１３７－４５ペプチド特異的ＴＣＲ」又は「ＷＴ１３７－４５抗原特異的ＴＣＲ」又は「ＷＴ１３７－４５ペプチド抗原特異的ＴＣＲ」又は「ＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的結合タンパク質」又は「ＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲ」又は「ＷＴ１ｐ３７抗原特異的ＴＣＲ」又は「ＷＴ１ｐ３７ペプチド抗原特異的ＴＣＲ」なる用語は、本願では同義であり、本願に定義するように、概算値又は少なくとも概算値で特定の親和性又は機能的アビディティ、好ましくは高い機能的アビディティとなるように、ＭＨＣ又はＨＬＡ分子と複合体化したＷＴ１ｐ３７ペプチドと例えば細胞表面上で特異的に結合するタンパク質又はポリペプチドを意味する。このような結合タンパク質又はポリペプチドは、本願に記載するようなＴＣＲ可変ドメインを含む。所定の実施形態において、ＷＴ１特異的結合タンパク質は、機能的アビディティｌｏｇ［ＥＣ５０］が約－２．５μＭ～約－３．７５μＭ（－８．５Ｍ～約－９．８Ｍに等価）となるように、ＷＴ１由来ペプチド：ＨＬＡ複合体（又はＷＴ１由来ペプチド：ＭＨＣ複合体）と結合する。これらの数値のＥＣ５０範囲は、例えば以下の段落及び本願の実施例１に記載するアッセイにより測定した場合に約３．１６×１０－９Ｍ～約１．５８×１０－１０Ｍに相当する。
親和性、見かけの親和性、相対親和性又は機能的アビディティを評価するためのアッセイは公知である。本願に記載するように、本開示のＴＣＲの見かけの親和性又は機能的アビディティは、例えば標識四量体を使用したフローサイトメトリーにより、ｐ３７ペプチドと会合した各種濃度の四量体との結合を評価することにより測定される。一部の実施例では、種々の濃度の標識四量体の２倍希釈液を使用した後、非直線回帰により結合曲線を求めることにより、ＴＣＲの見かけのＫＤ又はＥＣ５０を測定する。例えば、見かけのＫＤは５０％結合を生じるリガンドの濃度として求められ、ＥＣ５０は例えばサイトカイン（例えばＩＦＮγ、ＩＬ－２）の５０％産生を生じるリガンドの濃度として求められる。
一部の態様における「ＭＨＣ－ペプチド四量体染色法」とは、各々少なくとも１つの抗原（例えばＷＴ１）に対してコグネイトな（例えば一致又は関連する）アミノ酸配列を有する同一のペプチドを含むＭＨＣ分子の四量体を利用して抗原特異的Ｔ細胞を検出するために使用されるアッセイを意味し、前記複合体はコグネイト抗原に特異的なＴ細胞受容体と結合することができる。ＭＨＣ分子の各々にビオチン分子をタグ付けすることができる。蛍光標識可能なストレプトアビジンを加えることにより、ビオチン化ＭＨＣ／ペプチドを四量化する。蛍光ラベルを介してフローサイトメトリーにより四量体を検出することができる。所定の実施形態では、本開示の親和性の高い又は機能的アビディティの高いＴＣＲを検出又は選択するためにＭＨＣ－ペプチド四量体アッセイを使用する。
サイトカインの濃度は、当技術分野で一般的な本願に記載する方法により測定することができ、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、細胞内サイトカイン染色法及びフローサイトメトリーとその組み合わせ（例えば細胞内サイトカイン染色法とフローサイトメトリー）が挙げられる。末梢血細胞又はリンパ節由来細胞の試料中の循環リンパ球等のリンパ球を単離し、前記リンパ球を抗原で刺激し、三重水素チミジンの取り込みや、ＭＴＴアッセイ等の非放射性アッセイなどによりサイトカイン産生、細胞増殖及び／又は細胞生存率を測定することにより、免疫応答の抗原特異的誘発又は刺激に起因する免疫細胞増殖とクローン拡大を判定することができる。例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２及びＴＮＦ－β等のＴｈ１サイトカインと、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－９、ＩＬ－１０及びＩＬ－１３等の２型サイトカインの濃度を測定することにより、本願に記載する免疫原がＴｈ１免疫応答とＴｈ２免疫応答のバランスに及ぼす影響を試験することができる。
一部の態様において、「ＷＴ１ｐ３７特異的結合ドメイン」又は「ＷＴ１３７－４５特異的結合ドメイン」又は「ＷＴ１ｐ３７特異的結合断片」又は「ＷＴ１３７－４５特異的結合断片」なる用語は、ＭＨＣ又はＨＬＡ分子と複合体化したＷＴ１ｐ３７抗原との特異的結合に関与するＷＴ１特異的ＴＣＲのドメイン又は部分を意味する。ＴＣＲに由来するＷＴ１ｐ３７抗原特異的結合ドメインは、単独（即ち、ＷＴ１特異的ＴＣＲの他の部分を含まない場合）では可溶性であり、１０－９Ｍ未満、約１０－１０Ｍ未満、約１０－１１Ｍ未満、約１０－１２Ｍ未満又は約１０－１３Ｍ未満のＫＤでＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＭＨＣ複合体と結合することができる。他の実施形態において、ＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲは機能的アビディティが高く、Ｔ細胞表面上でＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合し、ｐＥＣ５０が８．５以上（例えば、約９まで、約９．５まで、約１０、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５又は約１３）となるようにＩＦＮγ産生を促進する。代表的なＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的結合ドメインとしては、本開示の抗ＷＴ１ｐ３７ペプチドＴＣＲに由来するか又は由来し得るＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ｓｃＴＣＲが挙げられる（例えば、Ｖα－Ｌ－Ｖβ、Ｖβ－Ｌ－Ｖα、Ｖα－Ｃα－Ｌ－Ｖα又はＶα－Ｌ－Ｖβ－Ｃβ等の１本鎖αβＴＣＲタンパク質であり、上記式中、Ｖα及びＶβはそれぞれＴＣＲα及びβ可変ドメインであり、Ｃα及びＣβはそれぞれＴＣＲα及びβ定常ドメインであり、Ｌはリンカーである。）。
（樹状細胞、マクロファージ、リンパ球又は他の細胞種等の）抗原提示細胞（ＡＰＣ）による抗原プロセシングと、（例えば抗原提示に関連するＭＨＣ遺伝子の少なくとも１個の対立遺伝子を共有する）免疫適合性ＡＰＣとＴ細胞の間の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）拘束性提示を含むＡＰＣによるＴ細胞への抗原提示の原理は周知である（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（８ｔｈ Ｅｄ．）２０１１ Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ；第６章、９章及び１６章参照）。例えば、サイトゾルに由来するプロセシング後の抗原ペプチド（例えば、腫瘍抗原、細胞内病原体）は一般に約７アミノ酸～約１１アミノ酸長であり、クラスＩＭＨＣ分子と会合するであろうし、（例えば、細菌、ウイルス由来）小胞系でプロセシングされたペプチドは約１０アミノ酸～約２５アミノ酸長となり、クラスＩＩＭＨＣ分子と会合するであろう。
本願で使用する「膜貫通ドメイン」とは、細胞膜内で熱力学的に安定であり、一般に約１５アミノ酸～約３０アミノ酸長の三次元構造を有する任意のアミノ酸配列を意味する。疎水性膜貫通ドメインの構造は、αヘリックス、βバレル、βシート、βヘリックス又は任意のその組み合わせを含むことができる。代表的な膜貫通ドメインはＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８又はＣＤ２７に由来する膜貫通ドメインである。
本願で使用する「免疫エフェクタードメイン」とは、適切なシグナルを受け取ると、細胞内で直接又は間接的に免疫応答を促進することができるｓｃＴＣＲ又はＣＡＲ融合タンパク質の細胞内部分である。所定の実施形態において、免疫エフェクタードメインは、結合すると、シグナルを受け取るタンパク質若しくはタンパク質複合体の部分であり、又は標的分子と直接結合し、免疫エフェクタードメインからシグナルを誘起する。免疫エフェクタードメインは、免疫受容体チロシン活性化モチーフimmunoreceptor
tyrosine-based activation motif（ＩＴＡＭ）等のシグナル伝達ドメイン又はモチーフを１個以上含む場合には、免疫細胞応答を直接促進することができる。他の実施形態において、エフェクタードメインは、細胞応答を直接促進する１つ以上の他のタンパク質と会合することにより、間接的に細胞応答を促進する。代表的な免疫エフェクタードメインとしては、４－１ＢＢ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３ζ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＡＲＤ１１、ＤＡＰ１０、ＦｃＲα、ＦｃＲβ、ＦｃＲγ、Ｆｙｎ、ＨＶＥＭ、ＩＣＯＳ、Ｌｃｋ、ＬＡＧ３、ＬＡＴ、ＬＲＰ、ＮＯＴＣＨ１、Ｗｎｔ、ＮＫＧ２Ｄ、ＯＸ４０、ＲＯＲ２、Ｒｙｋ、ＳＬＡＭＦ１、Ｓｌｐ７６、ｐＴα、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＴＲＩＭ、Ｚａｐ７０、ＰＴＣＨ２又はこのようなドメインの２つ若しくは３つの任意の組み合わせに由来する細胞内シグナル伝達ドメインが挙げられる。
一部の態様における「リンカー」とは、２つのタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ドメイン、領域又はモチーフを連結するアミノ酸配列を意味する。代表的なリンカーの１例は「可変ドメインリンカー」であり、具体的には、Ｔ細胞受容体Ｖα／β鎖とＣα／β鎖（例えばＶα－Ｃα、Ｖβ－Ｃβ、Ｖα－Ｖβ）を連結するか又はＶα－Ｃα、Ｖβ－Ｃβ、Ｖα－Ｖβの各対をヒンジ若しくは膜貫通ドメインと連結する５～約３５アミノ酸配列であって、得られる１本鎖ポリペプチドがＴ細胞受容体と同一の標的分子に対して特異的な結合親和性又は機能的アビディティを維持するように、２個のサブ結合ドメインの相互作用に十分なスペーサー機能とフレキシビリティを提供するものを意味する。所定の実施形態において、可変ドメインリンカーは約１０～約３０アミノ酸又は約１５～約２５アミノ酸を含む。特定の実施形態において、可変ドメインリンカーペプチドは１～１０個のＧｌｙｘＳｅｒｙリピートを含み、上記式中、ｘ及びｙは独立して０～１０の整数であり、但し、ｘとｙが同時に０になることはなく（例えば、Ｇｌｙ４Ｓｅｒ（配列番号１７１）、Ｇｌｙ３Ｓｅｒ（配列番号１７２）、Ｇｌｙ２Ｓｅｒ、若しくは（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）１（配列番号１７３）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎ（Ｇｌｙ２Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１７４）、（Ｇｌｙ３Ｓｅｒ）ｎ（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１７５）、又は（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ（配列番号１７１））、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の整数であり、連結された可変ドメインは機能的結合ドメイン（例えばｓｃＴＣＲ）を形成する。
一部の態様において、「結合部アミノ酸」又は「結合部アミノ酸残基」とは、結合ドメインとこれに隣接する定常ドメインの間、又はＴＣＲ鎖とこれに隣接する自己切断ペプチドの間等のポリペプチドの２つの隣接するモチーフ、領域又はドメイン間の１個以上（例えば約２～１０個）のアミノ酸残基を意味する。結合部アミノ酸は、融合タンパク質のコンストラクト設計に起因する場合（例えば、融合タンパク質をコードする核酸分子の構築中に使用される制限酵素部位に起因するアミノ酸残基）や、遺伝子組換え若しくは再構成イベント（例えばＲＡＧによる再構成）の過程でもたらされる場合がある。
一部の態様において、「変異ドメイン」又は「変異タンパク質」とは、野生型モチーフ、領域、ドメイン、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質（例えば、野生型ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲα定常ドメイン、ＴＣＲβ定常ドメイン）に対して少なくとも８５％（例えば８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．２％、９９．３％、９９．４％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、９９．９％）の配列不同一性を有するモチーフ、領域、ドメイン、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質を意味し、ＴＣＲα及びβ可変ドメインの各々に由来するＣＤＲ３は変異していないか、又は変異していないことが好ましい。
本願に開示する実施形態のいずれかでは、目的のＴＣＲ鎖の対合を強化するようにＴＣＲ定常ドメインを修飾することができる。例えば、宿主Ｔ細胞における異種ＴＣＲα鎖と異種ＴＣＲβ鎖の対合が修飾により強化されると、異種ＴＣＲ鎖と内在性ＴＣＲ鎖の望ましくないミスペアリングよりも２本の異種鎖を含むＴＣＲの結合が優先される（例えば、Ｇｏｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１６（２）：７７（２０１０）が参照され、そのＴＣＲ修飾を本願に援用する）。異種ＴＣＲ鎖の対合を強化するための代表的な修飾としては、異種ＴＣＲα鎖及びβ鎖の各々に相補的システイン残基を導入する方法が挙げられる。一部の実施形態において、異種ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドはアミノ酸位置４８位のシステインをコードし（全長成熟ヒトＴＣＲα鎖配列に対応）、異種ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドはアミノ酸位置５７位のシステインをコードする（全長成熟ヒトＴＣＲβ鎖配列に対応）。
「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」とは、天然では生じない様式又は宿主細胞中で天然では生じない様式で相互に連結された２個以上の天然アミノ酸配列、ドメイン又はモチーフを含むように構築された融合タンパク質を意味し、このような融合タンパク質は、細胞の表面に存在するときに受容体として機能することができる。ＣＡＲとしては、（例えば、がん抗原に特異的なＴＣＲから入手若しくは取得されるＴＣＲ結合ドメイン、抗体から入手若しくは取得されるｓｃＦｖ、又はＮＫ細胞に由来するキラー免疫受容体から入手若しくは取得される抗原結合ドメインのように、免疫グロブリン又は免疫グロブリン様分子から取得又は入手される）抗原結合ドメインを含む細胞外部分を、膜貫通ドメインと、（任意に共刺激ドメインを含む）１個以上の細胞内シグナル伝達ドメインとに連結したものを挙げることができる（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．，３（４）：３８８（２０１３）参照；更にＨａｒｒｉｓ ａｎｄ Ｋｒａｎｚ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，３７（３）：２２０（２０１６）、Ｓｔｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，６３（１１）：１１６３（２０１４）、及びＷａｌｓｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ７：１０７１３（２０１７）も参照され、そのＣＡＲコンストラクトとその作製方法を本願に援用する）。（例えば、ペプチド：ＨＬＡ複合体の文脈で）ＷＴ１抗原と特異的に結合する本開示のＣＡＲは、ＴＣＲＶαドメインとＶβドメインを含む。
一部の態様において本願で使用する「核酸」又は「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」とは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はインビトロ翻訳により作製された断片、及びライゲーション、切断、エンドヌクレアーゼ作用又はエキソヌクレアーゼ作用により作製された断片のいずれかを意味する。所定の実施形態において、本開示の核酸はＰＣＲにより生産される。核酸は、（デオキシリボヌクレオチドやリボヌクレオチド等の）天然ヌクレオチド、天然ヌクレオチドのアナログ（例えば、天然ヌクレオチドのαエナンチオマー）又はその両方の組み合わせである単量体から構成することができる。修飾ヌクレオチドは、糖部又はピリミジン若しくはプリン塩基部に修飾又は置換を有することができる。ホスホジエステル結合又はこのような結合に類似する結合により、核酸単量体を連結することができる。ホスホジエステル結合に類似する結合としては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニリダート、ホスホロアミダート等が挙げられる。核酸分子は１本鎖でも２本鎖でもよい。
一部の態様において、「単離」なる用語は、その材料がその当初の環境（例えば天然に存在する場合には天然環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生きた動物の体内に存在する天然核酸又はポリペプチドは単離されていないが、天然系において共存する物質の一部又は全部から分離された同一核酸又はポリペプチドは単離されている。このような核酸をベクターの一部とすることができ、及び／又はこのような核酸若しくはポリペプチドを組成物（例えば細胞溶解液）の一部とすることができるが、このようなベクター又は組成物は前記核酸又はポリペプチドの天然環境の一部ではないので、前記核酸又はポリペプチドはやはり単離されている。「遺伝子」なる用語は、ポリペプチド鎖の産生に関与するＤＮＡセグメントを意味し、コーディング領域の前後の「リーダー及びトレーラー」領域と、個々のコーディングセグメント（エキソン）の間の介在配列（イントロン）を含む。
一部の態様において本願で使用する「組換え」なる用語は、人為的介入により遺伝子操作された、即ち外来若しく異種核酸分子の導入により改変された細胞、微生物、核酸分子又はベクターを意味し、あるいは、内在性核酸分子又は遺伝子の発現が制御されるか、制御解除されるか、又は構成的となるように改変されている細胞又は微生物を意味する。人為的に行われる遺伝子改変としては、例えば、１つ以上のタンパク質若しくは酵素をコードする核酸分子（プロモーター等の発現制御因子を含んでいてもよい）を導入する修飾、又は他の核酸分子付加、欠失、置換、又は細胞の遺伝子材料の他の機能的破壊若しくは付加が挙げられる。代表的な修飾としては、参照又は親分子に由来する異種又は同種ポリペプチドのコーディング領域又はその機能的断片の修飾が挙げられる。
一部の態様において本願で使用する「突然変異」又は「突然変異された」とは、参照又は野生型核酸分子又はポリペプチド分子とそれぞれ比較して核酸分子又はポリペプチド分子の配列が変異していることを意味する。突然変異の結果として、配列に数種類の異なる種類の変異を生じることもあり、ヌクレオチド又はアミノ酸の置換、挿入又は欠失が挙げられる。所定の実施形態において、突然変異は１～３個のコドン若しくはアミノ酸の置換、１～約５個のコドン若しくはアミノ酸の欠失、又はその組み合わせである。
一部の態様における「保存的置換」は、あるアミノ酸が類似する性質をもつ別のアミノ酸に置換することとして当技術分野で認められている。代表的な保存的置換は当技術分野で周知である（例えば、ＷＯ９７／０９４３３，１０頁；Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．７１－７７，１９７５；Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ ＩＶ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ｐ．８，１９９０参照）。
一部の態様における「コンストラクト」なる用語は、組換え核酸分子を含む任意のポリヌクレオチドを意味する。コンストラクトをベクター（例えば、細菌ベクター、ウイルスベクター）に挿入していてもよいし、ゲノムに組み込んでもよい。「ベクター」は別の核酸分子を輸送することが可能な核酸分子である。ベクターは、例えばプラスミド、コスミド、ウイルス、ＲＮＡベクター又は線状若しくは環状ＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子とすることができ、前記分子としては、染色体、非染色体、半合成又は合成核酸分子が挙げられる。代表的なベクターは、自律複製が可能なもの（エピソーマルベクター）又は連結した核酸分子の発現が可能なもの（発現ベクター）である。
代表的なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、パルボウイルス（例えばアデノ随伴ウイルス）に加え、コロナウイルス、オルトミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、ラブドウイルス（例えば狂犬病及び水疱性口内炎ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば麻疹及びセンダイ）等のマイナス鎖ＲＮＡウイルス、ピコルナウイルスやアルファウイルス等のプラス鎖ＲＮＡウイルス、並びにアデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば単純ヘルペスウイルス１型及び２型、エプスタイン・バールウイルス、サイトメガロウイルス）、及びポックスウイルス（例えばワクシニア、鳥ポックス及びカナリアポックス）等の２本鎖ＤＮＡウイルスが挙げられる。他のウイルスとしては、例えば、ノーウォークウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、レオウイルス、パポバウイルス、ヘパドナウイルス及び肝炎ウイルスが挙げられる。レトロウイルスの例としては、トリ白血病肉腫ウイルス、哺乳類Ｃ型、Ｂ型ウイルス、Ｄ型ウイルス、ＨＴＬＶ－ＢＬＶ群、レンチウイルス、スプマウイルスが挙げられる（Ｃｏｆｆｉｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ：Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６）。
一部の態様において、本願で使用する「レンチウイルスベクター」とは、組込み型でも非組込み型でもよく、パッケージング能が比較的高く、種々の細胞種に形質導入することができる遺伝子送達用のＨＩＶベースのレンチウイルスベクターを意味する。レンチウイルスベクターは通常では、３種類（パッケージング、エンベロープ及びトランスファー）又はそれ以上のプラスミドを産生細胞に一過性トランスフェクション後に産生される。ＨＩＶと同様に、レンチウイルスベクターはウイルス表面糖タンパク質と細胞表面上の受容体の相互作用により標的細胞に侵入する。侵入すると、ウイルスＲＮＡはウイルス逆転写複合体により逆転写される。逆転写産物は２本鎖線状ウイルスＤＮＡであり、感染細胞のＤＮＡへのウイルス組込みの基盤となる。
一部の態様における「機能的に連結」なる用語は、２個以上の核酸分子のうちの１個の機能が他の分子の影響を受けるようにこれらの核酸分子を単一の核酸断片上で会合させることを意味する。例えば、プロモーターがコーディング配列の発現に影響を与えることが可能であるとき、このプロモーターはこのコーディング配列と機能的に連結されている（即ち、このコーディング配列はこのプロモーターの転写制御下にある）。「連結されていない」とは、会合した遺伝子エレメントが相互に緊密に会合しておらず、それぞれの機能が相互に影響しないことを意味する。
一部の態様において本願で使用する「発現ベクター」とは、適切な宿主内で核酸分子の発現を行うことが可能な適切な制御配列に前記核酸分子を機能的に連結したＤＮＡコンストラクトを意味する。このような制御配列としては、転写を行うためのプロモーター、このような転写を制御するために任意に使用されるオペレーター配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、及び転写と翻訳の終結を制御する配列が挙げられる。ベクターはプラスミド、ファージ粒子、ウイルス又は単に潜在的ゲノムインサートとすることができる。適切な宿主に導入されると、ベクターは宿主ゲノムに非依存的に複製及び機能することができ、又は場合によってはゲノム自体に組込むことができる。本明細書では、「プラスミド」、「発現プラスミド」、「ウイルス」及び「ベクター」を同義に使用することが多い。
一部の態様において本願で使用する「発現」なる用語は、遺伝子等の核酸分子のコーディング配列に基づいてポリペプチドが産生されるプロセスを意味する。前記プロセスとしては、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾又は任意のその組み合わせが挙げられる。
一部の態様において核酸分子を細胞に挿入する文脈における「導入」なる用語は、「トランスフェクション」又は「形質転換」又は「形質導入」を意味し、核酸分子を真核細胞又は原核細胞に取り込むことを含み、核酸分子を細胞のゲノムに取り込んでもよいし（例えば染色体、プラスミド、プラスチド又はミトコンドリアＤＮＡ）、自律型レプリコンに変換してもよいし、一過性発現させてもよい（例えばｍＲＮＡトランスフェクション）。
一部の態様において本願で使用する「異種」又は「外来」核酸分子、コンストラクト又は配列とは、宿主細胞に天然では存在しないが、宿主細胞に由来する核酸分子又は核酸分子の部分と同種であり得る核酸分子又は核酸分子の部分を意味する。異種又は外来核酸分子、コンストラクト又は配列の起源は異なる属又は種に由来することができる。所定の実施形態では、例えば共役、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション等により、異種又は外来核酸分子を宿主細胞又は宿主ゲノムに付加し（即ち、内在的又は天然には存在しない）、付加した分子は宿主ゲノムに組込んでもよいし、染色体外遺伝子材料として（例えば、プラスミド又は他の形態の自己複製ベクターとして）存在させてもよく、複数コピーとして存在することができる。また、「異種」とは、宿主細胞が同種タンパク質又は活性をコードする場合であっても、宿主細胞に外来核酸分子が導入されているときにこの外来核酸分子によりコードされる非天然酵素、タンパク質又は他の活性を意味する。更に、「修飾」又は「異種」ポリヌクレオチド又は結合タンパク質を含む細胞は、子孫自体が形質導入、トランスフェクション、又は他の方法で操作若しくは改変されているか否かに関係なく、この細胞の子孫を含む。
本願に記載するように、２つ以上の異種又は外来核酸分子を別個の核酸分子として宿主細胞に導入してもよいし、複数の個々に制御される遺伝子として導入してもよいし、ポリシストロン性核酸分子として導入してもよいし、融合タンパク質をコードする単一核酸分子として導入してもよいし、任意のその組み合わせとして導入してもよい。例えば、本願に開示するように、ＷＴ１抗原ペプチドに特異的な目的のＴＣＲ（例えば、ＴＣＲα及びＴＣＲβ）をコードする２つ以上の異種又は外来核酸分子を発現するように宿主細胞を改変することができる。２つ以上の外来核酸分子を宿主細胞に導入する場合には、当然のことながら、前記２つ以上の外来核酸分子を（例えば単一ベクターで）単一核酸分子として導入してもよいし、別個のベクターで導入してもよいし、宿主染色体の１部位若しくは複数部位に組込んでもよいし、任意のその組み合わせでもよい。言及する異種核酸分子又はタンパク質活性の数は、コーディング核酸分子の数又はタンパク質活性の数を意味し、宿主細胞に導入される個々の核酸分子の数を意味するものではない。
一部の態様において本願で使用する「内在性」又は「天然」なる用語は、宿主細胞に通常存在する遺伝子、タンパク質又は活性を意味する。更に、親遺伝子、タンパク質又は活性と比較して突然変異、過剰発現、シャフリング、重複又は他の方法で改変された遺伝子、タンパク質又は活性も、この特定の宿主細胞に対して内在性又は天然であるとみなす。例えば、第２の天然遺伝子又は核酸分子の発現を改変又は調節するために第１の遺伝子に由来する内在性制御配列（例えばプロモーター、翻訳低下配列）を使用することができ、第２の天然遺伝子又は核酸分子の発現又は調節は親細胞における正常な発現又は調節と相違する。
一部の態様において、「同種」又は「ホモログ」なる用語は、宿主細胞、生物種又は系列に存在又は由来する分子又は活性を意味する。例えば、異種又は外来核酸分子は天然宿主細胞遺伝子と同種とすることができ、任意に発現レベルの変化、異なる配列、活性変化又は任意のその組み合わせを有することができる。
一部の態様において、本願で使用する「配列同一性」とは、第１の配列と別の参照ポリペプチド配列を整列させ、必要に応じて最大の配列同一性百分率に達するようにギャップを導入し、保存的置換を配列同一性から除外した後に、前記第１の配列中のアミノ酸残基のうちで前記別の配列中のアミノ酸残基と一致するアミノ酸残基の百分率を意味する。配列同一性百分率値は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）“Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に定義されているようなＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ２．０ソフトウェアと、デフォルト値に設定されたパラメータを使用して求めることができる。
一部の態様において本願で使用する「造血前駆細胞」とは、造血幹細胞又は胎児組織に由来し、成熟細胞種（例えば免疫系細胞）へと更に分化することが可能な細胞とすることができる。代表的な造血前駆細胞としては、ＣＤ２４ＬｏＬｉｎ－ＣＤ８１＋表現型を有するものや、胸腺に存在するもの（前駆胸腺細胞と言う）が挙げられる。
一部の態様において本願で使用する「宿主」なる用語は、目的のポリペプチド（例えば、高親和性抗ＷＴ１ＴＣＲ）を生産するために異種又は外来核酸分子による遺伝子改変の標的となる細胞（例えばＴ細胞）又は微生物を意味する。所定の実施形態において、宿主細胞は、任意に異種又は外来タンパク質の生合成に関連するか又は関連しない所望の性質を付与する他の遺伝子改変を既に有するものでもよいし、このような改変を含むように操作してもよい（例えば、検出可能なマーカーの導入；内在性ＴＣＲの欠失、変異又は短縮；共刺激因子の発現亢進）。一部の実施形態において、宿主細胞は、例えば改変後の細胞に生存及び／又は拡大の利点を助長するために、宿主細胞内の免疫シグナル伝達を調節するタンパク質又は融合タンパク質を発現するように遺伝子改変されている（例えば、ＷＯ２０１６／１４１３５７の免疫調節融合タンパク質が参照され、その全てを本願に援用する）。他の実施形態において、宿主細胞は、本願で提供するようなＴＣＲを導入するように又は細胞内の免疫抑制シグナルをノックダウン若しくは最小限にするように遺伝子改変されており（例えば、チェックポイント阻害剤）、このような改変は、例えばＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して実施することができる（例えば、ＵＳ２０１４／００６８７９７、米国特許第８，６９７，３５９号；ＷＯ２０１５／０７１４７４参照）。所定の実施形態において、宿主細胞はＷＴ１抗原ペプチドに特異的なＴＣＲα鎖をコードする異種又は外来核酸分子を形質導入されたヒト造血前駆細胞である。
一部の態様において本願で使用する「過剰増殖性障害」とは、正常又は非疾患細胞と比較して過剰な成長又は増殖を意味する。代表的な過剰増殖性障害としては、腫瘍、がん、新生物組織、癌腫、肉腫、悪性細胞、前悪性細胞、及び非新生物又は非悪性過剰増殖性障害（例えば、腺腫、線維腫、脂肪腫、平滑筋腫、血管腫、線維症、再狭窄に加え、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬、炎症性腸疾患等の自己免疫疾患）が挙げられる。異常又は過剰な増殖が過剰増殖性疾患の場合よりもゆっくりと生じる所定の疾患を「増殖性疾患」と言うことができ、所定の腫瘍、がん、新生物組織、癌腫、肉腫、悪性細胞、前悪性細胞、及び非新生物又は非悪性疾患が挙げられる。
更に、「がん」とは、細胞のあらゆる増殖加速を意味することができ、固形腫瘍、腹水腫瘍、血液若しくはリンパ若しくは他の悪性腫瘍；結合組織悪性腫瘍；転移性疾患；臓器若しくは幹細胞移植後の微小残存病変；多剤耐性がん、原発性若しくは続発性悪性腫瘍、悪性腫瘍に関連する血管新生、又は他の形態のがんが挙げられる。
ＷＴ１ｐ３７抗原ペプチドに特異的なＴＣＲ
所定の態様において、本開示は、（ａ）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α鎖可変（Ｖα）ドメインと、配列番号１～１１、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５及び２４１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン；（ｂ）配列番号１２～２２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２及び２３８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲＶαドメインと、ＴＣＲＶβドメイン；又は（ｃ）配列番号１２～２２、１７８、１８４、１９０、１９６、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２及び２３８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号１～１１、１８１、１８７、１９３、１９９、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５及び２４１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲＶβドメインを含むＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。例えば、本開示のＴＣＲ又はその結合ドメインのいずれかは、細胞（例えばＴ細胞）表面上のＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＨＬＡ複合体と特異的に結合することができ、及び／又はｐＥＣ５０値が８．５以上（例えば、約８．６まで、約８．６５まで、約８．７まで、約８．７２まで、約８．７５まで、約８．８まで、約９まで、約９．１まで、約９．２まで、約９．３まで、約９．４まで、約９．５まで、約９．６まで、約９．６８まで、約９．７まで、約９．７５まで、約１０まで、約１０．５まで、約１１まで、約１１．５まで、約１２まで、約１２．５まで、又は約１３まで）となるようにＩＦＮγ産生を促進することができる。所定の実施形態において、本開示のＴＣＲは、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合することができ、ＩＦＮγ産生ｐＥＣ５０値が９．０以上であり、又はＩＦＮγ産生ｐＥＣ５０値が９．０以上である。所定の実施形態において、本開示のＴＣＲ又はその結合ドメイン（例えば、ｓｃＴＣＲ又はその融合タンパク質）は、ＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＨＬＡ複合体と特異的に結合することができ、ｐＥＣ５０が８．５～約９．９、又は８．６～約９．８、又は８．７～約９．７、又は８．７５～約９．６５等となるようにＩＦＮγ産生を促進することができる。ＥＣ５０は約１．１×１０－９Ｍ～約３．０×１０－１０Ｍ、又はこの範囲内の任意の数値とすることができる。他の例において、本開示のＴＣＲのいずれかは、ＣＤ８に非依存的に又はＣＤ８の不在下で細胞表面上のＷＴ１ペプチド：ＨＬＡ複合体と特異的に結合することができる。他の実施形態において、ＴＣＲは約１０－９Ｍ以下のＫＤでＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合する。所定の実施形態において、前記ＨＬＡはＨＬＡ－Ａ＊２０１を含む。前記ペプチド抗原ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）はＷＴ１ペプチド抗原であり、ＷＴ１タンパク質のアミノ酸３７～４５に相当する。
本願に記載する実施形態のいずれかにおいて、本開示はα鎖とβ鎖を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供し、前記ＴＣＲはＴ細胞表面上でＷＴ１：ＨＬＡ－Ａ＊２０１複合体と結合し、（ａ）ｐＥＣ５０が８．５以上（例えば、約９まで、約９．５まで、約１０まで、約１０．５、約１１、約１１．５、約１２、約１２．５又は約１３）となるようにＩＦＮγ産生を促進する；又は（ｂ）ＣＤ８に非依存的に若しくはその不在下で細胞表面と結合する。
所定の実施形態において、Ｖβドメインは、ＴＲＢＶ７－６＊０１／ＴＲＢＪ２－７＊０１、ＴＲＢＶ２０－１＊０２／ＴＲＢＪ２－７＊０１、ＴＲＢＶ１５＊０２／ＴＲＢＪ１－５＊０１、ＴＲＢＶ１３＊０１／ＴＲＢＪ２－５＊０１、ＴＲＡＪ５０＊０１／ＴＲＢＪ２－７＊０１、ＴＲＢＶ１１－３＊０１／ＴＲＢＪ１－１＊０１、ＴＲＢＶ１９＊０１／ＴＲＢＪ１－６＊０２、ＴＲＢＶ２７＊０１／ＴＲＢＪ２－７＊０１、ＴＲＢＶ１３＊０１／ＴＲＢＪ２－７＊０１、ＴＲＢＶ１１－１＊０１／ＴＲＢＪ１－４＊０１、若しくはＴＲＢＶ４－３＊０１／ＴＲＢＪ１－３＊０１を含むか又はそれに由来する。他の実施形態において、Ｖαドメインは、ＴＲＡＶ２１＊０２／ＴＲＡＪ５８＊０１、ＴＲＡＶ３８－１＊０１／ＴＲＡＪ４０＊０１、ＴＲＡＶ２９／ＤＶ５＊０１／ＴＲＡＪ６＊０１、ＴＲＡＶ２９／ＤＶ５＊０１／ＴＲＡＪ２０＊０１、ＴＲＡＶ４１＊０１／ＴＲＡＪ５０＊０１、ＴＲＡＶ１２－２＊０１／ＴＲＡＪ１１＊０１、ＴＲＡＶ１－２＊０１／ＴＲＡＪ２０＊０１、ＴＲＡＶ２０＊０２／ＴＲＡＪ８＊０１、ＴＲＡＶ２６－１＊０２／ＴＲＡＪ２６＊０１、ＴＲＡＶ２４＊０１／ＴＲＡＪ４８＊０１、若しくはＴＲＡＶ２０＊０２／ＴＲＡＪ３７＊０２を含むか又はそれに由来する。特定の実施形態において、ＴＣＲは、（ａ）ＴＲＢＶ７－６＊０１／ＴＲＢＪ２－７＊０１を含むか若しくはそれに由来するＶβドメインと、ＴＲＡＶ２１＊０２／ＴＲＡＪ５８＊０１を含むか若しくはそれに由来するＶαドメイン；（ｂ）ＴＲＢＶ２７＊０１／ＴＲＢＪ２－７＊０１を含むか若しくはそれに由来するＶβドメインと、ＴＲＡＶ２０＊０２／ＴＲＡＪ８＊０１を含むか若しくはそれに由来するＶαドメイン；又は（ｃ）ＴＲＢＶ１３＊０１／ＴＲＢＪ２－５＊０１を含むか若しくはそれに由来するＶβドメインと、ＴＲＡＶ２９／ＤＶ５＊０１／ＴＲＡＪ２０＊０１を含むか若しくはそれに由来するＶαドメインを含む。
所定の実施形態において、本開示のＴＣＲは更に、（ｉ）配列番号１９４、１７６、１８２、１８８、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０及び２３６のいずれか１つに記載のＣＤＲ１αアミノ酸配列又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体；及び／又は（ｉｉ）配列番号１９５、１７７、１８３、１８９、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１及び２３７のいずれか１つに記載のＣＤＲ２αアミノ酸配列又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体を含む。
所定の実施形態において、本開示のＴＣＲは更に、（ｉ）配列番号１９７、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３及び２３９のいずれか１つに記載のＣＤＲ１βアミノ酸配列又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体；及び／又は（ｉｉ）配列番号１９８、１８０、１８６、１９２、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４及び２４０のいずれか１つに記載のＣＤＲ２βアミノ酸配列又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体を含む。
所定の実施形態において、本開示のＴＣＲは、（ｉ）それぞれ配列番号１９４、１９５、１９６若しくは１２、１９７、１９８、及び１９９若しくは１；（ｉｉ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８若しくは１８、１７９、１８０、及び１８１若しくは７；（ｉｉｉ）それぞれ配列番号１８２、１８３、１８４若しくは２０、１８５、１８６、及び１８７若しくは９；（ｉｖ）それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０若しくは２１、１９１、１９２、及び１９３若しくは１０；（ｖ）それぞれ配列番号２００、２０１、２０２若しくは１３、２０３、２０４、及び２０５若しくは２；（ｖｉ）それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８若しくは１４、２０９、２１０、及び２１１若しくは３；（ｖｉｉ）それぞれ配列番号２１２、２１３、２１４若しくは１５、２１５、２１６、及び２１７若しくは４；（ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号２１８、２１９、２２０若しくは１７、２２１、２２２、及び２２３若しくは６；（ｉｘ）それぞれ配列番号２２４、２２５、２２６若しくは１９、２２７、２２８、及び２２９若しくは８；（ｘ）それぞれ配列番号２３０、２３１、２３２若しくは２２、２３３、２３４、及び２３５若しくは１１；又は（ｘｉ）それぞれ配列番号２３６、２３７、２３８若しくは１６、２３８、２４０、及び２４１若しくは５に記載のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、及びＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む。
本開示のいずれのポリペプチドも、ポリヌクレオチド配列によりコードされるように、「シグナルペプチド」（別称リーダー配列、リーダーペプチド又はトランジットペプチド）を含むことができる。シグナルペプチドは、新規に合成されたポリペプチドを細胞の内側又は外側のそれらの適切な位置に導く。シグナルペプチドは局在化若しくは分泌中又はその完了後にポリペプチドから除去することができる。シグナルペプチドを有するポリペプチドを本願では「プレタンパク質」と呼び、それらのシグナルペプチドが除去されたポリペプチドを本願では「成熟」タンパク質又はポリペプチドと呼ぶ。本願に開示する実施形態のいずれかにおいて、結合タンパク質又は融合タンパク質は、成熟タンパク質を含むか若しくは成熟タンパク質であり、又はプレタンパク質であるか若しくはプレタンパク質を含む。
所定の実施形態において、配列番号２３のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２３のアミノ酸配列から配列番号２３のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４２に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号２４のアミノ酸残基１～１５はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２３のアミノ酸配列から配列番号２４のアミノ酸残基１～１５を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４３に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号２５のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２５のアミノ酸配列から配列番号２５のアミノ酸残基１～１５を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４４に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号２６のアミノ酸残基１～２９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２６のアミノ酸配列から配列番号２６のアミノ酸残基１～２９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４５に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号２７のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２７のアミノ酸配列から配列番号２７のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４６に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号２８のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２８のアミノ酸配列から配列番号２８のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４７に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号２９のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号２９のアミノ酸配列から配列番号２９のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４８に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３０のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号３０のアミノ酸配列から配列番号３０のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２４９に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３１のアミノ酸残基１～２９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号３１のアミノ酸配列から配列番号３１のアミノ酸残基１～２９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２５０に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３２のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号３２のアミノ酸配列から配列番号３２のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２５１に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３３のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶβドメインは成熟ＴＣＲＶβドメインであり、配列番号３３のアミノ酸配列から配列番号３３のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶβドメインは、配列番号２５２に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３４のアミノ酸残基１～１９はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号３４のアミノ酸配列から配列番号３４のアミノ酸残基１～１９を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５３に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３５のアミノ酸残基１～２０はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号３５のアミノ酸配列から配列番号３５のアミノ酸残基１～２０を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５４に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３６のアミノ酸残基１～２６はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号３６のアミノ酸配列から配列番号３６のアミノ酸残基１～２６を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５５に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３７のアミノ酸残基１～２６はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号３７のアミノ酸配列から配列番号３７のアミノ酸残基１～２６を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５６に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３８のアミノ酸残基１～２２はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号３８のアミノ酸配列から配列番号３８のアミノ酸残基１～２２を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５７に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号３９のアミノ酸残基１～２１はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号３９のアミノ酸配列から配列番号３９のアミノ酸残基１～２１を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５８に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号４０のアミノ酸残基１～１７はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号４０のアミノ酸配列から配列番号４０のアミノ酸残基１～１７を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２５９に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号４１のアミノ酸残基１～２１はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号４１のアミノ酸配列から配列番号４１のアミノ酸残基１～２１を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２６０に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号４２のアミノ酸残基１～１７はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号４２のアミノ酸配列から配列番号４２のアミノ酸残基１～１７を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２６１に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号４３のアミノ酸残基１～２２はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号４３のアミノ酸配列から配列番号４３のアミノ酸残基１～２２を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２６２に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、配列番号４４のアミノ酸残基１～２１はシグナルペプチドであるか又はシグナルペプチドを含む。一部の実施形態において、ＴＣＲＶαドメインは成熟ＴＣＲＶαドメインであり、配列番号４４のアミノ酸配列から配列番号４４のアミノ酸残基１～２１を除去した配列を含むか又はこのような配列から構成される（即ち、前記ＴＣＲＶαドメインは、配列番号２６３に記載のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される）。
所定の実施形態において、ＷＴ１ペプチド：ＨＬＡ複合体に特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、配列番号２５３～２６３及び３４～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成されるＶαドメインを有するか、配列番号２４２～２５２及び２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成されるＶβドメインを有するか、又は任意のその組み合わせを有する。特定の実施形態において、Ｖαドメインは配列番号３４のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成され、Ｖβドメインは配列番号２３のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される。他の特定の実施形態において、（ａ）Ｖαドメインは配列番号４１のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成され、Ｖβドメインは配列番号３０のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成される；（ｂ）Ｖαドメインは配列番号３７のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成され、Ｖβドメインは配列番号２６のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成される；又は（ｃ）Ｖαドメインは配列番号４２のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成され、Ｖβドメインは配列番号３１のアミノ酸配列を含むか若しくはこの配列から構成される。他の特定の実施形態において、Ｖαドメインは配列番号２４のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成され、Ｖβドメインは配列番号３５のアミノ酸配列を含むか又はこの配列から構成される。
一部の実施形態において、前記Ｖαドメイン及び前記Ｖβドメインは、配列番号（ｉ）それぞれ２５３及び２４２；（ｉｉ）それぞれ２５９及び２４８；（ｉｉｉ）それぞれ２６１及び２５０；（ｉｖ）それぞれ２６２及び２５１；（ｖ）それぞれ２５７及び２４６；（ｖｉ）それぞれ２５４及び２４３；（ｖｉｉ）それぞれ２５５及び２４４；（ｖｉｉｉ）それぞれ２５６及び２４５；（ｉｘ）それぞれ２５８及び２４７；（ｘ）それぞれ２６０及び２４９；（ｘｉ）それぞれ２６３及び２５２；（ｘｉｉ）それぞれ３４及び２３；（ｘｉｉｉ）それぞれ４０及び２９；（ｘｉｖ）それぞれ４２及び３１；（ｘｖ）それぞれ４３及び３２；（ｘｖｉ）それぞれ３５及び２４；（ｘｖｉｉ）それぞれ３６及び２５；（ｘｖｉｉｉ）それぞれ３７及び２６；（ｘｉｘ）それぞれ３９及び２８；（ｘｘ）それぞれ４１及び３０；（ｘｘｉ）それぞれ４４及び３３；又は（ｘｘｉｉ）それぞれ３８及び２７に記載のアミノ酸配列を含むか又はこのような配列から構成される。
所定の実施形態において、本願に記載するＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な機能的アビディティの高い組換えＴＣＲは、ＣＤＲ３が変異せず、ＴＣＲがその特異的ＷＴ１ｐ３７結合機能を維持するか又は実質的に維持するという条件で、本願に記載するように配列番号４８～５８のいずれか１つ以上のアミノ酸配列に対してアミノ酸配列に１か所以上のアミノ酸置換、挿入又は欠失を有する変異ポリペプチド種を含む。
アミノ酸の保存的置換は周知であり、天然に生じる場合もあるし、ＴＣＲを組換え生産する際に導入される場合もある。当技術分野で公知の変異導入法を使用してアミノ酸置換、欠失及び付加をタンパク質に導入することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，２００１参照）。所望される置換、欠失又は挿入に応じて特定のコドンを変異させた変異ポリヌクレオチドを提供するには、オリゴヌクレオチドを用いた部位特異的（又はセグメント特異的）変異導入法を利用することができる。あるいは、免疫原ポリペプチド変異体を作製するには、アラニンスキャニング変異導入法、エラープローンポリメラーゼ連鎖反応変異導入法及びオリゴヌクレオチドを用いた変異導入法等のランダム又は飽和変異導入技術を使用することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，前出参照）。
ペプチド又はポリペプチドの特定位置で置換されたアミノ酸が保存的（又は類似）であるか否かについては、当業者に公知の種々の基準に示されている。例えば、類似アミノ酸又は保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似した側鎖を有するアミノ酸残基で置換されている場合である。類似アミノ酸は以下の分類に分けることができる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）；酸性側鎖を有するアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）；非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、ヒスチジン）；非極性側鎖を有するアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）；β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン）。プロリンは分類しにくいとみなされ、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（例えばロイシン、バリン、イソロイシン及びアラニン）の性質ももつ。グルタミンとアスパラギンはそれぞれグルタミン酸とアスパラギン酸のアミド誘導体であるため、状況によっては、グルタミン酸からグルタミン又はアスパラギン酸からアスパラギンへの置換を類似的置換とみなすこともできる。当技術分野で理解されている通り、２種類のポリペプチドの「類似性」は、（例えば、ＧＥＮＥＷＯＲＫＳ、Ａｌｉｇｎ、ＢＬＡＳＴアルゴリズム、又は本願に記載し、当技術分野で一般的な他のアルゴリズムを使用して）ポリペプチドのアミノ酸配列及びその保存置換されたアミノ酸残基を第２のポリペプチドの配列と比較することにより判定される。
ＷＴ１ｐ３７抗原：ＭＨＣ複合体に特異的な野生型ＴＣＲ又はその結合ドメインの変異体としては、ＶβドメインのＣＤＲ３とＶαドメインのＣＤＲ３のどちらも変異を含まず、他の部分の変異により機能的アビディティ（又は相対親和性）が野生型ＴＣＲと比較して１０％、１５％又は２０％を超えて低下しないという条件で、本願に開示する代表的なアミノ酸配列（例えば配列番号２３～５８）のいずれかに対して少なくとも約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するＴＣＲが挙げられる。任意に選択される一部の実施形態において、変異体ＴＣＲは更に、配列番号３４～４４のいずれか１つ（親Ｖαドメイン）又は配列番号２３～３３のいずれか１つ（親Ｖβドメイン）に記載するＣＤＲ１のＶαドメイン、ＣＤＲ２のＶαドメイン、ＣＤＲ１のＶβドメイン、ＣＤＲ２のＶβドメイン又は任意のその組み合わせのアミノ酸配列に変異を含まない。これらの実施形態の各々において、前記ＴＣＲはｐＥＣ５０が８．５、８．６、８．７、８．８、８．９若しくはそれ以上となるようにＩＦＮγ産生を特異的に誘導するその能力を維持し、又は前記ＴＣＲは約１０－９Ｍ以下のＫＤでペプチド抗原：ＨＬＡ複合体（例えば、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ＨＬＡ複合体）と特異的に結合するその能力を維持し、具体的に、配列番号４８～５８のいずれか１つから構成される野生型ＴＣＲよりも１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．３倍、３．５倍、５倍まで良好に結合する。
他の実施形態において、本開示は、（ａ）配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲα鎖可変（Ｖα）ドメインと、配列番号２３～２５、２７、２８、３０、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン；（ｂ）配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２３～２５、２７、２８、３０、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメイン；又は（ｃ）配列番号３４～４４のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶαドメインと、配列番号２３～２５、２７、２８、３０、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメインを含む、ｐ３７特異的ＴＣＲ又はその結合ドメインを提供する。
更に他の実施形態において、本開示は、（ａ）配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％（例えば９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有するＶβドメイン；（ｂ）配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメイン；又は（ｃ）配列番号３４～４４のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶαドメインと、配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメインを含む、ｐ３７特異的ＴＣＲ又はその結合ドメインを提供する。
更に他の実施形態において、本開示は、（ａ）配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するＶβドメイン；（ｂ）配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメイン；又は（ｃ）配列番号３４～４４のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶαドメインと、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９３％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメインを含む、ｐ３７特異的ＴＣＲ又はその結合ドメインを提供する。
他の実施形態において、本開示は、（ａ）配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶβドメイン；（ｂ）配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメイン；又は（ｃ）配列番号３４～４４のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶαドメインと、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＴＣＲＶβドメインを含む、ｐ３７特異的ＴＣＲ又はその結合ドメインを提供する。
更に他の実施形態において、本開示は、（ａ）配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＶβドメイン；（ｂ）配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶβドメイン；又は（ｃ）配列番号３４～４４のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶαドメインと、配列番号２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるＴＣＲＶβドメインを含む、ｐ３７特異的ＴＣＲ又はその結合ドメインを提供する。
上記実施形態のいずれかにおいて、前記ＴＣＲは細胞（例えばＴ細胞）表面ＷＴ１ｐ３７ペプチドＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ＨＬＡ複合体と結合し、ｐＥＣ５０が８．５、８．６、８．７、８．８、８．９若しくはそれ以上となるようにＩＦＮγ産生を特異的に誘導することができ、及び／又は前記ＴＣＲは、ＣＤ８に非依存的に若しくはその不在下でＷＴ１ペプチドＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ＨＬＡ細胞表面複合体と特異的に結合することができる。上記実施形態のいずれかにおいて、前記Ｖβドメインは、配列番号２３～３３のいずれか１つに存在するそれぞれＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２と比較してＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２のアミノ酸配列に変異を含まない。
所定の実施形態において、上記ＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）のいずれかはＴＣＲの抗原結合断片とすることができる。他の実施形態において、前記ＴＣＲの抗原結合断片は１本鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）を含み、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に加えることができる。一部の実施形態において、ＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲは、例えばＶαドメインとα鎖定常ドメインを含むＴＣＲα鎖と、Ｖβドメインとβ鎖定常ドメインを含むＴＣＲβ鎖を含む多鎖結合タンパク質であり、前記ＴＣＲα鎖定常ドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有しており、前記ＴＣＲβ鎖定常ドメインは、配列番号４５又は４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有する。他の実施形態において、本開示は、配列番号４７のアミノ酸配列を有するα鎖定常ドメインを含むか若しくはこのようなドメインから構成される、及び／又は配列番号４５若しくは４６のアミノ酸配列を有するβ鎖定常ドメインを含むか若しくはこのようなドメインから構成される、ＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲを提供する。
他の実施形態において、本開示は、Ｖαドメインとα鎖定常ドメインＴＣＲα鎖を含むＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲを提供し、（ａ）前記Ｖαドメインは、配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の配列同一性を有しており、前記α鎖定常ドメインは、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％の配列同一性を有する；又は（ｂ）前記Ｖαドメインは、配列番号３６又は３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９２％の配列同一性を有しており、前記α鎖定常ドメインは配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する。
一部の実施形態において、前記ＴＣＲは、Ｖαドメインとα鎖定常ドメインを含むＴＣＲα鎖を含み、（ａ）前記Ｖαドメインは配列番号２４２～２５２及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記α鎖定常ドメインは配列番号４７のアミノ酸配列を含む；又は（ｂ）前記Ｖαドメインは配列番号２４２～２５２及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成され、前記α鎖定常ドメインは配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％（例えば９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するか、このような配列を含むか、若しくはこのような配列から構成される。
一部の実施形態では、前記α鎖定常ドメインが存在し、前記Ｖαドメインと前記α鎖定常ドメインが一緒になってＴＣＲα鎖を形成する。一部の実施形態では、前記β鎖定常ドメインが存在し、前記Ｖβドメインと前記β鎖定常ドメインが一緒になってＴＣＲβ鎖を形成する。
一部の実施形態では、前記ＴＣＲはｓｃＴＣＲを含み、又は本願に開示するＴＣＲに由来するｓｃＴＣＲが提供される。一部の実施形態では、前記ＴＣＲはＣＡＲを含み、又は本願に開示するＴＣＲに由来する（例えば、本願に開示するＴＣＲに由来する１個以上の可変ドメインを含む）ＣＡＲが提供される。
他の実施形態では、上記実施形態のいずれか１つに係る機能的アビディティの高いＷＴ１特異的組換えＴＣＲ又はその結合ドメインと、薬学的に許容される基剤、希釈剤又は賦形剤を含有する組成物が提供される。
組換え生産された可溶性ＴＣＲを単離・精製するのに有用な方法としては、例えば、組換え可溶性ＴＣＲを培地に分泌する適切な宿主細胞／ベクターシステムから上清を採取した後、市販フィルターを使用して培地を濃縮する方法が挙げられる。濃縮後、濃縮液をアフィニティマトリックスやイオン交換樹脂等の単一の適切な精製マトリックス又は一連の適切なマトリックスにアプライすればよい。組換えポリペプチドを更に精製するために１回以上の逆相ＨＰＬＣ工程を利用してもよい。免疫原をその天然環境から単離するときにこれらの精製方法を利用してもよい。本願に記載する単離型／組換え可溶性ＴＣＲの１つ以上の大規模生産方法はバッチ細胞培養を含み、適切な培養条件を維持するようにモニター・制御される。可溶性ＴＣＲの精製は、米国内外規制当局の法律とガイドラインに準じ、本願に記載する当技術分野で公知の方法に従って実施することができる。
所定の実施形態では、ＭＨＣと複合体化したＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高いＴＣＲをコードする核酸分子を使用し、養子移入療法で利用するために宿主細胞（例えばＴ細胞）にトランスフェクション／形質導入した。ＴＣＲシーケンシングの進歩は文献に記載されており（例えば、Ｒｏｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１４：４０９９，２００９；Ｒｏｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌａｔ．Ｍｅｄ．２：４７ｒａ６４，２０１０；Ｒｏｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，（Ｓｅｐｔ．１０）Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ，２０１１；Ｗａｒｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．２１：７９０，２０１１）、本開示に係る実施形態を実施する過程で利用することができる。同様に、目的の核酸をＴ細胞にトランスフェクション／形質導入する方法（例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００４／００８７０２５号）や、所望の抗原特異性のＴ細胞を使用した養子移入法も記載されており（例えば、Ｓｃｈｍｉｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎ．２０：１２４０，２００９；Ｄｏｓｓｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７：７４２，２００９；Ｔｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１２：２２６１，２００８；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１８：７１２，２００７；Ｋｕｂａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０９：２３３１，２００７；ＵＳ２０１１／０２４３９７２；ＵＳ２０１１／０１８９１４１；Ｌｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：２４３，２００７）、ＨＬＡ受容体と複合体化したＷＴ１ペプチド抗原に特異的な高親和性ＴＣＲに関する教示を含めた本願の教示に基づき、本願に開示する実施形態にこれらの方法を応用することも想定される。
本願に記載するＷＴ１特異的ＴＣＲ又はその結合ドメイン（例えば、配列番号２３～５８とその非ＣＤＲ３変異体）は、Ｔ細胞活性のアッセイ方法として当技術分野で認められている多数の方法のいずれかに従って機能的に特性決定することができ、Ｔ細胞結合、活性化又は誘導の測定や、抗原特異的なＴ細胞応答の測定が挙げられる。例としては、Ｔ細胞増殖、Ｔ細胞サイトカイン放出、抗原特異的Ｔ細胞刺激、ＭＨＣ拘束性Ｔ細胞刺激、（例えば、標的細胞にプレロードした５１Ｃｒの排出を検出することにより）細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）活性、Ｔ細胞表現型マーカー発現の変化の測定、及びＴ細胞機能の他の測定が挙げられる。これらのアッセイ及び同様のアッセイの実施手順については、例えばＬｅｆｋｏｖｉｔｓ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９８）を参照されたい。更に、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；Ｗｅｉｒ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ（１９８６）；Ｍｉｓｈｅｌｌ ａｎｄ Ｓｈｉｇｉｉ（ｅｄｓ．）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ（１９７９）；Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｒｅｅｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１３０９（１９９８）及びその引用文献も参照されたい。
ＷＴ１ｐ３７抗原ペプチドに特異的なＴＣＲをコードするポリヌクレオチド
本願に記載するＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高い組換えＴ細胞受容体（ＴＣＲ）又はその結合ドメイン（例えば、ｓｃＴＣＲ又はその融合タンパク質）をコードする異種、単離又は組換え核酸分子は、本願に記載する種々の方法及び技術により生産・作製することができる（実施例参照）。目的のＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高い人工ＴＣＲ又はその結合ドメインを組換え生産するのに使用される発現ベクターの構築は、当技術分野で公知の任意の適切な分子生物工学技術を使用することにより実施することができ、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９ ａｎｄ ２００１ ｅｄｉｔｉｏｎｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）やＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３）に記載されているような制限エンドヌクレアーゼ消化、ライゲーション、形質転換、プラスミド精製及びＤＮＡシーケンシングの使用が挙げられる。効率的な転写と翻訳を得るために、各組換え発現コンストラクトにおけるポリヌクレオチドは、リーダー配列や、特に免疫原をコードするヌクレオチド配列に機能的に（即ち、作用し得るように）連結されたプロモーター等の少なくとも１個の適切な発現制御配列（調節配列とも言う）を含む。
所定の実施形態は、本願で想定するポリペプチド、例えば、ＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＭＨＣ複合体に特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高い人工ＴＣＲ又はその結合ドメインをコードする核酸に関する。当業者に自明の通り、核酸とは、任意形態の１本鎖又は２本鎖ＤＮＡ、ｃＤＮＡ又はＲＮＡを意味することができ、核酸の相補的なプラス鎖とマイナス鎖を含むことができ、アンチセンスＤＮＡ、ｃＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＲＮＡ－ＤＮＡハイブリッド、リボザイム、及び他の種々の天然又は合成形態のＤＮＡ又はＲＮＡも含む。
所定の実施形態において、本願では本開示のＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な機能的アビディティの高い人工（例えばコドン最適化）ＴＣＲ又はその結合ドメインをコードする単離型ポリヌクレオチドが提供され、配列番号９７、９８及び１０１～１０７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％又は１００％一致するポリヌクレオチドによりＶαドメインをコードすることができる。特定の実施形態では、配列番号９７～１０７のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むか又はこのような配列から構成されるポリヌクレオチドによりＶαドメインをコードする。他の実施形態において、本願では本開示のＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な機能的アビディティの高い人工ＴＣＲ又はその結合ドメインをコードするポリヌクレオチドが提供され、配列番号７５～７７、７９、８２、８４及び８５のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％又は１００％一致するポリヌクレオチドによりＶβドメインをコードする。特定の実施形態では、配列番号７５～８５のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むか又はこのような配列から構成されるポリヌクレオチドによりＶβドメインをコードする。
一部の実施形態において、本願で提供されるＴＣＲ又はその結合ドメインは、配列番号９７、９８及び１０１～１０７のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％（７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％又は１００％）の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるＶαドメイン、又は配列番号９９若しくは１００のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるＶαドメイン、又は配列番号９７～１０７のいずれか１つに記載の配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされるＶαドメインと；配列番号７５～７７、７９、８２、８４及び８５のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるＶβドメイン、又は配列番号７８、８０、８１及び８３のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるＶβドメイン、又は配列番号７５～８５のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むか若しくはこのような配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされるＶβドメインを含む。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｖαドメイン、Ｖβドメイン又はその両方をコードするポリヌクレオチドは更に、それぞれα鎖定常ドメイン又はβ鎖定常ドメインをコードすることができる。所定の実施形態において、本開示のＴＣＲはＴＣＲα鎖定常ドメインを含み、前記α鎖定常ドメインは配列番号１１０に対して少なくとも９８％～１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。特定の実施形態において、α鎖定常ドメインは、配列番号１１０のヌクレオチド配列を含むか又はこのような配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされる。他の実施形態において、本願では配列番号１０８又は１０９に対して少なくとも９９．９％～１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるβ鎖定常ドメインが提供される。特定の実施形態において、β鎖定常ドメインは、配列番号１０８又は１０９のヌクレオチド配列を含むか又はこのような配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされる。
上記実施形態のいずれかにおいて、ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、又はその両方を含む。所定の実施形態において、本開示のＴＣＲは、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド配列とＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド配列の間に配置された自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされる。代表的な自己切断ペプチドは、配列番号６０～６３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又は配列番号６０～６３のいずれか１つのアミノ酸配列から構成される。このような自己切断ペプチドは配列番号１６６～１７０のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードすることができ、又は配列番号１６６～１７０のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードすることができる。
所定の実施形態において、ＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、配列番号１５５～１６５のいずれか１つに対して少なくとも９５％（例えば９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。他の実施形態において、ＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、配列番号１５５～１６５のいずれか１つのポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるか、又は配列番号１５５～１６５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされる。更に他の実施形態において、前記コードされるＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つに対して少なくとも９５％（例えば９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は前記コードされるＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、配列番号４８～５８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか若しくはこのような配列から構成される。
本願に開示する実施形態のいずれかにおいて、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドは更に、（ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドがＣＤ８共受容体α鎖であるか若しくはＣＤ８共受容体α鎖を含む、前記ポリヌクレオチド；（ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、任意に、コードされるポリペプチドがＣＤ８共受容体β鎖であるか若しくはＣＤ８共受容体β鎖を含む、前記ポリヌクレオチド；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチドと（ｉｉ）のポリヌクレオチドを含むことができる。理論に拘束する意図はないが、所定の実施形態では、結合タンパク質がＣＤ８共受容体タンパク質又はＨＬＡ分子と結合するように機能するその部分と共発現又は並行発現する結果、結合タンパク質単独の発現と比較して宿主細胞（例えば、Ｔ細胞、任意にＣＤ４＋Ｔ細胞等の免疫細胞）の１つ以上の所望の活性が改善されると考えられる。当然のことながら、結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、ＣＤ８共受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは（例えば同一の発現ベクター内で）１個の核酸分子上に存在していてもよいし、宿主細胞内で別々の核酸分子上に存在していてもよい。
他の所定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、（ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと；（ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと；（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドの間に配置された自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、自己切断ペプチドをコードし、（１）結合タンパク質（例えば本開示のＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドと、ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの間；及び／又は（２）結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの間に配置されたポリヌクレオチドを含む。
更に他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、インフレームで機能的に連結された（ｉ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲ）；（ｉｉ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲ）；（ｉｉｉ）（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）；（ｉｖ）（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）；（ｖ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）；又は（ｖｉ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）を含むことができ、上記式中、ｐｎＣＤ８αはＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＣＤ８βはＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＴＣＲはＴＣＲをコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＳＣＰ１及びｐｎＳＣＰ２は各々独立して自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、前記ポリヌクレオチド及び／又は前記コードされる自己切断ペプチドは任意に同一又は異なる（例えばＰ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｆ２Ａ、Ｅ２Ａ）。
一部の実施形態において、前記コードされるＴＣＲはＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖を含み、前記ポリヌクレオチドは、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドとＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドの間に配置された自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、前記ポリヌクレオチドは、インフレームで機能的に連結された（ｉ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲα）；（ｉｉ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲα）；（ｉｉｉ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲβ）；（ｉｖ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲβ）；（ｖ）（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８β）；（ｖｉ）（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８α）；（ｖｉｉ）（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８β）；又は（ｖｉｉｉ）（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８α）を含み、上記式中、ｐｎＣＤ８αはＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＣＤ８βはＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＴＣＲαはＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＴＣＲβはＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドであり、ｐｎＳＣＰ１、ｐｎＳＣＰ２及びｐｎＳＣＰ３は各々独立して自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、前記ポリヌクレオチド及び／又は前記コードされる自己切断ペプチドは任意に同一又は異なる。
他の実施形態において、結合タンパク質は、安全スイッチタンパク質、タグ、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖、ＣＤ８共受容体α鎖若しくはその両方、又は任意のその組み合わせ等の１つ以上の他のアクセサリータンパク質をコードするトランスジーンコンストラクトの一部として発現され、及び／又は本開示の宿主細胞は、このような１つ以上の他のアクセサリータンパク質をコードすることができる。結合タンパク質とアクセサリーコンポーネント（例えば、安全スイッチタンパク質、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖又はＣＤ８共受容体α鎖の１つ以上）をコード・発現させるために有用なポリヌクレオチドとトランスジーンコンストラクトはＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５３１１２に記載されており、ヌクレオチド配列とアミノ酸配列を含め、同出願に記載されているポリヌクレオチド、トランスジーンコンストラクト及びアクセサリーコンポーネントを本願に援用する。当然のことながら、本開示の結合タンパク質、安全スイッチタンパク質、タグ、選択マーカー、ＣＤ８共受容体β鎖又はＣＤ８共受容体α鎖のいずれか又は全部を１個の核酸分子によりコードすることもできるし、別々の核酸分子であるか又は別々の核酸分子上に存在するポリヌクレオチド配列によりコードすることもできる。
代表的な安全スイッチタンパク質としては、例えば、細胞外Ｎ末端リガンド結合ドメインと細胞内受容体チロシンキナーゼ活性を欠損するが、その天然アミノ酸配列を維持し、Ｉ型膜貫通タンパク質の細胞表面局在を示し、医薬品グレードの抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体が結合する立体配座的に無傷なエピトープを有する短縮型ＥＧＦ受容体ポリペプチド（ｈｕＥＧＦＲｔ）であるセツキシマブ（アービタックス）ｔＥＧＦ受容体（ｔＥＧＦｒ；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１８：１２５５－１２６３，２０１１）が挙げられ、更に、カスパーゼポリペプチド（例えばｉＣａｓｐ９；Ｓｔｒａａｔｈｏｆ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０５：４２４７－４２５４，２００５；Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：１６７３－１６８３，２０１１；Ｚｈｏｕ ａｎｄ Ｂｒｅｎｎｅｒ，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．ｐｉｉ：Ｓ０３０１－４７２Ｘ（１６）３０５１３－６．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｅｘｐｈｅｍ．２０１６．０７．０１１）、ＲＱＲ８（Ｐｈｉｌｉｐ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２４：１２７７－１２８７，２０１４）；ヒトｃ－ｍｙｃタンパク質（Ｍｙｃ）に由来する１０アミノ酸タグ（Ｋｉｅｂａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０５：６２３－６２８，２００８）；及びＲＱＲ（ＣＤ２０＋ＣＤ３４；Ｐｈｉｌｉｐ ｅｔ ａｌ．，２０１４）等のマーカー／安全スイッチポリペプチドが挙げられる。
本開示の改変型宿主細胞に有用な他のアクセサリーコンポーネントは、細胞を同定、選別、単離、濃縮又は追跡できるようにするタグ又は選択マーカーを含む。例えば、所望の特徴（例えば、抗原特異的ＴＣＲや安全スイッチタンパク質）を有する標識宿主細胞を試料中の未標識細胞から選別することができ、所望の純度の製剤に加えるためにより効率的に活性化させ、拡大することができる。
本願で使用する「選択マーカー」なる用語は、選択マーカーを含むポリヌクレオチドを形質導入した免疫細胞を検出・ポジティブセレクションできるように、識別可能な変化を細胞に付与する核酸コンストラクト（及びコードされる遺伝子産物）を含む。ＲＱＲは、ＣＤ２０の細胞外大ループと２個の最小ＣＤ３４結合部位を含む選択マーカーである。一部の実施形態において、ＲＱＲをコードするポリヌクレオチドは、１６アミノ酸のＣＤ３４最小エピトープをコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施形態において、前記ＣＤ３４最小エピトープはＣＤ８共受容体ストークドメイン（Ｑ８）のアミノ末端位置に組み込まれる。他の実施形態では、前記ＣＤ３４最小結合部位配列をＣＤ２０の標的エピトープと連結し、Ｔ細胞用のコンパクトなマーカー／自殺遺伝子（ＲＱＲ８）を形成することができる（本願に援用するＰｈｉｌｉｐ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。このコンストラクトを用いると、同コンストラクトを発現する宿主細胞を、例えば磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）に結合させたＣＤ３４特異抗体で選択することが可能になり、更に、臨床で許容されている医薬品抗体であるリツキシマブを利用し、トランスジーンを発現する人工Ｔ細胞の選択的排除が可能になる（Ｐｈｉｌｉｐ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。
他の代表的な選択マーカーとしては、通常ではＴ細胞上で発現されない数種の短縮型Ｉ型膜貫通タンパク質、即ち、短縮型低親和性神経成長因子、短縮型ＣＤ１９、及び短縮型ＣＤ３４も挙げられる（例えば、Ｄｉ Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：１６７３－１６８３，２０１１；Ｍａｖｉｌｉｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８３：１９８８－１９９７，１９９４；Ｆｅｈｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１：４４８－４５６，２０００が参照され、各々その開示内容全体を本願に援用する）。ＣＤ１９とＣＤ３４の有用な特徴は、これらのマーカーを臨床グレード選別に適用できるオフザシェルフＭｉｌｔｅｎｙｉ ＣｌｉｎｉＭＡＣｓ（ＴＭ）選択システムを利用できることである。しかし、ＣＤ１９とＣＤ３４は比較的大きな表面タンパク質であり、組み込みベクターのベクターパッケージング能と転写効率が課題となる。細胞外非シグナル伝達ドメイン又は種々のタンパク質（例えばＣＤ１９、ＣＤ３４、ＬＮＧＦＲ）を含む表面マーカーも利用できる。どのような選択マーカーを利用してもよく、適正製造規範（Ｇｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ）に適合すると思われる。所定の実施形態では、目的遺伝子産物（例えば、ＴＣＲやＣＡＲ等の本開示の結合タンパク質）をコードするポリヌクレオチドと選択マーカーを共発現させる。選択マーカーの他の例としては、例えば、ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、β－ｇａｌ又はクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）等のレポーターが挙げられる。所定の実施形態では、例えばＣＤ３４等の選択マーカーを細胞に発現させ、本願に記載する方法での使用に備えて形質導入した目的細胞を（例えば免疫磁気選択により）選択、濃縮又は単離するためにＣＤ３４を使用することができる。本願で使用するＣＤ３４マーカーは、抗ＣＤ３４抗体、又は例えばＣＤ３４と結合するｓｃＦｖ、ＴＣＲ若しくは他の抗原認識部分とは区別される。
所定の実施形態において、選択マーカーはＲＱＲポリペプチド、短縮型低親和性神経成長因子（ｔＮＧＦＲ）、短縮型ＣＤ１９（ｔＣＤ１９）、短縮型ＣＤ３４（ｔＣＤ３４）又は任意のその組み合わせを含む。
ＲＱＲポリペプチドに関して、理論に拘束する意図はないが、ＲＱＲポリペプチドが選択マーカー／安全スイッチとして機能するためには、宿主細胞表面からのエピトープ又は標的配列の距離が重要であると思われる（Ｐｈｉｌｉｐ ｅｔ ａｌ．，２０１０（前出））。一部の実施形態において、コードされるＲＱＲポリペプチドはコードされるＣＤ８共受容体のβ鎖、α鎖若しくはその両方、又は一方若しくは両方の断片若しくは変異体に組み込まれる。特定の実施形態において、改変型宿主細胞は、ｉＣａｓｐ９をコードする異種ポリヌクレオチドと、ＲＱＲポリペプチドを組み込んだβ鎖とＣＤ８α鎖を含む組換えＣＤ８共受容体をコードする異種ポリヌクレオチドを含む。
上記実施形態のいずれかにおいて、例えば本開示のＴＣＲ若しくはその結合ドメイン、又はＣＤ８共受容体若しくはその細胞外部分をコードするポリヌクレオチドは、標的宿主細胞で効率的に発現されるようにコドン最適化されている。一部の実施形態において、前記宿主細胞はＴ細胞、ＮＫ細胞又はＮＫ－Ｔ細胞等のヒト免疫系細胞を含む（Ｓｃｈｏｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１９：１３５，２００６）。コドン最適化は公知技術及びツールを使用して実施することができ、例えばＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｒ）ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（ＴＭ）ツール又はＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用できる。コドン最適化配列としては、部分的にコドン最適化された（即ち、コドンの全部よりは少ないが、１個以上が宿主細胞での発現に適合するように最適化された）配列と、完全にコドン最適化された配列が挙げられる。当然のことながら、ポリヌクレオチドが２つ以上のポリペプチド（例えば、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ８共受容体α鎖、ＣＤ８共受容体β鎖、及び１つ以上の自己切断ペプチド）をコードする実施形態では、各ポリペプチドを独立して完全にコドン最適化してもよいし、部分的にコドン最適化してもよいし、コドン最適化しなくてもよい。
所定の実施形態において、本開示は、本開示のＴＣＲ又はその結合ドメインの任意の１つ以上をコードする異種ポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供し、このような改変型又は組換え宿主細胞は、前記異種ポリヌクレオチドによりコードされるＴＣＲ又はその結合ドメインをその細胞表面に発現する。
組換え（即ち、人工）ＤＮＡ、ペプチド及びオリゴヌクレオチド合成、イムノアッセイ及び組織培養と形質転換（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション）には種々の技術を使用することができる。酵素反応及び精製技術は製造業者の指示に従って実施してもよいし、当技術分野で広く実施されているように実施してもよいし、本願に記載するように実施してもよい。これらの技術と手順及び関連する技術と手順は、一般に当技術分野で周知の従来方法に従って実施することができ、また、本明細書の随所に引用・論述する微生物学、分子生物学、生化学、分子遺伝学、細胞生物学、ウイルス学及び免疫技術における種々の一般文献及び特殊文献に記載されているように実施することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ｕｐｄａｔｅｄ Ｊｕｌｙ ２００８）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；Ｇｌｏｖｅｒ，ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｖｏｌ．Ｉ ＆ ＩＩ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ ＵＳＡ，１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ：Ｊｏｈｎ Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａｄａ Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄａｖｉｄ Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅｔｈａｎ Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗａｒｒｅｎ Ｓｔｒｏｂｅｒ ２００１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ）；Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｊｕｌｉｅ Ｌｏｇａｎ，Ｋｉｒｓｔｉｎ Ｅｄｗａｒｄｓ ａｎｄ Ｎｉｃｋ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，２００９，Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ；Ａｎａｎｄ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｇｅｎｏｍｅｓ，（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９２）；Ｇｕｔｈｒｉｅ ａｎｄ Ｆｉｎｋ，Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．Ｇａｉｔ，Ｅｄ．，１９８４）；Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｅｄｓ．，１９８４）；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｅｄ．，１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；Ｎｅｘｔ－Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｊａｎｉｔｚ，２００８ Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ）；ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｐａｒｋ，Ｅｄ．，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；論文，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ ｅｄｓ．，１９８７，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９８）；Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｍａｙｅｒ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９８７）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ－ＩＶ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ ＣＣ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９８６）；Ｒｏｉｔｔ，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８８）；Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓｔａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ，Ｅｄ．，２００２）；Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｖｏｌｕｍｅ Ｉ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓｔａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ，Ｅｄ．，２００６）；Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｖｏｌｕｍｅ ＩＩ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓｔａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ，Ｅｄ．，２００６）；Ｈｕｍａｎ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｕｒｓａｄ Ｔｕｒｋｓｅｎ Ｅｄ．，２００６）；Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｄａｒｗｉｎ Ｊ．Ｐｒｏｃｋｏｐ，Ｄｏｎａｌｄ Ｇ．Ｐｈｉｎｎｅｙ，ａｎｄ Ｂｒｕｃｅ Ａ．Ｂｕｎｎｅｌｌ Ｅｄｓ．，２００８）；Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ａ．Ｋｌｕｇ，ａｎｄ Ｃｒａｉｇ Ｔ．Ｊｏｒｄａｎ Ｅｄｓ．，２００１）；Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｋｅｖｉｎ Ｄ．Ｂｕｎｔｉｎｇ Ｅｄ．，２００８）Ｎｅｕｒａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（Ｌｅｓｌｉｅ Ｐ．Ｗｅｉｎｅｒ Ｅｄ．，２００８）参照。
上記実施形態のいずれかでは、本開示のポリヌクレオチドを宿主細胞に取り込ませ、又は所定の実施形態では、ベクターに取り込ませ、前記ポリヌクレオチドを取り込んだ前記ベクターを宿主細胞に導入することができる。従って、本願で提供されるポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。一部の実施形態において、前記ポリヌクレオチドは発現制御配列と機能的に連結されている。本願に開示する所定の実施形態で使用するのに適したベクターは公知であり、特定の目的又は細胞に合わせて選択することができる。代表的なベクターの１例は別の核酸分子を連結して輸送することが可能な核酸分子又は宿主生物で複製可能な核酸分子を含むことができる。ベクターの例としては、プラスミド、ウイルスベクター、コスミド等が挙げられる。ベクターには、これらのベクターが導入される宿主細胞で自律複製が可能なもの（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターや哺乳動物エピソーマルベクター）もあれば、宿主細胞のゲノムに組込むことができるものや、宿主細胞に導入されると、ポリヌクレオチドインサートの組込みを促進し、宿主ゲノムと共存して複製できるものもある（例えばレンチウイルスベクター）。更に、ベクターによっては、これらのベクターが機能的に連結されている遺伝子の発現を誘導することができる（これらのベクターを「発現ベクター」と言う場合もある）。関連する実施形態によると、更に当然のことながら、１つ以上の薬剤（例えば、本願に記載するＷＴ１ｐ３７に特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高い組換えＴＣＲ又はその結合ドメインをコードするポリヌクレオチド）を対象に共投与する場合には、各薬剤を別々のベクターに搭載してもよいし、同一のベクターに搭載してもよく、（各々異なる薬剤又は同一薬剤を搭載した）複数のベクターを細胞若しくは細胞集団に導入することができ、又は対象に投与することができる。
所定の実施形態では、本開示のＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＭＨＣに特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高い組換えＴＣＲ又はその結合ドメインをコードするポリヌクレオチドをベクターの所定の発現制御因子に機能的に連結することができる。例えば、コーディング配列にライゲーションされたときにその発現及びプロセシングを生じるために必要なポリヌクレオチド配列を機能的に連結することができる。発現制御配列としては、適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列；スプライシングシグナルやポリアデニル化シグナル等の効率的ＲＮＡプロセシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を上げる配列（即ち、コザックコンセンサス配列）；タンパク質安定性を強化する配列が挙げられ；更にタンパク質分泌を強化する配列も考えられる。発現制御配列がトランスに作用するように目的遺伝子と隣接して配置されている場合又は目的遺伝子を制御するように距離を空けて配置されている場合に、発現制御配列は機能的に連結されていると言える。所定の実施形態では、レンチウイルスベクター又はγ－レトロウイルスベクター又はアデノウイルスベクター等のウイルスベクターである発現ベクターに本開示のＴＣＲ又はその結合ドメインをコードするポリヌクレオチドを搭載する。
特定の実施形態では、適切な細胞、例えばＴ細胞又は抗原提示細胞、即ち、ペプチド／ＭＨＣ複合体をその細胞表面に提示し（例えば樹状細胞）、ＣＤ８を欠損する細胞に前記組換え発現ベクターを送達する。所定の実施形態において、前記宿主細胞は造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である。例えば、前記免疫系細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせとすることができ、組み合わせが存在する場合には、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。前記宿主がＴ細胞である所定の実施形態において、前記Ｔ細胞はナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせとすることができる。従って、前記組換え発現ベクターは更に、例えばＢリンパ球、Ｔリンパ球等のリンパ組織特異的転写調節因子（ＴＲＥ）、又は樹状細胞特異的ＴＲＥを含むことができる。リンパ組織特異的ＴＲＥは当技術分野で公知である（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２：１０４３，１９９２；Ｔｏｄｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７：１６６３，１９９３；Ｐｅｎｉｘ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７８：１４８３，１９９３参照）。
ベクターに加え、所定の実施形態は本願に開示する異種ポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞に関する。所定の実施形態において、前記宿主細胞は前記ポリヌクレオチドによりコードされるＴＣＲをその細胞表面に発現し、前記ポリヌクレオチドは宿主細胞に対して異種である。当業者に自明の通り、多数の適切な宿主細胞が当技術分野で入手可能である。宿主細胞としては、ベクターを導入すること又は核酸及び／若しくはタンパク質を取り込むことが可能な任意の個々の細胞又は細胞培養物と、任意の子孫細胞が挙げられる。この用語は更に、遺伝子型又は表現型が同一であるか又は異なるかに関係なく、宿主細胞の子孫も意味する。適切な宿主細胞はベクターにより異なり、哺乳動物細胞、動物細胞、ヒト細胞、サル細胞、昆虫細胞、酵母細胞及び細菌細胞が挙げられる。ウイルスベクターの使用、リン酸カルシウム沈殿法による形質転換、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション又は他の方法により、これらの細胞に前記ベクター又は他の材料を取り込ませることができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｄ ｅｄ．（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８９）参照。
所定の実施形態において、前記宿主細胞により発現されるＴＣＲのＶαドメインは、配列番号９７、９８及び１０１～１０７のポリヌクレオチドのいずれか１つに対して少なくとも７５％（例えば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％又は１００％）の配列同一性、又は配列番号９９若しくは１００に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。所定の実施形態において、前記Ｖαドメインは、（ａ）配列番号９７～１０７のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含むか、又は（ｂ）配列番号９７～１０７のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされる。
所定の実施形態において、前記宿主細胞のＶβドメインは、配列番号７５～７７、７９、８２、８４及び８５のポリヌクレオチドのいずれか１つに対して少なくとも７５％の配列同一性、又は配列番号７８、８０、８１及び８３のポリヌクレオチドのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。所定の実施形態において、前記Ｖβドメインは、（ａ）配列番号７５～８５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含むか、又は（ｂ）配列番号７５～８５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされる。
所定の実施形態において、前記ＴＣＲα鎖は、配列番号１１０に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるα鎖定常ドメインを含む。所定の実施形態において、前記ＴＣＲα鎖は、（ａ）配列番号１１０のポリヌクレオチド配列を含むか、又は（ｂ）配列番号１１０のポリヌクレオチド配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされるα鎖定常ドメインを含む。所定の実施形態において、前記ＴＣＲβ鎖は、配列番号１０８又は１０９に対して少なくとも９９．９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるβ鎖定常ドメインを含む。一部の実施形態において、前記ＴＣＲβ鎖は、（ａ）配列番号１０８若しくは１０９のポリヌクレオチド配列を含むか、又は（ｂ）配列番号１０８若しくは１０９のポリヌクレオチド配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされるβ鎖定常ドメインを含む。
一部の実施形態において、前記ポリヌクレオチドは、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド配列とＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド配列の間に配置された自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態において、前記コードされる自己切断ペプチドは、（ａ）配列番号６０～６３のポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を含む；又は（ｂ）配列番号６０～６３のポリペプチドのいずれか１つの配列から構成される。
一部の実施形態において、前記自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドは、（ａ）配列番号１６６～１７０のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含む；又は（ｂ）配列番号１６６～１７０のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成される。
一部の実施形態において、前記ＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、配列番号１５５～１６５のいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる。
一部の実施形態において、前記ＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、（ａ）配列番号１５５～１６５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含む；又は（ｂ）配列番号１５５～１６５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成されるポリヌクレオチドによりコードされる。
一部の実施形態において、前記コードされるＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つに対して少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．１％、９９．５％、９９，９％又は１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、前記コードされるＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖は、（ａ）配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を含む；又は（ｂ）配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列から構成される。
一部の実施形態において、宿主細胞は造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である。一部の実施形態において、前記免疫系細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせであり、任意に、前記組合せはＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞を含む。
一部の実施形態において、前記宿主免疫系細胞はＴ細胞である。一部の実施形態において、前記Ｔ細胞はナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせである。
所定の実施形態において、前記ＴＣＲは内在性ＴＣＲ（例えば、前記内在性ＴＣＲが人工的に発現を抑制又は阻害されていないとき）と比較してより高いＴ細胞上の表面発現を有する。
所定の実施形態において、前記宿主細胞は更に、（ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドがＣＤ８共受容体α鎖であるか若しくはこれを含む、前記異種ポリヌクレオチド；（ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドがＣＤ８共受容体β鎖であるか若しくはこれを含む、前記異種ポリヌクレオチド；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチドと（ｉｉ）のポリヌクレオチドを含み、任意に、前記宿主細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞を含む。
一部の実施形態において、前記宿主細胞は、（ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドと；（ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドと；（ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドの間に配置された自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。
本願に開示する実施形態のいずれかにおいて、前記宿主細胞（例えば、ヒトＴ細胞等の免疫細胞）は、（ｉ）乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８の腫瘍細胞；（ｉｉ）膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ－１の腫瘍細胞；（ｉｉｉ）乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１の腫瘍細胞；（ｉｖ）ＨＬＡ－Ａ２を発現する骨髄性白血病細胞株Ｋ５６２の腫瘍細胞であって、任意に、前記ＨＬＡ－Ａ２がＨＬＡ－Ａ＊２０１を含む、前記腫瘍細胞；（ｖ）ＨＬＡ－Ａ２を発現する大腸がん細胞株ＲＫＯの腫瘍細胞であって、任意に、前記ＨＬＡ－Ａ２がＨＬＡ－Ａ＊２０１を含む、前記腫瘍細胞；又は（ｖｉ）（ｉ）～（ｖ）の腫瘍細胞の任意の組み合わせと試料中に同時に存在するときに、前記腫瘍細胞を殺傷することが可能である。
特定の実施形態では、前記宿主細胞と前記腫瘍細胞が３２：１、１６：１、８：１、４：１、２：１又は１．５：１の宿主細胞：腫瘍細胞比で前記試料中に存在するときに、前記宿主細胞は前記腫瘍細胞を殺傷することが可能である。標的細胞の殺傷は、例えばＩｎｃｕｃｙｔｅ（Ｒ）バイオイメージングプラットフォーム（Ｅｓｓｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で判定することができる。所定の実施形態において、このプラットフォームはカスパーゼ活性化と腫瘍細胞標識（例えば、ＲａｐｉｄＲｅｄ又はＮｕｃＲｅｄ）シグナルを使用し、オーバーラップを測定し、オーバーラップ面積の増加をアポトーシスによる腫瘍細胞死とみなす。標的細胞をクロム（５１Ｃｒ）で標識し、本開示の結合タンパク質を発現する免疫細胞と共に４時間コインキュベーション後に上清中の５１Ｃｒを測定する４時間アッセイを使用して殺傷を測定することもできる。
上記実施形態のいずれかでは、免疫シグナル伝達又は他の関連活性に関与するポリペプチドをコードする１つ以上の内在性遺伝子の発現を低下又は停止させるように、宿主細胞（例えば免疫細胞）を改変してもよい。代表的な遺伝子ノックアウトとしては、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＦａｓＬ、ＨＬＡ分子、ＴＣＲ分子等をコードするものが挙げられる。理論に拘束する意図はないが、所定の内在的に発現される免疫細胞タンパク質は、改変型免疫細胞を取り込んだ同種宿主に外来と認識され得るため、改変型免疫細胞が排除されたり（例えばＨＬＡ対立遺伝子）、改変型免疫細胞の免疫活性がダウンレギュレートされたり（例えばＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＦａｓＬ、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ３）、本開示の異種発現結合タンパク質の結合活性が妨害されたりすると考えられる（例えば、改変型Ｔ細胞の内在性ＴＣＲは非Ｒａｓ抗原と結合し、改変型免疫細胞がＲａｓ抗原を発現する細胞と結合するのを妨害する）。
従って、このような内在性遺伝子又はタンパク質の発現又は活性を低下又は停止させると、自家又は同種宿主条件下で改変型細胞の活性、寛容性又はパーシスタンスを改善することができ、前記細胞を（例えば、ＨＬＡタイプに関係なくあらゆるレシピエントに）普遍的に投与することが可能になる。所定の実施形態において、改変型細胞はドナー細胞（例えば同種）又は自家細胞である。所定の実施形態において、本開示の宿主細胞は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＴＩＧＩＴ、ＦａｓＬ、ＨＬＡコンポーネント（例えば、α１マクログロブリン、α２マクログロブリン、α３マクログロブリン、β１ミクログロブリン又はβ２ミクログロブリンをコードする遺伝子）又はＴＣＲコンポーネント（例えば、ＴＣＲ可変領域又はＴＣＲ定常領域をコードする遺伝子）をコードする遺伝子の１つ以上の染色体遺伝子ノックアウトを含む（例えば、Ｔｏｒｉｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．６：２１７５７（２０１６）；Ｔｏｒｉｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１９（２４）：５６９７（２０１２）；及びＴｏｒｉｋａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １２２（８）：１３４１（２０１３）が参照され、その遺伝子編集技術、組成物、及び養子細胞療法の全てを本願に援用する）。
本願で使用する「染色体遺伝子ノックアウト」なる用語は、宿主細胞における遺伝子変異又は阻害剤導入により、機能的に活性な内在性ポリペプチド産物が宿主細胞により産生されるのを妨げる（例えば低下、遅延、抑制又は停止させる）ことを意味する。染色体遺伝子ノックアウトをもたらす変異としては、例えば、ナンセンス突然変異（未成熟終止コドンの形成を含む）、ミスセンス突然変異、遺伝子欠失及び鎖切断の導入と、宿主細胞における内在性遺伝子発現を抑制する抑制核酸分子の異種発現を挙げることができる。
所定の実施形態では、宿主細胞の染色体編集により染色体遺伝子ノックアウト又は遺伝子ノックインを行う。染色体編集は、例えばエンドヌクレアーゼを使用して実施することができる。本願で使用する「エンドヌクレアーゼ」とは、ポリヌクレオチド鎖内でホスホジエステル結合の切断を触媒することが可能な酵素を意味する。所定の実施形態において、エンドヌクレアーゼは標的遺伝子を切断することにより、この標的遺伝子を不活性化又は「ノックアウト」することができる。エンドヌクレアーゼは天然、組換え、遺伝子改変又は融合エンドヌクレアーゼとすることができる。エンドヌクレアーゼにより生じる核酸鎖切断は、通常では相同組換え又は非相同末端結合（ＮＨＥＪ）の個々のメカニズムにより修復される。相同組換えの過程では、ドナー遺伝子を「ノックイン」するため、標的遺伝子を「ノックアウト」するため、及び任意に、ドナー遺伝子ノックイン又は標的遺伝子ノックアウトイベントにより標的遺伝子を不活性化するために、ドナー核酸分子を使用することができる。ＮＨＥＪは、多くの場合には切断部位のＤＮＡ配列に変異、例えば少なくとも１塩基の置換、欠失又は付加をもたらすエラープローン修復プロセスである。ＮＨＥＪは標的遺伝子を「ノックアウト」するために使用することができる。エンドヌクレアーゼの例としては、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、ＴＡＬＥヌクレアーゼ、ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓヌクレアーゼ、メガヌクレアーゼ、及びメガＴＡＬが挙げられる。
本願で使用する「ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）」とは、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインをＦｏｋｌエンドヌクレアーゼ等の非特異的ＤＮＡ切断ドメインと融合させた融合タンパク質を意味する。約３０アミノ酸の各ジンクフィンガーモチーフが約３塩基対のＤＮＡと結合し、所定の残基のアミノ酸を変異させて３塩基配列特異性を変化させることができる（例えば、Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：２２５６－２２６０，１９９３；Ｗｏｌｆｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８５：１９１７－１９３４，１９９９参照）。約９～約１８塩基対長の領域等の所望のＤＮＡ配列に対する結合特異性を生じるためには、複数のジンクフィンガーモチーフをタンデムに連結することができる。バックグラウンドとして、ＺＦＮはゲノムにおける部位特異的ＤＮＡ２本鎖切断（ＤＳＢ）の形成を触媒することによりゲノム編集に介在し、ＤＳＢ部位のゲノムに相同のフランキング配列を含むトランスジーンの標的組込みが相同修復により助長される。あるいは、ＺＦＮによりＤＳＢが生じると、切断部位のヌクレオチドの挿入又は欠失をもたらすエラープローン細胞修復経路である非相同末端結合（ＮＨＥＪ）による修復により、標的遺伝子のノックアウトを引き起こすことができる。所定の実施形態において、遺伝子ノックアウトは、ＺＦＮ分子を使用して行われる挿入、欠失、突然変異又はその組み合わせを含む。
本願で使用する「転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）」とは、ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメインとＦｏｋＩエンドヌクレアーゼ等のＤＮＡ切断ドメインを含む融合タンパク質を意味する。「ＴＡＬＥ ＤＮＡ結合ドメイン」又は「ＴＡＬＥ」は、各々一般に１２番目と１３番目のアミノ酸が可変である以外は高度に保存された３３～３５アミノ酸配列を有する１以上のＴＡＬＥリピートドメイン／単位から構成される。ＴＡＬＥリピートドメインはＴＡＬＥと標的ＤＮＡ配列の結合に関与している。可変アミノ酸残基は反復可変二残基（Ｒｅｐｅａｔ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｉｒｅｓｉｄｕｅ）（ＲＶＤ）と呼ばれ、特異的ヌクレオチド認識に相関する。これらのＴＡＬＥのＤＮＡ認識の天然（カノニカル）コードは、ＴＡＬＥの１２位と１３位がＨＤ（ヒスチン－アスパラギン酸）配列であればＴＡＬＥはシトシン（Ｃ）と結合し、ＮＧ（アスパラギン－グリシン）であればＴヌクレオチドと結合し、ＮＩ（アスパラギン－イソロイシン）であればＡと結合し、ＮＮ（アスパラギン－アスパラギン）であればＧ又はＡヌクレオチドと結合し、ＮＧ（アスパラギン－グリシン）であればＴヌクレオチドと結合するように決定されている。非カノニカル（非定型）ＲＶＤも知られている（例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１１／０３０１０７３号が参照され、その非定型ＲＶＤの全てを本願に援用する）。ＴＡＬＥＮはＴ細胞のゲノムに部位特異的２本鎖切断（ＤＳＢ）を生じるために使用することができる。非相同末端結合（ＮＨＥＪ）では、アニールするための末端配列オーバーラップが殆ど又は全くない２本鎖切断の両側からＤＮＡを連結することにより、エラーを導入し、遺伝子発現をノックアウトする。あるいは、トランスジーンに相同フランキング配列が存在する場合には、相同修復によりＤＳＢの部位にトランスジーンを導入することができる。所定の実施形態において、遺伝子ノックアウトは挿入、欠失、突然変異又はその組み合わせを含み、ＴＡＬＥＮ分子を使用して実施される。
本願で使用する「短いパリンドローム様リピートが一定間隔で繰り返し存在する領域（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）／Ｃａｓ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ）」ヌクレアーゼシステムとは、ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）にガイドされるＣａｓヌクレアーゼを利用し、塩基対合相補性によりゲノム内の標的部位（プロトスペーサーと言う）を認識した後、相補的標的配列の３’の直後に短い保存されたプロトスペーサー関連モチーフ（ＰＡＭ）が存在する場合にはＤＮＡを切断するシステムを意味する。ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓシステムはＣａｓヌクレアーゼの配列と構造に基づいて３種類のタイプ（即ち、Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型）に分類される。Ｉ型とＩＩＩ型でｃｒＲＮＡにガイドされる監視複合体は複数のＣａｓサブユニットを必要とする。ＩＩ型システムは最も研究が進んでおり、ＲＮＡにガイドされるＣａｓ９ヌクレアーゼと、ｃｒＲＮＡと、トランス作用性ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）の少なくとも３コンポーネントを含む。ｔｒａｃｒＲＮＡは２本鎖形成領域を含む。ｃｒＲＮＡとｔｒａｃｒＲＮＡは２本鎖を形成し、Ｃａｓ９ヌクレアーゼと相互作用し、ｃｒＲＮＡ上のスペーサーとＰＡＭの上流の標的ＤＮＡ上のプロトスペーサーとのワトソン・クリック型塩基対合により標的ＤＮＡ上の特定部位にＣａｓ９／ｃｒＲＮＡ：ｔｒａｃｒＲＮＡ複合体を導くことができる。Ｃａｓ９ヌクレアーゼはｃｒＲＮＡスペーサーにより規定される領域内の２本鎖切断部位を切断する。ＮＨＥＪにより修復されると、挿入及び／又は欠失を生じ、標的遺伝子座の発現が停止する。あるいは、相同フランキング配列を含むトランスジーンを相同修復によりＤＳＢの部位に導入することができる。ｃｒＲＮＡとｔｒａｃｒＲＮＡを複合体化してシングルガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ又はｇＲＮＡ）を構築することができる（例えば、Ｊｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６－２１，２０１２参照）。更に、所望の配列を標的とするように、標的部位に相補的なガイドＲＮＡの領域を改変又はプログラムすることができる（各々本願に援用するＸｉｅ ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ９：ｅ１００４４８，２０１４；米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／００６８７９７号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０１８６８４３号、米国特許第８，６９７，３５９号、及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／０７１４７４号）。所定の実施形態において、遺伝子ノックアウトは挿入、欠失、突然変異又はその組み合わせを含み、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムを使用して実施される。代表的なｇＲＮＡ配列と、免疫細胞タンパク質をコードする内在性遺伝子をノックアウトするためのその使用方法としては、Ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２３（９）：２２５５－２２６６（２０１７）に記載されているものが挙げられ、そのｇＲＮＡ、ＣＡＳ９ ＤＮＡ、ベクター及び遺伝子ノックアウト技術の全てを本願に援用する。
本願で使用する「メガヌクレアーゼ」は、「ホーミングエンドヌクレアーゼ」とも言い、大きな認識部位（約１２～約４０塩基対の２本鎖ＤＮＡ配列）を特徴とするエンドデオキシリボヌクレアーゼを意味する。メガヌクレアーゼは配列と構造モチーフに基づき、ＬＡＧＬＩＤＡＤＧ、ＧＩＹ－ＹＩＧ、ＨＮＨ、Ｈｉｓ－Ｃｙｓボックス及びＰＤ－（Ｄ／Ｅ）ＸＫの５種類のファミリーに分類することができる。代表的なメガヌクレアーゼとしては、Ｉ－ＳｃｅＩ、Ｉ－ＣｅｕＩ、ＰＩ－ＰｓｐＩ、ＰＩ－Ｓｃｅ、Ｉ－ＳｃｅＩＶ、Ｉ－ＣｓｍＩ、Ｉ－ＰａｎＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩ、Ｉ－ＰｐｏＩ、Ｉ－ＳｃｅＩＩＩ、Ｉ－ＣｒｅＩ、Ｉ－ＴｅｖＩ、Ｉ－ＴｅｖＩＩ及びＩ－ＴｅｖＩＩＩが挙げられ、その認識配列は公知である（例えば、米国特許第５，４２０，０３２号及び６，８３３，２５２号；Ｂｅｌｆｏｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３７９－３３８８，１９９７；Ｄｕｊｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ８２：１１５－１１８，１９８９；Ｐｅｒｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：１１２５－１１２７，１９９４；Ｊａｓｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１２：２２４－２２８，１９９６；Ｇｉｍｂｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：１６３－１８０，１９９６；Ａｒｇａｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８０：３４５－３５３，１９９８参照）。
所定の実施形態では、ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＦａｓＬ、ＨＬＡをコードする遺伝子又はＴＣＲコンポーネントをコードする遺伝子から選択される標的の部位特異的ゲノム修飾を促進するために、天然メガヌクレアーゼを使用することができる。他の実施形態では、標的遺伝子に対する新規結合特異性を有する人工メガヌクレアーゼを部位特異的ゲノム修飾に使用する（例えば、Ｐｏｒｔｅｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：９６７－７３，２００５；Ｓｕｓｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４２：３１－４１，２００４；Ｅｐｉｎａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１：２９５２－６２，２００３；Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ １０：８９５－９０５，２００２；Ａｓｈｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４４１：６５６－６５９，２００６；Ｐａｑｕｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：４９－６６，２００７；米国特許公開第ＵＳ２００７／０１１７１２８号、ＵＳ２００６／０２０６９４９号、ＵＳ２００６／０１５３８２６号、ＵＳ２００６／００７８５５２号及びＵＳ２００４／０００２０９２号参照）。他の実施形態では、ホーミングエンドヌクレアーゼをＴＡＬＥＮのモジュラーＤＮＡ結合ドメインで修飾して作製したメガＴＡＬと呼ばれる融合タンパク質を使用して染色体遺伝子ノックアウトを生じる。メガＴＡＬは、１個以上の標的遺伝子をノックアウトするためだけでなく、目的ポリペプチドをコードする外来ドナーテンプレートと併用する場合には異種又は外来ポリヌクレオチドを導入（ノックイン）するためにも利用できる。
所定の実施形態において、染色体遺伝子ノックアウトは、腫瘍関連抗原と特異的に結合する抗原特異的受容体をコードする異種ポリヌクレオチドを含む宿主細胞（例えば免疫細胞）に導入される阻害核酸分子を含み、前記阻害核酸分子は標的特異的阻害剤をコードし、前記コードされる標的特異的阻害剤は、宿主細胞における（例えば、ＰＤ－１、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＦａｓＬ、ＨＬＡコンポーネント若しくはＴＣＲコンポーネント又は任意のその組み合わせの）内在性遺伝子発現を阻害する。
染色体遺伝子ノックアウトは、ノックアウト法又はノックアウト剤の使用後に宿主免疫細胞のＤＮＡシーケンシングにより直接確認することができる。ノックアウト後の遺伝子発現の不在（例えば、ｍＲＮＡ又はこの遺伝子によりコードされるポリペプチド産物の不在）から染色体遺伝子ノックアウトを推定することもできる。
所定の実施形態において、染色体遺伝子ノックアウトは、α１マクログロブリン遺伝子、α２マクログロブリン遺伝子、α３マクログロブリン遺伝子、β１ミクログロブリン遺伝子又はβ２ミクログロブリン遺伝子から選択されるＨＬＡコンポーネント遺伝子のノックアウトを含む。
所定の実施形態において、染色体遺伝子ノックアウトは、ＴＣＲα可変領域遺伝子、ＴＣＲβ可変領域遺伝子、ＴＣＲ定常領域遺伝子又はその組み合わせから選択されるＴＣＲコンポーネント遺伝子のノックアウトを含む。
更に、当然のことながら、本開示のＴＣＲをコードするポリヌクレオチド及び／又はＣＤ８共受容体をコードするポリヌクレオチドを宿主細胞ゲノムに導入するために、本願に開示する遺伝子編集技術及びツールのいずれかを使用してもよい。
別の態様において、本願では、本開示の改変型宿主細胞と、薬学的に許容される基剤、希釈剤又は賦形剤を含有する組成物及びユニットドーズ製剤が提供される。
所定の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％の改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記ユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである（即ち、同等数のＰＢＭＣを有する患者試料と比較して１ユニットドーズ中に存在するナイーブＴ細胞集団が約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１０％未満、約５％未満又は約１％未満である）。
一部の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約５０％の改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約５０％の改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである。他の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約６０％の改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約６０％の改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記ユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである。更に他の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約７０％の人工ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約７０％の人工ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記ユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである。一部の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約８０％の改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約８０％の改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである。一部の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約８５％の改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約８５％の改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである。一部の実施形態において、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、（ｉ）少なくとも約９０％の改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞を含有する組成物と、（ｉｉ）少なくとも約９０％の改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する組成物を約１：１の比で含有しており、前記宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤はナイーブＴ細胞の含有量が低いか又は実質的にゼロである。
当然のことながら、本開示の宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は本願に記載するいずれかの宿主細胞又は宿主細胞の任意の組み合わせを含有することができる。所定の実施形態において、例えば、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、Ｒａｓペプチド：ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１複合体に特異的な結合タンパク質をコードするように改変された改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞、改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞又はその両方を含有しており、更に、ＷＴ１ペプチド：ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１複合体に特異的な結合タンパク質をコードするように改変された改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞、改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞又はその両方を含有している。上記に追加又は代替する構成として、本開示の宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、本願に記載するいずれかの宿主細胞又は宿主細胞の組み合わせを含有することができ、更に、別の抗原（例えば、別のＷＴ１抗原、又は例えばＢＣＭＡ、ＣＤ３、ＣＥＡＣＡＭ６、ｃ－Ｍｅｔ、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＥｐｈＡ２、ＩＧＦ１Ｒ、ＧＤ２、Ｏ－アセチルＧＤ２、Ｏ－アセチルＧＤ３、ＧＨＲＨＲ、ＧＨＲ、ＦＬＴ１、ＫＤＲ、ＦＬＴ４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ１５１、ＣＡ１２５、ＣＥＡ、ＣＴＬＡ－４、ＧＩＴＲ、ＢＴＬＡ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ１、ＩＬ６Ｒ、ｇｐ１３０、ルイスＡ、ルイスＹ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＨＶＥＭ、ＭＡＧＥ－Ａ（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＭＡＧＥ－Ａ４）、メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＳＭＡ、ＲＡＮＫ、ＲＯＲ１、ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＴＷＥＡＫ－Ｒ、ＨＬＡ、ＨＬＡと結合した腫瘍若しくは病原体関連ペプチド、ＨＬＡと結合したｈＴＥＲＴペプチド、ＨＬＡと結合したチロシナーゼペプチド、ＨＬＡと結合したＷＴ－１ペプチド、ＬＴβＲ、ＬＩＦＲβ、ＬＲＰ５、ＭＵＣ１、ＯＳＭＲβ、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８６、ＣＤ１２３、ＣＤ１７１、ＣＤ２７６、Ｂ７Ｈ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＰＴＣＨ１、ＷＴ－１、ＨＡ１－Ｈ、Ｒｏｂｏ１、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、フリズルド、ＯＸ４０、ＰＲＡＭＥ及びＳＳＸ－２等の別のタンパク質若しくは標的に由来する抗原）に特異的な結合タンパク質を発現する改変型細胞（例えば、Ｔ細胞等の免疫細胞）を含有することができる。例えば、ユニットドーズ製剤は、ＷＴ１－ＨＬＡ複合体と特異的に結合する結合タンパク質を発現する改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞と、ＨＥＲ２抗原と特異的に結合する結合タンパク質（例えばＣＡＲ）を発現する改変型ＣＤ４＋Ｔ細胞（及び／又は改変型ＣＤ８＋Ｔ細胞）を含有することができる。同様に当然のことながら、本願に開示する宿主細胞のいずれかを併用療法で投与してもよい。
本願に記載する実施形態のいずれかにおいて、宿主細胞組成物又はユニットドーズ製剤は、等量又はほぼ等量の人工ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞と改変型ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＴＭ細胞を含有する。
使用及び治療方法
所定の態様において、本開示は、治療を必要とするヒト対象に、本願に記載する上記ＴＣＲのいずれか若しくはいずれかの結合ドメインに係るヒトＷＴ１に特異的な親和性の高い若しくは機能的アビディティの高い組換えＴＣＲ若しくはその結合ドメインを含有する組成物、又は上記ＴＣＲを発現するように構築されたＴ細胞等の宿主細胞、又は本願に記載するＴＣＲ若しくはその結合ドメイン若しくは宿主細胞のいずれかを含有する組成物を投与することにより、過剰増殖性若しくは増殖性障害又はウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）発現若しくは過剰発現を特徴とする病態を治療する方法に関する。一部の実施形態において、前記ＴＣＲは、造血前駆細胞やヒト免疫系細胞等の宿主細胞により発現される。一部の実施形態において、前記免疫系細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせである。
対象における過剰増殖性障害若しくは増殖性障害又は悪性腫瘍病態の存在とは、異形成細胞、がん性細胞及び／又は形質転換細胞が前記対象に存在することを意味し、例えば新生物細胞、腫瘍細胞、非接触阻害細胞又は発がん性形質転換細胞等（例えば、固形がん；リンパ腫や、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病等の白血病を含む造血器がん）が挙げられ、これらの細胞は当技術分野で公知であり、その診断・分類基準も確立されている（例えば、Ｈａｎａｈａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｃｅｌｌ １４４：６４６，２０１１；Ｈａｎａｈａｎ ａｎｄ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｃｅｌｌ １００：５７，２０００；Ｃａｖａｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６０：３１９，２０１１；Ｋｙｒｉｇｉｄｅｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．９：３，２０１０）。所定の実施形態において、このようながん細胞は、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞性リンパ芽球性白血病又は骨髄腫の細胞とすることができ、これらの種類のがんのいずれかを発症させ、逐次移植することが可能ながん幹細胞を含む（例えば、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｔｈｅｒａｐ．１７：２１９，２００９参照）。
所定の実施形態では、造血器悪性腫瘍や固形がん等の過剰増殖性又は増殖性障害の治療方法が提供される（例えば、Ｎａｋａｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｄｅｒｎ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ １９：８０４－７１４（２００６）参照）。代表的な造血器悪性腫瘍としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（ＭＭ）が挙げられる。
他の実施形態では、胆道がん、膀胱がん、骨及び軟部組織癌腫、脳腫瘍、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、大腸腺癌、大腸がん、デスモイド腫瘍、胎児性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮がん、肝臓がん、肺がん、中皮腫、悪性黒色腫、骨肉腫、卵巣がん（例えば、Ｈｙｌａｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １０１：１２－１７（２００６）参照）、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星細胞系腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞がん、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫又は子宮がんから選択される固形がん等の過剰増殖性又は増殖性障害の治療方法が提供される。
一部の実施形態において、前記ＴＣＲは、ヒトＷＴ１に対する抗原特異的Ｔ細胞応答をクラスＩＨＬＡ拘束的に促進することが可能である。一部の実施形態において、前記クラスＩＨＬＡ拘束性応答は、抗原処理関連トランスポーター（ＴＡＰ）に非依存的である。一部の実施形態において、前記抗原特異的Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球（Ｔｈ）応答と、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答の少なくとも一方を含む。一部の実施形態において、前記ＣＴＬ応答はＷＴ１を過剰発現する細胞に特異的である。
ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）発現又は過剰発現に関連する増殖性又は過剰増殖性障害の治療方法で使用するための、前記ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、組成物、ベクター及び宿主細胞（任意の組み合わせを含む）のいずれかも本願で提供される。
ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）発現又は過剰発現に関連する増殖性又は過剰増殖性障害の治療用医薬の製造方法で使用するための、前記ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、組成物、ベクター及び宿主細胞のいずれか（任意の組み合わせを含む）も本願で提供される。
医療分野の当業者に自明の通り、「治療する」及び「治療」なる用語は、対象（即ち、ヒト又は非ヒト動物とすることができる患者、宿主）の疾患、障害又は病態の医学的管理を意味する（例えば、Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ参照）。一般に、適切な用量と治療レジメンは、治療又は予防効果を提供するために十分な量で、ヒトＷＴ１に特異的な機能的アビディティの高い組換えＴＣＲ若しくはその結合ドメイン（例えば、本願で提供する配列番号２３～５８とその変異体）又は前記ＴＣＲ等を発現する宿主細胞の１つ以上と、任意にアジュバント療法（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又は任意のその組み合わせ等のサイトカイン）を提供する。治療処置又は予防若しくは防御法により得られる治療又は予防効果としては、例えば臨床転帰の改善が挙げられ、その目的は、望ましくない生理的変化若しくは障害を予防若しくは遅延若しくは他の方法で抑制すること（例えば、未処置対照と比較して統計的に有意に減少させること）、又はこのような疾患若しくは障害の拡大若しくは重症化を予防、遅延若しくは他の方法で抑制することである。対象を処置することにより得られる有益又は望ましい臨床結果としては、処置対象となる疾患又は障害に起因又は関連する症状の抑制、軽減又は緩和；症状の発生低減；クオリティオブライフの改善；無病状態の延長（即ち、対象が疾患の診断の基準となる症状を発現する確率又は傾向の低下）；疾患の程度の低減；疾患状態の安定化（即ち非悪化）；疾患進行の遅延又は減速；疾患状態の改善又は緩和；及び検出可能であるか検出不能であるかを問わず（部分寛解か完全寛解かを問わず）寛解、又は全生存期間の延長が挙げられる。
「治療」とは、対象が治療を受けていなかった場合に予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを意味する場合もある。本願に記載の方法及び組成物を必要とする対象としては、既に疾患又は障害に罹患している対象に加え、疾患又は障害を発症する傾向又は危険のある対象も挙げられる。予防処置を必要とする対象としては、疾患、病態又は障害を予防すべき対象が挙げられる（即ち、疾患又は障害の発生又は再発の確率を低下させる）。本願に記載する組成物（及び前記組成物を含有する製剤）及び方法により提供される臨床効果は、実施例に記載するように、前記組成物の投与の恩恵を得ようとする対象におけるインビトロアッセイ、前臨床試験及び臨床実験の設計及び実施により評価することができる。
別の態様において、本開示は、治療を必要とするヒト対象に、上記コードされるＴＣＲのいずれか若しくはその結合ドメインに係るヒトＷＴ１に特異的な親和性の高い若しくは機能的アビディティの高い組換えＴＣＲ若しくはその結合ドメインをコードする単離型ポリヌクレオチドを含有する組成物、又は前記ポリヌクレオチドを含むＴ細胞等の宿主細胞、又は本願に記載するＴＣＲ若しくはその結合ドメイン若しくは宿主細胞のいずれかを含有する組成物を投与することにより、過剰増殖性障害若しくは増殖性障害又はウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）過剰発現若しくは発現を特徴とする病態を治療する方法に関する。所定の実施形態において、ヒトＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＭＨＣに特異的なＴＣＲ又はその結合ドメインをコードするポリヌクレオチドは、目的宿主細胞に合わせてコドン最適化されている。他の実施形態において、上記ポリヌクレオチドのいずれかは発現制御配列と機能的に連結されており、任意にウイルスベクター等の発現ベクターに搭載されている。代表的なウイルスベクターとしては、レンチウイルスベクターとγ－レトロウイルスベクターが挙げられる。関連する実施形態において、前記ベクターは、前記ポリヌクレオチドを造血前駆細胞又は免疫系細胞（例えば、ヒト造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞）等の宿主細胞に送達することが可能である。代表的な免疫系細胞としては、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせ（例えばヒト由来）が挙げられる。所定の実施形態において、前記免疫系細胞は、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせ等のＴ細胞であり、任意にその全てがヒト由来である。
更に別の態様において、本開示は、治療を必要とするヒト対象に、上記実施形態のいずれか又は本願に記載のいずれかに係る異種ポリヌクレオチド又は発現ベクターを含む宿主細胞を有効量投与することにより、過剰増殖性若しくは増殖性障害又はウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）発現若しくは過剰発現を特徴とする病態を治療する方法に関し、前記人工又は組換え宿主細胞は、ヒトＷＴ１ｐ３７：ＭＨＣに特異的な異種ポリヌクレオチドによりコードされるＴＣＲをその細胞表面に発現する。所定の実施形態において、本開示は、治療を必要とするヒト対象に、上記実施形態のいずれか又は本願に記載のいずれかに係る異種ポリヌクレオチド又は発現ベクターを含む宿主細胞を有効量投与することにより、過剰増殖性若しくは増殖性障害又はウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）ｐ３７ペプチド産生若しくはＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＭＨＣ複合体の存在を特徴とする病態を治療する方法に関し、前記人工又は組換え宿主細胞は、ヒトＷＴ１ｐ３７：ＭＨＣに特異的な異種ポリヌクレオチドによりコードされるＴＣＲをその細胞表面に発現する。
過剰増殖性又は増殖性障害をもつ対象の細胞におけるＷＴ１過剰発現を特徴とする病態を治療するための養子免疫療法であって、有効量の本開示の宿主細胞又は組成物を前記対象に投与することを含む方法も提供する。
一部の実施形態において、前記宿主細胞はエクスビボで改変されている。一部の実施形態において、前記宿主細胞は前記対象に対して同種細胞、同系細胞又は自家細胞である。一部の実施形態において、前記宿主細胞は造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である。一部の実施形態において、前記免疫系細胞はＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせである。
一部の実施形態において、前記Ｔ細胞はナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせである。
一部の実施形態において、前記過剰増殖性又は増殖性障害は造血器悪性腫瘍又は固形がんである。
一部の実施形態において、前記造血器悪性腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される。
一部の実施形態において、前記固形がんは、乳がん、卵巣がん、肺がん、胆道がん、膀胱がん、骨及び軟部組織癌腫、脳腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、大腸腺癌、大腸がん、デスモイド腫瘍、胎児性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮がん、肝臓がん、中皮腫、悪性黒色腫、骨肉腫、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星細胞系腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞がん、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫又は子宮がんから選択される。
一部の実施形態では、前記宿主細胞を非経口投与する。
一部の実施形態において、前記方法は、複数の用量の前記宿主細胞を前記対象に投与することを含む。一部の実施形態では、約２～約４週間の投与間隔で前記複数の用量を投与する。
本願に記載するヒトＷＴ１ｐ３７ペプチドに特異的な（例えば、親和性の高い又は機能的アビディティの高い）組換えＴＣＲ又はその結合ドメインを発現する細胞を、薬学的又は生理的に許容されるか又は適切な賦形剤又は基剤に配合して対象に投与することができる。薬学的に許容される賦形剤は、ヒト又は他の非ヒト哺乳動物対象に投与するのに適した生体適合性溶媒、例えば生理食塩水であり、本願に詳細に記載する。
治療有効量とは、養子移入で使用される（ヒトＷＴ１ｐ３７ペプチド：ＭＨＣに特異的な親和性の高い又は機能的アビディティの高い組換えＴＣＲ又はその結合ドメインを発現する）宿主細胞の量であり、投与後のヒト又は非ヒト哺乳動物に臨床的に望ましい結果を生じることが可能な量（即ち、ＷＴ１を過剰発現する細胞又はＷＴ１ｐ３７ペプチドを産生する細胞に対して特異的なＴ細胞免疫応答（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞応答）を統計的に有意に誘導又は強化するために十分な量）である。医療分野で周知の通り、任意の患者１人の投与量は、患者の体格、体重、体表面積、年齢、投与する特定の療法、性別、投与時間及び経路、一般健康状態、並びに並行して投与される他の薬剤等の多数の因子により異なる。用量は変動するが、本願に記載する組換え発現ベクターを含む宿主細胞の投与に好ましい用量は、細胞約１０４個／ｍ２、約５×１０４個／ｍ２、約１０５個／ｍ２、約５×１０５個／ｍ２、約１０６個／ｍ２、約５×１０６個／ｍ２、約１０７個／ｍ２、約５×１０７個／ｍ２、約１０８個／ｍ２、約５×１０８個／ｍ２、約１０９個／ｍ２、約５×１０９個／ｍ２、約１０１０個／ｍ２、約５×１０１０個／ｍ２又は約１０１１個／ｍ２である。一部の実施形態において、用量は細胞約１０７個／ｍ２、約５×１０７個／ｍ２、約１０８個／ｍ２、約５×１０８個／ｍ２、約１０９個／ｍ２、約５×１０９個／ｍ２、約１０１０個／ｍ２、約５×１０１０個／ｍ２又は約１０１１個／ｍ２を含む。
医薬組成物は、医療分野の当業者による判断に基づき、治療（又は予防）しようとする疾患又は病態に適切となるように投与することができる。組成物の適切な用量と適切な投与期間及び頻度は、患者の健康状態、患者の体格（即ち、体重、体質量指数又は体表面積）、患者の疾患の種類と重症度、活性成分の特定の形態、及び投与方法等の因子により決定されよう。一般に、適切な用量と治療レジメンは、治療及び／又は予防効果（本願に記載するような効果であり、完全若しくは部分寛解の頻度上昇、又は無病状態及び／若しくは全生存期間の延長等の臨床転帰の改善や、症状重症度の低下が挙げられる）を生じるために十分な量の前記組成物を提供する。予防用途では、疾患又は障害を予防、発症遅延又は関連する疾患の重症度を低下させるために十分な用量とすべきである。本願に記載する方法に従って投与される免疫原性組成物の予防効果は、（インビトロ及びインビボ動物試験を含む）前臨床及び臨床試験を実施し、得られたデータを適切な統計的、生物学的及び臨床的方法及び技術により解析することにより判定することができ、このような方法及び技術はいずれも当業者が容易に実施可能である。
ＷＴ１過剰発現（又は、実施形態によっては発現）に関連する病態としては、ＷＴ１細胞又は分子イベントの活性不良、活性過剰又は不適切な活性が存在する任意の障害又は病態が挙げられ、一般的には、正常細胞と比較して疾患細胞（例えば白血病細胞）における（統計的に有意な）異常に高レベルのＷＴ１発現に起因する。このような障害又は疾患をもつ対象は、本願に記載する実施形態の組成物又は方法による治療の恩恵を受けるであろう。従って、ＷＴ１過剰発現に関連する病態としては、前記対象が特定の障害に罹患し易くなる原因となる病態等の急性及び慢性障害及び疾患が挙げられる。
ＷＴ１過剰発現に関連する病態の例としては、過剰増殖性障害が挙げられ、一部の態様では対象において細胞が活性化及び／又は増殖している状態（転写活性が過剰な状態でもよい）を意味し、腫瘍、新生物、がん、悪性腫瘍等が挙げられる。細胞活性化又は増殖に加え、過剰増殖性障害としては、ネクローシスによるかアポトーシスによるかを問わず、細胞死プロセスの異常又は調節異常も挙げられる。このような細胞死プロセスの異常は、（原発性、続発性悪性腫瘍及び転移を含む）がんや他の病態を含む種々の病態に関連すると思われる。
所定の実施形態によると、本願に開示する組成物と方法の使用により、造血器がん（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む白血病、Ｔ又はＢ細胞リンパ腫、骨髄腫等）を含めてＷＴ１過剰発現を特徴とするほぼ全種類のがんを治療することができる。更に、「がん」とは、細胞のあらゆる増殖加速を意味する場合もあり、固形腫瘍、腹水腫瘍、血液若しくはリンパ若しくは他の悪性腫瘍；結合組織悪性腫瘍；転移性疾患；臓器若しくは幹細胞移植後の微小残存病変；多剤耐性がん、原発性若しくは続発性悪性腫瘍、悪性腫瘍に関連する血管新生、又は他の形態のがんが挙げられる。本願に開示する実施形態には、上記種類の疾患の１つのみを含む特定の実施形態も含まれ、また、ＷＴ１過剰発現を特徴とするか否かに関係なく、特定病態を除外してもよい特定の実施形態も含まれる。
本願で想定される所定の治療又は予防方法としては、（自家、同種又は同系とすることができる）宿主細胞の染色体に本願に記載するような目的核酸分子を安定的に組み込み、この宿主細胞を投与する方法が挙げられる。例えば、目的とするＷＴ１標的Ｔ細胞組成物を養子免疫療法として対象に投与するために、自家、同種又は同系免疫系細胞（例えばＴ細胞、抗原提示細胞、ナチュラルキラー細胞）を使用してこのような細胞組成物をエクスビボで生産することができる。
一部の態様において本願で使用する組成物又は療法の投与とは、送達経路又は方式に関係なく、前記組成物又は療法を対象に送達することを意味する。投与は連続的又は間欠的で非経口的に実施することができる。投与は、規定の病態、疾患又は疾患状態をもつことが既に確認されている対象を治療するために実施してもよいし、このような病態、疾患又は疾患状態を発症する可能性又は危険のある対象を治療するために実施してもよい。アジュバント療法との併用投与としては、複数の薬剤を任意の投与スケジュールに従って任意の順序で同時及び／又は逐次送達する方法が挙げられる（例えば、１つ以上のサイトカイン；カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ又は任意のその組み合わせ等の免疫抑制療法と、ＷＴ１特異的改変型（即ち、組換え又は人工）宿主細胞を併用する）。例えば、免疫チェックポイント分子の阻害剤又はモジュレーター（例えば抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１又は抗ＣＴＬＡ－４抗体；例えばＰａｒｄｏｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２，２０１２；Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｍｅｌｌｍａｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９：１，２０１３参照）等の免疫抑制成分の特定の阻害剤又はモジュレーターと、本開示の療法を併用することができる。
一部の実施形態では、前記宿主細胞を約１０７個／ｍ２～約１０１１個／ｍ２の用量で前記対象に投与する。一部の実施形態において、前記方法は更にサイトカインを投与することを含む。一部の実施形態において、前記サイトカインはＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又は任意のその組み合わせである。一部の実施形態において、前記サイトカインはＩＬ－２であり、前記宿主細胞と同時又は逐次投与される。一部の実施形態では、サイトカイン投与前に前記対象に前記宿主細胞を少なくとも３回又は４回投与するという条件で、前記サイトカインを逐次投与する。
一部の実施形態において、前記サイトカインはＩＬ－２であり、皮下投与される。
一部の実施形態において、前記対象は更に免疫抑制療法を実施中である。
一部の実施形態において、前記免疫抑制療法は、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ、又は任意のその組み合わせから選択される。
一部の実施形態において、前記対象は非骨髄破壊的又は骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがある。
一部の実施形態では、非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも３か月後に前記対象に前記宿主細胞を投与する。
一部の実施形態では、骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２か月後に前記対象に前記宿主細胞を投与する。ＨＣＴを実施するための技術及びレジメンは当技術分野で公知であり、臍帯血、骨髄若しくは末梢血に由来する細胞、造血幹細胞、動員幹細胞又は羊水に由来する細胞等の任意の適切なドナー細胞の移植を含むことができる。従って、所定の実施形態では、改変型ＨＣＴ療法で造血幹細胞と同時又はその直後に本開示の改変型免疫細胞を投与することができる。一部の実施形態において、前記ＨＣＴは、ＨＬＡコンポーネントをコードする遺伝子の染色体ノックアウト、ＴＣＲコンポーネントをコードする遺伝子の染色体ノックアウト、又はその両方を含むドナー造血細胞を含む。
他の実施形態において、前記対象は前記組成物又はＨＣＴを投与される前にリンパ球除去化学療法を受けたことがある。所定の実施形態において、リンパ球除去化学療法は、シクロホスファミド、フルダラビン、抗胸腺細胞グロブリン又はその組み合わせを含むコンディショニングレジメンを含む。
所定の実施形態では、本願に記載の組換え宿主細胞を前記対象に複数回投与し、約２～約４週間の投与間隔で投与することができる。他の実施形態では、サイトカイン投与前に前記対象に前記宿主細胞を少なくとも３回又は４回投与するという条件で、サイトカインを逐次投与する。所定の実施形態では、前記サイトカインを皮下投与する（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）。
更に他の実施形態において、前記治療対象は更に、ＰＤ－１に特異的な抗体（例えばピジリズマブ、ニボルマブ又はペムブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１に特異的な抗体（例えばＭＤＸ－１１０５、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ又はＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＣＴＬＡ４に特異的な抗体（例えばトレメリムマブ又はイピリムマブ）、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ又は任意のその組み合わせ等の免疫抑制療法を実施中である。更に他の実施形態において、前記治療対象は非骨髄破壊的又は骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがあり、非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２か月～少なくとも３か月後に前記宿主細胞を投与することができる。
一部の態様における治療組成物又は医薬組成物の有効量とは、本願に記載するように、必要な投与量と投与期間で所望の臨床結果又は有益な治療を達成するために十分な量を意味する。１回以上の投与で有効量を送達することができる。疾患又は疾患状態を有することが既に認識又は確認されている対象に投与する場合には、治療に関連して「治療量」なる用語を使用することができ、疾患又は疾患状態を発症（例えば再発）する可能性又は危険のある対象に予防クールとして有効量を投与することを表すためには、「予防有効量」を使用することができる。
細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）免疫応答レベルは、当技術分野で日常的に実施されている本願に記載する多数の免疫学的方法のいずれか１つにより測定することができる。ＣＴＬ免疫応答レベルは、例えばＴ細胞により発現される本願に記載のＷＴ１特異的ＴＣＲのいずれか１つの投与前後に測定することができる。ＣＴＬ活性を測定するための細胞傷害性アッセイは、当技術分野で日常的に実施されている数種の技術及び方法のいずれか１つを使用して実施することができる（例えば、Ｈｅｎｋａｒｔ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ－Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ” ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ（ｅｄ．）（２００３ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ），１１２７～５０頁とその引用文献参照）。
抗原特異的Ｔ細胞応答は、観測されるＴ細胞応答を本願に記載するＴ細胞機能パラメータ（例えば、増殖、サイトカイン放出、ＣＴＬ活性、細胞表面マーカー表現型の変化等）のいずれかに従って比較することにより一般に測定され、このような比較は、適切な状況におけるコグネイト抗原（例えば、免疫適合性抗原提示細胞により提示されるときにＴ細胞をプライミング又は活性化させるために使用される抗原）に曝露されるＴ細胞と、構造的に異なるか又は無関係の対照抗原に曝露される同一起源の集団に由来するＴ細胞の間で行うことができる。コグネイト抗原に対する応答が対照抗原に対する応答よりも統計的に有意に大きいならば、抗原特異的であると判断される。
本願に記載するＷＴ１由来抗原ペプチドに対する免疫応答の存在及びレベルを測定するために、対象から生体試料を取得することができる。本願で使用する「生体試料」は、（血清又は血漿を調製することができる）血液試料、生検検体、体液（例えば、肺洗浄液、腹水、粘膜洗浄液、滑液）、骨髄、リンパ節、組織外植片、臓器培養液、又は前記対象若しくは生体原料に由来する任意の他の組織若しくは細胞調製物とすることができる。免疫原性組成物の投与前に対象から生体試料を取得することもでき、このような生体試料はベースライン（即ち免疫前）データを設定するための対照として有用である。
本願に記載する医薬組成物は、密閉アンプル又はバイアル等のユニットドーズ又はマルチドーズ容器の形態とすることができる。使用時まで製剤の安定性を維持するためにこのような容器を凍結させてもよい。所定の実施形態において、ユニットドーズ製剤は、本願に記載する組換え宿主細胞を約１０７個／ｍ２～約１０１１個／ｍ２の用量で含有する。本願に記載する特定の組成物を使用するのに適した投与・治療レジメンの開発は種々の治療レジメンを含み、例えば、非経口又は静脈内投与又は製剤が挙げられる。
本願の組成物を非経口投与する場合には、前記組成物は更に滅菌水性又は油性溶液又は懸濁液を含むことができる。非経口投与に許容可能な適切な非毒性の希釈剤又は溶媒としては、水、リンゲル液、等張塩類溶液、１，３－ブタンジオール、エタノール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールと水の混液が挙げられる。水溶液又は水性懸濁液は更に、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は酒石酸ナトリウム等の１つ以上の緩衝剤を含むことができる。当然のことながら、全ての用量単位製剤の製造に使用される全ての材料は、利用される量で薬学的に純粋且つ実質的に非毒性でなければならない。更に、活性化合物を持続放出製品及び製剤に配合してもよい。本願で使用する用量単位形態とは、治療しようとする対象に単位用量として適切な物理的に不連続な単位を意味し、各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の組換え細胞又は活性化合物を適切な医薬品基剤と共に含有することができる。
一般に、適切な投与・治療レジメンは、治療又は予防効果を提供するために十分な量の活性分子又は細胞を提供する。このような応答は、非処置対象と比較して処置後対象における臨床転帰の改善（例えば、完全若しくは部分寛解の頻度上昇、又は無病生存期間の延長）を確認することによりモニターすることができる。腫瘍タンパク質に対する既存免疫応答の増加は一般に臨床転帰の改善に相関する。このような免疫応答は、一般に標準増殖アッセイ、細胞傷害性アッセイ又はサイトカインアッセイを使用して評価することができ、これらのアッセイは当技術分野で日常的に実施されており、処置前後に対象から取得した試料を使用して実施することができる。
本開示に係る方法は更に、前記疾患又は障害を併用療法で治療するために１つ以上の他の薬剤を投与することを含むことができる。例えば、所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を免疫チェックポイント阻害剤と（並行、同時又は逐次）併用投与することを含む。一部の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物（例えば、ＴＣＲ、ポリヌクレオチド、ベクター若しくは宿主細胞又はその組み合わせ）を刺激性免疫チェックポイント剤のアゴニストと併用投与することを含む。他の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を化学療法剤、放射線療法、外科療法、抗体又は任意のその組み合わせ等の二次療法と併用投与することを含む。
本願で使用する「免疫抑制剤」なる用語は、免疫応答の制御又は抑制を補助するために抑制シグナルを提供する１つ以上の細胞、タンパク質、分子、化合物又は複合体を意味する。例えば、免疫抑制剤としては、免疫刺激を部分的若しくは完全に阻止する分子；免疫活性化を低下、防止若しくは遅延させる分子；又は免疫抑制を増強、活性化若しくはアップレギュレートする分子が挙げられる。（例えば、免疫チェックポイント阻害剤の）標的とする代表的な免疫抑制剤としては、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－３５）、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、Ｔｒｅｇ細胞、又は任意のその組み合わせが挙げられる。
ＨＣＴを実施するための技術及びレジメンは当技術分野で公知であり、臍帯血、骨髄若しくは末梢血に由来する細胞、造血幹細胞、動員幹細胞又は羊水に由来する細胞等の任意の適切なドナー細胞の移植を含むことができる。従って、所定の実施形態では、改変型ＨＣＴ療法で造血幹細胞と同時又はその直後に本開示の改変型免疫細胞を投与することができる。一部の実施形態において、前記ＨＣＴは、ＨＬＡコンポーネントをコードする遺伝子の染色体ノックアウト、ＴＣＲコンポーネントをコードする遺伝子の染色体ノックアウト又はその両方を含むドナー造血細胞を含む。
他の実施形態において、前記対象は前記組成物又はＨＣＴを投与される前にリンパ球除去化学療法を受けたことがある。所定の実施形態において、リンパ球除去化学療法は、シクロホスファミド、フルダラビン、抗胸腺細胞グロブリン又はその組み合わせを含むコンディショニングレジメンを含む。
本開示に係る方法は更に、前記疾患又は障害を併用療法で治療するために１つ以上の他の薬剤を投与することを含むことができる。例えば、所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を免疫チェックポイント阻害剤と（並行、同時又は逐次）併用投与することを含む。一部の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を刺激性免疫チェックポイント剤のアゴニストと併用投与することを含む。他の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を化学療法剤、放射線療法、外科療法、抗体又は任意のその組み合わせ等の二次療法と併用投与することを含む。
本願で使用する「免疫抑制剤」なる用語は、免疫応答の制御又は抑制を補助するために抑制シグナルを提供する１つ以上の細胞、タンパク質、分子、化合物又は複合体を意味する。例えば、免疫抑制剤としては、免疫刺激を部分的若しくは完全に阻止する分子；免疫活性化を低下、防止若しくは遅延させる分子；又は免疫抑制を増強、活性化若しくはアップレギュレートする分子が挙げられる。（例えば、免疫チェックポイント阻害剤の）標的とする代表的な免疫抑制剤としては、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＣＤ２４４／２Ｂ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＫＩＲ、ＰＶＲ１Ｇ（ＣＤ１１２Ｒ）、ＰＶＲＬ２、アデノシン、Ａ２ａＲ、免疫抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１０、ＩＬ－４、ＩＬ－１ＲＡ、ＩＬ－３５）、ＩＤＯ、アルギナーゼ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５、Ｔｒｅｇ細胞、又は任意のその組み合わせが挙げられる。
免疫抑制剤阻害剤（別称、免疫チェックポイント阻害剤）は化合物、抗体、抗体断片若しくは融合ポリペプチド（例えば、ＣＴＬＡ４－ＦｃやＬＡＧ３－Ｆｃ等のＦｃ融合物）、アンチセンス分子、リボザイム若しくはＲＮＡｉ分子、又は低分子量有機分子とすることができる。本願に開示する実施形態のいずれかにおいて、方法は、以下の免疫抑制成分のいずれか１つを単独又は任意の組み合わせとして含む１つ以上の阻害剤と併用して、本開示の組成物を含むことができる。
所定の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤、例えばピジリズマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０（旧名ＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、ＢＭＳ－９３６５５８又は任意のその組み合わせ等のＰＤ－１特異抗体又はその結合断片と、本開示の組成物を併用する。他の実施形態では、ＢＭＳ－９３６５５９、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、アテゾリズマブ（ＲＧ７４４６）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ又は任意のその組み合わせ等のＰＤ－Ｌ１特異抗体又はその結合断片と、本開示の組成物を併用する。この他に考えられるものとしては、セミプリマブ；ＩＢＩ－３０８；ニボルマブ＋レラトリマブ；ＢＣＤ－１００；カムレリズマブ；ＪＳ－００１；スパルタリズマブ；チスレリズマブ；ＡＧＥＮ－２０３４；ＢＧＢＡ－３３３＋チスレリズマブ；ＣＢＴ－５０１；ドスタルリマブ；デュルバルマブ＋ＭＥＤＩ－０６８０；ＪＮＪ－３２８３；パゾパニブ塩酸塩＋ペムブロリズマブ；ピジリズマブ；ＲＥＧＮ－１９７９＋セミプリマブ；ＡＢＢＶ－１８１；ＡＤＵＳ－１００＋スパルタリズマブ；ＡＫ－１０４；ＡＫ－１０５；ＡＭＰ－２２４；ＢＡＴ－１３０６；ＢＩ－７５４０９１；ＣＣ－９０００６；セミプリマブ＋ＲＥＧＮ－３７６７；ＣＳ－１００３；ＧＬＳ－０１０；ＬＺＭ－００９；ＭＥＤＩ－５７５２；ＭＧＤ－０１３；ＰＦ－０６８０１５９１；Ｓｙｍ－０２１；チスレリズマブ＋パミパリブ；ＸｍＡｂ－２０７１７；ＡＫ－１１２；ＡＬＰＮ－２０２；ＡＭ－０００１；アルツハイマー病でＰＤ－１に拮抗するための抗体；ＢＨ－２９２２；ＢＨ－２９４１；ＢＨ－２９５０；ＢＨ－２９５４；固形腫瘍でＣＴＬＡ－４とＰＤ－１に拮抗するためのバイオ医薬品；腫瘍でＰＤ－１とＬＡＧ－３を標的とするための二重特異性モノクローナル抗体；ＢＬＳＭ－１０１；ＣＢ－２０１；ＣＢ－２１３；ＣＢＴ－１０３；ＣＢＴ－１０７；細胞免疫療法＋ＰＤ－１阻害剤；ＣＸ－１８８；ＨＡＢ－２１；ＨＥＩＳＣＯＩＩＩ－００３；ＩＫＴ－２０２；ＪＴＸ－４０１４；ＭＣＬＡ－１３４；ＭＤ－４０２；ｍＤＸ－４００；ＭＧＤ－０１９；腫瘍でＰＤＣＤ１に拮抗するためのモノクローナル抗体；腫瘍でＰＤ－１に拮抗するためのモノクローナル抗体；腫瘍でＰＤ－１を抑制するための腫瘍溶解性ウイルス；ＯＴ－２；ＰＤ－１アンタゴニスト＋ロペグインターフェロンα－２ｂ；ＰＥＧＭＰ－７；ＰＲＳ－３３２；ＲＸＩ－７６２；ＳＴＩＡ－１１１０；ＴＳＲ－０７５；腫瘍でＨＥＲ２とＰＤ－１を標的とするためのワクチン；腫瘍と自己免疫疾患でＰＤ－１を標的とするためのワクチン；ＸｍＡｂ－２３１０４；腫瘍でＰＤ－１を抑制するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド；ＡＴ－１６２０１；腫瘍でＰＤ－１を抑制するための二重特異性モノクローナル抗体；ＩＭＭ－１８０２；固形腫瘍と造血器腫瘍でＰＤ－１とＣＴＬＡ－４に拮抗するためのモノクローナル抗体；ニボルマブバイオシミラー；腫瘍でＣＤ２７８とＣＤ２８にアゴニストとして作用し、ＰＤ－１に拮抗するための組換えタンパク質；自己免疫疾患と炎症性疾患でＰＤ－１にアゴニストとして作用するための組換えタンパク質；ＳＮＡ－０１；ＳＳＩ－３６１；ＹＢＬ－００６；ＡＫ－１０３；ＪＹ－０３４；ＡＵＲ－０１２；ＢＧＢ－１０８；固形腫瘍でＰＤ－１、Ｇａｌ－９及びＴＩＭ－３を抑制するための薬剤；ＥＮＵＭ－２４４Ｃ８；ＥＮＵＭ－３８８Ｄ４；ＭＥＤＩ－０６８０；転移性黒色腫と転移性肺がんでＰＤ－１に拮抗するためのモノクローナル抗体；腫瘍でＰＤ－１を抑制するためのモノクローナル抗体；腫瘍でＣＴＬＡ－４とＰＤ－１を標的とするためのモノクローナル抗体；ＮＳＣＬＣでＰＤ－１に拮抗するためのモノクローナル抗体；腫瘍でＰＤ－１とＴＩＭ－３を抑制するためのモノクローナル抗体；腫瘍でＰＤ－１を抑制するためのモノクローナル抗体；造血器悪性腫瘍と固形腫瘍でＰＤ－１とＶＥＧＦ－Ａを抑制するための組換えタンパク質；腫瘍でＰＤ－１に拮抗するための低分子；Ｓｙｍ－０１６；イネビリズマブ＋ＭＥＤＩ－０６８０；転移性黒色腫でＰＤＬ－１とＩＤＯを標的とするためのワクチン；膠芽腫の治療用として抗ＰＤ－１モノクローナル抗体＋細胞免疫療法；腫瘍でＰＤ－１に拮抗するための抗体；造血器悪性腫瘍と細菌感染症でＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１を抑制するためのモノクローナル抗体；ＨＩＶでＰＤ－１を抑制するためのモノクローナル抗体；又は固形腫瘍でＰＤ－１を抑制するための低分子も挙げられる。
所定の実施形態では、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ－９８６０１６又は任意のその組み合わせ等のＬＡＧ３阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＣＴＬＡ４の阻害剤と本開示の組成物を併用する。特定の実施形態では、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（例えばアバタセプト、ベラタセプト）又は任意のその組み合わせ等のＣＴＬＡ４特異抗体又はその結合断片と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、３７６．９６又はその両方等のＢ７－Ｈ３特異抗体又はその結合断片と、本開示の組成物を併用する。Ｂ７－Ｈ４抗体結合断片は、例えばＤａｎｇａｊ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３：４８２０，２０１３に記載されているようなｓｃＦｖ又はその融合タンパク質や、米国特許第９，５７４，０００号とＰＣＴ特許公開第ＷＯ／２０１６４０７２４Ａ１号及びＷＯ２０１３／０２５７７９Ａ１号に記載されているものとすることができる。
所定の実施形態では、ＣＤ２４４の阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＢＬＴＡ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０又は任意のその組み合わせの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。抗ＣＤ－１６０抗体は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０８４１５８号に記載されている。
所定の実施形態では、ＴＩＭ３の阻害剤と本開示の細胞組成物を併用する。
所定の実施形態では、Ｇａｌ９の阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、おとりアデノシン受容体等のアデノシンシグナル伝達阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、Ａ２ａＲの阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）等のＫＩＲの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、抑制性サイトカイン（一般的には、ＴＧＦβ以外のサイトカイン）又はＴｒｅｇ発生若しくは活性の阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、レボ－１－メチルトリプトファン、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１５：３５２０－３０，２０１０）、エブセレン（Ｔｅｒｅｎｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．４９：５９１－６００，２０１０）、インドキシモド、ＮＬＧ９１９（Ｍａｕｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０４ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ２０１３；Ａｐｒ ６－１０，２０１３）、１－メチルトリプトファン（１－ＭＴ）－チラパザミン又は任意のその組み合わせ等のＩＤＯ阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、Ｎω－ニトロ－Ｌ－アルギニンメチルエステル（Ｌ－ＮＡＭＥ）、Ｎω－ヒドロキシノル－ｌ－アルギニン（ノルＮＯＨＡ）、Ｌ－ＮＯＨＡ、２（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）、Ｓ－（２－ボロノエチル）－Ｌ－システイン（ＢＥＣ）、又は任意のその組み合わせ等のアルギナーゼ阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＣＡ－１７０（Ｃｕｒｉｓ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）等のＶＩＳＴＡの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、例えばＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ，カナダ）等のＴＩＧＩＴの阻害剤、例えばＣＯＭ７０１（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）等のＣＤ１５５の阻害剤、又はその両方と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＰＶＲＩＧ、ＰＶＲＬ２又はその両方の阻害剤と、本開示の組成物を併用する。抗ＰＶＲＩＧ抗体は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／１３４３３３号に記載されている。抗ＰＶＲＬ２抗体は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０２１５２６号に記載されている。
所定の実施形態では、ＬＡＩＲ１阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５又は任意のその組み合わせの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増強する物質（即ちアゴニスト）と、本開示の組成物を併用する。例えば、（例えばウレルマブ等の）ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト、（例えばＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３又はＭＥＤＩ０５６２等の）ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）アゴニスト、レナリドミド、ポマリドミド、（例えばＣＤＸ－１１２７等の）ＣＤ２７アゴニスト、（例えばＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０又はＣＤ８６等の）ＣＤ２８アゴニスト、（例えばＣＰ－８７０，８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ又はＳＧＮ－４０等の）ＣＤ４０アゴニスト、（例えばＩＬ－２等の）ＣＤ１２２アゴニスト、（例えばＰＣＴ特許公開第ＷＯ２０１６／０５４６３８号に記載されているヒト化モノクローナル抗体等の）ＧＩＴＲのアゴニスト、（例えばＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ１４５－１、Ｉｃｏｓ３１４－８又は任意のその組み合わせ等の）ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）のアゴニストと、本開示の組成物を併用することができる。本願に開示する実施形態のいずれかにおいて、方法は、上記のいずれかを単独又は任意の組み合わせとして含む刺激性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアゴニストと、本開示の組成物を併用投与することを含むことができる。
所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物に加え、非炎症性固形腫瘍により発現されるがん抗原に特異的な抗体若しくはその抗原結合断片、放射線治療、外科療法、化学療法剤、サイトカイン、ＲＮＡｉ又は任意のその組み合わせの１つ以上を含む二次療法を含む。
所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を投与することと、更に放射線治療又は外科療法を行うことを含む。放射線療法は当技術分野で周知であり、ガンマ線照射等のＸ線療法と、放射性医薬品療法を含む。対象における所定のがんを治療するのに適した外科療法と外科技術は、当技術分野における通常の知識を有する者に周知である。
所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を投与することと、更に化学療法剤を投与することを含む。化学療法剤としては、限定されないが、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、（葉酸拮抗薬、ピリミジンアナログ、プリンアナログ及び糖鎖修飾アナログ等の）代謝拮抗薬、ＤＮＡ合成阻害剤、（インターカレート剤等の）ＤＮＡ相互作用物質、及びＤＮＡ修復阻害剤が挙げられる。化学療法剤の具体例としては、限定されないが、以下の群が挙げられる：ピリミジンアナログ（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）及びプリンアナログ、葉酸拮抗薬及び関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））等の代謝拮抗薬／抗がん剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）等の天然物質、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポシロン及びナベルビン等の微小管攪乱物質、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾラミド、テニポシド、トリエチレンチオホスホロアミド及びエトポシド（ＶＰ１６））を含む抗増殖／抗有糸分裂剤；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン等の抗生物質；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身で代謝させ、それ自体のアスパラギンを合成する能力をもたない細胞を消滅させるＬ－アスパラギナーゼ）；抗血小板薬；ナイトロジェンマスタード類（メクロレタミン、シクロホスファミド及びアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン類及びメチルメラミン類（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、アルキルスルホン酸類（ブスルファン）、ニトロソウレア類（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びアナログ、ストレプトゾシン）、トリアゼン類（ダカルバジン（ＤＴＩＣ））等の抗増殖性／抗有糸分裂性アルキル化剤；葉酸アナログ（メトトレキサート）等の抗増殖性／抗有糸分裂性代謝拮抗薬；白金錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固薬（ヘパリン、合成ヘパリン塩及び他のトロンビン阻害剤）；（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ等の）線維素溶解剤、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；遊走阻害剤；分泌阻害剤（ブレフェルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；血管新生抑制化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン）及び増殖因子阻害剤（血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンギオテンシン受容体拮抗薬；一酸化窒素供与体；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、リツキシマブ）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤・分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能不全インデューサー、コレラ毒素、リシン、緑膿菌外毒素、百日咳菌由来アデニル酸シクラーゼ毒素又はジフテリア毒素等の毒素、及びカスパーゼ活性化因子；並びにクロマチン攪乱物質。
抗がん活性に対する宿主免疫応答を操作するためにサイトカインを使用することができる。例えば、Ｆｌｏｒｏｓ ＆ Ｔａｒｈｉｎｉ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．４２（４）：５３９－５４８，２０１５参照。免疫抗がん又は抗腫瘍応答を促進するために有用なサイトカインとしては、例えば、ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられ、単独又は任意に組み合わせて本開示の組成物と併用する。
本願では養子免疫療法の調節方法も提供され、前記方法は、安全スイッチタンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む本開示の改変型宿主細胞を事前に投与された対象に、前記事前に投与した改変型宿主細胞を前記対象において消滅させるために有効な量の前記安全スイッチタンパク質のコグネイト化合物を投与することを含む。
所定の実施形態において、前記安全スイッチタンパク質はｔＥＧＦＲを含み、前記コグネイト化合物はセツキシマブであり、又は前記安全スイッチタンパク質はｉＣａｓｐ９を含み、前記コグネイト化合物はＡＰ１９０３（例えば二量化ＡＰ１９０３）であり、又は前記安全スイッチタンパク質はＲＱＲポリペプチドを含み、前記コグネイト化合物はリツキシマブであり、又は前記安全スイッチタンパク質はｍｙｃ結合ドメインを含み、前記コグネイト化合物は前記ｍｙｃ結合ドメインに特異的な抗体である。
更に他の態様では、本開示の組成物又はユニットドーズ製剤の製造方法が提供される。所定の実施形態において、前記方法は、（ｉ）本開示のベクターを導入した宿主細胞のアリコートに、（ｉｉ）薬学的に許容される基剤を加えることを含む。所定の実施形態において、本開示のベクターは、（例えばがん抗原を標的とする）養子移入療法で使用するために宿主細胞（例えばＴ細胞）にトランスフェクション／形質導入するために使用される。
一部の実施形態において、前記方法は更に、アリコートに分割する前に、前記形質導入宿主細胞を培養し、前記ベクターを取り込んだ（即ち、発現する）前記形質導入細胞を選択することを含む。他の実施形態において、前記方法は、前記培養及び選択後でアリコートに分割する前に、前記形質導入宿主細胞を拡大することを含む。本方法の実施形態のいずれかでは、製造後の組成物又はユニットドーズ製剤を後期使用に備えて凍結させることができる。本方法に従って組成物又はユニットドーズ製剤を製造するには任意の適切な宿主細胞を使用することができ、例えば、造血幹細胞、Ｔ細胞、初代Ｔ細胞、Ｔ細胞株、ＮＫ細胞又はＮＫ－Ｔ細胞が挙げられる。特定の実施形態において、前記方法は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はその両方である宿主細胞を含む。
所定の実施形態では、ＬＡＧ５２５、ＩＭＰ３２１、ＩＭＰ７０１、９Ｈ１２、ＢＭＳ－９８６０１６又は任意のその組み合わせ等のＬＡＧ３阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＣＴＬＡ４の阻害剤と本開示の組成物を併用する。特定の実施形態では、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ融合タンパク質（例えばアバタセプト、ベラタセプト）又は任意のその組み合わせ等のＣＴＬＡ４特異抗体又はその結合断片と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、３７６．９６又はその両方等のＢ７－Ｈ３特異抗体又はその結合断片と、本開示の組成物を併用する。Ｂ７－Ｈ４抗体結合断片は、例えばＤａｎｇａｊ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３：４８２０，２０１３に記載されているようなｓｃＦｖ又はその融合タンパク質や、米国特許第９，５７４，０００号とＰＣＴ特許公開第ＷＯ／２０１６４０７２４Ａ１号及びＷＯ２０１３／０２５７７９Ａ１号に記載されているものとすることができる。
所定の実施形態では、ＣＤ２４４の阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＢＬＴＡ、ＨＶＥＭ、ＣＤ１６０又は任意のその組み合わせの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。抗ＣＤ－１６０抗体は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／０８４１５８号に記載されている。
所定の実施形態では、ＴＩＭ３の阻害剤と本開示の細胞組成物を併用する。
所定の実施形態では、Ｇａｌ９の阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、おとりアデノシン受容体等のアデノシンシグナル伝達阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、Ａ２ａＲの阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５）等のＫＩＲの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、抑制性サイトカイン（一般的には、ＴＧＦβ以外のサイトカイン）又はＴｒｅｇ発生若しくは活性の阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、レボ－１－メチルトリプトファン、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１５：３５２０－３０，２０１０）、エブセレン（Ｔｅｒｅｎｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．４９：５９１－６００，２０１０）、インドキシモド、ＮＬＧ９１９（Ｍａｕｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０４ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ２０１３；Ａｐｒ ６－１０，２０１３）、１－メチルトリプトファン（１－ＭＴ）－チラパザミン又は任意のその組み合わせ等のＩＤＯ阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、Ｎω－ニトロ－Ｌ－アルギニンメチルエステル（Ｌ－ＮＡＭＥ）、Ｎω－ヒドロキシノル－ｌ－アルギニン（ノルＮＯＨＡ）、Ｌ－ＮＯＨＡ、２（Ｓ）－アミノ－６－ボロノヘキサン酸（ＡＢＨ）、Ｓ－（２－ボロノエチル）－Ｌ－システイン（ＢＥＣ）、又は任意のその組み合わせ等のアルギナーゼ阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＣＡ－１７０（Ｃｕｒｉｓ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．）等のＶＩＳＴＡの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、例えばＣＯＭ９０２（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，Ｏｎｔａｒｉｏ，カナダ）等のＴＩＧＩＴの阻害剤、例えばＣＯＭ７０１（Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）等のＣＤ１５５の阻害剤、又はその両方と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＰＶＲＩＧ、ＰＶＲＬ２又はその両方の阻害剤と、本開示の組成物を併用する。抗ＰＶＲＩＧ抗体は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／１３４３３３号に記載されている。抗ＰＶＲＬ２抗体は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０２１５２６号に記載されている。
所定の実施形態では、ＬＡＩＲ１阻害剤と本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５又は任意のその組み合わせの阻害剤と、本開示の組成物を併用する。
所定の実施形態では、刺激性免疫チェックポイント分子の活性を増強する物質（即ちアゴニスト）と、本開示の組成物を併用する。例えば、（例えばウレルマブ等の）ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）アゴニスト、（例えばＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ６３８３又はＭＥＤＩ０５６２等の）ＣＤ１３４（ＯＸ－４０）アゴニスト、レナリドミド、ポマリドミド、（例えばＣＤＸ－１１２７等の）ＣＤ２７アゴニスト、（例えばＴＧＮ１４１２、ＣＤ８０又はＣＤ８６等の）ＣＤ２８アゴニスト、（例えばＣＰ－８７０，８９３、ｒｈｕＣＤ４０Ｌ又はＳＧＮ－４０等の）ＣＤ４０アゴニスト、（例えばＩＬ－２等の）ＣＤ１２２アゴニスト（例えばＰＣＴ特許公開第ＷＯ２０１６／０５４６３８号に記載されているヒト化モノクローナル抗体等の）ＧＩＴＲのアゴニスト、（例えばＧＳＫ３３５９６０９、ｍＡｂ８８．２、ＪＴＸ－２０１１、Ｉｃｏｓ１４５－１、Ｉｃｏｓ３１４－８又は任意のその組み合わせ等の）ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）のアゴニストと、本開示の組成物を併用することができる。本願に開示する実施形態のいずれかにおいて、方法は、上記のいずれかを単独又は任意の組み合わせとして含む刺激性免疫チェックポイント分子の１つ以上のアゴニストと、本開示の組成物を併用投与することを含むことができる。
所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物に加え、非炎症性固形腫瘍により発現されるがん抗原に特異的な抗体若しくはその抗原結合断片、放射線治療、外科療法、化学療法剤、サイトカイン、ＲＮＡｉ又は任意のその組み合わせの１つ以上を含む二次療法を含む。
所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を投与することと、更に放射線治療又は外科療法を行うことを含む。放射線療法は当技術分野で周知であり、ガンマ線照射等のＸ線療法と、放射性医薬品療法を含む。対象における所定のがんを治療するのに適した外科療法と外科技術は、当技術分野における通常の知識を有する者に周知である。
所定の実施形態において、併用療法は、本開示の組成物を投与することと、更に化学療法剤を投与することを含む。化学療法剤としては、限定されないが、クロマチン機能の阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、ＤＮＡ損傷剤、（葉酸拮抗薬、ピリミジンアナログ、プリンアナログ及び糖鎖修飾アナログ等の）代謝拮抗薬、ＤＮＡ合成阻害剤、（インターカレート剤等の）ＤＮＡ相互作用物質、及びＤＮＡ修復阻害剤が挙げられる。化学療法剤の具体例としては、限定されないが、以下の群が挙げられる：ピリミジンアナログ（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）及びプリンアナログ、葉酸拮抗薬及び関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））等の代謝拮抗薬／抗がん剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）等の天然物質、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポシロン及びナベルビン等の微小管攪乱物質、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾラミド、テニポシド、トリエチレンチオホスホロアミド及びエトポシド（ＶＰ１６））を含む抗増殖／抗有糸分裂剤；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン等の抗生物質；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身で代謝させ、それ自体のアスパラギンを合成する能力をもたない細胞を消滅させるＬ－アスパラギナーゼ）；抗血小板薬；ナイトロジェンマスタード類（メクロレタミン、シクロホスファミド及びアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン類及びメチルメラミン類（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、アルキルスルホン酸類（ブスルファン）、ニトロソウレア類（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びアナログ、ストレプトゾシン）、トリアゼン類（ダカルバジン（ＤＴＩＣ））等の抗増殖性／抗有糸分裂性アルキル化剤；葉酸アナログ（メトトレキサート）等の抗増殖性／抗有糸分裂性代謝拮抗薬；白金錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固薬（ヘパリン、合成ヘパリン塩及び他のトロンビン阻害剤）；（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ等の）線維素溶解剤、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；遊走阻害剤；分泌阻害剤（ブレフェルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；血管新生抑制化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン）及び増殖因子阻害剤（血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンギオテンシン受容体拮抗薬；一酸化窒素供与体；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、リツキシマブ）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤・分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン及びプレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能不全インデューサー、コレラ毒素、リシン、緑膿菌外毒素、百日咳菌由来アデニル酸シクラーゼ毒素又はジフテリア毒素等の毒素、及びカスパーゼ活性化因子；並びにクロマチン攪乱物質。
抗がん活性に対する宿主免疫応答を操作するためにサイトカインを使用することができる。例えば、Ｆｌｏｒｏｓ ＆ Ｔａｒｈｉｎｉ，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．４２（４）：５３９－５４８，２０１５参照。免疫抗がん又は抗腫瘍応答を促進するために有用なサイトカインとしては、例えば、ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４及びＧＭ－ＣＳＦが挙げられ、単独又は任意に組み合わせて本開示の組成物と併用する。
本願では養子免疫療法の調節方法も提供され、前記方法は、安全スイッチタンパク質をコードする異種ポリヌクレオチドを含む本開示の改変型宿主細胞を事前に投与された対象に、前記事前に投与した改変型宿主細胞を前記対象において消滅させるために有効な量の前記安全スイッチタンパク質のコグネイト化合物を投与することを含む。
所定の実施形態において、前記安全スイッチタンパク質はｔＥＧＦＲを含み、前記コグネイト化合物はセツキシマブであり、又は前記安全スイッチタンパク質はｉＣａｓｐ９を含み、前記コグネイト化合物はＡＰ１９０３（例えば二量化ＡＰ１９０３）であり、又は前記安全スイッチタンパク質はＲＱＲポリペプチドを含み、前記コグネイト化合物はリツキシマブであり、又は前記安全スイッチタンパク質はｍｙｃ結合ドメインを含み、前記コグネイト化合物は前記ｍｙｃ結合ドメインに特異的な抗体である。
更に他の態様では、本開示の組成物又はユニットドーズ製剤の製造方法が提供される。所定の実施形態において、前記方法は、（ｉ）本開示のベクターを導入した宿主細胞のアリコートに、（ｉｉ）薬学的に許容される基剤を加えることを含む。所定の実施形態において、本開示のベクターは、（例えばがん抗原を標的とする）養子移入療法で使用するために宿主細胞（例えばＴ細胞）にトランスフェクション／形質導入するために使用される。
一部の実施形態において、前記方法は更に、アリコートに分割する前に、前記形質導入宿主細胞を培養し、前記ベクターを取り込んだ（即ち、発現する）前記形質導入細胞を選択することを含む。他の実施形態において、前記方法は、前記培養及び選択後でアリコートに分割する前に、前記形質導入宿主細胞を拡大することを含む。本方法の実施形態のいずれかでは、製造後の組成物又はユニットドーズ製剤を後期使用に備えて凍結させることができる。本方法に従って組成物又はユニットドーズ製剤を製造するには任意の適切な宿主細胞を使用することができ、例えば、造血幹細胞、Ｔ細胞、初代Ｔ細胞、Ｔ細胞株、ＮＫ細胞又はＮＫ－Ｔ細胞が挙げられる。特定の実施形態において、前記方法は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はその両方である宿主細胞を含む。
［実施例１］方法
細胞株
Ｔ２はＨＬＡ－Ａ＊０２：０１のみを発現するＴＡＰ欠損Ｔ細胞白血病／Ｂ－ＬＣＬハイブリッド細胞株１１であり、２９３Ｔ／１７は高い効率でトランスフェクションが可能な細胞株であり、ＡＴＣＣから購入した。Ｊｕｒｋａｔ７６細胞は親Ｊｕｒｋａｔ細胞株のＴＣＲα／ＴＣＲβ欠損誘導体であり、天然ではＣＤ８を発現しない１２。ＣＤ８αβを発現するようにＪｕｒｋａｔ７６細胞に事前に形質導入した（Ｊｕｒｋａｔ－ＣＤ８）。ＨＥＰＥＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＧＩＢＣＯ）に１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ及びストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬを添加し、細胞株を維持した。
ヒトＴ細胞培養：
ヘルシンキ宣言に従い、書面によるインフォームドコンセントを得ると共に、プロトコール８６８．０１として治験審査委員会の承認を得た後に、シアトルがんケアアライアンス（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃａｒｅ Ａｌｌｉａｎｃｅ）で健康なドナーから白血球除去療法試料を採取した。ＨＬＡタイピング済みドナーからＰＢＭＣを単離し、従来記載されているように１３，１４、ペプチドＷＴ１３７－４５であるＶＬＤＦＡＰＰＧＡに特異的なＨＬＡ－Ａ＊０２：０１拘束性Ｔ細胞株をドナー１人当たり１０株ずつ作製した（ドナー合計１０人）。要約すると、ＥａｓｙＳｅｐ（ＴＭ）ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＣＤ８＋Ｔ細胞を精製し、プラスチック基材に接着させ、１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ－４と８００Ｕ／ｍｌのＧＭＣＳＦを添加して２日間培養し、回収前の最終日に成熟サイトカインカクテルを添加することにより、自家ＰＢＭＣからＤＣを作製した。ＤＣにペプチド１μｇ／ｍｌを９０分間添加した後、洗浄して過剰のペプチドを除去し、４０００ラドを照射した。ペプチドパルスしたＤＣに３０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－２１を添加し、これに対して２．５：１の比となるように、ＣＤ８＋Ｔ細胞約５×１０６個を共培養した。ＨＥＰＥＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＧＩＢＣＯ）に５％熱不活化ヒト血清プール（Ｂｌｏｏｄｗｏｒｋｓ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ）、ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ及び２－β－メルカプトエタノール５５μＭを添加し、Ｔ細胞を維持した。２～３日毎に培地の半量を交換し、１２．５Ｕ／ｍｌのＩＬ－２と２２５０Ｕ／ｍｌのＩＬ－７及びＩＬ－１５を添加することにより、培養液に栄養補給した。ペプチドパルスして放射線照射した自家ＰＢＭＣに対して１：２の比でＴ細胞を共培養することにより、１０日毎に再刺激した。
フローサイトメトリーによる細胞選別
抗原特異的拡大後に氷上で全ドナーからのＴ細胞株を集めた。プール試料を分割し、以下の３つの条件の下にペプチド／ＨＬＡ－Ａ２四量体で染色した。即ち、（１）「四量体結合と親和性測定」のセクションに記載するように、陽性集団と陰性集団の最大の分離が得られるような野生型四量体濃度を実験により求める；（２）最適な四量体用量を１００倍に希釈する；及び（３）ＨＬＡ－Ａ２分子を突然変異させ、ＣＤ８と相互作用するα３ドメインの位置をＤ２２７ＫとＴ２２８Ａに変異させる１５ことにより別の改変型四量体を作製する。この四量体は、親和性の高いＣＤ８非依存的ＴＣＲと選択的に結合することが示されている１６，１７。四量体染色した各試料について、最高レベルの四量体結合を示す細胞（標識細胞の上位～２％）をフローサイトメトリーにより選別した。選別した集団をアダプティブ・バイオテクノロジーズ社（Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のｉｍｍｕｎｏｓｅｑアッセイにより解析し、各クロノタイプの相対存在量を定量した。全四量体陽性集団を含む別の試料も最適な四量体染色試料から選別し、アダプティブ・バイオテクノロジーズ社のｐａｉｒＳｅｑアッセイ１８によりＴＣＲαβペアリング情報を求めた。
データ解析
濃縮倍率計算
（選別した四量体＋集団における頻度）／（未選別プール試料における頻度）として各クロノタイプの濃縮スコアを計算した。プール試料中で検出されなかったクロノタイプについては、濃縮倍率計算のためにプール試料中の細胞１個に対応する頻度を割り当てた。
ＴＣＲシーケンシング及びα／βペアリング：
アダプティブ・バイオテクノロジーズ社のＩｍｍｕｎｏＳｅｑアッセイによりＴＣＲレパトア解析を実施した。１０ｘゲノミクス社（１０ｘ ｇｅｎｏｍｉｃｓ）のＣｈｒｏｍｉｕｍシングルセル免疫プロファイリングを使用してシングルセルＶ（Ｄ）Ｊ解析（ＴＣＲα／βペアリング）を実施した。
ＴＣＲ形質導入
ＴＣＲβ－ｐ２ａ－ＴＣＲαの順に配置したコドン最適化ＴＣＲコンストラクトをＢｉｏＸｐ（ＴＭ）３２００（ＳＧＩ－ＤＮＡ）で合成し、ギブソン・アセンブリによりｐＲＲＬＳＩＮ．ｃＰＰＴ．ＭＳＣＶ．ＷＰＲＥレンチウイルス発現プラスミド（ＮＣＩのＲｉｃｈａｒｄ Ｍｏｒｇａｎ博士から寄贈）にクローニングした。次に第３世代レンチウイルスパッケージングシステムを使用して発現ベクターを２９３Ｔ細胞にパッケージングした。４８時間後にレンチウイルス上清を回収し、濾過して細胞破片を除去した。レンチウイルス上清２ｍｌにポリブレン５μｇ／ｍｌを添加し、Ｊｕｒｋａｔ７６細胞約５×１０５個に加えた。細胞を３０℃にて１０００ｇで９０分間遠心し、形質導入を助長した。初代ＣＤ８＋Ｔ細胞へのＴＣＲ形質導入のために、ＥａｓｙＳｅｐ（ＴＭ）ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＨＬＡ－Ａ２＋ＰＢＭＣからＣＤ８＋Ｔ細胞を濃縮し、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（ＴＭ）Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８（Ｇｉｂｃｏ）で４時間活性化させた。レンチウイルス上清２ｍｌに硫酸プロタミン５μｇ／ｍｌとＩＬ－２を５０Ｕ／ｍｌ添加し、ＣＤ８＋Ｔ細胞約２×１０６個に加えた。ペプチド／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１四量体を使用してトランスジェニックＴＣＲ＋細胞をＦＡＣＳ選別し、下流アッセイ用の純粋な抗原特異的細胞集団を得た。
ＴＣＲ結合データ
正しいＴＣＲペアリングの評価
Ｊｕｒｋａｔ７６細胞に各ＴＣＲコンストラクトを導入し、内在性ＴＣＲを欠損するこれらの細胞におけるトランスジェニックＴＣＲ表面発現総量を反映するＣＤ３表面発現量と比較して四量体結合を解析した。
四量体結合と親和性測定
陽性Ｔ細胞集団で四量体滴定を実施し、陰性集団のバックグラウンド染色を上昇させずに陽性集団と陰性集団を最良に分離する濃度を選択することにより、最適な四量体用量を決定した。
ＴＣＲ機能データ
ＩＦＮ－γ産生
レンチウイルスを介して初代ＣＤ８＋Ｔ細胞に各ＴＣＲ発現コンストラクトを導入し、選別し、均一に四量体陽性を示す細胞集団を得た後、用量を減らしながら（１～１０－５μＭ）ペプチドをパルスしたＴ２標的細胞と１：１の比で混合した。あるいは、指定する場合には、自家ＰＢＭＣをＡＰＣとして使用した。ゴルジ体阻害剤（ＢＤ ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ及びＧｏｌｇｉＳｔｏｐ）の共存下で４時間インキュベーション後に、細胞を抗ＣＤ８で表面染色した後、固定（ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ）し、その後、ＢＤ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ中にて抗ＩＦＮ－γで細胞内標識を行った。細胞をフローサイトメトリーにより解析し、各試料についてＩＦＮ－γ＋細胞の百分率を求めた。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して非直線回帰によりこれらのデータを用量反応曲線にフィットさせた（４パラメータ－可変勾配を選択し、曲線のｂｏｔｔｏｍとｔｏｐをそれぞれ０と１００に制約した）。
図１（Ａ）及び１（Ｂ）は、高スループットシーケンシングストラテジーにより、ＷＴ１３７－４５ペプチド特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。全四量体陽性集団と比較して四量体との結合性の高さで選別することにより濃縮されたＴＣＲクロノタイプは、ペプチド／ＨＬＡ－Ａ２リガンドに対して高い親和性又は高い機能的アビディティを有する可能性が高いと同定した。（Ａ）ＷＴ１３７－４５ペプチド／ＭＨＣ四量体との結合性の高いＴＣＲクロノタイプを同定するための初期シーケンシングストラテジーの模式図。（Ｂ）全集団の百分率に対する選別集団の濃縮倍率を示し、選択したＴＣＲをハイライト表示する。黒丸により示す全ＴＣＲを合成し、抗原特異性について評価した（合計２７）。
図２は、選択したＴＣＲの特異性と相対四量体結合親和性を評価する四量体結合試験の結果を示す。内在性ＴＣＲα／β鎖を欠損するＪｕｒｋａｔ細胞でＴＣＲコンストラクトを発現させた。各ＴＣＲのＣＤ３発現に対する四量体染色を示す（ＣＤ３発現はトランスジェニックＴＣＲ表面発現に直接相関する）。
［実施例２］機能的アビディティの高いＴＣＲの同定
一部の高親和性ＴＣＲはＣＤ８に非依存的に四量体と結合することが分かったので、第２の実験を実施し、ＣＤ８非依存的（ＣＤ８ｉ）四量体を使用した場合に四量体との結合性の高い選別集団として特異的に濃縮されるＴＣＲを更に同定した。図３Ａ～３Ｃは、ＣＤ８非依存的（ＣＤ８ｉ）四量体を使用した改変型高スループットシーケンシングストラテジーにより、他のＷＴ１３７－４５ペプチド特異的ＴＣＲをどのように同定したかを示す。ＣＤ８非依存的ＷＴ１３７ペプチド／ＭＨＣ四量体との結合性の高いＴＣＲクロノタイプを同定するための改変型シーケンシングストラテジーの模式図を図３Ａに示す。全集団の百分率に対する初期選別集団の濃縮倍率と、ＣＤ８ｉ四量体を使用した場合の同様の解析を図３Ｂと図３Ｃと比較して示す。表面ＣＤ３レベルとＣＤ８ｉ四量体との結合性に基づいて更に１４のＴＣＲを選択した。図３Ｂ及び図３Ｃに名称を記載した全ＴＣＲクロノタイプを合成し、抗原特異性について評価した。図３Ｃに影（斜線パターン）丸により示す全ＴＣＲは、ＣＤ８ｉ四量体を使用して更に同定されたＴＣＲを表す。
［実施例３］ＣＤ３発現に対する四量体染色
ＣＤ８ｉ四量体で選択した他のＷＴ１３７－４５ペプチド特異的ＴＣＲのＣＤ８ｉ四量体結合を図４に示す。内在性ＴＣＲα／β鎖を欠損する（ＣＤ８発現も欠損する）Ｊｕｒｋａｔ細胞でＴＣＲコンストラクトを発現させた。各ＴＣＲのＣＤ３発現に対する四量体染色を図４に示す（ＣＤ３発現はトランスジェニックＴＣＲ表面発現に直接相関する）。四量体に最も強く結合し、抗ＣＤ３染色と比較して高レベルの四量体染色を生じたＴＣＲを更に解析するために選択した。
［実施例４］機能的アビディティ（ＥＣ５０）を測定するためのＩＦＮγアッセイ
本願のＴＣＲを形質導入したＴ細胞の５０％からＴ細胞応答（例えばＩＦＮγ産生）を誘発するために標的細胞にパルスする必要があるペプチド量であるペプチドＥＣ５０により、ＴＣＲが制限的な抗原濃度でＴ細胞活性化のシグナルを誘導する能力を測定した。この数値は、所定のＴＣＲを発現するＴ細胞が抗原を発現する標的細胞を殺傷する能力に直接相関する。選択したＴＣＲのペプチドＥＣ５０を求めるために、ドナーＰＭＢＣから単離したＣＤ８＋Ｔ細胞に各ＴＣＲを形質導入した（図５Ａ）。１週間後に、細胞から四量体＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を選別し、拡大した。拡大した抗原特異的細胞をペプチドパルスしたＴ２標的細胞と４～６時間共培養し、フローサイトメトリーによりＩＦＮγ産生を測定した（図５Ａ）。ＩＦＮγ産生細胞の百分率を非直線回帰により用量反応曲線にフィットさせ、各ＴＣＲのペプチドＥＣ５０を計算した（図５Ｂ）。
［実施例５］ＷＴ１３７－４５ペプチド特異的ＴＣＲを発現する初代ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＨＬＡ－Ａ２＋ＷＴ１＋ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞のインビトロ殺傷
ＷＴ１ｐ３７抗原を天然に発現し、ＨＬＡ－Ａ２上に提示する腫瘍細胞が、ＴＣＲを形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞により溶解されるか否かを直接評価するために、選択したＴＣＲ各１つをドナー由来ＣＤ８＋Ｔ細胞に形質導入し、四量体との結合性の高さで選別することにより精製した。次に、ＣｙｔｏＬｉｇｈｔ（Ｒ）Ｒａｐｉｄ Ｒｅｄ色素で事前に染色しておいた乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８に対して８：１の比となるように、ＴＣＲを形質導入したＴ細胞を混合した（３本ずつ）。ＴＣＲを形質導入した各Ｔ細胞集団について指定時点で７２時間にわたって（生きた標的細胞の総数に相関する）赤色オブジェクト総面積を計算した。最も強力な腫瘍反応性Ｔ細胞は患者にインビボ移入後、長期間にわたって腫瘍抗原に応答性であると思われる。そこで、ＴＣＲを導入したＴ細胞の持続性抗原に対する継続的応答性を評価するために、４８時間後にＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞を追加した。図６参照。
［実施例６］ＷＴ１３７－４５ペプチド特異的ＴＣＲを発現する初代ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞によるＨＬＡ－Ａ２＋ＷＴ１＋ＰＡＮＣ－１細胞のインビトロ殺傷
ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞はいずれもインビボ腫瘍クリアランスに役割を果たすことができる。従って、ＣＤ８＋Ｔ細胞しか活性化させることができないＴＣＲよりも、ＣＤ４＋Ｔ細胞でも抗原特異的応答のシグナルを誘導することができるＭＨＣクラスＩ拘束性ＴＣＲのほうが好ましい。ＭＨＣクラスＩ拘束性ＴＣＲがＣＤ４＋Ｔ細胞で機能する能力は、一部では、ペプチドＭＨＣに対するＴＣＲの親和性に依存するようである。多くの場合には、ＣＤ８αとＣＤ８βをコードする遺伝子をＣＤ４＋Ｔ細胞に導入すると、抗原特異的応答を効率的に誘発し易くなる。そこで、ＴＣＲ１０．１を発現するＣＤ８Ｔ細胞と比較して（ＣＤ８α／ＣＤ８βを導入した）ＣＤ４Ｔ細胞がＨＬＡ－Ａ２＋ＷＴ１＋腫瘍細胞を標的とする能力を評価するために、ＷＴ１３７－４５ＴＣＲ１０．１を発現するようにＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方に形質導入した。ＣＤ４＋Ｔ細胞には更にＣＤ８α遺伝子とＣＤ８β遺伝子を発現するように形質導入した。８日後に、形質導入した細胞を選別し、ＣＤ８＋四量体＋Ｔ細胞とＣＤ４＋／ＣＤ８＋四量体＋Ｔ細胞を精製した。ＮｕｃＬｉｇｈｔ（Ｒ）Ｒｅｄ色素を発現するように事前に形質導入しておいた膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ－１に対して８：１となるように、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はこれらの２集団（ＣＤ４とＣＤ８）の混合物である抗原特異的細胞を混合した（３本ずつ）。ＴＣＲを導入した各Ｔ細胞集団について指定時点で（生きた標的細胞の総数に相関する）赤色オブジェクト総面積を計算した。ＴＣＲを導入したＴ細胞の持続性抗原に対する継続的応答性を評価するために、４８時間後にＰＡＮＣ－１細胞を追加した。図７は、ＷＴ１３７－４５ＴＣＲ１０．１を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞がいずれも反復反復反復インビトロチャレンジ後にＷＴ１＋Ａ２＋膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ－１を排除できることを示す。
ＷＴ１ｐ１２６エピトープは必ずしもＷＴ１とＨＬＡ－Ａ２を発現する細胞により効率的にプロセシング／提示されない（Ｊａｉｇｉｒｄａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３９：１０５，２０１７）。特に、免疫プロテアソーム発現をアップレギュレートするためにＩＦＮγと共に前培養するか否かに拘わらず、ＷＴ１とＨＬＡ－Ａ２を発現する数種の固形腫瘍由来細胞株は、ＷＴ１－ｐ１２６特異的ＴＣＲにより効率的に標的化されない。一部の態様において、本開示は一面では、ＷＴ１－ｐ３７エピトープがＷＴ１－ｐ１２６エピトープと比較してより広範にプロセシングされ、多様な腫瘍種により提示されるという知見に関する。図８Ａ～８Ｄは、ＷＴ１－ｐ１２６ペプチド特異的ＴＣＲとＷＴ１ｐ３７ペプチド特異的ＴＣＲによる種々のＷＴ１＋Ａ２＋腫瘍細胞株の溶解を比較して示す。これらのデータは、ＷＴ１ｐ－３７ペプチド特異的ＴＣＲが一般に広範なＷＴ１＋Ａ２＋腫瘍をより確実に標的化できるらしいという事実を裏付けている。
本願に記載する各種実施形態を組み合わせて他の実施形態を提供することができる。本明細書中に言及及び／又は出願データシートに列挙する全特許、特許出願公開、特許出願及び非特許文献はその開示内容全体を本願に援用するものであり、限定されないが、米国特許出願第６２／８１６，７４６号、（出願日２０１９年３月１１日）が挙げられる。一般に、以下の特許請求の範囲で使用する用語は本願に開示する特定の実施形態に制限して解釈すべきではなく、このような特許請求の範囲の権利が及ぶ全範囲の等価物と共に、考えられる全ての実施形態を含めて解釈すべきである。
参考文献
１．Ｋａｌｏｓ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｈａｖｅ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｃａｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｍｅｍｏｒｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３，９５ｒａ７３－９５ｒａ７３（２０１１）．
２．Ｐｏｒｔｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｌｅｖｉｎｅ，Ｂ．Ｌ．，Ｋａｌｏｓ，Ｍ．，Ｂａｇｇ，Ａ．＆ Ｊｕｎｅ，Ｃ．Ｈ．Ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６５，７２５－７３３（２０１１）．
３．Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ，Ｊ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ－ｌｉｎｅａｇｅ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｉｎ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｔｏ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ＣＤ１９．Ｂｌｏｏｄ １１６，４０９９－４１０２（２０１０）．
４．Ｃｈａｐｕｉｓ，Ａ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ＷＴ１－ｒｅａｃｔｉｖｅ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｃａｎ ｍｅｄｉａｔｅ ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｅｒｓｉｓｔ ｉｎ ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ５，１７４ｒａ２７（２０１３）．
５．Ｃｈａｐｕｉｓ，Ａ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｍｅｌａｎｏｍａ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｐｅｒｓｉｓｔ，ｍｅｄｉａｔｅ ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ａｃｑｕｉｒｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｍｅｍｏｒｙ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ（２０１２）．ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１１１３７４８１０９
６．Ｍｏｒｇａｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ａｆｔｅｒ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１４，１２６－１２９（２００６）．
７．Ｄｕｄｌｅｙ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｄｏｐｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｍｅｌａｎｏｍａ：ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｍｙｅｌｏａｂｌａｔｉｖｅ ｃｈｅｍｏｒａｄｉａｔｉｏｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｒｅｇｉｍｅｎｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６，５２３３－５２３９（２００８）．
８．Ｒｏｂｂｉｎｓ，Ｐ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．Ｔｕｍｏｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｓｙｎｏｖｉａｌ ｃｅｌｌ ｓａｒｃｏｍａ ａｎｄ ｍｅｌａｎｏｍａ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｒｅａｃｔｉｖｅ ｗｉｔｈ ＮＹ－ＥＳＯ－１．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２９，９１７－９２４（２０１１）．
９．Ｓｔｒｏｍｎｅｓ，Ｉ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＲＣ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｒｅｇｉｏｎ ２ ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ １ ｉｎ ｔｕｍｏｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａｄｏｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｂｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｒｔ－ｌｉｖｅｄ ｅｆｆｅｃｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９，１８１２－１８２５（２０１２）．
１０．Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｔ．Ｍ．，Ｒａｇｎａｒｓｓｏｎ，Ｇ．Ｂ．＆ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｐ．Ｄ．Ｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２０，１２４０－１２４８（２００９）．
１１．Ｓａｌｔｅｒ，Ｒ．Ｄ．＆ Ｃｒｅｓｓｗｅｌｌ，Ｐ．Ｉｍｐａｉｒｅｄ ａｓｓｅｍｂｌｙ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｏｆ ＨＬＡ－Ａ ａｎｄ －Ｂ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｉｎ ａ ｍｕｔａｎｔ ＴｘＢ ｃｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄ．ＥＭＢＯ．Ｊ．５，９４３－９４９（１９８６）．
１２．Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ，Ｍ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｕｓｉｎｇ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｍｉｎｏｒ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ａｎｔｉｇｅｎ ＨＡ－２－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ａｌｐｈａ ｊｏｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ １０２，３５３０－３５４０（２００３）．
１３．Ｈｏ，Ｗ．Ｙ．，Ｎｇｕｙｅｎ，Ｈ．Ｎ．，Ｗｏｌｆｌ，Ｍ．，Ｋｕｂａｌｌ，Ｊ．＆ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｐ．Ｄ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ＣＤ８＋ Ｔ－ｃｅｌｌ ｃｌｏｎｅｓ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｎａｉｖｅ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３１０，４０－５２（２００６）．
１４．Ｃｈａｐｕｉｓ，Ａ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ＷＴ１－ｒｅａｃｔｉｖｅ ＣＤ８＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｃａｎ ｍｅｄｉａｔｅ ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｐｅｒｓｉｓｔ ｉｎ ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ５，１７４ｒａ１２７（２０１３）．
１５．Ｌｕｅｓｃｈｅｒ，Ｉ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．ＣＤ８ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｇａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ ｌｉｖｉｎｇ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ ３７３，３５３－３５６（１９９５）．
１６．Ｓｔｏｎｅ，Ｊ．Ｄ．＆ Ｋｒａｎｚ，Ｄ．Ｍ．Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｉｎ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４，２４４（２０１３）．
１７．Ｐｉｔｔｅｔ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．α３ Ｄｏｍａｉｎ Ｍｕｔａｎｔｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ／ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ Ｍｕｌｔｉｍｅｒｓ Ａｌｌｏｗ ｔｈｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ａｖｉｄｉｔｙ Ｔｕｍｏｒ－Ｒｅａｃｔｉｖｅ ＣＤ８ Ｔ Ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７１，１８４４－１８４９（２００３）．
１８．Ｈｏｗｉｅ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｐａｉｒｉｎｇ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ ａｎｄ ｂｅｔａ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ７，３０１ｒａ１３１（２０１５）．

Claims (110)

  1. （ａ）ＴＣＲα鎖可変（Ｖα）ドメインと、配列番号１９９、１～１１、１８１、１８７、１９３、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５及び２４１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲβ鎖可変（Ｖβ）ドメイン；
    （ｂ）配列番号１９６、１２～２２、１７８、１８４、１９０、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２及び２３８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲＶαドメインと、ＴＣＲＶβドメイン；又は
    （ｃ）配列番号１９９、１～１１、１８１、１８７、１９３、２０５、２１１、２１７、２２３、２２９、２３５及び２４１のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲＶαドメインと、配列番号１９６、１２～２２、１７８、１８４、１９０、２０２、２０８、２１４、２２０、２２６、２３２及び２３８のいずれか１つに記載のＣＤＲ３アミノ酸配列を有するＴＣＲＶβドメイン
    を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合し、８．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ５０値を有する、前記Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）。
  2. 前記ＴＣＲが、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合し、９．０以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ５０値を有する、請求項１に記載のＴＣＲ。
  3. 前記ＴＣＲが、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合し、９．５以上のＩＦＮγ産生ｐＥＣ５０値を有する、請求項１又は２に記載のＴＣＲ。
  4. 前記ＴＣＲが更に、ＣＤ８に非依存的に又はＣＤ８の不在下で細胞表面上のＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号５９）：ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）複合体と特異的に結合する、請求項１～３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  5. 前記ＨＬＡが、ＨＬＡ－Ａ＊２０１を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  6. 前記Ｖαドメインが、少なくとも
    （ａ）配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して約９０％の配列同一性；又は
    （ｂ）配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して９２％の配列同一性
    を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  7. 前記Ｖαドメインが、配列番号３４～４４のいずれか１つに存在するＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２とそれぞれ比較して、ＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２のアミノ酸配列に変異を含まない、請求項１～６のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  8. 更に、
    （ｉ）配列番号１９４、１７６、１８２、１８８、２００、２０６、２１２、２１８、２２４、２３０及び２３６のいずれか１つに記載のＣＤＲ１αアミノ酸配列、又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体；及び／又は
    （ｉｉ）配列番号１９５、１７７、１８３、１８９、２０１、２０７、２１３、２１９、２２５、２３１及び２３７のいずれか１つに記載のＣＤＲ２αアミノ酸配列、又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体
    を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  9. 前記Ｖβドメインが、少なくとも
    （ａ）配列番号２３～２５、２７、２８、３０、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して９０％の配列同一性；
    （ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列に対して９２％の配列同一性；
    （ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列に対して９３％の配列同一性；又は
    （ｄ）配列番号２６のアミノ酸配列に対して９５％の配列同一性
    を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  10. 前記Ｖβドメインが、配列番号２３～３３のいずれか１つに存在するＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２と比較してＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２のアミノ酸配列に変異を含まない、請求項１～９のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  11. 更に、
    （ｉ）配列番号１９７、１７９、１８５、１９１、１９７、２０３、２０９、２１５、２２１、２２７、２３３及び２３９のいずれか１つに記載のＣＤＲ１βアミノ酸配列、又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体；及び／又は
    （ｉｉ）配列番号１９８、１８０、１８６、１９２、２０４、２１０、２１６、２２２、２２８、２３４及び２４０のいずれか１つに記載のＣＤＲ２βアミノ酸配列、又は１若しくは２か所のアミノ酸置換を含むその変異体であって、任意に、前記１若しくは２か所のアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換を含む、前記変異体
    を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  12. （ｉ）それぞれ配列番号１９４、１９５、１９６若しくは１２、１９７、１９８、及び１９９若しくは１；
    （ｉｉ）それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８若しくは１８、１７９、１８０、及び１８１若しくは７；
    （ｉｉｉ）それぞれ配列番号１８２、１８３、１８４若しくは２０、１８５、１８６、及び１８７若しくは９；
    （ｉｖ）それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０若しくは２１、１９１、１９２、及び１９３若しくは１０；
    （ｖ）それぞれ配列番号２００、２０１、２０２若しくは１３、２０３、２０４、及び２０５若しくは２；
    （ｖｉ）それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８若しくは１４、２０９、２１０、及び２１１若しくは３；
    （ｖｉｉ）それぞれ配列番号２１２、２１３、２１４若しくは１５、２１５、２１６、及び２１７若しくは４；
    （ｖｉｉｉ）それぞれ配列番号２１８、２１９、２２０若しくは１７、２２１、２２２、及び２２３若しくは６；
    （ｉｘ）それぞれ配列番号２２４、２２５、２２６若しくは１９、２２７、２２８、及び２２９若しくは８；
    （ｘ）それぞれ配列番号２３０、２３１、２３２若しくは２２、２３３、２３４、及び２３５若しくは１１；又は
    （ｘｉ）それぞれ配列番号２３６、２３７、２３８若しくは１６、２３８、２４０、及び２４１若しくは５
    に記載のＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β及びＣＤＲ３βアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  13. 前記Ｖαドメインが、配列番号２５３～２６３及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  14. 前記Ｖαドメインが、配列番号２５３～２６３及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成される、請求項１～１３のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  15. 前記Ｖβドメインが、配列番号２４２～２５２及び２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  16. 前記Ｖβドメインが、配列番号２４２～２５２及び２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成される、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  17. 前記ＴＣＲが、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲα鎖定常ドメインを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  18. 前記ＴＣＲが、配列番号４５又は４６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＴＣＲβ鎖定常ドメインを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  19. 前記ＴＣＲが、Ｖαドメインとα鎖定常ドメインを含むＴＣＲα鎖を含み、
    （ａ）前記Ｖαドメインが、配列番号３４～３５及び３８～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有しており、前記α鎖定常ドメインが、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％の配列同一性を有する；又は
    （ｂ）前記Ｖαドメインが、配列番号３６若しくは３７のアミノ酸配列に対して９２％の配列同一性を有しており、前記α鎖定常ドメインが、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％の配列同一性を有する、
    請求項１～１８のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  20. 前記ＴＣＲが、Ｖαドメインとα鎖定常ドメインを含むＴＣＲα鎖を含み、
    （ａ）前記Ｖαドメインが、配列番号２４２～２５２及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記α鎖定常ドメインが、配列番号４７のアミノ酸配列を含む；又は
    （ｂ）前記Ｖαドメインが、配列番号２４２～２５２及び３４～４４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成され、前記α鎖定常ドメインが、配列番号４７のアミノ酸配列から構成される、
    請求項１～１９のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  21. 前記ＴＣＲが、Ｖβドメインとβ鎖定常ドメインを含むＴＣＲβ鎖を含み、
    （ａ）前記Ｖβドメインが、配列番号２３～２５、２７、２８、３０、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％の配列同一性を有しており、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含むか若しくは配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有する；
    （ｂ）前記Ｖβドメインが、配列番号２９のアミノ酸配列に対して９２％の配列同一性を有しており、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含むか若しくは配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有する；
    （ｃ）前記Ｖβドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列に対して９３％の配列同一性を有しており、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含むか若しくは配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有する；又は
    （ｄ）前記Ｖβドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列に対して９５％の配列同一性を有しており、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含むか若しくは配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％の配列同一性を有する、
    請求項１～２０のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  22. 前記ＴＣＲが、Ｖβドメインとβ鎖定常ドメインを含むＴＣＲβ鎖を含み、
    （ａ）前記Ｖβドメインが、配列番号２５３～２６３及び２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５若しくは４６のアミノ酸配列を含む；
    （ｂ）前記Ｖβドメインが、配列番号２５３～２６３及び２３～３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成され、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５若しくは４６のアミノ酸配列から構成される；
    （ｃ）前記Ｖβドメインが、配列番号２５、２８、２９、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含む；
    （ｄ）前記Ｖβドメインが、配列番号２５、２８、２９、３２及び３３のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成され、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列から構成される；
    （ｅ）前記Ｖβドメインが、配列番号２３、２４、２６、２７、３０及び３１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含み、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４６のアミノ酸配列を含む；又は
    （ｆ）前記Ｖβドメインが、配列番号２３、２４、２６、２７、３０及び３１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列から構成され、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４６のアミノ酸配列から構成される、
    請求項１～２１のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  23. 前記Ｖαドメイン及び前記Ｖβドメインが、配列番号
    （ｉ）それぞれ２５３及び２４２；
    （ｉｉ）それぞれ２５９及び２４８；
    （ｉｉｉ）それぞれ２６１及び２５０；
    （ｉｖ）それぞれ２６２及び２５１；
    （ｖ）それぞれ２５７及び２４６；
    （ｖｉ）それぞれ２５４及び２４３；
    （ｖｉｉ）それぞれ２５５及び２４４；
    （ｖｉｉｉ）それぞれ２５６及び２４５；
    （ｉｘ）それぞれ２５８及び２４７；
    （ｘ）それぞれ２６０及び２４９；
    （ｘｉ）それぞれ２６３及び２５２；
    （ｘｉｉ）それぞれ３４及び２３；
    （ｘｉｉｉ）それぞれ４０及び２９；
    （ｘｉｖ）それぞれ４２及び３１；
    （ｘｖ）それぞれ４３及び３２；
    （ｘｖｉ）それぞれ３５及び２４；
    （ｘｖｉｉ）それぞれ３６及び２５；
    （ｘｖｉｉｉ）それぞれ３７及び２６；
    （ｘｉｘ）それぞれ３９及び２８；
    （ｘｘ）それぞれ４１及び３０；
    （ｘｘｉ）それぞれ４４及び３３；若しくは
    （ｘｘｉｉ）それぞれ３８及び２７
    に記載のアミノ酸配列を含むか又は前記アミノ酸配列から構成される、請求項１～２２のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  24. 更にα鎖定常ドメイン及び／又はβ鎖定常ドメインを含み、前記α鎖定常ドメインが、配列番号４７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記β鎖定常ドメインが、配列番号４５又は４６に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２３に記載のＴＣＲ。
  25. 前記α鎖定常ドメインが存在し、前記Ｖαドメインと前記α鎖定常ドメインが一緒になってＴＣＲα鎖を形成する、請求項２４に記載のＴＣＲ。
  26. 前記β鎖定常ドメインが存在し、前記Ｖαドメインと前記β鎖定常ドメインが一緒になってＴＣＲβ鎖を形成する、請求項２４又は２５に記載のＴＣＲ。
  27. 前記ＴＣＲがｓｃＴＣＲを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  28. 前記ＴＣＲがＣＡＲを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＴＣＲ。
  29. 請求項１～２８のいずれか一項に記載のＴＣＲをコードする単離型ポリヌクレオチド。
  30. 前記ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが、目的宿主細胞に合わせてコドン最適化されている、請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
  31. 前記ポリヌクレオチドが、配列番号４８～５８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するか、前記アミノ酸配列を含むか、又は前記アミノ酸配列から構成されるアミノ酸配列をコードする、請求項２９又は３０に記載のポリヌクレオチド。
  32. 配列番号６４～１６５のいずれか１つに記載のポリヌクレオチド配列を含む、請求項２９～３１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  33. 更に、
    （ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体α鎖であるか若しくはＣＤ８共受容体α鎖を含む、前記ポリヌクレオチド；
    （ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドが、ＣＤ８共受容体β鎖であるか若しくはＣＤ８共受容体β鎖を含む、前記ポリヌクレオチド；又は
    （ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチドと（ｉｉ）のポリヌクレオチド
    を含む、請求項２９～３２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  34. （ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
    （ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと；
    （ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドの間に配置された自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチド
    を含む、請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
  35. 更に、自己切断ペプチドをコードし、
    （１）結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの間；及び／又は
    （２）結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドと、ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの間
    に配置されたポリヌクレオチドを含む、請求項３３又は３４に記載のポリヌクレオチド。
  36. インフレームで機能的に連結された
    （ｉ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲ）；
    （ｉｉ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲ）；
    （ｉｉｉ）（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）；
    （ｉｖ）（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）；
    （ｖ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）；又は
    （ｖｉ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）
    を含み、上記式中、
    ｐｎＣＤ８αは、ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＣＤ８βは、ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＴＣＲは、ＴＣＲをコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＳＣＰ１及びｐｎＳＣＰ２は、各々独立して自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、前記ポリヌクレオチド及び／又は前記コードされる自己切断ペプチドは任意に同一又は異なる、
    請求項３３～３５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  37. 前記コードされるＴＣＲが、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖を含み、前記ポリヌクレオチドが、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドとＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドの間に配置された自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、請求項３３～３６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  38. インフレームで機能的に連結された
    （ｉ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲα）；
    （ｉｉ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲα）；
    （ｉｉｉ）（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲβ）；
    （ｉｖ）（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＴＣＲβ）；
    （ｖ）（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８β）；
    （ｖｉ）（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８α）；
    （ｖｉｉ）（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８α）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８β）；又は
    （ｖｉｉｉ）（ｐｎＴＣＲα）－（ｐｎＳＣＰ１）－（ｐｎＴＣＲβ）－（ｐｎＳＣＰ２）－（ｐｎＣＤ８β）－（ｐｎＳＣＰ３）－（ｐｎＣＤ８α）
    を含み、上記式中、
    ｐｎＣＤ８αは、ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＣＤ８βは、ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＴＣＲαは、ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＴＣＲβは、ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチドであり、
    ｐｎＳＣＰ１、ｐｎＳＣＰ２及びｐｎＳＣＰ３は、各々独立して自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドであり、前記ポリヌクレオチド及び／又は前記コードされる自己切断ペプチドは任意に同一又は異なる、
    請求項３７に記載のポリヌクレオチド。
  39. 発現制御配列に機能的に連結された請求項２９～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
  40. 前記ベクターが、前記ポリヌクレオチドを宿主細胞に送達することが可能である、請求項３９に記載の発現ベクター。
  41. 前記宿主細胞が、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である、請求項３９に記載の発現ベクター。
  42. 前記免疫系細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせである、請求項４１に記載の発現ベクター。
  43. 前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせである、請求項４２に記載の発現ベクター。
  44. 前記ベクターが、ウイルスベクターである、請求項３９～４３のいずれか一項に記載の発現ベクター。
  45. 前記ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター又はγ－レトロウイルスベクターである、請求項４４に記載の発現ベクター。
  46. 請求項２９～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド又は請求項２９～４５のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、前記宿主細胞が、前記ポリヌクレオチドによりコードされるＴＣＲをその細胞表面上に発現し、前記ポリヌクレオチドが、宿主細胞に対して異種である、前記宿主細胞。
  47. 前記Ｖαドメインが、配列番号９７、９８及び１０１～１０７のポリヌクレオチドのいずれか１つに対して少なくとも７５％の配列同一性、又は配列番号９９若しくは１００に対して少なくとも９４％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４６に記載の宿主細胞。
  48. 前記Ｖαドメインが、
    （ａ）配列番号９７～１０７のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号９７～１０７のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成される
    ポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４６又は４７に記載の宿主細胞。
  49. 前記Ｖβドメインが、配列番号７５～７７、７９、８２、８４及び８５のポリヌクレオチドのいずれか１つに対して少なくとも７５％の配列同一性、又は配列番号７８、８０、８１及び８３のポリヌクレオチドのいずれか１つに対して少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４６～４８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  50. 前記Ｖβドメインが、
    （ａ）配列番号７５～８５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号７５～８５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成される
    ポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４６～４９のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  51. 前記ＴＣＲα鎖が、配列番号１１０に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるα鎖定常ドメインを含む、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  52. 前記ＴＣＲα鎖が、
    （ａ）配列番号１１０のポリヌクレオチド配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号１１０のポリヌクレオチド配列から構成される
    ポリヌクレオチドによりコードされるα鎖定常ドメインを含む、請求項４６～５１のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  53. 前記ＴＣＲβ鎖が、配列番号１０８又は１０９に対して少なくとも９９．９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされるβ鎖定常ドメインを含む、請求項４６～５２のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  54. 前記ＴＣＲβ鎖が、
    （ａ）配列番号１０８若しくは１０９のポリヌクレオチド配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号１０８若しくは１０９のポリヌクレオチド配列から構成される
    ポリヌクレオチドによりコードされるβ鎖定常ドメインを含む、請求項４６～５３のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  55. 前記ポリヌクレオチドが、前記ＴＣＲα鎖をコードするポリヌクレオチド配列と前記ＴＣＲβ鎖をコードするポリヌクレオチド配列の間に配置された自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、請求項４６～５４のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  56. 前記コードされる自己切断ペプチドが、
    （ａ）配列番号６０～６３のポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号６０～６３のポリペプチドのいずれか１つの配列から構成される、
    請求項５５に記載の宿主細胞。
  57. 前記自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチドが、
    （ａ）配列番号１６６～１７０のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号１６６～１７０のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成される、
    請求項５５又は５６に記載の宿主細胞。
  58. 前記ＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖が、配列番号１５５～１６５のいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４６～５７のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  59. 前記ＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖が、
    （ａ）配列番号１５５～１６５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号１５５～１６５のポリヌクレオチドのいずれか１つの配列から構成される
    ポリヌクレオチドによりコードされる、請求項４６～５８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  60. 前記コードされるＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖が、配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５８又は５９に記載の宿主細胞。
  61. 前記コードされるＴＣＲα鎖、自己切断ペプチド及びＴＣＲβ鎖が、
    （ａ）配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列を含む；又は
    （ｂ）配列番号４８～５８のポリペプチドのいずれか１つのアミノ酸配列から構成される、
    請求項５８～６０のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  62. 前記宿主細胞が、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である、請求項４６～６１のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  63. 前記免疫系細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせであり、任意に、前記組合せが存在する場合には、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞を含む、請求項６２に記載の宿主細胞。
  64. 前記免疫系細胞が、Ｔ細胞である、請求項６２に記載の宿主細胞。
  65. 前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせである、請求項６４に記載の宿主細胞。
  66. 前記ＴＣＲが、内在性ＴＣＲと比較してより高いＴ細胞上の表面発現を有する、請求項４６～６５のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  67. 更に、
    （ｉ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドがＣＤ８共受容体α鎖であるか若しくはこれを含む、前記異種ポリヌクレオチド；
    （ｉｉ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドであって、任意に、前記コードされるポリペプチドがＣＤ８共受容体β鎖であるか若しくはこれを含む、前記異種ポリヌクレオチド；又は
    （ｉｉｉ）（ｉ）のポリヌクレオチドと（ｉｉ）のポリヌクレオチド
    を含み、任意に、前記宿主細胞がＣＤ４＋Ｔ細胞を含む、請求項４６～６６のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  68. （ａ）ＣＤ８共受容体α鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドと；
    （ｂ）ＣＤ８共受容体β鎖の細胞外部分を含むポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドと；
    （ｃ）（ａ）のポリヌクレオチドと（ｂ）のポリヌクレオチドの間に配置された自己切断ペプチドをコードするポリヌクレオチド
    を含む請求項６７に記載の宿主細胞。
  69. 前記宿主細胞が、
    （ｉ）乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－４６８の腫瘍細胞；
    （ｉｉ）膵腺癌細胞株ＰＡＮＣ－１の腫瘍細胞；
    （ｉｉｉ）乳がん細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１の腫瘍細胞；
    （ｉｖ）ＨＬＡ－Ａ２を発現する骨髄性白血病細胞株Ｋ５６２の腫瘍細胞であって、任意に、前記ＨＬＡ－Ａ２がＨＬＡ－Ａ＊２０１を含む、前記腫瘍細胞；
    （ｖ）ＨＬＡ－Ａ２を発現する大腸がん細胞株ＲＫＯの腫瘍細胞であって、任意に、前記ＨＬＡ－Ａ２がＨＬＡ－Ａ＊２０１を含む、前記腫瘍細胞；又は
    （ｖｉ）（ｉ）～（ｖ）の腫瘍細胞の任意の組み合わせ
    と同時に試料中に存在するときに、前記腫瘍細胞を殺傷することが可能である、請求項４６～６８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
  70. 前記宿主細胞と前記腫瘍細胞が３２：１、１６：１、８：１、４：１、２：１又は１．５：１の宿主細胞：腫瘍細胞比で前記試料中に存在するときに、前記宿主細胞が前記腫瘍細胞を殺傷することが可能である、請求項６９に記載の宿主細胞。
  71. 請求項４６～７０のいずれか一項に記載の宿主細胞と、薬学的に許容される基剤、希釈剤又は賦形剤を含有する組成物。
  72. 宿主ＣＤ４＋Ｔ細胞と宿主ＣＤ８＋Ｔ細胞を含有する、請求項７１に記載の組成物。
  73. 過剰増殖性又は増殖性障害の治療方法であって、前記治療を必要とするヒト対象に、請求項１～２８のいずれか一項に記載のヒトウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）に特異的なＴＣＲを含有する組成物を投与することを含む、前記方法。
  74. 前記ＴＣＲが、宿主細胞の表面で発現され、任意に、前記宿主細胞が、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞であり、更に任意に、前記免疫系細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせである、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記宿主細胞が、請求項４６～７０のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記過剰増殖性又は増殖性障害が、造血器悪性腫瘍又は固形がんである、請求項７３に記載の方法。
  77. 前記造血器悪性腫瘍が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記固形がんが、乳がん、卵巣がん、肺がん、胆道がん、膀胱がん、骨及び軟部組織癌腫、脳腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、大腸腺癌、大腸がん、デスモイド腫瘍、胎児性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮癌、肝臓がん、中皮腫、悪性黒色腫、骨肉腫、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星細胞系腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞がん、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫又は子宮がんから選択される、請求項７７に記載の方法。
  79. 前記ＴＣＲが、ヒトＷＴ１に対する抗原特異的Ｔ細胞応答をクラスＩＨＬＡ拘束的に促進することが可能である、請求項７３～７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記クラスＩＨＬＡ拘束性応答が、抗原処理関連トランスポーター（ＴＡＰ）に非依存的である、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記抗原特異的Ｔ細胞応答が、ＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球（Ｔｈ）応答と、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答の少なくとも一方を含む、請求項７９又は８０に記載の方法。
  82. 前記ＣＴＬ応答が、ＷＴ１を過剰発現する細胞に特異的である、請求項８１に記載の方法。
  83. 過剰増殖性又は増殖性障害をもつ対象の細胞におけるＷＴ１過剰発現を特徴とする病態を治療するための養子免疫療法であって、有効量の請求項４６～７０のいずれか一項に記載の宿主細胞又は請求項７１若しくは７２に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
  84. 前記宿主細胞がエクスビボで改変されている、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記宿主細胞が、前記対象に対して同種細胞、同系細胞又は自家細胞である、請求項８３又は８４に記載の方法。
  86. 前記宿主細胞が、造血前駆細胞又はヒト免疫系細胞である、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記免疫系細胞が、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ダブルネガティブＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、樹状細胞又は任意のその組み合わせである、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記Ｔ細胞が、ナイーブＴ細胞、セントラルメモリーＴ細胞、エフェクターメモリーＴ細胞又は任意のその組み合わせである、請求項８７に記載の方法。
  89. 前記過剰増殖性又は増殖性障害が、造血器悪性腫瘍又は固形がんである、請求項８３～８８のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記造血器悪性腫瘍が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）又は多発性骨髄腫（ＭＭ）から選択される、請求項８９に記載の方法。
  91. 前記固形がんが、乳がん、卵巣がん、肺がん、胆道がん、膀胱がん、骨及び軟部組織癌腫、脳腫瘍、子宮頸がん、結腸がん、大腸腺癌、大腸がん、デスモイド腫瘍、胎児性がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、胃腺癌、多形性膠芽腫、婦人科腫瘍、頭頸部扁平上皮がん、肝臓がん、中皮腫、悪性黒色腫、骨肉腫、膵臓がん、膵管腺癌、原発性星細胞系腫瘍、原発性甲状腺がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞がん、横紋筋肉腫、皮膚がん、軟部組織肉腫、精巣胚細胞腫瘍、尿路上皮がん、子宮肉腫又は子宮がんから選択される、請求項８９に記載の方法。
  92. 前記宿主細胞を非経口投与する、請求項８３～９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記方法が、複数の用量の前記宿主細胞を前記対象に投与することを含む、請求項８３～９２のいずれか一項に記載の方法。
  94. 前記複数の用量を約２～約４週間の投与間隔で投与する、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記宿主細胞を前記対象に約１０７個／ｍ２～約１０１１個／ｍ２の用量で投与する、請求項８３～９４のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記方法が、更にサイトカインを投与することを含む、請求項８３～９５のいずれか一項に記載の方法。
  97. 前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１又は任意のその組み合わせである、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記サイトカインがＩＬ－２であり、前記宿主細胞と同時又は逐次投与される、請求項９７に記載の方法。
  99. サイトカイン投与前に前記対象に前記宿主細胞を少なくとも３回又は４回投与するという条件で、前記サイトカインを逐次投与する、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記サイトカインがＩＬ－２であり、皮下投与される、請求項９７～９９のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記対象が、更に免疫抑制療法を実施中である、請求項８３～１００のいずれか一項に記載の方法。
  102. 前記免疫抑制療法が、カルシニューリン阻害剤、コルチコステロイド、微小管阻害剤、低用量ミコフェノール酸プロドラッグ又は任意のその組み合わせから選択される、請求項１０１に記載の方法。
  103. 前記対象が、非骨髄破壊的又は骨髄破壊的造血細胞移植を受けたことがある、請求項８３～１０２のいずれか一項に記載の方法。
  104. 非骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも３か月後に前記対象に前記宿主細胞を投与する、請求項１０３に記載の方法。
  105. 骨髄破壊的造血細胞移植の少なくとも２か月後に前記対象に前記宿主細胞を投与する、請求項１０３に記載の方法。
  106. 前記対象が、免疫チェックポイント阻害剤及び／又は刺激性免疫チェックポイント剤のアゴニストを投与されたことがあるか又は投与中である、請求項７３～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 請求項４６～７０のいずれか一項に記載の宿主細胞又は請求項７２に記載の組成物を含む、ユニットドーズ製剤。
  108. 前記宿主細胞が、約１０７個／ｍ２～約１０１１個／ｍ２の用量である、請求項１０７に記載のユニットドーズ製剤。
  109. ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）発現又は過剰発現に関連する増殖性又は過剰増殖性障害の治療方法で使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項２９～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項３９～４５のいずれか一項に記載のベクター、請求項４６～７０のいずれか一項に記載の宿主細胞、又は請求項７１若しくは７２に記載の組成物、又は任意のその組み合わせ。
  110. ウィルムス腫瘍タンパク質１（ＷＴ１）発現又は過剰発現に関連する増殖性又は過剰増殖性障害の治療用医薬の製造方法で使用するための、請求項１～２８のいずれか一項に記載のＴＣＲ、請求項２９～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項３９～４５のいずれか一項に記載のベクター、請求項４６～７０のいずれか一項に記載の宿主細胞、又は請求項７１若しくは７２に記載の組成物、又は任意のその組み合わせ。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102375218B1 (ko) 2016-12-08 2022-03-17 이매틱스 바이오테크놀로지스 게엠베하 T 세포 수용체 및 이를 사용하는 면역 요법
CA3203118A1 (en) * 2020-12-31 2022-07-07 Gagan BAJWA Cd8 polypeptides, compositions, and methods of using thereof
WO2024088383A1 (en) * 2022-10-28 2024-05-02 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Anti-wt1/hla antibodies and uses thereof

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5420032A (en) 1991-12-23 1995-05-30 Universitge Laval Homing endonuclease which originates from chlamydomonas eugametos and recognizes and cleaves a 15, 17 or 19 degenerate double stranded nucleotide sequence
US5792632A (en) 1992-05-05 1998-08-11 Institut Pasteur Nucleotide sequence encoding the enzyme I-SceI and the uses thereof
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
GB9518220D0 (en) 1995-09-06 1995-11-08 Medical Res Council Checkpoint gene
ES2292994T3 (es) 2002-03-15 2008-03-16 Cellectis Meganucleasas hibridas y de cadena sencilla y su utilizacion.
EP2522723B1 (en) 2003-01-28 2014-12-03 Cellectis Custom-made meganuclease and use thereof
JP2008527001A (ja) 2005-01-13 2008-07-24 ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー 前立腺幹細胞抗原ワクチンおよびその使用
US8021867B2 (en) 2005-10-18 2011-09-20 Duke University Rationally-designed meganucleases with altered sequence specificity and DNA-binding affinity
EP2210903A1 (en) 2009-01-21 2010-07-28 Monoclonal Antibodies Therapeutics Anti-CD160 monoclonal antibodies and uses thereof
EP2258719A1 (en) 2009-05-19 2010-12-08 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Multiple target T cell receptor
EP3156062A1 (en) 2010-05-17 2017-04-19 Sangamo BioSciences, Inc. Novel dna-binding proteins and uses thereof
JP6120848B2 (ja) 2011-08-15 2017-04-26 メディミューン，エルエルシー 抗ｂ７−ｈ４抗体およびその使用
DK2800811T3 (en) 2012-05-25 2017-07-17 Univ Vienna METHODS AND COMPOSITIONS FOR RNA DIRECTIVE TARGET DNA MODIFICATION AND FOR RNA DIRECTIVE MODULATION OF TRANSCRIPTION
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
EP3031921A1 (en) 2012-12-12 2016-06-15 The Broad Institute, Inc. Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications
JP2016509582A (ja) 2012-12-19 2016-03-31 アンプリミューン， インコーポレイテッド 抗ヒトｂ７−ｈ４抗体およびその使用
EP3375877A1 (en) 2013-11-18 2018-09-19 Crispr Therapeutics AG Crispr-cas system materials and methods
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US10463732B2 (en) 2014-10-03 2019-11-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR) antibodies and methods of use thereof
PL3295951T3 (pl) 2015-02-19 2020-10-05 Compugen Ltd. Przeciwciała anty-pvrig i sposoby ich zastosowania
ES2979088T3 (es) 2015-03-05 2024-09-24 Fred Hutchinson Cancer Center Proteínas de fusión inmunomoduladoras y usos de las mismas
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
US11047011B2 (en) * 2015-09-29 2021-06-29 iRepertoire, Inc. Immunorepertoire normality assessment method and its use
EP3394092A1 (en) * 2015-12-23 2018-10-31 Fred Hutchinson Cancer Research Center High affinity t cell receptors and uses thereof
CN110785432A (zh) * 2017-04-24 2020-02-11 圣拉斐尔医院有限责任公司 Tcr和肽

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