CN113739845A - 一种羊栖菜寡糖的使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种羊栖菜寡糖的使用方法，该使用方法包括以下步骤：S1、将羊栖菜寡糖冻干后以0.05‑0.1g/L的浓度稀释；用育苗盘培育1000棵烟草种子。在出苗后6‑8天，将烟苗移栽到72孔育苗盘中，在烟苗长到4叶1心时，选取健壮、长势一致的幼苗移栽到直径为9 cm花盆中，每个实验组处理15盆烟苗。S2、采用灌根法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为40‑60 ml，每隔4‑6d一次，共2‑4次；S3、采取叶面喷施法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为5‑7ml，每隔4‑6d一次，共3‑5次。综合表明羊栖菜寡糖对植株早发快长、促生提质有显著的促进作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种羊栖菜寡糖的使用方法。
背景技术
烟草等是我国非常重要的经济作物，烟草栽培技术对于我国烟草行业的发展以及市场经济的发展有很大的影响。烟草优质高效地栽培可以显著提升烟草的质量与产量，提高烟农及供应商的经济收益。当前，烟草质量不仅关系着种植户的经济利益，还能在一定程度上促进社会经济的健康发展。因此，烟草的科学种植极为重要。
近年来，由于海藻多聚糖在农业生产中具有独特的优势，关于多聚糖的研究逐渐增多，然而关于低聚糖在农业上的应用研究却鲜有报道。研究绿色无害的海藻寡糖对烟草生长提质的作用，对烟草等作物的科学种植具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的是针对以上问题提供一种羊栖菜寡糖的使用方法，促进植株早发快长、促生提质。
为达到上述目的，本发明公开了一种羊栖菜寡糖的使用方法，该使用方法包括以下步骤：
S1、将羊栖菜寡糖冻干后以0.05-0.1g/L的浓度稀释；用育苗盘培育1000棵烟草种子。在出苗后6-8天，将烟苗移栽到72孔育苗盘中，在烟苗长到4叶1心时，选取健壮、长势一致的幼苗移栽到直径为9 cm花盆中，每个实验组处理15盆烟苗。
S2、采用灌根法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为40-60 ml，每隔4-6d一次，共2-4次；
S3、采取叶面喷施法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为5-7 ml，每隔4-6d一次，共3-5次。
其余时间按时浇水，浇水的水量及频率均采用现有技术，在此不再赘述。
施肥2-3周后测定植株幼苗的农艺性状, 农艺性状包括株高、单株叶片数、最大叶长、最大叶宽、叶片鲜重或根鲜重。优选的，测定植株幼苗的农艺性状时，计算各农艺性状的均值及标准差。
植株幼苗的农艺性状具体数据如图1所示。
施肥2-3周后测定植株幼苗的营养生长特性，营养生长特性包括叶绿素含量、总糖含量、总酚含量或总黄酮含量。优选的，测定植株幼苗的营养生长特性时，计算营养生长特性的均值及标准差。
其中，叶绿素含量的测定方法包括以下步骤：
A1、取植株幼苗的叶片剪碎，放入研钵中，加入液氮，研磨碎；
A2、称取步骤A1的产物0.1份，加入4-6份95%乙醇，涡旋成匀浆，将匀浆液在7000-9000 r/min下离心7-9min，取上清液0.4-0.6份，在上清液中加入1-2份95%乙醇，混匀；
A3、分别在440nm，649 nm和665 nm下测定吸光度值，根据公式计算叶绿素a，叶绿素b含量，计算公式为：
叶绿素a浓度Ca（mg/L）=12.71×A665-2.59×A649；
叶绿素b浓度Cb（mg/L）=22.88×A649-4.67×A665；
叶绿素总含量（mg/L）=Ca + Cb。
植株幼苗的叶绿素含量具体数据如图2所示。
总糖含量的测定方法包括以下步骤：
B1、取植株幼苗放置于离心管中，加水配置成提取液，沸水提取25-35min；
B2、离心后，吸取上清液0.05-1.5份置于试管中，并用蒸馏水补齐至1份；
B3、另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1份0.1 mg/ml 的葡萄糖标准品，并用蒸馏水补齐至1份；
B4、在标准品及样品试管中分别加入1份5%苯酚、5份浓硫酸混匀，静置25-35min；
B5、在485 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算可溶性糖含量。
葡萄糖标准曲线如图3所示，根据标准曲线得到方程y = 5.1131x + 0.0058，将样品吸光度代入方程计算样品的可溶性糖含量。
植株幼苗的总糖含量具体数据如图2所示。
总酚含量的测定方法包括以下步骤：
C1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成20-30 mg/ml的溶液；
C2、取步骤C1的产物0.1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1份1 mg/ml 的没食子酸标准品，并用超纯水补至0.1份；
C3、在标准品及样品中加入0.4-0.6份福林酚混匀，静置2.5-3.5min；
C4、在样品中加入1-2份20%Na2CO3溶液，并将标准品及样品稀释到8-12份，避光孵化0.8-1.2份；
C5、在760 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总酚含量。
没食子酸标准曲线如图4所示，根据标准曲线得到方程y = 0.5449x + 0.0121，将样品吸光度代入方程计算样品的多酚含量。
植株幼苗的总酚含量具体数据如图2所示。
总黄酮含量的测定方法包括以下步骤：
D1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成20-30 mg/ml的溶液；
D2、取步骤D1的产物1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.04、0.6、0.8、1份1 mg/ml 的槲皮素或芦丁标准品溶液，并用70%甲醇补至1份；
D3、在样品中加入0.2-0.4份5%的NaNO2溶液，静置4-6min，再加入0.3 ml10%AlCl3溶液，再加入2 ml1mol/L的NaOH溶液；
D4、在510nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总黄酮含量。
槲皮素或芦丁标准曲线如图5所示，根据标准曲线得到方程y = 0.4908x +0.0027，将样品吸光度代入方程计算样品的总黄酮含量。
植株幼苗的总黄酮含量具体数据如图2所示。
综上所述，本发明的有益效果在于：经过羊栖菜寡糖处理的植株在叶绿素含量、可溶性糖含量方面都比对照组有显著增加，且总酚、总黄酮也显著增加，表明植株的抗氧化能力得到提高；综合表明羊栖菜寡糖对植株早发快长、促生提质有显著的促进作用。
附图说明
图1是本发明一种羊栖菜寡糖的使用方法中植株幼苗农艺性状的示意图；
图2是本发明一种羊栖菜寡糖的使用方法中植株幼苗营养生长特性的示意图；
图3是本发明一种羊栖菜寡糖的使用方法中葡萄糖标准曲线的示意图；
图4是本发明一种羊栖菜寡糖的使用方法中没食子酸标准曲线的示意图；
图5是本发明一种羊栖菜寡糖的使用方法中槲皮素或芦丁标准曲线的示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：一种羊栖菜寡糖的使用方法，该使用方法包括以下步骤：
S1、将羊栖菜寡糖冻干后以0.05g/L的浓度稀释；用育苗盘培育1000棵烟草种子。在出苗后6天，将烟苗移栽到72孔育苗盘中，在烟苗长到4叶1心时，选取健壮、长势一致的幼苗移栽到直径为9 cm花盆中，每个实验组处理15盆烟苗。
S2、采用灌根法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为40ml，每隔4d一次，共2次；
S3、采取叶面喷施法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为5 ml，每隔4d一次，共3次。
其余时间按时浇水，浇水的水量及频率均采用现有技术，在此不再赘述。
施肥2周后测定植株幼苗的农艺性状, 农艺性状包括株高、单株叶片数、最大叶长、最大叶宽、叶片鲜重或根鲜重。优选的，测定植株幼苗的农艺性状时，计算各农艺性状的均值及标准差。
植株幼苗的农艺性状具体数据如图1所示。
施肥2周后测定植株幼苗的营养生长特性，营养生长特性包括叶绿素含量、总糖含量、总酚含量或总黄酮含量。优选的，测定植株幼苗的营养生长特性时，计算营养生长特性的均值及标准差。
其中，叶绿素含量的测定方法包括以下步骤：
A1、取植株幼苗的叶片剪碎，放入研钵中，加入液氮，研磨碎；
A2、称取步骤A1的产物0.1份，加入4份95%乙醇，涡旋成匀浆，将匀浆液在7000 r/min下离心7-9min，取上清液0.4份，在上清液中加入1份95%乙醇，混匀；
A3、分别在440nm，649 nm和665 nm下测定吸光度值，根据公式计算叶绿素a，叶绿素b含量，计算公式为：
叶绿素a浓度Ca（mg/L）=12.71×A665-2.59×A649；
叶绿素b浓度Cb（mg/L）=22.88×A649-4.67×A665；
叶绿素总含量（mg/L）=Ca + Cb。
植株幼苗的叶绿素含量具体数据如图2所示。
总糖含量的测定方法包括以下步骤：
B1、取植株幼苗放置于离心管中，加水配置成提取液，沸水提取25min；
B2、离心后，吸取上清液0.05份置于试管中，并用蒸馏水补齐至1份；
B3、另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1份0.1 mg/ml 的葡萄糖标准品，并用蒸馏水补齐至1份；
B4、在标准品及样品试管中分别加入1份5%苯酚、5份浓硫酸混匀，静置25min；
B5、在485 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算可溶性糖含量。
植株幼苗的总糖含量具体数据如图2所示。
总酚含量的测定方法包括以下步骤：
C1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成20 mg/ml的溶液；
C2、取步骤C1的产物0.1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1份1 mg/ml 的没食子酸标准品，并用超纯水补至0.1份；
C3、在标准品及样品中加入0.4份福林酚混匀，静置2.5min；
C4、在样品中加入1份20%Na2CO3溶液，并将标准品及样品稀释到8份，避光孵化0.8份；
C5、在760 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总酚含量。
植株幼苗的总酚含量具体数据如图2所示。
总黄酮含量的测定方法包括以下步骤：
D1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成20mg/ml的溶液；
D2、取步骤D1的产物1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.04、0.6、0.8、1份1 mg/ml 的槲皮素或芦丁标准品溶液，并用70%甲醇补至1份；
D3、在样品中加入0.2份5%的NaNO2溶液，静置4min，再加入0.3 ml10%AlCl3溶液，再加入2 ml1mol/L的NaOH溶液；
D4、在510nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总黄酮含量。
植株幼苗的总黄酮含量具体数据如图2所示。
实施例2：一种羊栖菜寡糖的使用方法，该使用方法包括以下步骤：
S1、将羊栖菜寡糖冻干后以0.08g/L的浓度稀释；用育苗盘培育1000棵烟草种子。在出苗后7天，将烟苗移栽到72孔育苗盘中，在烟苗长到4叶1心时，选取健壮、长势一致的幼苗移栽到直径为9 cm花盆中，每个实验组处理15盆烟苗。
S2、采用灌根法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为50ml，每隔5d一次，共2-4次；
S3、采取叶面喷施法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为6 ml，每隔5d一次，共4次。
其余时间按时浇水，浇水的水量及频率均采用现有技术，在此不再赘述。
施肥2.5周后测定植株幼苗的农艺性状, 农艺性状包括株高、单株叶片数、最大叶长、最大叶宽、叶片鲜重或根鲜重。优选的，测定植株幼苗的农艺性状时，计算各农艺性状的均值及标准差。
植株幼苗的农艺性状具体数据如图1所示。
施肥2.5周后测定植株幼苗的营养生长特性，营养生长特性包括叶绿素含量、总糖含量、总酚含量或总黄酮含量。优选的，测定植株幼苗的营养生长特性时，计算营养生长特性的均值及标准差。
其中，叶绿素含量的测定方法包括以下步骤：
A1、取植株幼苗的叶片剪碎，放入研钵中，加入液氮，研磨碎；
A2、称取步骤A1的产物0.1份，加入5份95%乙醇，涡旋成匀浆，将匀浆液在8000 r/min下离心8min，取上清液0.5份，在上清液中加入1.5份95%乙醇，混匀；
A3、分别在440nm，649 nm和665 nm下测定吸光度值，根据公式计算叶绿素a，叶绿素b含量，计算公式为：
叶绿素a浓度Ca（mg/L）=12.71×A665-2.59×A649；
叶绿素b浓度Cb（mg/L）=22.88×A649-4.67×A665；
叶绿素总含量（mg/L）=Ca + Cb。
植株幼苗的叶绿素含量具体数据如图2所示。
总糖含量的测定方法包括以下步骤：
B1、取植株幼苗放置于离心管中，加水配置成提取液，沸水提取25-35min；
B2、离心后，吸取上清液0.08份置于试管中，并用蒸馏水补齐至1份；
B3、另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1份0.1 mg/ml 的葡萄糖标准品，并用蒸馏水补齐至1份；
B4、在标准品及样品试管中分别加入1份5%苯酚、5份浓硫酸混匀，静置30min；
B5、在485 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算可溶性糖含量。
植株幼苗的总糖含量具体数据如图2所示。
总酚含量的测定方法包括以下步骤：
C1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成25 mg/ml的溶液；
C2、取步骤C1的产物0.1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1份1 mg/ml 的没食子酸标准品，并用超纯水补至0.1份；
C3、在标准品及样品中加入0.5份福林酚混匀，静置3min；
C4、在样品中加入1.5份20%Na2CO3溶液，并将标准品及样品稀释到10份，避光孵化1份；
C5、在760 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总酚含量。
植株幼苗的总酚含量具体数据如图2所示。
总黄酮含量的测定方法包括以下步骤：
D1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成25 mg/ml的溶液；
D2、取步骤D1的产物1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.04、0.6、0.8、1份1 mg/ml 的槲皮素或芦丁标准品溶液，并用70%甲醇补至1份；
D3、在样品中加入0.3份5%的NaNO2溶液，静置5min，再加入0.3 ml10%AlCl3溶液，再加入2 ml1mol/L的NaOH溶液；
D4、在510nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总黄酮含量。
植株幼苗的总黄酮含量具体数据如图2所示。
实施例3：一种羊栖菜寡糖的使用方法，该使用方法包括以下步骤：
S1、将羊栖菜寡糖冻干后以0.1g/L的浓度稀释；用育苗盘培育1000棵烟草种子。在出苗后8天，将烟苗移栽到72孔育苗盘中，在烟苗长到4叶1心时，选取健壮、长势一致的幼苗移栽到直径为9 cm花盆中，每个实验组处理15盆烟苗。
S2、采用灌根法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为60ml，每隔6d一次，共4次；
S3、采取叶面喷施法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为7 ml，每隔6d一次，共5次。
其余时间按时浇水，浇水的水量及频率均采用现有技术，在此不再赘述。
施肥2-3周后测定植株幼苗的农艺性状, 农艺性状包括株高、单株叶片数、最大叶长、最大叶宽、叶片鲜重或根鲜重。优选的，测定植株幼苗的农艺性状时，计算各农艺性状的均值及标准差。
植株幼苗的农艺性状具体数据如图1所示。
施肥3周后测定植株幼苗的营养生长特性，营养生长特性包括叶绿素含量、总糖含量、总酚含量或总黄酮含量。优选的，测定植株幼苗的营养生长特性时，计算营养生长特性的均值及标准差。
其中，叶绿素含量的测定方法包括以下步骤：
A1、取植株幼苗的叶片剪碎，放入研钵中，加入液氮，研磨碎；
A2、称取步骤A1的产物0.1份，加入6份95%乙醇，涡旋成匀浆，将匀浆液在9000 r/min下离心9min，取上清液0.6份，在上清液中加入2份95%乙醇，混匀；
A3、分别在440nm，649 nm和665 nm下测定吸光度值，根据公式计算叶绿素a，叶绿素b含量，计算公式为：
叶绿素a浓度Ca（mg/L）=12.71×A665-2.59×A649；
叶绿素b浓度Cb（mg/L）=22.88×A649-4.67×A665；
叶绿素总含量（mg/L）=Ca + Cb。
植株幼苗的叶绿素含量具体数据如图2所示。
总糖含量的测定方法包括以下步骤：
B1、取植株幼苗放置于离心管中，加水配置成提取液，沸水提取35min；
B2、离心后，吸取上清液1.5份置于试管中，并用蒸馏水补齐至1份；
B3、另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1份0.1 mg/ml 的葡萄糖标准品，并用蒸馏水补齐至1份；
B4、在标准品及样品试管中分别加入1份5%苯酚、5份浓硫酸混匀，静置35min；
B5、在485 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算可溶性糖含量。
植株幼苗的总糖含量具体数据如图2所示。
总酚含量的测定方法包括以下步骤：
C1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成30 mg/ml的溶液；
C2、取步骤C1的产物0.1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1份1 mg/ml 的没食子酸标准品，并用超纯水补至0.1份；
C3、在标准品及样品中加入0.4-0.6份福林酚混匀，静置3.5min；
C4、在样品中加入2份20%Na2CO3溶液，并将标准品及样品稀释到12份，避光孵化1.2份；
C5、在760 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总酚含量。
植株幼苗的总酚含量具体数据如图2所示。
总黄酮含量的测定方法包括以下步骤：
D1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成30 mg/ml的溶液；
D2、取步骤D1的产物1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.04、0.6、0.8、1份1 mg/ml 的槲皮素或芦丁标准品溶液，并用70%甲醇补至1份；
D3、在样品中加入0.4份5%的NaNO2溶液，静置6min，再加入0.3 ml10%AlCl3溶液，再加入2 ml1mol/L的NaOH溶液；
D4、在510nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总黄酮含量。
植株幼苗的总黄酮含量具体数据如图2所示。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和替换，这些改进和替换也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将羊栖菜寡糖冻干后以0.05-0.1g/L的浓度稀释；
S2、采用灌根法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为40-60 ml，每隔4-6d一次，共2-4次；
S3、采取叶面喷施法对植株幼苗进行施肥处理，每株剂量为5-7ml，每隔4-6d一次，共3-5次。
2.如权利要求1所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，所述植株幼苗采用出苗6-8天长到4叶1心时的烟草幼苗。
3.如权利要求1所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，施肥2-3周后测定植株幼苗的农艺性状, 农艺性状包括株高、单株叶片数、最大叶长、最大叶宽、叶片鲜重或根鲜重。
4.如权利要求3所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，测定植株幼苗的农艺性状时，计算各农艺性状的均值及标准差。
5.如权利要求1所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，施肥2-3周后测定植株幼苗的营养生长特性，营养生长特性包括叶绿素含量、总糖含量、总酚含量或总黄酮含量。
6.如权利要求5所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，测定植株幼苗的营养生长特性时，计算营养生长特性的均值及标准差。
7.如权利要求5所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，叶绿素含量的测定方法包括以下步骤：
A1、取植株幼苗的叶片剪碎，放入研钵中，加入液氮，研磨碎；
A2、称取步骤A1的产物0.1份，加入4-6份95%乙醇，涡旋成匀浆，将匀浆液在7000-9000r/min下离心7-9min，取上清液0.4-0.6份，在上清液中加入1-2份95%乙醇，混匀；
A3、分别在440nm，649 nm和665 nm下测定吸光度值，根据公式计算叶绿素a，叶绿素b含量，计算公式为：
叶绿素a浓度Ca（mg/L）=12.71×A665-2.59×A649；
叶绿素b浓度Cb（mg/L）=22.88×A649-4.67×A665；
叶绿素总含量（mg/L）=Ca + Cb。
8.如权利要求5所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，总糖含量的测定方法包括以下步骤：
B1、取植株幼苗放置于离心管中，加水配置成提取液，沸水提取25-35min；
B2、离心后，吸取上清液0.05-1.5份置于试管中，并用蒸馏水补齐至1份；
B3、另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1份0.1 mg/ml的葡萄糖标准品，并用蒸馏水补齐至1份；
B4、在标准品及样品试管中分别加入1份5%苯酚、5份浓硫酸混匀，静置25-35min；
B5、在485 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算可溶性糖含量。
9.如权利要求5所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，总酚含量的测定方法包括以下步骤：
C1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成20-30 mg/ml的溶液；
C2、取步骤C1的产物0.1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1份1 mg/ml的没食子酸标准品，并用超纯水补至0.1份；
C3、在标准品及样品中加入0.4-0.6份福林酚混匀，静置2.5-3.5min；
C4、在样品中加入1-2份20%的Na2CO3溶液，并将标准品及样品稀释到8-12份，避光孵化0.8-1.2份；
C5、在760 nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总酚含量。
10.如权利要求5所述的羊栖菜寡糖的使用方法，其特征在于，总黄酮含量的测定方法包括以下步骤：
D1、将冻干植株幼苗使用70%甲醇溶解，配成20-30 mg/ml的溶液；
D2、取步骤D1的产物1份，另取6支干净的试管，分别加入0、0.2、0.04、0.6、0.8、1份1mg/ml的槲皮素或芦丁标准品溶液，并用70%甲醇补至1份；
D3、在样品中加入0.2-0.4份5%的NaNO2溶液，静置4-6min，再加入0.3 ml10%AlCl3溶液，再加入2 ml1mol/L的NaOH溶液；
D4、在510nm下测定吸光度值，制作标准曲线，根据制作的标准曲线计算总黄酮含量。
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