CN113736697A - 一株预防或治疗结肠炎的乳双歧杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了乳双歧杆菌XLTG11及其应用。该菌株属于Bifidobacterium lactis，分类命名Bifidobacterium lactis XLTG11，保藏编号为CGMCC No.18738，于2019年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明提供的乳双歧杆菌XLTG11可通过抑制TLR4/MYD88/NF‑κB信号通路的激活调节炎症细胞因子、改善肠道屏障功能并调节肠道微生物群，从而缓解DSS诱导的结肠炎。此外，乳双歧杆菌XLTG11对环磷酰胺（CTX）所致小鼠免疫抑制模型小鼠具有增强免疫作用。

Description

一株预防或治疗结肠炎的乳双歧杆菌及其应用
技术领域：本发明涉及一株乳双歧杆菌及其应用，其属于生物技术领域。
背景技术：炎症性肠病(IBD)是一种慢性且易复发的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(crohn's disease,CD)两种疾病类型。虽然IBD在西方国家发病率最高，而近年来随着工业的发展，亚洲、非洲及南美洲等国家的IBD发病率急剧上升。IBD的具体发病机制尚不清楚，但越来越多的数据表明，遗传易感性、免疫反应异常、肠道屏障受损和肠道菌群失衡在IBD的发展中起着重要作用。氨基水杨酸盐、免疫抑制剂和生物药物等传统治疗药物通常会产生严重的副作用，如头痛、恶心和感染，因此，开发一种安全有效的治疗方法来缓解IBD症状是很重要的。
肠道微生物在人类能量代谢和免疫过程中起着至关重要的作用，越来越多的证据表明，肠道微生物失调与某些人类疾病有关，如肥胖、过敏、IBD和2型糖尿病等疾病。肠道微生物的组成与宿主免疫系统密切相关，厚壁菌门和拟杆菌门是肠道微生物中含量最高的两个菌门，与肠道健康有着紧密的联系。研究发现IBD患者肠道中厚壁菌门的相对丰度增加，而拟杆菌门的相对丰度下降。且有研究证明，与健康受试者相比，UC患者的潜在致病菌(大肠杆菌和变形菌门)相对丰度增加。致病菌入侵肠上皮细胞，刺激炎症，破坏肠上皮屏障的完整性，并触发肠道炎症反应，因此，肠道微生物可能是UC治疗的一个重要潜在靶点。
益生菌是一类定植于人类肠道的活的微生物，对肠道健康有益，尤其是具有干预肠道炎症作用的乳酸菌和双歧杆菌。双歧杆菌在减少条件病原体的丰度和定植、维持宿主微生物稳态、保护肠道黏膜屏障的完整性和调节肠道炎症方面发挥其特定作用。既往研究发现，短双歧杆菌可通过抑制炎症细胞因子、增强肠上皮屏障功能和调节肠道微生物群有效减轻DSS诱导的结肠炎。Din等人表明双歧杆菌ATCC29521可通过调节miRNA相关的紧密连接蛋白和NF-κB通路以及在一定程度上恢复菌群失调来缓解DSS引起的溃疡性结肠炎。然而，乳双歧杆菌改善结肠炎以及增强机体免疫方面却鲜见报道。
发明内容：
本发明自健康儿童肠道筛选获得一株新的乳双歧杆菌XLTG11，该乳双歧杆菌属于Bifidobacterium lactis，分类命名Bifidobacterium lactis XLTG11，保藏编号为CGMCCNo.18738，于2019年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏单位的地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
本发明的所述乳双歧杆菌XLTG11生物学特征如下：革兰氏阳性，厌氧，不运动，无芽孢，菌落光滑，凸圆，边缘完整，乳脂呈白色。
所述乳双歧杆菌XLTG11在pH2.5的人工胃液中消化3小时(存活率75.01％)，之后继续在pH8.0的人工消化液中消化11小时，其存活率高达89.75％，具有良好的胃肠道消化液耐受性，能够以活的状态进入人体肠道，发挥健康功效。
本发明所述乳双歧杆菌XLTG11，其对DSS诱导的小鼠结肠炎具有缓解作用，显著缓解了小鼠体重减轻、DAI评分和结肠缩短情况，显著降低了MPO活性、脾脏重量和结肠组织损伤程度，且具有剂量依赖性。
乳双歧杆菌XLTG11可显著降低促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)水平，提高抗炎细胞因子IL-10水平；高剂量乳双歧杆菌XLTG11可显著上调紧密连接蛋白(claudin-1、occludin和ZO-1)的表达，抑制TLR4/MYD88/NF-κB信号通路的激活。
补充乳双歧杆菌XLTG11使肠道微生物群的多样性有所增加，并对DSS引起的肠道微生物群紊乱进行调节。
乳双歧杆菌XLTG11可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB信号通路的激活调节炎症细胞因子、改善肠道屏障功能并调节肠道微生物群，从而缓解DSS诱导的结肠炎。
乳双歧杆菌XLTG11可提高小鼠足跖肿胀程度，可以增加CTX小鼠胸腺指数及细胞因子IL-2、TNF-α水平，增强淋巴细胞功能发挥免疫调节作用。
乳双歧杆菌XLTG11具有增强机体免疫功能。通过对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)致免疫低下小鼠模型灌服乳双歧杆菌XLTG11探讨其对机体胸腺及脾脏指数、细胞免疫功能、小肠黏膜组织病理变化及炎症因子的影响。
进一步，本发明提供了一种预防和/或治疗结肠炎、或增强免疫调节功能的产品，所述产品优选为药物，也可以为食品等，所述产品包括权利要求1所述的乳双歧杆菌XLTG11。所述产品使用时，乳双歧杆菌XLTG11的剂量为1×106-1×109cfu。
本发明还提供了一种含有权利要求1所述乳双歧杆菌XLTG11的菌剂以及所述菌剂的制备方法，所述菌剂的制备方法包括：将乳双歧杆菌XLTG11在添加了0.05％半胱氨酸盐酸盐的改良MRS培养基中37℃条件下厌氧培养18h，传代培养，乳双歧杆菌XLTG11通过离心获得，用无菌磷酸盐缓冲盐水洗涤3次后分别以1×107和1×108CFU/mL浓度重悬于PBS缓冲液中。
本发明所述乳双歧杆菌XLTG11以及所述菌剂还可以与其他益生菌等混合使用，共同预防和/或治疗结肠炎、或增强免疫调节功能。所述结肠炎优选溃疡性结肠炎。
附图说明：
图1乳双歧杆菌XLTG119对DSS诱导小鼠结肠炎症状的影响。(A)体重；(B)DAI评分；(C)结肠长度；(D)MPO活性；(E)脾脏指数。NC：正常对照组；MC：模型对照组；BL：低剂量乳双歧杆菌XLTG11；BH：高剂量乳双歧杆菌XLTG11。所有数据均以平均值±SD表示。不同字母表示各组间有统计学差异(P<0.05)。
图2乳双歧杆菌XLTG11对结肠组织病理学分析的影响。(A)组织学图像；(B)组织学评分。NC：正常对照组；MC：模型对照组；BL：低剂量乳双歧杆菌XLTG11；BH：高剂量乳双歧杆菌XLTG11。所有数据均以平均值±SD表示。不同字母表示各组间有统计学差异(P<0.05)。
图3乳双歧杆菌XLTG11对炎症细胞因子的影响。(A)IL-10；(B)IL-1β；(C)TNF-α和(D)IL-6.NC，NC：正常对照组；MC：模型对照组；BL：低剂量乳双歧杆菌XLTG11；BH：高剂量乳双歧杆菌XLTG11。所有数据均以平均值±SD表示。不同字母表示各组间有统计学差异(P<0.05)。
图4 qRT-PCR检测乳双歧杆菌XLTG11对结肠组织中claudin-1(A)、occlusion(B)和ZO-1(C)mRNA表达的影响。NC：正常对照组；MC：模型对照组；BL：低剂量乳双歧杆菌XLTG11；BH：高剂量乳双歧杆菌XLTG11。所有数据均以平均值±SD表示。不同字母表示各组间有统计学差异(P<0.05)。
图5 qRT-PCR检测乳双歧杆菌XLTG11对结肠组织中TLR4(A)、MYD88(B)和NF-κB(C)mRNA表达的影响。NC：正常对照组；MC：模型对照组；BL：低剂量乳双歧杆菌XLTG11；BH：高剂量乳双歧杆菌XLTG11。所有数据均以平均值±SD表示。不同字母表示各组间有统计学差异(P<0.05)。
图6乳双歧杆菌XLTG11对肠道菌群结构和组成的影响。(A)可观察的物种数；(B)辛普森指数；(C)门水平上的肠道微生物群组成；(D)属水平上的肠道菌群组成。NC：正常对照组；MC：模型对照组；BL：低剂量乳双歧杆菌XLTG11；BH：高剂量乳双歧杆菌XLTG11。
图7 Spearman对UC相关症状、相关基因表达与显性肠道菌群的相关性分析。*和**表示相关性显著(分别为P<0.05和P<0.01)。
图8 XLTG11不同剂量组对CTX小鼠胸腺和脾指数的影响。*P<0.05vs Controlgroup；#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001vs Model group
图9光学显微镜下观察小肠黏膜组织苏木精-伊红(HE)染色(×100)
图10小肠黏膜组织病理变化(绒毛高度)。*P<0.05vs Control group；#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001vs Model group
图11小肠杯状细胞数目。*P<0.05vs Control group；#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001vs Model group
图12各组小鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平。*P<0.05vs Controlgroup；#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001vs Model group
具体实施方式：
实施例1乳双歧杆菌的筛选与鉴定
自健康儿童肠道中分离一株菌株，经16s rRNA全长测序鉴定和质谱鉴定，该菌株属于Bifidobacterium lactis，分类命名Bifidobacterium lactis XLTG11，保藏编号为CGMCC No.18738，于2019年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏单位的地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
乳双歧杆菌XLTG11的生物学特征如下：革兰氏阳性，厌氧，不运动，无芽孢，菌落光滑，凸圆，边缘完整，乳脂呈白色。
测试乳双歧杆菌XLTG11的人工胃液和肠液耐受性，在pH2.5的人工胃液中消化3小时(存活率75.01％)，之后继续在pH8.0的人工消化液中消化11小时，其存活率高达89.75％，具有良好的胃肠道消化液耐受性，能够以活的状态进入人体肠道，发挥健康功效。
实施例2菌悬液制备
菌株在添加了0.05％半胱氨酸盐酸盐的改良MRS培养基(中国青岛希望生物公司，HB0384-5)中37℃条件下厌氧培养18h，实验前传代培养2次。乳双歧杆菌XLTG11通过离心获得(6000×g，4℃10min)，用无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤3次后分别以1×107和1×108CFU/mL浓度重悬于PBS缓冲液中。
实施例3乳双歧杆菌XLTG11对DSS诱导的结肠炎症状的影响
8周龄无特定病原体(SPF)C57BL/6雄性小鼠购自北京维塔尔河实验动物科技有限公司，所有动物在实验前均适应环境一周，期间饲养温度为23±2℃，湿度为50％±10％，12h光-暗循环。将小鼠随机分为四组：正常对照组(NC)、模型对照组(MC)、低剂量乳双歧杆菌XLTG11组(BL)和高剂量乳双歧杆菌XLTG11组(BH)。实验过程中，BL和BH组分别每日口服一次低剂量的乳双歧杆菌XLTG11(1×107CFU/d)和高剂量乳双歧杆菌XLTG11(1×108CFU/d)。NC组和MC组以相同的喂养频率每日注射200μLPBS一次。从第15天至第21天，除NC组外，所有小鼠均饮用含2.5％DSS的饮用水中以诱导结肠炎。在DSS处理期间，每天测量所有小鼠的体重，并根据体重减轻情况、大便稠度和总血量记录DAI评分。实验结束后，小鼠禁食12h，麻醉处死。所有小鼠取眼球采血并于4℃、3500rpm条件下离心15分钟取血清，于-80℃保存。在无菌条件下收集结肠内容物，于-80℃贮存，用于肠道微生物分析。测量结肠长度并用生理盐水冲洗，切除的结肠组织立即固定在4％多聚甲醛中进行组织病理学分析，其余组织保存在-80℃进行实时定量PCR。取脾脏并称重，脾指数计算如下：脏器重量(g)/体重(g)×100。
DSS诱导期间的体重如图1A中所示：对照组体重稳定增加，而其他组小鼠的体重从第17天到实验结束均呈下降趋势，低剂量和高剂量处理组则在一定程度上减缓了这一趋势。DAI评分的变化如图1B所示：对照组的DAI评分保持在0，而模型组的DAI评分较对照组相比呈现快速上升趋势，低剂量组和高剂量组的DAI评分增量则显著小于模型组。四组小鼠的结肠长度如图1C所示：与对照组相比，模型组结肠长度显著减少(P<0.05)，微生物干预后，DSS引起的结肠缩短症状明显减轻(P<0.05)。如图1D所示，与对照组相比，模型组小鼠的MPO活性显著升高(P<0.05)，与模型组相比，低剂量组和高剂量组小鼠的MPO显著降低(P<0.05)并呈剂量依赖性，对照组和高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。各处理组脾脏指数见图1E：，模型组小鼠的脾脏指数显著高于对照组(P<0.05)，且两种剂量的微生物给药均缓解了这些变化。以上结果表明乳双歧杆菌XLTG11有效地缓解了DSS诱导的结肠炎症状。
实施例4乳双歧杆菌XLTG11对结肠组织病理学分析的影响
远端结肠用4％多聚甲醛固定48h，石蜡包埋后切成5μm切片。切片经二甲苯脱蜡，然后用苏木精和伊红(H&E)染色进行观察(组织学评分的计算方法参考Tan,Y.et.al.,TheAmerican journal of the medical sciences 2018,355,377-386；Zhao,H.W.et.al.,World journal of gastroenterology 2017,23,999-1009)。
各处理组小鼠的结肠组织学变化如图2A所示，对照组小鼠结肠组织显示杯状细胞及上皮组织完整，而模型组小鼠结肠组织的隐窝结构和杯状细胞消失，炎症细胞浸润。经乳双歧杆菌XLTG11处理后，低剂量组和高剂量组小鼠结肠组织结构损伤改善，炎症细胞浸润减少。此外，如图2B所示，与模型组相比，两种剂量的乳双歧杆菌均显著降低了DSS引起的组织学评分(P<0.05)，尤其与低剂量组相比，高剂量组表现出更强的降低病理评分的能力。这些结果表明，高剂量乳双歧杆菌XLTG11显著改善了DSS诱导的组织形态学变化，并降低了组织学评分。
实施例5乳双歧杆菌XLTG11对炎症细胞因子的影响、对claudin-1、occludin和ZO-1 mRNA表达的影响、对TLR4/MYD88/NF-κB信号通路的影响
对不同处理组小鼠的结肠组织进行称重，以配置好的试剂为匀浆介质，按重量体积比1:19按进行研磨，用于MPO的测定，根据说明，使用ELISA试剂盒(中国泉州凯努奥迪生物技术有限公司)检测血清中白细胞介素IL-1β、IL-10、IL-6和肿瘤坏死因子TNF-α的水平。
各处理组小鼠血清中炎症细胞因子的水平如图3所示，模型组小鼠血清中促炎细胞因子(IL-1β、TNF-α和IL-6)水平显著高于对照组。而经两种剂量乳双歧杆菌处理的小鼠血清中IL-1β和IL-6的水平低于模型组(P<0.05)，且高剂量组小鼠血清中IL-6水平与对照组相比无显著差异(P>0.05)，DC组血清IL-10水平明显低于对照组(P<0.05)，而高剂量可显著逆转IL-10水平(P<0.05)，但低剂量组和模型组变化不显著(P>0.05)，上述数据显示相比于低剂量组，给予高剂量乳双歧杆菌XLTG11可有效抑制DSS引起的炎症症状。
结肠紧密连接蛋白(claudin-1、occludin、ZO-1)mRNA表达量如图4所示，与对照组相比，模型组claudin-1、ZO-1的表达水平显著降低(p<0.05)，表明上皮完整性已受损。与模型组相比，高剂量组显著提高了claudin-1和ZO-1的mRNA表达水平(P<0.05)，但在低剂量组和模型组中变化显著(P>0.05)。此外，模型组occludin-1的mRNA表达水平与对照组相比无显著差异(P>0.05)。值得注意的是，高剂量组经过大剂量补充乳双歧杆菌XLTG11后occludin-1的表达水平明显高于模型组。这些结果表明，补充高剂量的乳双歧杆菌XLTG11可以减轻DSS诱导的肠道屏障功能损伤。
为了研究TLR4/MYD88/NF-κB信号通路是否在乳双歧杆菌XLTG11的抗炎机制中发挥重要作用，对其相关基因的mRNA表达水平进行测量，结果如图5所示，与对照组相比，DSS给药显著增加了TLR4、MYD88和NF-κB的mRNA表达水平(P<0.05)。相反，高剂量组中TLR4和NF-κB基因表达明显下调(P<0.05)，但低剂量组和模型组之间没有显著差异(P>0.05)。此外，与模型组相比，两种剂量乳双歧杆菌XLTG11都显著下调了MYD88的mRNA表达(P<0.05)，特别是高剂量组经过乳酸双歧杆菌XLTG11处理后，其水平与NC组相似(P>0.05)。结果表明，高剂量的乳双歧杆菌XLTG11可通过抑制TLR4/MYD88/NF-κB信号通路的激活发挥其抗炎功能。
实施例6乳双歧杆菌XLTG11对肠道微生物群结构和组成的影响
通过定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白基因(claudin-1、occlusion和ZO-1)和TLR4信号通路相关基因(TLR4、MYD88和NF-κB)的相对mRNA水平，GAPDH基因作为内参基因。用RNAiso Plus((Takara Biotechnology，大连，中国)提取结肠总RNA，用2000C超微紫外分光光度计(Thermo Fisher Scientific Inc.，美国)进行定量，将提取好的RNA参照Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit RNA试剂盒(Roche,德国,04897030001).。进行反转录。qRT-PCR按照Bio-RadCFX96实时PCR系统(Bio-Rad，福斯特市，CA，美国)上的说明进行，上机检测参照试剂盒Stormstar SybrGreen qPCR Master Mix(DBI Bioscience,德国,DBI-2143)说明书进行，数据结果采用2–ΔΔCt法进行分析。
使用试剂盒(Omega Bio-Tek，Norcross，GA，USA)提取每组小鼠(n＝3)的结肠微生物群基因DNA。对细菌16S rDNA的V3-V4区域使用338F和806R引物进行PCR扩增：(5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3')(正向引物)和(5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3')(反向引物)。使用AxyPrep DNA凝胶提取试剂盒(Axygen Biosciences，Union City，CA，USA)纯化得到的PCR产物，并使用Qubit2.0荧光计(Life Technologies，Carlsbad，CA，USA)进行定量。测序在IlluminaMiseq平台(Illumina Inc.,San Diego,CA,USA)上进行。原始数据与Flash(版本1.2.11)软件合并，并由QIIME(V1.9.1)过滤以收集高质量标签。有效标签由UCLUST(版本1.2.22)聚类为相似度≥97％OTU[25]。通过PyNAST软件(版本1.2)对OTU基于Greengenes数据库进行分析，并在门和属水平上标注分类信息。
所有数据均使用SPSS 22.0软件进行分析，表示为平均值±标准差(SD)。使用单向方差分析确定统计差异，然后采用Duncan多范围检验。优势肠道微生物与UC相关症状之间的关系通过spearman相关系数评价，P<0.05为统计学上有显著差异。
本研究对16S rDNA基因的V3-V4高变区进行测序，分析了不同组结肠内容物的肠道微生物群。如图6A与图6B所示，模型组小鼠的可观察到的物种数低对照组，且辛普森指数高于对照组，表明DSS摄入导致微生物多样性下降，而乳双歧杆菌XLTG11的补充在一定程度上缓解了这些变化。
如图6C所示，在门水平上，与对照组相比，模型组小鼠拟杆菌门的相对丰度降低，而厚壁菌门、大肠杆菌和变形杆菌的相对丰度增加。然而，在低剂量组和高剂量组中，这些变化恢复到与对照组相似的水平。此外与模型组相比，两种剂量的乳双歧杆菌XLTG11干预措施中疣微菌的相对丰度均以剂量依赖性方式增加。如图6D所示，在属水平上模型组的志贺氏杆菌、罗姆布茨菌、ASF356、葡萄球菌和螺杆菌的相对丰度高于对照组。然而，低剂量和高剂量组都在一定程度上扭转了这一趋势。此外，低剂量和高剂量乳双歧杆菌增加了Muribaculaceae、瘤胃菌UCG-014、毛螺菌NK4A136组和阿克曼氏菌的相对丰度，相比于模型组，只有高剂量乳双歧杆菌XLTG11降低了拟普雷沃菌的相对丰度。特别是与对照组相比，模型组中Alistipes和Turicibacter的相对丰度显著增加，而这种趋势仅在高剂量组中有所缓解。有趣的是，低剂量和高剂量的乳双歧杆菌XLTG11都降低了乳杆菌的水平。
为了确定肠道微生物在减少炎症生物标志物方面的作用，本研究在属水平上分析了UC相关症状、相关基因表达于肠道优势菌群之间的相关性。如图7所示，拟杆菌的相对丰度与IL-1β、TNF-α、TLR4、NF-κB呈显著正相关，与IL-10、ZO-1呈显著负相关。未分类的Muribaculaceae菌属相对丰度与IL-10和ZO-1呈正相关，而与IL-1β、TNF-α、TLR4、MYD88和NF-κB呈负相关。IL-10和ZO-1水平与Alistipes菌属呈显著负相关，与TLR4和NF-κB呈显著正相关。螺杆菌的相对丰度与IL-1β呈正相关。乳杆菌相对丰度与TNF-α呈显著负相关，与ZO-1呈显著正相关。ASF356的相对丰度与促炎细胞因子(IL-1β、TNF-α和IL-6)和TLR4/MYD88/NF-κB信号通路呈正相关，与IL-10呈负相关。毛螺菌科NK4A136的相对丰度与IL-1β和TNF-α呈正相关，与ZO-1呈负相关。罗姆布茨菌属的相对丰度与IL-6和NF-κB呈正相关，与Claudin-1和ZO-1呈负相关。Turicibacter菌属的相对丰度与ZO-1呈显著负相关。
实施例7免疫抑制模型建立
SPF级BALB/c小鼠，6到8周龄，雄性，体重18-22g。由辽宁长生生物技术股份有限公司提供，动物许可证号：SCXK(辽)2020-0001。BALB/c小鼠随机分为7组，每组8只。空白组和模型组小鼠每只灌服生理盐水0.4mL，阳性对照组小鼠每只灌服LEV(10mg·kg-1)，乳双歧杆菌XLTG11不同剂量组小鼠每只分别灌胃给予0.4mL乳双歧杆菌XLTG11溶液1×109、1×108、1×107、1×106cfu，各组小鼠均连续灌服28d，期间自由饮食。在灌胃给予后第23，24天，模型组，阳性对照组和乳双歧杆菌XLTG11不同剂量组小鼠腹腔注射CTX(40mg·kg-1)，空白组腹腔注射等体积的生理盐水。
实施例8免疫器官指数的测定
于灌胃给予后第28天，各组小鼠称重后脊椎脱臼处死，摘取胸腺和脾脏称重，计算胸腺和脾脏指数。胸腺或脾脏指数＝胸腺或脾脏质量(mg)/小鼠体质量(g)。
XLTG11不同剂量组对CTX小鼠胸腺和脾指数的影响如表1、图8所示。与空白组比较，模型组小鼠胸腺指数和脾指数显著降低(P<0.05)。与模型组比较，阳性对照组小鼠胸腺指数增加(P<0.05)，XLTG11各剂量组小鼠胸腺指数均增加(P<0.05)，且呈剂量依赖性。
表1 XLTG11不同剂量组对CTX小鼠胸腺和脾指数的影响(
Figure BDA0003242412170000101
n＝8)Tab.1Effectof different dose groups of XLTG11 on thymus and spleen indexes in CTX mice(
Figure BDA0003242412170000102
n＝8)
Figure BDA0003242412170000103
Note:*P<0.05,***P<0.001,vs Control group；#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001vsModel group
实施例9迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity,DTH)的测定
于灌胃给予后第23天，各组小鼠腹腔注射2％(v/v)的绵羊红细胞(SRBC)0.2mL致敏。于灌胃给予后第27天，用游标卡尺测量左后足趾厚度，在测量部位皮下注射20％(V/V)的SRBC每只20μL，24h后再次测量左后足趾部位厚度，同一部位多次测量取平均值。以注射前后的足趾厚度差值来表示DTH的反应程度。
XLTG11不同剂量组对CTX小鼠足跖厚度的影响如表2所示。与空白组比较，模型组小鼠足跖厚度显著降低(P<0.05)，XLTG11(1×109cfu)组小鼠足跖厚度显著增加(P<0.05)。与模型组比较，阳性对照组小鼠足跖厚度显著增加(P<0.01)，XLTG11各剂量组小鼠足跖厚度均增加(P<0.05)。
表2 XLTG11不同剂量组对CTX小鼠足跖厚度的影响(
Figure BDA0003242412170000104
n＝8)
Figure BDA0003242412170000105
Figure BDA0003242412170000111
Note:*P<0.05,vs Control group；#P<0.05,##P<0.01,###P<0.001vs Model group
实施例10小肠黏膜组织病理变化
颈椎脱臼法处死小鼠后，采集各组小鼠的小肠黏膜组织，4％多聚甲醛固定，经脱水、包埋、切片等步骤制作石蜡切片，进行常规HE染色，光学显微镜下观察小肠黏膜组织病理变化。
各组小鼠HE染色结果见图9。空白组小鼠小肠黏膜组织结构完整，绒毛粗细均匀，排列整齐。模型组小鼠小肠黏膜组织损伤，肠壁变薄，绒毛变细，绒毛长短不一且排列稀疏。阳性对照组和XLTG11各剂量组小鼠小肠黏膜组织损伤均有改善，绒毛病变程度减轻。随着剂量增加，小鼠的小肠黏膜损伤情况得到缓解，呈剂量依赖性，以XLTG11(1×109cfu)效果最明显。
实施例11小肠黏膜绒毛高度的测定
使用实施例10的小肠黏膜组织切片，选取小肠组织的目的区域进行100倍成像，使用Image-Pro Plus 6.0分析软件，以毫米作为标准单位，分别测量每张切片中5根完整肠绒毛高度(Villus height)，并求出平均值。
各组小鼠小肠黏膜绒毛高度测定结果见图10。与空白组比较，模型组小鼠小肠绒毛高度显著降低(P<0.001)。与模型组比较，阳性对照组小鼠小肠绒毛高度增加(P<0.05)，XLTG11各剂量组小鼠小肠绒毛高度增加(P<0.05)。
实施例12小肠杯状细胞数目的测定
制片步骤同实施例11，将切片经过碘酸雪夫氏(PAS)染色，光镜下观察小肠上皮内杯状细胞(Goblet cell number)形态分布，选取小肠组织的目的区域进行100倍成像，使用Image-Pro Plus 6.0分析软件，以毫米作为标准单位，计数每张切片中5根肠绒毛上的杯状细胞数量以及对应的上皮长度，并计算出单位长度杯状细胞数量＝杯状细胞数量/长度。
各组小鼠杯状细胞数目结果见表3、图11。与空白组相比，模型组小鼠杯状细胞数目降低(P<0.05)。与模型组相比，阳性对照组小鼠杯状细胞数目明显增加(P<0.01)，XLTG11各剂量组小鼠杯状细胞数目增加(P<0.05)。
表3小肠杯状细胞数目(
Figure BDA0003242412170000121
n＝8)
Figure BDA0003242412170000122
Note:*P<0.05,vs Control group；#P<0.05,##P<0.01vs Model group
实施例13血清中细胞因子水平的测定
各组小鼠在末次灌胃30min后摘眼球取全血，3000r·min-1离心10min，取血清分装-80℃冰箱冷冻待测。采用ELISA试剂盒检测血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平，具体操作步骤按说明书进行。
各组小鼠血清中细胞因子结果见表4、图12。与空白组比较，模型组小鼠血清中IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平降低(P<0.05)。与模型组比较，阳性对照组小鼠血清中IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平增加(P<0.05)，实验1组和实验2组小鼠IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平增加(P<0.05)，实验3组小鼠IgA、IgG、IL-2、TNF-α水平增加(P<0.05)，XLTG11(1×106cfu)，实验4组小鼠IgA、IL-2、TNF-α水平增加(P<0.05)。
Figure BDA0003242412170000131
表4各组小鼠血清IgA、IgG、IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平(
Figure BDA0003242412170000132
n＝8)
Note：*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001,vs Control group；#P＜0.05,##P＜0.01,###P＜0.001,vs Model group

Claims (10)

1.一株乳双歧杆菌Bifidobacterium lactis XLTG11，其特征在于：保藏编号为CGMCCNo.18738。
2.权利要求1所述乳双歧杆菌XLTG11在制备预防和/或治疗结肠炎的产品中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述结肠炎为溃疡性结肠炎。
4.权利要求1所述乳双歧杆菌XLTG11在制备调节肠道微生物群的产品中的应用。
5.权利要求1所述乳双歧杆菌XLTG11在制备抑制TLR4/MYD88/NF-κB信号通路的激活调节炎症细胞因子的产品中的应用。
6.权利要求1所述乳双歧杆菌XLTG11在制备增强免疫功能产品中的应用。
7.如权利要求2-6所述的应用，所述产品为药物。
8.一种预防和/或治疗结肠炎、或增强免疫调节功能的药物，其特征在于，所述药物包括权利要求1所述的乳双歧杆菌XLTG11。
9.权利要求8所述的药物，其特征在于，乳双歧杆菌XLTG11的剂量为1×106-1×109cfu。
10.一种含有权利要求1所述乳双歧杆菌XLTG11的菌剂，其特征在于，所述菌剂的制备方法包括：将乳双歧杆菌XLTG11在添加了0.05％半胱氨酸盐酸盐的改良MRS培养基中37℃条件下厌氧培养18h，传代培养，乳双歧杆菌XLTG11通过离心获得，用无菌磷酸盐缓冲盐水洗涤3次后分别以1×107和1×108CFU/mL浓度重悬于PBS缓冲液中。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110893194A (zh) * 2019-11-20 2020-03-20 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99在抑制肠道炎症方面的新应用
CN114568703A (zh) * 2022-02-24 2022-06-03 重庆市天友乳业股份有限公司 一株乳双歧杆菌的新用途
CN114698587A (zh) * 2022-03-02 2022-07-05 杭州嫒仁生物技术有限公司 MRJPs对小鼠免疫和肠道微生物调节的模型建立方法及用途
CN115053864A (zh) * 2022-06-24 2022-09-16 内蒙古大学 一种构建绵羊肠炎动物模型的方法及其应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117701456A (zh) * 2023-12-22 2024-03-15 善恩康生物科技（苏州）有限公司 乳双歧杆菌、其制剂及其在生殖损伤或疾病中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011051760A1 (en) * 2009-11-02 2011-05-05 Compagnie Gervais Danone Method for reducing gastro-intestinal inflammation using bifidobacterium animalis bacteria or a fermented dairy product comprising such bacteria
CN107723257A (zh) * 2017-09-20 2018-02-23 深圳市晨光乳业有限公司 一种动物双歧杆菌及其食品组合物
CN108570429A (zh) * 2018-05-08 2018-09-25 西藏高原之宝牦牛乳业股份有限公司 一种动物双歧杆菌及其制备方法
CN110893194A (zh) * 2019-11-20 2020-03-20 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99在抑制肠道炎症方面的新应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011051760A1 (en) * 2009-11-02 2011-05-05 Compagnie Gervais Danone Method for reducing gastro-intestinal inflammation using bifidobacterium animalis bacteria or a fermented dairy product comprising such bacteria
CN102711778A (zh) * 2009-11-02 2012-10-03 热尔韦法国达能公司 利用动物双歧杆菌细菌或含有这种细菌的发酵乳制品减轻胃肠炎症的方法
CN107723257A (zh) * 2017-09-20 2018-02-23 深圳市晨光乳业有限公司 一种动物双歧杆菌及其食品组合物
CN108570429A (zh) * 2018-05-08 2018-09-25 西藏高原之宝牦牛乳业股份有限公司 一种动物双歧杆菌及其制备方法
CN110893194A (zh) * 2019-11-20 2020-03-20 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99在抑制肠道炎症方面的新应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NANA WANG等: "Alleviation Effects of Bifidobacterium animalis subsp. lactis XLTG11 on Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis in Mice", 《MICROORGANISMS》 *
姜岩世等: "动物双歧杆菌NMC对小鼠溃疡性结肠炎的预防作用", 《中国奶牛》 *
李俊洁等: "双歧杆菌调理和改善肠道相关疾病作用的研究进展", 《食品科学》 *
马微微等: "乳双歧杆菌 XLTG11 对小鼠免疫功能的影响", 《食品与发酵工业》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110893194A (zh) * 2019-11-20 2020-03-20 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99在抑制肠道炎症方面的新应用
CN110893194B (zh) * 2019-11-20 2023-03-14 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 乳双歧杆菌bl-99在抑制肠道炎症方面的新应用
CN114568703A (zh) * 2022-02-24 2022-06-03 重庆市天友乳业股份有限公司 一株乳双歧杆菌的新用途
CN114698587A (zh) * 2022-03-02 2022-07-05 杭州嫒仁生物技术有限公司 MRJPs对小鼠免疫和肠道微生物调节的模型建立方法及用途
CN115053864A (zh) * 2022-06-24 2022-09-16 内蒙古大学 一种构建绵羊肠炎动物模型的方法及其应用

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