CN113735915B - 一种异核金属铱-铼配合物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种异核金属铱‑铼配合物及其制备方法与应用，异核金属铱‑铼配合物以能量依赖的途径进入细胞，并且选择性靶向溶酶体，对HeLa、HepG2、A549和顺铂耐药株A549R细胞具有良好的抗肿瘤活性，诱导肿瘤细胞发生凋亡，可以作为靶向肿瘤溶酶体而非传统DNA的一种抗肿瘤药物。

Description

一种异核金属铱-铼配合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于化学生物学领域，具体涉及一种异核金属铱(III)-铼(I)配合物及其制备方法及抗肿瘤应用。
背景技术
癌细胞的代谢与正常细胞有显著的差别，其主要通过糖酵解而非氧化磷酸化来获得能量，这一现象称为Warburg效应。因此，癌细胞比正常细胞中有大量的质子产生。为避免细胞内累积的质子酸化，癌细胞激活多种酸去除途径，来促进细胞溶质碱化和细胞外酸化。其中，溶酶体的pH值保持在4.5-5，而胞质的pH值为7-7.5，这种显著的酸碱度差异表明溶酶体不仅是降解生物大分子的场所，也是良好的质子储存室。癌细胞溶酶体的体积和数量的增加，把细胞内质子储存在溶酶体中，有效抑制有害酸化，酸碱度稳态重新达到平衡。因此，破坏溶酶体的完整性，扰乱癌细胞的pH平衡，是治疗癌症的一个手段。同时，溶酶体膜通透化，可导致组织蛋白酶和其他水解酶从溶酶体释放到胞质，从而诱导细胞凋亡。因此，设计靶向溶酶体的抗肿瘤药物，是治疗癌症的有效手段。
顺铂及其衍生物在抗肿瘤方面取得了很大成功，但由于其自身严重的毒副作用和耐药性，限制了这种化合物在临床上的进一步发展。
发明内容
本发明提供一种异核金属铱(III)-铼(I)配合物及其制备方法和作为抗肿瘤药物的应用，制备的异核金属铱(III)-铼(I)配合物诱导肿瘤细胞发生凋亡，可以作为靶向肿瘤溶酶体而非传统DNA的一种抗肿瘤药物。
本发明提供一种异核金属铱(III)-铼(I)配合物，阳离子结构式如下：
其中，
阴离子为PF6 -。
具体地，该种异核金属铱(III)-铼(I)配合物具有以下1～3任一阳离子结构：
本发明还提供所述异核金属铱(III)-铼(I)配合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.由1,10-菲咯啉-5,6-二胺和4-吡啶甲醛在无水乙醇中加热反应，冷却后浓缩，加水析出沉淀，过滤、洗涤、干燥得到主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉；
S2.由IrCl3.3H2O和环金属配体在乙二醇乙醚与去离子水的混合溶剂中，N2保护下，加热反应，冷却后过滤、洗涤、干燥得到铱前体反应物，即[Ir(C^N)2Cl]2；
S3.由[Ir(C^N)2Cl]2和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉在甲醇与二氯甲烷的混合溶剂中，N2保护下，加热反应，冷却后加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，浓缩，加入乙醚析出固体，过滤、洗涤、干燥得到环金属铱中间体；
S4.由Re(CO)5Cl和金属配体红菲啰啉(DIP)在甲苯中，N2保护下，加热反应后再旋干得到Re(DIP)(CO)3Cl，再与三氟甲磺酸银在乙腈中，N2保护下，进行再加热反应，冷却后过滤，滤液浓缩后，再加入饱和NH4PF6水溶液搅拌2h，加入水析出固体，过滤、洗涤、干燥得到Re(DIP)(CO)3(CH3CN)；
S5.由环金属铱中间体和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)在丙酮中，N2保护下，加热反应，冷却后加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，浓缩，加入乙醚析出固体，固体经硅胶柱层析分离提纯，干燥得到异核金属铱(III)-铼(I)配合物。
步骤S1中1,10-菲咯啉-5,6-二胺和4-吡啶甲醛的摩尔比为1:1～1.2；加热反应的条件为：温度70～80℃，时间20～24h。
步骤S2中IrCl3.3H2O和环金属配体的摩尔比为1:2～2.2，环金属配体为2-苯基吡啶(ppy)、2-(2-噻吩)吡啶(thpy)、2-(2,4-二氟苯基)吡啶(dfppy)；加热反应的条件为：温度110～125℃，时间20～24h；乙二醇乙醚与去离子水的混合溶剂是乙二醇乙醚与去离子水按照体积比3:1混合得到。
步骤S3中[Ir(C^N)2Cl]2和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉的摩尔比为1:2～2.5；加热反应的条件为：温度60～65℃，时间4～5h；甲醇与二氯甲烷的混合溶剂是甲醇与二氯甲烷按照体积比2:1混合得到。
步骤S4中Re(CO)5Cl和金属配体(DIP)的摩尔比为1:1～1.2；加热反应的条件为：温度100～110℃，时间6～8h；Re(DIP)(CO)3Cl与三氟甲磺酸银的摩尔比为1:1～1.2，再加热反应的条件为：温度80～85℃，时间20～24h。
步骤S5中环金属铱中间体和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔比为1:1～1.2；加热反应的条件为：温度55～60℃，时间20～24h。
本发明中饱和NH4PF6水溶液均是过量添加，即步骤S3中饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是[Ir(C^N)2Cl]2的摩尔量的2倍以上，步骤S4中饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(CO)5Cl的摩尔量的1倍以上，步骤S5中饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔量的2倍以上。
本发明还提供所述异核金属铱(III)-铼(I)配合物在制备抗肿瘤药物中的应用，异核金属铱(III)-铼(I)配合物具有良好的荧光特性，以能量依赖的方式进入肿瘤细胞，蓄积在溶酶体，对肿瘤细胞具有良好的抗肿瘤活性，诱导肿瘤细胞发生凋亡，可以作为靶向溶酶体而非传统DNA的一种抗肿瘤药物。
所述肿瘤细胞的细胞株为HeLa、HepG2、A549和顺铂耐药株A549R。
与现有技术相比，本发明具有以下优异效果：
本发明提供的异核金属铱(III)-铼(I)配合物对肿瘤细胞具有良好的抗肿瘤活性，对HeLa和A549细胞的IC50值仅为1.1～1.8μM，以能量依赖的方式进入细胞，靶向溶酶体，诱导肿瘤细胞发生凋亡，可以作为靶向肿瘤溶酶体而非传统DNA的一种抗肿瘤药物。同时，双核或多核金属配合物的合理设计为寻找更佳疗效和更低毒副作用的抗肿瘤药物提供一种有效途径。
附图说明
图1异核金属铱(III)-铼(I)配合物的合成路线；
图2为异核金属铱(III)-铼(I)配合物在HeLa细胞中的激光共聚焦图；
图3为异核金属铱(III)-铼(I)配合物和商用线粒体染料MTDR的激光共聚焦图；
图4为异核金属铱(III)-铼(I)配合物和商用溶酶体染料LTDR的激光共聚焦图；
图5为异核金属铱(III)-铼(I)配合物诱导细胞发生凋亡的流式细胞术图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例，进一步说明一种异核金属铱(III)-铼(I)配合物及其制备方法和抗肿瘤应用，但实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明，实施例中所使用的试剂、方法均为本领域常用的试剂，不做特别说明的情况下，均可以市场购买得到或者常规方法配制得到。
实施例1
异核金属铱(III)-铼(I)配合物1的合成，工艺路线如图1所示，具体步骤如下：
(1)主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉的合成：
1,10-菲咯啉-5,6-二胺(0.1g，0.476mmol)和4-吡啶甲醛(0.051g，0.476mmol)于圆底烧瓶中，加入100mL的无水乙醇，80℃搅拌20h，冷却至室温，减压浓缩，加入120mL的水，析出淡黄色沉淀，过滤，固体用水、乙醚洗涤，45℃真空干燥得到主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉，产率86％；
(2)前体[Ir(ppy)2Cl]2的合成：
IrCl3.3H2O(0.2g，0.567mmol)和环金属配体ppy(0.176g，1.134mmol)加入40mL的乙二醇乙醚与去离子水(3:1，v/v)的混合溶剂，在N2保护下，125℃搅拌24h，冷却过滤，固体用水、乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，45℃真空干燥得到铱前体反应物，即[Ir(ppy)2Cl]2，产率91％；
(3)环金属铱(III)中间体的合成：
[Ir(ppy)2Cl]2(0.09g，0.084mmol)和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉(0.05g，0.168mmol)加入30mL的甲醇与二氯甲烷(2:1，v/v)的混合溶剂，在N2保护下，60℃搅拌5h，冷却至室温，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是[Ir(ppy)2Cl]2的摩尔量的12倍，减压浓缩，加入60mL的乙醚析出固体，固体用乙醚洗涤，45℃真空干燥得到环金属铱(III)中间体，产率72％；
(4)Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的合成：
Re(CO)5Cl(0.5g，1.382mmol)和金属配体DIP(0.459g，1.382mmol)加入60mL的甲苯，在N2保护下，110℃搅拌6h，减压旋干反应液得到Re(DIP)(CO)3Cl，再与三氟甲磺酸银(0.355g，1.382mmol)在80mL的乙腈中，N2保护下，85℃中搅拌20h，冷却过滤，除去AgCl，滤液浓缩，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌2h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(CO)5Cl的摩尔量的6倍，加入80mL的水析出黄色固体，过滤，固体用水、乙醚洗涤，45℃真空干燥得到Re(DIP)(CO)3(CH3CN)，产率81％；
(5)异核金属铱(III)-铼(I)配合物的合成：
环金属铱(III)中间体(0.138mmol)和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)(0.131g，0.166mmol)加入60mL的丙酮，在N2保护下，55℃搅拌24h，冷却至室温，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔量的6倍，减压浓缩，加入50mL的乙醚析出固体，固体用乙醚洗涤，以二氯甲烷/甲醇(20：1，v/v)作为洗脱剂经硅胶柱层析分离提纯，45℃真空干燥得到异核金属铱(III)-铼(I)配合物1，产率78％。
配合物1：1H NMR(600MHz,DMSO)δ9.89(d,J＝5.2Hz,1H),9.05(s,1H),8.85(s,1H),8.30–8.24(m,2H),8.18–8.06(m,4H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),7.87(t,J＝7.7Hz,1H),7.73–7.67(m,5H),7.49(d,J＝5.1Hz,1H),7.05(t,J＝7.4Hz,1H),6.95(dd,J＝16.7,7.3Hz,2H),6.27(d,J＝7.4Hz,1H).ESI-MS(CH3OH):m/z 700.6331[M-2PF6]2+,1400.2594[M-2PF6-H]+,1546.2322[M-PF6]+。
实施例2
异核金属铱(III)-铼(I)配合物2的合成，工艺路线如图1所示，具体步骤如下：
(1)主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉的合成：
1,10-菲咯啉-5,6-二胺(0.1g，0.476mmol)和4-吡啶甲醛(0.056g，0.524mmol)于圆底烧瓶中，加入100mL的无水乙醇，75℃搅拌22h，冷却至室温，减压浓缩，加入120mL的水，析出淡黄色沉淀，过滤，固体用水、乙醚洗涤，45℃真空干燥得到主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉，产率85％；
(2)前体[Ir(thpy)2Cl]2的合成：
IrCl3.3H2O(0.2g，0.567mmol)和环金属配体thpy(0.192g，1.191mmol)加入40mL的乙二醇乙醚与去离子水(3:1，v/v)的混合溶剂，在N2保护下，115℃搅拌22h，冷却过滤，固体用水、乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，45℃真空干燥得到铱前体反应物，即[Ir(thpy)2Cl]2，产率93％；
(3)环金属铱(III)中间体的合成：
[Ir(thpy)2Cl]2(0.092g，0.084mmol)和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉(0.062g，0.21mmol)加入30mL的甲醇与二氯甲烷(2:1，v/v)的混合溶剂，在N2保护下，65℃搅拌4h，冷却至室温，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是[Ir(thpy)2Cl]2的摩尔量的12倍，减压浓缩，加入60mL的乙醚析出固体，固体用乙醚洗涤，45℃真空干燥得到环金属铱(III)中间体，产率75％；
(4)Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的合成：
Re(CO)5Cl(0.5g，1.382mmol)和金属配体DIP(0.505g，1.52mmol)加入60mL的甲苯，在N2保护下，105℃搅拌7h，减压旋干反应液得到Re(DIP)(CO)3Cl，再与三氟甲磺酸银(0.391g，1.52mmol)在80mL的乙腈中，N2保护下，82℃中搅拌22h，冷却过滤，除去AgCl，滤液浓缩，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌2h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(CO)5Cl的摩尔量的6倍，加入80mL的水析出黄色固体，过滤，固体用水、乙醚洗涤，45℃真空干燥得到Re(DIP)(CO)3(CH3CN)，产率78％；
(5)异核金属铱(III)-铼(I)配合物的合成：
环金属铱(III)中间体(0.138mmol)和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)(0.12g，0.152mmol)加入60mL的丙酮，在N2保护下，57℃搅拌22h，冷却至室温，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔量的6倍，减压浓缩，加入50mL的乙醚析出固体，固体用乙醚洗涤，以二氯甲烷/甲醇(20：1，v/v)作为洗脱剂经硅胶柱层析分离提纯，45℃真空干燥得到异核金属铱(III)-铼(I)配合物2，产率75％。
配合物2：1H NMR(600MHz,DMSO)δ9.90(d,J＝5.4Hz,1H),9.08(dd,J＝17.9,7.4Hz,1H),8.88(d,J＝5.9Hz,1H)88.29(d,J＝5.4Hz,1H),8.19–8.12(m,4H),7.77–7.68(m,8H),7.41(d,J＝7.9Hz,1H),6.81–6.74(m,1H),6.25(d,J＝4.5Hz,1H).ESI-MS(CH3OH):m/z706.5877[M-2PF6]2+,1412.1692[M-2PF6-H]+,1558.1417[M-PF6]+。
实施例3
异核金属铱(III)-铼(I)配合物3的合成，工艺路线如图1所示，具体步骤如下：
(1)主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉的合成：
1,10-菲咯啉-5,6-二胺(0.1g，0.476mmol)和4-吡啶甲醛(0.061g，0.571mmol)于圆底烧瓶中，加入100mL的无水乙醇，70℃搅拌24h，冷却至室温，减压浓缩，加入120mL的水，析出淡黄色沉淀，过滤，固体用水、乙醚洗涤，45℃真空干燥得到主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉，产率82％；
(2)前体[Ir(dfppy)2Cl]2的合成：
IrCl3.3H2O(0.2g，0.567mmol)和环金属配体dfppy(0.238g，1.247mmol)加入40mL的乙二醇乙醚与去离子水(3:1，v/v)的混合溶剂，在N2保护下，110℃搅拌20h，冷却过滤，固体用水、乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，45℃真空干燥得到铱前体反应物，即[Ir(dfppy)2Cl]2，产率89％；
(3)环金属铱(III)中间体的合成：
[Ir(dfppy)2Cl]2(0.102g，0.084mmol)和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉(0.054g，0.185mmol)加入30mL的甲醇与二氯甲烷(2:1，v/v)的混合溶剂，在N2保护下，62℃搅拌4.5h，冷却至室温，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是[Ir(dfppy)2Cl]2的摩尔量的12倍，减压浓缩，加入60mL的乙醚析出固体，固体用乙醚洗涤，45℃真空干燥得到环金属铱(III)中间体，产率70％；
(4)Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的合成：
Re(CO)5Cl(0.5g，1.382mmol)和金属配体DIP(0.551g，1.658mmol)加入60mL的甲苯，在N2保护下，100℃搅拌8h，减压旋干反应液得到Re(DIP)(CO)3Cl，再与三氟甲磺酸银(0.426g，1.658mmol)在80mL的乙腈中，N2保护下，80℃中搅拌24h，冷却过滤，除去AgCl，滤液浓缩，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌2h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(CO)5Cl的摩尔量的6倍，加入80mL的水析出黄色固体，过滤，固体用水、乙醚洗涤，45℃真空干燥得到Re(DIP)(CO)3(CH3CN)，产率83％；
(5)异核金属铱(III)-铼(I)配合物的合成：
环金属铱(III)中间体(0.138mmol)和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)(0.109g，0.138mmol)加入60mL的丙酮，在N2保护下，60℃搅拌20h，冷却至室温，加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔量的6倍，减压浓缩，加入50mL的乙醚析出固体，固体用乙醚洗涤，以二氯甲烷/甲醇(20：1，v/v)作为洗脱剂经硅胶柱层析分离提纯，45℃真空干燥得到异核金属铱(III)-铼(I)配合物3，产率82％。
配合物3：1H NMR(600MHz,DMSO)δ9.90(d,J＝5.4Hz,1H),9.12(s,1H),8.88(d,J＝5.9Hz,1H),8.29(d,J＝5.8Hz,3H),8.15(dd,J＝32.0,25.3Hz,3H),7.96(t,J＝7.8Hz,1H),7.73–7.67(m,5H),7.56(s,1H),7.03(dt,J＝22.0,9.1Hz,2H),5.70(d,J＝8.3Hz,1H).ESI-MS(CH3OH):m/z 736.6134[M-2PF6]2+,1472.2216[M-2PF6-H]+,1618.1949[M-PF6]+。
实施例4
异核金属铱(III)-铼(I)配合物的抗肿瘤活性测试，用MTT法来评价异核金属铱(III)-铼(I)配合物对肿瘤细胞HeLa、HepG2、A549、A549R和正常LO2细胞的细胞毒性：
用含有10％胎牛血清的培养基重悬单细胞悬液，并以每孔为5×103个细胞接种到96孔板，在37℃，5％CO2细胞培养箱中培养过夜，设置给药组、不加药物的对照组、不加药物和细胞的空白组，给药组加入用培养基稀释的不同浓度的药物，分别为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM，然后在培养箱中培养44h，每孔加入MTT试剂(5mg/mL)，再孵育4小时，弃上清液，每孔加入150μL的DMSO，振荡15min，测定595nm处的吸光值，抑制率的公式如下：
抑制率＝(对照组平均OD值-给药组平均OD值)/对照组平均OD值×100％。
求出IC50值(抑制率等于50％的时候的药物浓度)，测试结果异核金属铱(III)-铼(I)配合物对不同细胞株的IC50值，如表1所示：
表1
实验结果显示，异核金属铱(III)-铼(I)配合物1-3对肿瘤细胞具有良好的抗肿瘤活性。
实施例5
异核金属铱(III)-铼(I)配合物在HeLa细胞中的摄取机制研究，通过激光共聚焦显微镜研究温度和代谢或内吞抑制剂对异核金属铱(III)-铼(I)配合物在HeLa细胞中的摄取机制的影响：
对于温度的影响，在4℃和37℃下用10μM的异核金属铱(III)-铼(I)配合物处理HeLa细胞1h；
对于抑制剂的影响，在加入10μM的异核金属铱(III)-铼(I)配合物之前，用30μM的CCCP(羰基氰化物间氯苯腙，代谢抑制剂)或50μM的Chloroquine(氯喹，内吞抑制剂)预先处理HeLa细胞1h。
实验结果如图2所示，经4℃或代谢抑制剂CCCP处理之后，HeLa细胞对异核金属铱(III)-铼(I)配合物的摄取效率降低；但是经内吞抑制剂Chloroquine处理的HeLa细胞对异核金属铱(III)-铼(I)配合物的摄取效率没有明显变化；表明，异核金属铱(III)-铼(I)配合物可能是通过能量依赖的途径进入HeLa细胞。
实施例6
异核金属铱(III)-铼(I)配合物在HeLa细胞中的定位，通过激光共聚焦显微镜研究异核金属铱(III)-铼(I)和商用线粒体染料MTDR或商用溶酶体染料LTDR的共定位：
取对数生长期的细胞培养于35mm的Corning激光共聚焦培养皿，待细胞的密度长至70％时，加入异核金属铱(III)-铼(I)配合物孵育1h之后，在共聚焦显微镜下观察其在细胞内的定位。
实验结果如图3和图4所示，其中图3为异核金属铱(III)-铼(I)配合物1-3与商用线粒体染料MTDR的共定位，图4为异核金属铱(III)-铼(I)配合物1-3与商用溶酶体染料LTDR的共定位；在图3中，异核金属铱(III)-铼(I)配合物的绿色荧光与HeLa细胞中MTDR的荧光几乎不重叠，但是图4中配合物的绿色荧光与LTDR的深红色荧光高度重叠，叠加后呈现橘黄色荧光，表明异核金属铱(III)-铼(I)配合物分布在溶酶体而不是线粒体，说明其靶向溶酶体。
实施例7
通过流式细胞术Annexin V来标记细胞膜上外翻的磷脂酰丝氨酸，来确定异核金属铱(III)-铼(I)配合物是否诱导细胞发生凋亡：
HeLa细胞培养于6孔板中，待细胞的密度长至70％时，用2×、3×和4×IC50浓度的异核金属铱(III)-铼(I)配合物处理HeLa细胞24h，收集细胞，染色，通过流式细胞仪测试细胞凋亡的比例。
实验结果如图5所示，异核金属铱(III)-铼(I)配合物处理HeLa细胞后发生明显的凋亡现象，并且凋亡率随配合物剂量的增加而增高，表明异核金属铱(III)-铼(I)配合物通过凋亡的方式来诱导细胞死亡。

Claims (10)

1.一种异核金属铱-铼配合物，其特征在于，阳离子结构式如下：
其中，阴离子为PF6 -。
2.权利要求1所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.由1,10-菲咯啉-5,6-二胺和4-吡啶甲醛在无水乙醇中加热反应，冷却后浓缩，加水析出沉淀，过滤、洗涤、干燥得到主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉；
S2.由IrCl3.3H2O和环金属配体在乙二醇乙醚与去离子水的混合溶剂中，N2保护下，加热反应，冷却后过滤、洗涤、干燥得到铱前体反应物，即[Ir(C^N)2Cl]2；
S3.由[Ir(C^N)2Cl]2和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉在甲醇与二氯甲烷的混合溶剂中，N2保护下，加热反应，冷却后加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，浓缩，加入乙醚析出固体，过滤、洗涤、干燥得到环金属铱中间体；
S4.由Re(CO)5Cl和金属配体红菲啰啉在甲苯中，N2保护下，加热反应后再旋干得到Re(DIP)(CO)3Cl，再与三氟甲磺酸银在乙腈中，N2保护下，进行再加热反应，冷却后过滤，滤液浓缩后，再加入饱和NH4PF6水溶液搅拌2h，加入水析出固体，过滤、洗涤、干燥得到Re(DIP)(CO)3(CH3CN)；
S5.由环金属铱中间体和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)在丙酮中，N2保护下，加热反应，冷却后加入饱和NH4PF6水溶液搅拌6h，浓缩，加入乙醚析出固体，以二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂，固体经硅胶柱层析分离提纯，干燥得到异核金属铱-铼配合物。
3.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中1,10-菲咯啉-5,6-二胺和4-吡啶甲醛的摩尔比为1:1～1.2；加热反应的条件为：温度70～80℃，时间20～24h。
4.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S2中IrCl3.3H2O和环金属配体的摩尔比为1:2～2.2，环金属配体为2-苯基吡啶、2-(2-噻吩)吡啶或2-(2,4-二氟苯基)吡啶；加热反应的条件为：温度110～125℃，时间20～24h；乙二醇乙醚与去离子水的混合溶剂是乙二醇乙醚与去离子水按照体积比3:1混合得到。
5.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S3中[Ir(C^N)2Cl]2和主配体2-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-f][1,10]菲咯啉的摩尔比为1:2～2.5；加热反应的条件为：温度60～65℃，时间4～5h；甲醇与二氯甲烷的混合溶剂是甲醇与二氯甲烷按照体积比2:1混合得到。
6.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S4中Re(CO)5Cl和金属配体红菲啰啉的摩尔比为1:1～1.2；加热反应的条件为：温度100～110℃，时间6～8h。
7.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S4中Re(DIP)(CO)3Cl与三氟甲磺酸银的摩尔比为1:1～1.2，再加热反应的条件为：温度80～85℃，时间20～24h。
8.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S5中环金属铱中间体和Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔比为1:1～1.2；加热反应的条件为：温度55～60℃，时间20～24h。
9.根据权利要求2所述异核金属铱-铼配合物的制备方法，其特征在于，步骤S3中饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是[Ir(C^N)2Cl]2的摩尔量的2倍以上，步骤S4中饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(CO)5Cl的摩尔量的1倍以上，步骤S5中饱和NH4PF6水溶液中的NH4PF6是Re(DIP)(CO)3(CH3CN)的摩尔量的2倍以上。
10.权利要求1所述异核金属铱-铼配合物在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤为宫颈癌、肝癌、肺癌、耐药肺癌。
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