CN113710324A - 抗cd38抗体 - Google Patents

抗cd38抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN113710324A
CN113710324A CN202080010821.7A CN202080010821A CN113710324A CN 113710324 A CN113710324 A CN 113710324A CN 202080010821 A CN202080010821 A CN 202080010821A CN 113710324 A CN113710324 A CN 113710324A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
gly
val
leu
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080010821.7A
Other languages
English (en)
Inventor
K·A·伊莱亚斯
G·兰德斯
S·辛格
W·科尔韦尔
A·W·德雷克
M·哈克-弗伦德斯邵
V·巴斯卡尔
E·威勒特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Millennium Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Millennium Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Millennium Pharmaceuticals Inc filed Critical Millennium Pharmaceuticals Inc
Publication of CN113710324A publication Critical patent/CN113710324A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

本公开涉及抗CD38结合结构域，特征在于其CDR序列。利用具有权利要求1至9中要求的序列的抗体提供了一些实验数据。参见表4中的亲和力值。CD38‑TM1、CD38‑TM2和CD38‑TM5结合人CD38上与达雷木单抗相比非重叠的表位残基。CD38‑TM3和CD38‑TM4结合人CD38上部分重叠于达雷木单抗的表位。

Description

抗CD38抗体
I.相关申请的交叉引用
本申请根据35 U.S.C.§119要求2019年1月23日提交的美国临时申请号62/795,855的优先权，所述临时申请的内容明确地以引用的方式整体并入。
II.对以光盘形式提交的“序列表”、表格或计算机程序列表附录的引用
本发明通过引用并入随同提交的序列表文本副本，该副本创建于2020年1月21日，名称为101588-5011-WO_ST25.txt，大小为76KB。
III.背景技术
CD38，又称为环状ADP核糖水解酶，它是一种具有长的C端细胞外结构域及短的N端细胞质结构域的II型跨膜糖蛋白。CD38是包含CD157和海兔属(Aplysia)ADPR环化酶的一组相关膜结合酶或可溶酶的成员。这个家族的酶具有将NAD转化成环状ADP核糖或烟碱酸-腺嘌呤二核苷酸磷酸的独特能力。
此外，已报道了CD38涉及Ca2+移动并涉及经由许多信号传递分子的酪氨酸磷酸化的信号转导，所述信号传递分子包括磷脂酶Cγ、ZAP-70、syk以及c-cbl。基于这些观察结果，提出CD38是淋巴样细胞正常发育期间的成熟和活化中的重要信号传递分子。
发现CD38在许多免疫细胞的表面上表达，包括B细胞、浆细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞、成熟树突状细胞(DC)和活化的单核细胞。在造血细胞中，发现CD38涉及功能效应如淋巴细胞增殖、细胞因子释放、B细胞和髓性细胞发育和存活的调节，以及树突状细胞成熟的诱导(图1)。
CD38的假定天然配体是CD31(PECAM-1；血小板内皮细胞粘附分子1)，它是免疫球蛋白超家族的130kD成员，在循环血小板、中性粒细胞、单核细胞和初始B-淋巴细胞的表面上表达。从功能上讲，CD31被认为是充当粘附分子，并且CD38与CD31的相互作用可能起到促进白血病细胞存活的作用。
CD38在许多造血系统恶性肿瘤和从各种造血系统恶性肿瘤得到的细胞系中被上调，所述造血系统恶性肿瘤包括非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma，NHL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt'slymphoma，BL)、多发性骨髓瘤(MM)、B慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)、B及T急性淋巴细胞性白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、急性髓性白血病(AML)、毛细胞白血病(HCL)、霍奇金氏淋巴瘤(HL)以及慢性髓性白血病(CML)。CD38因此已被用作白血病的预后标志物。
尽管近来在抗癌剂的发现和研发中取得了进展，但涉及CD38-表达的肿瘤的许多癌症形式仍具有较差的预后。因此，需要用于治疗此类癌症形式的改进方法，并且需要开发具有改进特性的抗CD38抗体，尽管市场上已有抗体。
IV.发明内容
本发明涉及包含新型抗CD38抗原结合结构域的组合物。
在一个方面，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其含有重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的vhCDR1、具有SEQ ID NO:3氨基酸序列的vhCDR2和具有SEQ ID NO:4氨基酸序列的vhCDR3；和轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:6氨基酸序列的vlCDR1、SEQ ID NO:7氨基酸序列的vlCDR2和SEQ ID NO:8氨基酸序列的vlCDR3。
在一些实施方案中，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其包含氨基酸序列与SEQ ID NO:1相同的重链可变结构域和氨基酸序列与SEQ ID NO:5相同的轻链可变结构域。在一些实施方案中，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其包含氨基酸序列与SEQID NO:1相同的重链可变结构域和氨基酸序列与SEQ ID NO:25相同的轻链可变结构域。
在另一个方面，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其含有重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含具有SEQ ID NO:10氨基酸序列的vhCDR1、具有SEQ ID NO:11氨基酸序列的vhCDR2和具有SEQ ID NO:12氨基酸序列的vhCDR3；和轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:14氨基酸序列的vlCDR1、SEQ ID NO:15氨基酸序列的vlCDR2和SEQ ID NO:16氨基酸序列的vlCDR3。
在一些实施方案中，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其包含氨基酸序列与SEQ ID NO:9相同的重链可变结构域和氨基酸序列与SEQ ID NO:13相同的轻链可变结构域。
在另一个方面，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其含有重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含具有SEQ ID NO:18氨基酸序列的vhCDR1、具有SEQ ID NO:19氨基酸序列的vhCDR2和具有SEQ ID NO:20氨基酸序列的vhCDR3；和轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:22氨基酸序列的vlCDR1、SEQ ID NO:23氨基酸序列的vlCDR2和SEQ ID NO:24氨基酸序列的vlCDR3。
在一些实施方案中，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其包含氨基酸序列与SEQ ID NO:17相同的重链可变结构域和氨基酸序列与SEQ ID NO:21相同的轻链可变结构域。
在另一个方面，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其含有重链可变结构域(VH)，所述重链可变结构域包含具有SEQ ID NO:54氨基酸序列的vhCDR1、具有SEQ ID NO:55氨基酸序列的vhCDR2和具有SEQ ID NO:56氨基酸序列的vhCDR3；和轻链可变结构域(VL)，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:58氨基酸序列的vlCDR1、SEQ ID NO:59氨基酸序列的vlCDR2和SEQ ID NO:60氨基酸序列的vlCDR3。
在一些实施方案中，所述组合物包含抗CD38抗原结合结构域，其包含氨基酸序列与SEQ ID NO:53相同的重链可变结构域和氨基酸序列与SEQ ID NO:57相同的轻链可变结构域。
在一些实施方案中，包含如本文所述的抗CD38抗原结合结构域的所述组合物在单一多肽上包含重链可变结构域和轻链可变结构域。在一些实施方案中，单一多肽在从VH-scFv接头-VL或VL-scFv接头-VH的N端到C端的定向上包括scFv接头、重链可变结构域和轻链可变结构域。
在一些实施方案中，包含如本文所述的抗CD38抗原结合结构域的所述组合物包含含有重链可变结构域的第一多肽和含有轻链可变结构域的第二多肽。
在一些实施方案中，包含如本文所述的抗CD38抗原结合结构域的所述组合物是包含含有重链可变结构域的重链和包含含有轻链可变结构域的轻链的抗体。在一些实施方案中，所述抗体含有重链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域，所述重链恒定结构域选自人IgG1、IgG2和IgG4以及其变体的重链恒定结构域。在一些实施方案中，所述抗体含有重链，所述重链包含重链可变结构域和人IgG1或其变体的重链恒定结构域。在一些实施方案中，所述抗体含有重链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域，所述重链恒定结构域选自具有消除的FcγR结合的人IgG1变体的重链恒定结构域。在一些实施方案中，所述抗体含有重链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域，所述重链恒定结构域选自具有S228P氨基酸取代的人IgG4变体的重链恒定结构域。
本发明还涉及一种核酸组合物，其编码重链可变结构域和轻链可变结构域。在一些实施方案中，所述核酸组合物包含编码重链可变结构域的第一核酸和编码重链可变结构域的第二核酸。在一些实施方案中，所述核酸组合物包含编码重链可变结构域和轻链可变结构域的单一核酸。
本发明的另一方面涉及一种表达载体组合物，其包含本文所述的核酸组合物中的任一种；以及一种宿主细胞，其包含本文所述的表达载体组合物中的任一种。在一些实施方案中，所述表达载体组合物包括含有所述第一核酸的第一表达载体和含有本文所述第二核酸的第二表达载体。在一些实施方案中，所述表达载体组合物包括含有编码重链可变结构域和轻链可变结构域的单一核酸的所述核酸组合物。
本发明进一步涉及一种制备含有本文所述抗CD38抗原结合结构域的所述组合物中的任一种的方法。所述方法包括在表达抗CD38抗原结合结构域的条件下培养所述宿主细胞，以及回收所述组合物。
本发明还包括一种使用有效量的含有本文所述抗CD38抗原结合结构域的所述组合物中的任一种治疗多发性骨髓瘤的方法。
附图说明
图1描绘淋巴样谱系细胞的CD38表达谱，星号指示高CD38表达。在祖B(pro-B)细胞(CD34+CD19+CD20)、活化B细胞(CD19+CD20+)、浆细胞(CD138+CD19-CD20-)、活化CD4+及CD8+T细胞、NKT细胞(CD3+CD56+)以及NK细胞(CD56+CD16+)上鉴定出CD38表达。此外，在淋巴样祖细胞(CD34+CD45RA+CD10+CD19-)而非淋巴样干细胞上发现CD38表达。此外，在成熟DC和活化单核细胞上观察到增大的CD38表达。
图2A-2B示出了通过ELISA测定，抗CD38结合克隆与纯化的人CD38的结合。每个抗CD38结合克隆被格式化为scFv，然后与志贺毒素A亚基融合(scFv-SLTA融合形式)。
图3A-3B示出了通过ELISA测定，抗CD38结合克隆与纯化的食蟹猴CD38的结合。每个抗CD38结合克隆被格式化为scFv，然后与志贺毒素A亚基融合。
图4示出了CD38细胞外结构域上对于抗CD38结合克隆CD38TM4(F216、L262、C119、L124、C201、L230、C254、C275)和抗CD38单克隆抗体达雷木单抗(daratumumab)(S274)的关键接触残基。
图5A-5B示出了在抗CD38抗体达雷木单抗(Dara)、HB-7、AT13-5和OKT-10以及若干融合蛋白的存在下抗CD38结合克隆(以scFv-SLTA融合形式)与表达CD38的MOLP-8细胞的结合。靶向CD38的参考分子#1(CD38TR1)也是scFv-SLTA融合蛋白的形式。图5C示出了scFv-SLTA融合形式的包括靶向CD38的参考分子#1(CD38TR1)的抗CD38结合克隆与表达CD38的MOLP-8细胞的竞争性结合。通过流式细胞术检测所有信号。图5D是总结了在抗CD38结合克隆(以单独scFv形式)(左第一列)存在下scFv-SLTA融合蛋白形式的抗CD38结合克隆(顶行)的结合的表格。
图6A-6G描绘了CD38TM1、CD38TM2、CD38TM3、CD38TM4、CD38TM5、CD38TM6和CD38TR1的重链可变结构域和轻链可变结构域以及CDR(在全结构域中加下划线)的序列。
图7示出了本发明的CD38靶抗原的序列。
图8描绘了一些接头序列。
图9描绘了如实施例中使用的与抗CD38结合结构域融合的一些志贺毒素蛋白的序列。
图10A和图10B描绘了基于人IgG1、IgG2和IgG4(包括一些标准变体)的许多IgG重链恒定结构域“主链”，以及轻链恒定κ和轻链恒定λ序列的序列。如本领域技术人员将理解的，并且如下所述，这些主链中的任一个可以与CD38TM1、CD38TM2、CD38TM3、CD38TM4、CD38TM5、CD38TM6和CD38TR1的重链可变结构域和轻链可变结构域组合。
图11A和11B分别示出了通过IMAC柱和蛋白L(Pro-L)柱对CD38TM3-SLTA和CD38TM4-SLTA的纯化。MW标记表示分子量标记所在的位置。图11C示出了CD38TM3的前21个氨基酸(下划线)被CD38TR1的前22个氨基酸(下划线)替换以衍生出CD38TM4。
图12示出了由两个相同scFv形成的双抗体的X射线结构图解，每个scFv从N端到C端包含VH-GGGGS-VL，其中VH和VL来自CD38TM4。一条scFv链的VH(链A)与另一条scFV链的VL(链B)复合形成CD38结合结构域。
V.具体实施方式
A.概述
CD38的表达增加与多种造血起源的疾病相关联。此类疾病包括但不限于：多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病、B细胞慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病(包括B细胞急性淋巴细胞白血病)、华氏巨球蛋白血症、原发性系统性淀粉样变性、套细胞淋巴瘤、前淋巴细胞白血病/髓细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、滤泡性淋巴瘤、NK细胞白血病和浆细胞白血病。因此，CD38提供治疗造血系统疾病的有效靶标。若干抗CD38抗体处于用于治疗CD38相关癌症的临床试验中。因此，CD38的抗体可用于治疗和诊断癌症。
本发明提供了能够以高亲和力结合人和食蟹猴CD38的抗CD38结合结构域。此外，此处公开的抗CD38结合结构域能够在达雷木单抗存在下结合至CD38，并且因此在临床应用中提供了现有的抗CD38抗体中的一些在临床测试中没有见过的优势。
B.定义
为了可以更全面地理解本申请，以下阐述了若干定义。此类定义旨在涵盖语法上的等同物。
“消除”在本文中意思是活性的降低或去除。在一些实施方案中，从抗体的恒定结构域去除活性是有用的。因此，例如，“消除FcγR结合”意思是与不包含特定变体的Fc区相比较，Fc区氨基酸变体中有少于50％开始结合至FcγR，其中小于70％-80％-90％-95％-98％的活性损失是优选的，并且一般而言，活性低于Biacore测定中可检测的结合水平。例如，IgG1恒定区中的一种消除变体是N297A变体，该变体去除了天然糖基化位点并显著减少了FcγRIIIa结合，并且由此降低了抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。
如本文所用的“ADCC”或“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”意思是细胞介导的反应，其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上的结合抗体并且随后引起靶细胞的裂解。ADCC与到FcγRIIIa的结合相关；到FcγRIIIa的结合增加会导致ADCC活性增加。
“抗原结合结构域”或“ABD”在本文中意思是一组6个互补决定区(CDR)，当作为多肽序列的一部分存在时，所述互补决定区如本文所述特异性地结合靶抗原。因此，“抗CD38抗原结合结构域”如本文所概述结合CD38抗原。如本领域所已知的，这些CDR通常作为第一组可变重链CDR(vhCDR或VHCDR)和第二组轻链可变CDR(vlCDR或VLCDR)存在，每组包含三个CDR：属于重链的vhCDR1、vhCD R2、vhCDR3以及属于轻链的vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3。如本领域所理解的，CDR在重链可变区和轻链可变区的每一个中由框架区隔开：对于轻链可变区，这些是(VL)FR1-vlCDR1-(VL)FR2-vlCDR2-(VL)FR3-vlCDR3-(VL)FR4，并且对于重链可变区，这些是(VH)FR1-vh CDR1-(VH)FR2-vhCDR2-(VH)FR3-vhCDR3-(VH)FR4。本发明的抗原结合结构域可以多种形式，例如以Fab、Fv和scFv体现。在“Fab”形式中，6个CDR的集合由两个不同的多肽序列贡献，即重链可变区(vh或VH；包含vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)以及轻链可变区(vl或VL；包含vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)，其中VH的C端连接至重链的CH1结构域的N端，并且VL的C端连接至轻链恒定结构域的N端(并且因此形成轻链)。重链可变区和轻链可变区一起形成Fv，如本文所述，如本文所概述，它们可以是scFv或Fab。因此，在一些情况下，抗原结合结构域的六个CDR由VH和VL贡献。在scFv形式中，VH和VL通常通过使用如本文所概述的接头共价地连接成单个多肽序列，这可以是(从N端开始)VH-接头-VL或VL-接头-VH。
“接头”在本文中意思是将两个蛋白质结构域连接在一起的结构域接头，诸如用于scFv和/或其他蛋白质以及蛋白质融合结构中。通常，存在许多可以使用的合适的接头，包括传统的肽键，所述合适的接头通过重组技术产生，所述重组技术允许以足够的长度和灵活性重组地连接两个结构域，以允许每个结构域保留其生物学功能。接头肽可以主要包括以下氨基酸残基：Gly、Ser、Ala或Thr。接头肽应具有一定长度，所述长度足以按一种方式连接两个分子，使得所述分子相对于彼此呈现正确的构象，从而使得所述分子保留所需的活性。在一个实施方案中，接头的长度为约1至50个氨基酸，优选地长度为约1至30个氨基酸。在一个实施方案中，可以使用长度为1至20个氨基酸的接头，其中约5至约10个氨基酸可用于一些实施方案中。有用的接头包括甘氨酸-丝氨酸聚合物，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n和(GGGS)n，其中n是至少为1的整数(通常为3至4)；甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物以及其他柔性接头。替代地，多种非蛋白质聚合物(包括但不限于聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物)可以用作接头。其他接头序列可以包括具有任何长度的CL/CH1结构域的任何序列，但不是CL/CH1结构域的所有残基；例如，CL/CH1结构域的前5到12个氨基酸残基。接头也可以源自免疫球蛋白轻链，例如Cκ或Cλ。接头可以源自任何同种型的免疫球蛋白重链，包括例如Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cα1、Cα2、Cδ、Cε和Cμ。接头序列还可以源自其他蛋白质，诸如Ig样蛋白质(例如，TCR、FcR、KIR)、铰链区来源序列和来自其他蛋白质的其他天然序列。虽然可以使用任何合适的接头，但许多实施方案使用甘氨酸-丝氨酸聚合物，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n和(GGGS)n，其中n是至少为1的整数(并且通常为2至3至4至5)。“scFv接头”通常包括这些甘氨酸-丝氨酸聚合物，诸如图8中所示的那些。一般而言，scFv接头是足够长的以允许VL和VH结构域适当地缔合以在单个多肽上形成抗原结合结构域(ABD)。
术语“抗体”在最广泛的意义上进行使用，并且包括例如完整的免疫球蛋白或抗原结合部分。传统抗体结构单元通常包含四聚体。每个四聚体通常由两对相同的多肽链组成，每一对具有一个“轻”链(通常具有约25kDa的分子量)和一个“重”链(通常具有约50-70kDa的的分子量)。人轻链被分类为κ和λ轻链。本发明涉及通常基于具有若干亚类的IgG类别的抗体或抗体片段(抗体单体)，所述亚类包括但不限于IgG1、gG2、IgG3和IgG4。一般而言，相较于IgG3，更频繁地使用IgG1、IgG2和IgG4。应注意，IgG1因在356(D或E)和358(L或M)处具有多态性而具有不同的同种异型。本文所示的序列使用356D/358M同种异型，但本文包括其他同种异型。也就是说，包含本文包括的IgGl Fc结构域的任何序列可以具有356E/358L，从而替代356D/358M同种异型。
因此，如本文所用的“同种型”意思是通过其恒定区的化学特性和抗原特性来定义的任何免疫球蛋白的亚类。
每条链的氨基末端部分包括约100至110个或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的可变区，在本领域和本文中所述可变区通常被称为“Fv结构域”或“Fv区”。在所述可变区中，针对具有重链和轻链的V结构域中的每一个聚集了三个环以形成抗原结合位点。环中的每一个被称为互补决定区(以下被称为“CDR”)，其中氨基酸序列的变化最为显著。“可变”是指可变区的某些区段的序列在抗体之间广泛不同的事实。可变区内的可变性并非均匀分布。实际上，V区由具有15-30个氨基酸的称为框架区(FR)的相对不变的伸长区组成，所述伸长区通过各自为9-15个氨基酸长或更长的称为“高变区”的极具可变性的较短区隔开。
每个VH和VL由三个高变区(“互补决定区”，“CDR”)和四个FR组成，其以下列次序从氨基端排列至羧基端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4.
高变区通常涵盖轻链可变区中的约氨基酸残基24-34(LCDR1；“L”表示轻链)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)，以及重链可变区中的接近约31-35B(HCDR1；“H”表示重链)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)的氨基酸残基；Kabat等人，SEQUENCES OF PROTEINS OFIMMUNOLOGICAL INTEREST，第5版，Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)和/或形成高变环的那些残基(例如，轻链可变区中的残基26-32(LCDR1)、50-52(LCD R2)和91-96(LCDR3)，以及重链可变区中的残基26-32(HCDR1)、53-55(HCDR2)和96-101(HCDR3)；Chothia和Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917)。以下描述本发明的特定CDR。
如本领域技术人员将了解的，CDR的确切编号和放置在不同编号系统之间可以不同。然而，应理解，重链可变序列和/或轻链可变序列的公开内容包括相关联(固有)的CDR的公开内容。因此，每个重链可变区的公开内容是vhCDR(例如，vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)的公开内容，并且每个轻链可变区的公开内容是vlCDR(例如，vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的公开内容。
如下进行了CDR编号的有用比较，参见Lafranc等人，Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77(2003)：
表1
Figure GDA0003323055400000121
贯穿本说明书，当提及可变结构域中的残基(近似地，轻链可变区的残基1-107和重链可变区的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统，并且对于Fc区通常使用EU编号系统(例如上文的Kabat等人,(1991))。
本发明提供了大量不同的CDR集合。在这种情况下，“完整的CDR集合”包括三个轻链可变CDR和三个重链可变CDR，例如vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3、vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3。相应地，这些可以是较大的轻链可变结构域或重链可变结构域的一部分。此外，如本文更全面概述的，当使用重链和轻链时(例如当使用Fab时)，重链可变结构域和轻链可变结构域可以处于单独的多肽链上，或者在scFv序列的情况下处于单个多肽链上。
CDR有助于抗体的抗原结合位点，或更具体地表位结合位点的形成。
“表位”是指与抗体分子可变区中的被称为互补位(paratope)的特异性抗原结合位点相互作用的决定簇。表位是成组的诸如氨基酸或糖侧链的分子，并且通常具有特定结构特性，以及特定电荷特性。单一抗原可以具有多于一个表位。表位可能包含直接涉及结合的氨基酸残基(也被称为表位的免疫显性组分)和并不直接涉及结合的其他氨基酸残基，诸如通过特异性抗原结合肽有效阻断的氨基酸残基；换句话说，氨基酸残基是在特异性抗原结合肽的占据区域(footprint)内。表位可以是构象或线性的。构象表位由线性多肽链的不同区段的空间上并列的氨基酸所产生。线性表位是由多肽链中相邻的氨基酸残基所产生的表位。构象和非构象表位的区别可能在于：在变性溶剂存在下，丧失与前者的结合而未丧失与后者的结合。
本文中的“修饰”意思是多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失，或对化学地连接至蛋白质的部分的改变。例如，修饰可以是连接至蛋白质的改变的碳水化合物或PEG结构。本文中的“氨基酸修饰”意思是多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。为了清楚起见，除非另有说明，否则氨基酸修饰总是针对由DNA编码的氨基酸，例如在DNA和RNA中具有密码子的20个氨基酸。
本文的“氨基酸取代”或“取代”意思是亲本多肽序列中特定位置处的氨基酸被另一氨基酸替换。特别地，在一些实施方案中，取代是针对不是特定位置处天然存在，或者不是生物体内或任何生物体中天然存在的氨基酸。例如，取代N297A是指位置297处的天冬酰胺被丙氨酸替换的变异多肽，在此情况下为Fc变体。为了清楚起见，经过工程改造以改变核酸编码序列但不改变起始氨基酸(例如，将CGG(编码精氨酸)变换为CGA(仍为编码精氨酸)以提高宿主生物体表达水平)的蛋白质不是“氨基酸取代”；也就是说，尽管产生了编码相同蛋白质的新基因，但如果所述蛋白质在其开始的特定位置处具有相同的氨基酸，则这就不是氨基酸取代。
如本文所用的“氨基酸插入”或“插入”意思是在亲本多肽序列中特定位置处添加氨基酸序列。例如，-233E或233E表示在位置233之后和在位置234之前插入谷氨酸。此外，-233ADE或A233ADE表示在位置233之后和在位置234之前插入AlaAspGlu。
如本文所用的“氨基酸缺失”或“缺失”意思是在亲本多肽序列中特定位置处去除氨基酸序列。例如，E233-或E233#、E233()或E233del表示在位置233处谷氨酸的缺失。此外，EDA233-或EDA233#表示从位置233开始的序列GluAspAla的缺失。
如本文所用的“变异蛋白质”或“蛋白质变体”或“变体”意思是与亲本蛋白质的蛋白质因至少一个氨基酸修饰而不同的蛋白质。蛋白质变体可以是指蛋白质本身，包含蛋白质的组合物或编码所述蛋白质的氨基序列。优选地，蛋白质变体与亲本蛋白质相比较具有至少一个氨基酸修饰，例如与亲本体相比较具有约1至约70个氨基酸修饰，并且优选地具有约1至约5个氨基酸修饰。如下所述，在一些实施方案中，亲本多肽(例如，Fc亲本多肽)是人野生型序列，诸如来自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区，但是具有变体的人序列也可以用作“亲本多肽”。本文的蛋白质变体序列优选地与亲本蛋白质序列具有至少约80％的同一性，并且最优选地具有至少约90％的同一性，更优选地具有至少约95％-98％-99％的同一性。变异蛋白质可以是指变异蛋白质本身、包含蛋白质变体的组合物或编码所述变异蛋白质的DNA序列。
因此，如本文所用的“抗体变体”或“变异抗体”意思是与亲本抗体因至少一个氨基酸修饰而不同的抗体，如本文所用的“IgG变体”或“变异IgG”意思是与亲本IgG(再次，在许多情况下为人IgG序列)因至少一个氨基酸修饰而不同的抗体。如本文所用的“免疫球蛋白变体”或“变异免疫球蛋白”意思是与亲本免疫球蛋白序列的序列因至少一个氨基酸修饰而不同的免疫球蛋白序列。如本文所用的“Fc变体”或“变异Fc”意思是在Fc结构域中包含氨基酸修饰的蛋白质。本发明的Fc变体是根据构成它们的氨基酸修饰来定义的。因此，例如，S241P或S228P是相对于亲本IgG4铰链多肽在位置228处具有取代脯氨酸的铰链变体，其中编号S228P是根据EU索引并且S241P是Kabat编号。同样，M252Y/S254T/T256E定义了相对于亲本Fc多肽具有取代M252Y、S254T和T256E的Fc变体(这些突变增加了Fc结构域与FcRn受体的结合，从而增加了分子的半衰期)。野生型氨基酸的身份可能是不确定的，在此情况下，前述变体被称为252Y/254T/256E。应注意，提供取代的次序是任意的，也就是说，例如，252Y/254T/256E与254T/252Y/256E是相同的Fc变体等等。对于本发明中讨论的与抗体相关的所有位置，除非另有说明，否则氨基酸位置编号是根据Kabat针对可变区编号进行的，并且是根据EU索引针对恒定区进行的，包括Fc区。EU索引或如在Kabat或EU编号方案中的EU索引是指EU抗体的编号(Edelman等人，1969,Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85，以引用的方式整体并入本文)。修饰可以是添加、缺失或取代。取代可以包括天然存在的氨基酸，并且在一些情况下包括合成氨基酸。实例包括：美国专利号6,586,207；WO 98/48032；WO 03/073238；US2004-0214988A1；WO 05/35727A2；WO 05/74524A2；J.W.Chin等人，(2002),Journal ofthe American Chemical Society 124:9026-9027；J.W.Chin和P.G.Schultz,(2002),ChemBioChem 11:1135-1137；J.W.Chin等人，(2002),PICAS United States of America99:11020-11024；以及L.Wang和P.G.Schultz,(2002),Chem.1-10，全部以引用的方式整体并入。
如本文所用，“蛋白质”在本文中意思是至少两个共价地连接的氨基酸，包括蛋白质、多肽、寡肽和肽。肽基包括天然存在的氨基酸和肽键，或合成的拟肽结构，即“类似物”，诸如类肽(参见Simon等人，PNAS USA 89(20):9367(1992)，以引用的方式整体并入)。氨基酸可以是天然存在的或合成的(例如，不是由DNA编码的氨基酸)；正如本领域技术人员所了解的那样。例如，出于本发明的目的，高苯丙氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸和正亮氨酸被认为是合成氨基酸，并且可以利用D-和L-(R或S)构象的氨基酸。本发明的变体可以包括修饰，所述修饰包括使用例如由Schultz和同事开发的技术并入的合成氨基酸的使用，所述技术包括但不限于以下项中描述的方法：Cropp和Shultz,2004,Trends Genet.20(12):625-30；Anderson等人，2004,Proc Natl Acad Sci USA 101(2):7566-71；Zhang等人，2003,303(5656):371-3；以及Chin等人，2003,Science 301(5635):964-7，全部以引用的方式整体并入。此外，多肽可以包括一个或多个侧链或末端的合成衍生化、糖基化、聚乙二醇化、环状排列、环化、接至其他分子的接头、与蛋白质或蛋白质结构域的融合以及肽标签或标记的添加。
如本文所用的“残基”意思是蛋白质中的位置以及其相关联的氨基酸身份。例如，天冬酰胺297(也被称为Asn297或N297)是人抗体IgG1中的位置297处的残基，附带地，所述位置是Fc区被糖基化的位置。糖基化的去除会消除FcγRIIIa结合，从而导致ADCC活性的丧失。
如本文所用的“Fab”或“Fab区”意思是包含VH、CH1、VL和CL免疫球蛋白结构域的多肽。Fab可以是指单独的该区域，或在全长抗体或抗体片段的背景下的该区域。
如本文所用的“Fv”或“Fv片段”或“Fv区”意思是包含单一抗体的VL和VH结构域的多肽。如本领域技术人员将了解的，这些多肽由两个结构域构成，即重链可变结构域和轻链可变结构域。
“单链Fv”或“scFv”在本文中意思是通常使用如本文所述的scFv接头共价地连接至轻链可变结构域以形成scFv或scFv结构域的重链可变结构域。scFv结构域可以处于从N端到C端的任一定向(vh-接头-vl或vl-接头-vh)。一般而言，接头是如本领域所公知的和上文讨论的scFv接头。
如本文所用的“IgG亚类修饰”或“同种型修饰”意思是将一种IgG同种型的一个氨基酸转化为不同的比对的IgG同种型中的对应的氨基酸的氨基酸修饰。例如，由于IgG1在EU位置296处包含酪氨酸，而IgG2包含苯丙氨酸，因此IgG2中的F296Y取代被认为是IgG亚类修饰。类似地，由于IgG1在位置241处具有脯氨酸，而IgG4在该处具有丝氨酸，因此具有S241P的IgG4分子被认为是IgG亚类修饰。应注意，亚类修饰在本文中被认为是氨基酸取代。
如本文所用的“非天然存在的修饰”意思是非同种型的氨基酸修饰。例如，由于没有一个IgG在位置297处包含天冬酰胺，因此IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(或其杂交体)中的取代N297A被认为是非天然存在的修饰。
如本文所用的“氨基酸”和“氨基酸身份”意思是由DNA和RNA编码的20种天然存在的氨基酸之一。
如本文所用的“效应子功能”意思是由抗体Fc区与Fc受体或配体相互作用产生的生化事件。效应子功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。
如本文所用的“亲本多肽”意思是随后要被修饰来产生变体的起始多肽。亲本多肽可以是天然存在的多肽，或者天然存在的多肽的变体或工程化型式。亲本多肽可以是指多肽本身、包含亲本多肽的组合物、或编码所述亲本多肽的氨基酸序列。因此，如本文所用的“亲本免疫球蛋白”意思是被修饰来产生变体的未经修饰的免疫球蛋白多肽，并且如本文所用的“亲本抗体”意思是被修饰来产生变异抗体的未经修饰的抗体。应注意，“亲本抗体”包括如下所概述的已知的商用的重组产生的抗体。
如本文所用的“Fc”或“Fc区”或“Fc结构域”意思是多肽，所述多肽包含抗体的恒定区，排除第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如，CH1)，并且在一些情况下排除铰链的部分。对于IgG来说，Fc结构域包含免疫球蛋白结构域CH2和CH3(Cγ2和Cγ3)以及在CH1(Cγ1)与CH2(Cγ2)之间的低级铰链区。虽然Fc区的边界可能会变化，但通常界定的人IgG重链Fc区包括其羧基端的残基C226或P230，其中编号是根据如Kabat中的EU索引。因此，在IgG背景下的“CH”结构域如下：“CH1”是指根据如在Kabat中的EU索引的位置118-215。“铰链”是指根据如在Kabat中的EU索引的位置216-230。“CH2”是指根据如在Kabat中的EU索引的位置231-340，并且“CH3”是指根据如在Kabat中的EU索引的位置341-447。因此，“Fc结构域”包括-CH2-CH3结构域，以及任选地铰链结构域(铰链-CH2-CH3)。在一些实施方案中，如以下更全面地描述的，对Fc区进行氨基酸修饰，例如以改变与一个或多个FcγR受体或FcRn受体的结合。
如本文所用的“Fcγ受体”、“FcγR”或“FcγR(FcgammaR)”意思是结合IgG抗体Fc区并且由FcγR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人体中，这个家族包括但不限于：FcγRI(CD64)，包括同工型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同工型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)以及FcγRIIc；以及FcγRIII(CD16)，包括同工型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIb-NA1和FcγRIIb-NA2)(Jefferis等人，2002,Immunol Lett82:57-65，以引用的方式整体并入)，以及任何未发现的人FcγRs或FcγR同工型或同种异型。在一些情况下，如本文所概述，减少或消除了与一种或多种FcγR受体的结合。例如，减少与FcγRIIIa的结合会减少ADCC，并且在一些情况下，减少与FcγRIIIa和FcγRIIb的结合是期望的。
如本文所用的“FcRn”或“新生儿Fc受体”意思是结合IgG抗体Fc区并且至少部分地由FcRn基因编码的蛋白质。FcRn可以是来自任何生物体，包括但不限于：人、小鼠、大鼠、兔和猴。如本领域中所已知，功能性FcRn蛋白质包含两个多肽，所述多肽经常被称为重链和轻链。轻链是β-2微球蛋白，并且重链由FcRn基因编码。除非本文另外指出，否则FcRn或FcRn蛋白质是指FcRn重链与β-2微球蛋白的复合体。如本文所述，与FcRn受体的结合是期望，并且在一些情况下，可以引入Fc变体以增加与FcRn受体的结合。
“重链恒定区”在本文中意思是人IgG抗体的CH1-铰链-CH2-CH3部分。在图10中示出了许多合适的重链恒定区。
“轻链恒定区”意思是来自κ或λ的CL结构域，其序列示出于图10中。
如本文所用的“位置”意思是蛋白质序列中的位置。位置可以按顺序编号，或根据已建立的格式，例如用于抗体编号的EU索引编号。
如本文所用的“靶抗原”意思是被给定抗体的可变区特异性地结合的分子。在这种情况下，如下文所定义，本文的目标靶抗原是CD38蛋白质，通常为人CD38和任选地食蟹猴CD38。因此，“抗CD38结合结构域”是抗原是CD38的抗原结合结构域(ABD)。
如本文所用的“靶细胞”意思是表达靶抗原的细胞。
如本文所用的“可变结构域”意思是免疫球蛋白的包含一个或多个Ig结构域的区，所述Ig结构域基本上由分别构成κ、λ和重链免疫球蛋白基因座的Vκ(V.kappa)、Vλ(V.lamda)和/或VH基因中的任一个编码。因此，“重链可变结构域”包含(VH)FR1-vhCDR1-(VH)FR2-vhC DR2-(VH)FR3-vhCDR3-(VH)FR4，并且“轻链可变结构域”包含(VL)FR1-vlCDR1-(VL)FR2-vlCDR2-(VL)FR3-vlCDR3-(VL)FR4。
“野生型或WT”在本文中意思是自然界中存在的氨基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因变异。WT蛋白质具有没有经过有意修饰的氨基酸序列或核苷酸序列。
本发明的抗体通常是分离或重组抗体。“分离”当用于描述本文公开的各种多肽时意思是已从其得到表达的细胞或细胞培养物识别并分离和/或回收的多肽。通常，分离多肽会通过至少一个纯化步骤制备。“分离抗体”是指大致上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体。“重组”意思是在外源宿主细胞中使用重组核酸技术产生抗体。
“特异性结合”或“特异性地结合至”或者对特定抗原或表位“特异”意思是明显不同于非特异性相互作用的结合。特异性结合可以例如通过测定分子的结合相较于对照分子的结合来测量，所述对照分子通常为不具有结合活性的类似结构的分子。例如，特异性结合可以通过与类似于标靶的对照分子的竞争来测定。
如本文所用的术语“Kassoc”或“Ka”意图指特定抗体-抗原相互作用的缔合速率，而如本文所用的术语“Kdis”或“Kd”意图指特定抗体-抗原相互作用的解离速率。如本文所用的术语“KD”意图指解离常数，所述解离常数是由Kd与Ka的比率(即，Kd/Ka)获得，并且表述为摩尔浓度(M)。抗体的KD值可以使用本领域的良好建立的方法确定。在一些实施方案中，用于确定抗体KD的方法是通过使用表面等离子体共振，例如通过使用生物传感器系统，诸如
Figure GDA0003323055400000201
系统来进行。在一些实施方案中，抗体的KD通过生物层干涉测量法确定。在一些实施方案中，KD使用流式细胞术经由抗原表达细胞测量。在一些实施方案中，KD值在抗原被固定的情况下进行测量。在其他实施方案中，KD值在抗体(例如亲本小鼠抗体、嵌合抗体或人源化抗体变体)被固定的情况下进行测量。在某些实施方案中，KD值以二价结合模式进行测量。在其他实施方案中，KD值以单价结合模式进行测量。对特定抗原或表位的特异性结合可以例如由对抗原或表位的KD为至少约10-7M、至少约10-8M、至少约10-9M、至少约10-10M、至少约10-11M、至少约10-12M、至少约10-13M、至少约10-14M的抗体展现。通常，特异性地结合抗原的抗体所具有的KD比对照分子相对于抗原或表位的KD大20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或更多倍。
相对于蛋白质序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”被定义为在比对序列并(如有必要)引入缺口以实现最大百分比的序列同一性之后并且在不将任何保守取代视为序列同一性的一部分的情况下，在候选序列中的氨基酸残基与特定(亲代)序列中的氨基酸残基相同的百分比。为了测定氨基酸序列同一性百分比而进行的比对可以通过本领域技术范围内的多种方式实现，比如，使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的合适参数，包括在被比较的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。一种特定的程序是美国公布号20160244525的第[0279]段至第[0280]段中概述的ALIGN-2程序，所述公布以引用的方式并入本文。用于核酸序列的另一种近似比对是由以下项的局部同源性算法提供：Smith和Waterman,Advances in Applied Mathematics,2:482-489(1981)。该算法可以通过使用评分矩阵应用于氨基酸序列，所述评分矩阵由Dayhoff,Atlas of Protein Sequences andStructure,M.O.Dayhoff编著，第5增刊，3:353-358,National Biomedical ResearchFoundation,Washington,D.C.,USA开发并且由Gribskov,Nucl.Acids Res.14(6):6745-6763(1986)归一化。
用于测定序列同一性百分比的该算法的一个实现实例是由Genetics ComputerGroup(Madison,WI)的“BestFit”实用应用程序所提供。该方法的默认参数在WisconsinSequence Analysis Package Program Manual,第8版(1995)(可从Genetics ComputerGroup,Madison,WI获得)中进行了描述。在本发明的背景下建立同一性百分比的另一种方法是使用由爱丁堡大学(University of Edinburgh)拥有版权的MPSRCH程序包，该程序包由John F.Collins和Shane S.Sturrok开发，并且由IntelliGenetics,Inc.(MountainView,CA)发行。根据这套软件包，可以采用Smith-Waterman算法，其中将默认参数用于评分表(例如，缺口开放罚分为12，缺口延伸罚分为1并且缺口为6)。根据所产生的数据，“匹配”值反映了“序列同一性”。用于计算序列之间的同一性或相似性百分比的其他合适的程序在本领域中是公知的，例如，另一个比对程序是BLAST，以默认参数使用。例如，可以使用以下默认参数来使用BLASTN和BLASTP：遗传密码＝标准；过滤器＝无；链＝双链；截断＝60；期望＝10；矩阵＝BLOSUM62；描述＝50个序列；筛选＝高分；数据库＝非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS翻译+Swiss蛋白质+Spupdate+PIR。这些程序的详细信息可以通过在blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi前键入http://的互联网地址上找到。
本发明的氨基酸序列(“发明序列”)与亲代氨基酸序列之间的同一性程度被计算为在两个序列比对中的精确匹配数量除以“发明序列”的长度或亲代序列的长度，以最短者为准。结果以同一性百分比表述。
术语“治疗(treatment、treating、treat)”等等是指获得所需的药理学和/或生理学效果。就完全或部分预防疾病或其症状，或者降低疾病或其症状的可能性而言，所述效果可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于所述疾病的副作用而言，所述效果可以是治疗性的。如本文所用的“治疗”覆盖对哺乳动物，尤其是人的疾病的任何治疗，并且包括：(a)防止可能易患疾病但尚未诊断为患有疾病的受试者出现疾病；(b)抑制疾病，即遏制疾病的发展或进展；以及(c)缓解疾病，即导致疾病消退和/或缓解一个或多个疾病症状。“治疗”还旨在涵盖递送剂以便提供药理学作用，即使在没有疾病或病状的情况下。例如，“治疗”涵盖在没有疾病状况的情况下，例如在疫苗的情况下，递送可以引发免疫应答或赋予免疫力的组合物。
组合物的“有效量”或“治疗有效量”包括足以对施用了组合物的受试者提供有益效果的组合物的量。递送媒介物的“有效量”包括足以有效地结合或递送组合物的量。
术语“核酸”包括具有多于一个呈任何形式的核苷酸的RNA或DNA分子，所述形式包括单链、双链、寡核苷酸或多核苷酸。术语“核苷酸序列”包括单链形式的核酸中寡核苷酸或多核苷酸中核苷酸的排序。
如本文所用的术语“启动子”包括可操作地连接至待转录的核酸序列，诸如编码所需分子的核酸序列的DNA序列。启动子通常位于待转录的核酸序列的上游，并且为RNA聚合酶和其他转录因子的特异性结合提供位点。
“载体”能够将基因序列转移至靶细胞。通常，“载体构建体”、“表达载体”和“基因转移载体”意思是能够引导目标基因的表达并且可以将基因序列转移至靶细胞的任何核酸构建体，这可以通过以下方式来完成：基因组整合载体的全部或一部分，或者瞬时或可遗传地维持作为染色体外元件的载体。因此，该术语包括克隆和表达媒介物，以及整合载体。
如本文所用的术语“调节元件”包括控制核酸序列表达的一些方面的核苷酸序列。调节元件的实例示例性地包括增强子、内部核糖体进入位点(IRES)、内含子、复制起点、多腺苷酸化信号(pA)、启动子、增强子、转录终止序列和上游调节结构域，它们有助于核酸序列的复制、转录和/或转录后加工。在多种情况下，调节元件还可以包括顺式调节DNA元件以及转座元件(TE)。本领域普通技术人员能够仅仅通过常规实验选择和使用表达构建体中的这些和其他调节元件。表达构建体可以使用基因重组方法产生或使用熟知的方法合成地产生。
“控制元件”或“控制序列”是有助于多核苷酸的功能调节的分子相互作用中所涉及的核苷酸序列，所述功能调节包括多核苷酸的复制、重复、转录、剪接、翻译或降解。调节可能会影响过程的频率、速度或特异性，并且本质上可能是增强的或抑制的。本领域已知的控制元件包括例如转录调节序列，诸如启动子和增强子。启动子是在某些条件下能够结合RNA聚合酶并且发起通常位于启动子下游(在3'方向上)的编码区的转录的DNA区。
C.CD38蛋白质和抗CD38结合结构域
1.CD38蛋白质
本发明提供了特异性地结合人和食蟹猴CD38蛋白质的抗CD38结合结构域。人和食蟹猴CD38蛋白质的氨基酸序列分别以RefSeq访问标识符NP_001766.2(SEQ ID NO:28)和NP_001274206.1(SEQ ID NO:30)展示，其中ECD序列(相应地为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31)示出于图7中。
因此，如本文所用，术语“CD38”或“CD38蛋白质”或“CD38多肽”可以任选地包括任何此类蛋白质、其变体、缀合物或片段，包括但不限于如本文所述的已知或野生型CD38，以及任何天然存在的剪接变体、氨基酸变体或同种型，以及尤其是CD38的细胞外结构域(ECD)片段。也就是说，本发明的ABD通常结合至人和食蟹猴CD38蛋白质两者的ECD结构域。
2.抗CD38结合结构域
本发明提供了呈不同形式或定向的许多抗CD38结合结构域。以下描述了抗CD38结合结构域的特定CDR。如上所述，CDR的确切编号和放置在不同编号系统之间可以不同。然而，应理解，重链可变区和/或轻链可变区的公开内容包括相关联(固有)的CDR的公开内容。因此，每个重链可变区的公开内容是vhCDR(例如，vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)的公开内容，并且每个轻链可变区的公开内容是vlCDR(例如，vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的公开内容。
本公开提供了新的抗CD38结合结构域。此类抗原结合结构域可以结合人和食蟹猴CD38蛋白质。图6A至图6G示出了可以结合至人和食蟹猴CD38两者的四种不同的抗CD38 ABD的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变区和轻链可变区以Fab形式排列，如下所述，其任选地包括在全长抗体中。在一些实施方案中，重链可变区和轻链可变区融合在一起以形成如本文大体概述的scFv。
本文还包括在CDR和/或框架区中的一个或多个中具有氨基酸修饰的抗CD38 ABD。
如本文所概述，在一些实施方案中，6个CDR的集合可以具有0、1、2、3、4、5或6个氨基酸修饰(其中发现氨基酸取代特别有用)。也就是说，CDR可以具有氨基酸修饰(例如，来自CDR集合中的1、2、3、4、5或6个氨基酸修饰(也就是说，可以修饰CDR，只要6个CDR的集合中的变化总数少于6个氨基酸修饰即可，这改变了CDR的任何组合；例如，vlCDR1可能存在一个变化，vhCDR2可能存在两个变化，vhCDR3可能不存在变化等))。在一些实施方案中，vhCDR3中的氨基酸取代是不太优选的或要加以避免。在一些情况下，可以增加对人和食蟹猴CD38中的一者或两者的结合亲和力，而在其他实施方案中，可以降低结合亲和力。在这些实施方案中，保留了与人和食蟹猴CD38的结合。用于测试与本文概述的VH和VL序列相比较，抗CD38抗原结合结构域是否包含修饰的合适的测定是本领域已知的，诸如Biacore测定或者实施例1、2或3中概述的结合测定。
在一些实施方案中，本文概述的抗-CD38 ABD也可以在重链可变和轻链可变框架区中的任一者或两者的框架区中具有氨基酸修饰(再次，发现氨基酸取代特别有用)，只要框架(排除CDR)与人种系序列保持至少约80％、85％或90％的同一性。因此，例如，如本文所述的相同的CDR可以与来自人种系序列的不同框架序列组合，只要框架区与人种系序列保持至少80％、85％或90％的同一性。
在另一方面，本发明进一步提供了包括上文所列的重链可变区和轻链可变区的变体的抗CD38结合结构域。重链可变区可以与本文的“VH”序列至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同，和/或包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化。轻链可变区可以与本文的“VL”序列至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同，和/或包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个氨基酸变化。在这些实施方案中，本发明包括这些变体，只要抗原结合结构域仍然结合至人和食蟹猴CD38。用于测试与本文概述的VH和VL序列相比较，抗CD38抗原结合结构域是否包含突变的合适的测定是本领域已知的，诸如Biacore测定或者实施例1、2和3中的那些测定。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM1，并且包括：重链可变区，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:9至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:13至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM1，并且包括：包含SEQ ID NO:10的vhCDR1、包含SEQ ID NO:11的vhCDR2、包含SEQ ID NO:12的vhCDR3、包含SEQ ID NO:14的vlCDR1、包含SEQ ID NO:15的vlCDR2和包含SEQ ID NO:16的vlCDR3。在一些实施方案中，这6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，任何单个CDR包含不超过1或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗CD38抗原结合结构域保留与人和/或食蟹猴CD38的结合。
在一些实施方案中，CD38TM1的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:9中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域。
在一些实施方案中，CD38TM1的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:13中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，CD38TM1的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:9中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域，以及在SEQ ID NO:13中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM1，并且具有含SEQ ID NO:9的VH和含SEQ ID NO:13的VL。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM2，并且包括：重链可变区，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:17至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:21至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM2，并且包括：包含SEQ ID NO:18的vhCDR1、包含SEQ ID NO:19的vhCDR2、包含SEQ ID NO:20的vhCDR3、包含SEQ ID NO:22的vlCDR1、包含SEQ ID NO:23的vlCDR2和包含SEQ ID NO:24的vlCDR3。在一些实施方案中，这6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR包含不超过1或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗CD38抗原结合结构域保留与人和/或食蟹猴CD38的结合。
在一些实施方案中，CD38TM2的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:17中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域。
在一些实施方案中，CD38TM1的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:21中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，CD38TM2的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:17中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域，以及在SEQ ID NO:21中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM2，并且具有含SEQ ID NO:17的VH和含SEQ ID NO:21的VL。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM3，并且包括：重链可变区，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:1至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:5至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM3，并且包括：包含SEQ ID NO:2的vhCDR1、包含SEQ ID NO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQ ID NO:7的vlCDR2和包含SEQ ID NO:8的vlCDR3。在一些实施方案中，这6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR包含1或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗CD38抗原结合结构域保留与人和/或食蟹猴CD38的结合。
在一些实施方案中，CD38TM3的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:1中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域。
在一些实施方案中，CD38TM3的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:5中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，CD38TM3的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:1中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域，以及在SEQ ID NO:5中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM3，并且具有含SEQ ID NO:1的VH和含SEQ ID NO:5的VL。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域在本公开中是CD38TM4，包括：重链可变区，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:1至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:25至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM4，并且包括：包含SEQ ID NO:2的vhCDR1、包含SEQ ID NO:3的vhCDR2、包含SEQ ID NO:4的vhCDR3、包含SEQ ID NO:6的vlCDR1、包含SEQ ID NO:7的vlCDR2和包含SEQ ID NO:8的vlCDR3。在一些实施方案中，这6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR包含1或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗CD38抗原结合结构域保留与人和/或食蟹猴CD38的结合。
在一些实施方案中，CD38TM4的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:1中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域。
在一些实施方案中，CD38TM1的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:25中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，CD38TM4的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:1中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域，以及在SEQ ID NO:25中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM4，并且具有含SEQ ID NO:1的VH和含SEQ ID NO:25的VL。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域在本公开中是CD38TM5，包括：重链可变区，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:53至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:57至少80％(例如，80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM5，并且包括：包含SEQ ID NO:54的vhCDR1、包含SEQ ID NO:55的vhCDR2、包含SEQ ID NO:56的vhCDR3、包含SEQ ID NO:58的vlCDR1、包含SEQ ID NO:59的vlCDR2和包含SEQ ID NO:60的vlCDR3。在一些实施方案中，这6个CDR中的一个或多个具有1、2、3、4或5个氨基酸修饰。在另外的实施方案中，单个CDR包含1或2个氨基酸取代，并且经修饰的抗CD38抗原结合结构域保留与人和/或食蟹猴CD38的结合。
在一些实施方案中，CD38TM5的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:53中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域。
在一些实施方案中，CD38TM5的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:57中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，CD38TM5的抗CD38结合结构域具有在SEQ ID NO:53中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VH结构域，以及在SEQ ID NO:57中具有不超过1、2、3、4或5个氨基酸变化的VL结构域。
在一些实施方案中，抗CD38结合结构域是CD38TM5，并且具有含SEQ ID NO:53的VH和含SEQ ID NO:57的VL。
除了本文所述的每个抗CD38结合结构域的重链和轻链可变区和/或CDR中的序列变体之外，还可以进行一个或多个重链可变区和/或轻链可变区的一个或多个框架区的变化。在一些实施方案中，对与表1中描述的框架区序列保持至少80％、85％、90％或95％的同一性的框架区进行改变，同时保持6个CDR不变并且保留与人和/或食蟹猴CD38的结合。
在一些实施方案中，对框架区和6个CDR两者进行改变，同时保留抗CD38结合结构域与人和/或食蟹猴CD38的结合。在这些实施方案中，CDR可以具有氨基酸修饰(例如，来自6个CDR的集合中的1、2、3、4、或5个氨基酸修饰(也就是说，可以修饰CDR，只要6个CDR的集合中的变化总数少于6个氨基酸修饰即可，这改变了CDR的任何组合；例如，vlCDR1可能存在一个变化，vhCDR2可能存在两个变化，vhCDR3可能不存在变化等))。
抗CD38结合结构域的表位如下文所概述进行绘图。本发明不仅包括本文列举的抗原结合结构域和抗体，而且包括与被所列举的抗原结合结构域结合的表位竞争结合的那些，例如CD38TM1、CD38TM2、CD38TM3、CD38TM4和CD38TM5。识别相同表位的抗原结合结构域可以在简单的竞争性免疫测定中进行验证，从而显示一个抗原结合结构域(或包含这种抗原结合结构域的抗体)阻止另一个抗原结合结构域(或包含这种抗原结合结构域的抗体)结合至靶抗原CD38，例如“合并”的能力。可以如本领域所已知的那样进行竞争性结合研究，这通常使用SPR/
Figure GDA0003323055400000311
结合测定，以及ELISA和基于细胞的测定来进行。
D.抗CD38结合结构域的特征
本发明提供了新的抗CD38结合结构域。抗CD38结合结构域特异性结合人和食蟹猴CD38，优选人和食蟹猴CD38的ECD。与人和食蟹猴CD38结合是有用的，因为食蟹猴动物可用作人受试者的模型，以帮助确定、估计和理解靶向CD38的分子的体内作用和行为，诸如例如，关于药代动力学、药效学和毒理学；其中模型可以具有通过可翻译成相关物种的分子的靶结合和靶细胞杀伤。
在一些实施方案中，本文所述的抗CD38结合结构域以高亲和力结合人和食蟹猴CD38。KD值可在抗原固定下或在抗体固定下进行测量。KD值也可以单价或二价结合模式进行测量。例如，当格式化成IgG1并通过流式细胞术测量时，结合人CD38的抗原结合结构域的KD值可以是1×10-6M或以下、5×10-7M或以下、2.5×10-7M或以下、1×10-7M或以下、5×10-8M或以下、1×10-8M或以下、1×10-9M或以下或1×10-10M或以下。结合食蟹猴CD38的抗原结合结构域的KD值可以是1×10-6M或以下、5×10-7M或以下、2.5×10-7M或以下、1×10-7M或以下、5×10-8M或以下、2.5×10-8M或以下、1×10-8M或以下、5×10-9M或以下、1×10-9M或以下、5×10-10M或以下或1×10-10M或以下。在一些实施方案中，结合人CD38的抗原结合结构域的KD值的范围为0.1nM–1μM、0.25nM–500nM、0.5nM–250nM、1nM–100nM或1.5nM–50nM。在一些实施方案中，结合食蟹猴CD38的抗原结合结构域的KD值的范围为0.1nM–1μM、0.25nM–500nM、0.5nM–250nM、1nM–100nM或2nM–50nM。
此外，本公开中提供的抗CD38结合结构域可结合人CD38 ECD上表位中的各种氨基酸。在一些实施方案中，抗CD38结合结构域结合R78和/或D81。在一些实施方案中，抗CD38结合结构域结合F216、L262、L124、C201、L230、C254和/或S274。在一些实施方案中，本文所述的抗CD38结合结构域结合CD38上不与达雷木单抗重叠的表位。在一些实施方案中，本文所述的抗CD38结合结构域结合CD38上与达雷木单抗部分重叠的表位。在一些实施方案中，本文所述的抗CD38结合结构域能够在达雷木单抗存在下结合人和/或食蟹猴CD38。
在一些实施方案中，本文公开的抗CD38结合结构域中的一个或多个包括在组合物中，诸如在抗体中，其可用于在CD38表达增加的细胞，诸如多发性骨髓瘤细胞中诱导补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。
E.抗CD38结合结构域的组合物
如本文所述，本发明的抗CD38结合结构域可以不同形式使用，例如作为scFv或作为包含在传统四聚体抗体中的Fab。
1.包含抗CD38结合结构域的scFv
在一些实施方案中，所述组合物包含含有本文所述的抗CD38结合结构域的scFv。scFvs结合人和食蟹猴CD38，并包含通过scFv接头连接的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)。VL和VH可以处于任一定向，例如从N端到C端“VH-scFv接头-VL”或“VL-scFv接头-VH”。
虽然可使用任何合适的接头，但许多实施例使用甘氨酸-丝氨酸聚合物，包括例如15-残基(Gly4Ser)3肽(SEQ ID NO:32)。可用于形成非共价多价结构的合适的scFv接头包括，例如，GGS(SEQ ID NO:33)、GGGS(SEQ ID NO:34)、GGGGS(SEQ ID NO:35)、GGGGSGGG(SEQID NO:35)、GGGGSGGG(SEQ ID NO:35)NO:36)、GGSGGGG(SEQ ID NO:37)以及GSTSGGGSGGGSGGGGSS(SEQ ID NO:38)或允许重链可变区和轻链可变区以足够长度和灵活性重组连接以允许每个结构域保留其生物学功能的任何肽序列。
在本发明中可使用可变长度的接头。在一些实施方案中，使用长度为1至50个氨基酸的接头。在一些实施方案中，使用长度为3至12个氨基酸的接头，并且所得scFv单体由于自缔合而倾向于形成多聚体或寡聚体(例如双抗体、三抗体和四抗体)，其中大部分形式为二聚体。在一些实施方案中，使用长度为5个氨基酸的接头，诸如GGGGS(SEQ ID NO:35)，并且可由ABD形成双抗体。在一些实施方案中，使用长度超过12个(例如，13、14、15、16、17、18、19或20个)氨基酸的接头，并且所得scFv主要形成单体，只有少数部分经历自发多聚化。在一些实施方案中，使用1至3个氨基酸的接头，其促进scFv多聚化成比二聚体形式更大的更高级结构，诸如三聚体和/或三聚体与四聚体的混合物。
本发明还包括scFv的多聚化。它可由共价或非共价的分子工程改造策略控制，例如，涉及单链串联排列的共价策略、涉及半胱氨酸介导的、二硫键稳定的多聚体的共价策略和/或涉及二聚化结构域、接头选择和/或可变结构域顺序的非共价策略。可组合多种策略(例如，接头相关的非共价多聚化和共价二硫键稳定化)以产生scFv多聚体(参见例如Lu D等人，J Immunol Methods 279：219-32(2003))。
在一些实施方案中，本发明提供包含重链可变结构域和轻链可变结构域的ABD，包括选自由CD38TM1、CD38TM2、CD38TM3、CD38TM4、CD38TM5和CD38TM6组成的组的VH和VL结构域。在一些实施方案中，ABD是scFv的形式。VH和VL结构域通过5个氨基酸的scFv接头，例如GGGGS(SEQ ID NO:35)连接以从N端到C端形成“VH-scFv接头-VL”或“VL-scFv接头-VH”。双抗体可由此类ABD形成。示例性scFv的X射线结构的图示在图12中呈现。此scFv包含来自CD38TM4的VH和VL以及scFv接头GGGGS(SEQ ID NO:35)，并形成双抗体结构。
2.包含抗CD38结合结构域的抗体
在一些实施方案中，本发明的组合物是传统的四聚体抗体，其包含形成ABD的本发明的重链可变结构域和轻链可变结构域，包括CD38TM1、CD38TM2、CD38TM3、CD38TM4、CD38TM5和CD38TM6。一般而言，这些VH和VL对被添加到人和变体人IgG1、IgG2和IgG4的重链恒定结构域(CH1-铰链-CH2-CH3)，其序列显示于图10，以及λ或κ的轻链恒定结构域(CL)，也显示于图10。在一些实施方案中，本发明提供包含Fab的组合物，所述Fab包括本文所述的抗CD38结合结构域。重链可变区(包含vhCDR1、vhCDR2和vhCDR3)的C端连接到重链的CH1结构域的N端，并且轻链可变区(包含vlCDR1、vlCDR2和vlCDR3)的C端连接到轻链恒定结构域的N端。恒定λ或κ结构域中任一者，和本文所述的CH1结构域和轻链恒定结构域的变体一样，可用于本发明。
合适的重链恒定结构域包括但不限于图10中描绘的那些。
在一些实施方案中，抗体包含具有CD38TM1的VH和VL的重链(VH-CH1-铰链-CH2-CH3)。在这些实施方案中，重链恒定结构域可来自如图10所示的人和变体IgG1、IgG2和IgG4。
在一些实施方案中，VH(SEQ ID NO:9)形成有选自由SEQ ID NO:39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的重链恒定区，并且VL(SEQ ID NO:13)形成有选自SEQID NO:51和52的轻链恒定结构域。
在一些实施方案中，抗体包含具有CD38TM2的VH和VL的重链(VH-CH1-铰链-CH2-CH3)。在这些实施方案中，重链恒定结构域可来自如图10所示的人和变体IgG1、IgG2和IgG4。
在一些实施方案中，VH(SEQ ID NO:17)形成有选自由SEQ ID NO:39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的重链恒定区，并且VL(SEQ ID NO:21)形成有选自SEQ ID NO:51和52的轻链恒定结构域。
在一些实施方案中，抗体包含具有CD38TM3的VH和VL的重链(VH-CH1-铰链-CH2-CH3)。在这些实施方案中，重链恒定结构域可来自如图10所示的人和变体IgG1、IgG2和IgG4。
在一些实施方案中，VH(SEQ ID NO:1)形成有选自由SEQ ID NO:39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的重链恒定区，并且VL(SEQ ID NO:5)形成有选自SEQ IDNO:51和52的轻链恒定结构域。
在一些实施方案中，抗体包含具有CD38TM4的VH和VL的重链(VH-CH1-铰链-CH2-CH3)。在这些实施方案中，重链恒定结构域可来自如图10所示的人和变体IgG1、IgG2和IgG4。
在一些实施方案中，VH(SEQ ID NO:1)形成有选自由SEQ ID NO:39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的重链恒定区，并且VL(SEQ ID NO:25)形成有选自SEQID NO:51和52的轻链恒定结构域。
在一些实施方案中，抗体包含具有CD38TM5的VH和VL的重链(VH-CH1-铰链-CH2-CH3)。在这些实施方案中，重链恒定结构域可来自如图10所示的人和变体IgG1、IgG2和IgG4。
在一些实施方案中，VH(SEQ ID NO:53)形成有选自由SEQ ID NO:39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的重链恒定区，并且VL(SEQ ID NO:57)形成有选自SEQ ID NO:51和52的轻链恒定结构域。
如下所述，可在抗体的Fc区中引入额外的取代。
3.包含在融合蛋白中
在一些实施方案中，本发明的抗CD38结合结构域可包含在融合蛋白中，诸如美国申请号14/774,130、14/965,882、15/114,487、15/114,474、15/125,126、15/125,142和15/317,892；和美国临时申请号62/795,633、62/945,107和62/945,106中总体描述的，诸如图9中所示的。
4.抗体工程改造
抗CD38结合结构域和包含此类抗CD38结合结构域的组合物可被修饰或工程改造，以通过氨基酸取代改变氨基酸序列。如本文所讨论的，可进行氨基酸取代以改变CDR对蛋白质(例如人和/或食蟹猴CD38，包括增加和减少结合)的亲和力，以及改变抗原结合结构域和抗体的额外功能特性。
另外，在一些实施方案中，可对抗体的Fc区进行工程改造以包括修饰，典型地以便改变抗体的一种或多种功能特性，诸如血清半衰期、补体固定、Fcγ受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，根据本发明的至少一些实施方案的抗原结合结构域和抗体可被化学修饰(例如，一个或多个化学部分可连接到抗原结合结构域和抗体)或被修饰以改变其糖基化，或改变抗原结合结构域和抗体的一种或多种功能特性。以下进一步描述此类实施方案。Fc区的残基编号是Kabat的EU索引的编号。
在一个实施方案中，铰链区经过修饰，使得铰链区中的半胱氨酸残基数量改变，例如增加或减少。此方法在Bodmer等人的美国专利号5,677,425中进一步描述。改变CH1的铰链区中的半胱氨酸残基数量，例如，以有利于轻链和重链的装配，或增加或降低抗体的稳定性。
在另一个实施方案中，可修饰抗体以消除体内Fab臂交换，特别是当使用IgG4恒定结构域时。具体而言，此过程涉及在其他IgG4抗体之间交换IgG4半分子(一条重链加一条轻链)，从而有效地产生功能上单价的双特异性抗体。重链铰链区和恒定结构域的突变可消除此交换(参见Aalberse,RC,Schuurman J.,2002,Immunology 105:9-19)。如本文所述，在本发明中具有特定用途的突变是在IgG4恒定结构域的情况下的S241P(Kabat编号，S228P EU编号)。IgG4可用于本发明，因为它没有显著的效应子功能，并因此用于阻断受体与其配体的结合而不消耗细胞。
在一些实施方案中，可在Fc区进行氨基酸取代，通常用于改变与FcγR受体的结合。存在许多有用的Fc取代，可以进行所述Fc取代来改变与一种或多种FcγR受体的结合。导致结合增加以及结合减少的取代可以是有用的。例如，已知的是与FcγRIIIa的结合增加通常导致增加的ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性；细胞介导的反应，其中表达FcγR的非特异性细胞毒性细胞识别靶标细胞上结合的抗体，并且随后引起靶标细胞的溶解。类似地，在一些情况下，与FcγRIIb(抑制性受体)的结合减小同样可以是有益的。可用于本发明的氨基酸取代包括美国序列号11/124,620(特别是图41)和美国专利号6,737,056中所列的那些，这两个专利通过引用以其全文且具体地关于其中公开的变体明确地并入本文。
在又一个实例中，通过修饰以下位置的一个或多个氨基酸，对Fc区进行修饰以增加抗体介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或增加抗体对Fcγ受体的亲和力和/或增加FcRn结合：238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。Presta的PCT公布WO 00/42072中进一步描述了这种方法。此外，人IgG1上对于FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点已经被作图，并且具有改进结合的变体已经被描述(参见Shields,R.L.等人(2001)J.Biol.Chem.276:6591-6604)。已显示位置256、290、298、333、334和339处的特定突变改善与FcyRIII的结合。另外，已显示以下组合突变体改善FcγRIII结合：T256A/S298A、S298A/E333A、S298A/K224A和S298A/E333A/K334A。此外，诸如M252Y/S254T/T256E或M428L/N434S的突变可改善与FcRn的结合并增加抗体循环半衰期(参见Chan CA和Carter PJ(2010)Nature Rev Immunol 10:301-316)。
此外，本发明的抗体被修饰以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，可引入以下一种或多种突变：T252L、T254S、T256F，如Ward的美国专利号6,277,375中所述。或者，为了增加生物半衰期，可在CH1或CL区内改变抗体以包含从IgG的Fc区CH2结构域的两个环中取用的补救受体结合表位，如Presta等人的美国专利号5,869,046和6,121,022中所述。增加血清半衰期的其他突变公开于美国专利号8,883,973、6,737,056和7,371,826中，并且包括428L、434A、434S和428L/434S。
在又一个实施方案中，抗体的糖基化被修饰。例如，可制备无糖基化的抗体(即，抗体缺乏糖基化)。糖基化可加以改变，例如，增加抗体对抗原的亲和力或降低效应子功能，诸如ADCC。此类碳水化合物修饰可通过例如改变抗体序列内的一个或多个糖基化位点(例如N297)来实现。例如，可进行一个或多个氨基酸取代，其导致消除一个或多个可变区框架糖基化位点，从而消除该位点处的糖基化，其中丙氨酸替换在一些实施方案中有用。
另外或替代地，可制备具有改变的糖基化类型的抗体，诸如具有减少量的岩藻糖基残基的低岩藻糖基化抗体或具有增加的二等分GlcNac结构的抗体。此类改变的糖基化模式已被证明可增加抗体的ADCC能力。此类碳水化合物修饰可通过例如在具有改变的糖基化机制的宿主细胞中表达抗体来实现。本领域中已经描述了具有改变的糖基化机制的细胞，并且可将其用作宿主细胞，在其中表达根据本发明的至少一些实施方案的重组抗体，从而产生具有改变的糖基化的抗体。参见例如美国专利公布号20040110704和WO 2003/035835。
本发明所考虑的本文抗体的另一种修饰是聚乙二醇化或添加其他水溶性部分，通常是聚合物，例如，以提高半衰期。可将抗体聚乙二醇化，以例如增加本领域已知的抗体的生物学(例如血清)半衰期。
除了为了改变对FcγR和/或FcRn的结合亲和力和/或增加体内血清半衰期而进行的取代之外，还可进行额外的抗体修饰，如下文进一步详细描述。
在一些情况下，亲和力成熟已完成。有时将CDR中的氨基酸修饰称为“亲和力成熟”。“亲和力成熟的”抗原结合结构域或抗体是一个或多个CDR中具有一个或多个改变从而导致抗原结合结构域或抗体对抗原的亲和力相较于不具有那些改变的抗体得到改进的抗体。在一些情况下，可能需要减小抗体对其抗原的亲和力。可进行亲和力成熟以增大抗原结合结构域或抗体对抗原的结合亲和力，相较于“亲本”抗体增大至少约10％至50-100-150％或更多，或1至5倍。优选的亲和力成熟的抗原结合结构域或抗体对抗原具有纳摩尔级或甚至皮摩尔级亲和力。亲和力成熟抗体通过已知的程序产生。
在一些实施方案中，可在本发明的CD38结合结构域的CDR的一个或多个中进行一个或多个氨基酸修饰。一般来说，任何单个CDR中仅取代1或2或3个氨基酸，并且通常，一组6个CDR内进行不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变(例如vhCDR1-3和vlCDR1-3)。然而应理解，任何CDR中没有取代、有1、2或3个取代的任何组合可独立地且任选地地与任何其它取代相组合。
或者，可在本发明抗原结合结构域的CDR的一个或多个中进行“沉默的”氨基酸修饰，例如不显著改变抗原结合结构域或抗体对抗原的亲和力的修饰。所进行的这些修饰可以是处于许多原因，包括使表达最佳化(如可对编码本发明抗原结合结构域或抗体的核酸所做的修饰)。
F.编码抗体的核酸
还提供了编码抗CD38结合结构域的核酸组合物和包含此类抗原结合结构域的组合物，以及含有核酸的表达载体和用核酸和/或表达载体组合物转化的宿主细胞。如本领域技术人员将理解的，由于遗传密码的简并性，本文描述的蛋白质序列可由任何数量的可能的核酸序列编码。
编码包含抗CD38结合结构域的组合物的核酸组合物将取决于组合物的形式。包含两条重链和两条轻链的传统四聚体抗体由两个不同的核酸编码，一个编码重链，一个编码轻链。如本领域已知的，可将它们放入单个表达载体或两个表达载体中，转化到宿主细胞中，在宿主细胞中它们被表达以形成本发明的抗体。在一些实施方案中，例如当使用scFv构建体时，通常使用编码重链可变区-接头-轻链可变区的单一核酸，其可插入表达载体中以转化入宿主细胞。可将核酸放入含有适当转录和翻译控制序列的表达载体中，所述转录和翻译控制序列包括但不限于信号和分泌序列、调节序列、启动子、复制起点、选择基因等。
用于表达根据本发明的至少一些实施方案的重组抗体的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)、PER.C6、HEK293和本领域已知的其他细胞。
为了产生scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接到编码柔性接头的另一个片段，例如编码氨基酸序列GGGGS和本文讨论的其他序列，使得VH和VL序列可表达为连续的单链蛋白，其中VL和VH区由柔性接头连接。
G.制剂
在上述方法的实践中使用的治疗性组合物可以被配制成药物组合物，所述药物组合物包含适用于所需的递送方法的载体。适合的载体包括当与治疗性组合物组合时，保留有治疗性组合物的治疗功能并且通常与患者的免疫系统不反应的任何材料。实例包括但不限于许多标准药物载体中的任何载体，如无菌磷酸盐缓冲盐水溶液、抑菌水以及类似载体(通常参见Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,A.Osal.编,1980)。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒并且可包括缓冲剂。
包含本发明的抗CD38结合结构域或抗体的药物组合物可被配制用于任何合适的给药途径和方式，包括但不限于静脉输注。
对于静脉输注，在一些实施方案中，包含本发明的抗CD38结合结构域或抗体的药物组合物在含有低温保护剂和表面活性剂的水性缓冲溶液中配制。在一些实施方案中，包含本发明的抗CD38结合结构域或抗体的药物组合物在含有蔗糖作为低温保护剂和聚山梨醇酯80作为表面活性剂的柠檬酸钠缓冲水溶液中配制并维持在pH4.8-5.2。在一些实施方案中，包含本发明的抗CD38结合结构域或抗体的药物组合物在含有200mM蔗糖和0.02％体积/体积聚山梨醇酯80的20mM柠檬酸钠缓冲液pH 5.0中配制。下面列出一个示例性制剂：
Figure GDA0003323055400000421
包含本发明药物组合物的制剂可方便地以单位剂量的形式提供并且可通过制药领域所熟知的任何方法进行制备。在所述形式的情况下，组合物被分成含有适量活性组分的单位剂量。
在优选的实施方案中，选择给药量和给药频率以便是治疗或预防有效的。如本领域中所已知，可能必须针对蛋白质降解、全身性传递与局部传递、和新蛋白酶合成的速率、以及年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、药物相互作用和病状严重性进行调整，并且将能够由所属领域技术人员用常规经验来确定。
H.使用抗体的方法
本发明的抗CD38结合结构域和包含此类抗CD38结合结构域的组合物可用于多种诊断和治疗应用。
1.诊断用途
本发明的抗CD38结合结构域和包含此类抗CD38结合结构域的组合物可用于表达CD38的癌症的体外或体内诊断，包括过表达CD38的肿瘤的成像。
通常，诊断可用若干方式来完成。在一个实施方案中，使来自患者的组织，诸如活检样本，与通常标记的抗CD38抗体接触，使得抗体与内源性CD38结合。将来自标记的信号水平与来自同一患者或参考样本的正常非癌组织的信号水平进行比较，以确定是否存在表达CD38的癌症。活检样本可来自实体瘤、血液样本(对于淋巴瘤和白血病，诸如多发性骨髓瘤、ALL、T细胞淋巴瘤等)。通常，在此实施方案中，抗CD38抗体被标记，例如用荧光团或其他光学标记来标记，所述标记使用荧光计或本领域公知的其他光学检测系统进行检测。
在另一个实施方案中，将标记的二抗与样本接触，例如使用来自不同哺乳动物(小鼠、大鼠、兔、山羊等)的抗人IgG抗体以形成本领域已知的夹心测定。或者，抗CD38抗体可被直接标记(即生物素)并且可通过本领域针对标记剂的二抗进行检测。
一旦观察到CD38的过度表达，就可通过施用根据如本文概述的本发明的抗CD38抗原结合结构域或包含抗CD38结合结构域的组合物来进行治疗。
在其他实施方案中，进行体内诊断。通常，在此实施方案中，将抗CD38抗体(包括抗体片段)注射到患者体内并进行成像。例如，在此实施方案中，抗体通常用光学标记或MRI标记进行标记，诸如钆螯合物，mAb(包括片段)的放射性标记。
用于诊断的特别有用的抗体包括但不限于列举的抗体，或利用具有变异序列的CDR的抗体，或与本文所述的任何抗体竞争结合的抗体。
在许多实施方案中，将诊断抗体标记。本文中的“标记”意思是本文公开的抗体上附着有一种或多种元素、同位素或化学化合物以在筛选或诊断程序中实现检测。一般来说，标记分为几类：a)免疫标记，其可为被并入作为由抗体辨别的融合伴侣的抗原表位，b)同位素标记，其可为放射性或重同位素，c)小分子标记，其可包括荧光和比色分析染料，或如能够进行其它标记方法的生物素的分子，以及d)如粒子(包括用于超音波标记的气泡)或允许身体成像的顺磁性标记的标记。如本领域中所已知，标记可并入抗体中的任何位置且可在蛋白质表达期间体外或体内并入。
诊断可在体内通过施用如以下所述允许全身成像的诊断抗体、或体外在从患者取出的样本上进行。这种情形下的“样本”包括许多事物，包括但不限于体液(包括但不限于血液、尿液、血清、淋巴液、唾液、肛门和阴道分泌物、汗液和精液)以及如得自相关组织的活检的组织样本。
此外，如下所述，有关CD38蛋白表达水平的信息可用于确定应向患者施用哪些抗体。
2.疾病治疗
本发明的抗CD38结合结构域和包含此类抗CD38结合结构域的组合物在治疗有需要的受试者或人患者的可能由CD38过表达介导、调节或以其他方式影响的疾病、病症和/或病状中特别有用。治疗包括向受试者或患者施用治疗有效量的包含本发明的抗CD38结合结构域的组合物。在本发明的某些实施方案中，包含本发明的抗CD38结合结构域的组合物用于治疗或预防与CD38过表达相关的癌症或免疫病症。在一些实施方案中，待使用本发明的此方法治疗的疾病、病症或病状是含有CD38过表达细胞的造血系统癌症，诸如多发性骨髓瘤，并且更一般地，与表达CD38的细胞的生长控制丧失相关的病状。除了多发性骨髓瘤，CD38还在许多其他造血系统恶性肿瘤和从各种造血系统恶性肿瘤得到的细胞系中被上调，所述造血系统恶性肿瘤诸如非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma，NHL)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma，BL)、B慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)、B及T急性淋巴细胞性白血病(ALL)、T细胞淋巴瘤(TCL)、急性髓性白血病(AML)、毛细胞白血病(HCL)、霍奇金氏淋巴瘤(HL)以及慢性髓性白血病(CML)。
在一些实施方案中，本发明的抗CD38结合结构域和/或包含此类抗CD38结合结构域的组合物与现有的抗CD38抗体，例如达雷木单抗联合使用，用于治疗癌症或与CD38过表达相关的免疫病症，诸如多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，本发明的抗CD38结合结构域和/或包含此类抗CD38结合结构域的组合物用于治疗与CD38过表达相关的患者，诸如多发性骨髓瘤患者，该患者已经暴露于抗CD38抗体，诸如，例如，达雷木单抗。在一些实施方案中，本发明的抗CD38结合结构域和/或包含此类抗CD38结合结构域的组合物用于治疗与CD38过表达相关的患者，诸如多发性骨髓瘤患者，该患者已经经历现有抗CD38抗体，例如达雷木单抗的治疗失败。在一些实施方案中，抗CD38结合结构域和/或包含此类抗CD38结合结构域的组合物与现有抗CD38抗体组合用于治疗与CD38过表达相关的疾病，诸如多发性骨髓瘤，其中抗CD38结合结构域结合CD38上不同于现有抗CD38抗体结合的表位的表位。
VI.实施例
现已大体上描述本发明，参考以下实施例将更容易理解本发明，这些实施例被包括仅出于说明本发明的某些方面和实施方案的目的并且不意图限制本发明。
A.实施例1：抗CD38抗原结合克隆与人和食蟹猴CD38结合
1.抗CD38抗原结合克隆与表达CD38的细胞结合
将抗CD38抗原结合克隆格式化为人IgG1，并测定它们与CD38蛋白的结合。将表达人CD38的人多发性骨髓瘤细胞MOLP-8和表达重组食蟹猴CD38的细胞用浓度为100nM的抗CD38抗体或仅二抗对照孵育。使用荧光团缀合的抗人IgG二抗检测抗体与CD38的结合。然后通过流式细胞术分析细胞，并使用抗CD38抗体的平均荧光强度(MFI)与仅二抗对照相比来计算背景倍数(FOB)。抗CD38结合克隆结合人和食蟹猴CD38，并且来自克隆CD38TM3、CD38TM1和CD38TM2、CD38TM5和CD38TM6的示例性数据示出在表2中。
表2
克隆 人CD38(FOB) 食蟹猴CD38(FOB)
CD38TM3 212.2 528.2
CD38TM1 397.1 1920.1
CD38TM2 39.6 271.6
CD38TM5 550.1 104.5
CD38TM6 104.1 176.1
2.抗CD38抗原结合克隆与纯化的CD38结合
还测试了抗CD38抗原结合克隆与纯化的人和食蟹猴CD38分子的结合。将抗CD38抗原结合克隆格式化为scFv，然后将其与志贺毒素A亚基融合以产生靶向CD38的分子。对于每个抗CD38scFv，重链可变区(VH)通过GGGGS接头融合到轻链可变区(VL)的N端或C端。测试中还包括与志贺毒素A亚基融合的参考抗CD38结合克隆(靶向CD38的参考分子#1-SLTA，或CD38TR1-SLTA)，以及与志贺毒素A亚基融合的改良抗CD38结合克隆CD38TM4，它在CD38TM3的轻链框架区中包含氨基酸取代，从而能够通过蛋白L层析进行纯化。所测试的抗CD38/志贺毒素融合蛋白的氨基酸序列为：SEQ ID NO:40(CD38TM1-SLTA)、SEQ ID NO:41(CD38TM2-SLTA)、SEQ ID NO:42(CD38TM3-SLTA)、SEQ ID NO:43(CD38TM4-SLTA)和SEQ ID NO:44(CD38TR1-SLTA)。
简而言之，将Nunc maxisorp板在4℃下在PBS中用重组人或食蟹猴CD38涂覆过夜。将孔洗涤并封闭，然后用连续稀释的靶向CD38的分子孵育。结合到孔中的靶向CD38的分子通过两步法检测，包括检测志贺毒素结构域的鼠单克隆抗体，然后是抗小鼠辣根过氧化物酶(HRP)缀合的二抗。通过Ultra TMB ELISA Substrate(Thermo Fisher)检测HRP活性，并在450nM处读取吸光度。
抗CD38抗原结合克隆CD38TM1、CD38TM2、CD38TM3和CD38TM4与人和食蟹猴CD38都结合。相比之下，CD38TR1仅与人CD38结合。以与志贺毒素A亚基(SETA)的scFv融合形式测试每个抗CD38结合克隆的结合，如图2A-3B和图3A-3B所示。CD38TM4衍生自CD38TM3并保留了CD38TM3的CD38结合能力。计算了与SETA的scfv融合形式的抗CD38抗原结合克隆的结合亲和力并示出在表3中。
表3.
Figure GDA0003323055400000471
B.实施例2：抗CD38结合克隆的亲和力测定
进行细胞结合亲和力测定以定量抗CD38结合克隆对表达CD38的细胞的结合亲和力。表达人CD38的MOLP-8细胞以大约2百万细胞/mL的活细胞浓度混悬在1％FBS/PBS中。将格式化为IgG1的抗CD38结合克隆在PBS中在6孔板上跨孔连续稀释(从102nM到24.95pM的2倍稀释)。每次滴定的最后一孔仅含有PBS。然后将细胞悬液和额外的PBS添加到每个孔中，使得每个孔包含300μL的最终体积和大约100,000个细胞。将板在4℃下置于板振荡器中5小时，之后在4℃下使用PBS洗涤每个孔中的细胞3次。然后将200μl 99nM Cy5山羊抗人IgG Fc特异性多克隆抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories，#109-175-008)加入到每个孔中，并将板在4℃下振摇30分钟。将细胞在在4℃下用PBS再次洗涤两次，然后通过FACSCantoTMII HTS流式细胞仪进行分析。对含有独特抗体浓度的每个孔测量5000个事件的平均荧光强度(MFI)，并使用Scientist 3.0软件非线性拟合作为抗体浓度函数的MFI曲线，使用以下等式来估计抗原结合亲和力KD：F＝p[(KD+LT+n(M))-{(KD+LT+n(M))2-4n(M)(LT)}1/2]/2+B
其中F是MFI，LT是相当于抗体分子浓度2倍的总抗体结合位点浓度，p是使任意荧光单位与已结合抗体关联的比例常数，M是以摩尔浓度计的细胞浓度并基于300μl中100,000细胞给定为0.553fM，n是每孔受体的数目，B是背景信号，并且KD＝平衡解离常数。
对于每一抗体滴定曲线，在P、n、B以及KD在非线性分析中自由浮动时获得KD估计值。对于以上等式的详细推导，参见Drake and Klakamp(2007),"A rigorous multipleindependent binding site model for determining cell-based equilibriumdissociation constants,"J.Immunol.Methods 318:157-62，其以引用的方式并入本文。表4列出了抗CD38抗体克隆的测量KD。使用抗体结合位点浓度(2×分子浓度)进行非线性曲线拟合。
表4
克隆 K<sub>D</sub>(M)
CD38TM3 1.9E-09
CD38TM1 3.2E-08
CD38TM2 3.4E-08
CD38TM5 3.4E-08
CD38TM6 4.6E-09
C.抗CD38抗原结合克隆的表位作图
为了通过抗CD38抗原结合克隆鉴定CD38细胞外结构域(ECD)上的接触残基，通过Integral Molecular进行表位作图。通过枪弹诱变(shotgun mutagenesis)进行表位作图，枪弹诱变是一种标准测定设置，具有丙氨酸扫描和额外的突变，以酌情将氨基酸从人残基更改为食蟹猴残基。简而言之，使野生型或突变的人CD38 ECD在HEK293细胞的细胞表面上表达，然后通过流式细胞术将当某些氨基酸发生突变时，感兴趣的抗CD38抗原结合克隆结合CD38 ECD的能力与相同的抗CD38抗原结合克隆对野生型CD38 ECD的结合进行比较。用一系列也靶向CD38的对照分子，对于影响分子的表达或一般折叠的突变进行对照测定。表5示出了与具有特定突变的表面表达的CD38 ECD蛋白的结合作为与野生型CD38结合的百分比。以粗体标记的值表示对于抗CD38抗原结合克隆的结合和表面可及性(基于公开的CD38结构)至关重要的氨基酸。
表5.
Figure GDA0003323055400000491
Figure GDA0003323055400000501
抗CD38抗原结合克隆CD38TM1和CD38TM2在人CD38上共享相同的关键接触残基(R78和D81)。CD38TM5在人CD38上的关键残基包括R78、H79和D81(数据未示)。CD38TM3在人CD38上的关键残基包括F216、L262、L124、C201、L230、C254和S275。CD38TM4在人CD38上的关键残基包括F216、L262、C201、L230、C254和S275。图4示出了对于CD38TM3的关键残基的位置，包括以红色显示的表面可及的接触残基F216、L262；以紫色显示的关键结构残基L124、C230，和以灰色显示的参与二硫键对的关键结构残基C119/C201和LC254/C275。
与达雷木单抗相比，CD38TM1、CD38TM2和CD38TM5结合人CD38上的非重叠表位残基。CD38TM6与达雷木单抗结合人CD38上的重叠表位残基。CD38TM3和CD38TM4结合人CD38上与CD38TR1和达雷木单抗部分重叠的表位。CD38TR1结合人CD38上包括F216、L262、Q272和F273的表位。达雷木单抗结合人CD38上包括F274和F275的表位。
克隆CD38TM4和/或CD38TM3结合人CD38上与参考分子CD38TR1和可能地达雷木单抗部分重叠的表位。图4示出了人CD38上对于CD38TM4的关键残基的位置，包括以红色显示的表面可及的接触残基F216、L262；以紫色显示的关键结构残基L124、C201，和以灰色显示的参与二硫键对的关键结构残基C119/C201和LC254/C275。
测试了在现有CD38抗体的存在下抗CD38抗原结合克隆与CD38的结合，所述现有CD38抗体包括达雷木单抗、HB-7(Santa Cruz，目录号：sc-18858)、AT13-5(Thermo Fisher，目录号：MA5-16578)和OKT-10(Sigma，目录号：87021903)。如上所述，将CD38TM2、CD38TM1和CD38TM3格式化为scFv并与志贺毒素A亚基融合。将MOLP-8细胞用20μg/ml的现有抗CD38抗体(～130nM)或对照分子(单独的志贺毒素A亚基)孵育70分钟。然后加入0.5μg/ml的抗CD38/志贺毒素融合分子(～5nM)并与细胞孵育48小时。使用识别志贺毒素A亚基的一抗和FITC缀合的抗IgG二抗，然后进行流式细胞术来检测与CD38的抗体结合。在减去来自仅二抗对照中的信号后计算抗CD38抗原结合克隆的平均荧光强度(MFI)。
如图5A和5B所示，scFv SLTA融合蛋白形式的CD38TM1和CD38TM2在达雷木单抗、HB-7、AT13-5和OKT-10存在下能够结合CD38，表明它们结合CD38上的表位不同于达雷木单抗、HB-7、AT13-5和OKT-10结合的表位。scFv SLTA融合蛋白形式的CD38TM3在OKT-10存在下能够与CD38结合，但在达雷木单抗、HB-7和AT13-5存在下不能，表明CD38TM3与CD38上结合的表位与OKT-10结合的表位不同，并且CD38TM3与达雷木单抗、HB-7和AT13-5共享或部分地共享CD38上的表位。
还测试了抗CD38抗原结合克隆之间与CD38的竞争性结合。如上所述，将CD38TM2、CD38TM1和CD38TM3格式化为scFv并与志贺毒素A亚基融合。将MOLP-8细胞用20μg/ml的抗CD38结合克隆(～400nM)或对照分子(仅志贺毒素A亚基)孵育70分钟。然后加入0.5μg/ml的scFv SLTA融合蛋白形式的抗CD38抗原结合克隆并与细胞孵育48小时。通过识别志贺毒素A亚基的一抗和FITC缀合的抗IgG二抗，然后进行流式细胞术来检测CD38结合。在减去来自仅二抗对照的信号后计算抗CD38抗原结合克隆的平均荧光强度(MFI)，并将其绘制为从单独志贺毒素A亚基作为对照测量的MFI的百分比。
如图5C和5D所示，CD38TM1和CD38TM2以竞争方式与CD38结合，这与它们结合CD38上相同表位的事实一致。CD38TM3与CD38TM1和CD38TM2以半竞争方式结合CD38。
D.抗CD38抗体对CDC和ADCC的诱导
将抗CD38结合克隆格式化为人IgG1，并测试了它们诱导补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞介导细胞毒性(ADCC)的能力。
对于CDC测定，将MOLP-8细胞以每孔10,000细胞的密度接种在黑色96孔平底组织培养板中的50μL完全培养基(补充有10％胎牛血清的RPMI)。将50μL抗CD38抗体(9μg/ml)、对照IgG1抗体(9μg/ml)或单独的培养基加入到每个孔中，并在室温(RT)下孵育10分钟。除对照孔外，向每个孔中加入不同量(2-15μL)的纯化兔补体(Cat#CL 3441CedarlaneLaboratories,Canada)。在37℃下孵育一小时后，使板达到室温，向每个孔添加100μL细胞滴定CytoTox GloTM试剂(Promega G7571/G7573)，振荡板5至7分钟，并且在
Figure GDA0003323055400000521
(Perkin Elmer)发光板式读取器上读取发光。测试的条件：单独的细胞；细胞+补体；细胞+IgG1对照+补体；细胞+抗体+补体。使用以下等式计算％CDC：100-(RLUT/RLUC)×100)，其中RLUT为测试样本的相对发光单位，而RLUc为仅有补体的样本的相对发光单位。测定一式三份进行，并且使用PRISM软件进行统计分析。
为了测量ADCC，使用MOLP-8细胞作为靶细胞。通过从得自Stanford Blood Center(Palo Alto,Calif.)的血液黄层(buffy coat)或LRS的Ficoll-PlaqueTM分离，分离出外周血单核细胞(PBMC)作为效应细胞。试样利用PBS中的2％FBS进行1:3稀释。15mL Ficoll-PlaqueTM(GE Healthcare)轻轻成层在35mL经稀释试样下方并以1800rpm离心(刹车)25分钟。收集含有PBMC的浑浊中间相，在2％FBS/PBS中洗涤3次，并且在10％DMSO/FBS中冷冻成50×106细胞/mL等分试样的等分试样。使用前，将PBMC的冷冻等分试样解冻并以2×106细胞/mL于10％FBS/RPMI+5ng/mL重组人IL2(R&D systems#202-IL)中培养过夜。
对于ADCC测定，所有步骤在完全培养基中进行。在96孔板中每孔涂铺5000个靶细胞，并且向每个孔加入50μL抗CD38抗体(10μg/ml)、对照IgG1(10μg/ml)或仅培养基。然后将50μL人效应PBMC以对于靶:效应(T:E)细胞为1:25至1:50的比率添加到孔中。以800rpm短暂离心板30秒以使所有细胞紧密接近。在37℃下孵育4小时后，将板以1100rpm离心5分钟，并且将100μL上清液转移到白色板上。向上清液中添加100μL CytoTox GloTM试剂(Promegacat#G9292)，然后使板在室温下(RT)振荡20-30分钟。于
Figure GDA0003323055400000532
(Perkin Elmer)发光板式读取器上读取发光，并且使用以下等式计算特异性溶解百分比：(RLUT/RLUE/T)/(RLUL/RLUE/T)×100，其中RLUT为测试样本的相对发光单位，RLUE/T为含有单独的靶细胞和效应细胞的样本的相对发光单位，并且RLUL为以Triton X-100溶解的细胞的相对发光单位。测定一式三份进行，并且使用PRISM软件进行统计分析。
由抗CD38抗体克隆诱导的CDC和ADCC百分比示出在表5中。所有抗CD38抗体克隆都能够诱导对于表达CD38的细胞的CDC和ADCC。
表6
Figure GDA0003323055400000531
E.从CD38TM3衍生出CD38TM4
CD38TM3的VH和VL不与标准单克隆抗体纯化树脂(蛋白A或蛋白L)结合，并且使用His-tag和IMAC柱对其进行纯化(图11A示出了scFv-SLTA融合蛋白形式的CD38TM3作为例子的纯化)。为了更容易纯化，将CD38TM3的为λ轻链的轻链通过框架突变加以修饰，使其能够与蛋白L结合，从而在没有额外标签的情况下实现亲和纯化。如图11C所示，CD38TM3 VL结构域的前21个氨基酸被替换成CD38TR1的VL结构域的前22个氨基酸，其为衍生出CD38TM4的VL结构域的κ轻链。所得CD38TM4能够与蛋白L结合，并因此通过蛋白L柱纯化(图11B示出了scFv-SLTA融合蛋白形式的CD38TM4作为例子的纯化)。
序列表
<110> 千禧制药公司(Millennium Pharmaceuticals, Inc.)
<120> 抗CD38抗体
<130> 101588-5011-WO
<160> 68
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Pro Ser Thr Gly Phe Trp Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 2
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 3
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1 5
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 4
Ala Arg Gly Pro Ser Thr Gly Phe Trp Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 5
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 5
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Ala Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly
20 25 30
Phe Tyr Pro Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Thr Asn Asn Lys Tyr Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Arg Val
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Val Tyr Tyr Asp Gly
85 90 95
Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 6
Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Phe Tyr
1 5
<210> 7
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 7
Ala Thr Asn
1
<210> 8
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 8
Leu Val Tyr Tyr Asp Gly Ala Trp
1 5
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 9
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu His Ser Asn Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 10
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 11
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 12
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 12
Ala Arg Glu His Ser Asn Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 13
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 14
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 15
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 15
Gly Asn Ser
1
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 16
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 17
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 17
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Glu Thr Ser Phe Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 18
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 19
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 19
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr
1 5
<210> 20
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 20
Ala Arg Glu Gly Glu Thr Ser Phe Gly Leu Asp Val
1 5 10
<210> 21
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 21
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Val Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 22
Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Tyr
1 5
<210> 23
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 23
Arg Asn Asn
1
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 24
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Val Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ala Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser
20 25 30
Gly Phe Tyr Pro Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
35 40 45
Ala Leu Ile Tyr Ala Thr Asn Asn Lys Tyr Ser Trp Thr Pro Ala Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Arg
65 70 75 80
Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Val Tyr Tyr Asp
85 90 95
Gly Ala Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 26
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向参考分子
<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Met Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
50 55 60
Ser Arg Leu Asn Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Ser Met Ile Thr Thr Gly Phe Val Met Asp Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向参考分子
<400> 27
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Thr Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Asn Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 28
<211> 300
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38智人
<400> 28
Met Ala Asn Cys Glu Phe Ser Pro Val Ser Gly Asp Lys Pro Cys Cys
1 5 10 15
Arg Leu Ser Arg Arg Ala Gln Leu Cys Leu Gly Val Ser Ile Leu Val
20 25 30
Leu Ile Leu Val Val Val Leu Ala Val Val Val Pro Arg Trp Arg Gln
35 40 45
Gln Trp Ser Gly Pro Gly Thr Thr Lys Arg Phe Pro Glu Thr Val Leu
50 55 60
Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His Pro Glu Met Arg His Val
65 70 75 80
Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys Gly Ala Phe Ile Ser Lys
85 90 95
His Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gln Pro Leu Met Lys Leu
100 105 110
Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Ile Leu Leu Trp Ser Arg Ile
115 120 125
Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val Gln Arg Asp Met Phe Thr
130 135 140
Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr Leu Ala Asp Asp Leu Thr Trp Cys
145 150 155 160
Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp Trp
165 170 175
Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser Val Phe Trp Lys Thr Val
180 185 190
Ser Arg Arg Phe Ala Glu Ala Ala Cys Asp Val Val His Val Met Leu
195 200 205
Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys Asn Ser Thr Phe Gly Ser
210 215 220
Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys Val Gln Thr Leu Glu Ala
225 230 235 240
Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser Arg Asp Leu Cys Gln Asp
245 250 255
Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile Ser Lys Arg Asn Ile Gln
260 265 270
Phe Ser Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp Lys Phe Leu Gln Cys Val
275 280 285
Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Thr Ser Glu Ile
290 295 300
<210> 29
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38智人细胞外结构域
<400> 29
Val Pro Arg Trp Arg Gln Gln Trp Ser Gly Pro Gly Thr Thr Lys Arg
1 5 10 15
Phe Pro Glu Thr Val Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Ile His
20 25 30
Pro Glu Met Arg His Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys
35 40 45
Gly Ala Phe Ile Ser Lys His Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr
50 55 60
Gln Pro Leu Met Lys Leu Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Ile
65 70 75 80
Leu Leu Trp Ser Arg Ile Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val
85 90 95
Gln Arg Asp Met Phe Thr Leu Glu Asp Thr Leu Leu Gly Tyr Leu Ala
100 105 110
Asp Asp Leu Thr Trp Cys Gly Glu Phe Asn Thr Ser Lys Ile Asn Tyr
115 120 125
Gln Ser Cys Pro Asp Trp Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser
130 135 140
Val Phe Trp Lys Thr Val Ser Arg Arg Phe Ala Glu Ala Ala Cys Asp
145 150 155 160
Val Val His Val Met Leu Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Phe Gly Ser Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys
180 185 190
Val Gln Thr Leu Glu Ala Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser
195 200 205
Arg Asp Leu Cys Gln Asp Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile
210 215 220
Ser Lys Arg Asn Ile Gln Phe Ser Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp
225 230 235 240
Lys Phe Leu Gln Cys Val Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Thr Ser
245 250 255
Glu Ile
<210> 30
<211> 301
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38长尾猕猴
<400> 30
Met Ala Asn Cys Glu Phe Ser Pro Val Ser Gly Asp Lys Pro Cys Cys
1 5 10 15
Arg Leu Ser Arg Arg Ala Gln Val Cys Leu Gly Val Cys Leu Leu Val
20 25 30
Leu Leu Ile Leu Val Val Val Val Ala Val Val Leu Pro Arg Trp Arg
35 40 45
Gln Gln Trp Ser Gly Ser Gly Thr Thr Ser Arg Phe Pro Glu Thr Val
50 55 60
Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Val His Pro Glu Met Arg His
65 70 75 80
Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys Gly Ala Phe Ile Ser
85 90 95
Lys Tyr Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr Gln Pro Leu Val Lys
100 105 110
Leu Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Thr Leu Leu Trp Ser Arg
115 120 125
Ile Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val Gln Arg Asp Met Phe
130 135 140
Thr Leu Glu Asp Met Leu Leu Gly Tyr Leu Ala Asp Asp Leu Thr Trp
145 150 155 160
Cys Gly Glu Phe Asn Thr Phe Glu Ile Asn Tyr Gln Ser Cys Pro Asp
165 170 175
Trp Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser Val Phe Trp Lys Thr
180 185 190
Val Ser Arg Arg Phe Ala Glu Thr Ala Cys Gly Val Val His Val Met
195 200 205
Leu Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys Asn Ser Thr Phe Gly
210 215 220
Ser Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys Val Gln Ala Leu Glu
225 230 235 240
Ala Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser Arg Asp Leu Cys Gln
245 250 255
Asp Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile Ser Lys Arg Asn Ile
260 265 270
Arg Phe Phe Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp Lys Phe Leu Gln Cys
275 280 285
Val Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Leu Ser Gly Ile
290 295 300
<210> 31
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38长尾猕猴细胞外结构域
<400> 31
Leu Pro Arg Trp Arg Gln Gln Trp Ser Gly Ser Gly Thr Thr Ser Arg
1 5 10 15
Phe Pro Glu Thr Val Leu Ala Arg Cys Val Lys Tyr Thr Glu Val His
20 25 30
Pro Glu Met Arg His Val Asp Cys Gln Ser Val Trp Asp Ala Phe Lys
35 40 45
Gly Ala Phe Ile Ser Lys Tyr Pro Cys Asn Ile Thr Glu Glu Asp Tyr
50 55 60
Gln Pro Leu Val Lys Leu Gly Thr Gln Thr Val Pro Cys Asn Lys Thr
65 70 75 80
Leu Leu Trp Ser Arg Ile Lys Asp Leu Ala His Gln Phe Thr Gln Val
85 90 95
Gln Arg Asp Met Phe Thr Leu Glu Asp Met Leu Leu Gly Tyr Leu Ala
100 105 110
Asp Asp Leu Thr Trp Cys Gly Glu Phe Asn Thr Phe Glu Ile Asn Tyr
115 120 125
Gln Ser Cys Pro Asp Trp Arg Lys Asp Cys Ser Asn Asn Pro Val Ser
130 135 140
Val Phe Trp Lys Thr Val Ser Arg Arg Phe Ala Glu Thr Ala Cys Gly
145 150 155 160
Val Val His Val Met Leu Asn Gly Ser Arg Ser Lys Ile Phe Asp Lys
165 170 175
Asn Ser Thr Phe Gly Ser Val Glu Val His Asn Leu Gln Pro Glu Lys
180 185 190
Val Gln Ala Leu Glu Ala Trp Val Ile His Gly Gly Arg Glu Asp Ser
195 200 205
Arg Asp Leu Cys Gln Asp Pro Thr Ile Lys Glu Leu Glu Ser Ile Ile
210 215 220
Ser Lys Arg Asn Ile Arg Phe Phe Cys Lys Asn Ile Tyr Arg Pro Asp
225 230 235 240
Lys Phe Leu Gln Cys Val Lys Asn Pro Glu Asp Ser Ser Cys Leu Ser
245 250 255
Gly Ile
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 32
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 33
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 33
Gly Gly Ser
1
<210> 34
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 34
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 35
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 35
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 36
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
1 5
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 37
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 38
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 连接子序列
<400> 38
Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 39
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG1恒定区
<400> 39
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 40
<211> 526
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分-SLTA
<400> 40
Met Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp
1 5 10 15
Ser Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile
20 25 30
Ser Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ile Gly Asp
35 40 45
Asn Leu Phe Ala Val Asp Ile Leu Gly Phe Asp Phe Thr Leu Gly Arg
50 55 60
Phe Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr
65 70 75 80
Gly Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe
85 90 95
Ser His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Ala Asp
100 105 110
Ser Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly
115 120 125
Met Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met
130 135 140
Ser His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu
145 150 155 160
Arg Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Ala Ser Tyr Val
180 185 190
Met Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser
195 200 205
Ser Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg
210 215 220
Ile Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile
225 230 235 240
Leu Asn Ser His His His Ala Ser Ala Val Ala Ala Glu Phe Pro Lys
245 250 255
Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Gly Gly Ala Pro Gln Ser Val Leu
260 265 270
Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile
275 280 285
Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp
290 295 300
Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Asn
305 310 315 320
Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
325 330 335
Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu
340 345 350
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Gly
355 360 365
Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Gly
370 375 380
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
385 390 395 400
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly
405 410 415
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
420 425 430
Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
435 440 445
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
450 455 460
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
465 470 475 480
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
485 490 495
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu His Ser Asn Tyr Phe Tyr Gly
500 505 510
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
515 520 525
<210> 41
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分-SLTA
<400> 41
Met Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp
1 5 10 15
Ser Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile
20 25 30
Ser Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ile Gly Asp
35 40 45
Asn Leu Phe Ala Val Asp Ile Leu Gly Phe Asp Phe Thr Leu Gly Arg
50 55 60
Phe Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr
65 70 75 80
Gly Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe
85 90 95
Ser His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Ala Asp
100 105 110
Ser Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly
115 120 125
Met Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met
130 135 140
Ser His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu
145 150 155 160
Arg Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Ala Ser Tyr Val
180 185 190
Met Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser
195 200 205
Ser Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg
210 215 220
Ile Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile
225 230 235 240
Leu Asn Ser His His His Ala Ser Ala Val Ala Ala Glu Phe Pro Lys
245 250 255
Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Gly Gly Ala Pro Gln Ser Val Leu
260 265 270
Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile
275 280 285
Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Tyr Val Tyr Trp
290 295 300
Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn
305 310 315 320
Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
325 330 335
Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu
340 345 350
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Val Ser Val
355 360 365
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
385 390 395 400
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
405 410 415
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
420 425 430
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
435 440 445
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
450 455 460
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
465 470 475 480
Ala Arg Glu Gly Glu Thr Ser Phe Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly
485 490 495
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
500
<210> 42
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分-SLTA
<400> 42
Met Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp
1 5 10 15
Ser Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile
20 25 30
Ser Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ile Gly Asp
35 40 45
Asn Leu Phe Ala Val Asp Ile Leu Gly Phe Asp Phe Thr Leu Gly Arg
50 55 60
Phe Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr
65 70 75 80
Gly Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe
85 90 95
Ser His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Ala Asp
100 105 110
Ser Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly
115 120 125
Met Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met
130 135 140
Ser His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu
145 150 155 160
Arg Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Ala Ser Tyr Val
180 185 190
Met Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser
195 200 205
Ser Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg
210 215 220
Ile Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile
225 230 235 240
Leu Asn Ser His His His Ala Ser Ala Val Ala Ala Glu Phe Pro Lys
245 250 255
Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Gly Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu
260 265 270
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile
275 280 285
Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp
290 295 300
Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr
305 310 315 320
Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val
325 330 335
Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser
340 345 350
Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Pro
355 360 365
Ser Thr Gly Phe Trp Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
370 375 380
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
385 390 395 400
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu
405 410 415
Thr Cys Ala Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Phe Tyr Pro Asn
420 425 430
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala Leu Ile Tyr Ala
435 440 445
Thr Asn Asn Lys Tyr Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu
450 455 460
Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Arg Val Gln Pro Glu Asp
465 470 475 480
Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Val Tyr Tyr Asp Gly Ala Trp Val Phe
485 490 495
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
500 505
<210> 43
<211> 507
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分-SLTA
<400> 43
Met Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp
1 5 10 15
Ser Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile
20 25 30
Ser Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ile Gly Asp
35 40 45
Asn Leu Phe Ala Val Asp Ile Leu Gly Phe Asp Phe Thr Leu Gly Arg
50 55 60
Phe Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr
65 70 75 80
Gly Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe
85 90 95
Ser His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Ala Asp
100 105 110
Ser Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly
115 120 125
Met Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met
130 135 140
Ser His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu
145 150 155 160
Arg Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Ala Ser Tyr Val
180 185 190
Met Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser
195 200 205
Ser Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg
210 215 220
Ile Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile
225 230 235 240
Leu Asn Ser His His His Ala Ser Ala Val Ala Ala Glu Phe Pro Lys
245 250 255
Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Gly Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu
260 265 270
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile
275 280 285
Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp
290 295 300
Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr
305 310 315 320
Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln Gly Gln Val
325 330 335
Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser
340 345 350
Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Pro
355 360 365
Ser Thr Gly Phe Trp Ser Gly Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
370 375 380
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
385 390 395 400
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
405 410 415
Ile Thr Cys Ala Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Ala Leu Ile Tyr
435 440 445
Ala Thr Asn Asn Lys Tyr Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
450 455 460
Leu Leu Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Arg Val Gln Pro Glu
465 470 475 480
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Val Tyr Tyr Asp Gly Ala Trp Val
485 490 495
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
500 505
<210> 44
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分-SLTA
<400> 44
Met Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp
1 5 10 15
Ser Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile
20 25 30
Ser Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ser Gly Asp
35 40 45
Asn Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg
50 55 60
Phe Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr
65 70 75 80
Gly Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe
85 90 95
Ser His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp
100 105 110
Ser Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly
115 120 125
Met Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met
130 135 140
Ser His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu
145 150 155 160
Arg Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val
180 185 190
Met Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser
195 200 205
Ser Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg
210 215 220
Ile Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile
225 230 235 240
Leu Asn Cys His His His Ala Ser Ala Val Ala Ala Glu Phe Pro Lys
245 250 255
Pro Ser Thr Pro Pro Gly Ser Ser Gly Gly Ala Pro Asp Ile Gln Met
260 265 270
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
275 280 285
Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg Leu Thr Trp Tyr
290 295 300
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Ser Gly Ala Thr
305 310 315 320
Ser Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
325 330 335
Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
340 345 350
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Trp Ser Asn Pro Tyr Thr Phe Gly Gln
355 360 365
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
370 375 380
Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu
385 390 395 400
Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His Trp
405 410 415
Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly Val Met Trp
420 425 430
Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met Ser Arg Leu Asn
435 440 445
Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu Arg Leu Ser Ser
450 455 460
Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ser Met Ile
465 470 475 480
Thr Thr Gly Phe Val Met Asp Ser Trp Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr
485 490 495
Val Ser Ser
<210> 45
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG1 D265A恒定区
<400> 45
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ala Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 46
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG1 N297A恒定区
<400> 46
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 47
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG2恒定区
<400> 47
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 48
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG3恒定区
<400> 48
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 49
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG4恒定区(野生型)
<400> 49
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 50
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgG4恒定区(S241P铰链突变体)
<400> 50
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 51
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人κ轻链
<400> 51
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 52
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人λ轻链
<400> 52
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 53
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Glu Gly Pro Tyr Tyr Leu Tyr Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 54
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 55
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 55
Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile
1 5
<210> 56
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 56
Ala Thr Glu Gly Pro Tyr Tyr Leu Tyr Gly Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 57
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 57
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Asn Thr Leu
85 90 95
Ser Gly Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 58
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 58
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 59
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 59
Gly Asn Ser
1
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 60
Gln Ser Tyr Asp Asn Thr Leu Ser Gly Val
1 5 10
<210> 61
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 61
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Leu Phe His Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Phe Gly His
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 62
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 62
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly
1 5
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 63
Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 64
Ala Arg Gly Gly Leu Phe His Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Phe Gly His
1 5 10 15
<210> 65
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 65
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ala Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Ser Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 66
Ser Ser Asn Ile Gly Asn Ser Tyr
1 5
<210> 67
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 67
Arg Asn Asn
1
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD38靶向部分
<400> 68
Ser Ala Trp Asp Asp Asn Leu Ser Val
1 5

Claims (27)

1.一种组合物，其包含抗CD38抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包含：
a)重链可变结构域(VH)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:2的序列的VHCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:3的序列的VHCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:4的序列的VHCDR3；以及
b)轻链可变结构域(VL)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:6的序列的VLCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:7的序列的VLCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:8的序列的VLCDR3。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述VH包含SEQ ID NO:1的序列且所述VL包含SEQ ID NO:25的序列。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述VH包含SEQ ID NO:1的序列且所述VL包含SEQ ID NO:5的序列。
4.一种包含抗CD38抗原结合结构域的组合物，所述抗CD38抗原结合结构域包含：
a)重链可变结构域(VH)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:10的序列的VHCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:11的序列的VHCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:12的序列的VHCDR3；以及
b)轻链可变结构域(VL)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:14的序列的VLCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:15的序列的VLCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:16的序列的VLCDR3。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述VH包含SEQ ID NO:9的序列且所述VL包含SEQ ID NO:13的序列。
6.一种组合物，其包含抗CD38抗原结合结构域，所述抗CD38抗原结合结构域包含：
a)重链可变结构域(VH)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:18的序列的VHCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:19的序列的VHCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:20的序列的VHCDR3；以及
b)轻链可变结构域(VL)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:22的序列的VLCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:23的序列的VLCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:24的序列的VLCDR3。
7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述VH包含SEQ ID NO:17的序列且所述VL包含SEQ ID NO:21的序列。
8.一种组合物，其包含抗CD38抗原结合结构域，所述抗CD38抗原结合结构域包含：
a)重链可变结构域(VH)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:54的序列的VHCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:55的序列的VHCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:56的序列的VHCDR3；以及
b)轻链可变结构域(VL)，其包含：
i)包含SEQ ID NO:58的序列的VLCDR1；
ii)包含SEQ ID NO:59的序列的VLCDR2；以及
iii)包含SEQ ID NO:60的序列的VLCDR3。
9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述VH包含SEQ ID NO:53的序列且所述VL包含SEQ ID NO:57的序列。
10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述VH和所述VL在单一多肽中。
11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述多肽包括scFv接头并且所述多肽具有VH-scFv接头-VL的从N端到C端的定向。
12.根据权利要求10所述的组合物，其中所述多肽包括scFv接头并且所述多肽具有VL-scFv接头-VH的从N端到C端的定向。
13.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含第一多肽和第二多肽，所述第一多肽包含所述VH，所述第二多肽包含所述VL。
14.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述组合物是抗体，所述抗体包含：
a)包含所述VH的重链；和
b)包含所述VL的轻链。
15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述重链包含所述重链可变结构域和重链恒定结构域，所述重链恒定结构域选自由人IgG1、IgG2和IgG4或其变体的重链恒定结构域组成的组。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述重链恒定结构域是人IgG1的重链恒定结构域。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述重链恒定结构域是所述人IgG1的变体重链恒定结构域。
18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述人IgG1的变体重链恒定结构域具有消除的FcγR结合。
19.根据权利要求15所述的组合物，其中所述重链恒定结构域是相比于人IgG4的野生型重链恒定结构域包含S228P氨基酸取代的人IgG4重链恒定结构域的变体。
20.一种核酸组合物，其编码权利要求15所述的组合物，其中所述核酸组合物包含：
a)第一核酸，其编码所述第一多肽；和
b)第二核酸，其编码所述第二多肽。
21.一种核酸组合物，其包含编码根据权利要求10所述的组合物的核酸。
22.一种表达载体组合物，其包含权利要求21所述的核酸。
23.一种表达载体组合物，其包含权利要求20所述的第一核酸和第二核酸。
24.一种表达载体组合物，其包含：
a)第一表达载体，其包含权利要求20所述的第一核酸；和
b)第二表达载体，其包含权利要求20所述的第二核酸。
25.一种宿主细胞，其包含根据权利要求22至24中任一项所述的表达载体组合物。
26.一种制备包含抗CD38抗原结合结构域的组合物的方法，其包括在表达所述包含抗CD38结合结构域的组合物的条件下培养权利要求25所述的宿主细胞，以及回收所述组合物。
27.一种治疗多发性骨髓瘤的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1至19中任一项所述的组合物。
CN202080010821.7A 2019-01-23 2020-01-23 抗cd38抗体 Pending CN113710324A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962795855P 2019-01-23 2019-01-23
US62/795,855 2019-01-23
PCT/US2020/014845 WO2020154540A1 (en) 2019-01-23 2020-01-23 Anti-cd38 antibodies

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113710324A true CN113710324A (zh) 2021-11-26

Family

ID=69740548

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080010821.7A Pending CN113710324A (zh) 2019-01-23 2020-01-23 抗cd38抗体

Country Status (9)

Country Link
US (2) US11414496B2 (zh)
EP (1) EP3914358A1 (zh)
JP (1) JP2022518282A (zh)
CN (1) CN113710324A (zh)
AR (1) AR119677A1 (zh)
AU (1) AU2020211407A1 (zh)
CA (1) CA3127624A1 (zh)
TW (1) TW202043281A (zh)
WO (1) WO2020154540A1 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020154531A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Cd38-binding proteins comprising de-immunized shiga toxin a subunit effectors
CN113710324A (zh) 2019-01-23 2021-11-26 千禧制药公司 抗cd38抗体
US20230312742A1 (en) * 2020-06-17 2023-10-05 Y-Mabs Therapeutics, Inc. CD38 antibodies for the treatment of human diseases
WO2023172983A1 (en) * 2022-03-08 2023-09-14 Molecular Templates, Inc. Ctla-4 binding molecules comprising shiga toxin a subunit scaffolds and uses thereof

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
EP0915987A2 (en) 1997-04-21 1999-05-19 Donlar Corporation POLY-($g(a)-L-ASPARTIC ACID), POLY-($g(a)-L-GLUTAMIC ACID) AND COPOLYMERS OF L-ASP AND L-GLU, METHOD FOR THEIR PRODUCTION AND THEIR USE
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7449443B2 (en) 2000-03-23 2008-11-11 California Institute Of Technology Method for stabilization of proteins using non-natural amino acids
US6586207B2 (en) 2000-05-26 2003-07-01 California Institute Of Technology Overexpression of aminoacyl-tRNA synthetases for efficient production of engineered proteins containing amino acid analogues
EP1443961B1 (en) 2001-10-25 2009-05-06 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
WO2003073238A2 (en) 2002-02-27 2003-09-04 California Institute Of Technology Computational method for designing enzymes for incorporation of amino acid analogs into proteins
JPWO2003085107A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 ゲノムが改変された細胞
WO2005035727A2 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Ambrx, Inc. Polymer derivatives
AU2005211385B2 (en) 2004-02-02 2008-12-11 Ambrx, Inc. Modified human growth hormone polypeptides and their uses
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
JOP20210044A1 (ar) * 2010-12-30 2017-06-16 Takeda Pharmaceuticals Co الأجسام المضادة لـ cd38
US20160177284A1 (en) 2014-01-27 2016-06-23 Molecular Templates, Inc. Cell-targeted molecules comprising amino-terminus proximal or amino-terminal shiga toxin a subunit effector regions
US9603927B2 (en) * 2014-02-28 2017-03-28 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with anti-CD38 antibodies
EP3872090A1 (en) 2014-03-11 2021-09-01 Molecular Templates, Inc. Proteins comprising amino-terminal proximal shiga toxin a subunit effector regions and cell-targeting immunoglobulin-type binding regions
US10208120B2 (en) 2014-11-05 2019-02-19 Genentech, Inc. Anti-FGFR2/3 antibodies and methods using same
KR20240038121A (ko) 2015-05-30 2024-03-22 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 탈면역된 시가 독소 a 서브유닛 스캐폴드 및 이를 포함하는 세포-표적화 분자
WO2020154531A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Cd38-binding proteins comprising de-immunized shiga toxin a subunit effectors
CN113710324A (zh) 2019-01-23 2021-11-26 千禧制药公司 抗cd38抗体

Also Published As

Publication number Publication date
US11414496B2 (en) 2022-08-16
WO2020154540A1 (en) 2020-07-30
EP3914358A1 (en) 2021-12-01
US20200231696A1 (en) 2020-07-23
TW202043281A (zh) 2020-12-01
AU2020211407A1 (en) 2021-08-12
US20230203186A1 (en) 2023-06-29
AR119677A1 (es) 2022-01-05
CA3127624A1 (en) 2020-07-30
JP2022518282A (ja) 2022-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11584794B2 (en) Bispecific heterodimeric fusion proteins containing IL-15-IL-15Ralpha Fc-fusion proteins and immune checkpoint antibody fragments
JP2021072784A (ja) 抗ｃｄ３抗体、抗ｃｄ１２３抗体及びｃｄ３及び／又はｃｄ１２３に特異的に結合する二重特異性抗体
KR20210010862A (ko) IL-15/IL-15Rα Fc-융합 단백질 및 PD-1 항원 결합 도메인을 함유하는 PD-1 표적화 이종이량체 융합 단백질 및 이의 용도
US11414496B2 (en) Anti-CD38 binding domains
TW201639880A (zh) 針對ｒｏｒ１之特異性抗體及嵌合抗原受體
WO2022179004A1 (zh) 肿瘤靶向、抗cd3和t细胞激活三功能融合蛋白及其应用
WO2018176159A1 (en) Tumor antigen presentation inducer constructs and uses thereof
JP2022541163A (ja) Ｎｋｇ２ｄに結合する抗体
JP2022523442A (ja) 抗Ｖβ１７／抗ＣＤ１２３二重特異性抗体
CN115151307A (zh) 抗mertk抗体和其使用方法
CN111787949A (zh) 变体cd3-结合结构域及其在用于治疗疾病的组合疗法中的用途
CN113307879A (zh) 一种taa/ctla-4/il15三功能融合蛋白及其应用
CN116075525A (zh) 抗mertk抗体及其使用方法
AU2014261398B2 (en) Monoclonal antibody directed against CXCR5
CN111183153A (zh) Cd3/cd33双特异性结合分子
JP2023547506A (ja) Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための抗ｃｄ１９剤及びｂ細胞標的化剤の組み合わせ療法
KR20230154311A (ko) Cd3 및 gpc3에 결합하는 이종이량체 항체
CN113966231A (zh) 用于调节t细胞介导的免疫力的材料和方法
WO2023083298A1 (zh) 抗icosl抗体融合蛋白及用途
WO2023284829A1 (zh) 特异性结合hgfr和egfr的抗原结合分子及其医药用途
WO2024051804A1 (zh) 抗ilt4抗体及其医药用途
CN117715940A (zh) 抗trem-1抗体
TW202413437A (zh) 特異性結合ｇｕｃｙ２ｃ和ｃｄ３的抗原結合分子及其醫藥用途
CN116496404A (zh) 靶向cd47和pd-l1的双特异性抗体及其应用
TW202311295A (zh) 一種抗原結合分子

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination