CN113694260A - 一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料及其制备方法，包括以下体积百分比的组分：70‑95％PMMA骨水泥和5‑30％水凝胶。与现有技术相比，本发明合成的骨水泥水凝胶复合材料在降低PMMA含量的同时降低固化温度，并将生物活性物质负载于水凝胶当中，赋予该混合骨水泥以生物活性，在稳定椎体，减轻患者疼痛的同时，用于促进局部成骨。

Description

一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料及其制备方法
技术领域
本发明涉及椎体成形术用材料，尤其是涉及一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料及其制备方法。
背景技术
椎体成形术(PVP)因其微创、有效稳定椎体及缓解疼痛等优势，常用于骨质疏松性椎体骨折、病理性椎体骨折、椎体转移瘤等疾病的治疗。聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)骨水泥目前是PVP术中广泛使用的骨水泥材料，其强度较高，可迅速固化，恢复病椎的强度和刚度。然而在实际临床应用中其主要缺点如下：1)聚合过程中大量放热，其最高温度超过人体组织可以耐受范围，达到80℃甚至更高从而造成周围组织坏死，故PMMA骨水泥固化放热造成的问题亟待解决。2)PMMA材料是不可降解的，长时间在体内容易松动，并且影响第二次手术，此外，一旦发生骨水泥强化椎体再骨折，可引起骨水泥突出到椎管，压迫神经；3)PMMA的弹性模量较高，可导致临椎再骨折以及加速椎间盘退变；4)PMMA无生物活性。综上，如何改善PVP用骨水泥的特性，为目前脊柱外科医生关注的焦点和热点。
专利申请CN106540318A公开了一种抗水低放热复合骨水泥及其制备方法，该骨水泥由下述原料组成：聚甲基丙烯酸酯、2-甲基丙烯酸环己酯、甲基丙烯酸2-羟基乙酯、氧化镁、氯化镁、生理盐水、水化硅酸钙、羟基亚乙基膦酸、左旋肉碱、2-甘油磷酸二钠、磷酸氢锶、石斛多糖、几丁聚糖、4-甲基-N,N-二甲基苯胺、二乙烯基砜、柠檬酸。该发明制备的复合骨水泥材料具有较高的抗压强度，抗水溃散性好，其初始抗压强度达36.7-41.6MPa，3天抗压强度为37.2-42.3MPa，抗水溃散性好，同时在固化过程中最高温度为36-40℃，大幅减低了PMMA骨水泥的聚合放热温度，综合性能优异，可满足临床应用需求。
专利申请CN107625993A公开了一种具有抗菌性能和生物相容性的骨水泥及其制备方法，将合金颗粒与PMMA粉体均匀混合，再与MMA单体混合，经自固化得到一种骨水泥，由于添加了具有抗菌性能的生物相容性合金颗粒，通过表面电荷效应或释放杀菌金属离子发挥明显的抗菌效果，具有明显广谱抗菌效果，有效降低金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和MRSA等细菌在骨水泥表面的粘附；并通过可控释放抗菌金属离子，可有效抑制骨水泥周围细菌引起的感染。同时，颗粒的合金化设计使得该骨水泥具有优异的生物相容性。
但是到目前为止，实现可用于椎体成形术的可负载生物活性因子的混合骨水泥仍无报道。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种在降低固化温度、提供液体环境的基础上，可以负载生物活性因子的，可用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料及其制备方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，包括以下体积百分比的组分：PMMA骨水泥：70-95％和水凝胶5-30％。
进一步地，所述的PMMA骨水泥为市售骨水泥，其配方中含有质量体积比2mg/1ml的PMMA粉末和MMA液体。PMMA为聚甲基丙烯酸甲酯，MMA为甲基丙烯酸甲酯。PMMA骨水泥的具体配方包括粉体组分和液体组分，其中粉体组分包括以下重量份组分：PMMA粉体6-70份，硫酸钡30份，过氧化苯甲酰2-3份，甲基丙烯酸甲酯单体90-100份，N，N-二甲基聚合甲苯胺0.5-1份；液体组分包括对苯二酚和MMA液体，对苯二酚的加入量为每1g粉体加入3-4ppm对苯二酚。
进一步地，所述的PMMA骨水泥中还添加有成骨因子，成骨因子的添加量为：成骨因子与PMMA骨水泥的质量体积比为5μg-50μg/ml。
进一步地，所述的成骨因子包括BMPs(如BMP-2、BMP-4、BMP-7等)、ALP、OPN、RUNX2、OCN中的一种或几种。
进一步地，所述的PMMA骨水泥为市售骨水泥，包括Mendec Spine骨水泥、SpinePlex骨水泥或SmartSet的骨水泥。
所述的水凝胶包括质量比为1～6:1～6的氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖。
其中，所述的氧化透明质酸钠通过以下方法获得：将透明质酸钠溶解在超纯水中得到溶液A，将高碘酸钠避光溶解在超纯水中，得到溶液B，在避光条件下，将溶液B逐滴加入至溶液A中，反应24h后，加入乙二醇终止反应，所得反应液透析后置于超低温环境中真空冷冻干燥获得氧化透明质酸钠。所述的透明质酸钠与高碘酸钠的质量比为5:1；所述的超低温环境为-20～-80℃。
一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料的制备方法，包括以下步骤：
(1)将氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖分别溶解在去离子水中配制成质量体积比为10～60mg/ml的溶液；
(2)PMMA骨水泥中的粉体组分和液体组分使用前分开放置，使用时，先将PMMA骨水泥中的粉体组分加入到无菌器皿中，然后按比例加入液体组分和步骤(1)所得氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液，搅拌1～2分钟混匀即得产品。
步骤(1)在氧化透明质酸钠溶液或羧甲基壳聚糖溶液中加入成骨因子，再将含有该成骨因子的氧化透明质酸钠溶液与羧甲基壳聚糖溶液作为水凝胶加入到PMMA骨水泥的液体组分中。
其中PMMA骨水泥的粉体组分和液体组分混合后成液体状，其体积与水凝胶的体积百分比为PMMA骨水泥：70-95％、水凝胶5-30％，水凝胶包括质量体积比为10～60mg/ml的氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液，且还可以含有成骨因子。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1.本发明采用高碘酸钠氧化透明质酸钠得到氧化透明质酸钠，该氧化透明质酸钠吸水储水能力强，羧甲基壳聚糖具有一定的稳定性和抗菌性，两者结合制成水凝胶，与PMMA骨水泥进行反应，水凝胶具有良好的吸热性能，并且PMMA骨水泥量的减低，共同使骨水泥水凝胶混合材料的固化温度明显减低，最高固化温度可为35-45℃，而单纯的PMMA最高固化温度可达60-70℃。
2.本发明骨水泥水凝胶复合材料中，成骨因子可充分分散并负载在水凝胶中，赋予该复合材料以生物活性，用于促进局部成骨。如图14-15，加了成骨因子后可促进成骨的作用更有效。
3.本发明骨水泥水凝胶复合材料具有良好的力学性能，在维持一定压缩强度的同时，降低了弹性模量(图4、5)
4.本发明在常规骨水泥中掺杂水凝胶后，混合PMMA水凝胶骨水泥可以部分降解(图8、9)。
5本发明骨水泥水凝胶复合材料可释放生物蛋白(图10)。
6.本发明骨水泥水凝胶复合材料提高了骨水泥的生物相容性(图11)，并降低了骨水泥的溶血率(图12)。
附图说明
图1为市售PMMA骨水泥与含有不同水凝胶的复合材料固化形成骨水泥样品示意图；
图2为各样品固化温度测试结果示意图；
图3为各样品最高固化温度测试结果示意图；
图4为各样品压缩强度测试结果示意图；
图5为各样品弹性模量测试结果示意图；
图6为各样品可注射性测试结果示意图；
图7为各样品固化时间测试结果示意图；
图8为各样品降解不同时间后的扫描电镜图；
图9为各样品定量称重计算降解率示意图；
图10为各样品使用BCA法检测BSA释放情况图；
图11为各样品CCK8检测结果示意图；
图12为各样品使用兔静脉血行溶血检测溶血率示意图；
图13为各样品使用兔静脉血行溶血检测外观示意图；
图14为加入了成骨因子的骨水泥水凝胶复合材料的ALP(碱性磷酸酶)染色结果图；
图15未加入成骨因子的骨水泥水凝胶复合材料的ALP(碱性磷酸酶)染色结果图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1-4
一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，通过以下方法制得：
(1)氧化透明质酸钠的制备：
称取5g透明质酸钠加入到500mL超纯水中，在室温下持续搅拌至氧化透明质酸钠完全溶解。然后，称取1g高碘酸钠避光溶解在5mL超纯水中，将溶解后的高碘酸钠溶液在避光条件下逐滴加入至氧化透明质酸钠溶液中。混合溶液在黑暗条件下搅拌24后，加入2mL乙二醇终止反应。随后，将所得的反应液装入透析袋(MWCO 7000中，并放置在超纯水中透析3天，期间每天换水三次。最后，将溶液放置在-20℃～-80℃超低温冰箱中冷冻后通过真空冷冻干燥获得氧化透明质酸固体。
(2)将500mg氧化透明质酸钠溶解在10ml去离子水中配制成氧化透明质酸钠溶液；
将500mg羧甲基壳聚糖溶解在10ml去离子水中配制成羧甲基壳聚糖溶液；
将成骨因子BMP-2加入氧化透明质酸钠溶液或羧甲基壳聚糖溶液中；
(3)先将市售PMMA骨水泥(Mendec Spine骨水泥)中的粉体组分加入到无菌器皿中，然后按照比例加入液体组分和含成骨因子BMP-2的氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液，其中BMP-2的加入量按照PMMA骨水泥中MMA的量为基础，每1mlMMA添加5μg～50μg的成骨因子，氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液等量添加，搅拌1-2分钟混匀。
按照PMMA骨水泥和水凝胶(氧化透明质酸钠溶液+羧甲基壳聚糖溶液)的体积比为70-95％：5～30％配制不同的样品按以下方法进行检测：
检测方法
1.标准尺寸样品制备
使用聚四氟乙烯材料制成内直径6mm，高2mm和高12mm的标准模具若干，按分组不同将充分搅拌均匀的各组骨水泥水凝胶复合材料注入模具内，制备样品若干，进行后续实验。如图1所示，以纯市售PMMA骨水泥，与水凝胶的掺杂体积与纯市售PMMA骨水泥体积比分别为，5％、10％、15％和20％分别作为样品，分别记为：Pure PMMA、PMMA-5％、PMMA-10％、PMMA-15％、PMMA-20％。2.固化温度：使用热电偶在25℃室温下测量持续测量骨水泥水凝胶复合材料的温度变化，聚合过程的温度。各样品固化温度示意图如图2～3所示，可以看出本发明骨水泥水凝胶复合材料的固化温度较纯PMMA骨水泥明显降低(P<0.05)，PMMA-15％和PMMA-20％水凝胶骨水泥平均最高固化温度分别为42.37±1.03℃和40.43±1.23℃，且最高峰值短暂，对生物活性因子灭活作用有限，此为混合骨水泥负载生物活性因子的重要前提；
3.固化时间：在25℃室温下，使用400g维卡仪、尖端直径1mm，每隔15秒测一次压头沉入骨水泥水凝胶复合材料的高度，计算开始至压头沉入骨水泥水凝胶复合材料压痕1mm深的时间为初凝时间，至无压痕的时间为终凝时间。如图6-7所示，可以看出本发明骨水泥水凝胶复合材料的可注射性较PMMA降低，凝固时间缩短，但是均可满足椎体成形术的需要。(P<0.05vs Pure PMMA组(即纯市售PMMA骨水泥组))
4.力学强度：对不同组别的直径6mm，高12mm的样品使用万能力学试验机进行压缩强度检测。如图4所示，可以看出本发明骨水泥水凝胶复合材料的压缩强度明显降低(P<0.05)，PMMA-15％和PMMA-20％水凝胶骨水泥压缩强度分别约15MPa和20MPa，与椎体松质骨强度类似，可提供足够力学支撑。
如图5所示为各样品弹性模量测试结果示意图，可以看出本发明骨水泥水凝胶复合材料的弹性模量均较PMMA骨水泥明显减低；
5.降解率：将各组骨水泥水凝胶复合材料试件，精确称重测量后浸入到模拟体液(0.1cm2/mL SBF)溶液中，于37℃下置于摇床上进行体外降解实验，摇床频率为120rpm，3、7、14、21、28天更换一次SBF并取样(3个/组/次)。滤纸除去表面水分，真空干燥24h，再精确称重，计算重量丢失的百分率，统计分析。样本保留进行扫描电镜观察。
图8～9为各样品降解性情况其中从图8扫描电镜观察发现PMMA-15％和PMMA-20％水凝胶骨水泥在模拟体液中可降解，在14天时已有明显孔隙形成，在第28天是孔隙明显增多，且PMMA-20％水凝胶骨水泥较PMMA-15％水凝胶骨水泥明显；图9定量称重计算降解率，发现PMMA-水凝胶骨水泥随浸泡时间延长降解率增高，且水凝胶比例越高，降解率越高，在28天时PMMA-20％水凝胶骨水泥降解率约为10％。
6.细胞毒性评估
样品的灭菌：将实验所需样品置于75％酒精中浸泡1h，然后换以无菌的PBS清洗三遍，再置于紫外光下照射半小时。
浸提液的制备：按照样品：培养基＝1：5(w/v)，即0.2g/ml培养基置于24孔板中，37℃下浸提24h。
细胞接种：将细胞消化重悬以后，按照1*104/孔板的密度接种细胞于96孔板中，24h后，将培养基更换为样品浸提液。
CCK8测试：分别在加入浸提液以后的24h，48h，72h加入10％CCK8溶液，置于37℃下孵育1h，然后置于多功能酶标仪下测定450nm处的OD值。
7.BSA模拟释放检测
为了研究负载BMP-2PMMA/胶样品的体外释放实验，我们选用廉价且常用的BSA作为模拟蛋白。
首先，将40mg BSA溶解到1ml 5％羧甲基壳聚糖水凝胶溶液中，配成浓度为40mg/ml的BSA溶液，然后按照正常制备PMMA样品的步骤制备6个薄片形式样品。(按照10％胶含量的样品，每个样品用360ulPBS进行浸提，全部释放的浓度为550ug/ml，若某一时间点释放10％，浓度为55ug/ml，接近BCA试剂盒的检出限)。
将样品置于48孔板中，加入360ul体积PBS溶液，分别在第1，3，7，14，21，28天收取所有溶液，并补充新的等体积的PBS溶液，收取的溶液可利用BCA试剂盒检测其中的BSA含量。
BCA法测定BSA含量的具体步骤如下：
(1)根据样品数量，按照50体积BCA试剂盒A液：1体积BCA试剂盒B液的比例制备工作液。
(2)取1.2mL蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(30mg BSA)中，配制成25mg/mL的蛋白标准溶液。接着用PBS稀释一定量的蛋白标准溶液至0.5mg/mL。
(3)根据BCA蛋白浓度测定试剂盒的说明书测定标准曲线，并加入20μL样品液，每孔加入200μL工作液，放入37℃恒温培养箱孵育30min后在562nm处测定吸光度，依据标准曲线计算每个样品的浓度。如图10使用BCA法检测BSA释放情况，结果显示BSA可从混合骨水泥中释放，且随水凝胶的比例增高，释放率增高，在第7天时可达最高释放，此时，PMMA-20％水凝胶骨水泥的累计释放率约50％。(P<0.05vs Pure PMMA组)。
9.溶血率：抽取成年健康新西兰大白兔静脉血2ml，加入到含有EDTA抗凝剂的真空管中，首先，将1mL血液样品添加到2mLPBS中，并通过以4000rpm离心10分钟从血清中分离出红细胞。用5mLSBF溶液洗涤5次后，用SBF溶液将纯化的血液稀释至其体积的1/10。然后，将0.2mL稀释的RBC悬浮液与0.8mL SBF溶液作为阴性对照，与0.8mL去离子水作为阳性对照，以及加入不同组别2mm高的样品。然后，将所有混合物振荡并在室温下保持3小时。最后，将混合物以12,000rpm离心5分钟后，用紫外可见分光光度计测定541nm上清液的吸光度。溶血率(％)＝[(样品吸收率×阴性对照吸光度)/(阳性对照吸光度-阴性对照吸光度)]×100％。
图11-13为PMMA-水凝胶骨水泥生物相容性，其中图11CCK8结果显示rBMSCs在PMMA-15％和PMMA-20％水凝胶骨水泥的浸提液中增殖明显(P<0.05)；图12-13使用兔静脉血行溶血检测，发现PMMA-15％和PMMA-20％水凝胶骨水泥溶血率较PMMA骨水泥降低。(P<0.05vs Pure PMMA组)。
实施例5-6
分别以本发明掺杂有成骨因子和未掺杂成骨因子的骨水泥水凝胶复合材料为样品进行成骨试验：
(1)本发明制备的复合材料为：PMMA骨水泥+15％水凝胶+BMP-2样品无菌制作：模具灭菌，准备无菌工具，超净台内完成。根据MMA液体用量，以20ug/ml将BMP-2加入到氧化透明质酸钠溶液中，按照前述实施例1-5的方法制作样本
(2)浸提液的制备：按照样品：培养基＝1：5(w/v)，即0.1g/ml培养基置于24孔板中，37℃下浸提24h。
(3)ALP染色:将大鼠间充质干细胞(接种量105/ml)消化重悬以后，种于24孔板中，24h后，将培养基更换为样品浸提液。第5天测ALP染色。
以不含BMP-2的复合材料：PMMA骨水泥+15％水凝胶(氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液等量添加)为样品，采用与上述相同方法进行成骨试验，结果如图14-15掺杂有成骨因子和未掺杂成骨因子的骨水泥水凝胶复合材料的ALP(碱性磷酸酶)染色结果图，染色越深说明ALP越多，促进间充质干细胞成骨分化更好，可以看出，掺杂有成骨因子的复合材料染色更深，效果更好。
实施例7
一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，通过以下方法制得：
(1)氧化透明质酸钠的制备(同实施例1)：
(2)将100mg氧化透明质酸钠溶解在10ml去离子水中配制成氧化透明质酸钠溶液；
将100mg羧甲基壳聚糖溶解在10ml去离子水中配制成羧甲基壳聚糖溶液；
将成骨因子ALP加入氧化透明质酸钠溶液或羧甲基壳聚糖溶液中；
(3)先将市售PMMA骨水泥(SpinePlex骨水泥)中的粉体组分加入到无菌器皿中，然后按照比例加入液体组分和水凝胶(即含成骨因子ALP的氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液)，其中ALP的加入量按照PMMA骨水泥中MMA的量为基础，每1mlMMA添加5μg的成骨因子，氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比为1:1，搅拌1-2分钟混匀。
其中市售PMMA骨水泥与水凝胶的体积比为：70:30。
实施例8
一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，通过以下方法制得：
(1)氧化透明质酸钠的制备(同实施例1)：
(2)将600mg氧化透明质酸钠溶解在10ml去离子水中配制成氧化透明质酸钠溶液；
将600mg羧甲基壳聚糖溶解在10ml去离子水中配制成羧甲基壳聚糖溶液；
将成骨因子RUNX2加入氧化透明质酸钠溶液或羧甲基壳聚糖溶液中；
(3)先将市售PMMA骨水泥(SpinePlex骨水泥)中的粉体组分加入到无菌器皿中，然后按照比例加入液体组分和水凝胶(含成骨因子RUNX2的氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液)，其中RUNX2的加入量按照PMMA骨水泥中MMA的量为基础，每1mlMMA添加50μg的成骨因子，氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比为1:6，搅拌1-2分钟混匀。
其中市售PMMA骨水泥与水凝胶的质量比为：95:5。
实施例9
一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，通过以下方法制得：
(1)氧化透明质酸钠的制备(同实施例1)：
(2)将300mg氧化透明质酸钠溶解在10ml去离子水中配制成氧化透明质酸钠溶液；
将300mg羧甲基壳聚糖溶解在10ml去离子水中配制成羧甲基壳聚糖溶液；
将成骨因子OCN加入氧化透明质酸钠溶液或羧甲基壳聚糖溶液中；
(3)先将市售PMMA骨水泥(Mendec Spine骨水泥)中的粉体组分加入到无菌器皿中，然后按照比例加入液体组分和水凝胶(即含成骨因子OCN的氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液)，其中OCN的加入量按照PMMA骨水泥中MMA的量为基础，每1mlMMA添加30μg的成骨因子，氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖的质量比为6:1，搅拌1-2分钟混匀。
其中市售PMMA骨水泥与水凝胶的体积比为：80:20。

Claims (10)

1.一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，包括以下体积百分比的组分：70-95％PMMA骨水泥和5-30％水凝胶。
2.根据权利要求1所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的PMMA骨水泥为市售骨水泥，其配方中含有质量体积比2mg/1ml的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)粉末和甲基丙烯酸甲酯(MMA)液体。
3.根据权利要求1所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的水凝胶中还添加有成骨因子，成骨因子的添加量为：成骨因子与PMMA骨水泥的质量体积比为5μg-50μg/ml。
4.根据权利要求3所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的成骨因子包括BMPs、ALP、OPN、RUNX2、OCN中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的PMMA骨水泥为Mendec Spine骨水泥、SpinePlex骨水泥、SmartSet的骨水泥。
6.根据权利要求1所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的水凝胶包括质量比为1～6:1～6的氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖。
7.根据权利要求6所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的氧化透明质酸钠通过以下方法获得：将透明质酸钠溶解在超纯水中得到溶液A，将高碘酸钠避光溶解在超纯水中，得到溶液B，在避光条件下，将溶液B逐滴加入至溶液A中，反应24h后，加入乙二醇终止反应，所得反应液透析后置于超低温环境中真空冷冻干燥获得氧化透明质酸钠。
8.根据权利要求7所述的一种用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料，其特征在于，所述的透明质酸钠与高碘酸钠的质量比为5:1；
所述的超低温环境为-20～-80℃。
9.一种如权利要求1所述的用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将氧化透明质酸钠和羧甲基壳聚糖分别溶解在去离子水中配制成质量体积比为10～60mg/ml的溶液；
(2)PMMA骨水泥加入到无菌器皿中，按比例加入步骤(1)所得氧化透明质酸钠溶液和羧甲基壳聚糖溶液，搅拌1～2分钟混匀即得产品。
10.根据权利要求9所述的用于椎体成形术的骨水泥水凝胶复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)在氧化透明质酸钠溶液中加入成骨因子，再将含有该成骨因子的氧化透明质酸钠溶液与羧甲基壳聚糖溶液加入到PMMA骨水泥中。
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