CN113749187A - 含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，涉及饲料添加剂和畜牧养殖领域。所述含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法：1)将特异青霉菌ACCC30443菌株经酶活性诱导固体培养基培养，经酶活性诱导液体培养基在发酵罐培养得到种子液；2)种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；3)将发酵结束后的发酵料粉碎、过筛与成品检测；得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。本产品含有葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，具有两种功能性生物活性酶，产品在畜牧和水产养殖中应用。

Description

含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法
技术领域
本发明涉及含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，具体涉及饲料添加剂和畜牧养殖领域。
背景技术
据大数据显示：2020年我国饲料总产量1390.8万吨，饲料添加剂总量1296.4万吨，氨基酸类饲料添加剂369.7万吨，维生素饲料添加剂164.3万吨，矿物元素饲料添加剂692.6万吨，酶制剂、微生物制剂等新型饲料添加剂保持快速增长趋势，同比去年增加15.1％和22.7％。
我国的养殖现状和未来发展趋势，产品要有食品安全认证和食品安全标记、有生产许可证和批准文号。认证机关和监管单位要将农作物生产的保障性用药、畜牧业的保健与治疗用药监管到位。食品让人们放心,确保营养健康,实现绿色养殖，保障禽畜食品安全。实现食品安全，就要从养殖的基础做起，基础就是饲料：配合饲料、秸秆饲料、发酵饲料等。要生产“无抗饲料”“生物饲料”等，将会解决养殖动物(少生病少死亡)，实现肉蛋奶绿色化和绿色养殖化。
目前生产无抗饲料同时，提出替抗问题，现在，替抗产品有益生菌、酶制剂、中草药、植物精油、植物提取物、酸化剂、微量元素以及功能性蛋白原等。这些均属于传统的抗生素替代品，虽都有一定的抗生素替代效果，但从实际效果、成本、稳定性和人们的认知等角度上看，短期内很难全面替代抗生素。
目前最为推崇的替抗产品：
1)微生物发酵产品抗菌肽：抗菌肽具有广谱抗菌活性和免疫调节活性，属于机体非特异性防御系统的固有组成部分，抗菌肽通常由12～60个氨基酸残基组成，相对分子量在2000道尔顿～7000道尔顿之间，多数抗菌肽分子量是4000道尔顿。研究结果表明：抗菌肽是最好的替抗产品。抗菌肽可以抑制病原菌、消除中和细菌毒素、调节肠道免疫系统、改善肠道健康和促进动物生长方面具有明确的作用，可广泛应用于畜牧业和水产养殖业的生产中。
2)微量元素中的镓、锶、锂抗菌剂：镓离子被细菌吸收，降低细菌存活率，达到抗菌效果。还可以提高动物体的免疫力和肠道健康。锶离子可以促进细胞修复，提高免疫力。锂离子在治疗躁郁和抑郁症，减少动物应激反应。且活性矿物质作为为载体，具有肠道收敛作用，可减少肠绒毛损伤并促其生长。所以说镓、锶、锂和活性矿物质在畜牧业应用上，可以起到抗菌、提高免疫力、改善应激、收敛四位一体的显著效果。从当前的实际使用效果来看，单一功效的产品是很难全面替代抗生素的，替抗产品要想实现真正的“健康养殖”，具有复合型功效替抗方案才是最佳选择。
3)微生物发酵酶制剂中的葡萄糖氧化酶：葡萄糖氧化酶是从特异青霉菌发现的酶。葡萄糖氧化酶能催化：D-葡萄糖+O2—D-葡糖酸+H2O2。为此称葡糖氧化酶。葡萄糖氧化酶是一种氧化还原酶，分子量为160000道尔顿的蛋白，有二个或四个多肽链构成，酶反应的最适pH5-7,最适温度是30-40℃。葡萄糖氧化酶在氧气的存在的条件下能将葡萄糖转化为葡萄糖酸，同时产生过氧化氢。过氧化氢是一种很强的氧化剂。抗菌性是由于反应生成的H2O2具灭菌作用。该酶对葡萄糖具有特异性。由于能定量地生成H2O2，可以作为饲料添加剂，广泛的应用在畜牧和水产养殖业。葡萄糖氧化酶制剂作为添加剂添加到配合饲料中喂养动物，可调解平衡胃肠菌群，清除肠道内致病因子，优化肠道环境，促进饲料的消化吸收，提高食欲，增加采食量，优于益生素。可以预防和治疗沙门氏菌引起的疾病，功效优于抗生素，且无耐药性及残留危害。可以增强机体免疫力，减少疾病发生，保护免疫系统，增强肝脏功能，降低动物体内药物残留。能够快速解除毒素中毒，特别是霉菌毒素中毒，治疗作用优于制霉菌素。且能够耐高温制粒，适合于颗粒饲料加工生产。在动物产品中的防腐保鲜中应用，具有转化葡萄糖和除去残存氧，保持食品的色、香、味的功能，延长了保存时间，无毒无残留，提高产品品质。
4)微生物发酵酶制剂中的过氧化氢酶：过氧化氢酶是原核CAT(主要来源微生物)和真核CAT生物中广泛存在的一类末端氧化酶，在进化过程中植物和动物进化过程中比较保守酶，也叫做触酶，是生物防御系统的关键酶。普遍存在于能呼吸的生物体作为生物体内的重要物质，最主要的功能就是参与活性氧的代谢。在环境特定生理条件或生病等逆境条件下，可导致生物体内的自由基增多，使细胞膜氧化，导致细胞膜的破坏和损伤，该酶可以同谷胱甘肽等一起清除超氧化物歧化酶和阴离子自由基，产生过氧化氢酶，保护细胞免受过氧化物的毒害，可清除体内氧化物质，从而减轻氧活动对细胞的损害。
在以往的研究中，人们对葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶的生物化学反应过程，对生物体的作用机理及应用效果等方面均进行了大量的科学研究，取得了多项科研成果，在畜牧养殖与水产养殖的应用上取得了非常喜人理想结果。葡萄糖氧化酶主要作用机理和作用功效：1)葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，吸收肠道内的氧，使肠道内形成低氧或厌氧环境，可以促进有益菌的繁殖生长，抑制有害菌生长；2)在葡萄糖氧化酶作用下，氧化成葡萄糖酸，能够为肠道提供有机酸，降低肠道PH值，可以提高消化酶活性，改善和提高饲料的转化率。3)葡萄糖酸分解成(H2O2)过氧化氢能够抑菌、杀菌，具有强氧化能力，可以解除霉菌毒素的毒害，增强肝脏抗氧化的能力。4)过氧化氢酶的主要作用机理和作用功效：动物在逆境条件下，过氧化氢酶可以同谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶共同作用清除阴离子自由基，保护肠和肝细胞免受伤害。人们对葡萄氧化酶和过氧化氢酶单体作用功能研究较多，对复合和交互功能研究较少，本专利就是研究其复合和交互作用。起到了1+1≥2的作用，有明显的技术效果。
发明内容
本发明公开了含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，涉及饲料添加剂和畜牧养殖领域。具体的发明是一种含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法：
1、菌种名称及来源：特异青霉菌ACCC30443，从中国食品发酵研究院购买；
2、生物酶系酶活性检测方法；
1)葡萄糖氧化酶检测方法依据本企业制定标准执行，进行检测；
2)过氧化氢酶检测方法依据本企业制定标准执行，进行检测；
3)淀粉酶依据GB 1886.174-2016进行检测；
4)纤维素酶依据NY/T 912-2004进行检测。
发明过程如下：
1)将特异青霉菌ACCC30443菌株,经酶活性诱导固体培养基培养得到固体种子，经酶活性诱导液体培养基在发酵罐中进行液体深层发酵培养得到种子液；
2)种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；
3)将发酵结束后的发酵料粉碎、过筛与成品检测；得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
本产品含有葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，具有两种功能性生物活性酶，产品在畜牧和水产养殖中应用，可以促进动物胃肠道中有益微生物的增殖，调节菌群平衡，促进胃肠道健康；可以增强机体免，改善动物体质，在健康状态下获得高生产性能；同时,还有脱霉剂作用，可消除饲料中霉菌毒素在机体内的蓄积，减少或解除霉菌毒素对机体的伤害；葡萄糖氧化酶能够氧化作用于葡萄糖产生有机酸，为此具有酸化剂作用，可以减少饲料使用量和药物预防程序中抗生素的使用量；使用含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂，能有效的限制和解除过氧化氢在动物体内的积累，大大的减少了过氧化氢对动物细胞的伤害，含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂，是一种具有多种生理功能的无毒、无抗药性、高效、安全、环保、绿色的新型畜牧水产用的饲料添加剂。
具体过程步骤为：
1)将特异青霉菌ACCC30443菌株，在酶活性诱导固体培养基上培养得到固体种子，再将固体种子接种到发酵罐中进行液体深层发酵培养得到种子液，其中出发菌株为：特异青霉菌ACCC30443；酶活性诱导分离固体培养基组成：葡萄糖、小黄米、蛋白胨、桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，经培养得到固体种子；酶活性诱导发酵罐液体培养基组成：蔗糖、硝酸钠、磷氢二钾、硫酸镁、氯化钾、桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，经微生物发酵罐深层培养得到液体种子；酶活性诱导剂：桔子皮粉、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚。
2)将步骤1)得到的种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；固体发酵原料组：麦麸皮，酶活性诱导剂：桔子皮粉、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚；固体发酵全过程需要控温、供氧；
3)步骤2)发酵结束后得到的发酵料粉碎、过筛与成品检测，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
采用特异青霉菌ACCC30443，酶的葡萄糖氧化酶的菌种的酶活性诱导分离固体培养基组成：葡萄糖5.0～7.0％、小黄米28～36克、蛋白胨5.0～7.0％、桔皮提取液1.0～3.0％、聚丙二醇0.001～0.005g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.003～0.007g/L、余量为水。固体培养96小时，孢子数80～100个亿/g，葡萄糖氧化酶酶活性130IU/ml～160IU/g、过氧化氢酶酶活性70IU/ml～100IU/g。
本发明人通过大量科学试验发现并证明：
采用特异青霉菌ACCC30443，最佳的酶的葡萄糖氧化酶的菌种的酶活性诱导分离固体培养基组成为：葡萄糖6.0％、小黄米32克、蛋白胨6.0％、桔皮提取液2.0％、聚丙二醇0.03g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.05g/L、余量为水。固体培养96小时，孢子数100个亿/g，葡萄糖氧化酶酶活性160IU/g、过氧化氢酶酶活性100IU/g。
采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导发酵罐液体培养基组成：：蔗糖5.0～7.0％、硝酸钠1.0～3.0％、磷酸氢二钾0.1～0.3％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钾0.1～0.3％、桔皮提取液1.0～3.0％、聚丙二醇0.003～0.007/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.003～0.007g/L、余量为水、pH值自然；灭菌条件：温度115℃、压力0.08～0.1MPa、时间18min；培养条件。酶活性诱导发酵罐液体培养条件：接种量0.10～0.15g/L；罐压0.03～0.05MPa、通入空气的风量100:100vvm～100：200vvm、转速30～90rpm、温度28℃～32℃；时间48～72h；葡萄糖氧化酶酶活性390IU/ml～480IU/ml、过氧化氢酶酶活性210IU/ml～300IU/ml。
本发明人通过大量科学试验发现并证明：
采用特异青霉菌ACCC30443，最佳的酶活性诱导发酵罐液体培养基组成：蔗糖6.0％、硝酸钠2.0％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.2％、氯化钾0.2％、桔皮提取液2.0％、聚丙二醇0.003g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.005g/L、余量为水、pH值自然；灭菌条件：温度115℃、压力0.08～0.1MPa、时间18min。最佳的酶活性诱导发酵罐液体培养条件：接种量0.15g/L；罐压0.05MPa、通入空气的风量100:150vvm、转速60rpm、温度30℃；时间60h；葡萄糖氧化酶酶活性为480IU/ml、过氧化氢酶酶活性为300IU/ml。
种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；种子液与固体发酵原料比例：40～60:80～100；固体发酵原料为麦麸皮粉，酶活性诱导剂：桔子皮粉8.0份～10.0份、聚丙二醇0.003～0.007份、月桂醇聚氧乙烯醚0.003份～0.007份，进行有氧固体发酵，温度控制29℃～31℃，通入空气的风量100:10vvm～100:50vvm，发酵时间48h～72h。
本发明人通过大量科学试验发现并证明：
最佳的种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；种子液与固体发酵原料重量比例：50:90；固体发酵原料为麦麸皮粉90，酶活性诱导剂：桔子皮粉10.0份、聚丙二醇0.005份、月桂醇聚氧乙烯醚0.005份，进行有氧固体发酵，温度控制30℃，通风100:30vvm，发酵时间60h。
产品粉碎、过筛与成品检测，粉碎目数为50目～70目，pH值3.5～3.7葡萄糖氧化酶酶活性为260～320IU/ml、过氧化氢酶酶活性为160～200IU/ml，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
本发明人通过大量科学试验发现并证明：
最佳的产品粉碎、过筛与成品检测，粉碎目数为60目，PH值3.6、葡萄糖氧化酶酶活性为320IU/ml、过氧化氢酶酶活性为200IU/ml，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
诱导剂：聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚和桔子皮提取液或桔子皮粉的主要功效：
聚丙二醇：无色到淡黄色的粘性液体。不挥发，无腐蚀性。分子量400道尔顿到2050道尔顿。较低分子量聚合物能溶于水，高分子量聚合物仅微溶于水，溶于油类、烃以及脂肪族醇、酮、酯等。其单酯是非离子型的表面活性剂，也可与醇作用生成醚具有消泡剂作用，可以用于酵母菌和氨基酸、酶类等发酵生产中。消泡效率为食用油的数倍至数十倍，并可刺激其代谢产物的增加。
月桂醇聚氧乙烯醚：具有优良的乳化、分散、润湿、增溶、刺激其代谢产物的增加等功能。
桔子皮提取液或桔子皮粉：含有柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、糖类、果胶和维生素等。还含有挥发油(萜、醛、酮、酚、醇、酯、酸及香豆精)。在酸性条件下加热，可以水解生成葡萄糖、鼠李糖，有软化血管的作用。具有降低毛细血管的脆性，保护毛细血管，防止微血管破裂出血的作用，桔皮苷能刺激有关的酶的形成，可以提高酶的活性。桔子皮粉也具有上述提高酶活性的功能。桔子皮粉碎后加入水后过滤得到桔子皮提取液。
本发明中在固体发酵阶段用的酶活性诱导剂为桔子皮粉、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，而在液体发酵中桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，功效是一样的。
本发明含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法及产品，与其他葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品的的现有技术相比较，有着本质的区别：具有以下优点：
1)菌种不同；本专利出发菌株：采用特异青霉ACCC30443(野生菌株)，采用诱导剂：桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，能够诱导代谢出较多葡萄糖氧化酶，同时，也能诱导代谢出较多的过氧化氢酶。其他厂家生产的产品，只含有葡萄糖氧化酶，不含有过氧化氢酶。
2)发酵培养基不同；本发明在采用菌株生产产品中，即：在液体发酵和固体发酵中，均需加入诱导剂：桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，以此提高产品中的葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶含量。其他厂家生产的产品，只是单一强调葡萄糖氧化酶含量，忽视了过氧化氢酶，本专利注重于诱导两个酶种的并存。
3)工艺好：常规的葡萄糖氧化酶饲料添加剂生产，是采用液体生产葡萄糖氧化酶发酵菌液，再用麦麸皮吸附、烘干，得到葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。本专利采用的液固二次发酵法生产，液体发酵产生含有大量的菌体和发酵液，含过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶的酶活，再用发酵液菌种与麦麸皮混合，再进行固体发酵。发酵得出产品含过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶含量高，在固体发酵过程中菌体将发酵底物种的纤维素降解成淀粉，再将淀粉降解成多糖和葡萄糖，在酶的作用下，将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，在其复杂的生化反应中，产生有机酸和过氧化氢(H2O2)，能够抑菌、杀菌，具有强氧化能力，而且含过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶饲料添加剂，有企业标准，生产中严格按照质量标准执行。
4)固体发酵工艺好：在固体有氧发酵过程中，添加诱导剂桔子皮粉量较大，满足通风条件，可以使葡萄糖氧化酶酶活性和过氧化氢酶酶活性较大幅度提高，发酵过程中没有添加诱导剂的对照组，则酶活性较低。并且，发酵达到终点后PH值降低到3.5以下，主要是在特异青霉菌ACCC30443大量增殖和诱导剂的作用下，代谢出酶活较多的葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶和少量的纤维素酶和淀粉酶等酶系，发酵料中的麸皮在纤维素酶的作用下转化成淀粉，在淀粉酶的作用下淀粉转化成葡萄糖，葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，氧化成葡萄糖酸和(H2O2)，故此使得发酵料PH值显著下降。
5)产品好，应用效果好；含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂，可以促进有益菌的繁殖，抑制有害菌的生长。能够提供有机酸，降低肠道PH值，制造肠胃酸性环境；可以提高消化酶活性，改善和提高饲料的转化率。在酶促反应过程中产生的过氧化氢(H2O2)能够抑菌、杀菌，具有强氧化能力；可以解除霉菌毒素的毒害，增强肝脏抗氧化的能力。最主要的是葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶能够复合清理动物在逆境条件下产生的多余阴离子自由基，保护细胞免受过氧化物的毒害。
6)产品应用在畜禽和水产类的动物养殖上有特殊的效果。降低腹泻、尿便、水便等发生；调整肠道微生物菌群平衡，提高免疫力；增强肝脏氧化还原，解除霉菌毒素的中毒；替代部分抗生素。其应用效果明显好于其他不含有过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂。含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂，是幼龄畜禽和水产类养殖动物预防和治疗的腹泻、调节肠胃道微生物菌群、降低肠道PH值、清楚细胞多余自由基、保护肝脏、饲料中减抗、替抗最好的饲料添加剂。
7)含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂作为新型替抗产品其应用效果明显好于其它替抗产品。与现有技术相比较，本专利产品突出的特点是可以饲料中添加量很少，在治理幼雏的腹泻中有特效，成本比较低廉，且改善了饲料的适口性，提高了采食量，提高生产性能，而且性能稳定，性价比高。
具体实施方式
以下对本发明的进一步说明，而不是发明的限制。
实施例1：
含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产分为三步：
1)将特异青霉菌ACCC30443菌种的酶活性诱导与菌种制备和液体种子深层发酵；
采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导分离固体培养基组成，以重量份数计：葡萄糖5.0～7.0％、小黄米28～36克、蛋白胨5.0～7.0％、桔皮提取液1.0～3.0％、聚丙二醇0.001～0.005g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.003～0.007g/L、余量为水。固体培养96小时，孢子数为80～100个亿/g，葡萄糖氧化酶酶活性为130IU/ml～160IU/g、过氧化氢酶酶活性为70IU/ml～100IU/g；
设计为6因素7水平，试验设计和试验结果如下表1：
表1、特异青霉菌ACCC30443诱导分离固体培养基试验设计及试验结果
Figure BDA0003234725010000081
通过表1看出：采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导分离固体培养基组成为：葡萄糖6.0％、小黄米32克、蛋白胨6.0％、桔皮提取液2.0％、聚丙二醇0.003g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.005g/L、余量为水。固体培养96小时，孢子数为100个亿/g，葡萄糖氧化酶酶活性为160IU/g、过氧化氢酶酶活性为100IU/g为最佳。而对照组Ⅰ-Ⅳ中是没有添加诱导剂桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚的对照组，葡萄糖氧化酶酶活性分别为80、120、110、110IU/ml、过氧化氢酶酶活性仅为10、58、57、55IU/ml。
用表1中试验Ⅱ的条件，试验设计和试验结果如下表2：
表2、酶活性诱导发酵液体培养基试验设计与试验结果
因子/水平 试验组Ⅰ 试验组Ⅱ 试验组Ⅲ 对照组
蔗糖(％) 5.0 6.0 7.0 5.0
硝酸钠(％) 1.0 2.0 3.0 1.0
磷酸氢二钾(％) 0.1 0.2 0.3 0.1
硫酸镁(％) 0.1 0.2 0.3 0.1
氯化钾(％) 0.1 0.2 0.3 0.1
桔皮提取液(％) 1 2 3 0
聚丙二醇(g/L) 0.001 0.003 0.005 0
月桂醇聚氧乙烯醚(g/L) 0.003 0.005 0.007 0
接种量0.15(g/L) 0.10 0.15 0.20 0.10
罐压0.05(MPa) 0.03 0.05 0.07 0.03
风量(vvm) 100:100 100:150 100:200 100:100
转速(rpm) 30 60 90 30
温度(℃) 28 30 32 28
时间(h) 48 60 72 48
葡萄糖氧化酶活性(IU/ml) 390 480 390 240
过氧化氢酶酶活性(IU/ml) 210 300 210 30
通过表2看出：采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导发酵液体培养基组成为(以重量百分比计)：蔗糖6.0％、硝酸钠2.0％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.2％、氯化钾0.2％、桔皮提取液2.0％、聚丙二醇0.003g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.005g/L、余量为水、pH值自然；灭菌条件：温度115℃、压力0.08～0.1MPa、时间18min的培养及配方和灭菌条件为最佳，而对照组中是没有添加诱导剂桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚的对照组，葡萄糖氧化酶酶活性分别为240IU/ml、过氧化氢酶酶活性仅为30IU/ml。
试验设计为6因素4水平，试验设计和试验结果如下表3：
2)将表2中试验Ⅱ得到的进行液体种子与固体载体原料混合再进行固体发酵；
将液体种子与固体载体原料混合及其发酵：按照重量百分比计，液体种子与固体载体原料比例为40～60:80～100。固体发酵料组成：麦麸皮粉80份～100％、桔子皮粉8.0％～10.0％、聚丙二醇0.003～0.007％、月桂醇聚氧乙烯醚0.003％～0.007％，进行固体发酵，温度控制29℃～31℃，通风100:10vvm～100:50vvm。固体发酵时间：48h～72h。
试验设计为8因素4水平，试验设计和试验结果如下表3:
表3、发酵液与固体载体原料混合比例及固体发酵条件
Figure BDA0003234725010000101
通过表3可以看出：按照重量百分份数计，最佳的发酵液与固体发酵原料比例为50:90。固体发酵料组成：麦麸皮粉90.0份、桔子皮粉10.0％、聚丙二醇0.005％、月桂醇聚氧乙烯醚00.05％，进行混合，控制条件为：温度控制30℃，通风100:30vvm，发酵时间60h为最佳，在满足上述条件下进行固体发酵，生长态势很好，可以达到产品保证值指标。葡萄糖氧化酶酶活性为320IU/ml、过氧化氢酶酶活性为200IU/ml，而相同的其它条件下，表3中的对照组中是没有添加诱导剂桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚的对照组，葡萄糖氧化酶酶活性分别为160IU/ml、过氧化氢酶酶活性仅为20IU/ml。
在固体发酵过程中，添加诱导剂，满足通风条件，可以使葡萄糖氧化酶酶活性和过氧化氢酶酶活性较大幅度提高，发酵过程中没有添加诱导剂的对照组，则酶活性较低。并且，发酵达到终点后PH值降低到3.5以下，主要是在特异青霉菌ACCC30443大量增殖和诱导剂的作用下，代谢出酶活较多的葡萄糖氧化酶较少的过氧化氢酶和少量的纤维素酶和淀粉酶等酶系，发酵料中的麸皮在纤维素酶的作用下转化成淀粉，在淀粉酶的作用下淀粉转化成葡萄糖，葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下，氧化成葡萄糖酸和(H2O2)，故此使得发酵料PH值显著下降。
3)产品粉碎、过筛与成品检测。
具体过程步骤为：
产品粉碎、过筛与成品检测；
粉碎目数为50目～70目，PH值3.5～3.7；葡萄糖氧化酶酶活性为260～320IU/ml；过氧化氢酶酶活性为160～200IU/ml；得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
产品在饲料中按照0.1％～0.3％添加可以产生有机酸中葡萄糖酸、且可以代谢出多种有机酸，因此也有酸化剂作用，畜禽养殖过程中，应用葡萄糖氧化酶可以减少饲料使用量8.80％～3.29％，可减少抗生素使用量20.0％～30.0％，减少多种胃肠道疾病，全面改善畜禽体质，使畜禽更健康。
产品粉碎普通粉碎机即可，试验结果表明：粉碎目数为50目、60目、70目过筛，60目为最佳。成品检测主要检测葡萄糖酸、葡萄糖氧化酶酶活性和过氧化氢酶酶活性。通过大量的检测实践，本产品发酵后PH值为3.6、葡萄糖氧化酶酶活性为320IU/ml和过氧化氢酶酶活性为200IU/ml，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
实施例2：
将实施例1获得的表3中试验组Ⅰ含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品在断奶仔猪上进行生长性能和腹泻率试验。
1)试验布置：
试验采用单因子随机实验设计，240头健康24日龄的三元杂交断奶子猪分成五组，每组四个重复，每个重复12头猪。试验期预期三天后开展正式试验期，14天实验日粮喂颗粒料实验猪自由采食和饮水，所有免疫及管理严格按照猪场规程执行。
实验动物分组布置
试验组1：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂2.0g/kg基础日粮的饲料；
试验组2：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶葡萄糖氧化酶饲料添加剂1.5g/kg基础日粮的饲料；
试验组3：将添加剂与基础日粮混合，获得辽宁威兰生物技术有限责任公司葡萄糖氧化酶饲料添加剂2.0g/kg基础日粮的饲料；
试验组4：将添加剂与基础日粮混合，获得实施例1中表3中对照组生产得到的添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
对照组：基础日粮(没有添加葡萄糖氧化酶饲料添加剂)饲料。
*本公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂:含有葡萄糖氧化酶活性酶活(300IU/g)，不含有过氧化氢酶酶活性，上述试验的日粮总重量是一样的。
采用上述饲料对断奶仔猪生长性能的影响的试验结果见表5。
表4、含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对断奶仔猪生长性能的影响
Figure BDA0003234725010000121
*：腹泻率＝试验期腹泻仔猪头数/(试验仔猪头数×试验天数)×100％
由表4可以看出，试验组1、2、3、4仔猪平均日增重分别为360.55、352.14、345.77、332.14，对照组为311.31；日增重提高率为15.81％、13.31％、11.07％、6.691％；试验组仔猪平均日增重明显高于对照组。仔猪平均日采食量分别为434.0、401.50、389.25、401.50，对照组为388.25；采食量提高率为11.78％、3.41％、0.25％、3.41％；料肉比分别为：1.14、1.21、1.23、1.21，对照组为1.25，试验组仔猪平均日采食量明显高于对照组。试验组料肉比均低于对照组，其中，试验组腹泻率低于对照组，差别显著，试验组各种指标均达到可应用效果。
添加本专利产品的试验组1、2与对照比较，日增重提高13.3％～15.81％；料肉比下降0.04％～0.11％；腹泻率下降0.75％～1.49％；结果喜人。
实施例3：
将实施例1获得的表3中试验组Ⅲ含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂在断奶仔猪上进行生长性能试验。
1)试验布置：
试验动物选用长白长长白二元杂交猪，将200头试验母猪按母猪预产期、胎次、体重、体况相近的均衡分布原则随机分布五组，每组40头。每头母猪为一个重复，至仔猪断奶，试验包括两个阶段，妊辰后期到分晚、辅乳期到仔猪断奶。7天开始补饲教槽料，21日龄称重,合计28天。
1)试验动物分组布置
试验组1：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组2：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶葡萄糖氧化酶饲料添加剂(1.5g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组3：将添加剂与基础日粮混合，获得辽宁威兰生物技术有限责任公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组4：将添加剂与基础日粮混合，获得实施例1中表3中对照组得到的添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
对照组：基础日粮(没有添加葡萄糖氧化酶饲料添加剂)的饲料；
*辽宁威兰生物技术有限责任公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂:含有葡萄糖氧化酶活性酶活(300IU/g)，不含有过氧化氢酶酶活性。
母猪饲粮添加不同浓度含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对仔猪生长性能的影响试验结果见表5。
表5、母猪饲粮添加不同浓度含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对仔猪生长性能的影响
Figure BDA0003234725010000131
*：腹泻率＝试验期腹泻仔猪头数/(试验仔猪头数×试验天数)×100％
仔猪平均日增重＝窝重/28天
通过表5看出，母猪饲粮中添加含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对仔猪生产性能的影响是正相关的，各组的断奶存活数、断奶窝重、断奶个体数,均有显著差别；试验组1、试验组2、试验组3、试验组4的仔猪平均日增重分别为：2.44kg、2.42kg、2.38kg、2.38kg；对照组为2.28kg，试验组与对照组比，日增重提高率分别为：7.08％、6.14％、4.29％、4.24％，试验差异显著。
在仔猪腹泻方面，多头母猪生产的仔猪腹泻率分别为0.28％、0.31％、0.51％、0.57％，对照组为3.23％，试验组与对照组相比，试验组均没有明显的腹泻现象，试验差异极显著。
添加本专利产品的试验组1、2与对照比较，日增重提高1.90％～2.74％；腹泻率下降2.95％～2.92％；结果喜人。
实施例4：
将实施例1获得的表3中试验组Ⅱ含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂在对12-16海蓝褐色蛋鸡鸡群生产性能的影响试验。
1)试验布置：
试验动物分组布置
试验组1：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组2：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶葡萄糖氧化酶饲料添加剂(1.5g/kg)+基础日粮的饲料；
*试验组3：辽宁威兰生物技术有限责任公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组4：将添加剂与基础日粮混合，获得实施例1中表3中对照组葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
对照组：基础日粮(没有添加葡萄糖氧化酶饲料添加剂)的饲料；
**辽宁威兰生物技术有限责任公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂:含有葡萄糖氧化酶活性酶活(300IU/g)，不含有过氧化氢酶酶活性。
含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对12-16周海蓝褐色蛋鸡鸡群生产性能的影响试验结果见表6。
表6、含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对12-16周海蓝褐色蛋鸡鸡群生产性能的影响
Figure BDA0003234725010000141
Figure BDA0003234725010000151
*：肉鸡试验天数为35天；每组供试鸡数为287只；
*：
Figure BDA0003234725010000152
*：日只单产(g)＝平均重量(g)×产蛋率
由表6可以看出，试验组1、2、3、4海蓝褐色蛋鸡的产蛋数分别为7916枚、7845枚、7684枚、7588枚，对照组为7441枚；总蛋重分别为527.20g、521.69g、510.99g、497.08g、对照组为494.15g，试验组产蛋数和总重量明显高于对照组。
海蓝褐色蛋鸡耗料量分别为1212.6g、1205.0g、1202.0g、1173.3g，对照组为1178.0g；料蛋比分别为：2.31％、2.32％、2.36％、2.37％，对照组为2.39，料蛋比分别下降：3.347％、2.929％、1.271％、0.837，试验组料蛋比均明显低于对照组，其中，试验组死淘率分别为：1.12％、1.28％、1.36％、1.58％，对照组为2.90％，试验组死淘率明显低于对照组，差别显著。
添加本专利产品的试验组1、2与对照组比较，产蛋率提高6.38％～5.44％；料蛋比分别下降：3.347％、2.929％；死淘率下降0.613％～0.558％；结果喜人。
试验组各种指标均达到可应用效果。
实施例5：
将实施例1获得的表3中试验组Ⅱ含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂在肉鸡上进行喂养试验。
1)试验布置：
试验动物分组布置
试验组1：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组2：将添加剂与基础日粮混合，获得本专利产品含过氧化氢酶葡萄糖氧化酶饲料添加剂(1.5g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组3：将添加剂与基础日粮混合，获得辽宁威兰生物技术有限责任公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
试验组4：将添加剂与基础日粮混合，获得实施例1中表3对照组的葡萄糖氧化酶饲料添加剂(2.0g/kg)+基础日粮的饲料；
对照组：基础日粮(没有添加葡萄糖氧化酶饲料添加剂)的饲料；
*辽宁威兰生物技术有限责任公司产品葡萄糖氧化酶饲料添加剂:含有葡萄糖氧化酶活性酶活(300IU/g)，不含有过氧化氢酶酶活性。
2)试验结果：
含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对肉鸡采食量、增重率、料肉比、腹泻程度的影响结果见表7。
表7含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对肉鸡采食量、增重率、料肉比、腹泻程度的影响
Figure BDA0003234725010000161
*：肉鸡试验天数为30天；
*：料肉比下降(％)＝(对照组料肉比—试验组料肉比)/对照组料肉比×100
腹泻指数：粪便评分之和/试验肉鸡只数；
腹泻指数判断标准：
正常；圆柱形，0形；
1、轻微腹泻:稀软，有形:
2、中度腹泻:粘稠、不成形、水份含量高；
3、严重腹泻：液态、不成形、水样稀粪.
3)讨论和结论：
通过表7看出：试验组平均采食量分别为：107.90g、107.50g、107.49g、107.77g，对照组为107.44g，采食效果：试验组1≥试验组3≥试验组2≥对照组。试验组1和验组4有明显的诱食效果。试验组平均日增重分别为：71.90g、71.60g、71.37g、71.40g、71.37g，对照组平均日增重70.00g，试验组与对照组平均日增重率分别为2.71％、2.28％、1.96％、2.00％、1.96％，增重率的顺序为：试验组1≥试验组2≥试验组3≥试验组4≥试验组5≥对照组。
试验组料肉比分别为：1.500：1、1.501：1、1.506；1、1.509：1，对照组料重比为1.535：1。试验组料肉比分别下降3.29％、3.35％、3.29％、2.77％、2.89％，料肉比的下降百分率为：试验组2≥试验组1≥试验组3≥试验组5≥试验组4≥对照。试验组与对照组相比较，均差异性显著。试验组的腹泻指数分别为1.10、1.10、1.15、1.28、1.36，对照组为3.52。治疗腹泻效果：试验组1≥试验组2≥试验组3≥试验组4≥试验组5≥对照组。
试验组1、试验组2和试验组3基本上没有鸡腹泻发生，试验组4和试验组5略有腹泻发生，对照组有腹泻发生。
添加本专利产品的试验组1、2与对照组比较，采食量提高0.56g～0.06g；增重率提高2.71％～2.00％；料肉比分别下降2.23％～2.22％；腹泻指数下降2.41～2.36；成活率提高3.33％～2.93％；结果喜人。试验组各种指标均达到应用效果。
通过肉鸡30天试验可以看出：含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂对肉鸡采食量、增重率、料肉比、腹泻程度均有很好的影响。明显看出含有过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂，可以起到互相促进，起到1+1+1≥3的作用。
与实施例1－5不同之处在于，为提高产品质量，缩短生产周期，申请人还试用了其他单位生产的葡萄糖氧化酶饲料预混料添加剂,其应用效果也很好。

Claims (10)

1.含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：1)将特异青霉菌ACCC30443菌株,经酶活性诱导剂酶活性诱导固体培养基培养得到固体种子，经酶活性诱导剂酶活性诱导液体培养基在发酵罐中进行液体深层发酵培养得到种子液；2)种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；3)将发酵结束后的发酵料粉碎、过筛与成品检测；得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品；酶活性诱导剂：桔子皮粉、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚。
2.含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：
具体过程步骤为：
1)将特异青霉菌ACCC30443菌株，在酶活性诱导固体培养基上培养得到固体种子，再将固体种子接种到发酵罐中进行液体深层发酵培养得到种子液，其中，菌株为：特异青霉菌ACCC30443；酶活性诱导分离固体培养基组成：葡萄糖、小黄米、蛋白胨、桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，经培养得到固体种子；酶活性诱导发酵罐液体培养基组成：蔗糖、硝酸钠、磷氢二钾、硫酸镁、氯化钾、桔皮提取液、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚，经微生物发酵罐深层培养得到液体种子；
2)将步骤1)得到的种子液接种于固体发酵原料和酶活性诱导剂的混合物中进行有氧固体发酵；固体发酵原料组：麦麸皮，酶活性诱导剂：桔子皮粉、聚丙二醇、月桂醇聚氧乙烯醚；固体发酵全过程需要有氧发酵；
3)步骤2)发酵结束后得到的发酵料粉碎，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
3.按照权利要求2所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导分离固体培养培养基组成，以重量份数计：葡萄糖5.0～7.0％、小黄米28～36g/L、蛋白胨5.0～7.0％、桔皮提取液1.0～3.0％、聚丙二醇0.001～0.005g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.003～0.007g/L、余量为水，固体培养96-120小时，孢子数80～100个亿/g，葡萄糖氧化酶酶活性130IU/ml～160IU/g、过氧化氢酶酶活性70IU/ml～100IU/g。
4.按照权利要求2或3所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导分离固体培养培养基组成，以重量份数计：葡萄糖6.0％、小黄米32g/L、蛋白胨6.0％、桔皮提取液2.0％、聚丙二醇0.03g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.05g/L、余量为水；固体培养96小时，孢子数100个亿/g，葡萄糖氧化酶酶活性160IU/g、过氧化氢酶酶活性100IU/g。
5.按照权利要求2所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导发酵罐液体培养基组成，以重量份数计：蔗糖5.0～7.0％、硝酸钠1.0～3.0％、磷酸氢二钾0.1～0.3％、硫酸镁0.1～0.3％、氯化钾0.1～0.3％、桔皮提取液1.0～3.0％、聚丙二醇0.003～0.007/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.003～0.007g/L、余量为水、pH值自然；灭菌条件：温度115℃、压力0.08～0.1MPa、时间18min；培养条件：接种量0.10～0.15g/L；罐压0.03～0.05MPa、通入空气的风量100:100vvm～100：200vvm、转速30～90rpm、温度28℃～32℃；时间48～72h；葡萄糖氧化酶酶活性390IU/ml～480IU/ml、过氧化氢酶酶活性210IU/ml～300IU/ml。
6.按照权利要求2或5所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：采用特异青霉菌ACCC30443，酶活性诱导发酵罐液体培养基组成：蔗糖6.0％、硝酸钠2.0％、磷酸氢二钾0.2％、硫酸镁0.2％、氯化钾0.2％、桔皮提取液2.0％、聚丙二醇0.003g/L、月桂醇聚氧乙烯醚0.005g/L、余量为水、pH值自然；灭菌条件：温度115℃、压力0.08～0.1MPa、时间18min，培养条件：接种量0.15g/L；罐压0.05MPa、通入空气的风量100:150vvm、转速60rpm、温度30℃；时间60h；葡萄糖氧化酶酶活性为480IU/ml、过氧化氢酶酶活性为300IU/ml。
7.按照权利要求2所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：步骤2)中种子液接种固体发酵原料和酶活性诱导剂混合物中进行有氧固体发酵；种子液与固体发酵原料比例：40～60:80～100；
固体发酵原料：麦麸皮粉；
酶活性诱导剂和固体发酵原料组成固体发酵料，酶活性诱导剂为：桔子皮粉8.0份～10.0份、聚丙二醇0.003～0.007份、月桂醇聚氧乙烯醚0.003～0.007份，
进行有氧固体发酵，温度控制29℃～31℃，通风100:10vvm～100:50vvm，发酵时间48h～72h。
8.按照权利要求2或7所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：步骤2)中种子液与固体发酵原料和酶活性诱导剂混合进行有氧固体发酵；
种子液与固体发酵原料比例：50:90；
固体发酵原料麦麸皮粉，
酶活性诱导剂和固体发酵原料组成固体发酵料，酶活性诱导剂为：桔子皮粉10.0份、聚丙二醇0.005份、月桂醇聚氧乙烯醚0.005份，
进行有氧固体发酵，温度控制30℃，通风100:30vvm，发酵时间60h。
9.按照权利要求2所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：产品粉碎，粉碎目数为50目～70目，pH值3.5～3.7葡萄糖氧化酶酶活性为260～320IU/ml、过氧化氢酶酶活性为160～200IU/ml，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
10.按照权利要求2或9所述的含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂的生产方法，其特征在于：产品粉碎、过筛与成品检测，粉碎目数为60目，PH值3.6、葡萄糖氧化酶酶活性为320IU/ml、过氧化氢酶酶活性为200IU/ml，得到含过氧化氢酶的葡萄糖氧化酶饲料添加剂产品。
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CN115606700A (zh) * 2022-11-03 2023-01-17 河北硕博畜牧服务有限公司 防治牛羊运输应激综合征的组合物及其制备方法和应用
CN115989848A (zh) * 2022-12-13 2023-04-21 广东智威农业科技股份有限公司 一种酶组合物应用于制备防止肉鸡霉菌毒素中毒的饲料

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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